Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Клинико-иммунологическая характеристика новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития и влияние плацентарных белков на субпопуляции лимфоцитов

На правах рукописи

ЛЮБИМЦЕ В А Татьяна Валентиновна

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОРОЖДЕННЫХ С СИНДРОМОМ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ И ВЛИЯНИЕ ПЛАЦЕНТАРНЫХ БЕЛКОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ

14.00.09 - педиатрия

Автореферат диссертации на соисканиеученой степени кандидата медицинских наук

Иваново 2004

Работа выполнена в ГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова» МЗ РФ.

Научный руководитель

доктор медицинских наук,

профессор Кузнецова Валентина Александровна

Научный консультант

доктор медицинских наук,

профессор Сотникова Наталья Юрьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Чемоданов Вадим Владимирович

кандидат медицинских наук Москвина Любовь Петровна

Ведущее учреждение - Научный центр здоровья детей РАМН

Защита диссертации состоится «_» сентября 2004 года в часов

на заседании диссертационного совета Д 208.027.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 153012, г. Иваново, пр. Ф. Энгельса, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ИвГМА Минздрава России.

Автореферат разослан «_» августа 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Жданова Л.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность научного исследования

Задержка внутриутробного роста и развития относится к наиболее частым причинам перинатальной заболеваемости и смертности новорожденных. Эго определяет не только медицинскую, но и социальную значимость проблемы. (Smyth V. et al, 1994; Shah P.M., 1994; Stratton J.F.et al, 1995; Шабалов Н.П.. 1997; Медведев М.В, Юдина Е.В., 1998; Потапов В .А, Пинский Е.В, 1999).

Частота распространения данной патологии среди новорожденных, по данным различных авторов, составляет от 2,4 до 17,6% (Бунин А.Т., Федорова М.В., 1988; Вихляева Е.М., Ходжаева С.З., Бунин А.Т., 1985; Baumgarten К., DumontM.et al, 1985).Это связано как с учащением этой патологии, так и с улучшением антенатальной диагностики (Демидов В.Н., Розенфельд Б.Е., 1996; Sanderson D.A., Willcos M.A. et al, 1994), а также с неблагоприятными социально-экономическими условиями в стране (Чернышев В.Н., Козырева Т.Е., 1998).

В настоящее время установлено, что в патогенезе синдрома задержки внутриутробного развития плода ведущая роль принадлежит нарушению ма-точно-плацентарного кровообращения и морфофункциональным изменениям в плаценте вследствие экстрагенитальной патологии и инфекции у матерей (Потапов В.А., 1999; Черданцев A.M., Литвинова A.M. и соавт., 2000). Все это приводит к гипоксии и каскаду метаболических и функциональных нарушении у плода (Стрижаков А.Н., Михайленко Е.Т., Бунин А.Т. с соавт., 1988; Кузнецова В.А., 1992; Басаргина Т.В., 2002; Ароян ГЦ., 2002).

Несмотря на значительное число исследований по этой проблеме, MHOI ие вопросы, касающиеся клинико-иммунологических особенностей течения не-онатального периода и состояния здоровья этих детей остаются до конца ие выясненными. Принимая во внимание, что наиболее важными системами, регулирующими адаптационные реакции организма, являются иммунная, эндокринная и нервная системы, представляет интерес исследование состояния иммунного статуса в динамике неонатального периода.

У детей, развивавшихся в условиях хронической внутриутробной гипоксии, происходит акцидентальная инволюция тимуса (Назаренко Л.Г., Антиисн-скаяЛ.В., 1992), сопровождающаяся блокадой ферментов, ответственных за синтез тимозина, что приводит к снижению активности как клеточного, так и гуморального иммунитета. Однако при задержке внутриутробного развития, сопровождающейся гипоксией, подобные исследования не проводились.

Формирование здоровья ребенка, полноценность его развития, способность адекватно реагировать на внешнее и внутреннее воздействие во многом зависят от структуры и функции поверхностного фенотипа лимфоцитов (Кору-линаМ.В., Посисеева Л.В., Бабакова Л.А. с соавт., 2000). Исходя из этого, представляется важным исследование функций этих клеток в первый месяц жизни, наиболее ответственный для здоровья детей в последующем периоде

жизни, наиболее ответственный для здоровья детей в последующем периоде жизни. Это позволит не только оценить иммунный статус ребенка, но и прогнозировать течение заболеваний.

В последние годы интерес исследователей привлекают специфические и нсспсцифичсскис белки репродуктивной системы человека трофобластический П-гликопротеин (ТБГ) и альфа-2 микроглобулин фертильности (АМГФ) (Поси-сесваЛ.В., 1990,1991, Борзова Н.Ю., 1989, Бойко Е.Л., 1993).

Установлено, что дети с задержкой внутриутробного развития рождаются у матерей, которые во время беременности имели низкое содержание ТБГ в периферической крови (Посисеева Л.В., Шульпина Е.Ю., Панова И.А., 1995).

Исследованиями Филиновой Н.Ю. (2000) доказана роль ТБГ и АМГФ в патогенезе задержки внутриутробного развития плода, заключающаяся в регуляции процессов активации лимфоцитов на локальном уровне. Однако влияние этих белков на поверхностный фенотип лимфоцитов у детей с задержкой внутриутробного развития не установлено.

Наряду с этим при задержке внутриутробного развития у новорожденных не выявлена взаимосвязь поверхностного фенотипа лимфоцитов с гормонами -СТГ, ТТГ, кортизола, регулирующими пролиферацию и функциональную активность лимфоцитов.

Таким образом, многофакторность этиологии и патогенеза этого синдрома определяющая большую частоту и сложность этой патологии требуют от практического врача научно обоснованной тактики ведения внутриутробного и пстнатального периодов развития ребенка (Кузнецова В.А., 1989).

Цель научного исследования

Выявить особенности поверхностного фенотипа лимфоцитов, установить их взаимосвязь с биохимическими нарушениями, оценить влияние трофобла-стичоского (3-гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности in vitro на субпопуляции лимфоцитов крови и разработать критерии оценки иммунного статуса у новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития в неонатальном периоде.

Задачи исследования

1.Дать клиническую характеристику новорожденным с синдромом задержки внутриутробного развития, установить взаимосвязь клинических нарушений с изменением иммунологических и биохимических показателей, разработать критерии для оценки иммунного статуса детей в неонатальном периоде.

2.Установить особенности иммунного статуса у доношенных новорожденных с симметричной и асимметричной формами задержки внутриутробного

развития на 4-10 сутки жизни на основании исследования поверхностного фенотипа лимфоцитов в периферической крови.

3.Выявить изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов в крови но ворожденных с данной патологией под влиянием трофобластического Р глико-протеина и альфа-2 микроглобулина фертильности in vitro на 4-10 сутки жизни.

4.Исследовать концентрацию лактата, глюкозы, малонового диальдегида, соматотропного, тиреотропного гормонов, кортизола в крови новорожденных и установить взаимосвязь с изменением иммунного статуса для выявления механизмов его нарушения.

Научная новизна исследования

• Установлено, что клинические проявления задержки внутриутробного развития сопровождаются изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления липидов, снижением концентрации гормонов - соматотропного, тиреотропного, кортизола.

• Уточнены патогенетические механизмы формирования задержки внутриутробного развития у доношенных новорожденных.

• Доказана роль нарушений иммунного статуса в генезе задержки внутриутробного развития.

• Выявлены особенности поверхностного фенотипа лимфоцитов периферической крови у доношенных новорожденных с различными формами задержки внутриутробного развития.

• Определена динамика изменений поверхностного фенотипа лимфоцитов периферической крови и их особенности у новорожденных с симметричной и асимметричной формами задержки внутриутробного развития на 410 сутки жизни.

• Выявлена взаимосвязь между изменением иммунного статуса, гормональными и метаболическими показателями при синдроме задержки внутриутробного развития.

• Расширены представления о функциональном состоянии трофобластического Р гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности и их влиянии на поверхностный фенотип лимфоцитов крови доношенных новорожденных.

• Доказано нормализующее влияние трофобластического Р гликопротеина и альфа-2 микроглобулина in vitro на поверхностный фенотип лимфоцитов крови доношенных новорожденных на 10 сутки жизни, у детей с синдромом задержки внутриутробного развития в раннем неонатальном периоде.

Практическая значимость работы

Установлены нормативные значения и динамика изменений показателей поверхностного фенотипа лимфоцитов доношенных новорожденных в неонатальном периоде (4-10 сутки жизни).

Предложены объективные критерии нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития на 4-10 сутки жизни.

Апробация и внедрение результатов исследования в практику

Выявленные критерии, позволяющие диагностировать иммунологические и метаболические нарушения у новорожденных с задержкой внутриутробного развития, внедрены в практику работы детского обсервационного отделения стационар-клиники ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» МЗ РФ (акт внедрения от 10.11.1999г).

Материалы диссертации доложены и обсуждены на второй и третьей Международных конференциях «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва 2001, 2002гг.), итоговой научной сессии ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова», Иваново, 2002г., на республиканских конференциях «Современные технологии в акушерстве и гинекологии», Челябинск, 2001; «Биохимические критерии оценки состояния новорожденных», Владимир, 2001г.

Апробация работы проведена на совместной научно-практической конференции сотрудников ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» МЗ РФ и ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Результаты проведенных исследований вошли в состав пособия для врачей «Определение содержания малонового диальдегида в пуповинной крови у новорожденных детей - как дополнительный метод для выявления внутриутробных инфекций» на уровне Министерства Здравоохранения Российской Федерации, утвержденного секцией по педиатрии МЗ РФ, протокол №6 от 13.12.01.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы, получено авторское свидетельство №1455310 от 01.10.1989г «Способ диагностики дисфункции коры надпочечников у новорожденных детей» и положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ прогнозирования инфекционных заболеваний новорожденных» от 02.04 2004г. по заявке № 2002119497.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего отечественных б е ж н ы х источника. Текст иллюстрирован рисунками и

JL0 таблицами.

Положения, выносимые на защиту

1. Клиническое состояние новорожденных с задержкой внутриутробного развития в неонатальном периоде сочетается с изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления ли-пидов, снижением концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов и кортизола.

2. Изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов доношенных новорожденных с задержкой внутриутробного развития и влияние трофобластиче-ского Р-гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности in vitro зависят от формы задержки и дня жизни неонатального периода.

ОРГАНИЗАЦИЯ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

' Исследования-выполнены на базе Государственного учреждения «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Министерства здравоохранения Российской Федерации», в детском обсервационном отделении стационар-клиники в рамках договора 015/003/002 «Разработка новых технологий прогнозирования, диагностики, профилактики и коррекции нарушений здоровья детей, родившихся у женщин из группы высокого риска перинатальной патологии».

Комплексно обследовано 100 доношенных новорожденных в сроке геста-ции 38-40 недель. В соответствии с поставленной целью дети были разделены на две группы: I группа (контрольная) — 30 здоровых доношенных новорожденных, 11 группа (исследуемая)— 100 доношенных новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития, с симметричной и асимметричной формой. Новорожденные были обследованы на 4 и 10 сутки жизни.

В работе использовались клинические, функциональные, лабораторные, иммунологические, биохимические методы исследования.

На каждого ребенка заполнялась специально разработанная карта «История развития новорожденного», включающая данные перинатального анамнеза новорожденною, результаты клинического, неврологического и нейросоногра-фического обследования, данные биохимических, гормональных и иммунологических исследований.

Диагноз задержки внутриутробного развития ставился на основании данных комплексного обследования клинико-неврологического, нейро-физиоло-гического, лабораторного, специальных биохимических и иммунологических методов исследования и анамнестических данных матери.

Клиннко-функциональные методы исследования

Состояние детей при рождении оценивали по шкале Лпгар на первой и пятой минутах жизни, включающей определение окраски кожных покровов, мышечного тонуса, рефлекторной возбудимости, частоты сердечных сокращений и дыхания.

Физическое развитие новорожденных оценивалось на основании полученных антропометрических данных: массы и длины тела, окружности головы, грудной клетки, живота.

Для оценки степени тяжести задержки внутриутробного развития рассчитывался массо-ростовой коэффициент.

Полученные результаты сопоставлялись с данными региональных таблиц центильного типа, представленных в информационно-методических материалах «Комплексная оценка здоровья детей» (под ред. А.И. Рывкина, 1995).

Для характеристики гармоничности развития определялось соотношение массы и длины тела, использовалась индексная форма оценки с вычислением индекса стении.

Оценка неврологического статуса проводилась по схеме, предложенной Ю.М. Барашневым (1982): учитывался общий вид новорожденного, поза и поведение, мышечный тонус, сухожильные и кожные рефлексы (характер, продолжительность, быстрота угасания, симметричность, сила ответа), а также безусловные рефлексы (хватательный, сосательный, ладонно-ротовой, опоры, автоматической ходьбы).

Ультразвуковое сканирование головного мозга (нейросонография) проводилось в установленные дни жизни ребенка согласно методике В.В. Гаврюшова (1990) с помощью прибора «Алока-2000», оснащенного датчиком секторального сканирования с частотой 5Мгц, работающего в режиме реального времени, во фронтальной и сагиттальной плоскостях через большой родничок наклоном и поворотом датчика в стандартных сечениях.

Лабораторные методы исследования

В периферической крови новорожденных определялось содержание:

молочной кислоты — на приборе «Accusport» («Boehrjnger Mannheim»,

Германия);

глюкозы — наборами «Biocon» (Германия);

малонового диальдегида — по методу К. Jagi et al, 1968.

Для оценки состояния гипофизарно-надпочечниковой системы у новорожденных исследовался уровень СТГ, ТТГ, кортизола в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа наборами «Delfia» фирмы «WALLAC», Финляндия.

Общий анализ крови с подсчетом количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, лейкоцитарной формулы проводился на гематологическом анализаторе «Vega» фирмы «La Roshe».

Иммунологические методы

При оценке экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитов периферической крови использовали метод проточной цитометрии на приборе FACScan («Bccton Dickinson», USA). Для неспецифического окрашивания лимфоцитов применялся Simultest Control (мышиные IgGl-FITC + IgG2a-PE) («Becton Dickinson», USA). Лейкоциты метили анти-Hle-l (FITC) и анти-Ьеи-МЗ (РЕ) -антителами с целью наложения оптимального окна дискриминации (гейта) для лимфоцитов на графике прямого и бокового светорассеяния, которое включало более 95% клеток с фенотипом CD45+CD14-.

В качестве флюорохромной метки использовали флюоресцеин изотио-ционат (F1TC) фирмы «Мед БиоСпектр» (Москва). Анализ результатов проводили в программе «LYSYS II».

Для фенотипирования лимфоцитов периферической крови использовали следующие моноклональные антитела: airra-CD3, airm-CD4, анти-СО8, анти-CD16, airra-CD22, анти-СО25, анти-HLA-DR, коныогированные с FITC.

Для исследования влияния ТБГ и АМГФ на экспрессию поверхностных маркеров клеток в эксперименте лимфоциты инкубировали с моноклональными антителами анти-СОЗ, анти-СО4, aimi-CD8, анти-СО16, aimi-CD22, анти-CD25, анти-HLA-DR, конъюгированных с FITC и оценивали экспрессию поверхностных маркеров на проточном цитометре в лимфоцитарном гейте.

Кровь на исследование забиралась на 4 и 10 сутки жизни ребенка с учетом биологических ритмов в одно и то же время до кормления перед проведением терапевтических мероприятий»

Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с использованием методов математической статистики на персональном компьютере IBMPC с помощью пакета прикладных программ (по методике С. Гланц, 1999).

Результаты исследований и их обсуждение

Ретроспективный анализ анамнестических данных показал, что наиболее важными факторами, повлиявшими на, формирование синдрома задержки внутриутробно по развития у обследованных нами женщин, явились: низкий материальный уровень в семье, соматические и инфекционные заболевания матери во

время беременности: анемия — в 56% случаев, хронический пиелонефрит — в 29%, вегето-сосудистая дистония — в 16%, гиперплазия щитовидной железы — в 9%, варикозная болезнь — в 7%, ОРВИ — в 30%, кольпит — в 42% и осложнение настоящей беременности внутриутробной гипоксией плода — в 68% случаев, нефропатией — в 26%, многоводием — в 24% и дородовым излитием околоплодных вод — у 21% женщин.

Состояние детей при рождении оценивалось по шкале Апгар на первой и пятой минутах жизни. В исследуемой группе она была достоверно ниже по сравнению со здоровыми детьми: 8-9 баллов имели 42% детей, 7 баллов — 51 ребенок (51%), 6 баллов — 5 детей (5%), менее 6 баллов — 2 человека (2%). В контрольной группе у 86,7% новорожденных оценка по Апгар составила 8-9 баллов, у 10% — 7 баллов, у 3,3% — 6 баллов. Неблагоприятное течение беременности и родов привело к тому, что в удовлетворительном состоянии родились лишь 39% новорожденных с задержкой развития. Среднетяжелое состояние отмечалось в 61% случаев.

При оценке физического развития выявлено, что средний показатель массы тела у новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития оказался достоверно ниже по сравнению с контрольной группой (р<0,001) и составил 2531 ± 43,4 г, тогда как в первой группе — 3353 ± 121 г, длины тела — 48,5 ± 0,23 см и 52,5 ± 0,8 см, окружности головы — 33,1 ± 0,18 см и 35,7 ±0,4 см, окружности груди — 31,0 ±0,25 см и 32,2 ±0,6 см, окружности живота — 28,8 ± 0,23 см и 32,3 ± 0,2 см соответственно группам. В соответствии с этим средняя величина массо-ростового коэффициента была достоверно ниже по сравнению со здоровыми новорожденными, что свидетельствовало о задержке внутриутробного развития. Умеренная долихоморфия, которая является клинической реализацией нарушения пластических процессов на антенатальном этапе, отмечена в 87% случаев.

Максимальное снижение убыли массы тела у новорожденных с задержкой внутриутробного развития было более медленным и произошло на 7 день жизни. Так, средний показатель массы тела у этих детей к середине второй недели снизился на 11 % по сравнению с исходным и составил 2224,1 ± 2,6 г. Нарастание массы тела шло более медленно и к 10 дню жизни восстановления исходной массы отмечалось лишь у 13% детей, что свидетельствовало о замедлении процессов адаптации к внеутробной жизни.

Течение раннего неонатального периода у этих детей осложнилось наличием сопутствующих заболеваний, таких как конъюгационная желтуха— 11 человек (11%), кардиопатия — у 5 детей (5%), морфо-функциональная незрелость выявлена в 2% случаев (2 ребенка), в 3% (3 ребенка)—субэпендималь-ные кровоизлияния и у одного ребенка (1%) был выявлен врожденный везику-лопустулез. В контрольной группе вышеперечисленные сопутствующие заболевания отмечались в единичных случаях.

Нарушения в неврологическом статусе у детей исследуемой группы проявилось мышечной гипотонией в 71% случаев, изменением двигательной активности в виде ее снижения — в 51% и повышения — в 24%, ослабление физиологических рефлексов — в 60%, наличие глазной симптоматики — косоглазие и нистагм — в 3% и 3% соответственно, тремор конечностей и подбородка — в 60%. В контрольной группе вышеперечисленные отклонения в неврологическом статусе отмечались значительно реже и составили соответственно 13,3%; 3,3%; 13,3%; 13,3%; 3,3%; 3,3%; 20%.

Ведущим неврологическим синдромом у детей с задержкой внутриутробного развития явился гипертензивный синдром, который составил 63%, в 3% случаев выявлен синдром угнетения.

Таким образом, у детей с задержкой внутриутробного развития отмечалось отставание в физическом развитии, преобладала умеренная долихомор-фия. Неонатальный период осложнился более выраженной транзиторной потерей массы тела и медленным ее восстановлением, а также наличием сопутствующих заболеваний: конъюгационной желтухи, кардиопатии, морфо-функциональной незрелости, преобладанием в неврологической симптоматике гипертензивного синдрома, обусловленного гипоксически-ишемическим повреждением центральной нервной системы.

Сопоставительный анализ анамнестических и клинических данных дал основание сделать заключение о том, что задержка внутриутробного развития формировалась на антенатальном этапе в результате воздействия многих факторов, в частности неблагоприятных социальных условий, осложненным течением беременности и наличием экстрагенитальной патологии матери. Неполноценное питание привело к нарушению трофики плода и отставанию в физическом развитии после рождения.

Для выявления нарушений в иммунном статусе у детей с синдромом задержки внутриутробного развития нами были установлены нормативные значения содержания основных субпопуляций лимфоцитов и параметры их активации в неонатальном периоде (4-10 сутки жизни) у здоровых новорожденных.

Так, на 4 сутки жизни в среднем уровень Т-лимфоцитов (СБ3+) составил 66-72%, В-лимфоцитов (СБ22+) — 10-13%, естественных киллеров (СБ 16+) — 7,0-8,0%, Т-хелперов (СБ4+) — 48-54%, цитотоксических Т-лимфоцитов (СБ8+) — 15,0-17,0%, при этом соотношение СБ4/СБ8 клеток было равно 3,04,0. Параметры ранней активации (СБ25+) соответствовали 7,0-9,0%, поздней (ИЬЛ/БЯ+)—10-12%.

К десятым суткам жизни отмечалось изменение ряда иммунологических показателей по сравнению с их исходным уровнем. Эти изменения касались в большей степени показателей Т-звсна иммунной системы, в частности СБЗ+ клеток, содержание которых увеличилось с

(р < 0,001). Как показали проведенные исследования, это увеличение происходило в основном за счет субпопуляции Т-хелперов (СБ4+). Так, если содержа-

ние СБ4+ на 4 день жизни составило 51,4 ± 3,2%, то к десятому дню жизни оно увеличилось до 60,4 ±2,1% (р < 0,02). Увеличение содержания CD4+ лимфоцитов при стабильном показателе уровня CD8+ клеток привело к возрастанию иммунорегуляторного индекса (ИРИ) на 11%, однако эти изменения не являлись достоверными (р > 0,05). Следует отметить, что количество клеток с цито-токсической активностью (CD8+, CD 16+) в динамике неонатального периода существенно не менялось (р > 0,05).

Можно полагать, что такая динамика показателей Т-клеточного звена иммунитета является отражением процессов мобилизации иммунной системы в ответ на расширяющийся спектр антигенов, воздействующих на организм ребенка после рождения.

Анализ показателей, отражающих гуморальное звено иммунитета, показал, что к десятому дню жизни количество В-клеток по сравнению с таковым на четвертый день жизни существенно снижалось с

(р < 0,02). Не исключено, что это связано с перераспределением их из кровеносного русла в зоны максимального поступления антигенов для усиления иммунологического барьера.

В течение неонатального периода достоверно снижалась активация лимфоцитов. Так, к десятому дню отмечалось снижение уровня СБ25+ лимфоцитов с 8,4±0,9% до 5,6±0,6% (р < 0,01) и П1Л-1Ж I клеток с 11,6 ±1,2% до Такое снижение функциональной активности поверхностного фенотипа лимфоцитов, по-видимому, является закономерным процессом и может быть связано с параллельным формированием толерантности к антигенам внешней среды.

Таким образом, неонатальный период (4-10 сутки жизни) у здоровых детей характеризуется усилением эффекторного звена клеточного иммунитета на фоне уменьшения ранней и поздней активации лимфоцитов и снижения уровня В-клеток.

У новорожденных с задержкой внутриутробного развития на четвертый день жизни среднестатистические показатели не отличались от таковых у здоровых детей. В связи с этим дети были разделены на две подгруппы: с симметричной и асимметричной формами.

Анализ полученных данных показал, что на четвертый день жизни исследованные показатели поверхностного фенотипа и параметры, характеризующие степень активации лимфоцитов новорожденных с симметричной формой задержки внутриутробного развития, существенно не отличались от таковых у здоровых новорожденных.

Изменение показателей поверхностного фенотипа и характер степени активации лимфоцитов были выявлены только при ассиметричной форме. Так, у этих новорожденных отмечался более низкий, чем у здоровых новорожденных, уровень Т-лимфоцитов — 55,1 ± 5,3% (р < 0,05) и Т-хелперов —38,4 ±3,7% (р < 0,02). В то же время иммунорегуляторный индекс существенно не отличал-

ся от аналогичного показателя детей контрольной группы (р > 0,05). Следует также отметить заметную тенденцию к снижению уровня цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) и увеличению содержания естественных киллеров (CD 16+) в данной группе детей по сравнению с аналогичными показателями новорожденных из группы контроля (р > 0,05). Такая направленность изменений при асимметричной форме синдрома задержки внутриутробного развития может свидетельствовать о снижении антиинфекционной защиты у этих детей и, следовательно, риске развития заболеваний.

При сравнении иммунологических показателей детей с симметричной и ассиметричной формами задержки внутриутробного развития между собой было установлено, что при асимметричной форме уровни Т-лимфоцитов (СБЗ+)—55,1 ±5,3% (р<0,05), Т-хелперов (СБ4+) - 38,4 ± 3,7% (р<0,02), ИРИ - 3,0 ± 0,4 (р < 0,02), Н1А/Б11+— 7,8 ± 1,6% были достоверно ниже, чем при симметричной.

На 10 сутки жизни у новорожденных с симметричной формой задержки внутриутробного развития наблюдалось более низкое содержание в периферической крови Т-лимфоцитов (СБЗ + )— 69,7 ±4,0% (р<0,02), Т-хелперов (СБ4 + ) — 50,9±4,7% (р<0,05) и цитотоксических Т-лимфоцитов (СБ8 + ) — 13,8 ± 1,2% на фоне увеличения количества В-клеток (CD22+) — 11,1± 1,4% (р < 0,02) и лимфоцитов, экснрессируюгцих на своей поверхности Н1А-Б11+ антигены- 8,3 ± 0,9% (р< 0,001).

При асимметричной форме задержки внутриутробного развития отмечались сходные изменения в иммунологических параметрах. У этих детей на 10 день жизни также отмечался более низкий, чем у здоровых новорожденных, уровень периферических Т-лимфоцитов (СБЗ + )—68,8 ± 2,1% (р< 0,001) и Т-хелперов (СБ4 + )— 53,3 ± 2,6% (р<0,05), усиливалась поздняя активация, лимфоцитов HLA/DR+ — 8,2 ± 0,8% (р < 0,02), однако при этом у них отсутствовало повышение содержания В-лимфоцитов в периферической крови, наблюдавшееся при симметричной форме задержки внутриутробного развития.

При сравнении показателей детей с симметричной и асимметричной формой задержки внутриутробного развития различий в их значениях выявить не удалось (р > 0,05).

Таким образом, к 10 дню жизни у новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития наблюдалось угнетение Т-звена иммунного ответа на фоне активации гуморального иммунитета.

Сопоставление параметров иммунной системы у новорожденных с задержкой внутриутробного развития позволило высказать предположение о том, что активация гуморального звена является мерой компенсации в ответ на развивающийся дефицит клеточного звена иммунитета.

В последние юды внимание обращено на изучение функции белков фер-гильпости, в частности трофобластического Р-гликопротеина (ТБГ) и альфа-2 микроглобулина фергилыюсти (ЛМГФ). Исследованиями, проведенными в Го-

сударственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова», установлена роль плацентарных белков ТБГ и АМГФ в формировании задержки внутриутробного развития, в связи с этим нами определялось влияние этих белков на субпопуляции лимфоцитов новорожденных. Результаты исследования показали, что после инкубации лимфоцитов здоровых новорожденных с белками ТБГ и АМГФ in vitro статистически достоверных различий по сравнению с исходным уровнем на 4 день жизни выявлено не было.

К 10-м суткам жизни под влиянием ТБГ отмечалось снижение Т-лимфо-цитов до и В-лимфоцитов — (р < 0,05) и повышение

лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности HLA-DR+ антигены, число которых возросло после инкубации до 8,1 ± 0,5% (р < 0,01).

После инкубации с АМГФ происходило достоверное уменьшение количества Т-лимфоцитов (CD3+) — 72,5 ± 2,7% (р < 0,02) и Т-хелперов (CD4+) — 53,5 ± 2,4% (р < 0,02) на фоне увеличения содержания HLA/DR+ позитивных лимфоцитов — 7,2 ± 0,5% (р < 0,05). На остальные субпопуляции данный белок влияния не оказывал (р > 0,05). В то же время следует отметить тенденцию к снижению уровня В-клеток после инкубации с АМГФ (р>0,05).

Таким образом, у здоровых новорожденных ТБГ и АМГФ на 4 день жизни не оказывали существенного влияния на поверхностный фенотип лимфоцитов периферической крови, на 10 сутки оба белка снижали уровень Т-лимфо-цитов и увеличивали количество HLA/DR+ позитивных клеток. Кроме того, ТБГ снижал уровень В-клеток, а АМГФ — Т-хелперов.

Влияние ТБГ и АМГФ in vitro на клетки иммунной системы доношенных новорожденных с синдромом задержки развития проявляется лишь при асимметричной форме и только на 4 день жизни. При этой форме под влиянием ТБГ увеличивалось содержание Т-лимфоцитов до 79,3 ± 3,0% (р < 0,001) и Т-хел-перов — до (р < 0,02) и наблюдалась тенденция к снижению уровня

CD16+ и активированных лимфоцитов CD25+ (р>0,05), а АМГФ повышал уровень цитотоксических Т-лимфоцитов до 18,3 ± 1,8% (р < 0,05). Параллельно отмечалась выраженная тенденция к повышению содержания Т-лимфоцитов, Т-хелперов и снижению количества активированных лимфоцитов (CD25+) (р > 0,05).

Для выявления возможных механизмов нарушения иммунной системы в крови новорожденных определялся ряд биохимических показателей. Осложненный акушерско-гинекологический анамнез явился одной из основных причин формирования фетоплацентарной недостаточности, которая в последующем реализовалась в гипоксию новорожденного, проявляющуюся соответствующими симптомами и неврологическими синдромами. Есть вес основания полагать, что осложненное течение неонатального периода у новорожденных с задержкой внутриутробного развития обусловлено гипоксией.

Учитывая, что гипоксия является одним из ведущих факторов, влияющих на становление различных органов и систем, в том числе иммунной системы ребенка на антенатальном и постнатальном этапах развития, у обследованных нами детей определялась концентрация лактата. Исследование концентрации молочной кислоты позволяло выявить гипоксию и установить ее роль в нарушении течения неонатального периода.

Результаты проведенных исследований показали, что при задержке внутриутробного развития содержание лактата в крови новорожденных увеличено по сравнению с контрольной группой на 82% и значения составили 3,36 ± 0,12 ммоль/л, в то время как в контрольной группе этот показатель был 1,85 ± 0,06 ммоль/л.

Исследования концентрации молочной кислоты и сопоставление се с клиническими и иммунологическими показателями позволило установить зависимость тяжести состояния ребенка и выявить сильную обратную корреляционную связь между концентрацией лактата и содержанием СБЗ+ и СБ4+ клеток (г = - 0,7).

Установлено,' что при гипоксии нарушение метаболических процессов проявляется не только накоплением молочной кислоты, но и нарушением утилизации глюкозы, являющейся одним из основных субстратов энергообеспечения всех процессов в организме, в том числе пролиферации лимфоцитов. Исследования уровня глюкозы в крови детей исследуемой группы выявило снижение данного параметра по сравнению с контролем. У 2/3 детей этой группы ее концентрация превышала уровень глюкозы у здоровых детей на 50% и, как правило, сочеталась с высокими показателями лактата. У остальных новорожденных концентрация глюкозы в крови оказалась сниженной, что свидетельствовало об интенсивном потреблении ее тканями.

В последние годы большое внимание уделяется исследованию свободно-радикального окисления, интенсификация которого рассматривается как один из механизмов повреждения рецепторного аппарата клеток. С этой целью и крови детей определялась концентрация малонового диальдегнда.

Исследования показали, что задержка внутриутробного развития протекает на фоне интенсификации перекисного окисления липидов. Об этом свидетельствовало статистически достоверное (р < 0,001) увеличение содержания малонового диальдегида до 6,27 ± 0,20 нмоль/мл, что на 42% больше, чем у здоровых детей.

При обследовании детей на 10 день жизни отмечалась положительная динамика исследуемых показателей крови — снижение концентрации лактата на 33%, малонового диальдегида — на 29%, при этом нормализация этих показателей произошла лишь в 30% случаев.

У большинства новорожденных с синдромом задержки сохранялись гипоксия и интенсификация перекисного окисления липидов, которые могли явиться причиной иммунологических и гормональных нарушений.

Учитывая регулирующее влияние гормонов на становление и функцию поверхностного фенотипа лимфоцитов, в крови новорожденных определялась концентрация СТГ, ТТГ и кортизола.

Исследование гормонов крови (СТГ, ТТГ, кортизола) позволило установить, что у детей с синдромом задержки развития при рождении снижена функциональная активность гипофизарно-надпочечниковой системы и одной из причин такого нарушения следует рассматривать гипоксию, которая развилась на антенатальном этапе. К 10 дню жизни полного восстановления нарушенной тройной функции гипофиза и надпочечников не происходило.

Рис. Содержание СТГ, ТТГ, кортизола в сыворотке крови новорожденных исследуемых групп на 4 и 10 дни жизни.

Можно полагать, что выявленные изменения иммунологических показателен, клинического состояния детей с задержкой внутриутробного развития обусловлены не только осложненным течением антенатального этапа развития, но и снижением функции гипофизарно-надпочечниковой системы.

выводы

1. Клинические проявления задержки внутриутробного развития у новорожденна - низкие антропометрические показатели, снижение мас-со-ростового коэффициента, умеренная долихоморфия, выраженная потеря первоначальной массы тела и нарушение ее восстановления, отклонения в неврологическом статусе, наличие сопутствующих заболеваний сопровождаются изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления липи-дов, снижением концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов и кортизола.

2. У доношенных новорожденных состояние иммунной системы зависит от формы задержки внутриутробного развития и дня жизни неона-тального периода. В раннем неонатальном периоде симметричная форма задержки внутриутробного развития не сопровождается изменением . иммунного статуса. Асимметричная форма характеризуется снижением Т-лимфоцитов, Т- хелперов и HLA/DR клеток по сравнению со здоровыми детьми. На 10 сутки жизни симметричная форма задержки внутриутробного развития характеризуется снижением параметров клеточного (CD3+, CD4+, CD8+) и повышением гуморального (CD22+ и HLA/DR) звеньев иммунитета, асимметричная форма -снижением Т-лимфоцитов, Т-хелперов и повышением лимфоцитов,

\ экспрессирующих на своей поверхности HLA/DR антигены.

3. Объективными количественными критериями нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с асимметричной формой синдрома задержки внутриутробного развития на 4 день жизни явились: содержание CD3+ <60%, CD4+ <41%, HLA/DR+ <9%, на 10 день жизни при обеих формах - содержание

<55%, HLA/DR+ - <9,0%.

4. Влияние трофобластического р-гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности на клетки иммунной системы in vitro зависит от дня жизни неонатального периода. У здоровых доношенных новорожденных влияние белков отсутствует в раннем неонатальном периоде и проявляется на 10 день жизни снижением количества Т-лимфоцитов и повышением уровня HLA-DR+ лимфоцитов, при этом трофобласти-ческий р-гликопротеина дополнительно снижает уровень В-клеток, а альфа-2 микроглобулин фертильности - Т-хелперов. У детей с синдромом задержки внутриутробного развития действие белков проявляется лишь в группе с асимметричной формой на 4 день жизни увеличением содержания Т-лимфоцитов и Т-хелперов под действием трофобластического Р-гликопротеина и цитотоксических Т-лимфоцитов под влиянием альфа-2 микроглобулина фертильности.

5. При синдроме задержки внутриутробного развития у новорожденных на изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов влияют гормонально-метаболические нарушения: гипоксия, интенсификация пере-кисного окисления липидов, снижение концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов, кортизола.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется новорожденным детям с синдромом задержки внутриутробного развития в неонатальном периоде включать в комплексное обследование консультацию врача-иммунолога и исследование иммунного и гормонального статуса с целью ранней диагностики и профилактики инфекционно-воспалительных процессов.

Предлагаются объективные количественные критерии нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития: на 4 день жизни при асимметричной форме - содержание CD3+ - <6О%, CD4+ - <41%, ША^Я+ - <9%, на 10 день жизни при обеих формах содержание CD3+ - <71% CD4+ - <55%, ШЬА/БЯ + - <9,0%.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Взаимодействие плацентарных белков и периферических иммунокомпс-тентных клеток новорожденных детей в норме и при патологии // Актуальные проблемы здоровья семьи, общественного здоровья и здравоохранения: Сб. науч. тр., посвященных 20-летию основания института.

- Иваново, 2000. - С.243-246 (в соавт. с Корулиной М.В., Посисее-вой Л.В., Бабаковой Л.А., Сотниковой Н.Ю., Коряковской Н.Г.).

2. Клинико-диагностическое значение показателей малонового диальдегида и общей атиоксидантной активности крови новорожденных с задержкой внутриутробного развития //Актуальные проблемы здоровья семьи, общественного здоровья и здравоохранения: Сб. науч. тр., посвященных 20-летию основания института. - Иваново, 2000. - С.246-248 (в соавт. с Басаргиной Т.В., Кузнецовой В.А.).

3. Влияние немедикаментозной терапии на клинико-иммунологическис показатели ребенка первого года жизни //Медико-социальная помощь семье в период реформирования здравоохранения в России: Российская науч.-практ. конф. - Иваново, 1995. - С.НО-112 (в соавт. с Кабаковым А.В., Алимовой Н.В., Бабаковой Л.А., Ждановой Л.А., Лаговской И.В., Кулагиной Т.Г., Коряковской Н.Г.).

4. Клиническое значение исследования состояния клеточных мембран в диагностике гипоксии плода и новорожденного //Материалы II съезда акушеров-гинекологов Таджикистана 27-29 мая 1986 г. -Душанбе, 1986.

- С.241-244.

5. А.с 1455310 СССР, МКИ О 01 № 33/48. Способ диагностики дисфункции коры надпочечников у новорожденных дегей (в соавт. с Князевым Ю.А., Кузнецовой В.А., Волковой Т.Г., Беспаловой В.А.).

6. Пат. 2002119497/15 (020444) РФ, МПК 7 О 01 № 33/48, 33/49, 33/53. Спо-

соб прогнозирования инфекционных заболеваний новорожденных (в со-авт. с Пановой И. А., Посисеевой Л.В., Царьковой Р.Х., Сотниковой Н.Ю., Крошкиной Н.В., Астраух Н.В.).

044*791

ЛЮБИМЦЕВА Татьяна Валентиновна

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОРОЖДЕННЫХ С СИНДРОМОМ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ И ВЛИЯНИЕ ПЛАЦЕНТАРНЫХ БЕЛКОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидатамедицинскихпаук

Подписано в печан» 07.07.04. Формат 60x84 1/16. Печ. л. 1,25. Усл. печ. л. 1,1. Тираж 75 экз.

ГОУ ВПО ИвГМА Минздрава России. 153012, г. Иваново, пр. Ф. 'Энгельса, 8.

Актуальность проблемы

Задержка внутриутробного роста и развития относится к наиболее частым причинам перинатальной заболеваемости и смертности новорожденных. Это определяет не только медицинскую, но и социальную значимость проблемы. (Smyth V. et al, 1994, Shah P.M., 1994, Stratton J.F.et al, 1995, Шабалов Н.П.1997, Медведев МБ, Юдина Е.В., 1998, Потапов В.А, Пинский Е.В, 1999).

Частота распространения данной патологии среди новорожденных по данным различных авторов составляет от 2,4 до 17,6% (Бунин А.Т., Федорова М.В., 1988, Вихляева Е.М., Ходжаева С.З., Бунин А.Т.,1985, Baumgarten К., Dumont M.et al, 1985). Это связано как с учащением этой патологии, так и с улучшением антенатальной диагностики (Демидов В.Н., Розенфельд Б.Е., 1996, Sanderson D.A., Willcos M.A. et al, 1994), a также с неблагоприятными социально-экономическими условиями в стране (Чернышов В.Н., Козырева Т.Е., 1998).

В настоящее время установлено, что в патогенезе синдрома задержки внутриутробного развития плода ведущая роль принадлежит нарушению маточ-но-плацентарного кровообращения и морфофункциональным изменениям в плаценте, вследствие экстрагенитальной патологии и инфекции у матерей (Потапов В.А., 1999, Черданцев A.M., Литвинова A.M. и соавт., 2000). Все это приводит к гипоксии и каскаду метаболических и функциональных нарушений у плода (Стрижаков А.Н., Михайленко Е.Т., Бунин А.Т. с соавт., 1988, Кузнецова В.А., 1992, Басаргина Т.В., 2002, Ароян Г.Ц., 2002).

Несмотря на значительное число исследований по этой проблеме, многие вопросы, касающиеся клинико-иммунологических особенностей течения неона-тального периода и состояния здоровья этих детей, остаются до конца не выясненными. Принимая во внимание, что наиболее важными системами, регулирующими адаптационные реакции организма, являются иммунная, эндокринная и нервная системы, представляет интерес исследование состояния иммунного статуса в динамике неонатального периода.

У детей, развивавшихся в условиях хронической внутриутробной гипоксии, происходит акцидентальная инволюция тимуса (Назаренко Л.Г., Антипен-ская Л.В., 1992), сопровождающаяся блокадой ферментов, ответственных за синтез тимозина, что приводит к снижению активности как клеточного, так и гуморального иммунитета. Однако, при задержке внутриутробного развития, сопровождающейся гипоксией, подобные исследования не проводились.

Формирование здоровья ребенка, полноценность его развития, способность адекватно реагировать на внешнее и внутреннее воздействие во многом зависят от структуры и функции поверхностного фенотипа лимфоцитов (Корулина М.В., Посисеева Л.В., Бабакова Л.А. с соавт., 2000). Исходя из этого, представляется важным исследование функций этих клеток в первый месяц жизни, наиболее ответственный для здоровья детей в последующем периоде жизни. Это позволит не только оценить иммунный статус ребенка, но и прогнозировать течение заболеваний.

В последние годы интерес исследователей привлекают специфические и V неспецифические белки репродуктивной системы человека трофобластический Р гликопротеин (ТБГ) и альфа-2 микроглобулин фертильности (АМГФ) (Посисеева Л.В., 1990, 1991, Борзова Н.Ю., 1989, Бойко Е.Л., 1993).

Установлено, что дети с задержкой внутриутробного развития рождаются у матерей, которые во время беременности имели низкое содержание ТБГ в периферической крови (Посисеева Л.В., Шульпина Е.Ю., Панова И.А., 1995).

Исследованиями Филиновой Н.Ю. (2000) доказана роль ТБГ и АМГФ в патогенезе задержки внутриутробного развития плода, заключающаяся в регуляции процессов активации лимфоцитов на локальном уровне. Однако, влияние этих белков на поверхностный фенотип лимфоцитов у детей с задержкой внутриутробного развития не установлено.

Наряду с этим при задержке внутриутробного развития у новорожденных не выявлена взаимосвязь поверхностного фенотипа лимфоцитов с гормонами -СТГ, ТТГ, кортизола, регулирующими пролиферацию и функциональную активность лимфоцитов.

Таким образом, многофакторность этиологии и патогенеза этого синдрома определяющая большую частоту и сложность этой патологии требуют от практического врача научно обоснованной тактики ведения внутриутробного и пост-натального периодов развития ребенка (Кузнецова В.А., 1989).

В связи с этим целью научного исследования явилось: выявить особенности поверхностного фенотипа лимфоцитов, установить их взаимосвязь с биохимическими нарушениями, оценить влияние трофобластического Р-глико-протеина и альфа-2 микроглобулина фертильности in vitro на субпопуляции лимфоцитов крови и разработать критерии оценки иммунного статуса у новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития в неонатальном периоде.

Задачи исследования

1.Дать клиническую характеристику новорожденным с синдромом задержки внутриутробного развития, установить взаимосвязь клинических нарушений с изменением иммунологических и биохимических показателей, разработать критерии для оценки иммунного статуса детей в неонатальном периоде.

2.Установить особенности иммунного статуса у доношенных новорожденных с симметричной и асимметричной формами задержки внутриутробного развития на 4-10 сутки жизни на основании исследования поверхностного фенотипа лимфоцитов в периферической крови.

3.Выявить изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов в крови новорожденных с данной патологией под влиянием трофобластического Р глико протеина и альфа-2 микроглобулина фертильности in vitro на 4-10 сутки жизни.

4.Исследовать концентрацию лактата, глюкозы, малонового диальдегида, соматотропного, тиреотропного гормонов, кортизола в крови новорожденных и установить взаимосвязь с изменением иммунного статуса для выявления механизмов его нарушения.

Научная новизна исследования

Установлено, что клинические проявления задержки внутриутробного развития сопровождаются изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления липидов, снижением концентрации гормонов - соматотропного, тиреотропного, кортизола.

Уточнены патогенетические механизмы формирования задержки внутриутробного развития у доношенных новорожденных.

Доказана роль нарушений иммунного статуса в генезе задержки внутриутробного развития.

Выявлены особенности поверхностного фенотипа лимфоцитов периферической крови у доношенных новорожденных с различными формами задержки внутриутробного развития.

Определена динамика изменений поверхностного фенотипа лимфоцитов периферической крови и их особенности у новорожденных с симметричной и асимметричной формами задержки внутриутробного развития на 410 сутки жизни.

Выявлена взаимосвязь между изменением иммунного статуса, гормональными и метаболическими показателями при синдроме задержки внутриутробного развития.

Расширены представления о функциональном состоянии трофобла-стического Р гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности и их влиянии на поверхностный фенотип лимфоцитов крови доношенных новорожденных.

Доказано нормализующее влияние трофобластического Р гликопротеина и альфа-2 микроглобулина in vitro на поверхностный фенотип лимфоцитов крови доношенных новорожденных на 10 сутки жизни, у детей с синдромом задержки внутриутробного развития в раннем неонатальном периоде.

Практическая значимость работы

Установлены нормативные значения и динамика изменений показателей поверхностного фенотипа лимфоцитов доношенных новорожденных в неонатальном периоде (4-10 сутки жизни).

Предложены объективные критерии нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития на 4-10 сутки жизни.

Апробация и внедрение результатов исследования в практику

Выявленные критерии, позволяющие диагностировать иммунологические и метаболические нарушения у новорожденных с задержкой внутриутробного развития, внедрены в практику работы детского обсервационного отделения стационар-клиники ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» МЗ РФ (акт внедрения от 10.11.1999г).

Материалы диссертации доложены и обсуждены на второй и третьей Международных конференциях «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва 2001, 2002гг.), итоговой научной сессии ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова», Иваново, 2002г., на республиканских конференциях «Современные технологии в акушерстве и гинекологии», Челябинск, 2001; «Биохимические критерии оценки состояния новорожденных», Владимир, 2001г.

Апробация работы проведена на совместной научно-практической конференции сотрудников ГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» МЗ РФ и ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Результаты проведенных исследований вошли в состав пособия для врачей «Определение содержания малонового диальдегида в пуповинной крови у новорожденных детей - как дополнительный метод для выявления внутриутробных инфекций» на уровне Министерства Здравоохранения Российской Федерации, утвержденного секцией по педиатрии МЗ РФ, протокол №6 от 13.12.01.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы, получено авторское свидетельство №1455310 от 01.10.1989г «Способ диагностики дисфункции коры надпочечников у новорожденных детей» и положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ прогнозирования инфекционных заболеваний новорожденных» от 02.04 2004г. по заявке № 2002119497.

Положения, выносимые на защиту.

1.Клиническое состояние новорожденных с задержкой внутриутробного развития в неонатальном периоде сочетается с изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления липидов, снижением концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов и кортизола.

2.Изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов доношенных новорожденных с задержкой внутриутробного развития и влияние трофобластиче-ского Р гликопротеина и альфа-2 микроглобулина на субпопуляции лимфоцитов in vitro зависят от формы задержки и дня жизни неонатального периода.

ВЫВОДЫ

Клинические проявления задержки внутриутробного развития у новорожденных - низкие антропометрические показатели, снижение массо-ростового коэффициента, умеренная долихоморфия, выраженная потеря первоначальной массы тела и нарушение ее восстановления, отклонения в неврологическом статусе, наличие сопутствующих заболеваний сопровождаются изменением поверхностного фенотипа лимфоцитов, гипоксией, интенсификацией перекисного окисления липидов, снижением концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов и кортизола.

2.У доношенных новорожденных состояние иммунной системы зависит от формы задержки внутриутробного развития и дня жизни неонатального периода. В раннем неонатальном периоде симметричная форма задержки внутриутробного развития не сопровождается изменением иммунного статуса. Асимметричная форма характеризуется снижением Т-лимфоцитов, Т- хелперов и HLA/DR клеток по сравнению со здоровыми детьми. На 10 сутки жизни симметричная форма задержки внутриутробного развития характеризуется снижением параметров клеточного (CD3+, CD4+, CD8+) и повышением гуморального (CD22+ и HLA/DR) звеньев иммунитета, асимметричная форма - снижением Т-лимфоцитов, Т-хелперов и повышением лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности HLA/DR антигены.

3.Объективными количественными критериями нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с асимметричной формой синдрома задержки внутриутробного развития на 4 день жизни явились: содержание CD3+ <60%, CD4+ <41%, HLA/DR+ <9%, на 10 день жизни при обеих формах - содержание CD3+ - <71%, CD4+ - <55%, HLA/DR+ - <9,0%.

4.Влияние трофобластического p-гликопротеина и альфа-2 микроглобулина фертильности на клетки иммунной системы in vitro зависит от дня жизни неонатального периода. У здоровых доношенных новорожденных влияние белков отсутствует в раннем неонатальном периоде и проявляется на 10 день жизни снижением количества Т-лимфоцитов и повышением уровня НЬА-ВЯ+ лимфоцитов, при этом трофобластический Р-гликопротеина дополнительно снижает уровень В-клеток, а альфа-2 микроглобулин фертильности - Т-хелперов. У детей с синдромом задержки внутриутробного развития действие белков проявляется лишь в группе с асимметричной формой на 4 день жизни увеличением содержания Т-лимфоцитов и Т-хелперов под действием трофобластического (3-гликопротеина и цитотоксических Т-лимфоцитов под влиянием альфа-2 микроглобулина фертильности.

5.При синдроме задержки внутриутробного развития у новорожденных на изменение поверхностного фенотипа лимфоцитов влияют гормонально-метаболические нарушения: гипоксия, интенсификация перекисного окисления липидов, снижение концентрации соматотропного, тиреотропного гормонов, кортизола.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется новорожденным детям с синдромом задержки внутриутробного развития в неонатальном периоде включать в комплексное обследование консультацию врача-иммунолога и исследование иммунного и гормонального статуса с целью ранней диагностики и профилактики инфекционно-воспалительн ых процессов.

Предлагаются объективные количественные критерии нарушения иммунного статуса у доношенных новорожденных с синдромом задержки внутриутробного развития: на 4 день жизни при асимметричной форме - содержание СБЗ+ - <60%, СВ4+ - <41%, НЬАЛЖ+ - <9%, на 10 день жизни при обеих формах содержание СВЗ+ - <71%, СВ4+ - <55%, НЬАЛЖ + - <9,0%.