Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Клинико-иммунологическая эффективность эндогенных иммуномодуляторов в комплексном лечении панкреонекроза

На правах рукописи

Иванова Инна Анатольевна

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЭНДОГЕННЫХ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ПАНКРЕОНЕКРОЗА

14.00.36 - аллерголо!Ия и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшею профессионального образования ('Курский государственный медицинский чниверсшсг Федеральною агентства но здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

поктор ме 1ицински\ на\к профессор Юдина Светлана Михайловна

Официальные онпонешы:

■юмор медицинских наук профессор Г оряйнов Игорь Иванович

ток гор медицинских наук, профессор С'нимшикова Ирина Анатольевна

Ведущая организация:

Г(А НПО «Российский юсу дарственный медицинский университет Рос: трава». г Москва

Зашита диссертации состоится « 2005 г в ^ V часов

на заседании диссертационном) совета Д 208 039 01 при Государственном обра зова те т ьном учреждении высшего профессиональною образования "Курский государственный медицинский университет Федерального атентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 305041, I Курск, \ I К Маркса, "5

С шссер1ацией можно ознакомиться в библиотеке Г ОУ ВПО КГМУ Рос в трава

V ченыи секретарь тисссртациоттното совета

Калуцкий П.В.

З&Ш

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема диагностики и лечения панкреонекроза является одной из наиболее актуальных в хирургической гастротнте-рологии Панкреонекроз - одно из самых тяжелых гнойно-септических заболеваний брюшной полости, летальность при котором даже в специализированных хирургических стационарах остается высокой, достигая 20-25%, причем около 70% летальных исходов определяются развитием гнойных осложнений и сепсиса (Брискин Б С., 1999; Толстой А.Д , 2002, Рогетагк С.Е., 2001)

Как известно из данных литературы, одной из причин тяжести течения и исходов панкреонекроза является вторичная иммунологическая недостаточность, развивающаяся с первых часов развития заболевания (Трухан Д И , 2000, Толстой А.Д , 2002; Аверкиев В Л , 2003).

Причинами развития тяжелого вторичного иммунодефицита в условиях формирования панкреонекроза является массивная антигенемия, приводящая к параличу иммунного ответа, так как в условиях избытка антигенов блокируются структуры антигенного распознавания зрелых иммунокомпетентных клеток. Сопутствующий панкреонекрозу Т-клеточный иммунодефицит, формирующийся с первых часов развития заболевания, является прогностическим критерием его течения и исхода В генезе вторичного иммунодефицита, развивающегося на ранней стадии заболевания, ведущее значение имеет также мощная продукция провоспалительных цитокинов (ИЛ-1/3, ФНО-а, ИЛ-6), генерализующих системный воспалительный ответ и усиливающих дисбаланс факторов врожденного и приобретенного иммунитета и, как следствие, формирование множественных органных дисфункций (Волков Д.В., 2000; Брискин Б С., 2002; Леплина О Ю„ 2004).

Прогноз при панкреонекрозе зависит как от объема поражения поджелудочной железы, распространенности гнойно-некротического процесса в самом органе и окружающих тканях, так и от степени иммунных нарушений (Булава Г.В., 2002; Козлов В.К., 2002; Толстой А.Д., 2003).

В связи с этим разработка методов иммунотерапии с целью восстановления функциональной полноценности иммунной системы является важной частью комплексной терапии панкреонекроза (Пинегин Б.В, 1999, Зайрать-янц О.В., 2002; Голубеева В.Л., 2003).

Цель работы: оценка клинико-иммунологической эффективности применения эндогенных иммуномодуляторов в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза

Задачи исследования.

1 Исследовать некоторые механизмы развития вторичного иммунодефицита у больных с инфицированным панкреонекрозом.

2 Изучть in vitro влияние эндогенных иммуномодуляторов (препарата Мие-лопид и его фракции МП-3) на состояние фенотипической и функциональном активное [И нейтрофидов и лимфоцитов больных с инфицированным панкреонекрозом

1 Разработать метод топического применения препарата комплекса цитокинов ( уперзимф у больных с инфицированным панкреонекрозом.

4 Провести сравнительную оценку клинической эффективности применения Миелонида и топической цитокинотерапии в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза

5 Исспедовать влияние иммунотерапии с препаратом Миелопид и топической циюкинотерапии на динамику показателей иммунного статуса больных с инфицированным панкреонекрозом

Научная новизна. Впервые in vitro показано иммуномодулирующее в зияние препарата Миелопид и его фракции МП-3 на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейгрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом

Установлено, что одним из факторов развития вторичной иммунологической недостаточности у больных с инфицированным панкреонекрозом является нарушение функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы

Разработан и внедрен в клиническую практику метод топической цитокинотерапии с препаратом Суперлимф в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом Проведена оценка влияния Миелопида и топической цитокинотерапии на регрессию воспалительного процесса в поджелудочной железе

Выявлено положительное влияние методов иммунотерапии на динамику показателей системного и местного иммунитета больных с инфицированным панкреонекрозом"

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований патогенетически обосновано применение Миелопида и топической цито-кинотерапии в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом, способствующих более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Положения, выносимые на защиту.

Препарат Миелопид и ею фракция МП-3 оказывают in vitro дозозависи-мое иммуномодулирующее влияние на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом.

Одним из факторов развития вторичной иммунологической недостаточности у больных с инфицированным панкреонекрозом является нарушение функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из панкреатогенной полости деструкции

Применение в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза препарата Миелопид и топической цитокинотерапии с препаратом Суперлимф способствует более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Топическая цитокинотерапия и применение Миелопида в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза способствуют, по сравнению с традиционной терапией, более быстрой положительной динамике показателей системного и местного иммунитета у больных с инфицированным панкреонекрозом.

Внедрения. Способ топической цитокинотерапии внедрен в практику лечебной работы отделения гнойной хирургии КОКБ, в научный и учебный процесс кафедр иммунологии и аллергологии и хирургических болезней № 1 КГМУ.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на 67-й межвузовской конференции студентов и молодых ученых (Курск, 2002), областной научно-практической конференции (Курск, 2003), 69-й итоговой научной сессии КГМУ (Курск, 2004), Российской научно-практической конференции (Пермь, 2004), международной научно-практической конферен-

ции студентов и молодых ученых (Санкт-Петербург, 2004), 70-й юбилейной научной конференции КГМУ (Курск, 2005), 70-й межвузовской конференции студентов и молодых ученых (Курск, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них 1 - в центральной, 3 - в региональной и 8 - в местной печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописною текста, иллюстрирована 21 рисунком, 12 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, а также библиографического указа1еля, включающего 158 отечественных и 103 зарубежных источника

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Кпиническая характеристика Сючышх с инфицированным панкреонекро-!ач Под нашим наблюдением было 94 пациента с инфицированным панкрео-некрозом находившихся на лечении в отделении гнойной хирургии КОКБ в период с 2000 по 2004 г Основной контингент составили больные в возрасте от 20 до 40 пет (6! ,7%), в том числе женщин - 33 (35,1%), мужчин - 61 (64,9%).

Все пациенты по способу течения были разделены на 2 группы. Контрольную группу составили 54 больных, получавших традиционное лечение, основную - 40 больных, в комплексном лечении которых применяли иммунотерапию Среди больных, получавших иммунотерапию, выделяли 2 подгруппы первую - 20 больных, в комплексном лечении которых применяли Миелопид, и вторую - 20 больных, в комплексном лечении которых применяли топическую ци юкинотерапию с препаратом Суперлимф

I радинионная терапия панкреонекроза включала оперативные (лапаро-томия методы ультразвуковой диапевтики) и консервативные способы лечения (антибактериальные препараты, детоксикационная терапия) Иммунотерапию применяли наряду с традиционным лечением в воспалительно-регенераторную фазу, когда отмечалось очищение панкреатогенной полости деструкции от I нойно-некротических масс

1я> 1ьным основной группы Миелопид вводили в воспалительно-регенераторную фазу внутримышечно в дозе 0,003 г на 2 мл физиологического раствора ежедневно в течение 10 дней Для топической цитокинотерапии при

меняли препарат Суперлимф, который вводили в воспалительно-регенераторную фазу в полость деструкции поджелудочной железы через полимерный катетер (медленно) в дозе 100 мкг на 5 мл физиологического раствора ежедневно в течение 5 дней.

Для оценки эффективности методов лечения инфицированного панкрео-некроза анализировали данные динамики клинических симптомов, результаты лабораторных и инструментальных исследований.

Динамику клинических симптомов оценивали в 4-балльной системе по выраженности интоксикационного синдрома (температура тела, аппетит, общее состояние, ЧСС, ЧДД), характеру отделяемого из полости деструкции, а также лабораторным данным (лейкоцитоз, нейтрофилез, СОЭ).

Методы лабораторного обследования больных Всем больным проводилась комплексная диагностика панкреонекроза и его осложнений в динамике с применением клинических, ультразвуковых, эндоскопических (лапароскопия, фиброгастродуоденоскопия), рентгенологических исследований (обзорная рентгеноскопия брюшной полости, ретроградная панкреатохолангиография, фистулография, рентгенологическое исследование желудочно-кишечного тракта с барием), компьютерной томографии Для верификации диагноза использовались также лабораторные, бактериологические, цитологические, гистологические и иммунологические методы исследования. Общеклинические лабораторные методы исследования выполнялись на базе клинической лаборатории КОКБ и включали определение амилазы, глюкозы, трансаминаз крови, протеи-нограммы, общего анализа крови.

Иммунологические исследования проводили на кафедре иммунологии и аллергологии КГМУ. Фенотип лимфоцитов и нейтрофилов определяли непрямым иммунопероксидазным методом с использованием моноклональных антител (ТОО «Сорбент», г. Москва) к структурам CD4, CD8, CD20, CD25, HLA-DR, CD95, CD16, CD1 lb.

Кроме этого, исследовали клеточный состав и содержание цитокинов в смыве из полости деструкции поджелудочной железы, который собирали через дренаж и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 минут. Осадок, представляющий собой клеточную суспензию, использовали для определения функциональной активности входящих в его состав нейтрофилов.

Исследование функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смыва из полости деструкции проводили с помощью спонтанной и лю-

минол-индуцированной хемилюминесценции с применением реагентов фирмы «Диа'М» (г Москва) по стандартным методикам. Оценку хемилюминесценции производили на аппарате «Биохемилюминометр БХЛ-06» путем подсчета све-тосуммы импульсов за одну минуту.

Количественная оценка уровней ИЛ-1р, ФНО-а в сыворотке крови больных и смывах из полости деструкции поджелудочной железы проводилась с помощью набора реагентов РгоСоп ИЛ-1 и РгоСоп ФИО (ТОО "Протеиновый Контур", г. Санкт-Петербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа Цитологическое исследование материала, взятого из полости деструкции, включало подсчет клеточных элементов: нейтрофилов, лимфоцитов и макрофагов.

Методы жспериментачьных исследований Для обоснования применения Миелопида в комплексном лечении панкреонекроза были проведены следующие экспериментальные исследования.

Лимфоциты и нейтрофильные гранулоциты периферической крови больных панкреонекрозом, а также нейтрофильные гранулоциты смывов из полости деструкции поджелудочной железы выделяли, используя двойной градиент плотности фиколл-верографина (1,077 и 1,114 г/см3) по общепринятой методике.

Все манипуляции с клетками и клеточными суспензиями проводили в стерильных условиях ламинарного бокса, используя стерильные лабораторные принадлежности и расходуемые материалы. В работе использовали среду !}РМ1-1640 («Финбио», Россия) с добавлением гентамицина («Феррейн», Россия) в конечной концентрации 40 мкг/мл, среду 199 («Финбио», Россия) Культивирование клеток осуществляли при 37°С в атмосфере 5% СО2.

После проведения всех манипуляций, предусмотренных конкретным экспериментом, клетки ресуспендировали до концентрации 2 миллиона на миллилитр, инкубировали в течение I часа в сывороточной среде ЯРМ1-1640 с препаратом Миелопид (1x10"7 г/мл, 1х10"8г/мл) и фракцией Миелопида МП-3 (1x107 г/мл, 1x108 г/мл) в лунках 96-луночных планшетов при 37°С в атмосфере 5% С02 В контрольные лунки изучаемые препараты не вносились. По окончании инкубации из лунок удаляли супернатанты клеток путем интенсивного стряхивания планшетов Оставшиеся в лунках клетки трижды отмывали средой 199 («Финбио», Россия) путем центрифугирования при 2000 об/мин в течение 5 ми-

нут, ресуспендировали в среде RPMI-1640 и инкубировали в течение 16 часов при 37°С в атмосфере 5% С02. Затем клетки центрифугировали при 2000 об/мин в течение 5 минут, наносили на предметные стекла и окрашивали согласно методике (ТОО «Сорбент», г Москва). Экспрессию CD4, CD8, CD20, CD25, CD95, CD16, HLA-DR, CDllb маркеров определяли непрямым иммуно-пероксидазным методом.

Для определения уровня продукции цитокинов лимфоцитами и нейтро-филами периферической крови, клетки в концентрации 2 млн./мл инкубировали в течение 1 часа в сывороточной среде RPMI-1640 с препаратом Миелопид (1x10"7 г/мл, 1 х 10"8 г/мл) и его фракцией МП-3 (1х10"7 г/мл, 1х10'8 г/мл) в стерильных пластиковых пробирках при 37°С в атмосфере 5% С02. В контрольные пробирки изучаемые препараты не вносились. После инкубации клетки трижды отмывали, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин, ресуспендировали в среде RPMI-1640 и инкубировали в течение 16 часов при 37°С в атмосфере 5% СОг. После центрифугирования при 3000 об/мин в течение 20 мин су-пернатант использовался для определения концентрации ИЛ-1 /3, ФНО-а имму-ноферментным методом.

Методы статистической обработки Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью программного комплекса «Статистика 6.0», предназначенного для статистической обработки результатов медицинских и биологических исследований, с использованием критериев Стью-дента и Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты экспериментальных исследований. Учитывая данные литературы о способности миелопептидов костного мозга стимулировать пролиферацию и дифференцировку предшественников иммунокомпетентных клеток и повышать функциональную активность зрелых клеток, в экспериментальной части работы нами было изучено влияние препарата Миелопид и его фракции МП-3 на функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов больных инфицированным панкреонекрозом, а также продукцию некоторых цитокинов. С этой целью лимфоциты и нейтрофилы больных с инфицированным панкреонекрозом инкубировали с препаратом Миелопид (в концентрациях 1x10"7 г/мл, 1х10"8 г/мл) и его фракцией МП-3 (в концентрациях 1х10"7 г/мл, 1х10"8 г/мл) в течение 1 часа.

Результаты исследования показали, что исходно до обработки препаратами у больных наблюдалась выраженная иммунодепрессия, характеризующаяся значительным снижением лимфоцитов CD4, CD8, CD20 фенотипа, экспрессии ими активационных маркеров, что сочеталось с усилением их апоптоза, о чем судили по увеличению уровня экспрессии CD95 в 1,5 раза и снижению в 2,5 раза CD16 на лимфоцитах.

После инкубации лимфоцитов с препаратом Миелопид и его фракцией МП-3 фенотип лимфоцитов существенно изменялся, в сторону повышения экспрессии указанных маркеров, более выраженная динамика отмечалась при обработке лимфоцитов Миелопидом в дозе 1х10"7 г/мл (рис. 1) Это сочеталось с увеличением числа лимфоцитов, экспрессирующих активационные маркеры, и снижением экспрессии CD95', нормализацией количества CD16 положительных клеток, что свидетельствовало об уменьшении их апоптоза (рис 2).

1+]

ph

♦---

11| ~ к .

1 у/

Еасы czcub

[WBCD25 ■

Рисунок 1. Влияние Миелопида и его фракции МП-3 на экспрессию CD4, CD8, CD20 маркеров лимфоцитами периферической крови больных пан-креонекрозом.

Рисунок 2. Влияние Миелопида и его фракции МП-3 на экспрессию CD25, CD95, CD16, HLA-DR маркеров лимфоцитами периферической крови больных панкреонекрозом.

Примечание: здесь и на рисунках 3-4 1 - клетки без обработки препаратом, 2 - клетки, инкубированные с фракцией Миелопида МП-3 в концентрации 1x10 г/мл, 3 - клетки, инкубированные с фракцией Миелопида МП-3 в концентрации 1x10'8 г/мт 4 - клетки, инкубированные с препаратом Миелопил в концентрации 1x10"7 г/чл, 5 - клетки, инкубированные с препаратом Миелопид в концентрации 1x10" г/мл

С учетом важной роли нейтрофильных гранулоцитов в развитии и исходе воспали тельного процесса мы исследовали влияние Миелопида и его фракции МП-3 на фенотип нейтрофилов периферической крови больных панкреонекрозом В результате экспериментальных исследований было установлено, что до обработки препаратами у нейтрофилов периферической крови больных были повышены адгезия и апоптоз Обработка нейтрофилов препаратами приводила

к дозозависимой стимуляции экспрессии CD16, а также к снижению экспрессии CD95, что свидетельствовало об уменьшении апоптоза и повышении жизнеспособности нейтрофилов. Это сочеталось со снижением экспрессии рецептора адгезии CD1 lb (рис. 3). При обработке нейтрофилов смывов из полости деструкции поджелудочной железы больных панкреонекрозом препаратом Миелопид и его фракцией МП-3 также отмечалось снижение их апоптоза и адгезии.

Таким образом, обработка лимфоцитов и нейтрофилов Миелопидом и его фракцией МП-3 приводила к восстановлению их фенотипа, снижала апоп-тоз.

Как известно, в основе синдрома системного воспалительного ответа (SIRS - Systemic Inflammatory Response Syndrome), развивающегося при пан-креонекрозе, лежит провоспалительная цитокинемия. Провоспалительные ци-токины играют защитную роль, поскольку обеспечивают рекрутирование в очаг инфекции дополнительного количества нейтрофилов и макрофагов, стимулируют их фагоцитарную, бактерицидную активность и индуцируют запуск анти-генспецифического ответа, что в совокупности способствует элиминации патогена.

В связи с этим мы изучили уровень продукции ИЛ-1/3 и ФНО-а лимфоцитами и нейтрофилами периферической крови больных панкреонекрозом при их обработке препаратом Миелопид и его фракцией МП-3. Инкубация лимфоцитов и нейтрофилов с препаратами, приводила к стимуляции продукции ИЛ-1/3 и ФНО-а. Более выраженная динамика со стороны продукции ФНО-а наблюдалась при обработке лимфоцитов фракцией МП-3 в концентрации 1х10"8г/мл, а ИЛ-1/3 - Миелопидом в концентрации 1x10"8 г/мл (рис. 4).

Рисунок 3. Влияние Миелопида и его Рисунок 4. Влияние Миелопида и его

фракции МП-3 на фенотип нейтрофи- фракции МП-3 на продукцию ИЛ-1/3 и

лов периферической крови больных ФНО-а лимфоцитами периферической

панкреонекрозом. крови больных панкреонекрозом.

Таким образом, результаты проведенных экспериментальных исследований показали, что Миелопид и его фракция МП-3 оказывают существенное влияние на функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов больных панкреонекрозом При этом более выраженная динамика исследуемых иммунолог ических показателей огмечалась в случаях обработки клеток Миелопидом, что можно объяснить более широким спектром иммуномодулируюших эффектов данною препарата, содержащего комплекс пептидов разнонаправленного действия, по сравнению с МП-3, входящей в его состав.

Влияние Миелопида па динамику клинико-иммунологических показателей больных панкреонекрозом

Как известно, одной из причин тяжести течения и исходов панкреонекро-за является вторичная иммунологическая недостаточность Учитывая полученные нами данные в экспериментальных исследованиях об иммуномодулирую-щей активности препарата Миелопид, мы провели анализ динамики клинико-иммунологических показателей больных панкреонекрозом на фоне иммунотерапии с препаратом Миелопид.

В зависимости от проводимого лечения больные были разделены на 2 группы контрольную и основную Контрольную группу составили 54 пациента с инфицированным панкреонекрозом, которым применялась традиционная терапия. Основную группу составили 20 пациентов с инфицированным панкреонекрозом, которым помимо традиционного лечения проводили иммунотерапию с препаратом Миелопид

У больных обеих групп в воспалительно-регенераторную фазу выраженность клинических симптомов по сумме баллов составила 9,8±0,43 При анализе динамики клинических симптомов после лечения у больных, получавших Миелопид, их выраженность снизилась до 7,2±0,41 баллов, тогда как у больных, находившихся на традиционном лечении, - до 8,6±0,38 баллов.

При исследовании цитологического материала из полости деструкции до лечения у больных обеих групп преобладали нейтрофилы при низком содержании лимфоцитов и макрофагов После лечения у больных, получавших Миелопид, количество нейтрофилов снизилось в 2,4 раза, лимфоцитов - возросло в 4 раза и макрофагов - в 5 раз, тогда как у больных контрольной группы после лечения количество нейтрофилов уменьшилось только в 1,3 раза, а число лимфоцитов и макрофагов возросло лишь в 2 и 3 раза соответственно.

При оценке показателей иммунного статуса у больных обеих групп в воспалительно-регенераторную фазу заболевания был выявлен тяжелый иммунодефицит, характеризующийся уменьшением в периферической крови количества CD4, CD8 положительных лимфоцитов, экспрессии ими активационных маркеров, повышением апоптоза. На фоне проводимого лечения у больных контрольной группы отмечалась позитивная динамика исследуемых показателей, но значений нормы они не достигали. У больных, получавших иммунотерапию, была отмечена нормализация исследуемых показателей после лечения (табл. 1).

Таблица 1

Динамика показателей иммунного статуса больных с инфицированным панкреонекрозом на фоне лечения

Показатели, % Доноры (п=18) Этапы исследования Группы больных

Контрольная группа (п=54) Основная группа (п=20)

CD4 40,0±1,7 1 11 16,7±1,9 23,8±1,6* 17,3+1,3 35,5+1,6**

CD8 26,0+1,5 I II 11,2+1,7 16,6±1,1* 11,5+1,2 23,2±1,6**

CD20 15,0±1,4 I II 9±1,2 9,3+0,8* 8,7±0,9 14,7±1,2**

CD25 5,0+1,1 I II 2,8±0,1 3,2±0,9 2,7±0,2 5,0±0,2**

HLA - DR 22,5±1,2 1 II 14,5±1,6 17,1±1,6* 14,9±2,0 31,711,07**

CD95 12,0±1,9 I II 15,7+1,7 16,2±1,5 15,4±1,2 8,9±1,2**

CD16 15,0± 1,4 I II 3,4±0,5 9,5+1,6* 3,5±0,7 12,2±1,4**

Примечание: здесь и в таблицах 2-5

1 I этап - воспалительно-регенераторная фаза показатели до лечения, II этап - показатели после лечения

2 * - р < 0,00], *» - р < 0,005 при сравнении показателей до лечения и после

лечения

При изучении фенотипа нейтрофилов периферической крови больных контрольной и основной групп на этой фазе заболевания была также выявлена гиперэкспрессия С095, снижение в 2 раза экспрессии СГ)16 на нейтрофилах.

Как известно, уменьшение количества СО 16 - рецепторов, которые сбрасываются с поверхности нейтрофилов при апоптозе, отражает один из механизмов реализации их апоптозной программы. Это сочеталось с повышением адгезии нейтрофилов. После лечения у больных обеих групп отмечена положительная динамика в отношении экспрессии указанных маркеров, более выраженная у больных, получавших Миелопид (табл. 2).

Таблица 2

Фенотип нейтрофилов в периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом на фоне лечения

Показатели, % 1 Этапы Доноры I иссле-(п=18) дова-' ния Группы больных

Контрольная группа (п=54) Основная группа (в=20)

СЭ95 12,9±0,8 1 II 14,2±1,2 13,2+1,8 14,6+1,3 12,9±0,7

СЭ16 12,4±1,1 1 II 5,5+0,8 7,8±1,4* 5,2±0,8 13,0+1,6**

СЭПЬ 28+1,0 I II 36,0±0,8 29,0±1,8* 35,7+0,8 27,0±1,4*

Таким образом, можно сделать вывод о том, что иммунотерапия с препаратом Миелопид оказывает модулирующее влияние на адгезию, апоптоз нейтрофилов, увеличивает количество функционально активных клеток, что в совокупности влияет на интенсивность и исход воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Как известно, реализация эффекторного потенциала нейтрофильных гра-нулоцитов зависит от состояния кислородного метаболизма, а именно от «респираторного взрыва» Показано, что хемилюминесценция нейтрофилов является информативным методом оценки тяжести течения и прогноза воспалительного процесса

Анализ показателей хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы показал, что до лечения как в контрольной, так и в основной группах имел место исходно высокий уровень спонтанной и стимулированной хемилюминесценции. На фоне лечения у больных обеих групп отмечалось достоверное снижение исходно повышенных показателей Однако более выраженная положительная динамика

отмечалась у пациентов, в комплексном лечении которых был применен Мие-лопид (рис. 5).

Рисунок 5. Динамика показателей хеми-люминесценции нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы больных панкреонекрозом на фоне лечения.

Примечание: здесь и на рисунках 7-8 1 - доноры, 2 - контрольная и основная группа чения, 3 - контрольная группа больных после лечения, 4 - основная группа больных лечения

Рисунок 6. Динамика уровня воспалительных цитокинов в ферической крови больных с креонекрозом на фоне лечения.

про-пери-пан-

до ле-после

Как известно, цитокины определяются в норме практически во всех биологических жидкостях организма в незначительных количествах, и их уровень, как правило, возрастает при воспалении. Определение уровня провоспалитель-ных цитокинов имеет диагностическое значение, а также используется при оценке эффективности проводимой терапии.

В связи с этим нами было исследовано содержание ФНО-а и ИЛ-1)3 в периферической крови больных обеих групп. При этом выявлено повышение уровня ФНО-а в и ИЛ-1)3 в среднем в 5,5 раза. После курса иммунотерапии препаратом Миелопид отмечено снижение до нормальных значений содержания уровня ФНО-а и ИЛ-1/3. У пациентов контрольной группы содержание исследуемых цитокинов изменялось в позитивную сторону, но значений нормы еще не достигало (рис. 6).

Таким образом, проведенные исследования показали, что у больных панкреонекрозом на фоне применения Миелопида происходило более быстрое восстановление показателей иммунного статуса и нормализация клеточного состава цитологического материала, взятого из панкреатогенной полости деструкции, свидетельствующих о более быстрой регрессии иммунной дисфункции.

Влияние топической цитокинотерапии на динамику клинико-иммунологических показателей больных панкреонекрозом

В последние годы с учетом участия цитокинов в патогенезе воспалительных процессов в иммунофармакологии разработано новое направление - цито-кинотерапия.

Известно, что цитокины оказывают преимущественно короткодистантное воздействие Поэтому введение препаратов цитокинов непосредственно в очаг воспаления обеспечивает более максимальный эффект их действия на клеточные элементы, участвующие в иммунных и воспалительных процессах.

Учитывая это, мы разработали метод топической цитокинотерапии с препаратом Суперлимф и применили его в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом.

С учетом проводимого лечения больные были разделены на 2 группы: контрольную и основную В контрольной фуппе были 54 пациента с инфицированным панкреонекрозом, которым применялась только традиционная терапия Основную группу составили 20 пациентов с инфицированным панкреонекрозом, в комплексном лечении которых применяли топическую цитокино-терапию с препаратом Суперлимф.

Оценка динамики регрессии воспалительного процесса показала, что у больных обеих групп в воспалительно-регенераторную фазу заболевания выраженность клинических симптомов составила 9,8±0,43 балла. После лечения у больных, получавших топическую цитокинотерапию, она снизилась до 7,44=0,18 балла, тогда как у больных контрольной группы - только до 8,7±0,42 балла.

После лечения менялся также клеточный состав цитологического материала из полос ги деструкции поджелудочной железы У больных, получавших Суперлимф, количество нейтрофилов снизилось в 2,5 раза, возросло количество лимфоцитов в 4,2 раза и макрофагов - в 5,3 раза, тогда как у больных контрольной группы количество нейтрофилов уменьшилось только в 1,3 раза, а число лимфоцитов и макрофагов возросло лишь в 2 и 3 раза соответственно.

При исследовании показателей иммунного статуса у всех больных были выявлены нарушения как со стороны системного, так и местного иммунитета.

Так, до лечения у больных обеих групп отмечалось уменьшение в периферической крови количества лимфоцитов CD4\ CD8\ CD20' фенотипа и экспрессии ими активационных маркеров, гиперэкспрессия CD95, резкое снижение экспрессии CD 16. На фоне топической цитокинотерапии наблюдалась нор-

мализация исследуемых показателей по сравнению с больными контрольной группы, у которых их положительная динамика была незначительной (табл 3)

Таблица 3

Динамика показателей иммунного статуса больных с инфицированным панкреонекрозом на фоне лечения

Показатели, % Доноры (п=18) Этапы исследования Группы больных

Контрольная группа (п=54) Основная группа (п=20)

CD4 40,0±1,7 I II 16,7+1,9 23,8+1,6* 17,5±1,7 41,88±1,9**

CD8 26,0±1,5 I II 11,2± 1,7 16,6±1,1* 12,5±1,8 30,25±1,3**

CD20 15,0+1,4 I II 9,0+1,2 9,3+0,8* 9,0+1,4 16,0+1,4**

CD25 5,0+1,1 I II 2,8±0,1 3,2±0,9* 3,2±0,3 5,8±0,2**

HLA-DR 22,5±1,2 I II 14,5+1,6 17,1±1,6* 15,25±1,4 25,9±1,5**

CD95 12,0±1,9 I II 15,7±1,7 16,2±1,5* 16,75±1,7 12,7±1,0**

CD16 15,0±1,4 I II 3,4±0,5 9,5±1,6* 3,0±1,4 16,2±2,4*

При изучении фенотипа нейтрофилов периферической крови у больных обеих групп были выявлены гиперэкспрессия С095, СОНЬ и снижение в 2 раза экспрессии С016 на нейтрофилах. После лечения более быстрая нормализация исследуемых показателей отмечалась также у больных, получавших топическую цитокинотерапию (табл. 4).

Таблица 4

Фенотип нейтрофилов в периферической крови больных

Показатели, % Доноры (п=18) Этапы исследования Группы больных

Контрольная группа(п=54) Основная группа (п=20)

CD95 12,9+0,8 I II 14,2±1,2 13,2+1,8 15,1±1,1 13,4±0,7

CD16 12,4+1,1 I II 5,5±0,8 7,8±1,4* 5,9±0,9 13,0±1,6**

CDllb 28,0±1,0 I II 36,0±0,8 29,0±1,8* 36,7+1,1 28,8±1,6*

Для оценки состояния иммунной защиты поджелудочной железы была изучена динамика фенотипа и функциональной активности нейтрофилов смывов из панкреатогенной полости деструкции на фоне различных методов лечения. Полученные результаты показали, что до лечения у больных обеих групп были выражены апоптоз и адгезия нейтрофилов смыва. На фоне топической цитокинотерапии отмечалось достоверное снижение апоптоза и адгезии по сравнению с больными контрольной группы, у которых их динамика была менее выражена

Кроме этого, на фоне лечения у больных обеих групп отмечалось снижение исходно повышенных показателей как спонтанной, так и индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов крови и смывов из полости деструкции Однако положительная динамика была более выражена у пациентов, получавших

топическую цитокинотерапию (рис."

10 --

Г+1

" I , »

II

]ш 1,1

г з 4

СЭЕЭ ДОМ Слоети-на» ТГ32*ров»С-гимулирОМин»« | —*— СУМ» __ш см| Они^пироши«» |

Рисунок 7. Динамика показателей > милюминесценции нейтрофилов г риферической крови и смывов из г лости деструкции поджелудочной л лезы больных панкреонекрозом на 4 не лечения.

Как уже отмечалось, цитокины являются универсальными регуляторами течения и исхода воспалительного процесса. Исходя из этого, нами было изучено содержание ФНО-а, ИЛ-1/3 в периферической крови и смывах из панкреатогенной полости деструкции При этом уровень этих цитокинов у больных обеих групп был исходно повышен в среднем в 5,5 раза.

После курса топической цитокинотерапии отмечено снижение до нормальных значений содержания в периферической крови ФНО-а и ИЛ-1У пациентов же, получавших традиционное лечение, содержание исследуемых цитокинов изменялось в позитивную сторону, но значений нормы они не достига-

¡ДачМчФНОв г—1 цгж, КГ —«-Г.ДД,й-т.а • » ..щр'

Рисунок 8. Динамика уровня провос-палительных цитокинов в периферической крови и смывах из полости деструкции поджелудочной железы больных с инфицированным панкреонекрозом на фоне лечения.

ли В смывах из панкреатогенной полости деструкции после лечения у больных, получавших топическую цитокинотерапию, отмечалось снижение уровня ФНО-ск в 4,5 раза, ИЛ-1/3 в 7,5 раза, тогда как у больных контрольной группы -только в 2,3 и 3,8 раза соответственно (рис. 8)

Таким образом, топическая цитокинотерапия способствует более быстрому восстановлению исходно нарушенных показателей системного иммунитета и иммунной защиты поджелудочной железы по сравнению с традиционным лечением.

В заключение можно сделать вывод, что применение Миелопида и топической цитокинотерапии способствует более быстрой регрессии иммунной дисфункции и воспалительного процесса в поджелудочной железе

ВЫВОДЫ

1 Инфицированный панкреонекроз сопровождается выраженными изменениями показателей системного и местною иммунитета уменьшением в периферической крови количества CD4, CD8, CD20 лимфоцитов, снижением экспрессии активационных маркеров (CD25\ HLA-DR+), повышением числа CD95+ клеток, увеличением содержания в сыворотке крови и смывах из панкреатогенной полости деструкции ФНО-а, ИЛ-1 (3, а также нарушением функциональной активности нейтрофилов крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы (снижением кислородза-висимого метаболизма, повышением апоптоза)

2 Препарат Миелопид и его фракция МП-3 оказывают in vitro дозозависи-мое иммуномодулирующее влияние на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом, а также продукцию ими провоспали-тельных цитокинов (ФНО-а и ИЛ-1(3).

3 Применение в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом препарата Миелопид способствует восстановлению в периферической крови количества CD4*, CD8*, CD20* лимфоцитов, экспрессии ими активационных маркеров (CD25*, HLA-DFTj, нормализации функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы, а также содержания в сыворотке крови провоспалительных цитокинов (ФНО-а и ИЛ-1/3)

Топическая цитокинотерапия с препаратом Суперлимф у больных с инфицированным панкреонекрозом способствует восстановлению в периферической крови числа лимфоцитов С04+, СП8+, С020\ СЭ25+, НЬА-ОЯ1 фенотипа, нормали ¡ации функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы, а также уровня ФНО-а и ИЛ-1/3 в сыворотке крови и смыве из полости деструкции больных с инфицированным панкреонекрозом. Применение Миелопида и топической цитокинотерапии в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза в воспалительно-регенераторную фазу заболевания способствует более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Г целью более быстрого купирования иммунной дисфункции и воспали-гечыюго процесса в поджелудочной железе в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза в воспалительно-регенераторную фазу заболевания (когда отмечается очищение панкреатогенной полости деструкции от гнойно-некротических масс) рекомендуется применять иммунотерапию с препаратом Миелопид и/или топическую циюкино!ерапию с препаратом Суперлимф

Препарат Мие юпид рекомендуется вводить внутримышечно в дозе 0,001 г на 2 мл физиологического раствора один раз в сутки в течение 10 дней

Препарат Суперлимф рекомендуется вводить ежедневно в полость деструкции поджел\дочной жепезы (медленно) в дозе 100 мкг на 5 мл физиологическою раствора в течение 5 дней

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Иванов, И.С Использование хемилюмннесценции в качестве критерия определения оптимального времени удаления дренажей у больных с панкреонекрозом / И С Иванов, Е.П. Розберг, И.А Иванова // Материалы 67-й межвуз. конф студентов и молодых ученых. - Ч. 2. - Курск, 2002. - С. 163-164.

2. Иванов, И.С Использование компьютерных систем хранения и анализа данных для определения эффективности хирургической тактики при панкреонекрозе / И С Иванов, С С Пучнин, И А Иванова // Курский науч -практ вестн «Человек и его здоровье». -

2002. -№ 1,-С. 20-23.

3. Ранговая система прогнозирования результатов лечения и оценки тяжести поступивших больных с панкреонекрозом / С В. Иванов, Г.А. Бондарев, И А. Иванова и др. // Актуальные вопросы научно-практической медицины. - Орел, 2002. - С. 204-207.

4. Иванов, И.С Оценка достоверности результатов применения ранговых систем в диагностике панкреонекроза / И.С. Иванов, Е.П. Розберг, И.А. Иванова // Актуальные вопросы хирургической гастроэнтерологии, материалы обл науч.-практ. конф - Курск,

2003.-С. 33-34.

5. Юдина, СМ Клинико-иммунологическая эффективность иммунотерапии в комплексном лечении панкреонекроза / С.М Юдина, Е.П. Розберг, И.А. Иванова // Сб. работ 69-й итог науч сес КГМУ. - Ч. 1. - Курск, 2004. - С 125-126

6. Иванов, И.С. Результаты лечения больных с осложнениями панкреонекроза / И.С. Иванов, Е П Розберг, И А. Иванова // Сб работ 69-й итог. науч. сес. КГМУ - Ч. 1 - Курск, 2004 - С. 228-229

7 Иванова, И А. Иммунные нарушения и их коррекция у больных с панкреонекрозом / И.А Иванова, С М Юдина, Е П Розберг // Ученые записки Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии Орел, 2004 - С. 49-55

8 Клннико-иммунолот ическая эффективность применения миелопида в комптексном лечении панкреонекроза / С М Юдина, И А Иванова. Р П Розберг, И Г Иванов /' Рациональное использование лекарств материалы Рос науч -практ конф - Пермь. 2004 - С 52-53.

() Иванов, И С Результаты лечения больных с осложнениями панкреонекроза ' И Г Иванов. Е П Розберг, И А Иванова // Санкт-Петербургские научные чтения 2004 сб тез У1еждунар науч -практ конф студентов и молодых ученых - СПб , 2004 - С. 6.

10 Иванов И С Лечение осложненных форм деструктивного панкреатита ' И С Иванов, Р Г Кокин, И А Иванова // Современные вопросы медицинской науки и практики' сб науч. тр регион, конф, мосвяш 100-аетию со дня рождения ГЕ Островерхова. -Курск. 2004 ( 70-7)

11 Ютина, С М Применение миелогтида в комплексном лечении больных с панкреонекровом / С М Юдина, И А Иванова. Е П Розберг // Сб тр юбилсиной науч конф КГМУ, посвящ 70-летию КГМУ - Курск. 2005 С 102-103

12 Гавриленко О В Нарушения в системе клеточного иммунитета при панкреонекрозе ' О В Гавриленко, И А Иванова Молодежная наука и современность' юбилейная межвуз конф студентов и мгподых ученых, посвящ 70-летию КГМУ. - Курск, 2005. - С 25.

Лицензия ЛР № 020862 or 30.04.99 i Сдано в набор 12 05 2005 г Подписано в печать 13 05 2005 г Формат 30х42'/8 Бумага офсетная Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Уел печ.л. 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 79А. Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г Курск, ул К Маркса, 3.

1 0 5 9 5

РНБ Русский фонд

2006-4 9228

Проблема диагностики и лечения панкреонекроза является одной из наиболее актуальных в хирургической гастроэнтерологии. Панкреонек-роз - одно из самых тяжелых гнойно-септических заболеваний брюшной полости, летальность при котором даже в специализированных хирургических стационарах остается высокой, достигая 20-25%, причем около 70% летальных исходов определяются развитием гнойных осложнений и сепсиса (13, 85, 118,165, 197).

Как известно из данных литературы, одной из причин тяжести течения и исходов панкреонекроза является вторичная иммунологическая недостаточность, развивающаяся с первых часов развития заболевания (2, 3, 111, 123, 197).

Причинами развития тяжелого вторичного иммунодефицита в условиях формирования панкреонекроза является массивная антигенемия, приводящая к параличу иммунного ответа, так как в условиях избытка антигенов блокируются структуры антигенного распознавания зрелых иммунокомпе-тентных клеток. Сопутствующий панкреонекрозу Т-клеточный иммунодефицит, формирующийся с первых часов развития заболевания, является прогностическим критерием его течения и исхода. В генезе вторичного иммунодефицита, развивающегося на ранней стадии заболевания, ведущее значение имеет также мощная продукция провоспалительных цитокинов (ИЛ-1(3, ФНО-а, ИЛ-6), генерализующих системный воспалительный ответ и усиливающих дисбаланс факторов врожденного и приобретенного иммунитета и, как следствие, формирование множественных органных дисфункций (13, 22, 65, 118, 123).

Прогноз при панкреонекрозе зависит как от объема поражения поджелудочной железы, распространенности гнойно-некротического процесса в самом органе и окружающих тканях, так и от степени иммунных нарушений (2, 14, 53,117,123).

В связи с этим, разработка методов иммунотерапии с целью восстановления функциональной полноценности иммунной системы, является важной частью комплексной терапии панкреонекроза (26, 34, 102, 109, 117).

Вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: оценка клинико-иммунологической эффективности применения эндогенных иммуномодуляторов в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Исследовать некоторые механизмы развития вторичного иммунодефицита у больных с инфицированным панкреонекрозом.

2. Изучить in vitro влияние эндогенных иммуномодуляторов (препарата Миелопид и его фракции МП-3) на состояние фенотипической и функциональной активности нейтрофилов и лимфоцитов больных с инфицированным панкреонекрозом.

3. Разработать метод топического применения препарата комплекса цито-кинов Суперлимф у больных с инфицированным панкреонекрозом.

4. Провести сравнительную оценку клинической эффективности применения Миелопида и топической цитокинотерапии в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза.

5. Исследовать влияние иммунотерапии с препаратом Миелопид и топической цитокинотерапии на динамику показателей иммунного статуса больных с инфицированным панкреонекрозом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые in vitro показано иммуномодулирующее влияние препарата

Миелопид и его фракции МП-3 на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом.

Установлено, что одним из факторов развития вторичной иммунологической недостаточности у больных с инфицированным панкреонекрозом является нарушение функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы.

Разработан и внедрен в клиническую практику метод топической ци-токинотерапии с препаратом Суперлимф в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом. Проведена оценка влияния Миело-пида и топической цитокинотерапии на регрессию воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Выявлено положительное влияние методов иммунотерапии на динамику показателей системного и местного иммунитета больных с инфицированным панкреонекрозом.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

В результате проведенных исследований патогенетически обосновано применение Миелопида и топической цитокинотерапии в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом, способствующих более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

Препарат Миелопид и его фракция МП-3 оказывают in vitro дозоза-висимое иммуномодулирующее влияние на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом.

Одним из факторов развития вторичной иммунологической недостаточности у больных с инфицированным панкреонекрозом является нарушение функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из панкреатогенной полости деструкции.

Применение в комплексном лечении инфицированного панкреонек-роза препарата Миелопид и топической цитокинотерапии с препаратом Суперлимф способствует более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Топическая цитокинотерапия и применение Миелопида в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза способствуют, по сравнению с традиционной терапией, более быстрой положительной динамике показателей системного и местного иммунитета у больных с инфицированным панкреонекрозом.

ВНЕДРЕНИЯ. Способ топической цитокинотерапии внедрен в практику лечебной работы отделения гнойной хирургии КОКБ и учебный процесс кафедр иммунологии и аллергологии и хирургических болезней №1 КГМУ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения работы доложены и обсуждены на 67-й межвузовской конференции студентов и молодых ученых (Курск, 2002), областной научно-практической конференции (Курск, 2003), 69-й итоговой научной сессии КГМУ (Курск, 2004), Российской научно-практической конференции (Пермь, 2004), международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых (Санкт-Петербург, 2004), 70-й юбилейной научной конференции КГМУ (Курск, 2005), 70-й межвузовской конференции студентов и молодых ученых (Курск, 2005).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них 1 - в центральной, 3 - в региональной и 8 - в местной печати.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 рисунками, 12 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, а также библиографического указателя, включающего 158 отечественных и 103 зарубежных источников.

ВЫВОДЫ.

1. Инфицированный панкреонекроз сопровождается выраженными изменениями показателей системного и местного иммунитета: уменьшением в периферической крови количества CD4, CD8, CD20 лимфоцитов, снижением экспрессии активационных маркеров (CD25+, HLA-DR+), повышением числа CD95+ клеток, увеличением содержания в сыворотке крови и смывах из панкреатогенной полости деструкции ФНО-а, ИЛ-1|3, а также нарушением функциональной активности нейтрофилов крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы (снижением кислородзависимого метаболизма, повышением апоптоза).

2. Препарат Миелопид и его фракция МП-3 оказывают in vitro дозозависимое иммуномодулирующее влияние на фенотип и функциональную активность лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови больных с инфицированным панкреонекрозом, а также продукцию ими провоспалительных цитокинов (ФНО-а и ИЛ-ip).

3. Применение в комплексном лечении больных с инфицированным панкреонекрозом препарата Миелопид способствует восстановлению в периферической крови количества CD4+, CD8+, CD20+ лимфоцитов, экспрессии ими активационных маркеров (CD25+, HLA-DR+), нормализации функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы, а также содержания в сыворотке крови провоспалительных цитокинов (ФНО-а и ИЛ-ip).

4. Топическая цитокинотерапия с препаратом Суперлимф у больных с инфицированным панкреонекрозом способствует восстановлению в периферической крови числа лимфоцитов CD4+, CD8+, CD20+,

CD25+, HLA-DR+ фенотипа, нормализации функциональной активности нейтрофилов периферической крови и смывов из полости деструкции поджелудочной железы, а также уровня ФНО-а и ИЛ-ip в сыворотке крови и смыве из полости деструкции больных с инфицированным панкреонекрозом.

5. Применение Миелопида и топической цитокинотерапии в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза в воспалительно-регенераторную фазу заболевания способствует более быстрой регрессии воспалительного процесса в поджелудочной железе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью более быстрого купирования иммунной дисфункции и воспалительного процесса в поджелудочной железе в комплексном лечении инфицированного панкреонекроза в воспалительно-регенераторную фазу заболевания (когда отмечается очищение панкреатогенной полости деструкции от гнойно-некротических масс) рекомендуется применять иммунотерапию с препаратом Миелопид и/или топическую цитокинотерапию с препаратом Суперлимф.

2. Препарат Миелопид рекомендуется вводить внутримышечно в дозе 0,003г на 2 мл физиологического раствора один раз в сутки в течение 10 дней.

3. Препарат Суперлимф рекомендуется вводить ежедневно в полость деструкции поджелудочной железы (медленно) в дозе 100 мкг на 5 мл физиологического раствора в течение 5 дней.