Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Комплекс микрометодов иммунодиагностики инфекционно-воспалительных заболеваний новорожденных

ь,0 0 .3 3 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР НОВОСИБИРСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ • МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 616.981.25-053.31-э78.333

СТОЛЯРОВА Вера Михайловна

комплекс г/жрожтодов мшгодашюстики инферЩйонно-

ВОСПАЛПЕЛЬНЬК ЗАБОЛЕВАНИЙ НОВОРОДЕИНЧХ 14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат

диссертации ка соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1992

Работа выполнена б Институте клинической и экспериментальной медицины СО РА?,И.

Научный руководитель - доктор биологических наук

А.И.Аутеталюс

Научный консультант - кандидат медицинских наук

Г.М .Мшсрюкова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

К.В Лаврова;

кандидат медицинских наук, доцент Т.Д.Амирова 7

Ведущее учревдение - НИИ детских инфекций, Санкт-Петербург

Защита состоится 19Э2 г. е // чаем

на заседании специализированного совета К 084.52Ю1 по присущ денизо ученой степени кандидата медицинских наук при Яовосиби! ском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте. (630091, г.Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Автореферат разослан "сЛ^" г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

Н,С.СемъяноЕа

■ ОБШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Известно, что бактериальная инфекция играет значительную роль в структуре неонатальной заболеваемости. Предрасполагающими факторами являются повреждахщие воздействия на становление иммунной системы плода, нарушение процессов внеутробной адаптации новорожденного, интенсивная бактериальная контаминация (Г.А.Самсыгина и др., 1987; З.И.Михайлова и др., I9S6; Л.И.Васильева, 1990).

Основная сложность в клинической диагностике инфекционных заболеваний, развивающихся в анте- и интранатальный периода, состоит в том, что большинство клинических проявлений внутриутробных инфекций являются общими и для неинфекционных заболеваний, поэтому в каждом случае для подтверждения диагноза необходимо проводить лабораторные исследования с помощью экспресс анализа, так как инфекционный процесс в неонатальный период может в короткий срок закончиться летальным исходом (И.А.Девис, Л.А.Готефорс, 1987; П.Н.Дерябин и др., 1987; Е.А.Овчинникова и др., 1987; Т.В.Баутина, 1988). Поэтому ранняя диагностика инфек-ционно-воспалительных заболеваний, обеспечивающая адекватную этиопатогенетичеекую терапию, является актуальной проблемой клинической медицины.

Ведущим методом диагностики бактериальной инфекции является микробиологическое исследование материала из очагоЕ инфекции и жидких сред организма. Но бактериологическое исследование, во-первых, не всегда дает положительные результаты (от 32 до 80%) и во-вторых, лишено экспрессности, удовлетворяющей клиническую и эпидемиологическую практику (В.Й.Калиничева и др., 1984; А.Ф.Фролов и др., Г987; М.К.Северцова и др., 1988; s.p. Knatua et al., 1986).

В настоящее время в лабораторной диагностике неонатальной бактериальной инфекции используют в осноеном неспецифические скрининговне метода: количественное определение С-реактиЕНого белка (J.H.Bhrich et al., 1986; 3.Shine et al., 1985), тест C нитросиним тетразолем (В.А.Силич и др., 1985; Р.А.Малышева и др., 1985; о.Montana et al., 1985), оценка лейкоцитарной Формулы (П.А.Девис, Л.А.Готафорс, 1987; Н.З.Никитина и др., T99I; c.u.iiiu et al., 1985; с.Р.Зреяг et al., 1985). Специфические се-

рологические методы диагностики зачастую трудно выполнимы в неонатологической практике, что связано с использованием достаточно больших объемов кроЕИ для новорожденного (РИГА), с определенной сложностью в проведении и с потребностью в специальных реактивах и препаратах. Кроме того, внедрение иммунологических методов диагностики инфекционных заболеваний сдерживается плохой технической оснащенностью лабораторий и недостатками промышленного выпуска, диагностических препаратов (Н.В.Иванова и др., 1991).

Таким образом, разработка простых и достаточно надежных .диагностических гестов с использованием мпкрообъемов крови, которые могли бы дать объективную информацию о наличии икфекцион-но-воспалителышх заболеваний, их активности и позволили бы судить об эффективности проведенного лечения, является актуальной задачей.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - совершенствование диагностики ивгйекци-онно-воспалительных заболеваний новорожденных и детей раннего возраста, вызванных грамполокительнши и гра:?стрицательными микроорганизмами, путем создания диагностического комплекса на основе гдарсглетодоЕ.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ:

1. Изучить взаимодействие измененных гранулоаитов с микроорганизмами у детей с инфеюгионно-Еоепалительньтл и неинФвкци-онными заболеваниями. Разработать микрометсд диагностики этиологии Икфекционно-Еоспалительных заболеваний у новорожденных и детей раннего Есзраста.

2. Изучить термодинамические характеристики реакции антиген-антитело у новорожденных и детей раннего возраста. Разработать микрометод выявления антител к бактериальным антигенам (аллергенам), основанный на термодинамических характеристиках реакции антиген-антитело.

3. Изучить влияние бактериальной сенсибилизации женщин с хронически:.® счагаш инфекции на шмунолсгическиэ показатели их нсвсрскдень-тс.

4. Предложить комплекс ынкрометодов по обследован'® новорожденных и детей раннего гозраста для выявления инфекционно-воспа-

лительных заболеваний, вызванны:: грамл с лежите льноп или грам отрицательней микрофлорой.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА:

1. Впервые установлено, что при инфекционно-воспалителышх заболеваниях новорожденных и детей раннего возраста измененные гранулоциты специфически взаимодействуют с аутсштаммами микроорганизмов .

2. Впервые установлено, чтс в острый период ияфекционно-воспалителъннх заболеваний, вызванных грамотрицательной микрофлорой, возрастает количество измененных гранулоцитов, специфически взаимодействующих С Salmonella minnesotae Н 595 И Esche-rihia coli, а при заболеваниях стафилококковой природа - со стафилококковой вакциной:.

3. Впервые разработаны диагностические критерии показателя иммуноцитоцрилзтания с грамотрицательныш и грамположительными шкр оорганизмали для диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний новорожденных и детей раннего возраста.

4. Проведена дифференциальная микрокалориметрия реакции антиген-антитело, изучена ее' термодинамика. На основе термодинамических характеристик иммунологической реакции ЕперЕые разработаны критерии, позволяющие выявлять антитела к бактериальным антигенам в микрообъемах крови.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработанные на основе проведенных исследований:

- микрометод выявления антител к бактериальным антигенам (аллергенам) с помощью дифференциальной микрокалориметрии;

- микрометод выявления сенсибилизации организма к патогенной и условно-патогенной.флоре, включая аутошгаммы (тест показатель иммуноцитоприлипанш) (A.c. 1697007)

яеляится достаточно информативными и реко?лендоЕаны для использования в качестве лабораторных тестсв для выявления заболеваний, вызванных грашолокигельной и грамотрицательной микройяорой у новорожденных и детей раннего возраста.

Пршенение этих методов в комплексе с клиническими и микробиологическими исследованиями улучшило и ускорило постановку диагноза, что обеспечило более правильный выбор антибактериальной терапии и контроль за ее эффективностью. Результаты исследовании легли в основу методических рекомендаций Минздрава СССР "Микрометода определения активности ш-рекционно-воспалительных заболеваний новорожденных", I9E7 г. ?.5лггромегода иммунодиагностики ин-

фекционно-воспалительннх заболеваний внедрены во 2 ДКБ г. Новосибирска. Имеются акты внедрения.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Количество антигенреагирутацкх гранулоцитов отражает уровень сенсибилизации организма к бактериальным антигенам. Для выявления инфекционно-восналительного заболевания, например, стрептостафилококковой этиологии или вызванного грамотрицатель-ной микрофлорой необходимо проводить тест показатель иммуноци-тсприлшания (ПИЦП) с применением стандартной стафилококковой вакцины, музейного штамма кишечной палочки, а для контроля за эффективностью лечения (определение активности процесса) желательно применять аутоштамм.

2. Реакция антиген-антитело сопровождается, выделением или поглощением тепла, что зависит от количественного соотношения антигена и антител. Дифференциальная шкрокалортаетрия, обладающая высокой разрешающей способностью, позволяет использовать микрообъеш периферической- крови.

3. Для выявления инфекционно-воспалителвных заболеваний необходимо проводить раститровку сывороток периферической крови от 1:10 до 1:640, что позволяет в полной мере оценить термодана/тку реакций антиген-ангктело.

4. Разработан комплекс микрометодов (тест ПИЩ с грамполо-кителышш и грамотрицательными микроорганизмами и дифференциальна* микрокалориметрия с бактериальными антигенам) для. выявления этиологии заболевания, активности инфекционного процесса у новорожденных й детей раннего возраста с инфекционными заболеваниями, вызванными условно-патогенной микрофлорой.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ. Материалы диссертации доложены и обсувдены на:

1. Всесоюзной конференции "Профилактика, диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний и вторичных имыуноде^ицитоЁ", 19-21 июня 1985 г., г. Новосибирск.

2. У1 Международном симпозиуме по иммунологии репродукции. Варна, Болгария, 30/7-2/УТ 1985 г.

3. I съезде пульмонологов Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера, г. Благовещенск, 1986 г.

4. Всесоюзной школе-семинаре "Внутриутробная инфекция плода и новорожденного", 26-27 апреля 1988 г., г. Новосибирск.

5. Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Патогенез хронического воспаления", 11-13 сентября 1991 г., г. Новосибирск.

6. Региональной научно-практической конференции с международным участием "Актуальные проблемы охраны материнства и детства на Востоке страны", 8-10 октября 1991 г., г. Хабаровск.

В завершенном виде диссертационная работа апробирована на заседании кафедр инфекционных болезней лечебного и педиатрического факультетов НОТКЗМИ.

По теме диссертации опубликовано 12 работ. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на #3 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и указателя литературы. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 12 таблицами. Библиографический указатель включает 213 работ (135 отечественных и 78 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Материалом исследования служила периферическая и венозная кровь:

1) 242 новорожденных и детей раннего возраста с инфекционно-воспалитеяышми заболеваниями различной этиологии,

2) 38 новорожденных с перинатальным поражением пентральной нервной системы,

3) 18 новорожденных с врожденными пороками развития и заболеваниями неинфекционной природа5

4) 26 здоровых новорожденных,

5) 20 женщин с хроническими очагами инфекции,

6) 28 практически здоровых женщин.

Основной массив исследований был проведен у детей в возрао-те от I суток до 2,5 мес. Больные с инфекционно-воспалительными заболеваниями обследовались дважды: в острый период заболевания (на 5,6 ^ 0,05 день болезни) и в период реконвалесценции. Остальные дети обследовались однократно.

У 65,29$ больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями диагноз был Еыставлен с учетом этиологического фактора на основании клинических данных и микробиологических исследований

(стафилококковая инфекция, заболевания, вызванные условно-патогенными энтеробактериями). В 34,7]$ случаев этиология иифекци-сннсьвоспалигельных заболеваний общепринятыми методами не была установлена.

При анализе анамнестических данных обращали внимание на состояние здоровья матери, характер течения беременности и родов. При клиническом осмотре отмечались общее состояние, наличие или отсутствие гнойных очагов на коже и слизистых, изменения со стороны внутренних органов и центральной нервной системы.

Из фоновых состояний выделяли дистрофию по типу гипотрофии, которая отмечалась у 28,23$ больных и гестационный Еозраст (93,17$ доношенных и 6,83% - недоношенных). Кроме того, учитывалась проводимая терапия.

Для исследования использовался тест показатель иммуноцито-прилипания (ПИЦЦ), основанный на взаимодействии измененных гра-нулоцитов с округлым ядром (ядрами) с микроорганизмами. Тест проводился по .методике А.И.Аутеншлюса и Е.Е.Исенгельдиной (1981).

В качестве микробных тел использовали стафилококковую еэк-цину, выпускаемую Харьковским институтом вакцин и сыЕороток, музейные штаммы E.coli N 324-, P.morsani N 194, Enterobacter aero-genes N 832 И генетически выведенный штамм Salmonella minnesota К 595 > & такке аутоштаммы Enterobaoter aerogenes, Klebsiella, неферментирущта E.coli, микробОЕ рода Proteus И Providencia, Ci-ьгоЪчлter и Haínia. Концентрация микробных тел во всех вариантах исследования составляла-2 млрд. в I мл.

Величины ПИЩ со стафилококковой вакциной от 0 до 20$ считались низкими, от 21 до АО% - умеренными, от 41% и больше - высоки®. Величины ПИЩ с грамотрицательной микрофлорой от 0 до 10$ считались низкими, от II до 20% - умеренными, выше 21% - высокими.

Для выявления антибактериальных антител в лаборатории физико-химической индикации иммунных процессов Института клинической и экспериментальной медицины СО РАШ был разработан микрометод, основанный на регистрации термодинамических характеристик реакции антиген-антитело (АГ-АТ). Был создан дифференциальна® ыикро-калоркметр, позволяющий регистрировать изменения температуры реагентов с точностью не хуже 10 С. Калориметр способен работать

в изотермическом режиме и с программируемым изменением температуры в диапазоне от комнатной до 50°С с одновременным или последовательным введением в камеры нескольких реагентов. В качестве термочувствительных элементов использовались микротерморезисто-ры ОТ-54. Точное поддержание температуры в измерительных и контрольных юоветах обеспечивалось с помощью 2-х термостатов. Поверка работы прибора осуществлялась с помощью стандартных калориметрических спиртовых смесей.

Регистрацию термодинамических характеристик реакции АГ-АТ проводили предварительно на моделях как с известным количеством очищенных антигенов и антител, так и при неизвестном количестве антител (разведение сыворотки). Эти исследования выполнялись совместно с младшим научным сотрудником В.Р.Губайдулиним. Одной из моделей являлась реакция между очищенной стрептокииазой (мол. масса 40'ООО дальтон) в концентрации 0,85 и 4,25 мкл/мл и антителами класса 5 против стрептокиназы в концентрации 5,0; Б,5; 12,5; 25 и 50 мкг/мл. В качестве второй модели была взята реакция мевду простагландином в концентрации 0,00062 мкг/мл и кроличьей сывороткой против просгагландина в разведениях 1:10, 1:50, 1:100, 1:200, между простагландином и нсшальной кроличьей сывороткой (производство Великобритании).

Б используемых сыворотках выявление антибактериальных антител методом дифференциальной микроиалориметрии проводили с помощью стандартных аллергенов (гемолитического стафилококка, белого непатогенного стафилококка, кишечной палочки,- синэгнойной палочки, протея мирабилис, моргаяьи, ретггери) в концентрации 0,1 кожной дозы. Разведение аллергеное и сыворотки производили физиологическим раствором. Титры антибактериальных антител от О до 1:80 считались низкими, а вше 1:80 расценивались как высокие. В ходе работы было проведено 1530 исследований. Материалы исследования были обработаны методом вариационной статистики с использованием критерия Стыодента, из непараметрических крите-' риев пользовались коэффициентом ассоциации (Г.Ф.Лакин, 1990).

Результата исследования. Специфичность и чувствительность того или иного метода диагностики инфекционных заболеваний, основанного на реакции клеток с микроорганизмами или с бактериальными антигенами могут быть доказаны при использовании аутошта»*-мов возбудителя заболевания или его антигенов (н.Hc.it, 1980).

Поэтому совместно с сотрудниками московского НИИ эпидемиологии и микробиология да. Н.Г.ГабричеЕСкого было проведено изучение взаимодействия гранулоцигсЕ в тесте ПИЩ с аутош-тадааш энтеробактерий, используемых в качестве микробных антигенов, которое явилось своего рода модельным исследованием.

У 55 новорожденных с кишечным синдромом, поступившим в диагностическое отделение, проводился гест ПИЩ с аутоштаммаш. Из них 16 человек (29,09$) лечились по поводу острой респираторной и ротавирусной инфекций и были выделены в I группу (Табл. I). У 39 больных (70,91$) была выявлена острая, кишечная инфекция, вызванная условно-патогенными энтеробактериями. На основании рекомендаций Н.В.Воротшцевой (1975), где в основу распределения больных по тяжести заболевания положена выраженность клинических симптомов, указывающих на степень интоксикации, поражение яелудочно-кишечного тракта, больные с острой кишечной инфекцией, вызванной условно-патогенными энтеробактериями, распределялись следующим образом: у I? детей установлена среднетяжэлая форма заболевания и они составили 2 группу, у 22 детей установлена тяжелая форма заболевания - 3 группа (Табл.Т).

"аблипа I .

Рначешя ШЩ с микроорганизмами у новорожденных с кишечным синдромом

II и д п

Группы -_____-

обследо- С ауто- С ¿.minneso- СО СТаЯвлокок- О ¿.аето^опев ганннх штаммом ta ü ЧЪ коеой вакциной

I. группа 21,0*1,80 15*1,90 38,5*4,7п 21,^*2,2С

Р1_2< 0,001 Pj_2< С,001 Р1_20,G5 0-05

2 группа 33,9*1,34 25,5*1,33 25,3*3,15 19.38*3,16

Р2_3<0,001 Р2_3> 0,05 Р^_п>0.05 Pj^O.OR

3 группа 66,7*1,80 28,5*3,5 32,5*3,50 23,4*3,то

Р^рС 0,001 P^j¿ 0,001 ?с_т ?0,05 P^j>0,05

Как показал анализ результатов величины с аутсштаммами ст-

ражают не только наличие кишечной инфекции, но и тяжесть заболевания. Результаты ПИЩ с Б.паппеаспа к 595 можно использовать как критерий инфекционно-воспалительного заболевания, вызванного уСЛОВНО-ПаТОГеННЫМИ ЭНТеробаКТерИЯМИ. ПИЩ С 3.аего§епез достоверно не отличался во всех группах и по нему нельзя судить ни об этиологии заболевания, ни о тяжести. Повышенные величины ПИЩ со стафилококковой вакциной во всех группах обусловлены наличием у части детей сопутствующей стафилококковой инфекцией.

Таким образом, проведение теста ПИЩ с аутоштаммом и с Б.тэ-ппезс^а н 595 позволило, во-первых, подтвердить этиологический фактор диареи и во-вторых, использовать штамм З.тз.ппезс^а и 595 в качестве индикатора кишечных инфекций, а стандартную стафилококковую вакцину для выявления сенсибилизации к стафилококку. Значения ПИЩ со стафилококковой вакциной, прегшащие 20% могут служить диагностическим критерием наличия заболевания стафилококковой этиологии, с з.ш1ппезо^а к 595 начиная с 10$ и Еыше служат критериями кишечной инфекции различной степени тяжести.

Получив высокую специфичность процессов взаимодействия измененных гранулоцитов с микроорганизмами в модельных исследованиях с заведомо известным возбудителем, а также с другими микроорганизмами, было решено использовать тест ПИЩ с различными микроорганизмами для диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных бактериальной микрофлорой у новорожденных и детей раннего возраста.

Среди больных с острыми Инфекционно-Еоспалительными заболеваниями были выделены 3 группы: I - 56 новорожденных со стафилококковой инфекцией (пузырчатка,вези:сулопустулез, эксфолиатиЕНЫй дерматит Риттера, омфалиг, конъюнктивит, энтерит, сепсис); 235 новорожденных с заболеваниями, вызванными грамотрицательнсй микрофлорой (инфекционный энтерит, декомпенсированная форма дис-бактериоза, пиелонефрит, сепсис); 3-71 ребенок с инфекционно-воспалительными заболеваниями неустановленной этиологии (пневмо-1шя, менингсэнцефалит, гнойный конъюнктивит, омфалит, остеомиелит, сепсис).

Сравнительный анализ по ПКЦП сс стафилококком и энтеробак-териями у больных ¿этих групп представлен на рисунке I, где еид-но, что при сгайилокогасовой инфекции в острый период заболевания

ПИЦЦ с грамотрицатедьнсй микрофлорой в острый период

Щ-'ШЩЦ с грамотрицательной микрофлорой в период реконвал.

Рис. I. Значения ПИЦЦ у новорожденных и детей раннего возраста

с различной патологией и здоровых.

А - стафилококковая инфекция, Б - грамотрицательная инфекция, В - инфекционно-Еоспалительные заболевания неустановленной этиологии, Г - перинатальное поражение ЦНС, Д- - здоровые

отмечаются максимальные величины ПЙШ со стафилокб&ксвсй вакциной, достоверно отличающиеся от аналогичного показателя в других группах. Самые высокие значения ШЩП с кишечной палочкой'? наблюдаются при инфекциокно-воспалительнвх заболеваниях,- знз^ ванных грамотрицательной микрофлорой. Умеренно выраженные вёяи^ чины ПИЩ со стафилококком у детей этой груши, как и величины г" ШЩП с грамотрицательной микрофлорой у детей со стафилококковой4-: инфекцией можно объяснить, во-первых, сочетанной в отдельных случаях инфекцией (стафилококковое поражение кожи и энтерит, ^ вызванный условно-патогенными энтеробактерияш); во-вторых, раз-4 втащимся дисбиоценозом как под влиянием инфекционного заболз-; вания, так и под влиянием антибактериальной терапия. " '

При инфекционно-воспалительвнх заболеваниях, этиологии ко- ^ торых установить не удалось, отмечались достаточно высокие вели-: чины ПИЩ и со стафилококк», и о грамотрицательной микрофлорой.] Учитывая специфичность реакции имыуноцитолрилипания при высоких-значениях ПИЩ со стафилококки» можно предположить наличие ста---филококковой инфекции. Повышение с Е.соИ, в.тахппеяо'Ьа я 595 и (или) р.тогдап! может свидетельствовать о заболевайиях,:. обусловленных грамотрицательной микрофлорой.

В период клинического улучшения во всех зтшс группах ных отмечалось снижение ПИЩ с указанвдаи микроорганизмами, то . ' ость величина показателя зависела от активности воспалительного' процесса.

Изучение ПИЩ со стафилококковой вакциной у больных с локализованными и генерализованными формами стафилококковой инфекции не выявило различий: у новорожденных о локализованными формами без интоксикации ПИЦП со стафилококком составил 46,97 * 0,47Й, при локализованной форме с выраженной интоксикацией 41,58 -- 3,18$?, при генерализованной форме 45,67 - 5,72. То есть не получено зависимости показателя иммуноритоприлипашя от степени тяжести процесса (гх = -0,12, Р->0,05). Было установлено, что на значения ШЭД у новороаденных оказывает влияние- предшествую- -щая сенсибилизация (острые инфекционные заболевания зли обострение хронических очагов инфекции во второй половине беременности у матери) (г^ =-0,27, Р< 0,05 ). В то же время'на значения ПИЦЦ -не влияют гестационный возраст и дистрофия по типу гипотрофии 1-П степени.

В период реконвалесценции при проведении неспецифической противовоспалительной терапии происходит снижение значений ПИЦС у 46,15^ больных до величин здоровых новорожденных, у 23,08$ больных.при тенденции к снижении значения ПИЦП были умеренным. В 30,77% значения ПИЩ со стафилококком бнли высокими. Всем больным с высокими значениями ГОЩД в период реконвалесценции проводилась активная специфическая терапия (введение 3-4-кратно антистафилококкового гаммаглобулина, антистафилококковой плазмы, стафилококкового анатоксина). Выявлена положительная корреляционная зависимость (гх =+0,66, Р с 0,01) между проведением специфической иммунотерапии и высокими значениями ПИЦЦ со стафилококковой вакциной. То есть введение специфических иммунных препаратов искажает картину серологических данных. Аналогичные результаты получены Ю.В.Мартыновым и соавт. (1991).

У больных с инфекционно-воспалителькыш процессами, вызванными грамотрицательной микрофлорой в 91,3% случаев в острый период заболевания отмечались высокие значения ПИЩ с знтеробакте-риями, у 8,7^ больных - умеренные значения.

При выраженной клинической картине (симптомы интоксикации, кишечный синдром, изменение показателей лабораторных данных) отмечается достоверное повышение значений ПЩ1 или со всеми тремя энтеробактериями (Е.coli, S.minnesota R 595, P.norgani) или с одной из них, по сравнению с аналогичными показателями детей с заболеваниями неинфекционной природы и здоровых. Следует отметить, что в 100% случаев значения ГОЩ1 с E,coli в острый период заболевания были повышены, колебания величины ПИЩ составили. 12-58$. Повышение ПИЩ с S.minnesota к 595 отмечено в 37,5% случаев, колебания величины составили

Чувствительность геста ПИВД без учета умеренных значений показателя составила 91,3%, с учетом умеренных значений - I00/J. Специфичность теста - 80%.

Учитывая достаточно высокую чувствительность и специфичность теста ПИЩ и получая высокие значения 1ГЛЦ с тем или иным микроорганизмом при наличии инфекционно-воспалигельного заболевания у ребенка, мокно установить вероятного возбудителя при отрицательных результатах микробиологического исследования материала из очага воспаления. Причем установлено, что у детей с инфекционно-Боспалительныыи заболеваниями с неустановленным возбудителем

грачположцтельная и грамотрицательная микрофлора, высеваемая при обязательном бактериологическом исследовании различных био-топое (нос, глаза, пупочная ранка), не сказывает влияния на показатель иммуноцятоприлипакия (Рис. 2).

~:;с. 2. Высев условно-патогеямсд :г патогенно" «тпкрофлорв

с различных участков организма у Сотт- "»зг '"гЗекщтонно-:!сспакительншя заболеганиятя! нчуо р.^'-'т:'- -отполота*

I | - грамположятелзнач ш;сро<т>лог.

1ЛУ\\\) - грамотрицательная шкроояора - отрицательные результаты ;■••;.•! - длсбактериоз кишечника

Результаты обследования больных с инфогапог"- -рсг^читель-ш заболеваниями сравнивались с показателями псрина-

таХ).'!- поражением центральном норвноЗ система {"" *. это"! группе в 73,695? случаев псракенпе ШС развилось г псз; ^ьтате трав-:.:атпчески-гипоксичесного механизма (рсдсрая трат > :: Г:!утриутроб-лая гипоксия). ~ 26,31$ сгуп! »» 1т"т'-гл было гшг.т-ч::^ влияния пн-тхтшонпнх агентов на пе ^ьуг» "гпнь п. • три :-г -~ч— у матери •во время берепепноств ее:лих юяглскь-. ¿р.бол . ■ или обостре-

Г6

ния хронических очагов инфекции.

Как показал аналйз материала, возраст ребенка не оказывал существенного влияния на значения теста ПИЦЦ (Табл. 2). В то же время большое значение имел отягощенный акушерский анамнез. Инфекционная патология, матери во второй половине беременности приводит к повышенным значениям ПИЩ с микроорганизмами у ребенка.

Наличие хронических очагов инфекции без обострения в период ] беременности не приводит к повышению ПИЩ у новорожденных.

Таблица 2

Встречаемость значений-НИЩ с микроорганизмами в зависимости от возраста у детей с перинатальным поражением ЩС

Возрастные Встречаемость значений ПИВД в %%

группы детей высокие умеренные низкие

1-10 дней жизни - 50,00 50,00

11-20 дней жизни 28,58 28,57 42,85

Старте 21 дня 10>00 40)00 .

При сравнении результатов обследования здоровых женщин с хроническими очагама иэфекции вне обострения не получено достоверных различий в значениях ПИЩ оо стафилококковой ващиной и кишечной палочкой (Табл. 3).

Таблица 3

Значения ПИЩ с микроорганизмами у здоровых женщин и женщин с хроническими очагами инфекции вне обострения

Группы обсле- Количе- П И Ц I (в %) М * т

дованных ство со стафилококком с кишечной палочкой

Здоровые женщины 13 18,46*3,05 5,33*0,98

Женщины с хроническими очагами инфекции 10 14,70*3,75 6,30*1,43

Своеобразной контрольной группой явились больные в возрасте от 7 дней до 2,5 месяцев с заболеваниями неинфекционной природы (гемолитическая болезнь новорожденного, дизагрегацнонная трсмбоцитопагия, постгипоксическая кардиопатия) и врожденными ■ пороками развития. В этой группе средние значения ПЩ1 с различными микроорганизмами практически не выходили за пределы низких ветчин (ПИЦП со стафилококком 12,0±0,81, с k.coü 9,71±0,62, С S.minnesota Н 595 8,07*0,48, P.morgani 5',37±0,75) и достоверно не отличались от показателей здоровых новорожденных. Таким обрат- ■ зом, тест показатель иыму ноцитоприлтшания, проводимый с различ^-ными бактериальными антигенами позволяет выявлять этиологию инфекционного процесса, как у новорожденных, так и у их матерей.

Оценку гуморального иммунного ответа в ходе инфекционного процесса проводили путем выявления антител к бактериальным антигенам методом дифференциальной микрокалориметрии. Методом дифференциальной микроналориметрии обследовано 88 детей.

7 новорожденных с бактериальными инфекциями в 74$ случаев выявлялись высокие титры антител к этиологически значимому бактериальному агенту (к антигенам стафилококка при локализованных Фермах стафилококковой инфекции, к "антигенам знтеробактерий при энтерите).

При анализе материалов группы детей со.стафилококковой инфекцией не получено -зависимости титров антибактериальных антител от сроков гестации и наличия дистрофии.по типу гипотрофии I и П степени. В то же время существенную роль играл срок обследования больного е зависимости от длительности заболевания.- Поэтому новорожденных со стафилококковой инфекцией разделили-на две'подгруппы: I - 21 ребенок, обследование которых проведало« в первую не—.: делю заболевания; 2-17 детей, у которых сыворотка крови исследовалась на 2-3 неделе заболевания. "Х' Г '•"' /J

В первой подгруппе в 66,67* случаев,'титры^антистафилококко-вых антител была низкими, в 33,33^"-; высокими Все дети с высокими титрами антител в отличие от детей с низкими титрами находились на грудном вскармливании (1003 и 55$ соответственно). • Среди матерей^ дети которых дали высокие титры антистафилококковых антител, 42,66% являлись носителями патогенного стафилококка, 14,29% - жмащ хроЕичесгаЗ тонзиотт, остальные были практически здорова, но в 28,58£ случаев во время беременности перенесли 0РШ

и дрожжевой колышт.

Матери детей с низкими титрами антистафилококковых антител практически все были здоровы до наступления беременности. В 42,85$ случаев беременность протекала без патологии, в 21,43$ осложнилась нефропатией I степени, угрозой невынашивания, в остальных случаях I женщина перенесла острую гонорею в первом триместре, I - трихомонадный кольпит, 2 - ОРВИ. Клинические формы стафилококковой инфекции у их детей были представлены, в основном .везик/логуетулвясы и пузырчаткой и практически не отличались у больных с высокими и низкими титлами антител. То есть на татры антибактериальных антител в первую неделю заболевания у новорожденных оказывает влияние не клиническая форма заболевания, а предшествующий анамнез, в частности, инфекционная патология матери во время беременности, при которой происходит выработка антител к бактериальным антигенам. Эти антитела М017Т передаваться траноплрцентарно и в последующем через грудное молоко.

Средний титр антистафилококковых антител в I подгруппе составил 1:139,17*38,22 и был достоверно ниже, чем во 2 подгруппе 1:297,14*52,51 (Р<0,02). Достоверной разницы титров антител к кишечной палочке в этих подгруппах получено не было (1:73,50*33,95 и 1:158,00*44,07 соответственно, Р>0,1). 'Чувствительность метода дифференциальной микрокалориметрии составила 82,35$, специфичность - 83$.

Таким образом, при локализованных формах стафилококковой инфекции в период репарации отмечалось достоверное нарастание титров антибактериальных антител к диагностически значимому антигену.

В группе новорожденных с инфекционно-воспалительными заболеваниями, обусловленными грамотрицательной микрофлорой, соотношение средних титров антибактериальных антител было иным. Средний- титр антител к антигену стафилококка был ниже такового к антигену килечной палочки (1:173,33*84,8 и 1:235,0*57,44 соответственно, Р>0,05), хотя и оказался повышенным, что можно объяснить процессами, связанными с дисбиоценозом. Но уровень антистафилококковых антител у дат ей этой группы не отличался достоверно от показателя группы здоровых детей (1:61,11*17,52). При сравнении титров антител к антигенам энтеробактерий при инфекционно-

воспалительных заболеваниях, обусловленных грамотрицагельной микрофлорой, получены достоверные разлитая с группой здоровых детей (1:235,0*57,44 и 1:35,56*11,34 соответственно, Р> 0,01).

Таким образом, на этиологически значимые антигены в группе новорожденных с Инфекционно-Еоспалительными заболеваниями выявлялись антитела в высоких титрах, достоверно отличающихся от показателей здоровых детей.

В группе детей с инфекотонно-воспалнтельными заболеваниями неустановленной этнологии достоверная разница получена только по средним титрам' антител к антигену кишечной палочки по сравнению со здоровыми (1:181,67*57,26 и 1:35,56*11,34 соответственно, Р<0,01). То есть на основании результатов вышеприведенных исследований можно предположить, что в развитии заболеваний у детей этой группы ведущее значение принадлежит энтеробактериям,. аналогичные данные получены и по ПВДГ с энтеробактериями..

Показатели детей с бактериальными инфекциями сравнивались с данными группы новорожденных с перинатальным поражением ЩС. В этой группе на момент обследования не было клинических проявлений инфекционного заболевания. При анализе анадгаестич'еских данных были получены следующие результаты: 47,1$ матерей этих детей были здоровы, из них у 50$ беременность и роды протекали без особенностей, у остальных во второй половине беременности отмечались ОРВП, яеуропатия, роды осложнились длительным безводным периодом. 52,9« женщин имели очаги хронической инфекции с обострениями во время беременности. Средние титры антистафилококковых антител в этой группе достоверно не отличались от таковых у здоровых (1:141,5*43,45 и 1:61,11*17,52 соответственно, Р>0,1) и у больных со стафилококковой инфекцией (1:231,05*49,35, Р>0,1). Средние титры антител к антигенам эктеробактерий были достоверно ниже, чем у детей с инфекционно-Еоспалительными заболеваниями, вызванными энтерсбачтерияот (1:74,71*28,91 и 1:235,0*57,44 соответственно, Р >0,02) и не отличались достоверно от тэкоеых у здоровых (1:35,56*11,34, Р> 0,05).

В группе здоровых новорожденных в 25$ случаев встречались высокие титры антпстафилококковых антител и в 8,33$ высокие титры антител к антигену кишечной палочки.

Наличие высоких титров антибактериальных антител у здоровых новорожденных можно обменить передачей этих антител от матери.

Среди матерей этой группы только 41,67$ женщин были здоровы, беременность и роды у них протекали без осложнений. Остальные матери имели хронические очаги инфекции (хронический тонзиллит, хронический пиелонефрит, хронический аднексит), хотя в период беременности.обострение основного заболевания не отмечалось ни у одной женщины.

Методом дифференциальной микрокалориметрии было обследовано 25 женщин, из них 10 имели хронические'очаги.инфекции. Выявлено достоверное повышение тигров антистафилокоюсоЕых антител и антител к антигенам кишечной палочки в группе матерей с хроническими очагами инфекции по сравнению с женщинами без хронических очагов инфекции (Табл. 4).

Таблица 4

Средние титры антибактериальных антител и их встречаемость у матерей

Антитела к

Группы ^ стафилококка АГ кишечной палочки

' Средний Встречаемость,^ Средний Встречаемость,& титр высокие низкие ТИГР высокие низкие

^даыс. ^ 1:171, о±

50,00 ±55)6 50,00 50,00

¡ЙШк- йо3;6" - 1оо'°° ^О654± 10'ш 90'00

гов инфек- -ш'7 ~1и,&

..цеи. Р<0,05 Р<0,05

. .Таким образом, женщины с хроническими очагами инфекции даже в период ремиссии имеют более высокий уровень антибактериальных антител, чем женщины без. инфекционной патологии. Эти антитела мотуг передаваться ребенку как ео внутриутробном периоде, так и при грудном вскармливаний.

Изучение титров АТ к бактериальным антигенам показало, что отмечается соответствие их уровня в 80,67$ случаев данным теста

- ПИЩ. В начальный период инфакционно-воспалительного процесса показатель иммуноцитоприлипания с этиологически значимым^ микроорганизмами, как правило, бывает высоким, а антитела к антигену этих микроорганизмов выявляется еще в низких титрах. В разгар заболевания при высоких титрах антибактериальных антител отмечалось и большое количество иммунных комплексов на поверхности измененных гранулоцитов. В период реконвалесценции значения ПШЩ были низкими, по-видимому, как за счет уменьшения количества рецепторов на гранулоцитах, так и снижения количества нейтрофилоЕ с рецепторами для комплекса антиген-антитело. Антибактериальные антитела обнаруживались в достаточно высоких титрах, что объясняется закономерностями иммунного ответа е разные периоды инфекционного процесса (А.Ф.Блюгер и соазт., 1930).

!.?етод дифференциальной микрокэлсриметрии не требует при выполнении большего количества химических реактивов и при наличии прибора гложет бить внедрен в клинических лабораториях практического здравоохранения для выявления антител, а такие в научно-исследовательски" лабораториях, изучающих термодинамические процессы.

Тгл;пм сбразс.ч, в лабораторные исследования новорожденных и детей раннего возраста легла- быть включен предлокэпный комплекс методов, позволяющий своевременно выявлять инфекотонно-воспали-телышя заболевания, что обеспечивает рояннга диагностику и снсе-Ереиенкуа терапию.

ВЫВОДЫ

1. 7 детей с кишечной инфекцией измененные гранулециты пе-риферпческсй крови с высокой специфичностью взашодейстЕуют с аутсктамгзами микроорганизмов в тесте показатель иммуйоцитоприлп-пания.

2. Показатель реакции измененных гранулоцитов периферической крови (тест чКЭД) С Bscherichiae Coli И с Salmonellae minnesotae я 595 является индикатором ипфекциошю-всспалптелыюго процесса, вызванного энтеробактерпяг.тг, а со стафилококковой вагапщой - индикатором стафилококковой ннфекцип.

3. Значения ПКЦТ с микроорганизмами зависят как от этиологии, так и от активности воспалительного процесса. В острый период за-

болевания, значения ПИЩ повышаются, а в период реконвалесценции снижаются.

4. Обострение хронических очэгое инфекции или возникновение острого инфекционного заболевания во второй половине беременности у матери сенсибилизирует организм плода и в период новорож-денносги у таких детей можно выявить как повышенные значения ПИЦЦ с микроорганизмами, так и высокие уровни антибактериальных антител при отсутствии инфекционно-воспалительного заболевания.

5. С помощью дифференциальной мпфокалориметрии можно проводить выявление антител к различным антигенам. Реакция АГ-АТ протекает с выделением тепловой энергии (при образовании комплекса) или с поглощением энергии (при распаде комплекса), что зависит от концентрации АГ и АГ.

6. Использование для выявления антител с помощью дифференциальной микрокалориметрии микрообъемов крови, а также высокая чувствительность и специфичность метода дают возможность рекомендовать его для иммунодиагностики инфекционно-воспалитель-ных заболеваний у новорожденных и детей раннего возраста.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Столярова В.М., Аутеншлюс А.И., Петерсон В.Д. Микрометод гранулоцктарного розегкообразования со стафилококком и его значение в диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний новорожденных // Тез. докл. научн. конференции "Профилактика, диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний и вторичных иммунодефицитов" - Новосибирск. - 1985. - Т. 2. - С. 100-102.

2. Trunova Ii.i. , Peterson V.D., Autenshlus A.I.,

Shvayuk A..P., Koroleva I.V., Oavrilova L.O., Stolyarova V.M. The Estimation of the Newborn Immune System Stimulation in Normal and. Pathological States // American J. of Reproductive Immunology and Microbiology. - 1985. - V. 7, 11 2. - P. 66 (87).

3. ТулеыисоЕа Г.Д., Аутеншлюс А.И., Столярова В.M., Петерсон В.Д., Рубилина Э.Э. Показатель иммуноцитоприлипания с бактериальными антигенами - микрометод для применения в диагностике заболеваний легких // В сб. "Диагностика, особенности течения и профилактики болезней органов дыхания в Дальневосточном регионе". -Благовещенск, - 1986. - Т. I. - С. 235-237.

4. Аутеншлюс А.И., Петерсон В.П., Гаврилова Л.О., Столярова В.М. Микрометоды определения активности инфскционно-воспалитель-

ных заболеваний новорожденные - Методические рекомендации -М., 1987. - 12 с. .

5. Столярова В.1Л., Аугеншлвс А.й., Ковалевич Б.В., Петерсон '

B.Д. Дифферэнциалъная щпфокалориметрия в диагностике инфекцисн-"'. но-воспалительных заболеваний новорожденных детей // Педиатрия. 1988. - Ji 4. С, 47-50.

6. Аутеншлюс А.И., Ковалевич Б.В., Губайдулш В.Р., Столя-' poEa В.М., Иванова О.В. Дифференциальная микрокалориметрия реакции антиген-антитело // Лаб. дело. - 1989. - № 7. - С. 49-53.

7. Гаврилова Л.О., Столярова В.М., Петерсон В.Д. .Иммуноци-тохимические показатели активности инфеквдонно-воспалительного процесса и сенсибилизации новорожденных к бактериальным- и паразитарным антигенам // I Всесовз. иммунологический съезд (Сочи, 15-17 ноября 1989 г.) - М., 1989.' - Т. I. - С. 207.'

8. Аутеншлюс А.И.., Гизагуллина С.С., Биргер М.О.., Сгояяро-ва В.М., Иванова О.В., Никовская М.И. Изучение взаимодействия измененных граяулоцитов с микроорганизмами при инфекционно-воо-палительных заболеваниях у новорожденных и детей раннего возрао-та // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1990. - № 4. - С. II2-II4.

9. Гизагуллина С.С., Биргер М.О., Аутеншлюс А.И., Столярова В.М. Способ диагностики острого кишечного заболевания, вызываемого условно-патогенными энтеробактериями у детей. - A.C.

# 1697007. Бвлл. открытий и изобретений. - й 45. - 1991.

10. Аутеншлюс А.И., Иванова О.В., Столярова В.М., Михайлова Е.С. ¡Иммунные реакции в системе мать-плод-новорожденннй и их значение в оценке состояния здоровья детей // Тез. докх. Всесссз. конф. с мендунар. участием "Патогенез хронического воспаления". Новосибирск, 1991. - С. 146-148.

11. Гаврилова Л.О., Столярова В.М., Аутеншлюс А.й., Иванова О.В. Иммунные реакции с бактериальными и тканевыми антигенами у ^. новорожденных с патологическими процессами •// Тез. докл. регион. кон$. с междунар. участием "Актуальные проблемы охраны материн-; стЕа и -дегсхЕа на Востоке страны". - Новосибирск, 1991. - Ч. I. -

C. 158-160.

12. Аутеншлюс А:И., Иванова О.-В., Михайлова Е.С., Столярова В.М., Губаидулип В.Р. Бактериальная.и ткаревая сенсибилизация у беременных и их детей // Вопроси охраны материнства и детсг-