Автореферат и диссертация по медицине (14.00.43) на тему:Клинико-генетические особенности формирования бронхообструктивного синдрома при моногенных (муковисцидоз) и мультифакториальных (бронхиальная астма) заболевания легких
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.43
Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-генетические особенности формирования бронхообструктивного синдрома при моногенных (муковисцидоз) и мультифакториальных (бронхиальная астма) заболевания легких
На правах рукописи
КЕЛЕМБЕТ Наталья Анатольевна
КЛИНИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ БРОНХООБСТРУКТИВНОГО СИНДРОМА ПРИ МОНОГЕННЫХ (МУКОВИСЦИДОЗ) И МУЛЬТИФАКТОРИАЛЬНЫХ (БРОНХИАЛЬНАЯ АСТМА) ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЕГКИХ
Пульмонология 14.00.43 Генетика 03.00.15
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург 2005 г.
Работа выполнена в НИИ пульмонологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Паклова и в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИ акушерства и гинекологии РАМН им Д.О.Огго.
Научные руководители: доктор медицинских наук,
профессор Татьяна Евгеньевна Гембицкая
доктор биологических наук Татьяна Эдуардовна Иващенко
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,
профессор Василий Иванович Трофимов
доктор биологических наук,
профессор Виктория Николаевна Горбунова
Ведущее учреждение.
ГОУ ДО Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Министерства здравоохранения РФ
Защита диссертации состоится «Ц ^ » с лХрл 2005 г в ■/ Я часов на заседании диссертационного совета Д 208 090 02 при Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. акад И.П Павлова в НИИ пульмонологии (197089, Санкт-Петербург, ул. Рентгена, 12)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им акад. И П. Павлова (197089, Санкт-Петербург, ул. Л.Толстого, д. 6/8)
Автореферат разослан «_»_2005 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, Доктор медицинских наук, профессор
Альберт Леонидович Александров
/////Ж
Актуальность проблемы.
Хронические неспецифические заболевания легких, протекающие с бронхообструктивным синдромом (бронхиальная астма, хронический обструктивный бронхит, муковисцидоз) являются социально значимой проблемой современной медицины Последнее обусловлено их высокой распространенностью, трудностями лечения, профилактики, потерей трудоспособности в молодом и зрелом возрасте, инвалидизаиией и т д (Кокосов А.Н. и соавт 2000, Илькович М М и соавт 2003, Чучалин А Г, 2004) Несмотря на углубленное изучение механизмов формирования обструкции бронхов на субклеточном, клеточном, органном, организменном уровнях и несомненные успехи достигнутые в понимании патогенеза обструкгавного синдрома (Федосеев Г Б, Трофимов В И, 2003, Чучалин А Г., 2004), остается еще множество нерешенных вопросов и дискутабельных проблем В последние годы в научной литературе делается акцент на значительную или даже преобладающую роль наследственных факторов в развитии воспалительной составляющей обструктивного синдрома дыхательных путей или, по крайней мере, предрасположенности к возникновению обструкции при воздействии ряда неблагоприятных факторов внешней среды, при наследственных дефектах системы детоксикации ксенобиотиков, изменении регуляции иммунного ответа, нарушении синтеза оксида азота Необходимость изучения полиморфных систем организма, ответственных за детоксикацию различных ксенобиотиков (аллергенов, продуктов табачного дыма, лекарственных веществ и тд) диктуется, прежде всего, данными эпидемиологических исследований об их значимости в патогенезе заболеваний легких Случаи семейных форм хронических неспецифических заболеваний легких, в частности бронхиальной астмы, стимулировали серию работ по выявлению связи этиопатогенеза этого заболевания с различными полиморфными системами организма Фенотип ичес кие проявления даже такого генетически четко очерченного наследственного заболевания как муковисцидоз, также зависят от состояния многих генных комплексов Исследование особенностей генотипа и фенотипа больных муковисцидозом крайне важны для прогнозирования течения заболевания и профилактики муковисцидоза Комплексное изучение роли различных систем генов, определяющих функционирование системы детоксикации ксенобиотиков, регуляции иммунного ответа и синтеза оксида азота поможет по-новому подойти к пониманию патогенеза заболеваний легких, оптимизировать методы их диагностики, лечения и профилактики В нашей работе, проанализированы клинические особенности и некоторые генетические механизмы, влияющие на развитие и тяжесть течения бронхообструктивного синдрома при различных
по генетической природе заболеваниях моногенном (муковисцидоз) и мультифакториальном (бронхиальная астма)
Цель исследования:
Оценить возможное влияние полиморфизма некоторых генов, кодирующих ферменты системы детоксикации ксенобиотиков, цитокины и ферменты контролирующие продукцию оксида азота, на формирование наследственной предрасположенности и течение бронхообструктивного синдрома при муковисцидозе и бронхиальной астме
Задачи исследования:
1 Изучить особенности аллельного полиморфизма генов GST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS и их ассоциативную связь с формированием обструктивных изменений при муковисцидозе
2 Оценить возможную ассоциативную связь аллельного полиморфизма генов OST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS с развитием и течением бронхиальной астмы
3 Проанализировать риск развития воспалительного процесса, его тяжесть у мужчин и женщин в зависимости от полиморфных вариантов генов системы детоксикации, цитокинов, ферментов синтеза оксида азота у больных муковисцидозом и бронхиальной астмой
4 Определить особенности формирования и течения бронхообструктивного синдрома при мультифакториальной (БА) и моногенной (MB) бронхолегочной патологии с учетом генетических составляющих
Положения, выносимые на защиту
1 «Нулевой» генотип GST Т1 гена достоверно чаще встречается у больных бронхиальной астмой женского пола
2 Полиморфные варианты генов, кодирующих синтез интерлейкина 4 и альфа цепи его рецептора, такие как -590Т (IL 4) и 576R(IL 4 Ra) вовлечены в патогенез бронхиальной астмы, а их сочетание повышает риск развития заболевания в 3 раза
3 Распределение полиморфных вариантов генов IL-4 и IL-4Ra отличается между пациентами мужского и женского пола Наличие определенных аллелей этих генов повышает риск развития бронхиальной астмы у мужчин более чем в 20 раз
4 Сочетание генотипов >12/>12 и 4b/4b по генам NOS 1 и eNOS у больных муковисцидозом является генетическим маркером хронической колонизации дыхательных путей Ps. Aeruginosa.
5 Сочетание «неблагоприятных» аллелей генов GST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS является важной составной частью генетической структуры подверженности к развитию бронхиальной астмы
Научная новизна
Впервые охарактеризованы в сравнительном аспекте клинические и генетические особенности бронхообструктивного синдрома при мультифакториапьной и моногенной легочной патологии Впервые изучена роль некоторых генов "предрасположенности" (GST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS) в формировании обструктивного синдрома при муковисцидозе и бронхиальной астме Впервые выявлена ассоциация генотипа 4а/4а гена eNOS с тяжестью течения бронхиальной астмы Впервые обнаружены достоверные различия в распределении полиморфных вариантов изученных генов у больных бронхиальной астмой разного пола
Практическая значимость работы
Показана целесообразность определения полиморфных вариантов генов GST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS для выявления лиц, предрасположенных к развитию бронхиальной астмы, для разработки новых методов лечения БА, например, антицитокиновой терапии, для создания комплексной программы по индивидуальной первичной профилактике бронхиальной астмы с учетом генетических характеристик, прогнозировании развития БА у потомства Выявленные особенности корреляции генотипа и фенотипа у больных муковисцидозом важны для прогнозирования течения заболевания и профилактики муковисцидоза, открывают перспективы для разработки новых методов лечения, например, ингаляции оксида азота.
Апробация и внедрение результатов
Результаты работы были доложены на заседании пульмонологической секции санкт-петербургского научно-практического общества терапевтов им СП Боткина (Санкт-Петербург, Россия, 2003г), на 13 национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, Россия, 2003), на научно-практической конференции «Актуальные вопросы пульмонологии и аллергологии - врачу обшей практики VIII Булатовские чтения» (Санкт-Петербург, Россия, 2003), на 14 национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2004), на 7 национальном конгрессе по муковисцидозу (Воронеж, 2005), на Славяно-Балтийский научном форуме «Гастро-2005» (Санкт-Петербург, 2005), на XIII, XV Европейском респираторном конгрессе (Вена, 2003,, Копенгаген, 2005)
По теме диссертации опубликовано 9 работ
Структура и объем диссертация
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 79 отечественных и 194 зарубежных литературных источников Работа изложена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 таблицами, 6 рисунками и 33 диаграммами
Материалы и методы исследования Для выполнения поставленной цели сформированы группы пациентов страдавшие муковисцидозом, бронхиальной астмой и контрольная группа здоровых доноров В первую группу вошли 37 больных МВ с различным генотипом, степенью тяжести заболевания, в возрасте от 5 до 24 лет, в группе преобладали тяжелые формы МВ (57%), мажорная мутация <1е!Р508 в гомозиготном или компаундном состоянии определялась в 86,5% случаев Вторую группу составили 47 больных БА различной степени тяжести, в возрасте от 14 до 47 лет, в группе преобладали легкие формы БА (53,2%) В контрольную группу включены 69 здоровых доноров, жителей Санкт-Петербурга и Северо-западного региона РФ в возрасте от 17 до 35 лет, без аллергических и хронических заболеваний органов дыхания в анамнезе Отбор и наблюдение пациентов осуществлялся диссертантом лично на базе отдела терапевтической пульмонологии НИИ пульмонологии СТТбГМУ им акад И П Павлова (руководитель - д м н , проф Т Е Гембицкая) и отделения пульмонологии Детской городской больницы Святой Ольги (зав. отделением - к м н А В Орлов ) в период 2001 - 2004 тт Диагноз МВ и БА был установлен на основании комплексного обследования, включавшего данные анамнеза, общеклинические, лабораторные методы, исследование функции внешнего дыхания, иммунологическое исследование; для диагностики МВ также применялось исследование хлоридов потовой жидкости, разности назальных потенциалов, микробиологическое обследование, рентгенографическое исследование, специальные генетические методы
Специальные методы исследования. Выделение ДНК проводили по стандартной методике (ватЬгоок А, 1989) с некоторыми модификациями Амплификации проводили на программируемом термоциклере фирмы «ДНК-технология» (Москва) при следующих условиях'
• Фрагменты генов ОБП 1(271 по), 08ТМ1(315 по), СПН АР508 (в качестве внутреннего контроля)
предварительная денатурация - 94°С (4 мин), 27 циклов амплификации' 94°С (40 сек) - денатурация, 62°С (40 сек) - отжиг праймеров, 72°С (40 сек) - элонгация, и заключительный синтез 72°С (3 мин).
• Фрагмент гена IL-4 (195 п.о.)
предварительная денатурация - 95°С (4 мин), 32 циклов амплификации' 95°С (30 сек) - денатурация, 50°С (50 сек) - отжиг праймеров, 71°С (1мин 10 сек) - элонгация, и заключительный синтез 72°С (3 мин)
• Фрагмент гена IL-4R (125 по)
предварительная денатурация - 95°С (4 мин), 32 циклов амплификации- 95°С (30 сек) - денатурация, 50°С (50 сек) - отжиг праймеров, 71°С (1мин 10 сек) - элонгация, и заключительный синтез 72°С (3 мин).
• Фрагменты генов NOS 1 и eNOS
после денатурации - 94°С (7 мин), 32 цикла амплификации в режиме- 95°С (50 сек ) - денатурация; 58°С (50 сек.) - отжиг праймеров; 72°С (50сек) - элонгация и заключительным синтез 72°С (5 мин.)
Таблица 1.
Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для проведения ПЦР
Ген, локализация Полиморфизм Структура олигопраймеров
GSTMl(lpl3.3) делеция F ОАА СТС ССТ GAA AAG СТА AAG С R GTT GGG СТС AAA TAT AGG GTG G
GSTT1 (22ql 1 2) деления F TTC CTT ACT GGT ССТ CAC АТС ТС R TCA CCG GAT CAT GGC CAG CA
IL-4 (5q31.1) С-590Т в промоторной области гена И-4 (замена СнаТ) F 5. TGG GGA AAGATA GAG TAA TA 3 R 5. TAA ACT TGGGAG AAC ATG GT 3
IL-4R (16pl2) 0576Я (замена глутамина (0) на аргинин (Я) в 576 положении аминокислотной последовательности а цепи рецептора для 1Ь-4) F GGCCCCCACCAGTGGCGATC R GCAAGCAGGCTTGAGAAGGC
eNOS (7q35-36) 4 и 5 повторов по 27 п н в 4интроне F- 5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3' R 5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3*
NOS1 (12q24) Различное число ААТ повторов в 20 интроне (от 9 до 16). F TGGCAAACATGAAAATCAAGGTAT R TGAACCAGCCCTCCTAATAA
Полиморфные варианты генов П,-4 и 1Ь-4Я определяли после обработки продуктов амплификации эндонуклеазами рестрикции в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя фермента. В работе был предложен новый модифицированный вариант идентификации (}576 и Я576 аллелей гена 1Ь-4Я путем использования набора олигопраймеров, позволяющих создать искусственный сайт рестрикции для эндонуклеазы рестрикции В^Ш.
Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием пакетов программ 81аЙ5Ш;а 5 О и Ехе1 7 О Для сравнения распределения изученных генотипов и аллельных вариантов генов между группами использовали критерий х2 В случае необходимости х2 вычисляли по формуле с поправкой Иейтса Относительный риск развития заболевания (ОЯ) рассчитывали по формуле ОК=-а/Ь*с)/с где а - число лиц с наличием и Ь - с отсутствием маркера среди больных, с и (1 -число лиц с наличием и отсутствием соответственно данного маркера среди лиц контрольной группы ОТ? представлен с 95% доверительным интервалом Границы доверительного интервала определены по формуле'
Результаты исследования и их обсуждение.
Исследование функции внешнего дыхания (ФВД) является важным диагностическим критерием тяжести бронхообструкгивного синдрома у больных МВ и очень важно для мониторирования степени обструкции у пациентов, страдающих БА Необходимо подчеркнуть, что обследование ФВД и кпинико-функциональная оценка состояния больных проводилась в период ремиссии При исследовании ФВД (табл 2) среднее значение жизненной емкости легких (ЖЕЛ) в группе больных МВ соответствовало легким нарушениям ЖЕЛ, а в группе больных БА - нормальным значениям ЖЕЛ При этом нормальные значения ЖЕЛ отмечались у 36 больных БА (76,6%) и лишь у 9 больных МВ (24,3%) Среднее значение объема форсированного выдоха (ОФВ1) в группе больных МВ соответствовало умеренным нарушениям бронхиальной проходимости, в группе больных БА соответствовало условной норме Нормальные показатели ОФВ1 отмечались у 29 (61,7%) больных БА и у 12 (32,4%) больных МВ
Таблица 2
Сравнительный анализ исследования ФВД в группах больных МВ и БА
ЖЕЛ ОФВ1
Группы больных (К) Среднее (% от К) Мт (% от >0 Мах (% от !Ч) Среднее (% от Ы) Мт (% от К) Мах (•/.от 14)
Больные МВ (п=34) 72,88±7,62 40,1 108 66,31±8,1 26,1 128
Больные БА (п=47) 98,24±13,9 55,2 136,1 86,09±15,68 44,6 130,4
Таким образом, для больных МВ характерен более тяжелый бронхообструктивный синдром, обусловленный основным генетическим дефектом, который проявляется клинически уже в раннем детском возрасте.
При сравнительном анализе иммунологических данных было выявлено достоверное повышение концентрации уровня общего IgE и иитерлейкина 4 у больных Б А, что подчеркивает определяющее значение аллергического компонента воспаления дыхательных путей у больных БА, тогда как у больных MB аллергический компонент обструкции встречается значительно реже
Анализ частот генотипов генов GSTT1 и GSTM1 в группах больных MB, БА и в контрольной группе.
При анализе делений генов GST Т1 и GST Ml выявлено, что частота гомозигот по нулевому аплелю GST Т1 среди женщин, больных БА (41,7%) достоверно выше, чем у пациентов мужского пола (9,1%) р<0,05) и несколько выше, чем у женщин в
контрольной группе (23,3%) Частота гомозигот по нулевому аплелю GST Ml статистически не отличалась в группах больных БА независимо от степени тяжести и пола от контрольной группы При анализе распределения сочетаний генотипов GSTT1 и GSTM1 у пациентов с бронхиальной астмой гомозиготность по нулевым аллелям GST Т1 и GST Ml отмечается достоверно чаще, чем в контрольной группе (19,1% и 7,2% соответственно), особенно в группе с легким течением БА (24,0%) ("¿"4,9%, р<0,05; OR=4,04, CI: 1,18 - 13,78) Функционально неполноценный генотип GST Т1 0/0, GST Ml 0/0 чаше встречался у женщин (22,2%) по сравнению с мужчинами (9,1%) и достоверно отличался от контрольной группы (женщины) (3,3%) р<0,05, OR=8,25, CI- 1,28 -
53,29) В контрольной группе не было выявлено достоверных отличий в распределении частот генотипов генов GST Т1 и GST Ml между подгруппами мужского и женского пола В группе больных MB достоверных отличий при анализе делеций генов GST Т1 и GST Ml выявлено не было
Таким образом, отмечена ассоциация «нулевого» генотипа GST Т1 гена с развитием бронхиальной астмы у женщин
Анализ полиморфизма генов иитерлейкина 4 (IL-4) и альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (IL-41la) в группах больных MB, БА я в контрольной группе.
При анализе частот аллелей гена IL-4 в группе больных MB отмечено, что среди женщин частота Т-аллеля (ш) составляет 29,4%, что достоверно выше, чем у мужчин (10,0%) (x*-4,51, р<0,05) При анализе распределения генотипов по гену IL-4 было выявлено, что гомозиготы по Т-аллелю встречаются только в группе больных женского пола (17,6%), тогда как среди мужчин данный генотип не встречался 0^=3,84, р<0,05) Это указывает на большое значение аллергического компонента воспаления дыхательных путей для женщин и возможно связано с более тяжелым течением муковисцидоза и более низкой продолжительностью жизни у женщин При анализе частот аллелей и генотипов
гена IL-4Ra не было выявлено четкой зависимости между полиморфными вариантами гена альфа цепи рецептора интерлейкина 4 и особенностями клинической картины при муковисцидозе
В группе больных БА частота Т-аллеля (т) составляет 29,8%, что выше, чем в контрольной группе (18,1%), но при статистической обработке достоверных отличий получено не было Однако распределение генотипов по гену IL-4 у больных БА достоверно отличалось от такового в контрольной группе 12,96, df2, р<0,01) Частота генотипа - 590С/Т (m/n) IL-4 достоверно увеличивается в группе больных бронхиальной астмой (51,1%) по сравнению с контрольной группой (27,5%) (OR = 2,74, CI 1,27 - 5,92) Среди мужчин частота Т-аллеля (ш) гена IL-4 составляет 40,9%, что несколько выше, чем у женщин (26,4%) и достоверно выше, чем у мужчин в контрольной группе (19,2%) (Х2=4,42, р<0,05, OR = 2,91; CI 1,07 - 7,86) Интересно отметить, что распределение генотипов по гену IL-4 у больных БА в зависимости от пола отличалось с высокой достоверностью (х2^ 10,06, ¿(2, р<0,01), тогда как в контрольной выборке таких закономерностей отмечено не было Выявлено, что гетерозиготы по наличию Т-аллеля (т) в группе больных мужского пола (81,8%) встречались достоверно чаще, чем среди женщин с БА (41,7%) и достоверно чаще, чем у мужчин в контрольной группе (28,2%) (5^=10,27, р<0,01) Согласно коэффициенту соотношения шансов, риск развития аллергической бронхиальной астмы у мужчин при наличии генотипа - 590С/Т IL-4 увеличивается более чем в 11 раз (OR =11,5; CI 2,57 - 50,87)
При анализе частот аллелей гена IL-4Ra отмечается некоторое повышение частоты аллели 576R (ш) у больных БА (26,6%), по сравнению с контрольной группой (17,4%) Группы с различной степенью тяжести БА статистически не отличались друг от друга. При анализе частот генотипов по гену IL~4Ra у мужчин больных БА выявлено достоверное повышение частоты аллеля 576R (т) (45,5%) по сравнению с пациентами женщинами (20,8%) р<0,05) и с мужчинами контрольной группы (15,4%)
{■¿=9,04, р<0,01; OR = 4,58; CI 1,69 - 12,36) Распределение генотипов по гену IL^JRa у больных БА в зависимости от пола отличалось с высокой достоверностью df2,
р<0,01), тогда как в контрольной выборке таких закономерностей выявлено не было Гетерозиготы по наличию аллеля 576R (т) в группе больных мужского пола (72,7%), встречались достоверно чаще, чем среди пациентов женского пола (30,6%) и среди мужчин контрольной группы (30,8%) р<0,05) Согласно коэффициенту
соотношения шансов, риск развития аллергической бронхиальной астмы у мужчин при наличии генотипа - 576Q/R IL-4Ra увеличивается в 6 раз (OR =6,0, CI-1,47 - 24,32)
Комбинация двух редких аплельных вариантов генов 1Ь-4 и ТЬ-4Ка (рис 1), достоверно чаше встречалась в группе больных БА (31,9%) по сравнению с контрольной группой (11,6%) {-¿=1,26, р<0,01) Риск развития атопической бронхиальной астмы при наличии «мутантного» аплеля в гомо- или гетерозиготном состоянии в обоих генах увеличивается более чем в 3 раза (С® = 3 57, С1 1 41 - 9 02) Среди мужчин, больных БА данная комбинация встречалась достоверно чаще (63,6%) по сравнению с пациентами женского пола (22,2%) (3^=8,13, р<0,01) и с мужчинами контрольной группы (7,7%) (X2-16,78, р<0,001) Риск развития атопической бронхиальной астмы у мужчин при данном генотипе увеличивается более чем в 20 раз (СЖ = 21, СГ 4,89- 90,12)
БА БА БА контроль контроль МВ
(Женщины) (Мужчины) (женщины) (мужчины)
□ */т + */т (где * - любой аллель) О нет сочетания
Рис 1 Анализ сочетанного распределения полиморфных вариантов генов 1Ь-4 и 1Ь-4Яа в ^ группах больных МВ, БА в зависимости от пола пациентов и в контрольной группе
• Таким образом, выявлена ассоциация между полиморфными вариантами генов ТЬ4
и 1Ь-4Яа и развитием бронхиальной астмой, в особенности это ярко выражено у мужчин, больных БА.
Анализ полиморфных вариантов генов ?ЧО-синтазы 1 типа (N081) н эндотелиальной Ж>-сннтазы («N08) в группах больных МВ, БА и в контрольной группе.
Частоты аллелей генов N081 и еЫОЗ в группе больных МВ в целом, а также в подгруппах среднетяжелого и тяжелого течения, не отличались от контрольной группы Однако, при оценке сочетаний полиморфных вариантов двух генов N081 и еШЭ
выявлено, что комбинация генотипов NOS 1 гена >\2t>\2 и eNOS гена 4b/4b (сочетанный генотип NOS1 и eNOS генов, приводящий к наименьшей выработке базального оксида азота), встречалась в 21,6% в группе больных MB и всего в 8,7% в контрольной группе (рис 2) В группе больных MB с хронической синегнойной инфекцией данная комбинация зарегистрирована в 25% случаев, в то время как в группе без колонизации Ps aeruginosa лишь в 11% случаев.
25,0%
MB с PS без PS контроль
Рис 2 Анализ сочетанного генотипа генов NOS1 и eNOS, приводящий к наименьшей выработке базального оксида азота
Таким образом, отмечена прямая корреляция между комбинацией полиморфных вариантов генов NOS 1 >12/>12 и eNOS 4b/4b и колонизацией дыхательных путей Ps aeruginosa Учитывая способность оксида азота (NO) оказывать влияние на иммунную систему и воспалительный ответ, участвовать в реализации важнейших физиологических и патофизиологических реакций организма, можно предположить, что выработка оксида азота является одним из механизмов местной защиты легких Поэтому при снижении выработки N0 и сниженном его содержании в выдыхаемом воздухе создаются более благоприятные условия для колонизации Ps Aeruginosa Обнаруженная нами частая комбинация полиморфных вариантов генов NOS 1 >12/>12 и eNOS 4b/4b в группе больных MB, особенно в подгруппе с тяжелым течением не только объясняет патогенетические механизмы колонизации Ps aeruginosa и дальнейшего прогрессировали! патологического процесса, но и определяет перспективы возможного лечения таких больных с помощью ингаляций оксида азота с учетом генетической характеристики каждого пациента.
В группе больных БА при анализе частот 'аллелей и генотипов NOS1 1ена отмечалось некоторое повышение частоты генотипа <12/>12 повторов у больных БА (48,9%) и в группе со среднетяжелым течением заболевания (52,6%) по сравнению с контрольной группой (39,1%) У женщин, больных БА выявлено некоторое повышение частоты аллеля, содержащего менее 12 ААТ-повторов (63,9%) по сравнению с мужчинами (40,9%) Распределение генотипов по гену NOS1 у больных БА в зависимости от пола отличалось с высокой достоверностью (х"-' 11,21 df2, р<0,01) Выявлено некоторое увеличение частоты генотипа <12/>12 в группе больных женского пола (55,6%), по сравнению группой больных БА мужского пола (27,3%) Генотип, ассоциированный с уменьшением синтеза оксида азота (>12/>12 ААТ повторов) значительно реже встречался у женщин (8,3%) по сравнению с мужчинами (45,5%)
При анализе распределения частот аллелей гена eNOS выявлено достоверное увеличение частоты аллеля 4а в группе больных БА среднетяжелого течения (31,6%) по сравнению с группой больных Б А легкого течения (12,0%) (^=5,08, р<0,05) При анализе распределения генотипов по eNOS гену отмечено некоторое увеличение частоты генотипа 4а/4а у больных БА (6,4%) по сравнению с контрольной группой (2,9%) В группе со среднетяжелым течением заболевания генотип 4а/4а встречался достоверно чаще (15,8%), чем в контрольной группе (2,9%) (х2=4,61, р<0,05,) Согласно коэффициенту соотношения шансов, риск развития бронхиальной астмы средней степени тяжести при наличии генотипа 4а/4а eNOS увеличивается в 6 раз (OR = 6,28, CI 1,17 - 33,55) В группе с легким течением астмы данный генотип не встречался вообще
Таким образом, выявлена ассоциация генотипа 4а/4а с более тяжелым течением бронхиальной астмы
Анализ сочетанного распределения полиморфных вариантов генов GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS.
Отдельный интерес представляет анализ комбинаций генотипов различных генов и ассоциация таких сочетаний с развитием БА Для анализа сочетанного распределения всех изученных нами полиморфизмов была предложена упрощенная система оценки в баллах, где каждому наиболее «неблагоприятному» полиморфному варианту изученных генов был присвоен 1 балл
• GSTT1 0/0-1 балл
• GST Ml 0/0-1 балл
• Ген IL 4 m/**, (где /** - любой аллель) -1 балл
• Ген IL 4 R m/**, (где /** - любой аллель) -1 балл
• Ген NOS 1 <12/**, (где /** - любой аллель) - 1 балл
• Ген еЖЮ 4а/**, (где /** - любой аллель) -1 балл
При анализе распределения полиморфных вариантов генов вЯТ Т1 и М1, ГЬ-4,1Ь-411а, N051, еЖ)в группах больных МВ, БА и в контрольной группе (рис 3) по сумме баллов отмечено достоверное увеличение количества «неблагоприятных» аллелей (от 4 до 6) в группе больных БА (40,43%) в сравнении с контрольной группой (17,39%) (/=7,57, р<0,001) и группой больных МВ (18,92%) (/=4,48, р<0,05) (табл 3)
Рис 3 Анализ сочетанного распределения полиморфных вариантов генов ввТ Т1 и М1,1Ь-4,1Ь-4Яа, N081, е№)8 группах больных МВ, БА и в контрольной группе.
Таблица 3
Распределения полиморфных вариантов генов вБТ Т1 и М1,1Ь-4,1Ь-4Яа, N081, еИОв _группах больных МВ, БА и в контрольной группе но сумме баллов._
Сумма баллов Группа больных МВ п=37 Группа больных БА п=47 Контрольная группа п=69
п % п % п %
ОтОдоЗ 30 81,1 28 59,6 57 82,6
От 4 до 6 7 18,9* 19 40,4* 12 17,4*
Таким образом, отмечена прямая корреляция между количеством «неблагоприятных» аллелей генов GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Rct, NOS1, eNOS и развитием бронхиальной астмы, что подтверждает значение, как отдельных аллелей генов, так и их сочетаний в развитии такого мульти компонентного заболевания как БА
Заключение.
Полученные результаты раскрывают некоторые аспекты генетики бронхиальной астмы и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез заболевания Накопление знаний о генетических основах БА, изучение вкладов конкретных сочетаний аллелей в подверженность к болезни, окажет неоценимую помощь в разработке новых методов лечения БА, например, антицитокиновой терапии, в создании комплексной программы по индивидуальной первичной профилактике бронхиальной астмы с учетом генетических характеристик, прогнозировании развития БА у потомства
Нами отмечены особенности генотипа и фенотипа больных муковисцидозом не только по основному генетическому дефекту - мутациям гена CFTR, но и по ряду других полиморфных генных систем Изученные полиморфные варианты генов вносят существенный вклад в фенотипические проявления легочных поражений при муковисцидозе, объясняя, в частности, частое поражение бронхолегочной системы у этих больных синегнойной палочкой и быстрое формирование хронического синегнойного процесса у пациентов Выявленные нами особенности генотипа и фенотипа больных муковисцидозом крайне важны для прогнозирования течения заболевания, первичной и вторичной профилактики муковисцидоза, открывают перспективы для разработки новых методов лечения, например, ингаляции оксида азота
ВЫВОДЫ:
1 «Неблагоприятные» аллели ряда полиморфных генетических систем у больных MB (NOS 1, eNOS) и БА (GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, eNOS) коррелируют с клиническими особенностями бронхообструкгивного процесса при этих заболеваниях
2 Частота «нулевого» генотипа по гену GST Т1 достоверно выше среди больных БА женщин, чем среди мужчин Частота функционально неполноценного генотипа GST Т1 0/0 + GST Ml 0/0 достоверно выше у больных БА, в том числе у больных с легким течением БА по сравнению с таковой в контрольной группе и у женщин с БА по сравнению с таковой у мужчин с БА
3 Выявлена ассоциация определённых полиморфных вариантов генов TL-4 и IL-4Ra с развитием бронхиальной астмы Сочетание двух редких аллельных вариантов генов IL-4 (-590 Т) и IL-4Ra (576 R) достоверно чаще встречается в группе больных с БА по сравнению с контрольной группой Риск развития атопической бронхиальной астмы при этом возрастает более чем в 3 раза.
4 Получены достоверные отличия в распределении полиморфных вариантов генов 1L-4 и IL-4Ra между пациентами мужского и женского пола, страдающих БА У мужчин, больных БА сочетание двух редких аллельных вариантов генов IL-4 (-590 Т) и IL-4Ra (576 R) встречается достоверно чаще по сравнению с женщинами При этом риск развития атонической бронхиальной астмы у мужчин возрастает более чем в 20 раз.
5 У больных MB определяющее значите в формировании бронхообструктивного синдрома, кроме основного генного дефекта, принадлежит генам, изменяющим ответ к бактериальному возбудителю, что подтверждает ассоциативная связь между сочетанием генотипов >12/>12 и 4b/4b по генам NOS 1 и eNOS и колонизацией дыха1ельных путей Ps Aeruginosa
6 Частота аллеля 4а и генотипа 4а/4а по гену eNOS достоверно выше в группе больных БА среднетяжелого течения по сравнению с контрольной группой Риск развития бронхиальной астмы средней степени тяжесги при наличии генотипа 4а/4а по гену eNOS увеличивается почти в 6 раз
7 Отмечена прямая зависимость между количеством «неблагоприягных» аллелей генов GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS и развитием бронхиальной астмы
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:
1 При формировании групп риска развития атонической бронхиальной астмы целесообразно тестирование генов-кандидатов (GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS), что дает возможность определить относительный риск развития болезни и своевременно применить меры первичной профилактики (безаллергенная диета, ограничение контакта с повреждающими факторами внешней среды, рациональная профориентация)
2. Тестирование генетических маркеров развития синегнойного воспалительного процесса в легких у больных муковисцидозом позволяет прогнозировать его развитие и соответственно изменение клинической картины заболевания
3 Необходимо определить неблагоприятные аллели ряда полиморфных генетических систем (GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS) у больных БА и MB для выбора своевременных и адекватных методов лечения этих заболеваний
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:
1 Келембет НА., Гембицкая Т.Е, Петрова М.А., Иващенко Т.Э, Сиделева О Г Полиморфизмы генов кодирующих глутатион-в-трансферазы М1 (ввТМ!) и Т1
(GSTT1), как факторы риска развития бронхиальной астмы // Сборник тезисов 12 национального конгресса по болезням органов дыхания, М -2002 - с 285. Келембет Н А, Гембицкая Т Е, Иващенко Т Э, Петрова М А Влияние нулевых аллелей генов семейства 1лутатион-8-транчферазы (GST) на особенности течения атопической бронхиальной астмы (БА) // Сборник тезисов 13 национального конгресса по болезням органов дыхания, СПб - 2003 - С 57 Келембет Н А , Гембицкая Т Е, Иващенко Т Э Роль ферментов г лутатион-S-трансферазы Ml и Т1 в развитии бронхообструктивного синдрома // Сборник тезисов 14 национального конгресса по болезням органов дыхания, М - 2004 -С 343
Федосеев Г Б, Петрова М А, Гулева Л И, Гембицкая Т Е , Лаврова О.В., Иващенко Т Э, Алешина Л А , Могилина С В , Келембет Н А, Углева Е М Прогнозирование риска формирования бронхиальной астмы у практически здоровых людей // Профилактика заболеваний и укрепление здоровья - 2004 - №3 -С 14-18
Келембет Н А , Гембицкая Т Е, Иващенко Т Э Значение полиморфных вариантов генов нейрональной и эндотелиальной синтаз оксида азота при хронической колонизации Ps aeruginosa у больных муковисцидозом // Сборник статей и тезисов VII национального конгресса по муковисцидозу. Воронеж - 2005 - С 55-57. Келембет Н А , Гембицкая Т Е, Иващенко Т Э Анализ полиморфных вариантов генов интерлейкина 4 и альфа цепи рецептора интерлейкина 4 у больных бронхиальной астмой // Материалы съезда медицинских генетиков Уфа - 2005 -с 149
Kelembet NA, Gembitskaya ТЕ, Petrova MA, Ivaschenko ТЕ Genetic Polymorphisms of the glutation-S-transferase (GST) gene family in patients with bronchial asthma // Abst. book ERS Annual Congress, Vienna, Austria - 2003 - V 22 - P 483 Kelembet NA, Gembitskaya ТЕ, Ivaschenko ТЕ Gene polymorphisms of neuronal and endothelial nitric oxide synthases and colonization of Pseudomonas Aeruginosa in patients with Cystic Fibrosis II Abst book 37 European human genetics conference, Prague, Czech Republic - 2005 - P 328
Mogilina SV, Ugleva EM, Kelembet NA, Ivaschenko ТЕ, Baranov VS Polymorphisms in the IL-4 and IL-4 receptor alpha chain genes and atopic bronchia} asthma in North-West of Russia // Abst book 37 European human genetics conference, Prague, Czech Republic - 2005 - P. 279.
Лицензия ПЛД № 69-217 от 22.10.1997г.
Подписано в печать 20 06.2005г. Тираж 100 экз. Заказ №3-08
Отпечатано с готового оригинал-макета
а типографии ООО «Полигон» 198096, Санкт-Петербург, пр. Стачек, 82 тел: 784-13-35
»
?
р 1 5 О О 2
РНБ Русский фонд
2006-4 12125
«г
Оглавление диссертации Келембет, Наталья Анатольевна :: 2005 :: Санкт-Петербург
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. Обзор литературы.
1.1 Клинический полиморфизм при муковисцидозе как отражение генетической гетерогенности болезни.
1.1.1 Дефиниция, этиопатогенез, генетика муковисцидоза.
1.1.2. Современные представления о течении муковисцидоза.
1.2. Бронхиальная астма.
1.2.1. Определение. Формирование представлений о генетической природе бронхиальной астмы.
1.2.2. Патогенез.:.
1.3. Факторы, участвующие в развитии хронического воспаления и бронхиальной обструкции.
1.3.1 Цитокины. Общая характеристика.
1.3.2 Интерлейкины.
1.3.2.1 Интерлейкин-4.
1.3.2.2. Гены интерлейкинов и их рецепторов.
1.3.2.2.1. Полиморфизм гена интерлейкина 4.
1.3.2.2.2. Полиморфизм гена альфа цепи рецептора интерлейкина 4.
1.4 Система детоксикации ксенобиотиков.
1.4.1 Общая характеристика.
1.4.2 Глютатион-Б-трансферазы и их роль в предрасположенности к болезням органов дыхания.
1.4.2.1 Глутатион-Б-трансфераза класса М.
1.4.2.2 Глутатион-8-трансфераза класса Т.
1.5 Ж)-синтазы и роль оксида азота в организме.
1.5.1. Полиморфизм генаЖ)-синтазы 1 типа.
1.5.2. Полиморфизм гена эндотелиальной ЫО-синтетазы (еЖ)8).
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Общая характеристика обследованного контингента больных и методы формирования клинических групп.
2.2 Общие методы исследования.
2.3 Специальные методы исследования.
2.3.1 Микробиологические методы исследования.
2.3.2 Молекулярно-генетические методы исследования.
2.3.2.1. Реактивы, ферменты, биопрепараты, оборудование.
2.3.2.2. Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови.
2.3.2.3 Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР).
2.3.2.4 Гидролиз ПЦР-фрагментов.
2.3.2.4.1 ПДРФ-анализ фрагмента гена 1Ь-4.
2.3.2.4.2 ПДРФ-анализ фрагмента гена 1Ь-411.
2.3.2.5 Электрофорез в ПААГ и визуализация результатов.
2.3.3 Определение концентрации общего
§Е и 1Ь-4 методом иммуноферментного анализ.
2.3.4 Математические методы анализа.
Глава III. Результаты исследования и обсуждение.
3.1 Клинико-генетические особенности группы больных МВ.
3.1.1. Клинико-лабораторная и функциональная характеристика больных
3.1.2. Анализ лабораторных данных и данных инструментального обследования.
3.1.3 Анализ частот генотипов генов СБТИ и С8ТМ1 в группе больных МВ и в контрольной группе здоровых доноров Северо-западпого региона РФ.
3.1.4. Анализ частот генотипов и аллелей гена интерлейкина 4 в группе больных МВ и контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона РФ.
3.1.5. Анализ частот генотипов и аллелей гена альфа цепи рецептора интерлейкина 4 в группе больных МВ и контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона России!.
3.1.6. Анализ частот генотипов и аллелей гена >Ю-синтазы 1 типа (N081) в группе больных МВ и контрольной группе здоровых доноров Северозападного региона России.
3.1.7. Анализ частот генотипов и аллелей гена эндотелиальной >Ю-синтазы (еЖ)8) в группе больных МВ и контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона России.
3.2 Клинико-генетические особенности группы больных бронхиальной астмой.
3.2.1. Клинико-лабораторная и функциональная характеристика больных
3.2.2. Анализ лабораторных данных и данных инструментального обследования.
3.2.3 Анализ частот генотипов генов 08ТТ1 и С8ТМ1 в группе больных БА и в контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона РФ.
3.2.4. Анализ полиморфизма генов интерлейкина 4 (1Ь-4) и альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (1Ь-411) в группе больных БА и контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона РФ.
3.2.4.1. Анализ частот генотипов и аллелей гена интерлейкина 4.
3.2.4.2. Анализ частот генотипов и аллелей гена альфа цепи рецептора интерлейкина 4.
3.2.5. Анализ полиморфизмов генов Ж)-синтазы 1 типа (N081) и эндотелиальной Ж)-синтазы ^N08) в группе больных БА и в контрольной группе здоровых доноров Северо-западного региона России.
3.2.5.1. Анализ частот генотипов и аллелей гена Ж)-синтазы типа.' Ю
3.2.5.2. Анализ частот генотипов и аллелей гена эндотелиальной Ш-синтазы (еЖ)8). 3.3 Сравнительная характеристика бронхообструктивного синдрома у больных с моногенным (муковисцидоз) и мультифакториальным (бронхиальная астма) заболеваниями органов дыхания.
3.3.1. Сравнительная характеристика лабораторных данных и данных инструментального обследования у больных МВ и БА.
3.3.2 Сравнительный анализ частот генотипов генов GSTT1 и GSTM1 в группах больных MB и Б А. Ш
3.3.3. Анализ полиморфизма генов интерлейкина 4 (IL-4) и альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (IL-4R) в группах больных MB, БА и в контрольной группе. ИЗ
3.3.3.1. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена интерлейкина4 (IL-4). ИЗ
3.3.3.2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (IL-4R).
3.3.4. Анализ полиморфизмов генов NO-синтазы 1 типа (NOS1) и эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) в группах больных MB, Б А и в контрольной группе.
3.3.4.1. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена NO-синтазы 1 типа (NOS 1).
3.3.4.2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена эндотелиальной NO-синтазы (eNOS).
3.3.5. Анализ сочетанного распределения полиморфных вариантов генов
GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS.
Введение диссертации по теме "Пульмонология", Келембет, Наталья Анатольевна, автореферат
Актуальность проблемы
Хронические неспецифические заболевания легких, протекающие с бронхообструктивным синдромом (бронхиальная астма, хронический обструктивный бронхит, муковисцидоз) являются социально значимой проблемой современной медицины. Последнее обусловлено их высокой распространенностью, трудностями лечения, профилактики, потерей трудоспособности в молодом и зрелом возрасте, инвалидизацией и т.д. (Кокосов А.Н., 2000, Илькович М.М., 2003, Чучалин А.Г. 2004). Несмотря на углубленное изучение механизмов формирования^ обструкции бронхов на субклеточном, клеточном, органном, организменном уровнях и несомненные успехи достигнутые в понимании патогенеза обструктивного синдрома (Федосеев Г.Б. 2003, Чучалин А.Г. 2004), остается еще множество нерешенных вопросов и дискутабельных проблем. В последние годы в научной литературе делается акцент на значительную или даже преобладающую роль наследственных факторов в развитии воспалительной составляющей обструктивного синдрома дыхательных путей или, по крайней мере, предрасположенности к возникновению обструкции при воздействии ряда неблагоприятных факторов внешней среды, при наследственных дефектах системы детоксикации ксенобиотиков, изменении регуляции иммунного ответа, нарушении синтеза оксида азота. Необходимость изучения полиморфных систем организма, ответственных за детоксикацию различных ксенобиотиков (аллергенов, продуктов табачного дыма, лекарственных веществ и т.д.) диктуется, прежде всего, данными эпидемиологических исследований об их значимости в патогенезе заболеваний легких. Случаи семейных форм хронических неспецифических заболеваний легких, в частности бронхиальной астмы, стимулировали серию работ по выявлению связи этиопатогенеза этого заболевания с различными полиморфными системами организма. Фенотипические проявления даже такого генетически четко очерченного наследственного заболевания как муковисцидоз, также зависят от состояния многих генных комплексов. Исследование особенностей генотипа и фенотипа больных муковисцидозом крайне важны для прогнозирования течения заболевания и профилактики муковисцидоза. Комплексное изучение роли различных систем генов, определяющих функционирование системы детоксикации ксенобиотиков, регуляции иммунного ответа и синтеза оксида азота, поможет по-новому подойти к пониманию патогенеза заболеваний легких, оптимизировать методы их диагностики, лечения и профилактики. В нашей работе проанализированы клинические особенности и некоторые генетические механизмы, влияющие на развитие и тяжесть течения бронхообструктивного синдрома при различных по генетической природе заболеваниях: моногенном (муковисцидоз) и мультифакториальном (бронхиальная астма).
Цель исследования:
Оценить возможное влияние полиморфизма некоторых генов, кодирующих ферменты системы детоксикации ксенобиотиков, цитокины и ферменты, контролирующие продукцию оксида азота, на формирование наследственной предрасположенности и течение бронхообструктивного синдрома при муковисцидозе и бронхиальной астме.
Задачи исследования:
1. Изучить особенности аллельного полиморфизма генов GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS и их ассоциативную связь с формированием обструктивных изменений при муковисцидозе.
2. Оценить возможную ассоциативную связь аллельного полиморфизма генов GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS с развитием и течением бронхиальной астмы.
3. Проанализировать риск развития воспалительного процесса, его тяжесть у мужчин и женщин в зависимости от полиморфных вариантов генов системы детоксикации, цитокинов, ферментов синтеза оксида азота у больных муковисцидозом и бронхиальной астмой.
4. Определить особенности формирования и течения бронхообструктивного синдрома при мультифакториальной (БА) и моногенной (MB) бронхолегочной патологии с учетом генетических составляющих.
Научная новизна
Впервые охарактеризованы в сравнительном аспекте клинические и генетические особенности бронхообструктивного синдрома при мультифакториальной и моногенной легочной патологии. Впервые изучена роль некоторых генов "предрасположенности" (GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS) в формировании обструктивного синдрома при муковисцидозе и бронхиальной астме. Впервые выявлена ассоциация генотипа 4а/4а гена eNOS с тяжестью течения бронхиальной астмы. Впервые обнаружены достоверные различия в распределении полиморфных вариантов изученных генов у больных бронхиальной астмой разного пола.
Практическая значимость работы
Показана целесообразность определения полиморфных вариантов генов GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS для выявления лиц, предрасположенных к развитию бронхиальной астмы, для разработки новых методов лечения БА, например, антицитокиновой терапии, для создания комплексной программы по индивидуальной первичной профилактике бронхиальной астмы с учетом генетических характеристик, прогнозирования развития БА у потомства. Выявленные особенности корреляции генотипа и фенотипа у больных муковисцидозом важны для прогнозирования течения заболевания и профилактики муковисцидоза, открывают перспективы для разработки новых методов лечения, например, ингаляции оксида азота.
Апробация и внедрение результатов
Результаты работы были доложены на заседании пульмонологической секции санкт-петербургского научно-практического общества терапевтов им. С.П.Боткина (Санкт-Петербург, Россия, 2003), на 13 национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, Россия, 2003), на научнопрактической конференции «Актуальные вопросы пульмонологии и аллергологии - врачу общей практики». VIII Булатовск'ие чтения (Санкт-Петербург, Россия, 2003), на 14 национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2004), на 7 национальном конгрессе по муковисцидозу (Воронеж, 2005), на Славяно-Балтийском научном форуме «Гастро-2005» (Санкт-Петербург, 2005), на XIII, XV Европейском респираторном конгрессе (Вена, 2003; Копенгаген, 2005).
По теме диссертации опубликовано 9 работ.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 79 отечественных и 194 зарубежных литературных источников. Работа изложена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 таблицами, 6 рисунками и 33 диаграммами.
Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-генетические особенности формирования бронхообструктивного синдрома при моногенных (муковисцидоз) и мультифакториальных (бронхиальная астма) заболевания легких"
ВЫВОДЫ:
1. «Неблагоприятные» аллели ряда полиморфных генетических систем у больных MB (NOS 1, eNOS) и Б A (GST Т1, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, eNOS) коррелируют с клиническими особенностями бронхообструктивного процесса при этих заболеваниях.
2. Частота «нулевого» генотипа по гену GST Т1 достоверно выше среди больных БА женщин, чем среди мужчин. Частота функционально неполноценного генотипа GST Т1 0/0 + GST Ml 0/0 достоверно выше у больных Б А, в том числе у больных с легким течением Б А по сравнению с таковой в контрольной группе и у женщин с БА по сравнению с таковой у мужчин с БА.
3. Выявлена ассоциация определённых полиморфных вариантов генов IL-4 и IL-4Ra с развитием бронхиальной астмы. Сочетание двух редких аллельных вариантов генов IL-4 (-590 Т) и IL-4Ra (-576 R) достоверно чаще встречается в группе больных с БА по сравнению с контрольной группой. Риск развития атопической бронхиальной астмы при этом возрастает более чем в 3 раза.
4. Получены достоверные отличия в распределении полиморфных вариантов генов IL-4 и IL-4Ra между пациентами мужского и женского пола, страдающих БА. У мужчин, больных БА, сочетание двух редких аллельных вариантов генов IL-4 (-590 Т) и IL-4Ra (-576 R) встречается достоверно чаще по сравнению с женщинами. При этом риск развития атопической бронхиальной астмы у мужчин возрастает более чем в 20 раз.
5. У больных МВ определяющее значение в формировании бронхообструктивного синдрома, кроме основного генного дефекта, принадлежит генам, изменяющим ответ к бактериальному возбудителю, что подтверждает ассоциативная связь между сочетанием генотипов >12/>12 и 4b/4b по генам NOS 1 и eNOS и колонизацией дыхательных путей Ps. Aeruginosa.
6. Частота аллеля 4а и генотипа 4а/4а по гену eNOS достоверно выше в группе больных БА среднетяжелого течения по сравнению с контрольной группой. Риск развития бронхиальной астмы средней степени тяжести при наличии генотипа 4а/4а по гену eNOS увеличивается почти в 6 раз.
7. Отмечена прямая зависимость между количеством «неблагоприятных» аллелей генов GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS и развитием бронхиальной астмы.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:
1. При формировании групп риска развития атопической бронхиальной астмы целесообразно тестирование генов-кандидатов (GST Tl, GST Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS), что дает возможность определить относительный риск развития болезни и своевременно применить меры первичной профилактики (безаллергенная диета, ограничение контакта с повреждающими факторами внешней среды, рациональная проф ори ентация).
2. Тестирование генетических маркеров развития синегнойного воспалительного процесса в легких у больных муковисцидозом позволяет прогнозировать его развитие и соответственно изменение клинической картины заболевания.
3. Необходимо определить неблагоприятные аллели ряда полиморфных генетических систем (GST Т1 и Ml, IL-4, IL-4Ra, NOS1, eNOS) у больных БА и MB для выбора своевременных и адекватных методов лечения этих заболеваний.
140
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Келембет, Наталья Анатольевна
1. Амелина Е.Л., Черняк A.B., Черняева A.JI. Муковисцидоз: определение продожительности жизни // Пульмонология. 2001. - №3. - С.4-61.
2. Балаболкин И.И. Бронхиальная астма у детей. М.: Медицина, 2003. -с. 5-7.
3. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности»: (Введение в предиктивную медицину). СПб.: Интермедика, 2000. - 272 с.
4. Баранов B.C. Программа «Геном человека» и научная основа профилактической медицины // Вестн. РАМН. 2000. - №10. - С. 27-37.
5. Баранов B.C., Асеев М.В., Баранова Е.В.'Тены предрасположенности" и генетический паспорт // Природа. 1999. - № 3. - С. 17-27.
6. Богорад А.Е. Роль генетических факторов в развитии бронхиальной астмы у детей // Пульмонология. 2002. - Т.12. - №1. - С. 47-56.
7. Бочков Н.П. Медицинская генетика. М.:Академия, 2003. - С. 37-41.
8. Бронхиальная астма. Глобальная стратегия: доклад Всемирной Организации Здравоохранения. -М., 1996. 166 с.
9. Булгакова Т.В. Иммунологические аспекты хронического воспаления у больных муковисцидозом: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.43/ СПбГМУ.- СПб., 2004. 15 с.
10. Вавилин В.А., Часовникова О.Б., Ляхович В.В., Гавалов С.М., Рябова O.A. Генетический полиморфизм глутатион-8-трансферазы Ml и Т1 у детей, больных бронхиальной астмой // Вопросы медицинской химии. 2000. - № 4. - С.388-397.
11. Величковский Б.Т. Молекулярные и клеточные основы экологической пульмонологии // Пульмонология,- 2000. Т.10, №3. - С.10-18.
12. Вишнякова Л.А., Желенина Л.А., Марзавина О.В., Гембицкая Т.Е., Орлов A.B., Дриневский В.Н. Этиология инфекционного процесса при легочной и смешанной формах MB у детей // Вестн. РАМН. 1995. - №9.-С.56-60.
13. Вишнякова JI. А., Сологуб Т.С., Желенина JI.A. Инфекционный воспалительный процесс при муковисцидозе у детей (этиология и некоторые вопросы патогенеза) // Пульмонология. 1999. - № 2. - С.59-62.
14. Вознесенский H.A., Чучалин А.Г., Антонов Н.С. Окись азота и легкие // Пульмонология. 1998. - Т.8, №2. - С.3-10.
15. Гембицкая Т.Е. Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики муковисцидоза // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол. 1993. -Т. 11, №3. - с. 88-92.
16. Гембицкая Т.Е. Клинические особенности, диагностика и лечение некоторых наследственно-обусловленных заболеваний органов дыхания у взрослых: Дис. .докт. мед. наук: 14.00.43 Л. 1987 - .
17. Гембицкая Т.Е. Муковисцидоз // Рациональная фармакотерапия заболеваний органов дыхания: рук. для практикующих врачей/ Под общ. ред. А.Г.Чучалина. М.: Литгерра - 2004. - С.423-448.
18. Гембицкая Т.Е. Наследственно детерминированные заболевания легких // Болезни органов дыхания/ Под ред. Н.Р.Палеева. М.: Медицина,2000.-С. 561-573.
19. Гинтер Е.К. Популяционная генетика и медицина // Вестник РАМН.2001.-№ 10.-С. 25-31.
20. Гланц С.А. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. -459 с.
21. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы /Под ред. А. Г. Чучалина. — М.: Атмосфера, 2002. — 160 с.
22. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб.: "Специальная литература", 1997. - 286 с.
23. Демьянов A.B., Котов А.Ю., Симбирцев A.C. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике // Цитокины и воспаление. 2003. - Т. 2, №3. - С. 20-35.
24. Дубаков A.B., Фрейдин М.Б., Тетенев Ф.Ф., Огородова Л.М., Пузырев
25. B.П. Ассоциация полиморфизма генов IL-4 и IL-4RA с показателями вентиляционной функции легких и патогенетическими признаками атопической бронхиальной астмы в семьях // Пульмонология. 2004. - Т. 14, №4.-С. 10-17.
26. Емельянов A.B. Роль факторов внешней среды в формировании бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т. 2. Бронхиальная астма/ Под ред. Г. Б. Федосеева. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. - С. 32-39.
27. Жданов В.Ф. Международный консенсус по вопросам диагностики и лечения бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т. 2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996.1. C.12-16.
28. Желенина JI.A. Муковисцидоз у детей (клиникогенетические особенности, инфекционный процесс в легких, лечение): Дис. . д-ра мед. наук: 14.00.43 / Гос. Научн. Центр пульмонологии МЗ РФ. -СПб., 1998.
29. Желенина Л.А., Фаустова М.Е., Доценко Е.К., Булгакова Т.В., Орлов A.B., Гончарова В.А., Вишнякова Л.А., Гембицкая Т.Е. Механизмы бронхиальной обструкции у больных муковисцидозом // Пульмонология. -1998. № 4. - С.27-30.
30. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991. - 272 с.
31. Журавлева И.А., Мелентьев H.A., Виноградов H.A. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии // Клин. мед. 1997. - Т. 75, №4. - С. 18-21.
32. Зорина Е.А., Каширская Н.Ю., Капранов H.H., Осипова И.А. Современные методы диагностики и диагностические критерии муковисцидоза // Пульмонология. 2001. - № 3. - С. 124-127.
33. Иващенко Т.Э. Идентификация мутаций и ПДРФ анализ ДНК локусов, сцепленных с геном муковисцидоза в некоторых популяциях, семьях высокого риска и у больных: Автореф. дис. .канд. биол. наук/МГУ. М., 1992.- 18 с.
34. Иващенко Т.Э., Баранов B.C. Биохимические и молекулярно-генетические основы патогенеза муковисцидоза. СПб.: Интермедика, 2002. -256 с.
35. Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г, Петрова М.А., Гембицкая Т.Е., Орлов A.B., Баранов B.C. Генетические факторы предрасположенности к бронхиальной астме // Генетика. 2001. - Т. 37, №1 - С. 107-111.
36. Илькович М.М., Игнатьев В.А. ХОБЛ: нозологическая форма или группа заболеваний? // Атмосфера. 2002. - № 1. - С. 27-28.
37. Каганов С.Ю. Бронхиальная астма у детей. М.: Медицина, 1999. -С. 10-12.
38. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Петрова Н.В. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе // Клин, генетика. 2004. -№9.-С. 398-412.
39. Капранов Н.И., Рачинский C.B. Муковисцидоз. М.: Медицина, 1995.-С. 12-64.
40. Клемент Р.Ф. Методы исследования внешнего дыхания // Болезни органов дыхания/ Под ред. Н.Р.Палеева. М.: Медицина, 2000. - С. 71-84.
41. Кокосов А.Н. Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких // Тер. архив. 2000. - №3. - С. 10-14.
42. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков // Соросовский образовательный журнал. 1999. - №1. - С.8-12.
43. Лешукович Ю.В. Эпидемиология бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т.2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. - С. 12-16.
44. Невзорова В.А., Зуга М.В., Гельцер Б.И. Роль окиси азота в регуляции легочных функций // Тер. архив. 1997. - Т. 69, № 3. - С. 68-73.
45. Немцов В.И., Кочанова Т.В. Механизмы формирования воспаления в бронхах и легких // Библиотека врача общей практики. Т.2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. - С.109-119.
46. Пальцев М.А., Иванов A.A., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия. -М.:Медицина, 2003. 288 с.
47. Петрова М.А., Линцов А.Е. Роль наследственных факторов в формировании бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т.2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. -С.24-27.
48. Петровский Ф.И., Петровская Ю.А., Огородова Л.М., Серебров В.Ю. Цитокины и оксид азота при бронхиальной астме // Бюллетень сибирской медицины. 2002. - № 1. - С. 70-74.
49. Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между прошлым и будущим // Медицинская генетика. 2003. - Т. 2, №12. - С.498-508.
50. Райе Р.Х., Гуляева Л.Ф. Биологические эффекты токсических соединений: курс лекций. Новосибирск, 2003. — 203 с.
51. Ройт А., Брюстофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир,2000.-592 с.
52. Романенко О.П. Распространенность муковисцидоза и опыт организации лечебно-профилактической помощи больным в СевероЗападном регионе России: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Д., 1996. - 26 с.
53. Романо JI.S Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Зегарра-Моран О. Корреляция генотипа с фенотипом у больных муковисцидозом // Пульмонология. 2001. - Т. 11, № 3. - С. 115-120.
54. Саприн А.Н., Калинина Е.В. Окислительный стресс и его роль в механизмах апоптоза и развития патологических процессов // Успехи биол. и химии.— 1999.— Т. 39.— С. 289-326.
55. Серебрянский Ю. Е., Афанасьев С. С., Денисов JI. А., Рубальский О. В. Цитокины в иммунореабилитации инфекционных больных // Воен.-мед. журнал. 1999. - Т. 320, № 3 - С. 41-50.
56. Сиделева О.Г. Полиморфные аллели генов, ассоциированные с патогенезом атопической формы бронхиальной астмы у жителей Северо-запада России: Автореф. дис. . канд. биол. наук. СПб., 2002. - 19 с.
57. Сиделева О.Г., Иващенко Т.Э., Орлов A.B., Петрова М.А., Гембицкая Т.Е., Останкова Ю.В., Баранов B.C. Гены GSTM1, GSTT1, CYP1A1, CFTR у больных бронхиальной астмой // Материалы 11 национального конгресса по болезням органов дыхания. М., 2001. - 20 с.
58. Симбирцев A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление. - 2002. - № 1. - 4-8.
59. Ульянова JI.B. Диспансерное наблюдение и этапная реабилитация детей, больных муковисцидозом, в условиях областного пульмонологического центра: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1987. -23 с.
60. Федосеев Г.Б. Механизмы обструкции бронхов. СПб.: Мед. информ. агентство, 1995. - С.191-333
61. Федосеев Г.Б. Определение, классификация и этапы развития бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т.2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. - С. 12-16.
62. Фейгельсон Ж., Пеко М. Поражение ЖКТ при МБ // Рос. журнал гастроэнтерологии и гепатологии. 1993. - № 3. - С.71-76.
63. Фрейдин М.Б. Роль генов интерлейкинов и их рецепторов в формировании предрасположенности к атопической бронхиальной астме: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Томск. - 2001. - 22 с.
64. Фрейдлин И.С., Тотолян A.A. Роль изменений иммунной системы в формировании бронхиальной астмы // Библиотека врача общей практики. Т.2. Бронхиальная астма. СПб.: Медицинское информационное агентство, 1996. - С.54-70.
65. Харитонов С.А., Барнс П.Дж., Чучалин А.Г. Окись азота (N0) в выдыхаемом воздухе: новый тест в пульмонологии // Пульмонология. 1997. -Т. 7, №3.- С. 7-12.
66. Худолей В.В. Канцерогены: характеристики, закономерности, механизмы действия. СПб.: НИИ Химии СПбГУ, 1999. - 419с.
67. Черменский А.Г., Гембицкая Т.Е., Желенина JI.A., Орлов A.B. Динамика медиана выживаемости больных муковисцидозом в Санкт-Петербурге // 7-й национальный конгресс по муковисцидозу: Сборник статей и тезисов. М., 2005. - С. 86-90.
68. Чучалин А.Г., Воронина JI.M., Кронина JI.A., Салконова М.В. Муковисцидоз у взрослых: этиология, патогенез, перспективы лечения // Пульмонология. 1994. - №3. - С. 17-22.
69. Чучалин А.Г. Генетические аспекты бронхиальной астмы // Пульмонология. 1999. - Т.9, №4. - С. 3-10.
70. Чучалин А.Г., Белевский A.C. Заболевания органов дыхания. М.: Литтерра, 2004.-5 12 с.
71. Чучалин А.Г., Самсыгина Г.А., Свердлов Е.Д. Генетические аспекты бронхиальной астмы // Consilium medicum. 2000. - Экстра-вып. - С. 3-6.
72. Шапорова H.JI. Механизмы формирования и методы коррекции кортикозависимости и стероидрезистентности у больных бронхиальной астмой: Дис. . д-ра мед. наук: 14.00.43 / СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова. -СПб., 1998-385 л.
73. Ширяева К.Ф. Муковисцидоз // Руководство по пульмонологии / под ред. Н.В.Путова, Г.Б.Федосеева. Л.: Медицина, 1984. - С.47-52.
74. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 608 с.
75. Ярилин А.А. Цитокины в тимусе. Выработка и рецепция цитокинов // Цитокины и воспаление. 2003. - Т.2, №1- С. 3-13.
76. Adnot S., Eddahibi S., Mauran P., Andrivet P., Carville C., Raffestin B. Nitric oxide, from vascular physiology to therapeutics // Arch. Mai. Coeur. Vaiss. " 1994.-№4.-P. 41-51.
77. Adnot S., Raffestin В., Eddahibi S. NO in the lung // Respir. Physiol. 1995. V. 101.-P. 109-120.
78. Alving K., Weitzberg E., Lundberg J.M. Increased amount of nitric oxide in exhaled air of asthmatics // Eur. Respir. J. 1993. - V. 6. - P. 1368—1370.
79. Anderson G.G., Cookson W.O. Recent advances in the genetics of allergy and-asthma // Mol. Med. Today. 1999. - V. 5. - P. 264-273.
80. Anderson M.P., Gregory R.J., Thompson S. Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity // Science. 1991. - V. 253. -P. 202-205.
81. Asano K., Chee C.B., Gaston B. Constitutive and inducible nitric oxide synthase gene expression, regulation and activity in human lung epithelial cells // Proc. Natl. Acad. Sci. 1994. - V. 91. - P. 10-29.
82. Ashutosh K. Nitric oxide and asthma: a review // Curr. Opin. Pulm. Med. -2000.- V. 6.-P. 21-25.
83. Autrup H. Genetic polymorfisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response // Mutat. Res. 2000. - V. 464.-P. 65-76.
84. Bachmann S., Mundel P. Nitric oxide in the kidney: synthesis, localization, and function // Am. J. Kidney Dis. 1994. - V. 24. - P. 112-129.
85. Balistreri W. Spectrum of liver disease in patients with cystic fibrosis // Pediatr. Pulm. 1990. - V.5. - P.71-78.
86. Baltimore R., Christie C., Smith O. Immunohistopatological localization of Pseudomonas aeruginosa in lung from patients with cystic fibrosis // Am. Rev. Respir. Dis.- 1989.-V. 140.-P. 1650-1661.
87. Baranov V.S., Gorbunova V.N., Ivaschenko T.E. et al. Five years experience in prenatal diagnosis of cystic fibrosis in the USSR// Prenat.Diagn. 1991. - V. 12. -P. 127-135.
88. Baranov V.S., Ivashenko T., Bakay M. Proportion of the GSTM1 0/0 genotype in some Slavic populations and its correlation with cystic fibrosis and other multifactorial diseases // Hum. Genet. 1996. - V. 97. - P. 517-520.
89. Baranova H., Perriot J., Albuisson E. Peculiarities of the GSTM1 0/0 genotype in French heavy smokers with various types of chronic bronchitis // Hum. Genet. 1997. - V. 99. - P. 822-826.
90. Barasch J., Kiss B., Prince A. et al. Defective acidification of intracellular organelles in cystic fibrosis // Nature. 1991. - V.352. - P. 70-73.
91. Barnes K.C. Atopy and asthma genes — where do we stand? // Allergy. -2000.-V. 55.-P. 803-817.
92. Barnes P.J., Chung K.F., Page C.P. Inflammatory Mediators of Asthma: An
93. Update // Pharmacological reviews. 1998. - V.50, №4. - P. 515-596
94. Barnes P.J., Liew F.Y. Nitric oxide and asthmatic inflammation // Immunol. Today. 1995. - V. 16. - P. 128-130.
95. Belvisi M.G., Ward J.K., Mitchell J.A., Barnes P.J. Nitric oxide as a neurotransmitter in human airways // Arch. Int. Pharmacodyn. 1995. - V. 329, №1.-P. 97-110.
96. Berger H., Anderson M.P., Gregory R.J. Identification and regulation of the CFTR-generated chloride channel // J. Clin. Invest. 1991. - V. 88, №10. - P. 1422-1431.
97. Berlyne G., Barnes N. No role for NO in asthma? // Lancet. 2000. - V. 355. -P. 1029-1030.
98. Bjorksten B. The environment and sensitisation to allergens in early childhood // Pediatr. Allergy. Immunol. 1997. - V. 8. - P. 32-39.
99. Board P.G., Suzuki T., Shaw D.C. Human muscle glutathione S-transferase shows close homology to human liver GST-1 // Biochim. Biophys. Acta. 1988. -V. 953.-P. 214-217.
100. Boat T.F. Phenotypic diagnosis of CF / Symposium Session Summaries // Pediatr. Pulmon. 1994. - S.10. -P.135.
101. Bonfield T.L., Pansuka J.R., Konstan M.W. Inflammatory cytokines in cystic fibrosis lungs // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995. - V. 152. - P. 2111-2118.
102. Borgo G., Mastella G., Gasparini P. et al. Pancreatic function and gene deletion F508 in cystic fibrosis // J. Med. Genet. 1990. - V. 27. - P. 665-669.
103. Bray G.W. The hereditary factor in asthma and other allergies // Brit. med. J. 1930.-V. 10. - P.384-387.
104. Busse R., Mulsch A. Induction of nitric oxide synthase by cytokines in vascular smooth muscle cells // FEBS Lett. 1990. - V. 275. - P. 87-90.
105. Caramori G., Papi A. Oxidants and asthma // Thorax. 2004. - V. 59. - P. 170-173.
106. Chang R.H., Feng M.H., Liu W.H. Nitric oxide increased interleukin-4 expression in T lymphocytes // Immunology. 1997. - V. 90, № 3. - P. 364-369.
107. Cheng P., Boat T., Cranfill K., Yankaskas J., Boucher R. Increased sulfation of glycoconjugates by cultured nasal epithelial patients cell from patients with cystic fibrosis // J. Clin. Invest. 1989. - V. 84. - P. 68-72.
108. Cheng S.H., Gregory R.J., Marshall J. et al. Defective intracellular transport and processing of CFTR is the molecular basis of most cystic fibrosis // Cell. -1990.-V. 63.-P. 827-834.
109. Choi P., Reiser H. IL-4: role in disease and regulation of production // Clin. Exp. Immunol.-V.l 13,- 1998.-p. 317-319
110. Chung K. F., Barnes P. J. Cytokines in asthma // Thorax 1999. - V. 54. - P. 825-857.
111. Cobos N., Pascual P., Linan S. et al. Bronchodilatator in cystic fibrosis // 18th Eur. CF Conf.: Book of Abstr. Madrid, 1993. -P.D68.
112. Collins F.S. Cystic fibrosis: Molecular biology and therapeutic implications // Science. 1992. - V. 256. - P. 774-779.
113. Courtney M., Tnansgene S.A. Progress toward gene therapy for cystic fibrosis // 19th Eur. CF Conf.: Book of Abstr. Paris, 1994. - P. L.3
114. Crystal R. Gene therapy for cystic fibrosis: lessons learned and hurdles to tuccess // Pediatr. Pulmon. 1995. - V. 12. - P. 67-68.
115. Cutting G.R. Genotype defect: its effect on cellular function and phenotypic expression // Am. J. Resp. Crit. Care Med. 1994. - V. 15. - P. 356-363.
116. Dabbagh K., Takeyama K., Lee H.M., Ueki I.F., Lausier J.A., Nadel J.A. IL-4 induces mucin gene expression and goblet cell metaplasia in vitro and in vivo // J.1.munol. 1999.-V. 162.-P. 6233-6237.
117. Danemau A., Gasckin K., Martin D. Pancreatic changes in cystic fibrosis and sonografic appearances // Amer. J. Roentgen. 1983. - V. 143, №4. - P. 653-655.
118. Davis P.B., Di Sant A/P/ Diagnosis and treatment of cystic fibrosis : an update // Chest. 1984. - V. 85, № 6. - P. 802-809.
119. Derelle J., Guernard L., Kures L., Vedailhet M. Role of mould allergy in cystic fibrosis // 18th Eur. CF Conf.: Book of abstr. Madrid, 1993. - P. 053.
120. Desanctis G.T., Mehta S., Kobzik L., Yandava C., Jiao A.P., Drazen J.M. Contribution of type INOS to expired gas NO and bronchial responsiveness in mice // Am. J. Physiol. (Lung Cell Mol. Physiol.). 1997. - V. 17. - P. L883-L888.
121. Dinarello C.A., Wolff S.M. The role of interleukins in desease // N. Engl. J. Med. 1993. - V. 328. - P. 106-113.
122. Dizier M.H., Besse-Schmittler C., Guilloud-Bataille M. Genome screen for asthma and related phenotypes in the French EGEA study // Am. J. Respir. Crit. Care Med.-2000.-V. 162.-P. 1812-1818.
123. Doucet C., Brouty-Boye D., Pottin-Clemenceau C., Canonica G. W., Jasmin C., Azzarone B. Interleukin (IL) 4 and IL-13 Act on Human Lung Fibroblasts // J. Clin. Invest. 1998. - V. 101, № 10. - P. 2129-2139.
124. Doucet C., Brouty-Boye D., Pottin-Clemenceau C., Jasmin C., Canonica G.W., Azzarone B. IL-4 and IL-13 specifically increase adhesion molecule and inflammatory cytokine expression in human lung fibroblasts // Int. Immunol. — 1998.-V. 10.-P. 1421-1433.
125. Dower S.K., Smith C.A., Park L.S. Human cytokine receptors // J. Clin. Immunol. 1990. - V. 10. - P. 289-299.
126. Edwards A.D. The pharmacology of inhaled nitric oxide // Arch. Dis. Child. Fetal. Neonatal. Ed. 1995.-V. 72, № 2.-P. F127-F130.
127. Elbom J.S., Snale D.J. Britton J.R. Cystic fibrosis: current survival and population estimates to the year 2000 // Thorax. 1991. - V. 46. - P. 881-885.
128. Estivill X. Spectrum of mutations in cystic fibrosis gene // 18th Eur. CF Conf.: Abstr. Book. Madrid. - 1993. - P. SI.
129. Faux J.A., Aydir E.M., Thomson A.H. Immune response to Aspergillus fumigatus and Candida albicans in cystic fibrosis in relation to antibiotic treatment // Eur. Respir. J. 1990. - V.4. - P. 414.
130. Feigelson J., Pecau J., Cathelineau L., et al. Additional data on hepatic function tests in cystic fibrosis // Acta Paediat. Scand. 1975. - V. 64. - P.337-344.
131. Fenech A., Hall I.P. Pharmacogenetics of asthma // J. Clin. Pharmocol. -2002.-V. 53.-P. 3-15
132. Forstermann U., Closs E.I., Pollock J.S. Nitric oxide synthase isozymes, characterization, purification, molecular cloning and function // Hypertension. -1994,-V. 23. — P. 1121-1131.
133. Fryer A.A., Bianco A., Hepple M., Jones P.W., Strange R.C., Spiteri M.A. Polymorphism at the glutathione S-transferase. A new marker for bronchial hyperresponsiveness and asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - V. 161. -P. 1437-1442.
134. Gao P.S., Huang S.K. Genetic aspects of asthma // Panminerva Med. 2004. -V. 46, №2.-P. 121-134.
135. Garte S., Gaspari L., Alexandrie A. Metabolic gene polymorphism frequencies in control populations // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001.1. V. 10.-P. 1239- 1248.
136. Gaston B., Kobzik L., Stamler J.S. Distribution of nitric oxide synthase in the lung // Nitric oxide and the lung / W. Zapol, K. Bloch, editors. New York: Marcel Dekker, 1997.-P. 75-86.
137. Geller D.A., Billiar T.R. Molecular biology of nitric oxide synthases // Cancer Metastasis Rev. 1998. - V. 17. - P. 7.
138. Gilliland F.D., Li Y.F., Dubeau L. et al. Effects of glutathione S-transferase Ml, maternal smoking during pregnancy, and environmental tobacco smoke on asthma and wheezing in children // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. - V. 166. -P. 457-463.
139. Gladman G., Connor P.J. Williams R.F., David T.J. Controlled study of Pseudomonas cepacia and Pseudomonas maltiphilia in CF // Arch. Dis. Children. -1992.-V. 67.-P. 192-195.
140. Global initiative for asthma. Global strategy for asthma management and prevention. National heart, lung and bood institute. Publication number 95-3659, 1995.- 176 p.i 151. Grasemann H., Knauer N., Buscher R., Hubner K., Drazen J.M:, Ratjen F.
141. Airway nitric oxide levels in cystic fibrosis patients are related to a polymorphism in the neuronal nitric oxide synthase gene // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. -V. 162.-P. 2172-2176.
142. Greally M., Jagoe W.S., Greally J. The genetics of asthma // Ir. Med. J. -1982.-V. 75.-P. 403-405.
143. Grunig G., deVries J.E., de Waal R. The role of IL-13 and its receptor in allergy and inflammatory // The Cytokine Handbook/ Ed. by A.W. Thomson, M.T. Lotze. Acad. Press, 2003. - P. 409.
144. Guo J., Apiou F., Mellerin M.P., Lebeau B., Jacqyes Y., Minvielle S.
145. Chromosomal mapping and expression of the human interleukin-13 receptor // Genomics. 1997. - V. 42. - P. 141-145.
146. Gustafsson L.E. Exhaled nitric oxide as a marker in asthma // Eur. Respir. J. 1998. - V. 26.-P. 49S-52S.
147. Habig W.H., Jakoby W.B., Glutation-S-transferases (rat and human) // Methods Enzymol. 1981. - V. 77. - P. 218-231.
148. Hall A.V., Antoniou H., Wang Y., Cheung A.H., Arbus A.M., Olson S.L. Structural organization of the human neuronal nitric oxide synthase gene (NOS1) // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 33082-33090.
149. Hamid Q.,.Tulic M.K, Liu M.C., Moqbel R. Inflammatory cells in asthma: Mechanisms and implications for therapy // J. Allergy. Clin. Immunol. 2003. - V. Ill, № l.-P. 5-17
150. Hatagima A. Genetic polymorphisms and metabolism of endocrine disruptors in cancer susceptibility // Cad. Saude Publica. 2002. - V. 18. - P. 357-377.
151. Hayes J.D., Pulford D.J. The glutathione S-transferase supergene family: regulation of GST and the contribution of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug resistance // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1995. - V. 30.-P. 445-600.
152. Heinzmann A., Mao X.-Q., Akaiwa M., Kreomer R.T., Gao P.-S.Genetic variants of IL-13 signalling and human asthma and atopy // Human Molecular Genetics. 2000. - V.9, №4. p. 549-559.
153. Heldin C.H., Westermark B. Platelet-derived growth factor: mechanism of activation and possible vivo function // Cell Régulât. 1990. - V. l.-P. 555-566.
154. Hershey G.K., Friedrich M.F., Esswein L.A., Thomas M.L., Chatila T.A. The association of atopy with a gain-of-function mutation in the alpha subunit of the interleukin-4 receptor //N. Engl. J. Med. 1997. - V. 337. - P. 1720-1725.
155. Hibbs J.D., Westenfelder C., Taintor R. Evidence for cytokine-inducible nitric oxide synthesis from L-arginine in patients receiving interleukin-2 therapy // J. Clin. Invest. 1992. - V. 89. - P. 867-877.
156. Hodson M.E. Cystic fibrosis // Postgraduate Med. J. 1984. - V. 60, №3.1. P. 225-233.
157. Holgate S.T., Church M.K., Howarth P.H., Morton E.N., Frew A. J., Djukanovic R. Genetic and environmental influences on airway inflammation in asthma // Int. Arch. Allergy Immunol. 1995. - V. 107. - P. 29-33.
158. Howard M., Paul W.E. Interleukins for B lymphocytes // Lymphokine Res. -1982.-V. l.-P. 1-4.
159. Hull J., Thomson A.H. Contribution of genetic factors other than CFTR to disease severity in cystic fibrosis // Thorax. 1998. - V. 53. - P. 1018-1021.
160. Hull J., Vervaart P., Grimwood K. Pulmonary oxidative stress response in young children with cystic fibrosis // Thorax. 1997. — V. 52. - P. 557-560.
161. Hunley T.E., Iwasaki S., Homma T., Kon V. Nitric oxide and endothelin in pathophysiological settings // Pediatr. Nephrol. 1995. - V. 9, № 2. - P. 235-244.
162. Jenkins M.A., Hopper J.L., Bowes G., Carlin J.B., Flander L.B., Giles G.G. Factors in childhood as predictors of asthma in adult life // BMJ. 1994. - V. 309. -P. 90-93.
163. Joos L., Pare P., Sanford A. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease // Swiss med. Wkly. 2002. - V. 132. - P. 27-37.
164. Juronen E., Tasa G., Uuskula M., Pooga M., Mikelsaar A.V. Purification, characterization and tissue distribution of human class theta glutathione S-transferase Tl-1 // Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. - V. 39. - P. 21-29.
165. Kawashima T., Noguchi E., Arinami T., Yamakawa-Kobayashi K., Nakagawa H., Otsuka F., Hamaguchi H. Linkage and association of an interleukin 4 gene polymorphism with atopic dermatitis in Japanese families // J. Med. Genet. — 1998.-V. 35.-P. 502-504.
166. Kerem B.S, Romnens J.M., Buchanan J.A. Identification of the cystic fibrosis gene: genetic analysis // Science. 1989. - V. 245. - P. 1073-1080.
167. Kerem E., Corey M., Kerem B.-S. et al. The reactoin between genotype and phenotype in cystic fibrosis analysis of the most common mutation (delF508) // N. Engl. J. Med. - 1990. -V. 323. - P. 1517-1522.
168. Ketley J.N., Habig W.H., Jakoby W.B. Binding of nonsubstrate ligands to theglutation-S-transferases // J. Biol. Chem. 1975. - V. 250, № 22. - P. 8670-8673.
169. Kharitonov S.A., Barnes P.J. Exhaled nitric oxide: a marker of airway inflammation? // Curr. Opin. Anaestesiol. 1996. - V.9. - P. 542-548.
170. Kharitonov S.A., Fan Chung K., Evans D.J., O'Connor B.J., Barnes P.J. Increased exhaled nitric oxide in asthma is mainly derived from the lower respiratory tract // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1996. - V. 153. - P. 17731780.
171. Kharitonov S.A., Wells A.U., O'Connor B.J., Cole P.J., Hansell D.M., Logan-Sinclair R.B., Barnes P.J. Elevated levels of exhaled nitric oxide in bronchiectasis // Ibid.- 1995.-V. 151, №6.-P. 1889-1893.
172. Kharitonov S.A., Yates D.H., Barnes P.J. Inhaled glucocorticoids decrease nitric oxide in exhaled air of asthmatic patients // Ibid. 1996. - V. 153, № 1. - P. 454-457.
173. Kiesewetter S., Masek M.J., David C. et al. A mutation in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene produces different phenotypes depending on chromosomal background // Nat. Genet. 1993. - V. 27, №5. - P. 788-792.
174. Kobzik L., Reid M.B., Bredt D.S., Stamler J.S. Nitric oxide in skeletal muscle // Nature. 1994. - V. 372. - P. 546-549.
175. Kruse S., Forster J., Kuehr J., Deichmann K.A. Characterization of the membrane-bound and a soluble form of human IL-4 receptor a produced by alternative splicing // Internat. Immunol. 1999. - V. 11, № 12. - P.1965-1969.
176. Laisney V., Gross M.S., Frezal J. Human genes for glutation-S-transferases // Hum. Genet. 1984.-V. 68.-P.221-227.
177. Laitinen T., Rasanen M., Kaprio J., Koskenvuo M., Laitinen L.A. Importance of genetic factors in adolescent asthma: a population-based twin-family study //
178. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. - V. 157.-P. 1073-1078.
179. Le Souef P.N. Asthma genetics studies in Western Australia // Clin. Exp. Allergy. 1995. - V. 25. - P. 26-28.
180. Lee Y.C., Cheon K.T., Lee H.B., Kim W., Rhee Y.K., Kim D.S. Gene polymorphisms of endothelial nitric oxide synthase and angiotensin-converting enzyme in patients with asthma // Allergy. 2000. - V. 55. - P. 959-963.
181. Leonardo M.J., Baltimore D. NF-kB: pleiotropic mediator of inducible and tissue-specific gene control // Cell. 1989. - V. 58. - P. 227-229.
182. Lis G., Kostyk E., Sanak M., Pietrzyk J.J. Molecular studies in a population of children with bronchial asthma // Pneumonol. Alergol. Pol. 2001. - V. 69. - P. 265-272.
183. Lowenstein C.J., Dinerman J.L., Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messenger // Ann. Intern. Med. 1994. - V. 120. - P. 227-237.
184. Mansur A.H., Christie G., Turner A., Bishop D.T., Markham A.F., Helms P., Morrison J.F. Lack of linkage between chromosome 5q23-33 markers and IgE/bronchial hyperreactivity in 67 Scottish families // Clin. Exp. Allergy. 2000. -V. 7.-P. 954-961.
185. Meyer D.J., Coles B., Pemble S.E., Gilmore K.S., Fraser G.M., Ketterer B. Theta, a new class of glutathione transferases purified from rat and man // Biochem. J. 1991. - V. 274. - P. 409-414.
186. Michel F.B., Bousquet J. Prevention of allergy // Presse Med. 1989. - V. 16.-P. 1367-1369.
187. Mitsuyasu H., Yanagihara Y., Mao X.Q., Gao P.S., Arinobu Y., Ihara K., Takabayashi A., Hara T. Cutting edge: dominant effect of Ile50Val variant of the human IL-4 receptor alpha-chain in IgE synthesis // J. Immunol. 1999. - V. 162. -P. 1227-1231.
188. Moncada S. Nitric oxide in the vasculature: physiology and pathophysiology // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1997. - V. 811. - P.60-67.
189. Moncada S., Higgs A. Mechanisms of disease: the L-arginine nitric oxide pathway //New Engl. J. Med. - 1993. - V. 329. - P. 2002-2012.
190. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology // Pharmacol. Rev. 1991. - V. 43. - P. 109142.
191. Mortenson J., Lange P., Jorgen N., Groth S. Lung mucociliary clearance // Eur. J. Nucl. Med. 1994. - V. 21. - P. 953-961.
192. Moser R., Fehr J., Bruijnzeel P.L. IL-4 controls the selective endothelium-driven transmigration of eosinophils from allergic individuals // J. Immunol. 1992. -V. 149.-P. 1432-1438.
193. Murad F. Discovery of some of the biological effects of nitric oxide and its role in cell signaling // J. Biosci. Rep. 1999. - V. 19, №3. - P. 133-154.
194. Murlas C.G. Patogenesis of airway hyperreactivity // Chest. 1988. - V. 93, №6.-P. 1278-1280.
195. Nakaki T. Physiological, and clinical significance of NO (nitric oxide) a review // Keio J. Med. - 1994. - V. 43. - P. 15-26.tVi
196. Nakielna B. Diagnosis of cystic fibrosis in adult patients // 1 lm Inern. CF Cong.: Book of Abstr. Dublin, 1992. - P.S22.
197. Nathan^ C., Xie Q. Nitric oxide synthases: roles, tolls and controls // Cell. -1994.-V. 79.-P. 915-918.
198. Nebert D.W., Carvan M.J. 3rd. Ecogenetics: from ecology to health // Toxicol. Ind. Health. 1997. -V. 13. - P. 163-192.
199. Neve J., Boule M. Assessment of bronchial lability in cystic fibrosis. Clinical correlation and therapeutically aspects // Pediatr. Pulmon. 1990. - Suppl.5. - P. 259.
200. Nijkamp F.P., Folkerts G. Nitric oxide and bronchial hyperresponsiveness // Arch. Int. Pharmacodyn. 1995. - V.329, № 1. - P.81-96.
201. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T., Takeda K., Maki T., Miyamoto T.,
202. Kawashima T., Kobayashi K., Hamaguchi H. Evidence for linkage between asthma/atopy in childhood and chromosome 5q31-q33 in a Japanese population // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997. - V. 156. - P. 1390-1393.
203. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T., Takeda K., Yokouchi Y., Kawashima T., Yanagi H., Matsui A., Hamaguchi H. Association of asthma and the interleukin-4 promoter gene in Japanese // Clin. Exp. Allergy. 1998. - V. 28. - P. 449-453.
204. Nussler A.K., Di Silvio M., Billiar T.R. Stimulation of the nitric oxide synthase pathway in human hepatocytes by cytokines and endotoxin // J. Exp. Med. 1992.-V. 176.-P. 261-264.
205. Ober C., Cox N. J., Abney M. et al. Genome-wide search for asthma susceptibility loci in a founder population // Hum. Mol. Genet 1998. - V.7. - P. 1393-1398.
206. Ober C., Moffatt M.F. Contributing factors to the pathobiology. The genetics of asthma // Clin. Chest. Med. 2000. - V. 21. - P. 245-261.
207. Ohara J., Paul W.E. Up-regulation of interleukin 4/B-cell stimulatory factor 1 receptor expression // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988. V. 85. - P. 82218225.
208. Oiso N., Fukai K., Ishii M. Interleukin 4 receptor alpha chain polymorphism Gln551Arg is associated with adult atopic dermatitis in Japan // Br. J. Dermatol. -2000.-V. 142.-P. 1003-1006.
209. Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endotheliumderived relaxing factor // Nature. -1987. V.327.-P. 524-526.
210. Paul W.E. Interleukin-4: a prototypic immunoregulatory lymphokine // Blood. 1991. - V. 77. - P. 1859-1870.
211. Pepper C.B., Shah A.M. Nitric oxide: from laboratory to bedside // Spectrum Int. 1996. - V. 36. - P. 20-23.
212. Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990.-V. 87.-P. 5193-5197.
213. Rahman I., MacNee W. Lung glutation and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease // Am. J. Physiol. 1999. - V. 277. - P. L1067-L1088.
214. Riordan J.M., Rommens J.M., Kerem B. Identification of cystic fibrosis gene: cloning and characterization of complementary DNA // Science. 1989. - V. 245. -P. 1066-1073.
215. Rosa-Rosa L., Zimmermann N., Bernstein J.A., Rothenberg M.E., Khurana Hershey G.K. The R576 IL-4 receptor alpha allele correlates with asthma severity // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. -V. 104. - P. 1008-1014.
216. Rosenwasser L.J., Klemm D.J., Dresback J.K., Inamura H., Mascali J.J., Klinnert M., Borish L. Promoter polymorphisms in the chromosome 5 gene cluster in asthma and atopy // Clin. Exp. Allergy. 1995. - V. 2. - P. 74-78, 95-76.
217. Rozmaher R., Wilschanski M., Matin A. et al. Modulation of disease severity in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator deficient mice by asecondary genetic factor // Nat. Genet. 1996. - V. 12. - P. 280-287.
218. Sandford A.J., Pare P.D. The genetics of asthma. The important questions // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - V. 161. - P. S202-S206.
219. Santis G., Osbone L., Knight R.A. et al. Independent genetic determinants of pancreatic and pulmonary status in cystic fibrosis // Lancet. 1990. - V. 336. - P. 1081-1084.
220. Schuller M., Stelcl M., Rybnieek O., Buekova D., Izakovieova L. The ecNOS gene in allergic Czech children //Allergy. 2002. - V. 57. - P. 368-369.
221. Scoggan K.A., Jakobsson P.J., Ford-Hutchinson A.W. Production of leukotriene C4 in different human tissues is attributable to distinct membrane bound biosynthetic enzymes // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 10182-10187.
222. Seidegard J., Vorachek W.R., Pearson W.R. Hereditary differences in the expression of the human glutathione transferase active on trans-stilbene are due to a gene deletion // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1998. - V. 85. - P. 7293-7297.
223. Sengler C., Lau S., Wahn U., Nickel R. Interactions between genes and environmental factors in asthma and atopy: new developments // Respir. Res. — 2001. V. 3, № 2. - P. 15-31.
224. Sibbald B. Genetics of asthma and atopy: an overview // Clin. Exp. Allergy. -1991.-V.21.-P. 178-181.
225. Sibbald B., Turner-Warwick M. Factors influencing the prevalence of asthma among first degree relatives of extrinsic and intrinsic asthmatics // Thorax. 1979. -V. 34.-P. 332-337.
226. Silkoff P.E., Robbins R.A., Gaston B. Endogenous nitric oxide in allergic airway disease // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - V. 105. - P. 438-448.
227. Singh S., Evans T.W. Nitric oxide, the biological mediator of the decade: fact or fiction? // Eur. Respir. J. 1997. - V. 10. - P. 699-707.
228. Skadhauge L.R., Christensen K., Kyvik K.O., Sigsgaard T. Genetic and environmental influence on asthma: a population-based study of 11,688 Danish twin pairs // Eur. Respir. J. 1999. - V. 13. - P. 8-14.
229. Smith L.S., Drumm M., Wilkinson D.J. Chloride conductance expressed bydel F508 and other mutant CFTRs in Xenopus oocytes // Science. 1991. - V. 254. -P. 1797-1799.
230. Snyder S.H. Janus faces of nitric oxide // Nature. 1993. - V. 364. - P. 577.
231. Song Z., Casolaro V., Chen R., Georas S.N., Monos D., Ono S.J. Polymorphic nucleotides within the human IL-4 promoter that mediate overexpression of the gene // J. Immunol. 1996. - V. 156. - P. 424-429.
232. Steinke J.W., Borish L. Th2 cytokines and asthma. Interleukin-4: its role in the pathogenesis of asthma, and targeting it for asthma treatment with interleukin-4 receptor antagonists // Respir. Res. 2001. - V. 2, № 2. - P. 66-70.
233. Steinke J.W., Borish L., Rosenwasser L.J. Genetics of hypersensitivity // J. Allergy Clin. Immunol.-2003.-V. 111.-P. S495-501.
234. Suzuki I., Hizawa N., Yamaguchi E., Kawakami Y. Association between a C+33T polymorphism in the IL-4 promoter region and total serum IgE levels // Clin. Exp. Allergy. 2000. - V. 30. - P. 1746-1749.
235. Tedgui A., Mallat Z. Anti-inflammatory mechanisms in the vascular wall // Circ. Res. 2001. - V. 88. - P. 877-887.
236. Tepper R.S. Airway reactivity in infants: a positive response to methacholine metaproteirenol // J. Appl. Physiol. 1987. - V. 62, №3. - P. 1155-1159.
237. Texereau J., Marullo S., Hubert D., Coste J., Dusser D.J., Dall'Ava-Santucci J., Dinh-Xuan A.T. Nitric oxide synthase 1 as a potential modifier gene of decline in lung function in patients with cystic fibrosis // Thorax. 2004. - V.59. - P. 156158.
238. Thomas S.R., Kharitonov S.A., Scott S.F., Hodson M.E., Barnes P.J. Nasal and exhaled nitric oxide is reduced in adult patients with cystic fibrosis and does not correlate with cystic fibrosis genotype // Chest. 2000. - V. 117. - P. 1085-1089.
239. Tizzano E.E., Buchwald M. CFTR expression and organ damage in cystic fibrosis // Am. Intern. Med. 1995. - V. 15. - P. 305-308.
240. Torres-Galvan M. J., Quiralte J., Pestano J. J., Ortega N., Blanco C., Castillo R., Carrillo T., Perez-Aciego P., Sanchez-Garcia F. IL4-R1 (5q31-q33) and FcsRI-f3ca (llql3) markers and atopy: a case/control study in a Spanish population //
241. Allergy. 2001. - V. 56. - P. 159-163.
242. Tsui L.-C. Mutations and sequence variations detected in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene: a report from the cystic fibrosis analysis consortium // Hum. Mutation. 1992. - V. 1, № 3. - P. 197-203.
243. Van Alphen L. Interaction of Bacteria and airway epithelial cells // Eur. Resp. J. 1996. - №9. - P. 1342-1344.
244. Vella A., Teague T.K., Ihle J., Kappler J., Marrack P. Interleukin 4 (IL-4) or IL-7 prevents the death of resting T cells: stat6 is probably not required for the effect of IL-4 // J. Exp. Med. 1997. -V. 186. - P. 325-330.
245. Vilcek J., Le J. Immunology of cytokines: an introduction // The Cytokine Handbook / Ed. A.W. Thomson. Academic Press, 1994. - P. 1-19.
246. Vitetta E.S., Fernandez-Botran R., Myers C.D., Sanders V.M. Cellular interaction in the humoral immune response // Adv. Immunnol. 1989. - V. 45. -P. 1-105.
247. Walley A.J., Cookson W.O. Investigation of an interleukin-4 promoter polymorphism for associations with asthma and atopy // J. Med. Genet. 1996. — V. 33.-P. 689-692.
248. Wang H.Y., Shelburne C.P., Zamorano J., Kelly A.E., Ryan J.J., Keegan A.D. Cutting edge: effects of an allergy-associated mutation in the human IL-4RA (Q576R) on human IL-4-induced signal transduction // J. Immunol. 1999. - V. 162.-P. 4385-4389.
249. Wang X.L., Mahaney M.C., Siew A. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997.-V. 17.-P. 3147-3153.
250. Wang X.L., Wang J. Endothelial nitric oxide synthase gene sequence variations and vascular disease // MoL Genet. Metab. 2000. - V. 70. - P. 241-251.
251. Wang Y., Marsden P.A. Nitric oxide synthases: biochemical and molecular regulation // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1995. - V. 4. - P. 12-22.
252. Wechsler M.E., Grasemann H., Deykin A., Silverman E.K., Yandava C.N., Israel E., Wand M., Drazen J.M. Exhaled Nitric Oxide in patients with asthmaassociation with NOS1 genotype // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - V. 162. - P. 2043-2047.
253. Weinberger B., Heck D.E., Laskin D.L. Nitric oxide in the lung: therapeutic and cellular mechanisms of action // Pharmacol. Ther. 1999. - V. 84, № 3. - P. 401-411.
254. Welsh M.J. Trials of gene transfer in humans: what have we learned? // Pediatr. Pulmon. 1995. - V. 12. - P. 121.
255. Welsh M.J., Smith A.E. Molecular mechanisms of CFTR chlotide channel dysfunction in cystic fibrosis // Cell. 1995. - V. 73. - P. 1251-1254.
256. Whitty A., Raskin N., Olson D., Borysenko C.W., Ambrose C.M., Wilkinson J., Clapper M.L. Detoxification enzymes and chemoprevention // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1997.-V. 216.-P. 192-200.
257. Winne J J. Basic aspects of cystic fibrosis // Clin. Rev. Allergy. 1991. — V. 9.-P. 1-28.
258. Wjst M., Kruse S., Illig T., Deichmann K. Asthma and IL-4 receptor alpha gene variants // Eur. J. Immunogen. 2002. - V. 29. - P. 263-268.
259. Xie H., Seward R.J., Huber B.T. Cytokine rescue from glucocorticoid induced apoptosis in T cells is mediated through inhibition of Ik-Ba // Mol. Immunol. 1997. - V. 34. - P. 987- 994.
260. Zhang Y., Lefort J., Kearsey V. et al. A genome-wide screen for asthma-associated quantitative trait loci in a mouse model of allergic asthma // Hum. Mol. Genet 1999. - V. 8. - P. 601-605.