Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

Гиндина, Татьяна Леонидовна

Диссертации по медицине → Гематология и переливание крови

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Гиндина, Татьяна Леонидовна Санкт-Петербург 2002 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.29

Автореферат диссертации по медицине на тему Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

РГ5 ОД

1 г т т

На правах рукописи

ГИНДИНА ТАТЬЯНА ЛЕОНИДОВНА

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ГЕМОПОЭЗА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ МЕТОДОМ СЕРЕБРЕНИЯ ЯДРЫШКОВЫХ ОРГАНИЗАТОРОВ

14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

На правах рукописи

ГИНДИНА ТАТЬЯНА ЛЕОНИДОВНА

14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Сургутском государственном университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Н. Н. Мамаев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор С.С. Бессмельцев доктор медицинских наук, А.Ю. Зарицкий

Ведущая организация:

Российская Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Защита состоится « »2002 г. в часов

на заседании Диссертационного Совета Д 208.074.01 в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии (193024, г. Санкт-Петербург, ул.2-я Советская, д. 16)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « /<Р » г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

В.С. Быков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Хотя представление о ММ как опухолевом заболевании В-лим-фоцитов сформировалось давно, происхождение злокачественных клеток до последнего времени оставалось тайной. По современным представлениям они возникают из клеток фолликулярных центров, которые, пройдя дифференцировочные мутации, созревают и накапливаются в костном мозге.

Начальная экспансия миеломных клеток в костном мозге скорее всего обеспечивается интерлейкином-6 (ИЛ-6). По мере прогрессии заболевания к стимуляции миеломных клеток подключаются и другие ци-токины [Berenson, 2000], секретируемые стромальными и костными элементами в условиях прилипания к ним миеломных клеток. Кроме того, часть цитокинов может продуцироваться самими миеломными клетками.

Несмотря на выраженные изменения гемопоэза, патогенез этих нарушений при ММ изучен слабо. Ранее отмечаемое недостаточное поступление в костный мозг солей железа в контрольных исследованиях не подтвердилось. Предполагаемое участие дефицита эритропоэтина в патогенезе анемии при ММ оказалось применимым к небольшому числу больных. При этом было показано, что количество эритроидных предшественников в костном мозге, а также их пролиферативный потенциал при ММ снижаются. Отсюда возникло представление, что в основе развития анемии при ММ может быть укорочение длительности жизни эритроцитов, недостаточно компенсируемое ответной реакцией костного мозга. По-видимому, близкий к этому сценарий имеет место также и в гранулоцитопоэзе больных ММ [Wunder et al., 1995]. В то же время данные о нарушениях мегакариоцитопоэза при ММ практически отсутствуют.

В последнее время важный вклад в прояснение биологии костномозговых элементов при ММ внесли исследования дифференциально окрашенных серебром ядрышек, которые позволяют оценить уровень транскрипции и созревания прерибосомной РНК (пре-рРНК) в каждой анализируемой клетке [Ro-Choi, 1997]. В результате этих исследований была всесторонне изучена белоксингезирующая способность самих миеломных клеток и показана большая прогностическая значимость этих параметров [Pich et al., 1994]. В то же время количественная характер«-

стика всего гемопоэза с использованием такого подхода до сих пор не проводилась.

Цель исследования

Изучить белоксинтезирующую способность кроветворных клеток костного мозга при ММ и уточнить патогенетические механизмы нарушения гемопоэза при этом заболевании.

Задачи исследования:

- Оценить транскрипцию и созревание пре-рРНК в основных классах кроветворных элементов костного мозга больных с различными им-мунохкмическими вариантами и клиническим течением множественной миеломы с помощью метода избирательного серебрения ядрышек.

- Провести сопоставление полученных данных по серебрению ядрышек кроветворных элементов с основными клиническими и лабораторными параметрами больных множественной миеломой.

- Уточнить место нарушений биологической активности миелом-ных клеток, эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов в патогенезе множественной миеломы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Использованный в работе метод количественной оценки гемопоэза с помощью избирательного серебрения ядрышковых организаторов кроветворных элементов помогает оценить вклад изменения функциональной активности эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов в патогенез нарушений гемопоэза при множественной миеломе.

2. Однонаправленные зависимости изучаемых показателей активности рибосомных цистронов миеломных клеток и костномозговых лимфоцитов с таковыми эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов больных множественной миеломой указывают на тесную функциональную связь лимфоцитов с миеломными клетками и, отсюда, на их важную роль в патогенезе этого заболевания.

3. Реакция эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов на присутствие в костном мозге биологически активных миеломных клеток и лимфоцитов носит разнонаправленный характер, и может быть частично объяснена возмущающими воздействиями продуцируемых опухолевыми элементами цитокинов на протеинкиназу С-альфа.

4. По сравнению с контролем активность рибосомных цистронов в эритроидных предшественниках больных ММ повышена, что может быть одной из причин депрессии длительно активируемого эритропоэза.

Научная новизна

- Впервые проведена количественная оценка функционального состояния всех основных видов кроветворных элементов костного мозга больных множественной миеломой методом дифферециального серебрения ядрышек.

- На основании анализа многочисленных корреляционных зависимостей показано, что миеломные клетки и лимфоциты костного мозга больных ММ в функциональном отношении представляют единое целое.

- Отмечены важные отличия в реакции зритроидных, гранулоци-тарных и мегакариоцитарных элементов костного мозга больных ММ на инфильтрацию костного мозга миеломными клетками и лимфоцитами.

Практическая ценность

Предложенный в работе метод изучения активности рибосомных цистронов кроветворных элементов костного мозга больных ММ с помощью нитрата серебра прост и технически доступен любой цитологической лаборатории. Он может быть с успехом использован для количественной оценки гемопоэза при многих заболеваниях крови, в том числе на фоне проводимой лекарственной терапии и миелотрансплантации.

Внедрение результатов работы

Метод количественной оценки гемопоэза, разработанный в диссертационной работе, внедрен в практику гематологических отделений Дорожной клинической больницы г. Санкт-Петербурга и Центральной районной клинической больницы г. Сургута при обследовании больных множественной миеломой. Результаты исследования используются в учебном процессе для студентов медицинского факультета СурГУ.

Апробация работы

Полученные данные были представлены на Всероссийской научно-практической конференции «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере» (Сургут, 2000), Окружной научно-практической онкологической конференции (Сургут, 2001), Международном рабочем совещании по множественной миеломе (Стокгольм, 1999), 13-м Международном симпозиуме по молекулярной патологии гемопоэза (Нью-Йорк, 2000) и на 25-м Юбилейном Конгрессе Европейского общества медицинских онкологов (Гамбург, 2000).

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 16 рисунками. Библиография включает 54 отечественных и 188 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследование включены 50 больных ММ в возрасте 37-80 лет (34 мужчины и 16 женщин), 46 из которых наблюдались в гематологических отделениях больницы № 31 (Клинический центр передовых медицинских технологий) и Дорожной клинической больницы города Санкт-Петербурга (основные клинические и лабораторные данные этих больных были любезно предоставлены д.м.н., профессором Э.И. По-дольцевой и К.М.Н. И.А. Скороход), а 4 - в Сургутской центральной районной клинической больнице.

Одиннадцать обследованных больных (22%) к началу исследования терапии не получали, у 12 пациентов (24%), заболевание находилось в фазе плато, а у 27 (54%) - имел место рецидив ММ.

Диагноз ММ ставили на основании критериев CLMTF. (Chronic Leukemia-Myeloma Task Force, 1973). При постановке диагноза у 8 больных (16%) определена I клиническая стадия заболевания, у 23 (46%) - II стадия и у 19 (38%) - III стадия ММ. Подстадия А (без нарушения почечной функции) поставлена у 36 больных (72%), а подстадия В (с почечной недостаточностью) - у 14 (28%).

У 10 из 50 больных (20%) выявлен IgA тип моноклонального иммуноглобулина, а у 33 (66%) - IgG иммунохимический вариант ММ. У 5 из 50 больных (10%) - обнаружена экскреция легких цепей иммуноглобулинов (ММ Бене-Джонса), а в 2 случаях (4%) была солитарная плаз-моцитома.

Согласно критериям Э.И. Подольцевой (1996) группа обследованных больных по активности течения заболевания была разбита на 3 подгруппы: первую подгруппу составили 17 больных (34%) с индолентной ММ, вторую - 16 больных (32%) с активной ММ и третью - 17 пациентов (34%) с агрессивной ММ.

У каждого пациента определяли следующие клинические и лабораторные признаки: стадию ММ согласно критериям Durie В. и Salmon S. (1975), степень костных повреждений, концентрацию гемоглобина в крови, скорость оседания эритроцитов, количество лейкоцитов и тромбоцитов в крови, лейкоцитарную формулу, уровень общего белка в сыворотке крови, суточную потерю белка с мочой, концентрацию креати-нина в крови, количество моноклонального белка в крови, тип иммуноглобулина, субтип легких цепей, содержание плазматических клеток в костном мозге, морфологическую характеристику эритроидного, гра-нулоцитарного и мегакариоцитарного ростков костного мозга, уровни р2-микроглобулина, а также спонтанного и стимулированного интер-лейкина-6 (ИЛ-6). В качестве контрольной группы были использованы данные изучения костного мозга 12 здоровых доноров.

Изучение активности рибосомных цистронов интерфазных клеток осуществляли на стандартно приготовленных мазках костного мозга. Их высушивали на воздухе, фиксировали в смеси метилового спирта с ледяной уксусной кислотой в соотношении 3:1 и окрашивали 50% раствором нитрата серебра по стандартной методике Howell and Black, [1980] в модификации H.H. Мамаева и др. [1984, 1989]. Анализ препаратов с импрегнированными серебром ядрышкообразующими районами (ЯОР) в ядрах интерфазных клеток проводили с помощью микроскопа «Ergaval» («Карл Цейс», Йена) при увеличении ЮООх. Оценивали количество ядрышек и содержание в них Ag-гранул (А|*ЯОР) в популяциях эритроидных клеток I порядка (пронормобла-сты и базофильные нормобласты), эритроидных клеток II порядка (по-лихроматофильные нормобласты), промиелоцитов (Пм), миелоцитов (Мц), моноцитов (Мн), лимфоцитов (Лф), плазматических клеток (Пк) и мегакариоцитов (Мг). У каждого больного анализировали по 50 - 100 клеток в каждой из интересующих клеточных популяций. На основании полученных данных рассчитывали среднее содержание ядрышек и Aj>HOP в ядрах клеток для каждой из исследуемых групп костномозговых элементов.

Статистическую обработку данных проводили с использованием новой технологии системного анализа клинико-лабораторных данных, воплощенной в программном комплексе «Гема» [Генкин A.A., 1999]. Для сравнения средних и разброса двух выборок определяли параметрический критерий Стьюдента, непараметрические критерии Уилкоксо-на-Манна-Уитни (U-критерий), а для сравнения дисперсий - непараметрические критерии Миллера (Q-критерий) и Фишера (F-критерий). Если оценка дисперсий сравниваемых выборок была различной, использовали модификацию t-критерия - критерий Беренса-Фишера. При анализе средних значений в парных наблюдениях определяли непараметрический критерий Уилкоксона. Корреляционный анализ проводили с вычислением коэффициента попарной корреляции Пирсона для анализа парных связей.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Среднее количество ядрышек в клетках костного мозга больных ММ и в контрольной группе представлено на рис.1. Этот показатель был максимальным в мегакариоцитах, промежуточным - в эритроидных клетках II порядка и промиелоцитах, а в лимфоцитах и плазматических клетках эта величина была минимальной. При этом среднее количество ядрышек у больных ММ, по сравнению с контролем, имело тенденцию к повышению, хотя статистической достоверности получено не было.

А)

25 20 15 10

гш ГШ ГШ га

Эр1 Эр2 Пм Мц Мн Мг Пк Лф

Б)

О Контроль ВМиелома

□ Контроль ВМиелома

Эр1 Эр2 Пм Мц Мн Мг Пк Лф

Рис.1 Среднее количество ядрышек (А) и гранул серебра (Б) в клетках костного мозга гематологически здоровых лиц и больных ММ.

По оси ординат - среднее число ядрышек (А) и среднее число Ag-гранул на ядро (Б); по оси абсцисс - типы изученных клеток: Эр1 - про-нормобласты и базофильные нормобласты, Эр2 - полихроматофильные нормобласты, Пм - промиелоциты, Мц - миелоциты, Мн - моноциты, Мг - мегакариоциты, Пк - плазматические клетки, Лф - лимфоциты.

Активность рибосомных цистронов (среднее число А§-гранул на ядро) у больных ММ и здоровых доноров была максимальной в мегака-риоцитах, промежуточной - в эритроидных клетках I порядка и промие-лоцитах (рис.1). Минимальную активность рибосомных генов проявляли лимфоциты и миелоциты. При этом плазматические клетки занимали промежуточное положение на уровне активно делящихся Эр-П и про-миелоцитов. По сравнению с контрольной группой у больных ММ среднее число Ag-гpaнyл на ядро было достоверно выше в эритроидных предшественниках I и II порядка (р<0,05), в то время как в гранулоци-тарных элементах статистической достоверности получено не было.

Плазматические клетки и лимфоциты

Экспрессия пре-рРНК плазматических клеток больных с различными иммунохимическими вариантами ММ варьировала в широких пределах (рис. 2). Средние показатели Ag-гpaнyл были несколько выше у больных с вариантом ММ, чем при ^А или ММ Бенс-Джонса, разница статистически недостоверна.

-28 -24 —20

-16 . -• ■ •

-12

-8_

0 I I I I

^О 1|>А Бенс-Джонса Солит

Рис.2. Среднее число гранул серебра (А§ЯОР) в плазматических клетках костного мозга больных с различными иммунохимическими вариантами ММ.

По оси абсцисс - иммунохимический вариант ММ, по оси ординат -среднее количество Ag-гpaнyл на ядро. Горизонтальные линии указывают на средние величины в группе.

Активность рибосомных цистронов плазматических клеток и лимфоцитов положительно коррелировала с таковой Эр-1 (г=0,64 и г=0,54, р<0,001), Эр-И (г=0,63 и г=0,45; р=0,001), Пм (г=0,59; р=0,001 для обоих видов клеток), Мц (г=0,42 и г=0,47; р=0,003), но отрицательно с Мг (г=-0,72; р=0,001 и г=-0,36; р=0,045, для Пк и Лф соответственно). Кроме того, в более однородной группе больных с ММ отмечены положительные корреляции среднего числа Ag-rpaнyл в Пк и Лф с уровнем спонтанного ИЛ-6 (г=0,65; р=0,02 и г=0,58; р=0,039, соответственно), общим белком сыворотки крови (г=0,49; р=0,009 и г=0,46; р=0,013, соответственно) и парапротеином (г=0,48 р=0,002 и г=0,46; р=0,013, соответственно). Далее у плазматических клеток выявлены положительные корреляции экспрессии рибосомных цистронов с М-градиентом сыворотки (г=0,44; р=0,046), СОЭ (г=0,36; р=0,044) и суточной потерей белка с мочой (г=0,53; р=0,026), а у лимфоцитов - с р2-микроглобулином (г=0,69; р=0,03).

Подводя итог этой части работы, необходимо подчеркнуть, что активность рибосомных цистронов в миеломных клетках и связанных с ними лимфоцитах больных ММ варьировала в широких пределах, а средние показатели экспрессии пре-рРНК опухолевых элементов мало зависели от иммунохимического варианта ММ и проведенной к моменту исследования терапии. Учитывая данное обстоятельство, а также разное содержание плазматических клеток и лимфоцитов в костном мозге обследуемых больных, представлялось интересным изучить реакцию на них отчетливо суживающихся при ММ эритроидного, грануло-цитарного и мегакариоцитарного ростков кроветворения на всей группе больных.

Эритроидные элементы

Как показано выше (рис. 1) среднее число Ag-гpaнyл в Эр-1 и Эр-П (эритроидных предшественниках I и II порядка) больных ММ было достоверно выше такового у гематологически здоровых лиц (р<0,05). Возможной причиной активации эритропоэза при ММ могли быть сами миеломные клетки, а именно их повышенная метаболическая активность и/или степень инфильтрации ими костного мозга. Чтобы ответить на этот вопрос, активность рибосомных цистронов эритроидных клеток была сопоставлена в группах больных с низкой (<15 Ag-гpaнyл на ядро) и высокой (>15 А§-гранул на ядро) активностью плазматических клеток. Исследование показало, что у больных второй группы среднее число Ад-гранул на ядро в Эр-1 и Эр-П клетках (45,61 ± 7,05 и 16,8 ± 4,99, со-

ответственно) было достоверно выше, чем в группе сравнения (36,18 ± 7,45 и 13,09 + 2,62; р<0,001 ир=0,005, соответственно).

Таблииа 1

Сравнение среднего числа Ag-гpaнyл (М ± т) в ядрышках костномозговых элементов и некоторых лабораторных параметров в группах больных ММ, различающихся по уровню гемоглобина в

крови

с4 и м = 1 а ~ Лабораторные параметры Критерии достоверности

щ Ь: и о X НЬ < 100 г/л НЬ > 100 г/л 1 Б Р

Пк 17,52 ±5,04 14,96 ±4,26 1,6 1,4 Не дост.

Лф 7,03 ± 1,12 6,91 ±0,9 0,4 1,56 Недост.

л С! Эр-1 39,79 ±10,64 40,53 ± 7,9 0,2 1,81 Не дост.

3 & • ад < Эр-Н 16,22 ±6,19 14,06 ±2,72 5,19 <0,001

Пм 20,32 ± 5,88 21,11 ±4,36 0,4 1,81 Не дост.

Мц 8,63 ± 1,93 8,34 ±2,19 0,3 1,29 Не дост.

Мг 59,51 ± 11,45 79,21 ±24,55 2,5 0,023

Общий белок, г/л 96,54 ±21,16 80,24 ± 14,48 2,5 0,018

М-градиент 34,41 ±20,19 17,65 ±16,99 2,2 0,034

СОЭ, мм/час 54,92 ± 22,6 30,49 ± 17,81 3,7 <0,001

СПБ, г/л 1,56 ±2,91 0,11 ±0,25 138 <0,001

Креатинин, ммоль/л 0,13 ±0,09 0,09 ± 0,08 2,1 0,044

Тромбоциты 10*9/л 174,91 ± 59,9 241,13 ±63,8 2,9 0,005

% ПК к/м 41,82 ± 25,56 11,42 ± 14,02 3,8 0,001

Примечание: Пк - плазматические клетки, Эр-1 - эритроидные клет-ки I порядка (пронормобласты и базофильные нормобласты), Эр-И - эритроидные клетки II порядка (полихроматофильные нормобласты),

Мг - мегакариоциты, Пм - промиелоциты, Мц - миелоциты, Лф - лимфоциты, СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/час, СПБ - суточная потеря белка, г/л, %Пк к/м - процентное содержание плазматических клеток в костном мозге.

Сравнительный анализ экспрессии пре-рРНК эритроидных элементов у больных с различной степенью инфильтрации костного мозга плазматическими клетками показал, что она была также достоверно выше в группе больных с более высоким содержанием ПК в костном мозге (>20%), это касалось полихроматофильных нормобластов (р<0,001, Е-критерий). Из этих сопоставлений следует, что активность рибосом-ных цистронов эритроидных элементов при ММ зависит в какой-то мере и от содержания Пк в костном мозге, и от их метаболической активности.

Другой возможной причиной повышения активности рибосомных цистронов в эритроидных клетках костного мозга при ММ могла быть свойственная ей анемия. Чтобы проанализировать эту ситуацию, мы сравнили показатели экспрессии пре-рРНК в костномозговых элементах больных с различным уровнем гемоглобина крови (табл. 1). Исследование показало, что у больных с выраженной анемией среднее число А§-гранул на ядро в полихроматофильных нормобластах было достоверно выше, чем в группе сравнения.

При проведении корреляционного анализа оказалось, что активность рибосомных генов в Эр-1 элементах больных ММ сильно связана с таковой Пк (г=0,64; р=0,001), Лф (г=0,54; р<0,001), Эр-И (г=0,72; р<0,001) и Пм (г=0,53; р<0,001), с уровнем спонтанного (г=0,39; р=0,041) и стимулированного интерлейкина-6 (г=0,47; р=0,016), а у больных с ММ - также с уровнем р2-микроглобулина (г=0,67; р<0,035).

Что касается Эр-П элементов, то показатели активности их бело-ксинтезирующего аппарата положительно коррелировали с таковой Пк (г=0,63; р=0,001), Лф (г=0,45; р<0,011), Пм (г=0,56; р<0,001), с уровнем спонтанного (г=0,4; р=0,038) и стимулированного ингерлейкина-6 (г=0,87; р<0,001). При анализе этих данных у больных ММ помимо отмеченных выше корреляций были обнаружены сильные положительные связи с процентным содержанием Пк в костном мозге (г=0,61; р=0,001), суточной потерей белка (г=0,9; р=0,001), но отрицательные с уровнем эритроцитов (г=-0,39; р=0,031) и гемоглобина крови (г=-0,41; р=0,023).

Гранулоцитарные элементы

По нашим данным среднее число Ад-гранул в гранулоцитарных элементах больных ММ существенно не отличалось от такового в контрольной группе (рис. 1). Вместе с тем, сопоставление этого показателя в группах больных с различной активностью плазматических клеток об-

наружило, что у пациентов с более активными Пк (>15 А§-гранул на ядро) уровень транскрипции и созревания пре-рРНК в Пм и в Мц был выше (23,28+3,65 и 8,94 ± 2,05 А§-гранул на ядро, соответственно), чем в группе сравнения (18,84+4,52; и 7,65 ± 2,05; р=0,001 и р=0,049, Мфи-терий и \у-критерий, соответственно). В то же время у больных с различным содержанием Пк в костном мозге эти показатели не отличались.

Корреляционный анализ обнаружил, что экспрессия рибосомных цистронов Пм положительно связана с таковой Пк (г=0,59; р=0,001) и Лф (г=0,59; р=0,001), Эр-1 (г=0,53; р<0,001) и Эр-П (г=0,56; р<0,001), Мц (г=0,57; р<0,001), с уровнем спонтанного (г=0,39; р=0,042) и стимулированного интерлейкина-6 (г=0,46; р=0,016). В дополнении к этому в группе больных с ^О ММ были выявлены положительные связи А^ОР Пм с процентным содержанием Пк в костном мозге (г=0,37; р=0,046) и общим белком сыворотки крови (г=0,41; р=0,029). Что касается активности рибосомных цистронов Мц, то она положительно коррелировала с таковой Пк и Лф (г=0,42; р=0,003 и г=0,47; р<0,001, соответственно), Пм (г=0,57; р<0,001), но отрицательно с Мг (г=-0,43; р=0,023). В то же время корреляция с общим белком сыворотки крови была отмечена только у больных ММ.

Таким образом, анализ белоксинтезирующей активности эригро-идных и гранулоцитарных элементов костного мозга обнаруживает однонаправленный характер их изменений. Это находит выражение в позитивных корреляциях Эр-1, Эр-И, Пм и Мц как друг с другом, так и с таковой Пк и Лф. При этом активность эритроидных и гранулоцитарных элементов при ММ мало зависит от иммунохимического варианта болезни и проведенной к моменту исследования терапии.

Мегакариоциты

Среднее число гранул серебра в ядрышках Мг варьирует в больших пределах (от 41,54 до 146,57), составляя в среднем 74,93 ± 23,81 А^ОР на ядро, что не отличается от контрольного значения (76,4 ± 11,5) (рис. 1). Сравнительный анализ показал, что эта величина в Мг была значительно выше, чем во всех других изученных кроветворных элементах (р<0,05).

Важно отметить, что активность рибосомных цистронов Мг была ниже у больных с большим содержанием Пк в костном мозге (65,04 ± 14,38 против 81,41 ± 25,56; р=0,044, Б-критерий) и их повышенной активностью (55,84 ± 10,16 против 89,61 ± 20,71; р<0,001), чем в группе сравнения. Кроме того, этот показатель был ниже в группе больных ММ с уменьшенным содержанием гемоглобина, чем в группе сравнения (табл. 1), что сочеталось с пониженным уровнем тромбоцитов.

Корреляционный анализ обнаружил множественные обратные зависимости между экспрессией рибосомных цистронов Мг с таковой Пк (г=-0,72; р<0,001), Лф (г=-0,36; р=0,045), Мц (г=-0,43; р=0,023), с уровнем стимулированного интерлейкина-6 (г=-0,61; р=0,022), а также с содержанием Пк в костном мозге (г=-0,36; р=0,048).

Плазматические клетки, АдЯОР

Рис.3. Корреляционная зависимость между активностью рибосомных цистронов мегакариоцитов и плазматических клеток.

По оси абсцисс - среднее число А§-гранул на ядро в плазматических клетках, по оси ординат - среднее число А§-гранул на ядро в мега-кариоцитах.

Таким образом, в отличие от зритроидных и гранулоцитарных элементов, белоксинтезирующая активность Мг ведет себя иначе. Так, при нарастании в костном мозге содержания плазматических клеток и функционально связанных с ними лимфоцитов, а также при увеличении их метаболической активности, белоксинтезирующая активность Мг снижается. Кроме того, изменение этого показателя в Мг отчётливо связано с уровнем содержания в крови эритроцитов и гемоглобина, что естественно, отражается на уровне тромбоцитов.

Исследование активности рибосомных цистронов в клетках костного мозга больных ММ с разным типом легких цепей иммуноглобулинов показало (табл.2), что у больных с лямбда легкими цепями ^ активность рибосомных цистронов плазматических клеток была выше, также как и уровень общего белка, М-градиент, суточная потеря белка с мочой и связанная с ними скорость оседания эритроцитов, чем в

группе больных с каппа легкими цепями. Обращало внимание, что в первой группе больных имела место более высокая активность рибо-сомных генов в Эр-И и Мн, чем в группе сравнения.

Таблица 2

Среднее значение Ag-гpaнyл (М ± т) в клетках костного мозга и некоторые лабораторные параметры у больных ММ с разным типом легких цепей иммуноглобулинов

А^ЯОР в клетках к.м. X легкие цепи к легкие цепи Критерии достоверности Р

1 Р

Пк 16,7 ±5,56 15,17 ±3,99 < 0,008*

Лф 6,97 ±0,93 6,94 ± 0,95 0,1 1,06 Не достов.

Эр-1 43,86 ± 9,82 40,0 ± 7,44 1,2 1,74 Не достов.

Эр-И 18,56 ±6,47 13,92 ±2,47 2,1 0,047

Пм 21,93 ±3,63 21,13 ±4,28 0,8 Не достов.

Мц 8,11 ±1,16 8,35 ±2,34 4,05 0,023

Мн 14,48 ± 0,92 11,45 ±2,81 2,5 < 0,001

Б) Лабораторные тесты

Общ. белок 95,86 ± 14,59 78,5 ± 15,24 2,7 0,011

М-градиент 38,52 ± 8,93 20,22 ± 19,07 3,3 0,003

СПБ 2,24 ± 3,73 0,2 ± 0,42 8,56 < 0,001

СОЭ 44,63 ± 12,53 30,09 ±20,13 2,6 0,015

Примечания:

Сокращения те же, что к табл. 1. * соответствует критерию Уилкоксона.

Активность рибосомных цистронов Лф и Пк у больных с различными стадиями заболевания отличается незначительно (табл. 3). В то же время транскрипция и созревание пре-рРНК в эритроидных и гранулоцитарных элементах достоверно повышается у больных с более продвинутыми стадиями заболевания. Напротив, активность рибосом-

ных цистронов Мг у больных со II и III стадией ММ была достоверно ниже, чем с I стадией заболевания.

Корреляционный анализ показал, что процентное содержание Пк в костном мозге у больных с III стадией заболевания положительно коррелирует с активностью рибосомных цистронов Эр-П (г=0,57; р=0,034) и Пм (г=0,6; р=0,024), но отрицательно с уровнем гемоглобина (г=-0,64; р=0,006) и эритроцитов (г=-0,58; р=0,014). На основании этих данных напрашивается вывод, что активация эритроидных и гранулоцитарных предшественников при ММ связана с содержанием миеломных клеток в костном мозге, а не с их метаболической активностью. Кроме того, экспрессия пре-рРНК эритроидных предшественников зависит от уровня гемоглобина.

Таблица 3

Сравнительный анализ активности рибосомных цистронов клеток костного мозга в зависимости от клинической стадии ММ

Клетки К.М. Стадия Р

I п=8 II п=23 III п=19 1-Й п-ш 1-Ш

Пк 13,05 ±4,34 14,7 ±3,1 17,97 ± 5,37 - 0,012* -

Лф 6,68 ± 0,91 6,87 ±0,88 7,18 ±1,15 - - -

Эр-1 37,86 + 3,2 38,96 ±8,16 45,89 ± 7,69 0,009* 0,023 0,007

Эр-П 13,1 ± 1,7 13,87+2,62 17,83 ± 5,74 - 0,028 0,019

Пм 19,93 ± 5,98 21,06 ±3,66 22,43 ± 2,92 0,038* - 0,013*

Мц 8,85 ± 3,3 7,94 ±1,83 8,08 ± 1,52 0,019* - 0,01*

Мг 106,3 + 23,41 68,49 ± 20,5 73,8 ±11,04 0,017 - 0,001

Примечания:

Сокращения те же, что к табл.1. * соответствует Б-критерию.

Сравнительный анализ экспрессии и созревания пре-рРНК кроветворных элементов больных с различным типом течения ММ

показал, что у больных с агрессивным течением заболевания число гранул серебра в Пк, а также их процентное содержание в костном мозге

сопровождается повышением активности рибосомных цистронов в эритроидных предшественниках (табл. 4). Напротив, этот показатель в мегакариоцитах у больных с агрессивной ММ был отчетливо ниже. Отсюда можно заключить, что повышение активности гранулоцитарных и эритроидных предшественников у больных с агрессивным течением ММ может быть обусловлено не только увеличением содержания Пк в костном мозге, но и их высокой метаболической активностью.

Таблица 4

Сравнительный анализ активности рибосомных цистронов клеток костного мозга в зависимости от типа течения ММ

Клетки К.м. Тип течения ММ Р

1 Индолентная п=17 2 Активная п=16 3 Агрессивная п=17 1-2 2-3 1-3

Пк 13,62 ±3,58 14,49 ± 3,85 18,07 ±4,61 - - 0,007

Лф 6,79 ± 0,77 6,64 ± 1,14 7,3 ±0,97 - - -

Эр-1 39,79 ± 7,26 37,35 ±7,05 44,8 ±8,1 - 0,027 -

Эр-П 14,14 ±2,48 12,25 ± 1,94 17,83 ±5,18 - 0,002* 0,021

Пм 21,08 ±4,85 19,62 ±3,18 22,75 ±3,12 - 0,024 0,049*

Мц 8,26 ±2,69 7,71 ± 1,95 8,37 ± 1,33 - - 0,008*

Мг 97,38 ±18,97 60,62 ± 19,01 70,56 ± 10,31 0,004 - 0,008

Примечание:

Сокращения те же, что к табл. 1. * соответствует Р-критерию.

Анализ активности рибосомных цистронов у больных с различными фазами ММ показал, что в Пк и Лф этот показатель был наименьшим в фазе плато, но не отличался на этапах постановки диагноза и в момент рецидива (табл.5). Активность рибосомных цистронов эритроидных и гранулоцитарных элементов у больных ММ в фазе рецидива была несколько выше, чем в фазе плато, хотя в основном эта разница была недостоверна. Напротив, активность рибосомных цистронов в Мг на этапе рецидива ММ была достоверно ниже, чем в фазе плато.

Таблица 5

Сравнительный анализ активности рибосомных цистронов клеток костного мозга в зависимости от фазы ММ

Клетки к.м. Фазы ММ Р

1 постановка диагноза п=11 2 плато п=12 3 рецидив п=27 1-2 2-3 1-3

Пк 15,73+5,4 13,2 ±2,08 16,6 ±4,45 0,006* 0,007 -

Лф 6,86 ±1,02 6,66 ±0,56 7,17 ±1,02 0,048* 0,033* -

Эр-1 38,04 ±7,48 40,74 ±8,97 42,24 ± 7,76 - - -

Эр-11 15,69 ±6,18 14,58 ±2,77 15,22 ±3,99 0,015* - -

Пм 23,27 ±5,31 20,48 ±4,16 21,24 ±3,41 - - 0,05*

Мц 8,49 ±2,76 7,58 ± 1,94 8,53 ± 1,82 - - -

Мг 89,56 ±4,73 67,26 ± 17,44 0,001

Примечание:

Сокращения те же, что к табл. 1. ^соответствует F-критерию

Сравнительный анализ данных серебрения ядрышковых организаторов в группе больных ММ с почечной недостаточностью (II и III стадия") обнаружил, что активность Эр-Ii была достоверно выше (16,23 ± 6,82 против 14,83 ± 3,71; р=0,008, F-критерий), чем у больных без ХПН. В то же время этот показатель был достоверно ниже в Пм (19,13 ± 6,34 против 21,4 ± 3,49; р=0,01, F-критерий) и в Мг (56,6 ± 8,45 против 72,04 ± 18,95; р=0,039, критерий Беренса-Фшиера) больных первой группы, чем в группе сравнения.

Проведенное исследование показало, что экспрессия рибосомных цистронов в умеренно пролиферирующих Пк варьирует довольно широко, в то время как их средние показатели находятся на уровне активно делящихся промиелоцитов и полихроматофильных нормобластов. При этом процентное содержание Пк в миелограмме находится в прямой зависимости от уровня активности их рибосомных цистронов. В дополнение к этому у больных с IgG ММ степень инфильтрации костного мозга

Пк чётко коррелирует с уровнем экспрессии рибосомных цистронов в Лф костного мозга. Обсуждая эти данные, следует иметь в виду, что ар-гентофильность ядрышек миеломных клеток положительно коррелирует с их пролиферативным потенциалом [Scopeliton et al., 1994; Marmont et al., 1996], хотя эта связь была достаточно слабой и обнаруживала себя только в группе больных с низким содержанием Пк в костном мозге [Marmont et al., 1996]. С другой стороны, имеются прямые доказательства тесной связи аргентофильности ядрышек Пк с уровнем монокло-нального белка в сыворотке крови [Papadhimitrou et al., 2000], что созвучно с результатами нашей работы, выявившими четкую положительную корреляцию аргентофильности ядрышек Пк с уровнем парапротеи-на сыворотки крови, с содержанием общего белка сыворотки крови, М-градиента и связанной с ними СОЭ. При этом часть перечисленных выше параметров положительно связана с уровнем активности рибосомных цистронов не только в Пк, но и в Лф костного мозга.

Как было показано выше, экспрессия пре-рРНК в Пк и Лф при ММ чётко коррелирует с содержанием в крови спонтанного ИЛ-6, в значительной мере ответствененного за пролиферацию Пк. Отсюда правомочно допущение, что повышенная аргентофилия ядрышек Пк при ММ может быть частично обусловлена пролиферацией Пк, стимулированной или самим ИЛ-6, или какими-то другими, тесно связанными с ним цитокинами. Вместе с тем основной вклад в увеличение экспрессии рибосомных генов Пк, всё-таки, вносит их участие в синтезе белка, в первую очередь, парапротеинов. В таком случае, содружественно увеличенная аргентофильность ядрышек в слабо пролиферирующих Лф костного мозга больных ММ может быть объяснена с тех же позиций [Го-ленков А.К., Шабалин В.Н., 1995]. Основанием для такого заключения являются данные о принадлежности Лф костного мозга больных ММ к основному злокачественному клону клеток, что было показано неоднократно [Van Camp et al., 1989; Billadeau et al., 1993; Голенков A.K., Шабалин B.H., 1995; Bergsagel et al., 1995].

По нашим данным показатели транскрипции и созревания пре-рРНК в эригроидных элементах костного мозга больных ММ были выше, чем в контроле. Они были наибольшими при агрессивном течении ММ, отчётливо коррелировали с таковыми Пк и Лф и степенью инфильтрации костного мозга патологическими клетками. Возможной причиной активации рибосомных цистронов в эритроидных предшественниках костного мозга больных ММ могла быть сама анемия. В правильности такой трактовки убеждает выявленная обратная корреляция между активностью рибосомных цистронов в Эр-II и концентрацией гемоглобина, которая прослеживается не только в общей группе больных, но и у пациентов с различным клиническим течением заболевания. По-

видимому, естественной реакцией эритроидных клеток костного мозга на развивающуюся анемию должно быть усиление их пролиферативно-го потенциала. Вместе с тем имеются данные, что уровень эритроидных предшественников в костном мозге больных ММ явно ниже, чем в контроле [Dalton, 1998; Majumdar et al., 1993], их пролиферативный потенциал меньше [Timm et al., 1998; Fossa et al., 1999], а ответ на эритропо-этин слабее [Aoki et al., 1992; Dalton, 1998], чем следует ожидать.

Чтобы объяснить эти противоречивые находки, необходимо напомнить, что среднее число гранул серебра в ядрышках изучаемых клеток отражает некий общий уровень белкового синтеза, который связан не только, с пролиферацией [Derenzini et al., 2000], но и с дифферешщ-ровкой, и с созреванием, и с многосторонней функциональной активностью клеток [Мамаев H.H., Мамаева С.Е., 1992], как это имеет место в таких слабо пролиферирующих, но функционально активных клетках как кардиомиоциты, тироциты и мегакариоциты. Ярким примером высказанного положения являются остановленные в синтезе ДНК эритро-идные элементы больных В12-дефицитной анемией, которые (с позиции тесной связи AgflOP с пролиферативной активностью клеток) содержат неожиданно высокое количество гранул серебра в ядрышках. Как показали недавно проведенные исследования на В12-дефицитной Эуглене, в основе феномена повышения активности рибосомных цистронов лежит амплификация последних, направленная на усиление дифференцировки остановленных в синтезе ДНК клеток [Betraux et al., 1991]. В чём-то похожая ситуация, по-видимому, имеет место и в эритропоэзе больных ММ, что требует проведения дополнительного исследования.

Хотя среднее число гранул серебра в ядрышках Пм и Мц больных ММ мало отличалось от контроля, характер изменения активности рибосомных цистронов обнаруживает много общего с эритропоэзом. В частности, активность рибосомных цистронов в Пм и Мц положительно коррелирует с таковой эритроидных элементов, Пк и Лф, но отрицательно у Мц - с активностью Мг. Как и в эритропоэзе, максимальная активность рибосомных цистронов гранулоцитов имеет место при агрессивном течении заболевания. Поскольку известно, что, по аналогии с эритропоэзом, количество гранулоцитарных предшественников, также как их способность к образованию колоний в полутвёрдом агаре при ММ отчётливо снижается [Зарицкий А.Ю.,1979], прежде всего, у больных с активным и рецидивирующим течением ММ [Wunder et al., 1995], правомочно допущение, что механизмы активации экспрессии пре-рРНК в них такие же, как в эритропоэзе.

В отличие от эритроидных и гранулоцитарных элементов, показатели активности рибосомных цистронов в Мг больных ММ обнаруживают другие тенденции. По сравнению с контролем, они снижаются,

чему не противоречит обнаруженная в них недосегментация и уменьшение плоидности ядер. Далее, показатели функциональной активности Мг обнаруживают сильные обратные корреляции с таковыми Пк, Лф, степенью инфильтрации костного мозга опухолевыми клетками, уровнем стимулированного в моноцитах ИЛ-6. Наконец, в отличие от эритроидных и гранулоцитарных элементов, активность рибосомных цистронов Мг была отчётливо ниже во 2-й и 3-ей стадиях заболевания, а также при агрессивном течении ММ.

Для объяснения этих находок следует вспомнить, что эритроидные и мегакариоцитарные линии клеток имеют общих предшественников [Debili et al. 1996], а ключевым моментом для альтернативной диффе-ренцировки их или в эритроидном, или в мегакариоцитарном направлении является протеинкиназа С-а [Majumdar et al, 1993; Hong et al., 1996; Myclebust et al, 2000]. В свете этих данных, обнаруженная в нашей работе реципрокная активация дифференцировки эритроидных предшественников и подавление таковой в мегакариоцитарных элементах в условиях нарастающей анемии у больных ММ может быть также обусловлена какой-то модификацией в системе протеинкиназ С. Насколько верно подобное объяснение, покажут ближайшие исследования. Косвенным подтверждением правильности данной концепции является понижение уровня экспрессии рибосомных цистронов в Мг больных с низким содержанием гемоглобина в крови (<100г/л), что, по-видимому, связано с обсуждаемой выше активацией (через анемию) эритроидного ростка и тесно связанным с ней реципрокным торможением мегакарио-цитарного.

Анализ активности рибосомных цистронов кроветворных элементов в группах больных ММ с к- и Х-цепями иммуноглобулинов обнаружил более высокую экспрессию рибосомных цистронов в Пк больных с Х-цепями иммуноглобулинов. Последнее ожидаемо, поскольку эти больные считаются в прогностическом плане менее благоприятными [Абдулкадыров К.М., Бессмельцев С.С., 1993; Goranov, 1997; Tanigawa et al., 2000].

В целом проведенное исследование показывает, что подсчет гранул серебра в ядрышках кроветворных элементов костного мозга открывает реальную возможность для тонкой количественной оценки ге-мопоэза при многих заболеваниях системы крови, где патогенез нарушений эритроидного, гранулоцитарного, мегакариоцитарного и/или других звеньев кроветворения понят не до конца.

ВЫВОДЫ

1. Метод избирательного серебрения пре-рРНК в клетках костного мозга больных с различными иммунохимнческими и клиническими вариантами множественной миеломы открывает возможность для количественной характеристики не только опухолевых элементов, но и гемо-поэза в целом.

2. Активность рибосомных цистронов в миеломных клетках и лимфоцитах как у леченых, так и у нелеченых больных варьирует в широких пределах. Она мало зависит от иммунохимического варианта множественной миеломы, но достоверно выше при прогрессии заболевания и агрессивном его течении.

3. Анализ многочисленных корреляционных связей показывает, что миеломные клетки и лимфоциты костного мозга больных множественной миеломой в функциональном отношении представляют единое целое.

4. Инфильтрация костного мозга метаболически активными мие-ломными клетками и лимфоцитами сопровождается отчетливым повышением активности рибосомных цистронов в эритроидных и грануло-цитарных элементах и снижением таковой в мегакариоцитарных..

5. Разнонаправленный характер реакции эритроидных и мегакариоцитарных элементов на присутствие в костном мозге биологически активных миеломных клеток и лимфоцитов может быть обусловлен особенностями их дифференцировки из общей клетки-предшественницы эритропоэза и мегакриоцитопоэза.

6. Одним из патогенетических механизмов анемии при множественной миеломе может быть преждевременная депрессия длительно активируемого эритропоэза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Е Предложенный в работе метод является технически простым, экономически выгодным и доступным для получения информации о количественной характеристике гемопоэза при различных заболеваниях системы крови и может быть рекомендован для многих клинических лабораторий.

2. Показатели активности рибосомных цистронов миеломных клеток могут быть использованы для распознавания агрессивного течения множественной миеломы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гиндина Т.Л., Скороход И.А., Мамаев Н.Н. Количественная характеристика гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышек. II Сб. материалов Российской научно-практ. конф. «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере». - CypiyT: СурГУ. 2000, ч.2, - С.113-115.

2. Мамаев Н.Н., Гиндина Т.Л. Опыт и перспективы использования данных серебрения ядрышек в фундаментальных исследованиях и в клинике. // Сб. материалов Российской научно-практич. конф. «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере». -Сургут: СурГУ. 2000, ч.1, - С.214-215.

3. Мамаев Н.Н., Гиндина Т.Л., Скороход И.А., Кондакова Е.В., По-дольцева Э.И. Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой. // Гематология и трансфузиология, 2002, т.47, №4 (в печати).

4. Mamaev N., Gindina Т., Scorohod I., Podoltseva E. Quantitative evaluation of hematopoiesis in multiple myeloma// 13th Symposium on Molecular Biology of Hematopoiesis and treatment of Leukemia and Cancer. -July 14-18, New York, USA, 2000. Acta Haematologica, 2000, 103 suppl 1. - P.50 (abstract).

5. Mamaev N., Gindina Т., Scorohod I., Podoltseva E. A possible role of IL-6 in supression of megakaryocytic differentiation under multiple myeloma// 25th ESMO Congress. October 13-17, Hamburg, Germany. Ann Oncology, 2000, 11, suppl 4. - P.97 (abstract).

6. Podoltseva E., Scorohod I., Gindina Т., Mamaev N. Argirophilic nucleolar organizer regions study in multiple myeloma with different course of activity // Proc of VII International Multiple Myeloma Workshop. September 1-5, Stockholm, Sweden, 1999.-P. 163 (abstract).

Татьяна Леонидовна Гиндина

Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Сдано в печать 18.03.2002 г. Формат 60x80/16 Гарнитура «Times New Roman» Объем 1 'Л п л. Заказ 02-09.... Тираж 150 экз.

A«nft»c

628403, Россия, Ханты-Мансийский автономный округ, г. Сургут, ул. 30 лет Победы, 28-217

тел. (3462) 32-38-18

Лицензия на издательскую деятельность ЛР № 066050 от 10.08.98 г.

Оглавление диссертации Гиндина, Татьяна Леонидовна :: 2002 :: Санкт-Петербург

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1.

СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О БИОЛОГИИ МИЕЛОМНЫХ КЛЕТОК И

ПАТОГЕНЕЗЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 БИОЛОГИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

А ИНТЕРЛЕЙКИН-6 И ЦИКЛИН

Б ДРУГИЕ ЦИТОКИНЫ.

ИНТЕРЛЕЙКИН-1Р.

ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛИ.

ОНКОСТАТИН-М.

ИНТЕРЛЕЙКИН-15.

ИНСУЛИНОПОДОБНЫЙ РОСТОВОЙ ФАКТОР.

ФАКТОР РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ.

ТРАНСФОРМИРУЮЩИЙ РОСТОВОЙ ФАКТОР.

1.2 ВКЛАД ВИРУСА ГЕРПЕСА ННУ-8 И ЕГО ЦИТОКИНОВ В ПАТОГЕНЕЗ МИЕЛОМЫ.

1.3 МИЕЛОМНЫЕ КЛЕТКИ И СТРОМА.

1.4 ПОВРЕЖДЕНИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ ПРИ МИЕЛОМЕ.

1.5 ХРОМОСОМНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ МИЕЛОМЕ.

1.6 ОНКОГЕНЫ И ГЕНЫ СУПРЕССОРЫ ОПУХОЛЕЙ.

РЕТИНОБЛАСТОМНЫЙ ПРОТЕИН.

Р21/ЯА8.

СЕМЕЙСТВО ВСЬ-2 ПРОТЕИНОВ.

С-МУС ОНКОГЕН.

1.7 НАРУШЕНИЯ ГЕМОПОЭЗА ПРИ МИЕЛОМЕ.

1.8 ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА И

КРОВИ МЕТОДОМ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО СЕРЕБРЕНИЯ ЯДРЫШЕК.

АКТИВНОСТЬ РИБОСОМНЫХ ЦИСТРОНОВ КРОВЕТВОРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ.

ЗДОРОВЫХ ЛИЦ И БОЛЬНЫХ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ.

АКТИВНОСТЬ РИБОСОМНЫХ ЦИСТРОНОВ КРОВЕТВОРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ

ПРИ ЛИМФОИДНЫХ ЛЕЙКОЗАХ И ЛИМФОМАХ.

АКТИВНОСТЬ РИБОСОМНЫХ ЦИСТРОНОВ КРОВЕТВОРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ . ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

ГЛАВА II.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 КЛИНИЧЕСКИЙ КОНТИНГЕНТ.

2.2 МЕТОД ОКРАШИВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА РАСТВОРОМ.

АЗОТНОКИСЛОГО СЕРЕБРА.

2.3 СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ.

ГЛАВА III.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 ЭКСПРЕССИЯ И СОЗРЕВАНИЕ ПРЕ-рРНК В ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ.

И ЛИМФОЦИТАХ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

3.2 ЭКСПРЕССИЯ И СОЗРЕВАНИЕ ПРЕ-рРНК В ЭРИТРОИДНЫХ.

ГРАНУЛОЦИТАРНЫХ И МЕГАКАРИОЦИТАРНЫХ ЭЛЕМЕНТАХ КОСТНОГО. . МОЗГА ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

3.3 ЭКСПРЕССИЯ И СОЗРЕВАНИЕ ПРЕ-рРНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА.

БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ С РАЗНЫМ ТИПОМ ЛЕГКИХ. ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ.

3.4 ЭКСПРЕССИЯ И СОЗРЕВАНИЕ ПРЕ-рРНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА.

БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ С РАЗНЫМ УРОВНЕМ. ГЕМОГЛОБИНА.

3.5 ЭКСПРЕССИЯ И СОЗРЕВАНИЕ ПРЕ-рРНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА.

БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНЫМИ КЛИНИЧЕСКИМИ. СТАДИЯМИ, ФАЗАМИ И

ТИПОМ ТЕЧЕНИЯ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ.

ГЛАВА IV.

ОСОБЕННОСТИ КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ (ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ).

4.1 ЭКСПРЕССИЯ РИБОСОМНЫХ ЦИСТРОНОВ В ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ . И ЛИМФОЦИТАХ.

4.2 ЭРИТРОПОЭЗ.

4.3 ГРАНУЛОЦИТОПОЭЗ.

4.4 МЕГАКАРИОЦИТОПОЭЗ.

4.5 ГЕМОПОЭЗ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ ВАРИАНТАХ. МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ.

4.6 ГЕМОПОЭЗ У БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНЫМ КЛИНИЧЕСКИМ ТЕЧЕНИЕМ.

МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ.

Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Гиндина, Татьяна Леонидовна, автореферат

Множественная миелома (ММ) человека считается некурабельным заболеванием. На её долю приходится 1% всех злокачественных заболеваний и приблизительно 10% гематологических опухолей. Причина ММ до конца неизвестна. Высокая заболеваемость среди африканских американцев предполагает генетическую предрасположенность данной патологии. На это же указывают многочисленные сообщения о семейных случаях ММ у близких родственников, а также о повышенной чувствительности к миеломе некоторых линий мышей. По последним данным риск возникновения ММ может увеличивать радиационное воздействие и ряд других неблагоприятных факторов внешней среды [Tricot, 2000].

Хотя представление о ММ как опухолевом заболевании В-лимфоцитов сформировалось давно, происхождение злокачественных клеток до последнего времени оставалось тайной. По современным представлениям они возникают из клеток фолликулярных центров, которые, пройдя дифференцировочные мутации, созревают и накапливаются в костном мозге.

Начальная экспансия миеломных клеток в костном мозге скорее всего обеспечивается интерлейкином-6 (ИЛ-6). По мере прогрессии заболевания к стимуляции миеломных клеток подключаются и другие цитокины [Berenson, 2000], секретеруемые стромальными и костными элементами в условиях прилипания к ним миеломных клеток. Кроме того, часть цитокинов, например ИЛ-6, фактор роста эндотелия сосудов и некоторые другие, могут продуцироваться самими миеломными клетками.

Большой прогресс в понимание биологии миеломных клеток внесли цитогенетические и молекулярно-биологические исследования. Как стало известно недавно, геному миеломных клеток свойственен сложный набор численных и структурных нарушений хромосом [Х}и«1егег е1 а!., 2000]. Среди повторяющихся, неслучайных изменений кариотипа заслуживают внимания перестройки хромосом, вовлекающие в транслокации локус тяжёлых цепей иммуноглобулинов (14ц32). При этом участвующие в обмене донорские хромосомы могут быть разными. На основании проведенных исследований создаётся впечатление, что какой-то важный, подавляющий опухоль ген находится в маркере 13ц14. Из других хромосомных изменений заслуживают внимания транслокации, затрагивающие локус 1Ц13, в котором расположен ген ССЖ>1, кодирующий циклин 01, а также вовлечение в поломки локуса 4р16 с расположенным здесь рецептором фактора роста фибробластов. Как показано с помощью иммуноцитохимии, 01 циклин выявляется у трети больных множественной миеломой, а его уровень коррелирует с наличием в клетках транслокации 1(11;14)(ц13;я32) и со степенью зрелости миеломных клеток.

Несмотря на выраженные изменения гемопоэза, в первую очередь анемии, патогенез этих нарушений при ММ изучен слабо. Ранее отмечаемое недостаточное поступление в костный мозг солей железа в контрольных исследованиях не подтвердилось. Предполагаемое участие дефицита эритропоэтина в патогенезе анемии при ММ оказалось применимым к небольшому числу больных. При этом было показано, что количество эритроидных предшественников в костном мозге, а также их пролиферативный потенциал при ММ снижаются. Отсюда возникло представление, что в основе развития анемии при ММ может быть укорочение длительности жизни эритроцитов, недостаточно компенсируемое ответной реакцией костного мозга. По-видимому, близкий к этому сценарий имеет место также в гранулоцитопоэзе больных ММ [Wunder et al., 1995]. В то же время данные о нарушениях мегакариоцитопоэза при ММ практически отсутствуют.

В последнее время важный вклад в прояснение биологии костномозговых элементов при ММ внесли исследования дифференциально окрашенных серебром ядрышек, которые позволяют с помощью обычного светового микроскопа оценить уровень транскрипции и созревания прерибосомной РНК (пре-рРНК) в каждой анализируемой клетке [Ro-Choi, 1997]. В результате этих исследований была всесторонне изучена белоксинтезирующая способность самих миеломных клеток и показана большая прогностическая значимость этих параметров [Pich et al., 1994]. В то же время количественная характеристика всего гемопоэза с использованием такого подхода до сих пор не проводилась.

Цель исследования

Изучить белоксинтезирующую способность кроветворных клеток костного мозга при множественной миеломе и уточнить патогенетические механизмы нарушения гемопоэза при этом заболевании.

Задачи исследования

- Оценить транскрипцию и созревание пре-рРНК в основных классах кроветворных элементов костного мозга больных с различными иммунохимическими вариантами и клиническим течением множественной миеломы с помощью метода избирательного серебрения ядрышек.

- Уточнить место нарушений биологической активности миеломных клеток, эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов в патогенезе множественной миеломы.

Положения, выносимые на защиту:

4. По сравнению с контролем активность рибосомных цистронов в эритроидных предшественниках больных множественной миеломой повышена, что может быть одной из причин депрессии длительно активируемого эритропоэза.

Научная новизна

- Впервые проведена количественная оценка функцислального состояния всех основных видов кроветворных элементов костного мозга больных множественной миеломой методом дифференциального серебрения ядрышек.

- На основании анализа многочисленных корреляционных зависимостей на новом уровне показано, ч*о миеломные клетки и лимфоциты костного мозга больных ММ в функциональном отношении представляют единое целое.

- Отмечены важные отличия в реакции эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных элементов костного мозга больных ММ на инфильтрацию костного мозга миеломными клетками и лимфоцитами.

Практическая ценность

Предложенный в работе метод изучения активности рибосомных цистронов кроветворных элементов костного мозга с помощью нитрата серебра прост и технически доступен любой цитологической лаборатории. Он может быть с успехом использован для количественной оценки гемопоэза при многих заболеваниях крови, в том числе на фоне проводимой лекарственной терапии и миелотрансплантации.

Апробация работы

Сургут, 2001), Международном рабочем совещании по множественной миеломе (Стокгольм, 1999), 13-м Международном симпозиуме по молекулярной патологии гемопоэза (Нью-Йорк, 2000) и на 25-м Юбилейном Конгрессе Европейского общества медицинских онкологов (Гамбург, 2000).

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов"

ВЫВОДЫ

1. Метод избирательного серебрения пре-рРНК в клетках костного мозга больных с различными иммунохимическими и клиническими вариантами множественной миеломы открывает возможность для количественной характеристики не только опухолевых элементов, но и гемопоэза в целом.

4. Инфильтрация костного мозга метаболически активными миеломными клетками и лимфоцитами сопровождается отчетливым повышением активности рибосомных цистронов в эритроидных и гранулоцитарных элементах и снижением таковой в мегакариоцитарных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предложенный в работе метод является технически простым, экономически выгодным и доступным для получения информации о количественной характеристике гемопоэза при различных заболеваниях системы крови и может быть рекомендован для многих клинических лабораторий.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Гиндина, Татьяна Леонидовна

1. Абдулкадыров K.M., Бессмельцев С.С. Диагностика и лечение множественной миеломы: Методические рекомендации. -СПб, 1993. 22С.

2. Алексеев Г.А., Андреева Н.Е. Миеломная болезнь. М., 1966. 246С.

3. Алмазов В.А., Афанасьев Б.В., Подольцева Э.И. Множественная миелома // Клин. мед. 1993. - Т.71,№2. - С.5-10.

4. Андреева Н.Е. Множественная миелома: прошлое, настоящее и будущее // Гематол. трансфузиол. 1998. - Т.43,№3. -С. 4-11.

5. Блинова Т.С., Морозова Е.О., Пономаренко В.М., Блинов М.Н. Ультраструктурная организация и аргентофильные зоны ядрышек лимфобластов больных острым лимфобластным лейкозом // Гематол. Трансфузиол. 1990. - Т.35,№11. - С.14-17.

6. Генкин A.A. Новая информационная технология анализа медицинских данных. СПб.: Политехника, - 1999.191 С.

7. Голенков А.К. Клинико-иммунологическая характеристика и лечение множественной миеломы // Автореф. докт. дис-1989. -М. -40С.

8. Голенков А.К., Златкина А.Р., Гриценков А.Б. и др. Характеристика моноклональных B-лимфоцитов при множественной миеломе в различных фазах болезни // Гематол. Трансфузиол. 1988.- №10. С.16-19.

9. Голенков А.К., Касаткина В.В., Козинец Г.И. и др. Кинетическая характеристика опухолевого роста при множественной миеломе // Гематол. Трансфузиол. 1988. - №12. - С.34-36.

10. Голенков А.К., Кирзон С.С., Златкина А.Р. и др. Иммунологические нарушения при множественной миеломе // Сов. медицина. 1988. - Х°11. - С.18-19.

11. Голенков А.К., Чередеев А.Н., Златкина А.Р. и др. Состояние иммунной системы при множественной миеломе в процессе полихимиотерапии // Гематол. Трансфузиол. 1987. - №6. -С.9-13.

12. Голенков А.К., Шабалин В.Н. Множественная миелома. -СПб., 1995. 140 С.

13. Гринёва E.H. Функциональная активность тироцитов больных диффузным токсическим зобом, хроническим иммунным тиреоидитом Хашимото и узловыми образованиями щитовидной железы //Автореф. канд. дис. J1., 1991. 18С.

14. Гудкова А.Я. Оценка активности рибосомных генов кардиомиоцитов больных артериальными гипертензиями различного генеза и ишемической болезнью сердца (Разработка метода, клинико-морфологические сопоставления) //Автореф. канд. дис. JL, 1991. 18С.

15. Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Мамаев H.H. Активность ядрышковых организаторов в кардиомиоцитах больных с артериальными гипертензиями различного генеза //Арх. патол. -1989. Т.51 ,№7. - С.55-59.

16. Зарицкий А.Ю. Колониеобразующая способность костного мозга, колониеобразующая активность плазмы и лейкоцитов периферической крови при хроническихлимфопролиферативных заболеваниях // Автореф. канд. дис. -JL, 1979. 21С.

17. Зарицкий А.Ю., Алмазов В. А., Афанасьев Б.В. Исследование грануломоноцитопоэза при лимфопролиферативных заболеваниях // В кн.: "Диагностика и лечение злокачественных лимфом". Рига. - 1979. - С.3-5.

18. Зарицкий А.Ю., Афанасьев Б.В., Гольдман Е.И. Исследование регуляции грануло- и моноцитарных клеток-предшественников при миеломной болезни // Пробл. Гематол. -1979. №6. - С. 11-16.

19. Зацепина О.В. и Сметана К. Электронно-микроскопическое исследование локализации Ag-белков в ядрышках лимфоцитов человека // Цитология. 1985. - Т.27,№11. - С.1228-1234.

20. Иванова В.В. Исследование рибосомных цистронов клеток костного мозга при бронхиальной астме и клинические особенности заболевания // Автореф. канд. дис. СПб., 2000. 22С.

21. Иконникова O.A. Диагностические возможности анализа ультраструктуры лейкозных клеток и активности ядрышковых организаторов при острых лейкозах у детей // Автореф. канд. дис. М., 1990. 22С.

22. Иконникова O.A., Коляскина М, Зацепина О.В., Ленская Р.В. Активность ядрышкообразующих районов хромосом при различных иммуноцитохимических вариантах острого лимфолейкоза у детей // Цитология. 1988. - Т.30,№9. - С. 1131.

23. Иконникова O.A., Ленская Р.В., Зацепина О., Байдун Л.В. Состояние ядрышкообразующих районов в клетках костного мозга и крови при остром лейкозе у детей // Гематол. Трансфузиол. -1989. -Т.34,№9. -С.28-33.

24. Иконникова O.A., Ленская P.B., Кондратчик К.Л., Чернов В.М. Ультраструктурный портрет и активность ядрышковых организаторов лейкозных клеток при «общем» типе острого лейкоза у детей // Гематол. Трансфузиол. 1990. - Т.35,№11. - С. 11-14.

25. Кирзон С.С., Голенков А.К., Чередеев А.Н. Т-зависимый иммунодефицит при миеломной болезни // Иммунология. 1988.- №5.- С.76-80.

26. Ковалёва О.В. Белоксинтезирующая функция кардиомиоцитов у больных ИБС и пороками сердца (по результатам интраоперационных биопсий) // Автореф. канд. дис. СПб., 1991. 18С.

27. Колосков A.B. Активность ядрышковых организаторов в мегакариоцитах больных с лейкозами // Гематол. Трансфузиол. -1994. Т.39,№4. - С. 12-15.

28. Колосков A.B. Функциональная активность мегакариоцитов больных лейкозами, изученная методом избирательного серебрения ядрышек // Автореф. канд. дис. СПб., 1996. 18С.

29. Колосков A.B., Мамаев H.H. Новый подход к изучению функционального состояния мегакариоцитов в норме и патологии // Цитология. 1991. - Т.33,№9. - С.77-78.

30. Колосков A.B., Мамаев H.H. Прогностическая важность активности ядрышкообразующих районов мегакариоцитов больных с острым лимфобластным лейкозом // Гематол. Трансфузиол. 1996. -Т.41,№1. - С.23-25.

31. Крокер Дж. Показатели клеточной пролиферации при злокачественных лимфомах с особым рассмотрением ядрышкообразующих районов // Гематол. Трансфузиол. 1990. -Т.35,№11. - С.28-34.• ,

32. Лосева М.И., Левитан Н.В., Дегтярёва М.М., Поначева Л.А. Прогностическая значимость нуклеолярных маркеров при хроническом лимфолейкозе // Гематол. Трансфузиол. 1990. -Т.35,№11. -С.2-8.

33. Луцкая Я.Я. Ядрышковый организатор пула лимфоидных клеток костного мозга и периферической крови в оценке остаточной лейкозной популяции //Автореф. канд. дис. М., 1993. 18С.

34. Мамаев H.H., Гричанова Т.И., Шандлоренко Д.С., Колосков A.B. Морфофункциональная характеристика мегакариоцитов человека в норме и при патологии по данным серебрения ядрышек // Гематол. Трасфузиол. 1990. - №11. - С. 1720.

35. Мамаев H.H., Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Ковалёва О.В., Алмазов В.А. Метод оценки белоксинтезирующей функции кардиомиоцитов человека //Арх. Анат. Гистол. Эмбриол. 1989. -Т.96,№5. - С.69-72.

36. Мамаев H.H., Мамаева С.Е. Структура и функция ядрышковых организаторов (ЯОР): молекулярные, цитологические и клинические аспекты // Цитология. 1992. - Т. 34, №10. - С.3-25.

37. Мамаев H.H., Мамаева С.Е., Бандападхайя Д., Медведева Н.В. Изучение активности ядрышкообразующих областей хромосом нормальных, лейкозных и опухолевых клеток человека с помощью окрашивания нитратом серебра // Цитология. 1980. -Т.20,№2. - С. 161-167.

38. Мамаев H.H., Мамаева С.Е., Либуркина И.Л., Козлова Т.В., Медведева Н.В., Макаркина Г.Н. Активность ядрышковых организаторов нормальных и лейкозных клеток человека // Цитология. 1984. - Т.26,№1. - С.46-51.

39. Мамаев H.H., Мамаева С.Е., Ушакова Е.А., Либуркина И.Л., Поздняк Е.И. Результаты изучения активности ядрышковых организаторов клеток костного мозга больных множественной миеломой // Цитология и генетика. 1986. - Т.20,№ 4. - С. 91 -97.

40. Мамаев H.H., Мартинес У., Морозова Е.О., Иванова И.А. Характеристика окрашенных серебром ядрышек в бластных элементах разного диаметра больных острыми лейкозами // Цитология. 1988. - Т.30,№12. - С.1478-1482.

41. Медведева Н.В. Активность рибосомных цистронов в клетках лимфатических узлов и крови больных злокачественными лимфомами // Автореф. канд. дис. Спб., 1998. 17С.

42. Мартинес К.У. Изучение активности ядрышковых организаторов бластных элементов больных острыми лейкозами и бластным кризом хронического миелолейкоза //Автореф. канд. дис. -Л., 1990. 18С.

43. Морозова Е.О., Мамаев H.H., Блинов М.Н., Самускевич И.Г., Медведева Н.В. Особенности синтеза рибосомной РНК в лимфоцитах крови больных хроническим лимфолейкозом. // Цитология. 1987. - Т.29,№10. - С.1150-1155.

44. Назарова И.Н. Клиническое значение иммунологического фенотипа и пролиферативной активности опухолевых лимфоцитов при множественной миеломе // Автореф. канд. дис. М., 1992. 19С.

45. Петухов В.И., Строжа И.Л., Бондаре Д.К., Миронова H.A., Воскобойник Н.И., Озе А.И. Функциональная активность ядрышковых организаторов в интерфазных ядрах гранулоцитов при хроническом миелолейкозе // Арх. Патол. 1994. - Т.56,№2. - С.28-30.

46. Погорелов В.М., Даровский Б.М., Котельников В.М.,

47. Козинец Г.И. Морфометрическая характеристика аргентофильных структур ядрышек лимфоидных клеток крови больных неходжкинскими лимфомами и хронической лимфоцитарной лейкемией //Эксперим. Онкол. 1987. - Т.9,№3. - С.43-48.

48. Подольцев Н.А. Множественная миелома, ассоциированная с первичным амилоидозом: клинико-иммунологические аспекты //Автореф. канд. дис. СПб., 1997. 21С.

49. Подольцева Э.И. Множественная миелома. Прогностические признаки, классификация, патогенез клинических синдромов, лечение // Автореф. докт. дис СПб., 1996. 40 С.

50. Подольцева Э.И. Классификация множественной миеломы. Терапевтический алгоритм // Гематол. Трансфузиол. -1997. Т.42 , №3. - С.8-11.

51. Позднякова JI.B. Естественная резистентность и клеточный иммунитет при множественной миеломе // Автореф. канд. дис. М., 1986. 40С.

52. Репетун А.Н. Морфологическая диагностика и определение степени злокачественности неходжкинских лимфом. //Автореф. канд. дис. СПб., 1998. 17С.

53. Рощина J1.B. Патоморфология множественной миеломы по данным трепанобиопсий // Автор, дисс.канд. М., 1992. 25С.

54. Салогуб Г.Н. Активность ядрышковых организаторов интерфазных клеток костного мозга больных лейкозами (клинико-морфологические сопоставления) // Автор, канд. дис. СПб., 1997. 19С.

55. Abdou NI, Abdou NL. The monoclonal nature of lymphocytes in multiple myeloma //Ann Intern Med. 1975. -V.83. -P.42-47.

56. Akiyama N, Tsuruta H, Sasaki H, Sakamoto H, Hamaguchi

57. M, Ohmura Y, Seto M, Ueda R, Hirai H, Yazaki Y, et al. Messenger RNA levels of five genes located at chromosome llql3 in B-cell tumors with chromosome translocation t(ll;14Xql3;q32) // Cancer Res. 1994. -V.45,#2. - P.377-379.

58. Aoki I, Nishijima K, Homori MM, et al. Responsiveness of bone marrow erythroid progenitors (CFU-E and BFU-E) to recombinant human erythropoietin (rH-Ep) in vitro in multiple myeloma // Br J Haematol.- 1992. V.81.-P. 463-469.

59. Anderson KC, Lust JA. Role of cytokines in multiple myeloma // Semin Hematol. 1999. - 36(lsuppl.3). - P. 14-20.

60. Arden KC, Johnston DA, Cork A, Pathak S. Differential nucleolus organizer activity in normal and leukemic bone marrow // Am J Hematol. -1989. V.30. - P.164-173.

61. Arden KC, Pathak LS, Zander A. Ag-NOR staining in human chromosomes: differential staining in normal and leukemic bone-marrow samples // Int J Cancer. 1995. - V.36. - P.647-649.

62. Bakkus M, Riet I, Van Camp B, Thielemans K. Evidence that the clonogenic cell in multiple myeloma originates from a pre-switched but somatically mutated B cell // Br J Haematol. 1994. - V.87.- P.68-74.

63. Barille S, Bataille R, Amiot M. The role of interleukin-6 and interleukin-6/11-6 receptor-a complex in the pathogenesis of multiple myeloma // Eur Cytokine Netw. 2000. - V.l 1(4). - P.546-551.

64. Barlogie B. Treatment of the anemia of multiple myeloma: the role of recombinant human erythropoietin // Semin Hematol. 1993. -V.30,#4 (suppl 6). -P.25-27.

65. Barlogie B, Beck T. Recombinant human erythropoietin and the anemia of multiple myeloma // Stem Cells (Dayt). 1993. -V.ll.- P.88-94.

66. Barton BE, Murphy TF. Constitutive expression of IL-6-like cytokines in normal bone marrow: implications for pathophysiology of myeloma // Cytokine. 2000. - V. 12. - P. 1537-1545.

67. Beguin Y, Verna M, Loo M, et al. Erythropoiesis in multiple myeloma: defective red cell production due to inappropriate erythropoietin production // Br J Haematol. 1992. - V.82. - P.648-653.

68. Beguin Y. Erythropoiesis and erythropoietin in multiple myeloma // Leuk Lymphoma. 1995. - V.18. - P.412-421.

69. Beguin Y. A risk-benefit assessment of epoetin in the management of anemia associated with cancer // Drug Saf. 1998. -V.19(4). - P.269-282.

70. Bergsagel DE, Wong O, Bergsagel PL et.al. Benzene and Multiple myeloma: Appraisal of the Scientific Evidence // Blood. -1999. V.94,#4. - P. 1174-1182.

71. Berenson J, Wong R, Kim K, et al. Evidence of peripheral blood B-lymphocyte but not T-lymphocyte involvement in multiple myeloma // Blood. 1987. - V.70. -P.1550-1555.

72. Betraux O, Mederic C, Valencia R. Amplification of ribosomal DNA in the nucleolus of B12-deficient Euglena cells // Exp Cell Res. 1991. - V.195. - P.l 19-128.

73. Billadeau D, Ahmann G, Greipp P, Van Ness B. The bone marrow of multiple myeloma patients contain B-cell populations at different stages of differentiation that are clonally related to the malignant plasma cell // J Exp Med. 1993. - V.178. - P.1023-7.

74. Billadeau D, Jelinek DF, Shah N, et al. Introduction of an activated N-ras oncogene alters the growth characteristics of the interleukin 6-dependent myeloma cell line ANBL6 //Cancer Res. 1995.- V.55. P.3640-3646.

75. Bloem AC, Chand MA, Van Camp B et al. Phenotypical and Functional characterization of the Idiotype-Positiv B-cells in Multiple Myeloma // Scand J Immunolog. 1988. - V.28, #6. - P.791-799.

76. Boldy DAR, Crocker J, Ayres JG. Application of the AgNOR method to cell imprints of lymphoid tissue // J Pathol. 1989. -V.157. -P.75-80.

77. Bryan RL, Janmohamed R, Crocker J, et al. Nucleolar organizer regions in myeloma and benign paraproteinemia letter. // Br J Cancer. 1990. - V.61 - P.645.

78. Boccadoro M, Gavarotti P, Fossati G et.al. Kinetics of circulating B lymphocytes in human myeloma // Blood. 1983 - V.61,#4.- P.812-814.

79. Boccardo M, Marmont F, Tribalto M et al. Early responder myeloma: kinetic studies identify a patient subgroup characterized by very poor prognosis // J Clin Oncol. 1989. - V.7. - P. 119-125.

80. Caligaris-Cappio F, Bergui L, Gregoretti MG, Gaidano G, Gaboli M, Schena M, Zallone AZ, Marchisio PC. Role of bone marrow stromal cells in the growth of human multiple myeloma // Blood. 1991.- V.77. P.2688-2693.

81. Cazzola M, Messinger D, Battistel V, et al. Recombinant human erythropoietin in the anemia associated with multiple myeloma or non-Hodgkin's lymphoma: dose finding and identification of predictors of response // Blood. 1995. - V.86. - P.4446-4453.

82. Chesi M, Bergsagel PL, Brents LA, Smith CM, Gerharrd DS, Kuehl WM. Dysregulation of cyclin D1 by translocation into an IgHgamma switch region in two multiple myeloma cell lines // Blood. 1996. - V.88,#2. - P.674-681.

83. Chesi M, Kuehl WM, Bergsagel PL. Recurrent immunoglobulin gene translocations identify distinct molecular subtypes of myeloma // Ann Oncol. 2000. - V. 11, Suppl. 1. - P. 131 -135.

84. Cibull ML, Hereyt A, Gatter KC, Mason DY. The utility of Ki-67 immunostaining nuclear organizer region counting, and morphology the assessment of follicular lymphoma // J Pathol. 1989. -V.158. -P.189-193.

85. Crocker J. Nucleolar organizer regions//Curr Top Pathol. -1990. V.82. - P.91-149.

86. Crocker J, Macartney JC, Smith PJ. Correlation between DNA flow cytometric and nucleolar organizer region data in non-Hodgkin's lymphomas // J Pathol. 1988. - V.154. - P.151-156.

87. Crocer J, Nar P. Nucleolar organizer regions in lymphomas // J Pathol.- 1987.-V. 151. P.l 11-118.

88. Cronin K, Loftus BM, Dervan PA. Are AgNORs useful in distinguishing follicular hyperplasia from follicular lymphoma? // J Clin Pathol. 1989. -V.42. - P. 1267-1268.

89. Costes V, Portier M, Lu ZY, Rossi JF, Bataille R, Klein B. Interleukin-1 in multiple myeloma: producer cells and their role in the control of IL-6 production // Br J Haematol. 1998. - V.103. - P.l 1521160.

90. Dalton WS Anemia in multiple myeloma and its management // Cancer Control: JMCC. 1998. -V.5 (suppl 2). -P.46-50.

91. Damacco F, Barlogie B. Multiple myeloma and related disorders // Ares-Serono Symp. Publ. 1994. - P.83-92.

92. Derenzini M. The AgNORs // Micron. 2000. - V.31. -P.l 17-120.

93. Debili N, Coulombel L, Croisille L, Katz A, et al. Characterization of a bipotent erythro-megakaryocytic progenitor in human bone marrow // Blood. 1996. - V.88. - P. 1284-1296.

94. Doody MM, Linet MS, Glass AG, et al. Risks of non-Hodgkin's lymphoma, multiple myeloma, and leukemia associated with common medication // Epidemiology. 1996. - V.7. - P.131-137.

95. Drach J, Kaufman H, Urbauer E, Schreiber S, Ackerman J, Huber H. The biology of multiple myeloma // J Cancer Res Clin Oncol. -2000. V.126. - P.441-447.

96. Drexler HG, Matsuo Y. Malignant hematopoietic cell lines: in vitro models for the study of multiple myeloma and plasma cell leukemia // Leukemia Res. 2000. - V.24,#8. - P.681-703.

97. Durie BMG, Salmon SE. The current status and future prospects of treatment for multiple myeloma // Clin Haematol. 1982. -V.l 1. - P. 181-210.

98. Durie BMG, Salmon SE. A clinical staging system for multiple myeloma: correlation of measured myeloma cell mass with presenting clinical features, response to treatment, and survival // Cancer. 1975. - V.36. - P.842-854.

99. Dührsen U, Hossfeld DK. Stromal abnormalities in neoplastic bone marrow disease // Ann Hematol. 1996. - V.73. - P.53-70.

100. Epstein J. Myeloma stem cell phenotype. Implications for treatment // Hematol Oncol Clin North Am. 1997. - V. 11(1). - P.43-49.

101. Dusek J. Biological characteristics of multiple myeloma // Cesk Pathol. 2000. - V.36(3). - P.l 11-115.

102. Feinman R, Sawyer J, Hardin J, Tricot G. Cytogenetics and molecular genetics in multiple myeloma // Hematol Oncol Clin North Am. 1997.-V.11.-P.1-27.

103. Fiedler W, Weh HJ, Hossfeld DK. Comparison of chromosome analysis and BCL-1 rearrangement in a series of patients with multiple myeloma // Br J Haematol. 1992. - V.81,#l. - P.58-61.

104. Freeman J, Kellock DB, Yu CC, Crocker J, Levison DA, Hall PA. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and nucleolar organizer regions in Hodgkin's disease: correlation with morphology // J Clin Pathol. 1993. - V.46. - P.446-449.

105. Fritshi L, Shemiatycki J. Lymphoma, myeloma and occupation: results of case-control study //Int J Cancer. 1996. - V.67. -P.498-503.

106. Flactif M, Zandecki M, Bernardi F, Obein V et.al. Intrphase fluorescence in situ hybridization as a poweful tool for the detection of aneuploidy in multiple myeloma // Leukemia. -1995. V.9. - P.2109-2114.

107. Fossa A, Myklebust JH, Seeber S, et al. Relation between S-phase fraction of myeloma cells and anemia in patients with multiple myeloma //Exp Hematol. 1999. - V.27. -P.1621-1626.

108. Garton JP, Gerrtz MA, Witzig TE, et al. Epoetin-alfa for the treatment of the anemia of multiple myeloma: a prospective, randomized, placebo-controlled, double-blind trial // Arch Intern Med. -1995.-V.155.-P. 2069-2074.

109. Gilberti MFP, Metze K, Lorand-Metze I. Changes of nucleolar organizer regions in granulopoietic precursors during the courseof chronic myeloid leukemia // Ann Hematol. 1995. - V.71. - P.275-279.

110. Gillett CE, Barnes DM. Cell cycle Hi Clin Pathol: Mol Pathol. 1998. - V.51,#6. -P.310-316.

111. Gonzales-Guzman I. Generalities on the nucleolar content of some blood cells // Blood. 1947. - V2. - P.57-65.

112. Gonzales-Guzman I. Contribution a la connaissance de l'appareil nucléolarie des cellules leucemiques // Sang. 1949. - V.20. -P.225-238.

113. Goranov S. Kappa and lambda light chain proteins -clinical and prognostic significance in patients with multiple myeloma // Folia Med. 1997. - V.39, #2. - P.52-57.

114. Gould J, Alexanian R, Goodacre A. et al. Plasma cell karyotype in multiple myeloma // Blood. 1988. - V.71. - P.453-456.

115. Grotto HZW, Metze K, Lorand-Metze I. Pattern of nucleolar organizer regions in human leukemic cells // Analyt Cellular Pathol. 1993. - V.5. - P.203-212.

116. Jego G, Bataille R, Pellat-Daceunynck C. Interleukin-6 is a growth factor for nonmalignant human plasmablasts // Blood. 2001. -V.97(6). -P.1817-1822.

117. Joannidis RA, Joshna DE, Warburton PT. Multiple myeloma: evidence that light chains play an immunoregulatory role in B-cell regulation // Hematol Pathol. 1989. - V.3. - P. 169-173.

118. Jones JL, Walker RA. Integrins: a role as cell signaling molecules // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1999. - V.52,#4. - P.208-213.

119. Hall PA, Crocker J, Watts A, Stansfeld AD. A comparison of nucleolar organizer region staining and Ki-67 immunostaining in non-Hodgkin's lymphoma // Histopathology. 1988. - V.12. - P.373-381.

120. Hara T, Miyajima A. Cytokine receptors and signal transduction // In: Textbook of malignant haematology. Eds. L. Degos, DC Linch, and B Lowenberg, Martin Dunitz. London., 1999. P. 11 -131.

121. Hata H, Xiao H, Petrucci T et al. Interleukin-6 gene expression in multiple myeloma: a characteristic of immature tumor cells // Blood. 1993. - V.81. - P.3357-3364.

122. Ho PJ, Brown B. Illegitimate switch recombinations are present in approximately half of primary myeloma tumors, but do not relate to known prognostic indicators of survival // Blood. 2001. -V.97,#2. - P.490-495.

123. Hoechtlen-Vollmar W, Menzel G, Bartl R, Lamerz R, Wick M, Seidel D. Amplification of cyclin D1 gene in multiple myeloma: clinical and prognostic relevance // Br J Haematol. 2000. - V.109,#l. -P.30-38.

124. Holm G, Yi Q, Sundblad A. Interleukin-10 gene promoter polymorphisms in multiple myeloma // Int J Cancer. 2001. - V.95,#3.1. P. 184-188.

125. Hong Y, Martin JF, Vainchenker W, Erusalimsky JD. Inhibition of protein kinase C suppresses megakaryocyte differentiation and stimulates erythroid differentiation in HEL cells // Blood. 1996. -V.87. -P.123-131.

126. Howell M, Black DA. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a one step method // Experientia. 1980. - V.36. - P. 1014-1015.

127. Hoyer JD, Hanson CA, Fonseca R, Greipp PR, Dewald GW, Kurtin PJ. The (Il;14)(ql3;q32) translocation in multiple myeloma. A morphologic and immunohistochemical study // Am J Clin Pathol. -2000. V.113,#6. -P.831.

128. Hsu HC, Lee YM, Yang CF, Hsiao KJ et. al. Detection of Kaposi sarcoma-associated herpesvirus in bone marrow biopsy samples from patients with multiple myeloma // Cancer. 2001. - V.91(8) -P.1409-1413.

129. Ivanyi JL, Kiss A, Telek B. Nucleolar organizer regions in acute and chronic leukemias // Acta Histochem. 1992. - V.93. - P.453-461.

130. Jan-Mohamed RM, Armstrong SJ, Crocker J, Leyland MJ, Hulten MA. The relationship between number of interphase NORs and NOR-bearing chromosomes in non-Hodgkin's lymphoma // J Pathol. -1989.-V.158.-P.3-7.

131. Jan-Mohamed RM, Murray PG, Crocker J, Leyland MJ.

132. Sequential demonstration of nucleolar organizer regions and Ki-67 immunolabelling in non-Hodgkin's lymphomas // Clin Lab Haematol. -1990. V. 12. - P.395-399.

133. Jelinek DF. Mechanisms of myeloma cell growth control // Hematol Oncol Clin North Am. 1999. - V.13(6). - P. 1145-1157.

134. Karadag A, Oyajobi BO, Apperley JF, Russell RG, Croucher PI. Human myeloma cells promote the production of interleukin-6 by primary human osteoblasts // Br J Haematol. 2000. -V. 108(2). - P.383-390.

135. Kastrinakis NG, Gorgoulis VG, Foukas PG, Dimopoulos MA, Kittas C. Molecular aspects of multiple myeloma //Ann Oncol. -2000. V. 11 ,# 10. - P. 1217-1228.

136. Kawano MM, Mahmoud MS, Ishikawa H. Cyclin D1 and pl6INK4A are preferentially expressed in immature and mature myeloma cells, respectively // Br J Haematol. 1997. - V.99,#l. - P. 131-138.

137. Klein B. Update of gpl30 cytokines in multuple myeloma // Curr Opin Hematol. 1998. - V.5(3). - P. 186-191.

138. Klein B, Lu ZY, Gu ZJ, Costes V, Jourdan M, Rossi JF. Interleukin-10 and Gp 130 citokines in human multiple myeloma // Leuk Lymphoma. 1999. - V.34(l-2). - P.63-70.

139. Klein B, Zhang XG, Lu ZY, Bataile R. Interleukin-6 in human multiple myeloma // Blood. 1995. - V.85. - P.863-872.

140. Klobusicka M, Babusikova O. The relationship between argyrophilic proteins and some immunophenotypic markers in acute leukemia cells // Neoplasma. 1997. - V.44,#6. -P.356-360.

141. Klobusicka M, Babusikova O, Mesarosova A, Cap J. Relation of some enzyme activities and argyrophilic proteins in childhood acute lymphoblastic leukemia // Neoplasma. 1995. - V.42, #6. - P.299-305.

142. Klobusicka M, Babusikova O, Mesarosova A, Kusenda J, Glasova. The study of AgNOR proteins in leukemias: diagnostic value and correlation to S-phase cell fraction // Neoplasma. 1996. - V.43, #6. -P.397-401.

143. Kobayashi H, saito H, Kitano K, Kiyosawa K, Gaun S, Aoki K, Narita A, Watanabe M, Uchimaru K, Motokura T. Overexpression of the PRAD1 oncogene in a patient with multiple myeloma and t(l I;14)(ql3;q32) // Acta Haematol. 1995. -V.94,#4. -P. 199-203.

144. Li X, Lu Z, Klein B. The expression, secretion and regulation of membrane-soluble syndecan-1 in human multiple myeloma cells // Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2000. - V.21. - P.572-576.

145. Lim Sh, Badros A, Lue C, Barlogie B. Distinct T-cell clonal expansion in the vicinity of tumor cells in plasmacytoma // Cancer. -2001. V.91(5). - P.900-908.

146. Liu P, Leong T, Quan L, et al. Activating mutations ofN-and K-ras in multiple myeloma show different clinical associations. Analysis of Eastern Cooperative Oncology Group Phase III trial // Blood. 1996. - V.88. - P.2699-2706.

147. Lorand-Metze I, Carvalho MA, Metze K. Relationship between morphometric analysis of nucleolar organizer regions and cell proliferation in acute leukemias // Cytometry. 1998. - V.32. - P.51-56.

148. Lorand-Metze I, Metze K. AgNOR clasters as a parameter of cell kinetics in chronic lymphocytic leukemia. //J Clin Pathol: Mol Pathol 1996. V.49,#6. - M.357-360.

149. Ludwig H, Chott A, Fritz E, Krainer M. Increase of bone marrow cellularity during erythropoietin treatment in myeloma // Stem Cells. 1995. - V.13, suppl.2. - P.77-87.

150. Ludwig H, Fritz E, Kotzmann H, et al. Erythropoietin treatment of anemia associated with multiple myeloma // N Engl J Med. -1990. -V.322.- P. 1693-1699.

151. Lumelsky NL, Schwartz BS. Protein kinase C in erythroid and megakaryocyte differentiation // Biochim Biophys Acta. 1997. - V. 1358. -P.79-82.

152. Lust JA, Donovan KA. The role of interleukin-ip in the pathogenesis of multiple myeloma // Hematol Oncol Clin North Am. -1999. -V.13(6).-P.l 117-1125.

153. Majumdar G, Westwood NB, Bell-Witter C, et al. Serum erythropoietin and circulating BFU-E in patients with multiple myeloma and anemia but without renal failure // Leuk Lymphoma. 1993. - V.9.-P.173-176.

154. Mamaev NN. Morphofunctional characteristics of silver-stained nucleoli in human normal and pathological cells // Nucleolar structure and function. New York, London: Plenum Press, 1990. P. 183185.

155. Mamaev NN, Mamaeva SE. Nucleolar organizer region activity in human chromosomes and interphase nuclei of normal, leukemic, and tumor cells as evaluated by silver staining //Int Rev Cytol. 1990. -V. 121. -P.233-266.

156. Mamaev NN, Grineva EN, Blagosklonnaya YV. Interphase ribosomal RNA staining in thyrocytes from patients with Grave's disease, Hashimoto's thyroiditis, benign and malignant nodes of thyroid gland. // J Clin Pathol: Mol Pathol 1996. V.49. - P.M240-244.

157. Mamaev NN, Medvedeva NV, Shust VF, Markochev AB, Pasternak ND. Nucleoli and AgNORs in Hodgkin's disease // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1997. - V.50. - P. 149-152.

158. Mamaev NN, Gudkova AY, Amineva KK. AgNORs in myocardium in ischemic heart disease complicated by heart failure: apostmortem study // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1998a. - V.51,#2. -P.M102-104.

159. Mamaev NN, Kovalyeva OV, Amineva KK, Gudkova AY, Maier YB, Polykarpov IS, Schneider YuA Proshin SN, Lebedev LV. AgNOR in cardiomyocytes from surgical patients with coronary heart disease // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1998b. - V.51,#4. - P.M218-221.

160. Mamaev NN, Salogub GN, Koloskov AV. Interphase ribosomal RNA cistron staining in chronic myeloid leukemia // J Clin Pathol Mol Pathol. 1995. - V.48. - P.M260-264.

161. Mamaev NN, Salogub GN, Nefedova IB. Interphase ribosomal RNA cistron silver staining in refractory anemias with and without excess blasts // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1997. - V.50. -P.M92-95.

162. Manukata S, Hendricks JB. Morphometric analysis of AgNORs in imprints and sections from non-Hodgkin's lymphomas // Anal Quant Cytol Histol. 1993. - V.15,#5. - P.329-334.

163. Marmont F, Pich A, Chiusa L, Locatelli F et al. Correlation between argyrophilic nucleolar organizer region counts and labelling index in multiple myeloma // Eur J Haematol. 1996. - V.56. - P.39-44.

164. Mazumder S, Gong B, Almasan A. Cyclin E induction by genotoxic stress leads to apoptosis of hematopoietic cells // Oncogene. -2000. V. 19,#24. - P.2828-2835.

165. Mazur EM, Lindquist DL, De Alacron PA, Cohen JL. Evaluation of bone marrow megakaryocyte ploidy distributions in persons with normal and abnormal platelet counts // J Lab Clin Med. 1988. -V.l 11. -P. 194-202.

166. Mellstedt H, Holm G, Petterson D, Peset D. Idiotype bearing lymphoid cells in plasma cell neoplasma // Clin Haematol. -1982. V.ll,#l. -P.65-86.

167. Metze K, Chiari AC, Andrade FL, Lorand-Metze I. Changes in AgNOR configurations during the evolution and treatment of chronic lymphocytic leukemia // Hematol Cell Ther. 1999. - V.41. -P.205-210.

168. Metze K, Lobo AM, Lorand-Metze I. Nucleolus organizer regions (AgNORs) and total tumor mass are independent prognostic parameters for treatment-free period in chronic lymphocytic leukemia // Int J Cancer. 2000. - V.89,#5. - P. 440-443.

169. Mourad WA, Pugh WC, Huh YO, Keating Mj. Cell kinetic analysis of interleukin-2 receptor-tested chronic lymphocytic leukemia using the AgNOR silver stain // Am J Clin Pathol. 1994. - V.101. -P.300-304.

170. Mourad WA, Sembera DL, Katz RL, et al. Two AgNOR counting methods in fine needle aspirates of lymphoproliferative disorders correlated with acridine orange flow cytometry // Diagn Cytopathol. -1992. V.8. - P. 128-134.

171. Myklebust JH, Smeland EB, Josefsen D, Sioud M. Protein kinase C-a isoform is involved in erythropoietin-induced erythroid differentiation of CD34+ progenitor cells from human bone marrow // Blood. 2000. - V.95. - P.510-518.

172. Nakasu S, Nakazawa T, Saito A, Matsuda M, Handa J.

173. Outcome of patients with primary malignant lymphoma of the brain: relationship to the nucleolar organizer region // No Shinkey Geka. 1992. - V.20,#5. - P.593-598.

174. Ng M, Chung Y, Wickham N, et al. Frequent hypermethylation of pi6 and pi5 genes in multiple myeloma // Blood. -1997. V.89. - P.2500-2506.

175. Nikicicz EP, Norback DH. Argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) staining in normal bone marrow cells // J Clin Pathol. -1990. V.43. - P.723-727.

176. Nikicicz EP, Norback DH. Spectrum of argyrophilic nucleolar organizer region staining pattern in chronic and transformed B-cell leukemias // Arch Pathol Lab Med. 1992. - V.l 16. - P.265-268.

177. Osterbor A. The role of recombinant human erythropoietin in the management of anaemic cancer patients: focus on haematological malignancies // Med Oncol. 2000. - Suppl 1. - P. 17-22.

178. Papadhimitriou SI, Daskalopoulou D, Tsaftaridis P, Markidow S, Stamatelou M. Evaluation of argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNORs) in multiple myeloma // J Clin Pathol. -2000. V.53. - P.462-465.

179. Paule B, Quillard J, Bisson M, Kahn MF, Massias P. Prognostic significance of plasma cell morphology in multiple myeloma // Nouv Rev Fr Hematol. 1988. - V.30. - P.209-212.

180. Paulin FEM, West MJ, Sullivan NF, et al. Abberanttranslational control of c-myc gene in multiple myeloma // Oncogene. -1996. V.13. - P.505-511.

181. Pedrazzini E, Mamaev N, Slavutsky I. Age-related decrease of NOR activity in bone marrow metaphase chromosomes from healthy individuals // J Clin Pathol: Mol Pathol. 1998. - V.51. - P.39-42.

182. Petrucchi MT, Riccardi MR, Ariola C, Gregorj C, Ribersani M, Savino R, Ciliberto G, Tafuri A. Cell cycle regulation and induction of apoptosis by IL-6 variants on the multiple myeloma cell line XG-1 // Ann Hematol. 1999-V.78,#l. -P.13-18.

183. Pich A, Chiusa L, Audisio E, Marmont F. Nucleolar organizer region counts predict complete remission, remission duration, and survival in adult acute myelogenous leukemia patients // J Clin Oncol. 1998.-V.16,#4.-1512-1518.

184. Pich A, Chiusa L, Marmont F et al. Argyrophilic nucleolar organizer region counts in multiple myeloma: a histological study on bone marrow trephine biopsies // Virch Archiv A Pathol Anat. 1992 - V.421. -P. 143-7.

185. Pich A, Chiusa L, Boccadoro M, Marmont F. AgNORs and myeloma prognosis // Leukemia Lymphoma. 1994. - V.12. -P.383-394.

186. Pich A, Chiusa L, Marmont F et al. Risk groups of myeloma patients by histologic pattern and proliferative activity // Am J Surg Pathol. 1997. -V.21(3). -P.339-347.

187. Pich A, Chiusa L, Margaria E. Prognostic relevance of AgNORs in tumor pathology // Micron. 2000. - V.31. - P.33-41.

188. Pich A, Marmont F, Chuisa N, Capello N, et al. Argirophilic nucleolar organizer region counts and prognosis in multiple myeloma // Brit J Haematol. 1992. - V.82. - P.681-88.

189. Pruneri G, Fabris S, Baldini L, Carboni N, Zagano S,

190. Colombi MA, Ciceri G, Lombardi L, Rocchi M, Buffa R, Maiolo AT, Neri A. Immunohistochemical analysis of cyclin D1 shows deregulated expression in multiple myeloma with t(l 1;14) // Amer J Pathol. 2000. -V.156,#5. — P.1505-1513.

191. Raynaud SD, Bekri S, Leroux D, Grosgeorge J, Klein B, Bastard C, Gaudray P, Simon MP. Expanded range of 1 lql3 breakpoints with differing patterns of cyclin D1 expression in B-cell malignancies // Genes Chromosomes Cancer. 1993. -V.8,#2. -P.80-89.

192. Renner D, Queisser W. Megakaryocyte polyploidy and maturation in chronic granulocytic leukemia //Acta Haematol. 1988. -V.80. - P.74-78.

193. Rettig MB, Ma HJ, Vescio RA, et al. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection of bone marrow dendritic cells from multiple myeloma patients // Science. 1997. - V.276. - P. 1851-1852.

194. Riccardi A, Montecucco C, Danova M, Ucci G et al. Rate of M-component changes and plasma cell labeling index in 25 patients treated with peptichemio // Cancer Treat Rep. 1985. - V.69. - P.971-975.

195. Riedel DA, Potter LM. The epidemiology of multiple myeloma // Hematol Oncol Clin North Am. 1992. -V.6. - P.225-231.

196. Ro-Choi TS. Nucleolar snoRNA and ribosome production II Mol Cells. 1997. - V.7,#4. - P.451-467.

197. Rockika-Piotrowicz M, Paluszewska M, Paszkowska M, Rakowska M. Erythropoietin in the pathogenesis of anemia in patients with multiple myeloma // Pol Arch Med Wewn. 1998. - V.99(3). -P.218-223.

198. Sakalova A, Holomanova D, Mikulecky M et.al. Immunotypizacia drenovich a circulu jucich buniek pri prognostikom posudeni plazmocytomy // Vnitr. Lek. 1992. - V.32(7). -P.685-692.

199. Sangfelt O, Osterborg A, Grander D, et al. Response to interferon therapy in patients with multiple myeloma correlates with expression of the bcl-2 oncoprotein // Int J Cancer. 1995. - V.63. -P. 190-192.

200. Sati HI, Greaves M, Apperley JF, Russel RG, Croucher PI. Expression of interleukin-ip and tumour necrosis factor-a in plasma cells from patients with multiple myeloma // Br J Haematol. 1999. -V. 104(2). -P.350-357.

201. Scopelitou A, Tselenis S, Theocharis S et al. Expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and nucleolar organizer regions (NORs) in multiple myeloma // Anticancer Res. 1994. - V.14. - P.787-792.

202. Shome DK, Khurana N. Distinctive AgNOR patterns of myeloid and lymphoid blasts in acute leukemia // Am J Hematol. 1999. - V.61,#2. - P. 149-152.

203. Silvestris F, Tucci M, Cafforio P, Damacco F. Fas-L up-regulation by highly malignant myeloma cells: role in the pathogenesis of anemia and disease progression // Blood. 2001. - V.97. - P. 1155-1164.

204. Smetana K., Likovsky L. Nucleolar silver-stained granulesin maturing erythroid and granulocytic cells // Cell Tissue Res. 1984. -V.237. - P.367-370.

205. Smith G, Murray PG, Crocker J. Correlation between PCNA and AgNOR scores in non-Hodgkin's lymphomas using sequential staining technique // J Clin Pathol. 1993. - V.46,#l. - P.28-31.

206. Sonoki T, Hata H, Kuribayashi N, Yoshida M, Harada N, Nagasaki A, Kimura T, Matsuno F, Mitsuya H, Matsuzuki H. Expression of PRADl/cyclin D1 in plasma cell malignancy: incidence and prognostic aspects // Br J Haematol. 1999. - V.104,#3. - P.614-617.

207. Suzuki R, Kiroda H, Komatsu H, Hosokawa Y, Kagami Y, Ogura M, Nakamura S, Kodera Y, Morishima Y, Ueda R, Seto M. Selective usage of D-type cyclins in lymphoid malignancies // Leukemia. 1999. - V.13,#9. - P. 1335-1342.

208. Takagi M, Miyamoto Y, Kosaka M, Saito S. Clinical significance of serum erythropoietin levels in patients with multiple myeloma// Rinsho Ketsueki. 1992. - V.33(9). -P.l 151-1157.

209. Tanigawa M, Tamaki, Fujieda A, Myashita H, Tanaka K, Ichioka M, Taniguchi M, Tsuji K, Miyanishi E. Aggressive transformation and extramedullary tumor formation in IgA-lambda multiple myeloma // Rinsho Ketsueki. 2000. - V.41. - P.635-640.

210. Taylor J, Mactire RA, Stewart WK, et al. The effect of erythropoietin on anemia in patients with myeloma receiving haemodialysis // Br Med J. 1990. - V.301. - P.476-478.

211. Tedeschi R, Kvarnung M, Knekt P, Schulz TF, Szekely L,

212. De Paoli P et.al. A prospective seroepidemiological study of human herpesvirus-8 infection and the risk of multiple myeloma // Brit J Cancer. 2001. - V.84( 1). - P. 122-125.

213. Teoh G, Anderson K. Interaction of tumor and host cells with adhesion and extracellular matrix molecules in the development of multiple myeloma // Hematol Oncol Clin North Am. 1997. - V.ll. -P.27-42.

214. Thiele J, Holgado S, Choritz H, Georgii A. Abnormalities of megakaryocytes in myelitisand chronic myeloproliferative diseases // Virch Arch Cell Pathol. 1982. - V.41. - P.67-72.

215. Timm M, Kimlinger TK, Hanson C, Witzig TE. Measurement of the cell proliferation rate of bone marrow erythroid precursors by flow cytometry: initial applications to multiple myeloma // Leuk Lymphoma. 1998. - V.30. - P.353-359.

216. Trere D, Pession A, Basso G, et al. Prognostic relevance of pretreatment proliferative rapidity of marrow blast cells in childhood acute lymphoblastic leukemia // Br J Cancer. 1994. - V.70. - P. 11981202.

217. Tricot G, Sawyer J, Jagannath S et al. The unique role of cytogenetics of the prognosis of patients with myeloma receiving highdose therapy and autotransplants // J Clin Oncol. 1997. - V.15. -P.2659-2663.

218. Urashima M, Ogata AM, Chauhan D, Vidríales MB et al. Interleukin-6 promotes multiple myeloma cell growth via phosphorylation of retinoblastoma protein // Blood. 1996. - V.88. - P.2219-2227.

219. Van Camp B, Heirman I, Lacor C, et al. Detection of monoclonal B lymphocytes in bone marrow and peripheral blood of multiple myeloma patients by immunoglobulin gene rearrangement studies // Br J Haematol. 1989. - V.73. - P.289-292.

220. Van Camp B, Van Riet I. Homing mechanisms in the biology of multiple myeloma // Verh K Acad Geneeskd Belg. 1998. -V.60(3). - P. 163-194.

221. Vasef MA, Medeiros LJ, Yospur LS, Sun NC, McCourty A, Brynes RK. Cyclin D1 protein in multiple myeloma and plasmacytoma: an immunohistochemical study using fixed, paraffin-embedded tissue sections // Mol Pathol. 1997. - V.10,#9. - P.927-932.

222. Wachtler F, Ellinger A, Schwarzacher HG. Nucleolar changes in human PHA-stimulated lymphocytes // Cell Tissue Res. -1980. V.213. - P.351-360.

223. Wallace SR, Oken MM, Lunetta KL, Panoskaltsis-Mortari A, Masellis AM. Abnormalities of bone marrow mesenchymal cells in multiple myeloma patients // Cancer. 2001. -V.91. - P. 1219-1230.

224. Weh H, Gutensohn K, Selbach J et al. Karyotype in multiple myeloma and plasma leukemia // Eur J Cancer. 1993. - V.9. -P. 1269-1273.

225. Wickramasinghe SN, Cooper EH, Chalmers DG. A study of erythropoiesis by combined morphologic, quantitative cytochemical and autoradiographic methods. Normal human bone marrow, vitamin B12-deficiency anemia // Blood. 1968. - V.31. - P.304-313.137') uh

226. Wunder E, Sovalat H, Bacrenzung M. et al. Impeded normal hematopoiesis in bone marrow of patients with multiple myeloma // Stem Cells. 1995. - V.13(suppl.2). -P.51-55.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

Автореферат диссертации по медицине на тему Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов

Оглавление диссертации Гиндина, Татьяна Леонидовна :: 2002 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Гиндина, Татьяна Леонидовна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Количественная оценка гемопоэза больных множественной миеломой методом серебрения ядрышковых организаторов"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Гиндина, Татьяна Леонидовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций