Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Клинико-патогенетическое значение С-антигенемии, циркулирующих иммунных комплексов и реактивности нейтрофилов при сальмонеллезе

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАГЧНО-ИССадОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ - Э1ЩЕМИ010ГИИ

•'''¿Г*/

На правах рукописи

ЛУКИНСКАЯ ТАТЬЯНА. ВЛАДИМИРОВНА

ЮШНИКО-ПАТОГЕНЕТШЕХЖОЕ ЗНАЧЕНИЕ О-АНТИГЕНЕМИИ, ЦИРКУЛИРУЩИХ ИШУННЫХ КОМПЛЕКСОВ И РЕАКТИВНОСТИ НЕЙТГОФШЮВ ПРИ САЛЬМОНЕШГЕЗЕ

14.00.10 - ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА - 1992

>

Работа выполнена в Российском Государственном медицинском университете.

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Ю.А.Ильинский

Официальное оппоненты: доктор медицинских наук,

член-корр. РАШ, профессор Н.Д.Ющук доктор медицинских наук, профессор 1.1.Х. Турышов

Ведущая организация - Московская медицинская академия имени И.М.Сеченова.

Защита диссертации состоится V- Э » 1992 г.

в час. ~~ лшн. на заседании спецяалшшровшного совета Д 074.19.01 в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии ( 1Ш23, Москва, Новогиреевская ул., д. 3-а).

С дисссртащгеЕ моено ознакомиться в библиотеке Центрально! научно-исследовательского института эпидемиологии.

Автореферат разослан

Уч'ёней секретарь спехщишэирозанного совета

кандидат медицински наук М.Н.Пименова

Заказ Й 1235 от 34.0?.92г. Тираж 100 Типотрафия МНПК

ОССИЙСКАЯ /ЦЛР-ЛЗьННАЯ ИЛБШЛОТЕКА

___________Отдел|

Актуальное^ппо^У^к Повсеместный рост заболеваемости

сальмонеллезом привлекает пристальное внимание ученых к данной кишечной инфекции (Черкасский Б.Л. с соавт., 1991).Несмотря на многочисленные работы, касащиеся патогенеза сальмонел-леза (Ющук Н.Д., 1980; Покровский В.И. с соавт., 1983;Пак С.Г. с соавт., 1987; Турьянов М.Х., 1984), ряд вопросов остается не до конца изученным. В последние годы большое количество работ посвящено изучению антигенемии, которая является важным звеном патогенеза сальмонеллеэа. Именно антигены индуцируют цепь последовательных иммунологических реакций, обеспечивающих полноценный иммунный ответ и элиминацию возбудителя из организма. Однако данные, полученные при определении специфического сальмонеллезного антигена, далеко не однозначны и требу-юг дальнейшего изучения (Бунин К.В. с соавт., 1982; Валиев А.Г., 1986). Взаимодействие антигенов со специфическими антителами приводит к образованию иммунных комплексов и является этапом физиологического галунного ответа, одним из механизмов,направленных на поддержание гомеосгаза организма.

В доступной нам литературе лишь небольшое количество работ посвящено изучению роли ЦИК в пато- и иммуногенезе болезни (Микерин С.М. с соавт., 1983; Ющук Н.Д. с соавт,, 1991), есть указания о дезинтоксикационной роли ЦИК при сальмонелле-зе (Бунин К.В. с соавт., Г982); и вместе с тем, образование ЦИК уменьшает содержание в сыворотке крови свободных антигенов и антител, что создает трудности при серологической диагностике инфекционных заболеваний и делает актуальным обнаружение специфических антигенов в составе циркулирующих иммунных котлексов (Белая О.Ф. с соавг., 1988). Отсутствует сведения о размерах иммунных котлексов и их*связи с элиминацией

последних из организма при сальмонеллезе.

Определение иммунных комплексов одним методом не дает возможности полностью оценить их роль в патогенезе заболевания. Использование для определения иммунных комплексов протеина А, меченного пероксидазой, позволяет определить 1еС-содержанке ЦИК, которые, по мнению ряда авторов, относятся к наиболее патогенным ЦИК, обладающих способностью повышать проницаемость сосудистой стенки и откладываться в тканях (Агеев А.Г., 1983; Веппе* Е.М. et а1., 1977).

В защите организма от бактериальных инфекций кроме гуморальных факторов, значительная роль отводится фагоцитам (Пигаревский В.Е., 1982). Известно, что стимуляция нейтрофи-лов чужеродными антигенами, иммунными комплексами сопровож-даетря значительными метаболическими изменениями, отражающими реактивность фагоцитов (Маянский А.Н., 1986; 1987; 1990).

Представляет значительный интерес одномоментное изучение 0-АГ, ЦИК и реактивности нейтрофилов периферической крови, которые принимают активное участие в обезвреживании и элиминации возбудителей заболевания, их антигенов и токсинов.

Перечисленные положения легли в основу настоящего исследования, целью которого явилась комплексная оценка патогенетической и диагностической значимости О-антигенемии, циркулирующих иммунных комплексов и их взаимосвязи с реактивностью нейтрофилов периферической крови у больных сальыонеллезом в зависимости от тяжести течения и динамики инфекционного процесса.

Основные задачи исследования

I. Изучить уровень О-антигенемии, его динамику в течение инфекционного процесса в зависимости от различных методов терапии у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза.

2. Определить содержание, размеры, диагностическую значимость состава циркулирующих иммунных комплексов при различной степени тетести сальмонеллеза в динамике заболевания.

3. С помощью модифицированного метода с применением протеина А, меченного пероксидазой, изучить уровень 1ЕС-содер-жащих -ЦИК у больных сальмонеллезом в зависимости от тяжести

и сроков болезни.

4. Изучить метаболические изменения нейтрофилов периферической крови методом количественной оценки интенсивности цитохимических реакций (гликоген, липиды, миелопероксидаэа),отражающих иммунологическую реактивность клеток у больных сальмонеллезом.

Научная новизна проводимого исследования заключается в получении новых данных об уровнях О-антигенемии, циркулирующих иммунных комплексов, их взаимосвязи с реактивностью нейтрофилов периферической крови в динамике сальмонеллеза различной степени тяжести.

Впервые применявшимся методом изучены размеры ЦИК у больных сальмонеллезом.

Впервые определение в составе ЦИК сальмонеллезного 0-ан-тигена проведено методом колоночной гельфильтрации с использованием в качестве сорбента Тоуореаг! шт-55» Установлено,что метод диссоциации дает значительное повышение эффективности обнаружения О-антигенов сальмонелл в РАГА (до 89,3%) и может быть использован для диагностики сальмонеллеза.

Впервые использован метод для исследования уровней циркулирующих иммунных комплексов с помощью протеина А, меченного пероксидазой. Названный метод позволяет выявлять содержание комплексы.

Впервые при сальмонеллезе количественным методом на ци-тофотометре МИФ-компакт оценена функциональная активность нейтрофилов периферической крови по интенсивности цитохимических реакций.

Впервые выявлены различные уровни О-антигенемии и ЦИК в периоде реконвалесценции у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза, получавших солевые растворы разными способами.

Практическая значимость выполненного исследования заключается в применении полученных данных в качестве дополнительных критериев оценки тяжести патологического процесса при сальмонеллезе, очищения организма от антигенных субстанций возбудителя болезни.

Определение в составе ЦИК сальмонеллезного О-антигена может быть использовано в качестве дополнительного диагностического теста. Д1анкый тест позволяет получить подтверждение диагноза в 89,3$ случаев.

Внедрение полученных результатов. Предложенный диагностический тест был апробирован в клинике инфекционных болезней лечебного факультета 2-го Московского медицинского института им.Н.И.Пирогова на базе 3-й городской клинической больницы и внедрен в практику кафедральной лаборатории. Кроме этого, предложенный метод определения igG- содержащих циркулирующих иммунных комплексов применен в комплексном обследовании больных острыми кишечными инфекциями в 3-ей городской инфекшонн ной больнице г.Москвы, внедрен в практику научных исследований и учебного процесса на кафедре инфекционных и тропических болезней с курсом эпидемиологии РГМУ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 2 - в центральной печати.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на мея-кафедральных научных конференциях (1986-1990 гг.) в Российском государственном медицинском университете, на Всесоюзной конференции молодых ученых в г.Москве (1989 г.), на 3 Всероссийском съезде инфекционистов в г.Смоленске (1989 г.).

Диссертационная работа апробирована на заседании кафедры инфекционных и тропических болезней РП.5У 12.02.92 г.

Структура и объем диссертации. Диссертаций состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций. Объем диссертации составляет /69 страниц машинописного текста. Работа документирована 6 рисунками, {9 таблицами, ¿^ выписками из историй болезни. Библиографический указатель излоаен на 34 страницах и содержит 291 источник, в том числе 193 отечественных и 98 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Для выполнения поставленных задач проведено комплексное клиническое обследование 112 больных гастрогазтестинальной формой сальмонеллеза. Контролем служили 32 практически здоровых донора периферической крови.

Диагноз сальмонеллеза устанавливался на основании тщательного клинико-лабораторного обследования с учетом эпидемиологических данных, в соответствии с клинической классификацией академика АМН Российской Академии В.И.Покровского с соавторами (1980). Клинически? наблюдения проводились во 2-й клинической и 3-й городской инфекционных больницах г.Москвы. Обследованные лица в основном молодого и среднего возраста.

б

Мужчин было 43,8*, женщин 56,2й. Бее больные перенесли гастро-интестинальную форму сальмонеллеза. Ряд пациентов относился к декретированной группе, у части больных проводилось- катам-нестическое наблюдение, что позволило обследовать их в более поздние сроки. Диагноз подтвержден бактериологически (положительная копрокультура) в 38,4% случаев, серологически (определение сальмонеллезного О-антигена в сыворотке крови) - в 61,6%. Легкое течение болезни отмечалось в 18 случаях,средне-тяжелое - в 83, тяжелое - у II больных. Гастритический вариант болезни отмечался у 8 человек, гастроэнтероколитический -у 20. Основным являлся гастроэнтеритический вариант сальмонеллеза - 84 пациента.

Сопутствующие заболевания желудочно-кишечного тракта имелись у 23 больных (20,5*). Из них у 18 - хронический гастрит, у 2 - хронический колит с ферментативной и моторной недостаточностью, у 3 - хронический холецистит.

В исследуемых группах больных течение сальмонеллеза характеризовалось как типичное и не отличалось от описанного в литературе. Больные получали общепринятую терапию: дезинток-сикационную и регидрагационную (перорально - 53, парентерально - 27 пациентов), витамины, десенсибилизирующую и симптома--тическую терапию.

Для выполнения поставленных задач в работе были использованы комплексные методы исследования:

1. Определение сальмонеллезного О-антигена в реакции агрегат-гемагглютинцаии (Горина Л.Г., 1975).

2. Метод определения количественного содержания ЦИК с использованием ПЭГ (Мвеоп м. ег а1., 1977).

3. Метод определения размеров ЦИК (Стручков П.В. с соавт., 1985).

4. Метод определения сальмонеллезного О-антигена в составе ЦИК (Горина Л.Г. с соавт., 1983) в нашей модификации.

5. Метод определения содержащих ЦИК с использованием ПЭГ и протеина А, меченного пероксидазой (модификация метода Б-ЬвУваз 3. et а1., 1978).

6. Количественный метод оценки интенсивности цитохимических реакций на шгофотометре Ш$-компакт (определение гликогена, липидов, миелопероксидазы) (Котельников В.Н. с соавт., 1987).

Изучаемые показатели исследовались от 2-х до 4 раз в динамике заболевания. Материалы лабораторных и клинических наблюдений подвергнуты статистическому анализу на АСВТМ-4030 с использованием пакета прикладных программ для обработки медицинской и биологической информации.

Результаты собственных исследований. При определении содержания специфического О-антигена в сыворотке крови больных сальмонеллезом выявлены следующие закономерности: О-антигене-ыия регистрировалась во всех группах больных на протяжении всего заболевания. Изучаемый показатель снижался в динамике заболевания, оставаясь до выписки из стационара достоверно выше контрольного уровня (Р> 0,001). Наибольшее содержание О-антигена выявлено у больных с тяжелым течением сальмонелле-за в период разгара заболевания (1,70+0,09). У больных со среднетяжелнм и легким течением болезни уровень О-антигенемии был также высоким, - однако достоверно ниже, чем у больных с тяжелым течением сальмонеллеза (1,50+0,06; 1,44+0,14; Р^ 0,05). При тяжелом течении на 16-20 дни отмечено увеличение содержания О-антигена (1,35+0,15; Р <0,05). Выявлена зависимость О-антигенемии от тяжести течения и динамики инфекционного процесса.

Сводная таблица изучавшихся показателей у больных гастроинтестинальной

формой сальмонеллеза

Тяжесть течения сальмонеллеза

( |

Изучавшиеся!0-анти- |

показа-I ген '

а. ,ед

ЦИК ОП

^й-со- !

Дни болезни

¡ной кон-1 ¡центра- ! ¡ции ]

I

{держащ.

|цик

|усл.единиц

Размер ЦИК

коэффициент

(к)

Гликоген] Липиды |миелопе-' ед.ОП | ед.ОП |Р°КСИ-

даза ! ед.ОП

I. Легкое течение п = 18

1-5

1,44 + 0,14х

101,25 + 5,23х

94,60 ±2,3

1,43 +0,10*

195,0 ± 7,6

125,4 ± 6,2

45,7 +6,3*

6 - 10

1,50 1 0,12х

106,50 + 7,74х

93,62 + 6,7

1,75 + 0,11

198.6

Ь 10,6

119,7 + 9,1

71,6 + 3,7х

II - 15

1,22 ± о»9*

108,20 + 6,28

95,60 ± 1«6

1,95 + 0,07

200,5 + Ю.7

105,7 + 6,7

100,8 + 7,8

16 - 20

54,73 + 4,47

93,35 ± 0,7

2. Среднетяжелое течение т........ I I - 5 г"11 -......■"■ \ 1,50 + 0,06х т—----------- 130,18 ± 6,41х ! 89,24 ±13,4 "1 .......... 2,08 +0,20 т-- 263,8 ± 12,6х ' 153,5 + 7,2х I 57,1 + 4,3ХХ

п = 83 6 - 10 1,41 40,10х 139,36 + 6,92х 86,84 + 3,2х 1,70 +0,08 218,0 ± 12,6х 127,2 + 8,1 76,8 + 8,4х

II - 15 1,41 + ±0,ПХ 119,34 + 6,21х 95,8 + 4,1 1,85 +0,16 213,7 + 7,5х 117,3 ± 8.3 92,8 +11,9

16 - 20 1,15 +0,08х 104,47 + 8,54х 96,55 ± 3,1

3. Тяжелое течение I - 5 1,70 ¿0,09х 83,35 + 3,22х 93,40 + 7,1 1,77 _+0,18 253,8 ± 11,4х 137,4 + 9,4х 78,3 + 6,9х

П = 11 6 - 10 1,42 ¿0,11х 134,82 + 9,23х 94,25 + 5,0 1,55 + 0.16 201,0 ± 9,8 108,6 ± 8,7 102,5 + 10,1

» II - 15 0,90 40,20х 117,73 +10,91х 75,40 ± 5,8х 1,62 +0,10 181,3 ± 7.2 112,3 ± 7.1 104,6 + 7,3

16 - 20 1,35 40,15х 142,04 + 6,82х 91,18 + 6,4

Контроль 0,3 +0,01 62,27 + 3,61 94,0 + 1,8 1,89 +0,18 188,0 + 3,3 120,8 + 4,1 98,0 ± 2,4

ю

Примечание: х - достоверные различия с контрольной группой

Аналогичные результаты получены и другими авторами (Га-лимзянов Х.М., 1982; Валиев А.Г., 1986).

У больных с легким и среднетяжелым течением отмечено . уменьшение содержания О-антигена сыворотки крови в динамике заболевания. Это, по-видимому, связано с рядом причин: возможной фиксацией антигена на клеточных мембранах, поглощением клетками ыононуклеарно-фагоцитарной системы, а также с иммунокомплексообразованиеы, которое, в свою очередь, стимулирует процессы фагоцитоза и элиминации антигенов.

У больных с тяжелым течением заболевания в период рекон-валесценции зафиксировано повторное увеличение содержания О-антигена. И если высокий уровень О-антигенемш в острый период, по-видимому, отражает степень инфицированности (Погорельская Л.В., 1986), то повторное повышение его уровня, на фоне отсутствия клинических симптомов, возможно, связано с особенностями токсического действия значительных доз О-антигена, в результате чего происходит изменение функциональной активности клеток МЮ, а также разрушение этих клеток, что приводит к высвобождению большого количества О-антигена,вновь попадающего в кровь в свободном состоянии, но утратившего токсические свойства.

Кроме этого увеличение уровня О-антигенемии в эти сроки может зависеть от диссоциации циркулирующих и фиксированных иммунных комплексов (Погорельская Л.В., 1986; Микерин С.М., 1987).

Сравнение уровней О-ангигенемии у больных с бактериологическим подтверждением диагноза и больных, у которых данные бактериологического обследования были отрицательными, на 6-10 дни болезни выявило более низкое содержание О-антигена у пациентов первой группы (0,82+0,18; 1,53+0,10; Р<0.01), что,

возможно, связано с более интенсивным выведением возбудителя из организма через кишечник (Микерин С.М., 1987).

Проведение корреляционного анализа показало зависимость уровня О-антигенемии от выраженности симптомов интоксикации и дегидратации в острый период болезни. Уровень циркулирующих иммунных комплексов зависел от степени тяжести и сроков болезни. Повышение количества ЦИК зарегистрировано на протяжении всего периода наблюдения, и только в группе больных с легким течением сальмонеллеза на 16-20 день содержание ЙК не отличалось от контроля (54,73+4,41; Р> 0,05). Убольных с легким и среднетяжелыы течением в динамике заболевания отмечалось снижение ЩК. При тяжелом течении сальконеллеза минимальное содержание ЦЙК зарегистрировано в остром периоде болезни (83,35+3,2; Р< 0,05) и максимальное в период рекокзалесцен-ции (16-20 дни)(142,04+6,8; Р< 0,05).

Полученные результаты, демонстрирующие увеличение уровня ЦЙК, можно объяснить ответной реакцией макроорганизма на попадание чужеродного агента и активацией клеточных звеньев иммунного ответа, ответственных за пролиферацию специфических антител. При легком и среднетяжелом течении сальмонелле-за, по-видимому, наблюдается адекватная реакция организма. В ответ на антигенную стимуляцию наблюдается постепенное нарастание ЦИК, с последующей их элиминацией в' период реконва-лесценции. Однако у больных со среднетяжеяым течением болезни ЦЙК не достигают перед выпиской из стационара контрольных цифр, что, по-видимому, может быть связано с более высоким уровнем их в острый период, а также со свойствами клеток !.ЙС, принимающих участие в элиминации иммунных комплексов из организма. Данный факт позволяет также предпблояить, что полной санаши организма от специфических антигенов у этих больных

к моменту выписки не происходит.

Сравнительно низкий уровень ЦИК в острой периоде заболевания у больных с тяжелым течением сальмонеллеза на фоне высокого содержания О-антигена, возможно, связан с периферической блокадой рецепторов антитело-образующих клеток (АОК) (Ка-Линкович А.Г. с соавт., 1983) и, как следствие, с нарушением выработки специфических антител. Повторное увеличение ЩК в периоде реконвалесценции при тяжелом течении, по-видимому, происходит в результате действия О-антигена и ЦИК на клетки ШЮ и, как следствие этого - частичная юс гибель, в связи с чем освобождается большое количество О-антигена, вновь попадающего в кровь и связывающегося с антителами, что совпадает с мнением ряда авторов (Погорельская Л.В., 1986). Сохраняющийся высокий уровень ЦИК у больных с тяжелым течением сальмонеллеза, а также, в меньшей степени при среднетяжелом течении заболевания, может быть связан с качественными характеристиками иммунных комплексов, а именно их размерами и составом.

Проведено сравнительное исследование уровня О-антигене-ыии и количественного содержания ЦИК у больных средней тяжести, получавших дезинтоксикационную и регидратационную терапию различными методами: I) перорально (раствор "Перораль") - 53 пациента; 2) парентерально (растворы "Квартасольп,пТри-соль", "Ацесоль") - 27 больных. В остром периоде заболевания клинические проявления сальмонеллеза достоверно не отличались в двух группах (Р > 0,05). На фоне проводимой терапии было выявлено более быстрое купирование клинических симптомов (отсутствие аппетита, тошнота, рвота; 3,20+0,3; 4,13нЮ,4 дня;'1,98+0,3; 3,03+0,4 дня; 1,11+0,16; 1,88+0,29 дня соот-

ветствекно) и более низкое содержание ЦИК на II—15 дни болезни в группе больных, получавших солевые растворы пэрорально (110,47+6,7; 130,74+10,4; Р< 0,05).

Результаты, по-видтаоыу, модно объяснить усилением выведения возбудителя сальмонеллеза и его антигенов через кишечник при пероральном применении солевых растворов, что подтверждается исследованиями ряда авторов (Малеев В.В., 1987; Голохвастова Е.А., 1989).

Размеры ВДК в зависшостя от тяжести течения и динамики сальмонеллеза оценивали по коэффициенту К, который определяется отношением количественного содержания ЦЙК при различия: концентрациях полиэтиленгликоля (Стручков П.В. с соавт.,1985). Анализ результатов показал, что во всех грушах больных размеры циркулирующих иммунных комплексов статистически достоверно не отличались от размеров ЦИК контрольной группы; только у больных с легким течением сальмонеллеза в остром периоде заболевания определены иммунные комплексы крупных размеров, достоверно отличащиеся от контрольных результатов (1,43+0,10; 1,89+0,18; Р < 0,05). У больных с тяжелым и среднетяжелым течением болезни выявлена тенденция к уменьшению размеров ЦЙК в остром периоде и периоде реконвалесценции.

Полученные данные, демонстрирующие наличие крупных ЦИК в остром периоде легкого течения сальмонеллеза, по-видимому, могут объяснить более низкий уровень ИК как в остром периоде, так и на протяжении всего заболевания, а также их снижение до контрольных показателей к 20 дню от начала болезни.

Более высокий уровень -ЦИК на протяжении всего заболевания, а также отсутствие его нормализации при среднетяжелом и тяжелом течении болезни может быть связан с наличием у больных этих групп иммунных комплексов меньших размеров. Возмож-

но, что одним из факторов, определяющих благоприятное течение при гастроинтестинальной форме сальмонеллеза, является образование ЦИК крупных и средних размеров.

Антигены возбудителей острых кишечных инфекций, в дгяном случае О-антигены сальмонелл, попадая в кровь, подвергаются элиминации несколькими путями. Кроме процессов фагоцитоза антигенных субстанций и пути их метаболического катаболизма, свободные антигены связываются с антителами, образуя циркулирующие иммунные комплексы, которые, по мнению ряда авторов, приводят к уменьшению содержания в сыворотке крови свободных антигенов и антител и затрудняют диагностику инфекционных заболеваний (Микерин С.М., 1987; Белая Ю.А. с соавт., 1988). Поэтому определение в настоящей работе 0-антигена сальмонелл в составе ЦЙК мы считаем важным этапом как в изучении качественного состава ЦИК, так и в плане разработки дополнительных диагностических тестов при салыюнеллезе.

Исследованы 28 образцов сывороток крови от 19 больных. У 14 больных диагноз сальмонеллеза подтвержден бактериологически, у 5 - отсутствовало бактериологическое к серологическое подтверждение диагноза. Результаты определения сальмонел-лезного О-анткгена в составе ЦЙК, после их диссоциации в кислом буфере на колонке, где в качестве сорбента использовали Тоуореага 1И-55 (Горина Л.М. с соавт., 1983), показали, что в 25 образцах в составе ЦЙК обнаруживался 0-антиген сальмонелл. Таким образом, если до диссоциации ВДК в сыворотке крови больных 0-антиген был обнаружен в диагностических титрах- 1:8 и выше лишь в 7 исследуемых образцах (2590, то после диссоциации ЦИК, специфический 0-антиген выявлялся в 89,3% случаев.

Представленные результаты исследований свидетельствуют о том, что антигенный состав иммунных комплексов в значитель-

ной степени обусловлен специфическим зальмонеллезным О-анти— геном. Диссоциация ЦЙК с последующим определением суммарного О-антигена в РАГА позволяет увеличить в 3,3 раза выход антигена и значительно повшает процент положительных результатов реакции.

По мнению В.И.Покровского (1983), обнаружение антигенов микроорганизмов является прямым доказательством взаимодействия патогенных микробов с организмом человека. Таким образом, определение сальмонеллезного О-антигена в составе ЦИК может являться самостоятельным тестом для подтверждения диагноза.

В работе произведено изучение уровней ЦЙК с использованием протеина А, меченного пероксидазой (Stevens s. et al., 1978). Данным методом регистрируются иммунные комплексы, содержащие igG и его подклассы (igs1; igs35 igff^)«

Полученные данные свидетельствуют, что у больных с легким течением сальмонеллеза на протяжении всего заболевания уровни igG-ЦИК не отличались от показателей контрольной группы (94,0+1,8; Р >0,05). При среднетяжелом течении болезни на 6-10 дни заболевания, а у больных с тяжелым течением на II—15 дни зафиксирован уровень igG-ЦИК статистически достоверно более низкий, чем в контрольной груше (86,84+3,2; 75,40+5,8; Р< 0,05). Таким образом, изучение уровней IgG-ЦИК

швило их различия в зависимости от тяжести течения и динамики сальмонеллеза.

В защите организма от бактериальных инфекций, кроме гуморальных факторов, значительная роль отводится нейтрофилам, которые принадлежат к наиболее реактивным клеткам крови, высокочувствительны к разнообразным изменениям внутренней среда, сопутствующим нарушениям гомеостаза во многих системах

организма (Маянский А.Н., 1986). Нейпрофили человека представляют важную эндотоксиисвязывающую клеточно-гуморальную систему, участвующую в сложных процессах иммобилизации, транспорта и выведения липополисахарида из крови и организма. Определен ние количественным методом на цитофотомэтре 'ШФ-компакт цитохимических показателей (гликоген, липиды, миелопероксидаза) позволяют объективно оценить реактивность нейтрофилов периферической крови у больных сальмонеллезом.

Содержание внутриклеточного гликогена и липидов на протяжении легкого течения заболевания не отличались от контрольных показателей, однако уровень МП в остром периоде резко снижался (45,7+6,3; 98,0+2,4; Р< 0,05), а в период реконвалесцен-ции нормализовался (100,8+7,8; Р >0,05). При среднетяжелом течении в остром периоде заболевания отмечено значительное увеличение содержания гликогена и липидов в клетке (263,8+12,6; 153,5+7,2; Р < 0,05), уровень МП резко снижался (57,1+4,3; Р < 0,05), в период реконвалесценции все изучавшиеся показатели не отличались от контрольных результатов. У больных с тяжелым течением сальмонеллеза данная зависимость сохранялась, однако содержание МП было статистически достоверно большим, чем у больных с легким и среднетяжелым течением.

Таким образом, показана зависимость цитохимических показателей нейтрофилов периферической крови больных сальмонеллезом от тяжести течения и динамики инфекционного процесса. На основании полученных результатов можно предположить, что в период разгара заболевания,происходила стимуляция нейтрофилов антигенами возбудителя, выражающаяся в активации процессов синтеза гликогена, являющегося основным энергетическим веществом, обеспечивающим высокую антимикробную активность нейтро-

филов. Снижение содержания внутриклеточного гликогена к б-Ю дню болезни и в более поздние сроки отражает реализацию энергетических запасов на нужда стимулированного нейтрофила, а также, возможно, связано с выходом в кровь незрелых нейтрофи-лов (Козинец Г.И., 1980). В острый период заболевания происходит увеличение содержания липидов в результате взаимодействия липолитичесних и липосинтетических процессов. Уменьшение содержания липидов на 6-10 дни болезни, по-видимому, связано с преимущественннм заверявшей образования фаголизосои в этот период, а возможно, и с частичной реализацией липидов на энергетические нужда. Снижение уровня Ш в 1-5 дни болезни может быть расценено как показатель повшегаш реактивности нейгрофилов и связано с реализацией фермента в процессе убивания бактерий внутри .клетки, а также на экстрацеллюлярше нужды. Повышение Щ в более поздние сроки заболевания свидетельствует о снижении бактерицидной активности (Пигаревский В.Е., 1982; Маянский А.Н. с соавт., 1984).

По—вид!п.!ему, в остром периоде еальмонеллеза токологическая реактивность нейгрофилов, на фоне высокого содержания О-антигена и ЦИК, была значительной, отсутствие статистически достоверных различий между цитохимическими показателями и результата?«! контрольных исследований в целом отражает уменьшение реактивности фагоцитов в период рекооталесценции, совпадающее со снижением уровня О-антигенемии и циркулирующих иммунных кошлексов.

Таким образом, установлено, что для гастроинтестиналь-ной формы еальмонеллеза характерна специфическая О-антигене-мия, коррелирующая с выраженностью клинических симптомов. На всем протяжении заболевания отмечается повышенное содержание

циркулирующих иммунных комплексов, принимающих активное участие в элиминации антигенов. Иммунные комплексы, выявляющиеся у больных сальмонеллезом, преимущественно крупных и средних размеров. Антигенный состав ЦИК в значительной мере обусловлен специфическим О-антигеном. У больных сальмонеллезом определяются 1вс;-содержшцие ЦИК, не коррелирующие с общим пулом циркулирующих иммунных комплексов. Выявленные изменения цитохимических показателей нейгрофилов периферической крови, возможно, являются результатом стимулирующего действия сальмонелле зного О-аятигена и ЦИК на фагоциты и свидетельствуют о повышении иммунологической реактивности клеток в ходе иммунного ответа.

Изученные иммунологические показатели отражают закономерности иммунного ответа макроорганизма, направленные на сохранение гомеостаза при сальмонеллезе.

ВЫВОДЫ

1. При гастроинтестинальной форме сальмонеллеза в реакции агрегат-гемагглютинации закономерно определяется специфическая О-антигенемия, максимальный уровень которой регистрируется в остром периоде болезни, зависит от тяжести, вариантов течения, сроков болезни и способа проведения регидратационной и дезин-токсикациснной терапии.

2. В разгаре болезни выявляется прямая зависимость между уровнем сальмонеллезной О-ангигенемии и симптомами интоксикации и дегидратации,

3. У больных сальмонеллезом отмечается повышенное содержание циркулирующих иммунных комплексов, зависящее от тяжести, динамики болезни и методов лечения. Среднетяжелое и тяжелое течение гастроинтестинальной формы сальмонеллеза сопровождает-

ся снижением уровня содержащих ЦИК.

4. У больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза образуются циркулирующие иммунные комплексы, преимущественно крупных и средних размеров, что определяет благоприятное течение болезни.

5. Обнаружение специфического О-антигена в составе циркулирующих иммунных комплексов, после их диссоциации»повышает процент серологического подтверждения диагноза до 89,3% (при РАГА - 25$) и может служить дополнительным диагностическим тестом при сальмонеллезе.

6. Определение количественным методом'цитохимических показателей нейтрофилов периферической крови выявило их разнона-правленность в динамике сальмонеллеза: повышение уровня гликогена, липидов,снижение уровня миелопероксидазы в остром периоде болезни и нормализацию показателей в периоде реконвалесценции, что указывает на функциональную перестройку клетки и зависит от уровня О-антигенемии и циркулирующих иммунных комплексов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Динамический контроль за уровнем О-антигенемии и содержанием циркулирующих иммунных комплексов при сальмонеллезе может служить для оценки степени тяжести, эффективности лечения

и элиминации антигенов.

2. Определение специфического О-антигена в составе ЦИК, после их диссоциации, может быть рекомендовано в качестве дополнительного диагностического теста сальмонеллеза.

3. Количественная оценка метаболических изменений нейтрофилов периферической крови, по интенсивности цитохимических реакций, может использоваться тля характеристики иммунологической реактивности клеток в динамике сальмонеллеза, что позволяет судить о течении болезни.

Список -работ, опубликованных по теме диссертации

1. К вопросу о патогенезе шигеллезов /И.А.Лежнёв, Т.В.Лукинская, Ю.А.Ильинский, С.Г.Разумовская // Современные представления о диагностике, патогенезе, лечении и профилактике острых кишечных инфекций. Сб.научн.трудов I ММЙ.- М.,

1986.- С.65-66.

2. Циркулирующие иммунные комплексы при сальмонеллезе /Ю.А.Ильинский, Т.В.Лукинская. И.А.Лекнёв и др.// Сов.медицина.-

1987.- Р 6.- С.105-107.

3. Некоторые показатели динамики циркулирующих иммунных комплексов при сальмонеллезе /Т.В.Лукинская, Л.В.Соколова // Третий Всероссийский съезд инфекционистов. Москва-Смоленск, 3-4 октября 1989 г. - М., 1989.- С,93-96.

4. Некоторые клинико-иммунологические параллели при дизентерии /Т.В.Лукинская, Л.В.Соколова, В.Н.Володина, В.М.Ко-тельников // Влияние факторов внешней среды на реактивность организма. Материалы региональной научно-практической конференции.- Киев-Ворошиловград, 1990.- Т.1.- С.45-46.

5. Ильинский Ю.А., Лукинская Т.В. Антигенный состав циркулирующих иммунных комплексов и его диагностическая значимость при сальмонеллезе // Сов.медицина,- 1991.- № 6.- С.79-80. •