Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Клинико-иммунологические сопоставления в системе мать-дитя в условиях высокой пренатальной отягощенности

. I У V ..

и 1 СЕН 1999

На правах рукописи

ГАНЬЧЕВА Елена Анатольевна

КЛ ШIИ КО-ИММ У ПОЛ ОГИЧ ЕСТСИЕ СОПОСТАВЛЕНИЯ В СИСТЕМЕ МАТЬ-ДИТЯ В УСЛОВИЯХ ВЫСОКОЙ ПРЕНАТАЛЪИОЙ ОТЯГОЩЕННОСТИ (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.09. - педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Хабаровск - 1999

Работа выполнена в Институте охраны материнства и детства СО РАМН

Научные руководители: член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки, профессор В.К. Козлов, доктор медицинских наук К.В. Гайдуль

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор. А.И. Ицкович, кандидат медицинских наук И.П. Кольцов

Ведущая организация: НИИ педиатрии РАМН

Защита диссертации состоится _1999 г. в^^часов

на заседании специализированного Ученого Совета Д 084.11.01 при Дальневосточном государственном медицинском университете (680000, г. Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35)

С диссертации! можно ознакомиться в библиотеке Дальневосточного государственного медицинского университета (680000, г. Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35)

Автореферат разослан

Ж о

.1999 г.

Ученый секретарь специализированного Совета. доктор медицинских наук, профессор

В.А. Добрых

АКТУАЛЬНОСТЬ. Иммунодефицитные состояния (ИДС) включают обширную группу самостоятельных заболеваний и сопутствующих синдромов общими признаками которых является недостаточность системы иммунитета (Стефани Д.В. с соавт., 1996). Такие состояния имеют не только наследственную основу (первичные ИДС), но и могут формироваться во внутриутробном или постнатальном периодах жизни. ИДС, особенно вторичные, являются распространенной патологией детского возраста (Зимин Ю.И., 1984; Кисляк U.C. ссоавт., 1984; Хлыстова З.С., 1987; Ивановская Т.Е. 1996: Toder V. et.al., 1984). Актуальность этой темы обусловлена не только частотой респираторной патологии у данного контингента детей с ИДС, но и тем, что такие дети в последующем составляют группу риска по формированию хронических заболеваний ряда органов и систем (Альбицкий В.Ю. с соавт., 1983; Гребешева И.И., 1987; Белова А.П., 1988; Козлов В. К.,1993).

Предполагают, что ИДС у детей возникают в результате нарушения иммунного гомеостаза у матери во время беременности (Брондз Б.Д., 1987) и, протекая, по типу "реакции трансплантат против хозяина" сопровождаются угнетением клеточного звена иммунитета у потомства (Вербицкий М.Ш., 1979: Говалло В.И., 1987).

Существует мнение, что ИДС могут быть следствием воздействия факторов внешней среды на лимфоидную систему зародыша (Ивановская Т.Е. с соавт., 1996).

Таким образом, ИДС могут формироваться антенатально. Существующие методы коррекции ИДС у детей затрагивают постнатальный период развития иммунной системы ребенка, когда антенатальный дефект в данной системе уже сформировался (Альбицкий В.И. с соавт., 1983; Вельти-щев Ю.В., 1989; Козлов В.К., 1993; Хаитов P.M., 1997).

Наиболее частое осложнение беременности - гестоз (Малахова Е.И. с соавт., 1993), вызывает глубокие разносторонние изменения в организме беременной женщины и плода и является одной из причин невынашивания, ранней неонатальной и материнской смертности (Федорова М.В. с соавт., 1991). Одним из патогенетических звеньев гестоза является гипоксия (Ша-баловН.П. с соавт., 1990; Венцковскпй Б.М. с соавт., 1994; Черствый Е.Д. с соавт., 1996).

В системе мать-плод гипоксия является ведущим механизмом, опосредующим отрицательное действие на плод различных неблагоприятных факторов воздействующих на мать (Аршавский И.А., 1967; Персиани-нов Л.С., 1978; Ивановская Т.Е. с соавт., 1989).

Кроме того, в патогенезе большинства ИДС показана ведущая роль гипоксического фактора, который является следствием осложненного течения беременности (Вольф В.Е., 1992; Абрамченко В.В., 1996). От степени выраженности гипоксии зависит степень повреждения того или иного анатомического субстрата, осуществляющего иммунный ответ. Указанные положения требуют более раннего назначения иммунокорригирующих препаратов для нормализации работы функциональной системы мать-дитя и предотвращения формирования ИДС у дет ей.

В связи с этим весьма актуальным является выяснение некоторых патогенетических аспектов НДС у детей и разработка методов коррекции.

В настоящее время нейропептиды и их синтетические аналоги являются одними из наиболее перспективных фармакологических препаратов (АшмаринИ.П., 1984; 1986; Кинтрая П.Я. с соавт., 1986: Порядип Г.В. с соавт., 1995).

Достижения химии пептидов позволяет синтезировать аналоги с заданными свойствами и с заданным адресом передачи (Чазов Е.И., 1986).

В ранее проведенных экспериментальных исследованиях выполненных в ИОМиД СО РАМН и ЦНИИ Дальневосточного государственного медицинского университета показана высокая эффективность пептидного морфогена головы гидры (ПМГ) для коррекции постгипоксиче-ских нарушений у плода в системе ПОЛ-АОЗ (перекисное окисление липи-дов-антиоксидантная защита) (Лебедько O.A., 1994). Влияние ПМГ на им-мунокомпетентные органы плода и новорожденного потомства не изучалось.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Определить клиническое значение иммунных нарушений в системе мать-дитя в зависимости от степени риска и пренатальной гипоксии плода. Научно обосновать применение ПМГ для антенатальной коррекции постгипоксических нарушений в Т-клеточной системе иммуногенеза у потомства в эксперименте.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Определить клинико-иммунодогическую характеристику пар "мать-

дитя" в зависимости от факторов риска и наличия внутриутробной гипоксии плода (новорожденного).

2. На основании юшнико-иммунологических сопоставлений выявить осо-

бенности в парах "мать-дитя" в зависимости от факторов риска и наличия внутриутробной гипоксии плода (новорожденного).

3. Изучить возможность коррекции постгипоксических нарушений в Т-

клеточной системе иммунитета у потомства в экспериментальных условиях с использованием ПМГ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В результате проведенных исследований дана клинико-иммунологаческая характеристика системы мать-дитя в зависимости от суммы факторов риска женщины во время беременности и действия гипоксического фактора.

В ходе исследования, на современном методическом уровне с использованием моноюгональных антител отечественного производства и проточного цитофлюориметра "Гайсап", показаны изменения в Т-клеточном звене иммунитета у женщин в зависимости от факторов риска и наличия пре-натальной гипоксии у плода (новорожденного). Доказано, что у женщин без пренатальной гипоксии плода, высокие факторы риска ассоциируются с Т-клеточным иммунодефицитом со снижением процентного содержания основных иммуиорегуляторных клонов (С03+,С04+, С 08+) и тенденцией к лимфопении, с активацией клеток презентнрующего (СЭ25+) и цитолити-ческого (С016+) звеньев. Высокие факторы риска у женщин, беременность которых протекала с пренатальной гипоксией плода, приводят к противоположным изменениям в системе иммуногенеза, сопряженные с активацией Т-клеточной системы иммунитета с резким увеличением процентного содержания СОЗ+ и СП4+ клеток и выраженным снижением супрессорного потенциача (СБ8+).

С учетом проведенных клинико-иммунологических исследований в системе мать-дитя установлено, что увеличение баллового риска у женщин происходит за счет экстрагенитальной патологии (ЭТО), которая приводит

к развитию внутриутробной гипоксии плода. Формирующийся в этих условиях иммунологический дисбаланс в организме беременной женщины приводит к возникновению дефекта в Т-клетрчном звене иммунитета, уже в антенатальный период. Степень выраженности ИДС у детей зависит от наличия гипоксического фактора и сопровождается снижением процентного содержания СОЗ+, СБ4+, СБ8+ клеток и увеличением количества СП25+ и

>

СО 16+ клеток.

В ходе исследования показано участие цитотоксического звена иммунитета (С025+, СО 16+) женщины в развитии иммунной патологии у ребенка. Чем* выше бьшо процентное содержание этих, клеток, особенно СБ16+, у женщины, тем выраженнее была супрессия на уровне основных клонов нммунокомпетентных клеток у плода (новорожденного) - СОЗ+, С04+, С08+. |

Учитывая, что в условиях высоких факторов риска у женщины и пренатальной гипоксии плода, дефект Т-клеточной линии у ребенка формируется антенатально, научно-обоснованным является более ранее проведение иммунокорригирующей терапии.

Впервые в экспериментальных условиях нами было установлено протективное и иммунокорригирующие действие ПМГ на потомство, позволяющие вывести организм плода (новорожденного) из состояния хронического кислородного голодания, без элементов повреждения на уровне центрального органа иммуногенеза - тимуса.

Концептуальный подход к синдрому дезадаптации во время беременности, к формированию которого приводят высокие факторы риска и который, в более тяжелых случаях, клинически, проявляется внутриутробной гипоксией плода и ИДС у ребенка, позволяет осветить новые грани его этиопатогенеза и с принципиально новых позиций подойти к терапии и профилактике формирующихся осложнений, в частности, иммунных.

Изучение иммуноструктурного гомеостаза при моделировании синдрома дезадаптации в виде гипоксического воздействия в экспериментальных условиях показало, что индикатором неблагополучия организма при воздействии дестабилизирующих факторов, преломляющих свое действие через гипоксию, является центральный орган иммуногенеза - тимус.

Проведенные клннико-нммунологические исследования позволили на методически новом уровне установить различия в Т-клеточной системе иммуногенеза в парах "мать-дитя" от суммы факторов риска и наличия ги-поксического фактора.

Применение ПМГ, с целыо антенатальной коррекции постгипоксиче-ских нарушений, позволяет предупредить возникновение ИДС у потомства в эксперименте.

ОСНОВНЬШПОЛСИСЕНИЯВЬШОСШЛЬШНА ЗАЩИТУ ДИССЕРТАЦИИ.

1. В результате иммунологическогб дисбаланса в организме беременной женщины, у детей, уже в антенатальный период, формируется дефект в системе Т-клеточпого звена иммунитета.

2. Степень выраженности ИДС у ребенка зависит от наличия ги-поксического фактора и сопровождается снижением процентного содержания СОЗ+, СЭ4+, С08+ клеток и увеличением СЭ25+, СБ16+ клеток.

3. В развитии иммунной патологии у детей принимает участие цнтотоксическое звено иммунитета (С025+, СП16+ клетки) женщины. Чем выше процентное содержание С1325+ и СБ16+ клеток у женщины, тем выраженнее супрессия на уровне основных иммунорегуляторных клопов у плода (новорожденного).

4. В экспериментальных условиях установлено протективиое и иммунокорригирующее действие ПМГ на потомство, позволяющее вывести организм плода (новорожденного) из состояния хронического кислородного голодания, без элементов повреждения на уровне центрального органа иммуногенеза- тимуса. I

5. Установлены различия в Т-клеточной системе иммунитета в парах "мать-дитя" от суммы факторов риска и наличия гипоксического фактора. Профилактическое применение ПМГ, в экспериментальных условиях, позволяет предупредить формирование антенатальных ИДС у потомства.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ. Основные по-

I

ложения диссертации доложены на научно-практических конференциях "Актуальные вопросы организации1 системы охраны здоровья матери и

ребенка на Дальнем Востоке" (20-23 сентября 1996 года г. Биробиджан), "Актуальные вопросы акушерства, перинатологии и педиатрии в экологических условиях Дальнего Востока" (19-23 мая 1997 года г. Хабаровск), в статьях и тезисах.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании проведенных клини-ко-иммуно-логических исследований был разработан алгоритм диагностики и коррекции постгипоксических нарушений в системе Т-клеточного звена иммуногенеза у потомства. Полученные результаты исследований расширяют научные представления об особенностях формирования Т-клеточной системы иммуногенеза в условиях высоких факторов риска и действия внугризтроб-ной гипоксии и на экспериментальном уровне, позволяют разработать корригирующую терапию антенатально сформированных дефектов Т-клеточной линии иммунитета с помощью пептидного морфогена головы гидры. Это в свою очередь позволит выработать возможные лечебно-профилактические рекомендации для коррекции постгипоксических нарушений со стороны органов иммуногенеза в системе мать-дитя.

ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомендаций. Содержит 9 графиков, 12 таблиц, 4 микрофотографии. Список литературы состоит из 275 источников, из них 190 - отечественных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ. На основании анализа анамнестических данных и результатов обследования беременных все пары "мать-дитя" были оценены по таблице определения степени риска для состояния здоровья ребенка, разработанной Ф. Ариас (1989). В 1-ю группу (группа контроля) вошли 22 женщины с минимальными факторами риска (0-2 балла) по таблице Ф. Ариас (1989), дети которых внутриутробно развивались без признаков внутриутробной гипоксии. Во 2-ю - 37 женщин с высокими показателями (3-6 баллов) по таблице факторов риска, дети которых

развивались в условиях адекватного кислородного обеспечения. В 3-ю группу - 26 женщин с высокими факторами риска, дети которых (18) развивались в условиях внутриутробной гипоксии.

Состояние при рождении оценивали по таблицы В. Апгар (1952). Параметры физического развития оценивали с использованием таблицы Г.М. Дементьевой ссоавт. (1981).

Диагноз внутриутробной гипоксии ставился на основании клинико-инструментальных исследований.

У 49 детей был прослежен катамнезв течение первого года жизни.

Материалом для исследования служила венозная гепаринйзированная кровь. Забор материала, в количестве 1 мл, у женщин осуществлялся в третьем триместре беременности, у новорожденных на 5-7 день жизни. Идентификацию мембранных маркеров Т-лимфоидных популяций осуществляли с применением панели моноклональных антител отечественного производства, серии ИКО (ВОНЦ РАМН). Панель моноклональных антител включала 5 маркеров к следующим субпопуляциям лимфоцитов: CD3+ (зрелые Т-лим-фоциты), CD25+ (рецептор к интерлейкину-2 (активированные Т и В лимфоциты)), CD4+ (Т-хелперы/индукторы), CD8+ (Т-супрессоры/цитотоксические клетки), CD 16+ (натуральные киллеры) (Стефани Д.В. с соавт., 1996). Для приготовления клеточной суспензии использовали методику описанную А. Воушп (1968). Учет результатов проводили на проточном цитофлюори-метре FACScan фирмы "Becton Dickinson".

В экспериментальных условиях были использованы белые беспородные крысы-самки. Состояние гипоксии моделировали ежедневным 4-х часовым пребыванием самок в барокамере СБК-48 (высота 9000 м, парциальное давление кислорода 42 мм. рт. ст.) с 14-го по 19-й день беременности.

Первый день беременности устанавливали на основании обнаружения смерматозоидов в вагинальном мазке нормально циркулирующих самок в соответствии с рекомендациями И.П.Западнюкссоавт., (1978).

Всего в эксперименте было использовано потомство от 72 самок, общим количеством 397, которое было распределено по следующим экспериментальным группам. I -ая гр. - интазегный контроль; 2-ая ip. - крысята,

перенесшие внутриутробную гипоксию; 3-я гр. - крысята - потомство самок, получавших ПМГ на фоне адекватного кислородного обеспечения; 4-ая гр. -крысята - потомство самок, получавших ПМГ на фоне гипоксии. Крысят забивали посредством быстрой декапитации на 5-е сутки после рождения.

В нашем исследовании в качестве средства для коррекции постгипок-сических нарушений у потомства был выбран неопиатный пептид с условным названием "пептидный морфоген головы гидры".

Данное вещество было синтезировано в лаборатории синтеза пептидов ВКНЦ РАМН. Вещество растворяли в изотоническом растворе хлорида натрия и вводили внутрибрюшинно из расчета 10 мкг на гр. массьг самок. Самки получали пептид ежедневно в течение 6-ти дней с 14-го по 19-й день беременности за 30 минут до помещения в барокамеру.

Интактным самкам и самкам, подвергшимся гипоксии без коррекции пептида, внутрибрюшинно вводили эквиобъемное количество изотонического раствора хлорида натрия.

Для изучения процессов пролиферации использовали изотоп ЗН-ти-мидин, который вводили новорожденным крысятам внутрибрюшинно за час до эвтаназии из расчета 1 мкКзори на 1 кг массы (удельная активность 84 Кюри/мм о ль).

Изготовление радиоавтографов осуществляли по общепринятой методике (Епифанова О.И. с соавт., 1977). Меченные ядра подсчитывали после просмотра не менее 2500 ядер на срезах. Индекс меченых ядер (ИМЯ) выражали в процентах. О скорости синтеза ДНК сущит на основании интенсивности метки (ИМ) - показателя количества зерен серебра над ядром.

Для морфометрического изучения ткани препараты окрашивали гематоксилин-эозином, определяли соотношение коркового и мозгового вещества тимуса и подсчитывали количество клеток в 15-ти полях зрения с трех срезов от каждого новорожденного с определением доли каждого вида клеток (малые, средние, большие лимфоциты). Для изучения влияния гипоксии на течение беременности был определен "процент донашивания беременности", который высчитывался как отношение от общего количества самок, вступивших в беременность (принятое за 100%), к количеству самок, чья беременность завершилась родами. Для подсчета процента лимфоцитов пери-

ферической крови мазки окрашивали по Май-Грюнвальду (Тур А.Ю., 1963) Для измерения структурных единиц тимуса, лимфоцитов периферической крови пользовались винтовым окуляр-микрометром при объективе * 10, * 90.

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Нами на базе Клиники института охраны материнства и детства СО РАМН (главный врач И.А. Баглай) было обследовано 65 женщин с разнообразной патологией, отягощающей течение их беременности. В группу контроля вошли 22 женщины с минимальными факторами риска.

При анализе процентного распределения показателей по таблицы Ф. Ариас (1989) было показано, что у женщин с высокими факторами риска (2-я и 3-я гр.) резко возрастает процент экстрагениталыюй пато-лопш: увеличивается доля хронических заболеваний почек (ХЗП) и про-цент анемий по сравнению с группой контроля.

Женщины 2-ой и 3-ей групп имели отягощенный акушерский анамнез (ОАА) в виде привычного невынашивания беременности (ПНБ). Процент данной патологии составил 32.4±7.7% и 19.2+7.7%

Во 2-ой и 3-ей группах женщин с высокими факторами риска, с наличием (3-ая группа) или отсутствием (2-я группа) пренатальной гипоксии у плода, определялась такая патология развития плода как задержка внутриутробного развития (ЗВУР - симметричные формы, в дальнейшем просто ЗВУР) в 8.10±4.5 и 7.7±5.2 процентах случаев, в то время как, в 1-ой группе такой патологии выявлено не было. Течение беременности у женщин 2-ой и 3-ей групп носило осложненный характер в виде гипертензнии и миогово-дия. Первый вид патологии - гипертензия, отсутствовал в группе у женщин с минимальными факторами риска, а процент многоводия превышал искомое значение в 1-ой группе женщин в 3.5 и 1.7 раза соответственно.

Анализ процентного распределения по физическому развитию и первичных асфиксий (в дальнейшем просто асфиксия) новорожденных детей, показал, что с увеличением баллового риска и его сочетания с гипоксией происходит увеличение доли маловесных детей, увеличивается процент нарушений физического развития.

Если в 1 -ой группе процент детей, соответствующих по физическому развитию сроку гестации, составил 77.3±8.9% (17 чел.), то во 2-ой и 3-ей -70.3±7.5% (26 чел.) и 33.3+11.1% (6 чат.) соответственно. Процент нарушений физического развития в 1 -ой группе составил 22.7±8.9% (5 чел.), а во - 2-ой и 3-ей гр. - 29.7+7.5% (11 чел.) и 66.7±11.1% (12 чел) соответственно.

Причем, если в 1-ой группе данные нарушения были представлены в основном пренатальной гипотрофией (асимметричные формы ЗВУР, в дальнейшем просто пренатальная гипотрофия) 1-ой степени 18.2+8.2% (4 чел) и 2-ой степени - 4.5±4.4% (1 чел), то во 2-ой группе процент пренатальной гипотрофии 1-ой степени составил - 8.1+4.5% (3 чел.), 2-ой степени - 8.1+4.5% (3 чел.), 3-ей степени - 5.4±3.8% (2 чел.). В данной группе возросло число новорожденных детей с более глубокой задержкой развития, процент ЗВУР здесь составил 8.1 +4.8% (3 чел.).

Самый высокий процент нарушений физического развития имели новорожденные дети в 3-ей группе - 66.7+11.1% (12 чел). Распределение по степеням пренатальной гипотрофии были следующие: пренатальная гипотрофия 1-ой степени встречалась в 38.8+11.5% (7 чел.), 2-ой степени - 16.7+8.8% (3 чел). ЗВУР составил 11.1+7.4% (2 чел.).

Аналогичную тенденцию имел и процент асфиксии в исследуемых группах. В 1-ой группе он составил 36.4±10.2% (8 чел.), во 2-ой группе -75.7+7.1% (28 чел.), в 3-ей группе 83.3+8.8% (15 чел.).

Таким образом, анализ клинических показателей показал, что такое осложнение у плода (новорожденного) как пренатальная гипоксия тссно связано с отягощенным анамнезом у матери. Именно в группе 3 высок процент женщин с экстрагенитальной патологией (ЭГП) и гипертензией. Это подтверждается и данными литературы о том, что доминирование этих факторов приводит к формированию и развитию хронической гипоксии плода (Малахова Е.И. с соавт., 1993; Горячев В.В., 1994).

Данные катамнеза, по состоянию здоровья детей из 2-ой и 3-ей групп, свидетельствуют о развитие у них иммунологической недостаточности, клиническими проявлениями которой, явились высокая частота инфекционной

патологии и аномалий конституции в виде эмхуцапвнокапральнсго диатеза.

При изучении показателей "белой" крови: абсолютного количества лейкоцитов, абсолютного и относительного количества лимфоцитов, была выявлена тенденция к уменьшению данных параметров в парах "мать-дитя" во 2-ой и 3-ей группах по сравнению с 1-ой группой.

Анализируемые показатели "белой крови" в парах "магь-дпя" ш 1-ой группы были сопоставимы с данными литературы (ОдаровНМ,ссоавг., 1982).

При обследовании новорожденных детей (Табл.1) из 1-ой группы было выявлено, что иммунофенотипическая характеристика лимфоцитов свидетельствует о том, что процентное содержание основных клонов иммуноком-петентных клеток (CD3+, CD4+, CD8+) соответствует данным литературы (Самохвалова А.В., 1987; Zola H., et al., 1983: Thomas R.M., et ai., 1984).

Таблица 1

Иммунофенотипическая характеристика Т-клеточного звена иммунитета в парах "мать-дитя" в зависимости ог факторов риска и наличия прсиаталыюп

гипоксии

ПОКАЗАТЕ- 0-2 балла 3-6 баллов

ЛИ гипоксия "-" гипоксия "-" гипоксия "+"

%) мать дитя мать дитя мать дитя

CD3+, (Т1) 43.65+ 2.07 46.81+ 2.93 36.12+ 0.86* 30.46± 2.13** 58.00± 0.43* 20.56+ 1.66**

CD25+, (Та) 6.64± 0.73 2.27± 0.16 7.96± 0.45 17.28+ 2.95** 8.30+ 0.36* 9.67+ 1.69**

CD4+, (Th) 32.05± 2.73 27.56± 1.36 22.24± 1.08* 18.80± 1.25** 56.00± 0.12* 13.86± 1.38**

CD8+ (Ts) 15.62+ 0.96 13.71± 1.15 12.16+ 0.88* 9.96± 0.56** 11.00± 0.21* 8.96± 0.92**

CD16+ (Nk) 1.81± 0.19 1.05± 0.09 7.18+ 0.30* 7.90± 0.72** 21.90± 2.13* 11.08± 2.25**

* - достоверно по отношению к группе женщин с минимальными факторами риска, при значении р<0.05

** - достоверно по отношению к группе детей с минимальными факторами риска, при значении р<0.05

Определение CD25+ клеток у детей в раннем неонатальном периоде в доступной нам литературе не обнаружено. В нашем исследовании процентное содержание данного маркера (CD25+) было крайне низким.

Имеющиеся в литературе данные по количеству натуральных киллеров, клеток, несущих маркер CD16+, у новорожденных детей однозначны, процент этих клеток иичножно мал и колеблется от 0.24 (Самохвалова А.В., 1987) до 0.77 (Стефани Д.В., с соавт., 1996).

Вероятно, низкий уровень CD25+ клеток, обусловленный "физиологическим" дефектом Т-клеточного звена иммунитета в силу развития плода в мйлоантигенных условиях, приводит, вторично, и к дефициту клеток цито-литического пула (CD 16+). Показатели Т-клеточного звена иммунитета у женщин 1-ой группе (минимальные факторы риска (0-2 балла)) соответствовали данным литература (Karla V.R.. et al., 1983; TrivediK., et al., 1983). Сообщений, посвященных изучению содержания CD25+ клеток у беременных женщин в третьем триместре, в доступной литературе мы не встретили. Процентное содержание этого клеточного маркера у здоровых людей колеблется в диапазоне от 6% до 13% (Стефани Д.В., с соавт., 1996). Полученные нами результаты, по процентному содержанию данного пула клеток, свидетельствует о том, что у беременных женщин с минимальными факторами риска уровень этих клеток находится на нижней границе нормы и составляет 6.64±0.73.Следует указать, что процентное содержание натуральных киллеров (CD16+) в парах "мать-дитя" из 1 -ой группы было сопоставимо друг с другом и практически не отличалось 1.05+0.09 у новорожденного ребенка и 1.81 ±0.19 у беременной женщины.

В периферической крови новорожденных из 2-ой группы процентное содержание CD3+, CD4+, CD8+ клеток было достоверно снижено по сравнению с контролем (1-я группа). Соотношение CD4+/CD8+ было равно 1.88+0.90, что указьваег в первую очередь на снижающийся супрессорный потенциал.

Процентное содержание CD25 и CD16 маркеров у новорожденных детей из данной группы превысило данные показатели в группе контроля в 7.61 и 7.52 раз. Данные изменения указывают на нарушения иммунного го-меостаза не только у ребенка, но и у матери.

Как видно из таблицы 1, у женщин из 2-ой группы происходит достоверное снижение CD3+, CD4+ и CD8+ клеток по сравнению с контролем. В результате уменьшения процентного содержания клеток хелперов происходит снижение IRI до 1.83 ±0.98.

В женщин данной группы (2-ая группа) происходит увеличение CD25+ клеток с одновременным повышением процентного содержания CD 16+ клеток.

Таким образом, динамика изменений основных клонов иммуноком-петентных клеток (CD3+, CD4+, CD8+) в этих парах была однонаправлена, происходило их снижение с одновременным увеличением таких клеточных маркеров, как CD25+и CD16+.

Совершенно иная ситуация наблюдалась в парах "мать-дитя" из 3-ей. группы. В периферической крови этих детей процентное содержание CD3+ клеток, а также процентное содержание основных субпопуля-ционных клонов (CD4, CD8), было достоверно ниже, чем в группе контроля. Соотношение клеток СГ34+/С08+ составило 1.54+0.75 против 2.01±0.59 в контроле. Достоверно было повышенным процентное содержание таких клеток как CD25+ и CD16+, что в 4.25 и 10.55 раз отличалось от группы сопоставления. Интересен тот факт, что у детей из 3-ен группы содержание CD25+ было достоверно сниженно, по сравнению с эквивалентным значением у детей из 2-ой группы, несмотря на это процентное содержание клеток киллеров было выше в 1.40 раза.

У беременных женщин 3 группы иммунологическая ситуация указывала на аутоиммунную перестройку в системе иммуногенеза. Здесь процентное содержание CD3+ и CD4+ клеток достоверно отличалось в сторону увеличения от группы контроля. Процент CD8+ клеток бьи достоверно ниже, чем в группе контроля. В результате выраженного субпопуляционного дисбаланса IRI, соотношение клеток хеяперного и супрессорного направления, составил 5.09+0.16. Достоверно увеличенным был процент активированных (CD25+) и цитолитических (CD 16+) клеток.

Особенностью этой пары явилось то, что иммунологические нарушения здесь носили разнонаправленный характер. Чем выше было процентное содержание таких клонов как CD3, CD4 CD25, в особенности CD16 у матери, тем ниже были эти показатели у новорожденного ребенка.

Таким образом, анализ изучаемых показателей в парах "мать-дитя" из 2-ой и 3-ей групп выявил изменения в сторону супрессии показателей "белой" крови и большинства показателей Т-клеточного звена иммунитета (СОЗ+, С04+, СВ8+) в парах «мать-дитя» 2-ой группы. Тем не менее, стоит отметить, что даже высокие факторы риска для новорожденного ребенка не вызывают столь выраженного угнетения основных клонов иммунокомпе-тентных клеток (СОЗ+, С04+, С08+), как их сочетание с внутриутробной гипоксией. Этот факт еще раз подтверждает универсальность действия гипоксии, как преломляющего фактора для любых дестабилизирующих влияний.

При анализе абсолютных (масса тела и масса тимуса) и относительной (масса тимуса) величин у новорожденных крысят из группы "Гипоксия" было выявлено их достоверное отличие в сторону снижения от группы контроля. Масса тела новорожденных крысят в данной группе составила 6.72+0.16 г., абсолютная масса тимуса - 10.4%Ю.55 мг, относительная - 1.45±0.05 мг/г., что в 1.2,1.3и 1.2раз отличалось от группы "Контроля" при р<0.С15.

Как видно из диаграммы, в группе "Гипоксия", показатели нролифе-ративной активности - ИМЯ и ИМ достоверно отличались в сторону снижения в 1.66, 1.77 и 1.44, 1.34 раза соответственно от группы интактного контроля.

Корковое вещество Мозговое вещество

Рис. Влияние ПМГ и внутриутробной гипоксии на процессы

клеточной пролиферации в тимусе новорожденных крысят

Как видно из таблицы 2, под влиянием внутриутробной гипоксии происходит достоверное уменьшение КМИ, что в 1.43 раза отличается от показателей интактного контроля. Процентное распределение лимфоцитов было также нарушено.

Таблица 2

Влияние ПМГ и внутриутробной гипоксии на гравиметрические показатели у новорожденных крысят.

Группа Масса тела, г. Абсолютная масса тимуса, мг Относительная масса тимуса, мг/г.

Контроль Гипоксия ПМГ ПМГ+Гипоксия 7.69+0.13 * 6.72+0.16 ** 7.82+0.09 ** 7.38+0.11 14.07Ю.54 * 10.44±0.55 ** 13.53+0.39** 12.65+0.44 1.80±0.05 1.45+0.05 ** 1.70+0.04 ** 1.70+0.05

* -р<0.05 по сравнению с контролем

** - р<0.05 по сравнению с группой "Гипоксия"

При анализе гравиметрических, показателей в группах "ПМГ", "ПМГ+Гипоксия", можно отметить, что ПМГ как на фоне адекватного кислородного обеспечения, так и на фоне кислородной недостаточности не приводит к их достоверным изменениям. В контроле эти значения составили: 7.69±0.13 г.; 14.07+0.54 мг.; 1.80±0.05 мг/г, в группах "ПМГ" и "ПМГ+Гипоксия" - 7.82±0.09 г. и 7.38+0.11 г; 13.53Ю.39 мг и 12.65+0.44 мг; 1.70+0.04 мг/г и 1.70+0.05 мг/г.

В то же время, все значения в группах "ПМГ" (кроме массы тела) и "ПМГ+Гипоксия" были недостоверно ниже по сравненшо с интакгным контролем, но достоверно выше, чем в группе "Гипоксия".

Полученные данные, особенно по уменьшению абсолютной и относительной масс тимуса, можно объяснить тем фактом, что в группах "ПМГ" и "ПМГ+Гипоксия" "процент донашивания" составил 100 и 73.68 процентов. В этих группах родилось максимальное количество потомства - 134 и 118 по сравнению с интакгным контролем (84) и группой "Гипоксия" (81).

Кроме того., в данных экспериментальных группах, где применяли ПМГ на фоне кислородной недостаточности и адекватного кислородного обеспечения, среднее количество особей в помете составило 8.42 и 8.38, в то время . как в группах "Контроль" и "Гипоксия" - 7.0 и 6.75.

Полученные нами экспериментальные данные согласуются с данными литературы о том, что с увеличением количества потомства идет перераспределение на уровне фетоплацентарной трансфузии и антропометрические показатели у новорожденных снижаются пропорционально увеличению количества особей в помехе (Западшок И.П. с соавт., 1974).

Таким образом, введение ПМГ на сроках 14-19 день беременности не оказывает существенного влияния на гравиметрические показатели, независимо от кислородного обеспечения эмбриогенеза. Достоверные изменения наблюдались лишь по отношению к группе "Гипоксия".

При анализе показателей клеточной пролиферации (Рис.) (ИМЯ, ИМ) в группе "ПМГ" было выявлено, что изучаемый пептид увеличивает ИМЯ в корковом и мозговом веществе в 1.73 и 1.48 раза соответственно по сравнению с контролем. ИМ достоверных различии не имела в сравнении с 1руппой контроля.

Введение ПМГ беременным самкам, на фоне гипоксии предотвращало ее отрицательное влияние на показатели пролиферации в корковом и мозговом веществе тимуса. Здесь ИМЯ составил 22.04+1.98 и 12.63±1.19 в корковом и мозговом веществе тимуса; ИМ - 16.91+0.20 и 15.91+0.26 соответственно. По сравнению с группой "Гипоксия" увеличение данных показателей произошло ИМЯ в 2.64 и 2.33 раза, а ИМ - в 1.48 и 1.45 раза соагвегст-венно.

При оценки влияния ПМГ на процентное содержание лимфоцитов в парах "самка-крысенок" (Табл.3) и морфометрические показатели (Табл. 2) в корковом веществе тимуса было показано, что исследуемый пептид приводит к достоверному увеличению процента лимфоцитов периферической крови как у новорожденного, так и у самки, что превышало искомые показатели в контроле в 1.24 и 1.23 раза соответственно. В группе, где введение ПМГ производили на фоне гипоксии, процентное содержание лимфоцитов приближалось к контролю и достоверно не отличалось от него.

При анализе клеточного распределения в корковом веществе тимуса, было выявлено, что наиболее высокими были цифры в группе "ПМГ".

В группе "ПМГ+Гипоксия" эти значения занимали промежуточное место. Аналогичную тенденцию имел и корково-мозговой индекс.

Таблица 3

Влияние ПМГ и пренатальной гипоксии процентное распределение лимфоцитов в парах "самка-крысенок"

Контроль Гипоксия ПМГ ПМГ + Гипоксия

самка крысенок самка крысенок самка крысенок самка крысенок

70.85+ 1.07 72.44+ 0.79 63.71+ 2.23* 60.68+ 0.48* 87.28± 0.83* 90.15± 1.83* 74.71 + 1.42 74.51± 0.74

* - достоверно по отношению к контролю при р<0.05

Таким образом, ПМГ, нормализуя показатели клеточной пролиферации в тимусе в условиях гипоксии у новорожденных крысят, выравнивает й процентное содержание лимфоцитов периферической крови как у новорожденного потомства, так и у самок, что связано с его определенным влиянием на рецепторные структуры иммунокомпетентных клеток, вероятно, через систему циклических нуклеотидов.

Антенатальный дефект Т-клеточной системы иммуногенеза является основой для развития вторичной иммунологической недостаточности у детей на первом году жизни. Клиническими проявлениями данных нарушений, у детей 2-ой и 3-ей групп, являются высокая частота инфекционной патологии и аномалий конституции в виде экссудативно-катарального диатеза.

Делая заключение, надо подчеркнуть тесную взаимосвязь между влиянием внутриутробной гипоксии и нарушениями в системе иммуногенеза как на клиническом, так и на экспериментальном уровне и высокую эффективность ПМГ в нивелировке данных постгипоксических нарушений.

АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИКИ И КОРРЕКЦИИ ПОСТГИПОКСИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ Т-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНОГЕНЕЗА У ПОТОМСТВА

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Использовать разработанный алгоритм диагностики антенатально сформированных ИДС у детей в практической деятельности врачей -акушеров и перинатологов.

2. Дети от женщин с высокими факторами риска по таблицы Ф. Ариас (1989) должны подлежать диспансерному наблюдению с обязательным иммунологическим мониторингом в основные эпикризные сроки: 1, б и 12 мес

3. ПМГ можно рекомендовать для клинического эксперимента с целью профилактики и коррекции ИДС у данного контингента детей.

ВЫВОДЫ

1. Клиннко-иммунологические сопоставления в системе "мать-дитя" выявили наличие иммунологического дисбаланса у беременных женщин из групп риска по перинатальной патологии, который приводит к формированию антенатального дефекта у плода (новорожденного) в системе Т-клеточного звена иммунитета.

2. Клиническими проявлениями у беременных женщин из групп высокого риска по развитию перинатальной патологии является значительная распространенность таких осложнений беременности, как анемии (в 1.6 и 1.5 раз чаще) и ОГ-гесгозов (в 18.9 и 19.2 раз чаще).

3. У детей, родившихся от женщин из групп высокого риска по развитию перинатальной патологии и перенесших внутриутробную гипоксию плода, клиническими проявлениями является значительная частота пренатальных гипотрофий (в 1.3 и 2.9 раза превышающие контроль), задержки внутриутробного развития плода по гипо- и диспласическому типам (в 8.1 и 11.1 раз чаще), асфиксии (в 2.0 и 2.3 раза чаще).

4. В условиях высоких факторов риска у женщин происходят нарушения в системе Т-клеточного звена иммунитета, степень выраженности которых сопряжена с гипоксическим фактором и варьирует от иммуноде-фицитного со снижением процентного содержания СОЗ+, С04+, СО8+ клеток до аутоиммунного с увеличением процентного содержания СОЗ+ и СБ4+ клеток, снижением С08+ клеток.

5. У новорожденных детей, родившихся от женщин с высокими факторами риска по развитию перинатальной патологии, особенно в условиях пре-натальной гипоксии, формируется иммунодефицигное состояние Т-клеточной линии иммунитета со снижением СБ4+ и С08+ клеток на фоне общего снижения СОЗ+ клеток.

6. Выявленные клинико-иммунологические особенности свидетельствуют об иммуноцитотоксическом действии иммунокомпетентных клеток (С025+, СО 16+) матери на иммунную систему плода и новорожденного.

7. Введение ПМГ беременным крысам-самкам на фоне гипоксии ни-велируег постгипоксические нарушения процессов пролиферации тимоцитов у новорожденных крысят и распределение лимфоцитов периферической крови в парах «самка-крысенок». ПМГ оказывает положительное влияние на течение беременности, как в условиях адекватного кислородного обеспечения, так и при его нарушениях, увеличивая «процент донашивания беременности» до 100 и 73.89 процентов.

1

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ. !

1. Влияние факторов риска во время беременности на показатели Т-клеточного звена иммунитета, естественной цитотоксичности в парах "мать-дитя" /Ганьчсва Е.А., Боровская Т.Ф., Козлов В.К., Тимошин С.С. и др., // Здоровье населения Дальнего Востока. Региональная ассамблея: Тез. докл. / Под ред. Ю. В. Каминского. - Владивосток: Уссури, 1996. -С. 73-74.

2. Ганьчева Е.А., Козлов В.К., Тимошин С.С., Боровская Т.Ф. Влияние пре-

натальной гипоксии на становление Т- клеточного звена иммунитета у новорожденных детей. Возможные методы коррекции // Дальневосточный медицинский журнал (приложение). - 1997. - N 2. - С. 42-44.

3. Особенности количественных параметров иммунной системы новорожден-

ных от женщин с синдромом фетоплацентарной недостаточность /Боровская Т.Ф., Ганьчева Е.А., Козлов В.К. и др. //Дальневосточный медицинский журнал. -1997. -И 2. - С. 47-49.

4. Иммунологические взаимоотношения в системе мать-плацента-плод в норме и различных патологических состояниях. - /Ганьчева Е.А., Боровская Т.Ф., Когут Е.П., Козлов В.К., Гайдуль К.В. // Дальневосточный медицинский журнал. -1997. - N 2. - С. 100-106.

5. Ганьчева Е.А., Козлов В.К., Тимошин С.С. Влияние пептидного морфогена

гидры на процессы клеточной пролиферации в тимусе новорожденных крысят, подвергнутых иренатальной гипоксии /Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1997. - т. 124. - N 9. - С. 348-350.

6. Особенности клеточного звена иммунитета у женщин с синдромом фетоп-

дацентарной недостаточности /Боровская Т.Ф.. Ганьчева Е.А., Панькова Т.Д., Ефименко М.В. и др. // Актуальные вопросы организации системы охраны здоровья матери и ребенка на Дальнем Востоке: Тез. докл. региональной науч.-ирактич. конф. - Биробиджан, 1996. - - О. 22-23.

7. Показатели клеточного звена иммунитета у новорожден- ных от женщин с

синдромом фегоплацешарной недостаточности /Ганьчева Е.А., Козлов В.К., Боровская Т.Д.. Панькова Т.Д., и др. // Актуальные вопросы организации системы охраны здоровья матери и ребенка на Дальнем Востоке: Тез. докл. региональной науч.-практич. конф. - Биробиджан, 1996. - С. 37-38.