Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Клинико-морфологические и иммуногистохимические особенности вариантов артифициального мочевого пузыря в разные сроки функционирования

На правах рукописи

БОДАРЕВА Наталья Валерьевна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВАРИАНТОВ АРТИФИЦИАЛЬНОГО МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ В РАЗНЫЕ СРОКИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ

14.03.02 - патологическая анатомия 14.01.23 - урология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 2013

005540546

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И. И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

АНИЧКОВ Николай Мильевнч, член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор СЗГМУ им. И.И. Мечникова, заведующий кафедрой патологической анатомии;

КОМЯКОВ Борис Кириллович, доктор медицинских наук, профессор СЗГМУ им. И.И. Мечникова, заведующий кафедрой урологии;

Официальные оппоненты:

Кветиой Игорь Моисеевич - доктор медицинских наук профессор, Федеральное Государственное бюджетное учреждение "Научно-Исследовательский институт акушерства и гинекологии имени Д.О. ОТТА" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук, руководитель отдела патоморфологии

Семешок Андрей Александрович - доктор медицинских наук, доцент, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский Государственный педиатрический медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра урологии, доцент

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится « 26 »декабря 2013 года в 11-00 часов на заседании диссертационного совета Д208.086.06 при Государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Западный Государственный медицинский университет имени И.И Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д. 41).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке в Государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Западный Государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (195196, Санкт-Петербург, Заневский пр., д. 1/82)

Автореферат разослан «_»_2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор медицинских наук М.А. Шевяков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Создание артифициального мочевого пузыря является признанным высоким достижением пластической хирургии мочевых путей, создающим оптимальные возможности естественной деривации мочи после радикальных операций по поводу рака и хронической декомпенссированной инкура-бельной патологии мочевыделительной системы (Комяков Б.К., 2002; Горелов С.И., 2002; Комяков Б.К., 2003, 2005; Шаплыгин Л.В., 2005). Радикальная цис-тэктомия в сочетании с созданием альтернативного мочевого пузыря рассматривается как «золотой стандарт» хирургического лечения рака мочевого пузыря при выраженном инвазивном росте и при неинвазивной, мультифокальной опухоли (Комяков Б.К. и соавт., 2006; Stein Y.P. et al., 1997; Hautman R.E., 2001, 2003; Studer U.E. et al., 1996, 2000). В качестве неоцистиса используются различные отделы желудочно-кишечного тракта: подвздошная, толстая кишка, желудок (Комяков Б.К., Горелов С.И., 2002; Комяков Б.К., 2003, 2005; Шаплыгин JI.B., 2005; Немытин Ю.В., 2004; Сергеев A.B., 2008; Асаг О., 2003; Gatti R.,1998, 1999; Newgreen D., 2002; Ngan Y.H.K., 1993). Накоплен значительный клинический и морфологический материал с изучением клинических и морфофункциональных показателей, различных вариантов цистопластики (ЦП). Работы посвящены: хирургической технике, уродинамике, динамическим процессам клинической и морфологической адаптации на уровне организма и АМП. При этом наиболее часто применяемой остается илеоцистопластика (Немытин Ю.В., 2004; Бодарева Н.В., 2008, 2010, 2011; Аничков Н.М., 2009; Комяков Б.К., 2010; Gatti R., 1998, 1999). Лишь в небольшом числе опубликованных работ, с использованием желудочного сегмента подчеркивается оптимальность его морфофункциональной адаптации с наименее выраженной тканевой и клеточной перестройкой (Комяков Б.К., 2002, 2005; Дариенко P.O., 2009; Ngan Y.H.K., 1993; Асаг О., 2003). На современном этапе этот вариант цистопластики является альтернативой кишечному, но выполняется в единичных клиниках (Комяков Б.К., 2005; Ngan Y.H.K., 1993; Асаг О. et al., 2003). Такое положение во многом определяется немногочисленностью исследований с многоплановой, сравнительной оценкой различных вариантов цистопластики на разных и особенно поздних сроках функционирования АМП. Этим определяется отсутствие комплекса показателей индивидуального выбора сегмента ЖКТ для детубуляризации, с учетом патологии мочевых путей, предшествующей цистопластике, типовых морфофункциональных особенностей используемых сегментов желудочно-кишечной системы. Практически отсутствуют исследования с клинико-морфологической оценкой создания и функционирования вариантов неоцистиса в совокупности с параллельной оценкой клинических и динамики морфологических показателей при исследовании эндоскопического биопсийного материала. Большая часть работ с таким направлением исследования относится к тонкокишечному АМП в сроки, не превышающие 4 года функционирования. (Дариенко P.O., 2007; Деев Р.В., 2009; Feretti S. et al., 1995). Данные о сравнительной динамике адаптационной перестройки при различных вариантах ЦП при многолетнем функционировании АМП представлены лишь в отечественной литературе и в небольшом числе пуб-

ликаций (Дариенко P.O., 2008; Комяков Б.К. и соавт., 2004, 2005, 2006; Аничков Н.М., Бодарева Н.В., 2010). При этом, как правило, изучение динамики морфологических процессов проводится на уровне традиционных методик, иммуно-гистохимический и ультраструктурный методы использованы лишь в единичных исследованиях (Дариенко P.O., 2008; Деев Р.В. с соавт., 2009).

Степень разработанности темы исследования. Актуальность сравнительного клинико-морфологического и морфофункционального изучения различных вариантов ЦП с качественной и количественной оценкой особенностей перестройки АМП на разных и особенно поздних сроках функционирования определяется необходимостью расширения выбора вариантов цистопластики с оптимизацией долгосрочного функционирования неоцистиса и повышением социальной адаптации и качества жизни пациента. Целесообразно провести исследование трех вариантов ЦП как на ранних, так и поздних сроках функционирования с использованием традиционных и иммуногистохимических методов с комплексным сравнительным клинико-морфологическим их изучением.

Комплексное клинико-морфологическое, морфофункциональное иммуноги-стохимическое исследование с морфологической оценкой данных создает возможность многоплановой сравнительной оценки различных вариантов цистопластики с расширением и оптимизацией их индивидуального выбора и прогнозирования качественной оценки адаптационного процесса на ранних и поздних сроках функционирования АМП.

Цель работы: комплексная сравнительная клинико-морфологическая мор-фофункциональная, иммуногистохимическая оценка изменений в тонкокишечных, толстокишечных и желудочных АМП на ранних и поздних сроках после цистопластики.

Задачи исследования:

1. Исследование сравнительных особенностей морфологической перестройки трех вариантов АМП (тонкокишечного, толстокишечного, желудочного) на органном, тканевом, клеточном уровнях, при различных сроках их функционирования (1 месяц - 12 лет).

2. Установление качественных и количественных параметров архитектоники: слизистого слоя, покровного эпителия, желез, камбиальных отделов АМП.

3. Изучение направления и уровня дифференцировки клеточных популяций в покровном эпителии, генеративных зонах в трех вариантах АМП.

4. Сравнительное изучение иммуногистохимических показателей: маркеров пролиферации, апоптоза, верификации клеточного состава: покровного эпителия, камбиальных зон.

5. Сравнительная морфологическая, иммуногистохимическая, морфометри-ческая оценка стромального клеточного инфильтрата на разных этапах функционирования различных вариантов АМП.

6. Сравнительное клинико-морфологическое исследование изученных вари-ан-тов ЦП на разных сроках функционирования АМП: качественная и количест-

венная оценка основных клинических и морфофункциональных показателей с анализом их соотношений при различных вариантах цистопластики в разные сроки функционирования неоцистисов.

Научная новизна:

1. Впервые проведено сравнительное комплексное клинико-морфологическое исследование на большом материале, состоящем из трех вариантов цистопластики на ранних и поздних этапах функционирования АМП;

2. Впервые изучение адаптационного процесса проведено с использованием комплекса методов: морфологического, гистохимического, иммуногистохимиче-ского и морфометрического. Изучены качественные и количественные показатели сравнительной оценки особенностей течения адаптационного процесса в трех вариантах АМП, на молекулярно-биологическом уровне;

3. Изученные иммунногистохимические показатели пролиферации (Ki67), апоптоза (р53, Вс12), верификации клеточного состава эпителиальных структур и стромы (цитокератииа, хромогранина А, синаптофизина, CD8,CD20) на молеку-лярно-биологическом уровне подтверждают адаптационную природу морфологической перестройки АМП;

4. Впервые на большом материале с исследованием повторных эндоскопических биопсий при долгосрочном функционировании (6-12 лет) АМП не установлено типовых морфологических проявлений, документирующих стадии морфогенеза опухолевой трансформации (дисплазии, атипии, рака in situ).

5. Сравнительным клинико-морфологическим исследованием установлена положительная динамика основных клинических и морфофункциональных показателей независимо от варианта цистопластики с объективным подтверждением возможности расширения выбора варианта ЦП с более широким выполнением толстокишечного и желудочного вариантов и рекомендацией сроков повторных контрольных биопсий.

Теоретическая и практическая значимость работы:

1. Обоснована необходимость проведения сравнительного комплексного клинико-морфологического исследования на большом материале, состоящем из трех вариантов цистопластики на ранних и поздних этапах функционирования АМП;

2. Доказана целесообразность изучения адаптационного процесса проведенного с использованием комплекса методов: морфологического, гистохимического, иммуногистохимического и морфометрического; изучение качественных и количественных показателей сравнительной оценки особенностей течения адаптационного процесса в трех вариантах АМП, на молекулярно-биологиче-ском уровне;

3. Изученные иммунногистохимические показатели пролиферации (Ki67), апоптоза (р53, Вс12), верификации клеточного состава эпителиальных структур и стромы (цитокератииа, хромогранина А, синаптофизина, CD8,CD20) на молеку-

лярно-биологическом уровне помогают подтвердить адаптационную природу морфологической перестройки АМП;

4. Обоснована необходимость исследования повторных эндоскопических биопсий при долгосрочном функционировании (6-12 лет) АМП для установления типовых морфологических проявлений, документирующих стадии морфогенеза опухолевой трансформации (дисплазии, атипии, рака in situ).

5 Доказана целесообразность сравнительного клинико-морфологического исследования с установлением положительной динамики основных клинических и морфофункциональных показателей независимо от варианта цистопластики с объективным подтверждением возможности расширения выбора варианта ЦП с более широким выполнением толстокишечного и желудочного вариантов и рекомендацией сроков повторных контрольных биопсий.

Материалы работы используются в хирургической деятельности и при проведении учебного процесса на кафедре урологии СЗМУ им. И.И. Мечникова на базе ГМПБ № 2 (зав. кафедрой д.м.н., профессор Б.К. Комяков).

Направление морфологического исследования оценки и диагностики эндоскопических биопсий используется в работе эндоскопического и патологоанато-мического отделений (городское патологоанатомическое бюро (заведующий ГПАБ, д.м.н., профессор Г.Б. Ковальский) и на кафедре патологической анатомии СЗМУ им. И.И. Мечникова (заведующий кафедрой з.д.н. РФ, член-корреспондент РАМН, д.м.н., профессор Н.М. Аничков).

Методология и методы исследования. Методологической основой диссертационного исследования явилось последовательное применение методов научного познания. Работа выполнена в дизайне сравнительного рандомизированного открытого исследования с использованием клинико-морфологических, гистологических, гистохимических, иммуногистохимических, морфометриче-ских, аналитических, статистических методов.

Положения, выносимые на защиту

1. При всех вариантов цистопластики, независимо от сроков их функционирования, характерно постоянство биологической сущности процесса перестройки, ее адаптационный компенсаторно-приспособительный характер.

2. При стабильном сохранении органного строения вариантов АМП качественные и количественные показатели адаптационной перестройки варьируют, что определяется морфофункциональными особенностями использованных сегментов ЖКТ и сроками функционирования АМП.

3. Тонкокишечный АМП характеризуется наиболее выраженной перестройкой архитектоники слизистой оболочки с редукцией типовых морфофункциональных структур, осуществляющих функцию пристеночного пищеварения и всасывания в условиях нормы.

4. Толстокишечный и желудочный АМП характеризуются наименее выраженной морфофункциональной перестройкой на тканевом и клеточном уровне, что отражает их высокую адаптационную пластичность.

5. Во всех вариантах АМП отсутствуют морфологические признаки опухолевой трансформации (дисплазия, атипия, рак in situ).

6. Многоплановое иммуногистохимическое исследование со сравнительным изучением пролиферации (Ki67), апоптоза (р53, Вс12), а также выявлением клеточного состава эпителия (бокаловидные, каемчатые и бескаемчатые нейроэн-докринные клетки) и стромы (лейкоциты, лимфоциты, тучные клетки, клетки Кахаля), подтверждает защитно-приспособительный характер морфофункцио-нальной перестройки, независимо от вариантов ЦП и сроков функционирования артифициалыюго мочевого пузыря.

Степень достоверности и апробация результатов. Степень достоверности полученных результатов проведённых исследований определяется достаточным и репрезентативным объёмом эндоскопического материала трех вариантов АМП с использованием современных методов исследования. Методы статистической обработки полученных результатов адекватны поставленным задачам. Сформулированные в диссертации выводы, положения и рекомендации аргументированы и логически вытекают из системного анализа значительного объёма выборок исследованного эндоскопического материала трех вариантов АМП и результатов выполненного исследования. Достоверность работы подтверждается публикацией её результатов в рецензируемых научных изданиях. По материалам диссертационного исследования опубликовано 13 печатных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных изданиях ВАК РФ. Внедрение результатов исследования. Материалы исследования апробированы на федеральном, регионарном, местном уровне: результаты работы доложены на Пленуме правления Российского общества урологов (Краснодар, 2010), на обществе патологоанатомов г. Санкт-Петербурга (2011), на Всероссийской конференции с международным участием, посвященной памяти член-корр. РАМН, з.д.н. РФ, профессора O.K. Хмельницкого (2013). По материалам исследования имеются 13 печатных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных изданиях ВАК РФ.

Личный вклад автора в получении результатов исследования. Автором работы лично проведены: аналитическая оценка монографической и периодической отечественной и иностранной литературы по теме диссертационного исследования; изучение и диагностика всего эндоскопического биопсийного материала; изучение, выполнение и многоплановый анализ морфологического гистохимического, иммуногистохимического, морфометрического материала; сравнительный клинико-морфологический анализ; документация фактических данных; комплексный анализ результатов исследования.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, иллюстрирована 18 таблицами и 28 рисунками. Список литературы содержит 193 источников, в том числе отечественных авторов - 78, иностранных - 112.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Материал представлен 256 наблюдениями радикальной цистэктомии, проведенными в урологической клинике СЗГМУ им. И.И. Мечникова на базе урологического отделения городской многопрофильной больницы № 2 за период 1995-2011 гг. Показанием для ЦП было наличие различной патологии мочевого пузыря с клиническими и морфофункциональными, прогностически неблагоприятными, нарушениями уродинамики, инкурабельной почечной недостаточностью. Из 256 пациентов с радикальной цистэктомией эндоскопическая биопсия выполнена в 119 наблюдениях (46,5%) человек, в том числе тонкокишечная (подвздошный сегмент кишки) у 99 (83,2%), толстокишечная (сигмовидный отдел) у 6 (5,0%), желудочная (фундальный отдел) - у 14 (11,8%) больных.

Наиболее частым показанием для ЦП был рак мочевого пузыря - 218 (85,2%) больных. По данным макро- и микроскопического исследования, прогрессия раковой опухоли в соответствии с классификацией TNM соответствовала: рТ in situ - у 44 (20,2%) пациентов, Т2а и Т2Ь - у 115 (52,8%), ТЗа и ТЗЬ - у 26 (11,9%), Т4а и Т4Ь - у 33 (15,1%) пациентов. Лимфогенное регионарное мета-стазирование установлено у 59 (27,0%) из 218 больных.

Рецидив первичной опухоли возник у 18 (8,3%) из 218 больных в сроки 248 месяцев после цистэктомии: после тонкокишечной ЦП (99 операций)! I у 14 (14,1%), толстокишечной (6 операций) - у 2 (33,3%), после желудочной (14 операций) -у 2 (14,3%) больных (х2=1,63; р>0,10).

Эндоскопические биопсии изучены в 119 первичных наблюдениях, у 61 пациента они были повторными. Изучено 180 биопсий (таблица 1) с преобладанием тонкокишечного АМП (99 наблюдений); значительно меньшее число составили биопсии из толстокишечного (6 наблюдений) и желудочного АМП (14 наблюдений). Сроки выполнения биопсий от 1 месяца до 12 лет. В сроки до 4 лет функционирования выполнены 102 биопсии, от 5 до 12 лет - 78 биопсий.

Таблица 1

Количество выполненных эндоскопических биопсий при различных вариантах цистопластики

Эндоскопические АМП

биопсии тонкокишечный толсто кишечный желудочный

(п=99) (п=6) (п=14)

Первичные (п=119) 99 6 14

Повторные (п=61) 40 18 3

Всего (п=180) 139 24 17

Комплексное клинико-морфологическое исследование проводилось по единому протоколу на ранних и поздних этапах клинического наблюдения в соответствии со сроками исследования эндоскопических биопсий. Изучены показатели: метаболических нарушений, состояния функции почек, печени, динамиче-

ского исследования мочи, уродинамики, обструктивных проявлений, мочевой инфекции, чувствительности к антибактериальной терапии. Больным проводилось комплексное лабораторное, инструментальное, биохимическое обследование, обзорная и экскреторная урография, цистография, компьютерная томография. Анамнестические, клинические, лабораторные данные учитывались по карте обследованного больного.

Эндоскопическое обследование проводилось с выполнением биопсий из разных участков дистального и проксимального отдела АМП (не менее 2-3 био-птатов из каждого отдела). Материал фиксировался в 10% нейтральном формалине, заливался в парафин. С каждого блока изготавливались по 8-16 срезов на разных уровнях, что определяло возможность широкого изучения АМП. Морфологическое исследование эндоскопических биопсий включало: гистологический, гистохимический, морфометрический методы. Гистологическое исследование проведено с окраской срезов гематоксилином и эозином, пикрофуксином (метод Ван Гизон), альциановым синим, толуидиновым синим, по методу Романовско-го-Гимза, импрегнацией серебром (метод Гримелиуса). Гистохимическое исследование включало: реакцию ШИК, в том числе с окраской альциановым синим.

Иммуногистохимическое исследование проведено в 64 наблюдениях, из них в тонкокишечном АМП - 50 (сроки от 1 года до 12 лет), в толстокишечном - 7 (от 1 года до 12 лет), в желудочном - 7 (от 1 года до 9 лет).

Таблица 2

Количество выполненных иммуногистохимических исследований при трех различных вариантах цистопластики

Иммуногисто-химические маркеры Варианты цистопластики и сроки выполнения иммуногистохимических исследований

тонкокишечный АМП (п=50) толсто кишечный АМП (п=7) желудочный АМП (п=7)

Ki67 7 1 1

р53 7 1 1

Вс12 7 1 1

ХрА 8 1 1

Syn 4 1 1

МСС 3 1 1

CD8 7 1 1

CD20 7 1 1

Иммуногистохимическим исследованием изучена экспрессия маркеров: пролиферативной активности и апоптоза в клетках покровного эпителия и крипт (Ki67, р53, Вс12), верифицирован гистогенез клеток в составе слизистой оболочки, строме (МСС, синаптофизин, хромогранин A, CD8, CD20). Использованы моноклональные мышиные антитела к Ki67, Clone Ki67 (1:400, «Dako», Дания); p53, Clone DO-7 (1:150, «Dako», Дания); Bcl2, Clone 124 (1:100, «Dako», Дания), MultiCytoCeratin, Synaptophisin, хромогранин A, AE1/AE3 multicytokeratin (1:50, «Dako», Дания), CD20 (1:200, «Dako», Дания), CD8 (1:50, «Dako», Дания). Им-

муногистохимическая реакция проводилась по одноэтапному протоколу с демаскировкой антигена (высокотемпературной обработкой ткани) в 0,01 М цитрат-ном буфере (рН 7,60).

Морфометрическое исследование проведено во всех наблюдениях с оценкой в каждом биоптате 10 полей зрения, при увеличении х40, с расчетом средних величин и/или полуколичественной оценкой показателей: 0 - отсутствие показателя, + - слабая степень выраженности, ++ - умеренная степень выраженности, +++ - интенсивная степень выраженности.

Количественную оценку результатов проводили с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием методов параметрической и непараметрической статистики. Для оценки межгрупповых различий значений признаков применяли t-критерий Стьюдента, ранговый U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, /2-критерий Пирсона и точный метод Фишера (ТМФ).

Выполнялась компьютерная статистическая обработка материала с использованием стандартного пакета программ прикладного статистиче-ского анализа (Statistica for Windows v. 6.0, StatSoft Inc., США). Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий или факторных влияний) принимали равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Рост заболеваемости раком мочевого пузыря и целым рядом других врожденных и приобретенных нозологических форм патологии мочевыводящих органов определяет возрастающую актуальность радикальной цистэктомии с последующим созданием артифициального мочевого пузыря из различных сегментов желудочно-кишечного тракта (Горелов С.И., Комяков Б.К., 2003, 2005; Шап-лыгин Л.В., 2005; Hautmann R.E., 2001). На современном этапе, помимо традиционно преобладающей илеоцистопластики, возникает необходимость более широкого использования для ЦП толстокишечного и желудочного сегментов ЖКТ (Комяков Б.К., 2003; Сергеев А.В., 2008; Асаг О., 2003; Newgreen D., 2002; Оде М., 2004). Выбор пластического материала при ЦП должен учитывать до-операционную патологию, индивидуальные особенности пациента и его клинические показатели, наличие сочетанных форм патологии. Это связано с необходимостью максимального обеспечения сохранения гомеостаза на уровне организма, достижения оптимальных результатов уродинамики, сохранения морфо-функциональной полноценности при долгосрочной функции АМП. Все перечисленное определяет качество жизни и социальную адаптацию больного (Комяков Б.К., Дариенко P.O., 2008; Аничков Н.М., Бодарева Н.В., 2011). Отечественные и иностранные публикации с изучением направления морфофункциональ-ной перестройки сегментов ЖКТ в новых условиях функционирования касаются преимущественно тонкокишечного АМП. Морфологические сведения о толстокишечном и желудочном АМП, из-за относительно редкого выполнения этих вариантов цистопластики, немногочисленны (Дариенко P.O., Шаплыгин, 2005;

Сергеев А.В., 2008; Nilsson G. et al„ 1993; Sheldon C.A., Gibbert et al„ Wacksman J., 2005).

Важными вопросами, требующими исследования, остаются: проблемы сравнительного изучения процесса адаптации с оценкой динамики клинических, морфологических, морфофункциональных, а также иммуногистохимических особенностей различных вариантов АМП на разных этапах их функционирования; степень риска опухолевой трансформации при многолетнем функционировании неоцистиса (Комяков Б.К., Аничков Н.М., Бодарева Н.В., 2011).

Собственное сравнительное комплексное клинико-морфологическое, мор-фофункциональное, иммуногистохимическое, морфометрическое исследование проведено в 119 из 256 наблюдений радикальных цистэктомий с последующей цистопластикой. Исследовано 180 эндоскопических биопсий (75 повторных) в сроки функционирования АМП 1 месяц - 12 лет: тонкокишечных - 142 (62 повторных), в сроки 1 месяц — 12 лет; толсто кишечных - 14 (5 повторных), в срок 4 месяца - 6 лет; желудочных - 24 (8 повторных) в сроки 1 месяц — 9 лет. Исследование биопсий из нескольких участков одного АМП на разных уровнях био-птата позволило объективизировать сравнительную оценку процесса в пределах одного биоптата и в разных наблюдениях.

Нами установлено абсолютное постоянство сохранения органного строения, использованных при цистопластики сегментов ЖКТ, что подтверждает данные P.O. Дариенко (2008). Однако это не исключает существенных временных, качественных и количественных различий направления морфофункциональной перестройки АМП, что отражает особенности типовой функции и строения, использованных при цистопластике сегментов в условиях многолетнего функционирования АМП.

Тонкокишечный мочевой резервуар характеризуется постоянством и ранним развитием значительной перестройки архитектоники слизистой оболочки. В самые ранние сроки (до 1 года) наблюдается четко выраженная тенденция к атрофии ворсинчатых структур с их расширением, уплощением, нарушением рельефа слизистой оболочки. На фоне нарастающей атрофии возникает редукция ворсинок с неравномерной степенью выраженности процесса даже в пределах одного наблюдения. Число ворсинок с 8,2±3,1 мм2 снижается к 4 годам функционирования АМП до 4,67±1,6 - 6,2±2,1; к 7-12 годам до 3,05±1,7; высота ворсинок соответственно с 288,67±2,8 до 128,31±2,1 - 98±1,8 и 34±0,2, толщина с 111±1,2 - 106,9±1,7 до 45,2±1,3 в срок 12 лет. Редукция ворсинчатых структур с формированием безворсинчатой слизистой оболочки является характерной особенностью поздних сроков функционирования тонкокишечного АМП. С перестройкой архитектоники четко коррелирует изменение состава покровного эпителия — с постоянством опережающего прогрессирующего замещения каемчатых энтероцитов бокаловидными клетками с секрецией сиаломуцинов: в срок функционирования АМП 3-4 года при числе каемчатых клеток 9,03±2,3, бокаловидные клетки составляют 26,42±2,3, в поздние сроки (10-12 лет) они образуют тотальный монослой с соотношением к каемчатым энтероцитам 10:1. При субтотальном уплощении слизистой оболочки к 12 годам формируется монослойная эпителиальная выстилка клетками уротелиалыюго типа, экспрессирующими

панцитокератин с непостоянной секрецией сиаломуцина (Дариенко P.O. и соавт.. 2008). Как известно, качественное изменение секреции бокаловидных клеток с нарастанием секреции сиаломуцинов имеет защитное значение (Аруин Л.И.. 1997).

Особенностью тонкокишечного АМП является установленное во всех наблюдениях, независимо от сроков исследования, устойчивое сохранение камбиальных отделов: число крипт до 1 года составляет 9,4±2,5, к 3 годам 8,3±3,1, к 4 годам - 7,5±2,6; глубина, соответственно, 114.3±2,1, 109,7±2,5. 99,7±1,6, ширина — 47,9±2,5, 51.1 ±2,8, 51,3±1,7. Даже в самые поздние сроки (к 12 годам) их число составляет 15,2±2,9, глубина 108,4±2,9, ширина - 49,2±3,1 со значительным разнообразием распределения в пределах одного наблюдения. Независимо от морфометрических показателей в криптах сохраняется типовое направление дифференцировки: эпителиальное (бокаловидное), нейроэндокринное, клеток Панета. Бокаловидные клетки расположены по всей глубине крипт и составляют 18,12 - 29,2±3,1; нейроэндокринные, экспрессирующие хромогранин, - 8,2±1,9. Клетки Панета сохраняют донную топографию и составляют 3,79±2,4 - 8,3±2,1, их постоянство на всех сроках функционирования отражает высокий защитный потенциал, свойственный типовым особенностям тонкой кишки (Аруин Л.И., 1997).

шШШ 9 Ш1

; '

¡¡g I Щрщ

а

Рисунок 2. а) Тонкокишечный АМП, срок функционирования 6 лет: сохранение органного строения, безворсинчатая поверхность, сохранение крипт, гипертрофия мышечного слоя. Окраска гематоксилином и эозином, х100;

б) Тонкокишечный АМП, срок функционирования 12 лет. Безворсинчатая слизистая оболочка с монослоем бокаловидных и бескаемчатых клеток, выраженный лимфоцитарный инфильтрат в строме. Реакция ШИК, х400

Толстокишечный и желудочный АМП, в отличие от тонкокишечного, характеризует постоянство значительного сохранения типовой архитектоники и морфофункциональных особенностей, свойственных этим отделам ЖКТ.

В толстокишечном АМП во все сроки исследования сохраняются типовые топографические и количественные соотношения покровного эпителия желез крипт, что коррелирует с функциональными и морфометрическими особенно-

б

стями толстокишечного эпителия. Покровный эпителий представлен монослоем колоноцитов, секретируюших в ранние сроки функционирования АМП преимущественно сульфомуцины, а в более поздние сроки - сиаломуцины. Отчетливо выражена и коррелирует со слизеобразованием экструзия эпителия. Очаговой гиперплазии эпителия и/или аденоматозных пролифератов не выявлено при всех сроках функционирования АМП.

Крипты в ранние сроки сохраняют типовую топографию, равномерное расположение. Лишь в сроки функционирования АМП 4-6 лет нарастает неравномерность их расположения с укорочением и некоторым очаговым уменьшением числа: до 2 лет их число 10,6±0,7 - 13,4±0,4, в сроки 4-6 лет - 4,2±0,2 - 5,2±0,6. В поздние сроки в небольшом числе наблюдений возникает микрокистозная трансформация донных отделов крипт (4±0,3 на 1 мм2) с атрофией эпителия с перифокальным склерозом подслизистой оболочки, наличием лейкоцитов в стенке и просвете кист. Микрокистозная трансформация донных отделов крипт имеет, очевидно, ретенционую природу, что отражает свойственную криптам толстой кишки тенденцию к возрастной атрофии (Саркисов Д.С., 1974). Во всех сроках исследования в криптах сохраняется типовое клеточное воспроизведение с бокаловидным направлением дифференцировки эпителия, наличием нейроэн-докринных клеток и непостоянством клеток Панета.

Желудочный АМП во всех сроках исследования сохраняет устойчивую типовую характеристику архитектоники слизистой оболочки покровного эпителия, желез и камбиальных отделов. На этом фоне выявляется, преимущественно в поздние сроки, очаговая атрофия желез с уменьшением их размеров, формы ветвления, разобщением эпителиальных структур стромой. Для таких участков характерно: уменьшение длины, расширение шеек желез, расширение ямок. Число камбиальных структур меняется с 40,8±1,5 - 33,8±2,8 в сроки до 4 лет до 66,4±2,2 - 68,6±1,2 при 7-летнем функционировании неоцистиса. Такие изменения сочетаются с гиперплазией обкладочных клеток, число которых с 29,7±0,2 возрастает до 63,6±0,2. Гиперплазию обкладочных клеток рассматривают как характерный для желудка реактивный процесс, компенсирующий атрофию железистых структур (Саркисов Д.С., Аруин Л.И., Туманов В.П., 1997). Покровный и железистый эпителий секретируют нейтральный ШИК-положительный секрет. Лишь в небольшом числе наблюдений, на поздних этапах функционирования желудочного АМП, выявлена очаговая, неполная кишечная метаплазия, коррелирующая с атрофией желез и гиперплазией обкладочных клеток. При этом цитологическая характеристика клеток не отличается от типовой.

Проведенное нами впервые комплексное, динамическое сравнительное, иммуногистохимическое исследование подтвердило адаптационную биологическую природу перестройки изученных вариантов АМП в новых условиях функционирования.

В раннем и позднем послеоперационном периоде для покровного эпителия и крипт характерны независимо от варианта цистопластики постоянство и высокий уровень эпителиоцитарной, нейроэндокринной дифференцировки с высоким уровнем экспрессии цитокератина (МиШСуюСегайп), хромогранина А, синапто-физина. Эпителиальная дифференцировка при всех вариантах неоцистиса преоб-

ладает, нейроэндокринные клетки составляют в тонкокишечном АМП 8,2±1,9, в толстокишечном - 5,4±1,5, в желудочном - 6,4±2,5, интерстициальные клетки Кахаля соответственно 9,4±1,9, 6,5±3,7 и 6,6±2,1.

В работе проведено исследование иммунобиологических показателей пролиферации и апоптоза (Ki67, р53, Вс12). Установлено постоянство высокого уровня экспрессии маркера пролиферации (Ki67) независимо от варианта АМП и сроков функционирования, что сравнимо с устойчивостью показателей апоптоза (р53, Вс12). В соответствии с этим в тонкокишечном АМП показатели апоптоза при сохранении типовой топографии варьируют: в сроки до 4 лет функционирования от 68,6±2,1 р53, ++ Вс12; до 14±1,8 (р53), +++ (Вс12) в 10 лет.

В толстокишечном АМП соответственно — 34,8±1,3 ++; 21,5±2,1 + в сроки 2-6 года; в желудочном - 68±1,4 - 72±1,1 и 32,3±0,2, 12,8±2,1. В совокупности с иммуногистохимическими показателями экспрессии маркера пролиферации (Ki67) количественная оценка апоптоза отражает постоянство сохранения функциональной активности камбиальных структур, независимо от варианта и сроков исследования неоцистисов, что имеет прямое отношение к «чистоте» клеточного отбора на ранних этапах дифференцировки (Саркисов Д.С., Аруин Л.И., 1997).

В связи со спорностью вопроса о биологической сущности стромальной клеточ-ной инфильтрации в АМП нами проведена иммуногистохимическая верификация клеток стромы (CD8, CD20). При различной степени выраженности и распространенности, наиболее интенсивной и постоянной в тонкокишечном АМП, наименее LJb желудочном, установлено постоянство качественной характеристики инфильтрата: в тонкокишечном до 4 лет количество Т- и В-лимфоцитов составляет 37,2±1,3 и 37,0±1,6, в 12 лет - 12,5±2,1 и 11,9±2,7; в толстокишечном соответственно до 2 лет - 43,2±3,1 и 12,4±5,1, к 4 годам - 23,6±5,1 и 30,1±3,5; в желудочном - 31,3±1,7, 19,3±2,2,10,4±3,9 и 21,3±1,5. Эти данные позволяют считать постоянство стромальной клеточной инфильтрации кооперацией клеток иммунного ряда одним из проявлений комплексного защитно-приспособитель-ного адаптационного процесса, свойственного всем изученным вариантам цистопластики, независимо от сроков функционирования АМП.

Оценка результатов различных вариантов цистопластики определяется совокупностью клинико-морфологических показателей: частотой и характером осложнений, нарушением гомеостаза, качеством уродинамики, развитием деструктивно текущего воспаления, риском опухолевой трансформации (Комя-ков Б.К., 2007; Дариенко P.O., 2008). Важной проблемой преимущественно ранних этапов цистопластики является нарушение гомеостаза с развитием метаболических осложнений: гиперкалиемии, гипернатриемии, гиперхлоремии, нарушением кислотно-щелочного состояния и электролитного баланса крови. Риск развития метаболических нарушений наиболее характерен для тонкокишечной цистопластики, в связи со специфической функцией тонкой кишки (всасывание, секреция, пристеночное пищеварение) с дополнительным повреждением неоци-стиса мочой (Сергеев A.B., 2004; Комяков Б.К., 2006; Groeschull J., 1993; Golsalberz, 1993). Реже они наблюдаются при толстокишечной цистопластике (Organdini G., Gatti R., 1998) и еще более редки при желудочном варианте ЦП (Parkh D.I., Clark Т., 2002; Hautman R.E., 2003). Собственный материал подтвер-

ждает повышение показателей метаболических нарушений в ранние сроки функционирования тонкокишечного неоцистиса (3-24 месяца): концентрация калия составила от 3,1 до 4,2 ммоль/л, хлора от 104,1 до 112,3 ммоль/л, дефицит основания от 3,6 до 6,5. Тем не менее, для большей части наблюдений характерно нормальное значение этих показателей, что определяет их нормальный средний уровень. Эти данные прямо коррелируют с прогрессирующей атрофией и редукцией ворсинчатых структур и каемчатых эпителиоцитов.

Толстокишечная и желудочная цистопластика, в отличие от тонкокишечной, характеризуется устойчивыми благоприятными показателями гомеостаза.

При оценке качества функционирования АМП важными являются показатели уродинамики: максимальный объем АМП, дневная и ночная континенция, управляемость мочеудержания и мочеиспускания. При сравнительном изучении этих показателей в тонкокишечном и желудочном АМП установлены определенные различия.

Для тонкокишечного АМП характерны более высокие показатели максимального объема АМП как в ранние, так и в поздние сроки функционирования: соответственно 605,0±132,5 - 612,5±150,2; 387±33,5 и 392,4±88,5 мл; дневная и ночная континенция - 93,3 - 84,2%; 59,9 - 87,2% и 92,6 - 9%; 85% - 31,5%; частота ночного удержания мочи независимо от сроков исследования составила 42,6% и 32,8%.

При желудочном АМП в сроки функционирования (3-24 месяца) объем мочеиспускания, первого позыва, максимальная емкость, объем остаточной мочи имеют более оптимальную характеристику, соответственно 20,2±12,1 и 62,5±52,5 в 3 месяца, 32±17,2 и 128,8±116,2 через 12 месяцев. В целом в работе отмечено положительное влияние этого вида неоцистиса на показатели уродинамики, что коррелирует с установленными собственным исследованием морфологическими и иммуногистохимическими особенностями АМП: постоянством сохранения органного строения, рабочей гипертрофией мышечного слоя, отсутствием деформирующего склероза, постоянством высокого уровня экспрессии нейроэндокринных клеток, интерстициальных клеток Кахаля, ответственных за процессы регуляции гомеостаза и сократительной активности мышечного слоя АМП (ТокаИ М„ 2003).

В связи с повреждающим действием мочи и устойчивой бактериурией в литературе постоянно обсуждается вопрос о биологической сущности стромальной клеточной инфильтрации, которую рассматривают как проявление острого и хронического воспаления с выделением в АМП ранней воспалительной стадии (Сай1 Я. е1 а1., 1998; Сапш М. сЧ а1„ 1996).

Проведенное нами исследование с сопоставлением клинико-морфологических, иммуногистохимических, бактериологических показателей, в отличие от принятого мнения, позволяет считать стромальные изменения одним из проявлений адаптационного, защитно-приспособительного процесса в новых условиях функционирования неоцистиса независимо от его варианта. Это подтверждается установленным постоянством преимущества кооперации иммуно-компетентных клеток в стромалыюм инфильтрате: число Т- и В-лимфоцитов, экспрессирующих С08 и С020, плазматических, тучных клеток варьирует в

ранние и поздние сроки, их соотношения меняются, но они всегда преобладают независимо от варианта ЦП. Нейтрофильные и эозинофильные лейкоциты непостоянны, немногочисленны, очаги гнойной деструкции отсутствуют. При постоянстве стромальной клеточной инфильтрации характерно отсутствие тенденций к склерозу, который слабо и/или умеренно выражен, склеротическая деформация отсутствует, независимо от варианта ЦП и сроков функционирования АМП. На изученном материале не выявлено наблюдений с агрессивно текущей клеточной инфильтрацией, сопровождающейся деструкцией тканей АМП, о чем пишет М. Tokaki (2003).

Установленные нашим исследованием особенности стромальной инфильтрации с преобладанием кооперации иммунокомпетентных клеток и не подтверждают проявлений хронического воспаления с его волнообразным течением, постоянством выраженных склеротических изменений ткани с тенденцией к деформации органа (Давыдовский И.В., 1978; Струков А.И., 1997; Аничков Н.М., 2007), что особенно важно с учетом долгосрочного функционирования АМП. Эти данные в совокупности с выявленным в работе постоянством в стромальной инфильтрате интерстициальных клеток Кахаля с их прямым отношением к регулярным и синтетическим процессам на органном уровне является еще одним аргументом в пользу компенсаторно-приспособительной природы стро-мальных изменений.

Одной из актуальных постоянно обсуждаемых и неясных проблем ЦП, особенно с учетом необходимости многолетней функции неоцистиса, является первичная опухолевая трансформация. В мировой литературе опубликовано небольшое число наблюдений развития раковой опухоли при сигмопластике, реже илеопластике в сроки 5-50 лет (Gatti R.F., 1986; Shokeir A.A. et al., 1995; Sarano S., Voshiro S., Joko K., 1995). Имеются единичные сообщения о возможности гиперплазии, метаплазии и дисплазии в тонкокишечном и желудочном АМП (Дариенко P.O., 2008; Деев Р.В., 2009; Di Tonno F. et al., 2001; Organdi G. et al., 2002). На нашем материале не выявлено наблюдений с морфологическими проявлениями дисплазии, атипии и/или рака in situ, как типовых фаз морфогенеза опухолевой трансформации (Головин Д.И., 1975; Краевский Н.А., 1993; Аничков Н.М., 2005). Наиболее сложным для диагностической оценки является процесс дисплазии, который выявлен в небольшом числе клеток при электронно-микроскопическом исследовании (Деев Р.В. и др., 2009; Organdi G., 1998). Однако следует учитывать, что дисплазия оценивается по комплексу морфологических признаков: многорядности эпителия, ядерным изменениям, нарушению ядерно-цитоплазматических отношений, повышением митотической активности (Саркисов Д.С., 1982; Аничков Н.М., 2005). Такой морфологической документации проявлений дисплазии ни в одном из наших наблюдений не обнаружено. Постоянство установленных собственным исследованием показателей апоптоза при всех вариантах АМП как в ранние, так и в поздние сроки функционирования имеет прямое отношение к дискуссионному вопросу о риске первичной опухолевой трансформации при ЦП в целом и при различных вариантах цистопласти-ки в частности. Наиболее высокие показатели апоптоза установлены нами при тонкокишечном варианте ЦП с сохранением их типовой топографии в донных

отделах крипт, что определяет чистоту клеточного отбора с физиологической гибелью клеток на ранних этапах клеточного воспроизведения (Аруин Л.И., 1997). Для всех вариантов неоцистиса характерно повышение экспрессии анти-апоптотического маркера апоптоза (Вс12) на поздних сроках, что отмечено также в работе P.O. Дариенко (2008). Эти данные имеют прямое отношение к постоянно обсуждаемой проблеме - степени риска опухолевой трансформации в АМП, особенно на поздних сроках функционирования (Gatti R. et al., 1995; Dellis A.E. et al., 2008).

Установленный нами сравнительный комплекс иммуногистохимических и морфометрических показателей пролиферации и апоптоза при всех вариантах АМП, на всех сроках исследования является объективным подтверждением сохранения биологического механизма «чистоты» отбора клеточных популяций уже на уровне ранних этапов клеточного воспроизводства, что снижает риск развития первичного рака в АМП при различных вариантах цистопластики.

Тем не менее, при оценке риска опухолевой трансформации следует учитывать, что при многолетнем функционировании желудочного и толстокишечного неоцистиса не исключена свойственная этим сегментам ЖКТ тенденция к аде-номатозной гиперплазии, метаплазии. При снижении активности апоптоза в поздние сроки функционирования в этих вариантах АМП может повышаться риск опухолевой трансформации в связи с нарушением регенераторного гомео-стаза.

Нашим исследованием установлен комплекс постоянства многоплановых, морфофункциональных, иммуногистохимических, морфометрических показателей биологической защиты всех вариантов неоцистиса в ранние и поздние сроки функционирования соответствующим общим и частным положениям характеристики адаптационного, компенсаторно-приспособительного процесса (Саркисов Д.С., Аруин Л.И., 1982; Пальцев М.А., Аничков Н.М., Литвицкий П.Ф., 2009).

В таблице 3 представлены данные о показателях биологической защиты при разных сроках функционирования вариантов ЦП.

Таблица 3

Морфофункциональные морфометрические показатели биологической защиты при разных сроках функционирования вариантов ЦП

ИЦП сцп гцп

Показатели 4 года 12 лет 4 года 6 лет 4 года 9 лет

(п=2) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2)

Ano птоз 68,6 23,5 34,8 21,5 40,8 19,3

(Р53) ±2,1 ±2,5 ±1,3 ±2,1 ±2,3 ±1,1

Антиапоптотический маркер экспрессии (Вс12) ++ + ++ + ++ +

Бокаловидные клетки, продуцирующие сиаломуцины 26,42 ±2,3 30,04 ±2,9 - -/+ +++ +++

Нейроэндокринные 2,1 1,4 10,4 15,2 9,6 13

клетки крипт ±0,1 ±1,3 ±0,2 ±3,2 ±0,3 ±0,6

Продолжение таблицы 3

Показатели ИДИ сцп гцп

4 года (п=2) 12 лет (п=2) 4 года (п=2) 6 лет (п=2) 4 года (п=2) 9 лет (п=2)

Клетки Кахаля 6,7 ±3,1 10,3 ±1,1 6,5 ±3,7 7,1 ±2,3 7,1 ±0,7 6,6 ±2,1

Клетки Панета 3,79 ±2,4 5,88 ±1,7 - - - -

В-лимфоциты (CD20) 14,4 ±1,6 6,1 ±2,2 43,2 ±3,1 23,6 ±5,1 31,3 ±1,7 19,3 ±2,2

Т-лимфоциты (CD8) 12,5 ±2,1 11,9 ±2,7 12,4 ±5,1 30,1 ±3,5 10,4 ±3,9 21,3 ±1,5

Тучные клетки 2,1 ±1,1 1,4 ±2,4 2,1 ±1,5 1,9 ±0,9 1,3 ±0,5 1,8 ±0,2

Мышечный слой (гипертрофия) ++ +++ ++ +++ ++ +++

Фиброз стромы + ++ + ++ + ++

Примечание: достоверных различий между показателями при различных вариантах АМП на разных сроках функционирования нет (р>0,10). Клетки Панета находятся только в тонкой кишке. Полуколичественная оценка степени выраженности показателей: (-) -нет, (+) — слабо выраженный, (++) — умеренно выраженный, (+++) — резко выраженный

Установленная в проведенном исследовании сравнительная оценка клини-ко-морфологических, морфофункциональных и иммуногистохимических особенностей характеризует постоянство особенности адаптационного процесса при трех вариантах ЦП, создавая реальную и рациональную возможность более широкого выбора материала для цистопластики за счет желудочного и толстокишечного сегмента ЖКТ. Такая возможность позволяет оптимизировать выбор вариантов цистопластики и улучшить показатели долгосрочного качественного функционирования АМП с учетом индивидуальных особенностей пациента, определивших необходимость радикальной цистэктомии с последующей цистопла-стикой. Это позволяет повысить социальную адаптацию и качество жизни пациентов с радикальной цистэктомией и с последующей цистопластикой.

ВЫВОДЫ

1. Морфологическая перестройка изученных сегментов желудочно-кишечного тракта, использованных при цистопластике, имеет компенсаторно-приспособитель-ную биологическую природу. Это определяет стабильность полученных нами морфофункциональных и иммуногогистохимических показателей при всех вариантах неоцистиса, независимо от сроков функционирования АМП (до 12 лег).

2. Морфофункциональные особенности адаптационного процесса характеризуются: постоянством сохранения органного строения сегмента, с наличием камбиальных отделов, клеточным воспроизводством (эпителиоцитов, нейроэн-

докринных элементов, клеток Панета), сохранением лимфоидного аппарата слизистой оболочки, неизменным преобладанием в стромальном клеточном инфильтрате клеток лимфоидного ряда, рабочей гипертрофией мышечного слоя АМП.

3. При иммуногистохимическом исследовании нами установлена определенная устойчивость комплекса показателей, независимо от варианта и сроков функционирования АМП: высокий уровень экспрессии маркеров пролиферации (Ki67), апоптоза (р53, Вс12), направления воспроизведения эпителио-цитарной и нейроэндокринной дифференцировки (цитокератин, хромогранин А, синаптофи-зин), признаков кооперации иммунокомпетентных клеток стромы - Т- и В-лимфоцитов (CD8, CD20). Установленный иммуногистохимический спектр отражает защитные биологические особенности адаптационной перестройки АМП.

4. Постоянство адаптационного направления процесса перестройки не исключает временных качественных и количественных различий морфологических и иммуногистохимических показателей, отражающих исходные морфофункцио-нальные особенности использованных при цистопластике сегментов ЖКТ и сроки функционирования АМП.

5. Тонкокишечный АМП характеризует ранняя и выраженная перестройка архитектоники слизистой оболочки, связанная с прогрессирующей атрофией и редукцией ворсинчатых структур с последовательным формиро-ванием безворсинчатой поверхности: число ворсинок в срок 1-4 года снижается с 8,2±3,1 мм2 до 4,6±1,6, в срок 7-12 лет до 3,05±1,7. Характерно опережающее замещение специализированных каемчатых энтероцитов бокаловидными клетками (1:10), с секрецией сиаломуцинов, имеющих защитную функцию. При этом показательна количественная и качественная долгосрочная устойчивость крипт: в поздние сроки их число 15,2±2,9, глубина - 108,4±2,5, ширина - 49±2,3, клеточное воспроизводство характеризует преобладание бокаловидных клеток (29,2±3,0), постоянство клеток Панета (8,3±3,1), нейроэндокринных клеток (8,2±1,9), что коррелирует с экспрессией маркера пролиферации (Ki67) (77,9±2,2) и апоптоза в ранние сроки р53 - 68,6±2,1, Вс12 ++, в поздние (12 лет) соответствен-но14±1,8 и +++.

6. Толстокишечный и желудочный АМП, в отличие от тонкокишечного, характеризует устойчивое сохранение типовой архитектоники слизистой оболочки и желез. Количество камбиальных отделов в сроки до 4 и до 7 лет функционирования составляет для сигмовидного - 13,4±0,7 - 5,2±0,6; для желу-дочного 40,8±1,5 - 68,6± 1,27. Эти показатели коррелируют с постоянством направления клеточного воспроизводства (эпителиоцитарной, нейроэндокринной дифференцировки) редкостью и очаговостью атрофического и гиперпластического процесса. Показатели экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации в сигмовидном варианте: Ki67 - 19,2±3,5, р53 - 2,8±2,3, Вс12 - 20±1,3, в желудочном: Ki67 -20±1,3, р53 - 32,3±0,2, Вс12 - 12,8±2,1.

7. Для всех вариантов АМП, независимо от сроков функционирования, характерно отсутствие морфологических проявлений агрессивного текущего воспаления. При этом всегда преобладает инфильтрация стромы клетками лимфоидного ряда, экспрессирующими маркеры CD8 и CD20 с наиболее высокими

проявлениями в тонкокишечном АМП (CD8 - 23,6±5,1, CD20 - 30,1±3,5), менее выраженными при сигмоцистопластике (CD8 - 9±2,3, CD20 - 10±1,8) и очаговыми при гастроцистопластике (CD8 - 19,3±2,2, CD20 — 21,3±1,5). Показатели стромальной лимфоидной инфильтрации сочетаются с постоянным наличием клеток Кахаля и их корреляцией с рабочей гипертрофией мышечного слоя АМП. Это тоже отражает защитно-приспособительную сущность перестройки.

8. В изученных трех вариантах неоцистиса во все сроки исследования комплекса не обнаружено признаков аденоматозной гиперплазии, дисплазии и/или морфогенеза ранних этапов опухолевой трансформации.

9. Положительная клинико-морфологическая оценка показателей гомеоста-за, уродинамики, значения бактериурии для риска развития ранних и поздних осложне-ний цистопластики подтверждается продолжительным и качественным функционированием, а также благоприятным и долговременным прогнозом при всех изученных вариантах АМП.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Высокий уровень адаптационной перестройки с постоянством комплекса показателей биологической защиты характерен для всех исследованных вариантов АМП. Это подтверждается многолетним качественным их функционированием, что определяет рациональность расширенния выбора цистопластики за счет желудочного и толстокишечного АМП с учетом основной и сочетанной патологии пациента.

2. Для морфологической оценки адаптационного процесса, с учетом его неодномерности, требуются повторные эндоскопические исследования с выполнением биопсий из разных отделов АМП.

3. При планировании повторного, контрольного эндоскопического исследования с выполнением биопсии необходимо учитывать клинико-морфологические особенности варианта цистопластики. При энтеропластике надо иметь в виду возможность замедленного течения адаптационного процесса и метаболических нарушений, требующих коррекции, в сроки до 4 лет; при сиг-мопластике - развитие микрокистозной трансформации крипт с лейкоцитарной инфильтрацией, при гастропластике - возможность очаговой гиперплазии и толстокишечной метаплазии эпителия — в поздние сроки (после 4 лет).

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

Перспективы дальнейшей разработки темы лежат в совершенствовании подходов установленных комплексным сравнительным исследованием и особенностей адаптационного процесса, которые учитывают и создают реальную и рациональную возможность расширения вариантов за счет желудочного и толстокишечного сегментов с улучшением показателей долгосрочного функционирования, социального прогноза, качества жизни пациентов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1.Бодарева Н.В. Клинико-морфологическая бактериологическая оценка значения инфицированное™ мочевых путей при цистопластике / Бодарева Н.В. // 3-я Межрегиональная научно-практическая конференция «Доброкачественные новообразования и инфекции в урологии и гинекологии». - СПб.: СПбГМА, 2008.-С. 7-10.

2. Комяков Б.К. Исследование антибиотикорезистентности микрофлоры мочи после гастро-, илео- и сигмопластики / Комяков Б.К., Сергеев A.B., Бодарева Н.В. // 3-я Межрегиональная научно-практическая конференция «Доброкачественные новообразования и инфекции в урологии и гинекологии» - СПб.: СПбГМА, 2008. - С. 44-46.

3. Сергеев A.B. Микробный спектр посевов мочи ортотопических резервуаров / Сергеев A.B., Строкова Л.А., Бодарева Н.В. // 3-я Межрегиональная научно-практическая конференция «Доброкачественные новообразования и инфекции в урологии и гинекологии». - СПб.: СПбГМА, 2008. - С. 71-73.

4. Бодарева Н.В. Морфофункциональные особенности адаптации эпителия тонкой кишки в различные сроки илеопластики / Бодарева Н.В., Дариенко P.O. // Материалы научно-практической конференции «Исследования по приоритетным направлениям в медицине и биологии»: Сборник научных трудов. - СПб.: СПбГМА, 2009. - С. 305-306.

5. Бодарева Н.В. Морфофункциональные особенности ортотопического мочевого пузыря в поздние сроки после илео- и гастропластики / Бодарева Н.В. // Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2009. - Прилож. 1 (25). -С. 813-814.

6. Аничков Н.М. К вопросу о биологической сущности морфофункциональ-ной перестройки кишечного и желудочного резервуаров при цистопластики / Аничков Н.М., Бодарева Н.В., Дариенко Р.О, Сергеев A.B. // Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2009. - Прилож. 1 (25). - С. 678-679.

7. Аничков Н.М. Морфофункциональные особенности ортотопического мочевого резервуара в поздние сроки функционирования / Аничков Н.М., Комяков Б.К., Бодарева Н.В. // Материалы научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины и биологии»: Сборник научных трудов. - СПб.: СПбГМА, 2010. - С. 328-329.

8. Аничков Н.М. Морфофункциональная характеристика мочевого резервуара при многолетнем его функционировании / Аннчков Н.М., Комяков Б.К., Бодарева Н.В. // Архив патологии. - 2011. - № 2. - С. 27-29.

9. Аничков Н.М. Морфологическая адаптация артифициального мочевого пузыря / Аничков Н.М., Комяков Б.К., Бодарева Н.В. // Пленум правления Российского общества урологов, Краснодар, 2010. — С. 69-72.

10. Бодарева Н.В. Морфофункциональные и иммуногистохимические особенности камбиального отдела эпителия тонкокишечного ортотопического мочевого резервуара / Бодарева Н.В. // Профилактическая и клиническая медицина: Сборник научных трудов. - СПб.: СПбГМА, 2011. - С. 289-290.

П.Аничков Н.М. Морфологические признаки адаптации артифициального мочевого пузыря из различных отделов желудочно-кишечного тракта / Аничков Н.М., Комяков Б.К., Бодарева Н.В., Фадеев В.А., Сергеев A.B. // Медицинский академический журнал. - 2012. - Т. 12, № 1. - С. 37-44.

12. Комяков Б.К. Сравнительная клиническая и морфофункциональ-ная оценка тонкокишечного, толстокишечного, желудочного артифициаль-ных мочевых резервуаров в разные сроки функционирования / Комяков Б.К., Аничков Н.М., Бодарева Н.В., Сергеев A.B., Фадеев В.А., Попов A.C. // «Урология». - 2013. - №1. - С. 19-24.

13. Бодарева Н.В. Морфофункциональные особенности вариантов артифициального мочевого пузыря из сегментов желудочно-кишечного тракта при долгосрочном его функционировании // «Научное образование». -2013. №9. С.-448-452.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АМП — артифициальный мочевой пузырь

ГЦП - гастроцистопластика

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

жмп - желудочный мочевой пузырь

ицп — илеоцистопластика

НМП - нижние мочевые пути

РМП - рак мочевого пузыря

рц - радикальная цистэктомия

сцп - сигмоцистопластика

ТолМП - толстокишечный мочевой пузырь (неоцистис)

ТонМП - тонкокишечный мочевой пузырь (неоцистис)

ХрА - хромогранин А

ЦП — цистопластика

мсс - мультицитокератин

Syn - синаптофизин

ЛР № 020496

Подписано в печать 13.11.2013 г. Заказ № 248 Формат бумаги 60 х 84/16. Тираж 100 экз. Усл.п.л. 1,0.

Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова Типография ООО «ЛАДОГА», Санкт-Петербург, Выборгская наб., д. 29