Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Клинико-экспериментальное обоснование повреждений слизистой оболочки желудка при инфаркте миокарда

На правах рукописи

¿>0 /Ус^Г¿у

НЛСЫГОВ ВЛАДИЛЕН ХАЛИМОВИЧ

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ИНФАРКТЕ МИОКАРДА

14. 00. 25 - фармакология 14. 00. Об - кардиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

УФА - 1999

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете.

Научные руководители:

доктср медицинских наук J1.A. Валеева

доктср медицинских наук, профессор Л.Н. Мингазетдинова

Официальные оппоненты:

доктср медицинских наук, профессор Ф.С. Зарудий доктор медицинских наук, профессор Э.Г. Муталова

Ведущая организация: Казанский государственный медицинский университет им. C.B. Курашова

Защита диссер тации состоится "с^ "Q/HZ/i^b^eï- 1999 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д 084. 35. 01 при Башкирском государственном медицинском университете по адресу : 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета.

4 Автореферат разослан "¿¿Vf//ii ït<fj<j 1999

г.

Учений секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Х.М. Насыров

ОЫЦЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛЬОТЫ

Актуальность проблемы. Ишемическая болезнь сердца (ИБС) относится к числу наиболее распространенных заболеваний по тяжести ее осложнений и летальности, поражая трудоспособное население. Среди всех вариантов ИКС инфаркт миокарда (ИМ) часто определяет течение и исход заболевания по числу ранней инвалидизации и высокой смертности. У ряда больных течение ИМ осложняется нарушениями моторики и секреторной деятельности желудочно-кишечного факта (ЖКТ) от легких функциональных изменений до паралича желудка и изъязвления слизистой оболочки желудка (СОЖ) я двенадцатиперстной кишки с последующими желудочно-кишечными кровотечениями (Cappel, 1995; Blair, Hyes, 1995; Pohl, 1996).

Механизмы формирования абдоминального синдрома у больны»: ИМ недостаточно ясны, поэтому существующие методы лечения не дают желаемого эффекта (Kaplan, 1996; Rosario et al, 1996). В свете изложенных фактов поиск новых путей фармакологической регуляции деятельности желудка при ИМ является актуальной задачей.

В последние годы в повреждении СОЖ большое значение придается таким нейромедиаторам, как серотонин и гнетами», а также их рецепторам, расположенным в ЖКТ (Шамшонкова Т.П. и др., 1992; Солтано» Е.В. и др., 1993; Hanas et al, 1994). По данным Gidener et al (1995) повреждение СОЖ ссротони-иом опосредуется 5-НТ]д рецепторами. По мнению Alarson et л1 (1996) в этот процесс вовлечены 5-НТ; рецепторы. Cho et al (1994) полагают, что серотонин оказывает ульцерогенное действие, возбуждая 5-НТз рецепторы.

Ульцсрогенное действие гистамина на СОЖ опосредуг.ст также Н2 рецепторы желудка и двенадцатиперстной кишки, поэтому в настоящее время для лечения язвенной болезни широко используют Н2 блокаторы - ц (м-лидин, ранити-дин, низатидин, фамотидин и др.(Roberts, Bateman, 1995). Ряд аьторов в патогенезе язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишкл придают большое значение активации лизосомальных ферментов ЖКТ, имеющих татаболическую направленность действия (Княшева И.Р. и др., 1991; Оетапчуч Н В., 1991; Бсло-стоцкий Н И., 1996)

Несмотря на несомненное значение серотонина, гистамина и и;: рецепторов, а также лизосом желудка в патогенезе язвенной болезни и двенадцатиперстной кишки, их роль в формировании желудочно-кишечных осложнений при ИМ недостаточно ясна.

Цель исследовании. Выявление роли серогониновых, гистачшгопых рецепторов и лизосом желудка в повреждении СОЖ при ИМ и обоснование возмож-

мости фармакологической регуляции плотности рецепторов и активности ферментов личосом для профилактики и лечения абдоминального синдрома у больных ИМ.

Задачи исслешиаппн

1. Клиническое обоснование повреждения СОЖ у больных ММ.

2. Выявление макроскопических и микроскопических изменений СОЖ крыс в зависимости от размера зоны некроза сердечной мышцы, активности ферментов (ЛДГ, КОК.. АлАТ, АсАТ) в крови.

3. Определение количества участков связывания [3П] - серотонина и [3Н] -гистамииа в мембранной фракции гомогената желудка (МФГЖ) в разные сроки экспериуентального ИМ.

4. Оценка состояния лизосомального аппарата желудка при ИМ.

Научная новизна. Впервые изучены специфическое связывание [3Н] -серотонина и ['Н] - гистамииа с МФГЖ и активность лизосомальных ферментов - р-глюкозилазы, [!-галактозидазы в тканях желудка у крыс с экспериментальным ИМ в зависимости от стадии заболевания, в связи с морфологическими изменениями ЖКТ и активностью ферментов ЛДГ, КФК, АлАТ, АсАТ в крови экспериментальных животных.

Установлено, что при ИМ изменяется плотность ссротониновых рецепторов желудка. Специфическое связывание [}Н] - серотонина с МФГЖ уменьшалось в первые (1, 2, 3) дни после перевязки коронарной артерии, увеличивалось в последующие сроки наблюдения (5, 6, 7 дни) и возвращалось к исходному уровню через 15 суток. Увеличение плотности ссротониновых рецепторов желудка по Бремени совпадало с появлением язв и эрозий на СОЖ.

Выявлены изменения количества гистаминовых рецепторов желудка при ИМ. Установлено, что специфическое связывание [3Н] - гистамииа с МФГЖ повышается через сутки после перевязки коронарной артерии, которое сменяется спадом в последующие (2, 3, 4) сутки исследования. Второй подъем уровня связывания лиганда отмечается на 6-е сутки наблюдения, что предшествует повреждению СОЖ. Показано, что при экспериментальном ИМ с первого дня исследования повышается активность лизосомальных ферментов желудка. Активность Р-гяюкозидазы была выше контрольных величин в первые три дня исследования, активность Р-галактозидазы возвращалась к исходному уровню лишь на 15-е сутки.

Научно-практическая ценность работы. Получены новые сведения об участии ссротониновых рецепторов желудка в повреждении СОЖ при ИМ, что расширяет представление о патогенезе острого коронарного синдрома и открывает перспективу применения агонистов и антагонистов серотонина в лечении гастродуоденальных осложнений инфаркта миокарда.

Определена роль гистаминовых рецепторов в патогенезе абдоминального синдрома при ИМ. Полученные данные обосновывают возможность фармакологической регуляции плотности гистаминовых рецепторов Ж;:лулка дня профилактики и лечения абдоминального синдрома при ИМ.

Обнаружены новые данные о вовлечении лизосомальных ферментов желудка в повреждение СОЖ при ИМ, что дополняет имеющиеся знания о роли лизосомальных ферментов в патогенезе ИМ и определяет новые подходы к лечению и профилактике желудочных кровотечений у больны:« ИМ. Порученные данные могут быть использованы для преподавания патологической физиологии, фармакотерапии, кардиологии. Они помогут выбрать правильную тактику ведения больных с наличием в анамнезе язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки или эрозивного гастрита.

По результатам исследований получены свидетельства на рационализаторские предложения № 2087 от 31.05.99 г. " Способ корреляции осложнений со стороны желудочно-кишечного тракта при остром инфаркте миокарда " и № 2088 от 31.05.99 г. "Способ лечения желудочно-кишечных осложнении в остром периоде инфаркта миокарда".

Основные положепш:, выносимые на защиту.

1. При инфаркте миокарда изменяется специфическое связывание [3Н] - серото-нина с МФГЖ. Количество сайтов связывания лиганда уменьшается в начальной стадии ИМ и увеличивается з дальнейшем.

2. Плотность гистаминовых рецептороз желудка повышается з первые дни после перевязки коронарной артерии и уменьшается в последующие.

3. При экспериментальном ИМ с первого дня заболевания повышается активность лизосомальных ферментов желудка.

4. Повышение плотности сайтов связывания гистамина и активности ферментов лизосом желудка при ИМ предшествует повреждению СОЖ.

5. Увеличение плотности серотониновых рецепторов желудка по времени совпадает с появлением язв и эрозий на СОЖ.

Внедрение результатов работы в практику. Полученные данные используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии №1 и 2, внутренних болезнен Башкирского государственного медицинского университета, а также в лечении острого ИМ в кардиологических и терапевтически»: отделениях больниц г. Уфы.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на IV и V Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Мосхва, 1997, 1998), на конференции молодых ученых (Уфа, 1999), заседаниях Башкирского общества фармакологов ■>: проблемной комиссии по экспериментальной фармакологии "Изыскание и изучение новых биологически активных веществ", на межкафедральном заседании кафедр фармакологии №1 и 2 и внутренних болезней №1.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на листах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 26 рисунками. Библиография представлена 48 отечественными и 146 иностранными источниками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОНАПИЯ

Проведен ретроспективный анализ 149 историй и 40 больных острым ИМ, проходивших лечение в кардиореанимационном отделении клинической больницы №13 г. Уфы в 1996-1998 гг.

Все больные прошли тщательное обследование, которое включало, кроме общеклинических методов, измерение артериального давления на плечевой артерии методом Короткова (за истинное принимается наименьший показатель на правой илечеьой артерии при 3-х кратном измерении). Лабораторные методы исследования включали общий анализ крови с лейкоцитарной формулой, определение гемоглобина, исследование ферментов в крови: креатинфосфокиназы (КФК), а.спартат,-;аланинаминотрансферазы (АсАТ- АлАТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ); реологических показателей крови, электрокардиографию (ЭКГ), эхокар-диографию (ЭхоКГ), по показаниям - фиброгастродуоденоскопию (ФГДС). Исследование внутрисердечной гемодинамики проведено методом эхокардиогра-фии (М-., В-, допамер-режимы) на аппарате "А11оса - 650" (Япония).

Экспериментальные исследования выполнены на 500 крысах - самцах массой 140-160 г.

Инфаркт миокарда (ИМ) у крыс вызывали под эфирным наркозом путем перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии на 1,5 мм ниже ушка левого предсердия (Коган А.Х., 1979). Для подтверждения ИМ у животных снимали ЭКГ в трех стандартных отведениях при скорости движения бумажной ленты 50 мм/с, 1 мВ = 10 мм до начала экспериментов, сразу после воспроизведения ИМ и в динамике. Измеряли стандартные зубцы и интервалы ЭКГ и вычисляли систолический показатель. Гистологическое подтверждение наличия ИМ получали путем окрашивания срезов сердца гематоксилинэозином и исследования их в проходящем свете.

Контрольных животных оперировали аналогичным способом, но коронарную артерию не перевязывали, а лишь подводили под нее лигатуру.

Олытных крыс забивали через I, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 15 дней после перевязки коронарной артерии.

Ложноопернрованные животные также подразделялись на 10 групп с такими же сроками после операции, как и опытные крысы. Забивали по 10 крыс из

опытной и контрольной групп с одинаковыми сроками наблюдения и 10 ннтакт-ных животных в качестве контроля для ложнооперированных крыс. Перед забоем у всех животных снимали ЭКГ. После декапитации измеряли площадь зоны некроза сердечной мышцы по Когану А.Х. (1984).

С целью изучения состояния слизистой оболочки желудка крыс с ИМ извлекали желудок, вскрывали по малой кривизне, слизистую промывами под проточной водой, исследовали макроскопически состояние слизистой на предмет обнаружения эрозий и язв; часть желудков консервировали в 10% растворе нейтрального формалина для морфологических исследований, часть желудков использовали для изучения состояния гистаминовых и серотониновых рецепторов, а также лизосомальных ферментов.

Мембранные фракции гомогената желудка (МФГЖ) получали методом дифференциального центрифугирования в гомогенной среде по Ыт е( а1 (1988). Полученные МФГЖ использовали для определения участков связывания [3Н] -гистамина и [3Н] - серотонина.

Для определения уровня общего связывания радиолигандов с тканями желудка аликвоты мембранных препаратов с конечным содержанием белка в инкубационной смеси 0,3 - 1,0 мг/мл инкубировали в триплете с [3Н]-лигандами в определенной концентрации. Объем инкубационной смеси составлял 1 мл. Связывание [3Н] - серотонина проводили при 37°С в течение 15 минут з 50 мМ трис-НС1 буфере, содержащем 0,1 % аскорбиновой кислоты и 0,01 мМ паргили-на (АзагсЬ, 1987; НатЬет е1 а)., 1987); [3Н] - гистамина при 0°С в течение 45 минут в 50 мМ трис-НС1 буфере (рН = 7,4) (БиЬгашашап, БкИш, 1981).

Для определения уровня неспецифического связывания реакцию проводили точно также, но в присутствии 1000-кратного избытка немеченых аналогов.

Реакция была остановлена путем фильтрации проб через фильтры ОРС. Фильтры дважды промывались холодным трис-НС1 буфером, просушивались и помещались в сцинтиляционные флаконы с 5 мл сцинтиляционной жидкости на основе диоксана (Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., 1987). Содержание мест связывания выражали в пмолях (10"12 М) или фмолях (10"15 М) лигандз, специфически связанного с 1 мг белка (Ткачук В.А., 1983; Сергеев П.В., Шимановский Н. Л., 1987).

Активность Р-глюкозидазы (КФ 3.2.1.21) и р-гапакхозидазы (КФ3.2.1.23)определяли методом Ра1е1, Тарре! (1969). Принцип метода основан на свойстве 2- или 4-нитрофенола, который образуется при гидр элизе синтетических субстратов лизоссмальнымн гликозидами, давать в щглошой среде характерное желтое окрашивание с максимумом абсорбции при 420 нм. В качестве субстратов использовали : 4-нитрофенил-р-Д-глюкопиранозид - для

определения активности р-глюкозидазы; 4-нитрофенил-Р-Д-галактопиранозид -для определения активности ß-галактозидазы.

Свободную активность ферментов определяли в пативном гомогеиате; общую - после разрушения лизосомальпых мембран тритоном Х-100 в конечной концентрации 0,05% при определении активности р-глюкозидазы и 0,1% при определений активности р-галактозидазы. Для суждения о проницаемости мембран лтосом вычисляли процентное соотношение свободной и общей активности ферментов. Активность плазменного ЛДГ и КФК измеряли с помощью набора реактивов финской фирмы "Lab Systems", АлАТ, АсАТ - с помощью набора реактивоЕ' фирмы "Абрис" (Санкт-Петербург).

Белок определяли по Лоури (Lowri et al., 1969).

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с применением критерия Стьюдента ( Беленький М.Л., 1963). Корреляционный анализ результатов исследований проводили с использованием программы Microsoft Exe! 97.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенный нами анализ 149 историй болезни и 40 больных острым ИМ, находившихся на лечении в кардиореанимационном отделении клинической больницы №13 г. Уфы в 1996-1998 гг. показал, что неприятные ощущения в эпигастральной области при поступлении беспокоили 54,3% больных, у 32,9% -отмечался дискомфорт в виде отрыжки, изжоги, сухости во рту, у 4,2% - рвота с примесью крови или "кофейной гущей". Таким образом, подавляющее большинство больных ОИМ при поступлении в стационар отмечали определенные нарушения со стороны ЖКТ. 30 больным была проведена ФГДС, которая показала наличие свежей язвы кардиалыюго отдела желудка (5 больных), эрозивный антральный гастрит со следами перенесенных кровотечений из эрозий (12 больных). Изучение состояния красного ростка кроветворения у больных ИМ выявило статистически достоверное уменьшение количества эритроцитов и гемоглобина, возникающее на фоне дискомфорта со стороны ЖКТ. Это проявлялось уже при мелкоочаговом ИМ и приобретало более выраженный характер при крупноочаговом ИМ (табл. 1, 2).

Полученные результаты согласуются с данными других авторов, которые наблюдали дискинезии ЖКТ у больных в ранние сроки ИМ (Циммерман Я.С. и др., 1987, 199С); тошноту, рвоту кофейной гущей, мелену, боли в эпигастральной области, головокружение, анемию у ряда больных ИМ (Капанадзе Г.В., Ко-гламашвили А И., 1976); желудочные кровотечения у своих больных наблюдали также Мазченхо Н.С. (1978), Гуревич P.A. и др. (1987), Cappel, Biais, Hyes (1995); ни а\топсии Мокроусов В.М. (1988) обнаружил эрозии.

Таблица 1

Количество эритроцит»» и кроим больных OHM (шш/мкл)

Группы больных Количество об- Количество эри- Уровень досто-

следованных троцитов верности

больных

Острый ИМ 62 4,17+0,095 Р<0,()01

(всего)

ОИМ - мужчин 40 4,21 ±0,069 Р<(),()[)1

ОИМ - женщин 22 3,58±0,087 Р<0,001 Р2 <0.001

Крупноочаговый 45 3,8±0,06 Р<0,()01

ИМ PI <0,1)01

Мелкоочаговый 17 4,2+0,07 Р<0,001

ИМ

Контроль 20 4,8±0,08

Примечание: Р - уровень достоверности но сравнению с контрольной г руппой, Р1 - по сравнению между крупно- и мелкоочаговым ИМ, Р2 - по сравнению показателей мужчин и женщин.

Таблица 2

Содеря;ание гемоглобина кропи больных ОПМ (г/л)

Показатель Контроль ОИМ Крупноочаг. ' ИМ Мелкоочаг. ИМ

Mira 161,0±2,3 147,8±3,35 134,9+2,15 151.2+2,2

Р — Р<0,05 Р<0,05 Р<0,05

% 100 91 83 93

Проведенный клинический анализ позволил приступить к экспериментальному обоснованию повреждения СОЖ при ИМ. С этой ц;лыо нами воспроизводился экспериментальный круиноочаговый левожелудочксвыи ИМ у крыс путем перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии. При этом способе моделирования ИМ экспериментальная патология возникала у 98% животных. Наличие ИМ подтверждалось элекгрокардиогэафически (тахикардия, подъем сегмента БТ, патологический зубец С?!:}, путем измерения площади некроза но Когану А.Х. (1984), повышением активное"!! ЛлА'Г, АсА'Г с первого по седьмой день экспериментального ИМ, повышением активности КФК через 1 и 2 дня, а ЛДГ через 2, 4 и 5 дней после перевозки коронарной артерии (табл. 3).

Таблица 3

Изменение уровни ЛлАТ, АсАТ, ЛДГ п КФК н сьшороткс кропи у крыс с

ИМ

Сроки ин- АлАТ, ед/л АсАТ, ед/л ЛДГ, ед/л КФК, мккат/л

фаркта

1 сутки 92,9 ± 6,3 429 ± 46,0 828 ± 70,4 11,4 ±0,72

Р, <0,001 Р,<0,001 Р,<0,001

Р2<0,001 Р2<0,001 Р2<0,001

2 сутки 86,0 ± 5,4 392 ± 15,1 1440 ± 111,1 5,6 ± 0,49

Р, <0,001 Р,<0,001 Р, <0,001 Р,<0,001

Р2<0,001 Р2<0,001 Р2<0,001 Р2<0,05

3 сугки 78,0 + 5,1 421 ± 24,0 — • 4,5 ±0,31

Р, <0,001 Р,<0,001 Р|<0,05

Р2<0,001 Р2<0,001

4 с>тки 76,5 + 5,1 295 ± 14,7 1719 + 97,6 4,1 +0,31

Р,<0,001 Р,<0,01 Р,<0,001 Р]>0,05

Р2<0,001 Р2<0,01 Р2<0,001

5 с>ггки 75,3 ± 5,9 319 ±21,7 1334 ±85,7 5,05 + 0,53

Р, <0,001 Р,<0,01 Р, <0,001 Р,<0,01

Р2<0,001 Р2<0,01 Р2<0,001

6 сугки 68,7 ± 6,1 279+ 16,5 1116 ± 87,5 4,8 + 0,49

Р,<0,05 Р,<0,05 Р,<0,05

Р2<0,05 Р2<0,05

7 сутки 59,4 ±4,6 243 + 17,0 1144 ±93,7 4,15 ±0,54

Р|<0,05 Р,<0,05 Р ,>0,05

Рг<0,05

8 сутки 47,9 ± 3,3 258 ± 13,5 Р,<0,05 1203 + 107,2 3,3 ±0,35 Р ,>0,05

9 сутки 47,1 ± 8,3 214 ±24 1266+ 117,5 3,9 ± 0,29

15 сутки 51,2 + 6,8 198+ 13,3 849 ±83,0 4,08 ±0,36 Р ,>0,05

Ложнооперн- 49,1 ±3,4 239 ± 7,3 789 ± 44,6 3,6 ± 0,60

рованные

Интактные 48,9 ± 5,4 218 ± 13,0 810 ±46,8 3,06 ± 0,43

Примечание: Р1 - уровень достоверности но сравнению с интактными животными; Р2- по сравнению с ложнооперированнымн животными.

Макроскопическое изучение СОЖ крыс с экспериментальным КМ нока-з;ик), что уже через су тки после перевязки коронарной артерии у 90% животных вошикпла гиперемия тканей желудка и 12-перстной кишки, коюрля сохранялась на таком уровне в течение 7 суток (табл. 4). На 8-е, 9-е сутки процентное соотношение животных с гиперемией ЖК'Г уменьшалось до 40%. Кровенаполнение ЖКТ возвращалось к исходному уровню через 15 суток. На фоне гиперемии у опытных животных отмечалось появление язв и эрозий. Вперрые эрозии эпителия СОЖ появлялись через трое суток после моделирования ИМ и наблюдались у 40% животных. Частота возникновения эрозий сохранялась на этом уровне в течение 9 сугок. Через 15 суток эрозии СОЖ не обнаруживались. Язвенные дефекты желудка начинали определяться также через трое суток после коронаро-окклюзин. В этот срок исследования язвы на СОЖ имели 20% животных, через 5 суток - 30%, через 6 сугок - 40%, а через 7 суток - 60% крыс. В дальнейшем (через 8, 9 суток) язвы встречались лишь у 10% животных, а через 15 дней определялись редко. Таким образом, эрозии и язвы появляются через 3 дня после перевязки коронарной артерии, максимальное количество язв регистрируется через 7 суток наблюдения. Через 15 суток исследования целостность СОЖ восстанавливается. Гистологически, начиная с 3 дня наблюдении и до 9 дня, отмечалось резко выраженное полнокровие сосудов поверхностных отделов СОЖ. Полнокровие сочеталось со стазами, небольшими кровоизлияния ии. В глубоких отделах СОЖ и подслизистом слое определялась умеренная, неравномерная лимфоидная эозинофнльная инфильтрация. О том, что основной причиной повреждения СОЖ является нарушение кровотока свидетельствуют результаты исследований и друг их авторов (Малая Л.Т. и др., 1976; Livingston, 199? ).

Необходимо отметить, что изменения СОЖ крыс с ИМ но совпадали по времени с уровнем активности плазменных ферментов КФК, ЛДГ, АсАТ, АлАТ. Таким образом, динамика плазменных ферментов при ИМ не отражает степень и длительность поражения ЖКТ у крыс, о чем свидетельствует отсутствие корреляционной зависимости.

Эсаулов Г.И. (1970) связывает появление острых изьязвленин ЖКТ у больных ИМ с увеличением содержания серотопина в крови. Действительно, се-ротонин способствует повреждению СОЖ (Пгот et al, 199); Koviakina, 1994). Так. в наблюдениях на 116 больных язвой 12-перстной кишки отмечено повышение уровня серотопина в кропи (Шамшонкова Т.П. и др., 1992). У крыс, получавших внутрижелудочно индомсташш, отмечалось повышение уровня серотопина в желудке уже через 15 минут после введения препарата. На этом фоне появлялись язвенные поражения СОЖ (Солтанов В.В. и др., 1993).

Поэтому следующим этапом исследований было изучение роли геротони-новых и гиотаминовых рецепторов в повреждении СОЖ при ИМ В результате нескольких серий опытов по насыщению мест связывания в МФГ'Ж [ 1:.] -

Таблица 4

Изменении слизистой оболочки крыс при инфаркте миокарда

Срок наблюде- Условия опыта Кол ичество жипотных

ния (сутки)

Гиперемия Эрозия Язва

1 ИМ 9 из 10 0 из 10 1 из 10

Ложная операция 4 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

2 ИМ 7 из 9 0 из 9 0 из 9

Ложная операция 3 из 8 0 из 8 0 из 8

Контроль 0 из 9 0 из 9 0 из 9

3 ИМ 8 из 10 4 из 10 2 из 10

Ложная операция 3 из 10 1 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 9 0 из 9 0 из 9

4 ИМ 6 из 10 3 из 10 3 из 10

Ложная операция 3 из 10 1 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

5 ИМ 9 из 10 4 из 10 3 из 10

Ложная операция 3 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 9 0 из 9 0 из 9

6 ИМ 8 из 10 4 из 10 3 из 10

Ложная операция 4 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

7 ИМ 4 из 10 4 из 10 5 из 10

Ложная операция 2 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

8 ИМ 4 из 10 3 из 10 I из 10

Ложная операция 0 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

9 ИМ 3 из 10 3 из 10 1 из 10

Ложная операция 0 из 10 0 1н 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

15 ИМ 1 из 10 0 из 10 0 из 10

Ложная операция 0 из 10 0 из 10 0 из 10

Контроль 0 из 10 0 из 10 0 из 10

ссротонином в возрастающих концентрациях, начиная с 0,2 нМ и заканчивая 10 нМ, установлено, мго в желудке крыс определяются сайты насыщаемого специфического связывания серотонина, что указывает па присутствие в тканях же-

лудка ссротониновых рецепторов. Изотерма сорбции |'l 11 - серотонина имела лишь один компонент. График Скэтчардт иосил линейный характер, что свидетельствует о том, что п заданных нами условиях опыта в желудке крыс определяется один класс серотонинсвязывакмтих участков, максимальное количество которых (13 тах) колебалось от 47 до 85 фмоль /мг белка, а Kd - 0,6-2,8 пМ (п=4). Следовательно, в желудке крыс имеются высокоаффинные, низкоемкостные серотопиновые рецепторы. Полученные нами физико-химические параметры связывания [ 1f I] - серотонина с МФГЖ близки к параметрам ссротониновых рецепторов первою типа (Корнеев А Я., 1990).

Определение уровня специфического связывания ['Н) - серотонина с МФГЖ в концентрациях 1,2 нМ и 6 нМ через 1, 2, 3, 5, 6, 7 и 15 суток после ко-ронароокклюзии позволило проследить характер изменений чувствительности и плотности серотониноиых рецепторов желудка при экспериментальном ИМ в сравнении с ложнооперированными животными.

Как видно из рис. 1, в первые 3 дня экспериментального ИМ специфическое связывание серотонина в концентрации 1,2 нМ с МФГЖ подавляется, что свидетельствует об уменьшении физиологической активности ссротониновых рецепторов желудка в ранний период ИМ. В последующие сроки исследования (через 5, 6, 7, 15 суток) аффинитет серотошшовых рецепторов к лиганду восстанавливается.

Определение специфического связывания [3Н] - серотонина с МФГЖ в концентрации 6 нМ (рис. 2) выявило уменьшение плотности серотошшовых рецепторов желудка в первые дни после перевязки коронарной артерии. Но уже через 5 дней после корэнароокклюэни наблюдалось повышение уровня связывания лиганда и лишь через 15 дней возвращение ее к контрольным значениям.

Таким образом, в начальные сроки исследования (через 1,2,3 дня) функциональная активность серотониносых рецепторов желудка падает вследствие понижения их аффинитета к ненромедкатору и уменьшения их количества. В более поздние сроки (через 5, 6, 7 суток) функциональная активность ссротониновых рецепторов, напротив, возрастает вследствие значительного увеличения их плотности в тканях желудка при неизменной чувствительности к серотонину. Функциональная активность рецепторов серотонина восстанавливается через 15 дней наблюдения. Увеличение уровня связывания серотонина с МФГЖ по времени совпадает с появлением язв и эрозий на СОЖ. Коэффициент корреляции в концентрации [Н] - серотонина 1 нМ составляет 0,549, а в концентрации 6 нМ -0,809, т.е. имеет место прямая и сильная корреляционная зависимость.

Предпосылкол для изучения гисташшовм.х рецепторов желудка при ИМ служили данные Rai et al. (1976) о повышении уровня гпстамина в плазме крови больных ИМ. По данным них авторов, п норме содержание гистамина в кропи колеблется от 7 до 8,1 мкг на 100 мл крозн, а при ПМ, особенно с сопутствую

Рис. 1

Уровень специфически!и сими.нишии ¡'11 |-ссромжинл в копнем-(ранни 1,2 »М с МФГЖ к|1ыс в нскоюрмс сроки после перевяжи коронарной ари-рни

Срок исследования (сутки)

Рис. 2 Изменение количества мест связывания [~П]-серотонина в концентрации 6 н\1 с МФГЖ крыс при жсперимензильном инфаркте мнокарла

7 15

Срок ИССПО£.)БаниЯ (су!ки)

♦

- достоверная р<гмшца по ц^шнению с лоячпоемкрпрощшилми Kpi.itsi.Nur

щимн аритмиями, концентрация данного амина доеттает 16,1 мкг па 100 мл кропи. Максимальный уровень гпстамппа п кропи наблюдается через 24 часа после начала боли (7.аса et al., 1986). Известно, что шетамин вызывает повреждение СОЖ, связываясь со своими рецепторами в тканях желудка (Del Soldato et al., 1985; Okabe et al., 1992). Это позволило предположить участ ие гисгаминовых рецепторов желудка » патогенезе абдоминального синдрома при ИМ.

Определение уровня специфического связывания рН]-гистамипа с МФГЖ в концентрациях 2,5,10,40,70 и 100 нМ позволило построить изотерму сорбции радиолиганда тканями желудка иптактных крыс. Изотерма сорбции fll]-гистамипа имела два компонента. Наличие двух компонентов в кривой насыщения указывает на присутствие более одного класса гистаминовых рецепторов в МФГЖ. Преобразование полученных данных по Скэтчарду и построение графика подтвердило данное предположение. График Скэтчарда имел нелинейный характер. В заданных нами условиях опыта в МФГЖ определялось два участка связывания [3Н]-гисталшна. Первый участок был высокоаффипным и нпзкоем-костным, а второй - низкоаффинным и высокоемкостным. Физико-химические параметры связывания [3Н]-гистамина с первым классом рецепторов характеризовались Kd=0,83-5,7 нМ, В1Па<--14-80 фмоль/мг белка. .Второй тип рецепторов обладал меньшим сродством к гистамину ( Kd=47,4-73,2 нМ), но по количеству мест связывания (В ,„„ = 325-800 фмоль/мг белка) значительно превышал их. Физико-химические параметры высокоаффинных сайтов связывания [3Н]-гистамнна близки к параметрам И,, а нцзкоаффшжых - 1 Ь рецепторам (Сергеев П.В., Шимаиовский H.J1., 1987; Авдонин Б.В., Ткачук В.А., 1994).

После перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии система специфического связывания гистамина в желудке крыс претерпевала значительные изменения. Через сугки после коронароокклюзии в 10 раз возрастал уровень связывания рН^гистамипа в концентрации 10 нМ с МФГЖ (рис. 3). Но уже через два дня он понижался в пять раз и сохранялся на этом уровне в течение последующих дней. Через 6 сутск наблюдения связывание ['П]-гпстамина вновь возрастало, более чем в два para, превысив контрольный уровень; через 7 суток оно возвращалось к исходному уровню, а через 15 дней наблюдения вновь уменьшалось более чем в 3,5 раза.

Динамика связывания ('{IJ-гистамина в концентрации 40 нМ с МФГЖ (рис. 4) по характеру принципиально не отличается от связывания радиолиганда в концентрации 10 нМ. В этом случае также наблюдалось повышение уровня связывания радиолиганда с МФГЖ крыс через сутки после перевязки коронарной артерии. Но уже через два дня специфическое связывание ['Н]-гистамнна с тканями желудка подавлялось более чем в 2 раза по сравнению с ложноопери-рованными животными. Через три дня исследования специфическое связывание [3Н]-гистамина с МФГЖ крыс с ИМ не определялось вовсе. Через 5 дней отмс-

Рис. 3 Специфическое сшпышишс |'*}lj-nici«Miiiiit (10 иМ) с JvKW/lv крыс в ритме сроки JKLTiepnMcinu.iiiiOKi инфаркт миокарда

Срок исследования (сутки)

Рис. -4 Динамика уровня связывания: [УНj-гистамнна (40 нМ) с МФГЖ крыс после перевязки коронарнг'й арт ерии

1200

- 1000

5 б 7 15

Срок исследования (сутки)

- достоверные оглнчня no цтавненню с ложнооперирова] ными жгиютнычт

чался новый всплеск уровня связывания [3Н]-гистамина с МФГЖ, который в дальнейшем сменился падением уровня специфического связывания радиолигапда.

Таким образом, на протяжении ¡5 суток наблюдения за крысами, подвергшимися королароокклюзии отмечается два подъема функциональной активности гистаминовых рецепторов желудка (через один и пять суток) и два спада (через 2,3,4 и 6,7,15 суток после коронароокклюзии). Повышение функциональной активности гистаминовых рецепторов желудка предшествовало повреждению СОЖ. Увеличение образования язв и эрозий наблюдалось на фоне подавления специфического связывания [3Н]-гистамина с МФГЖ.

Перевязка коронарной артерии приводила к значительным изменениям функционального состояния лизосомалыюго аппарата желудка (табл. 5).

Таблица 5

Активность л изосе мяльных ферментов (мкмоль / мин I г белка) в гомоге-патс желудка крыс в некоторые сроки экспериментального ИМ

Срок исследова- Свободная Общая Свободная/

ния (сутки) активность активность общая, %

(3 - гл.скозидаза

Контроль 3,94±0,21 4,54±0,22 86,9± 1,63

1 4,95±0,1 Г 5,6±0,13* 89,25+3,75

2 5,2±0,09 6,11+0,15* 86,16+4,21

3 3,75+0,2 4,82+0,18 79,0+5,42

5 4,01+0,09 5,24+0,42 77,95+4,96

6 3,55+0,16 4,29+0,26 84,28±3,12

7 3,79±0,21 4,05+0,32 91,82+4,83

15 4,12±0,18 4,83±0,29 86,25±1,95

Р - пи актозидаза

Контроль 5,67±0,38 6,31+0,17 89,6+3,51

1 8,05±0,25* 10,12+0,21* 80,24±4,72

2 10,1+0,31' 10,51±0,15* 95,81+2,17

3 6,93±0,12' 6,95±0,32 96,28±5,02

5 7,24±0,15* 8,0±0,31* 89,92±2,25

6 6,52+0,32 7,5+0,22* 85,36+3,0

7 5,72+0,28 7,8±0,18* 75,21+6,98

15 5,48+0,21 6,25±0,19 88,2+3,04

Примечание: знаком * обозначены стглистически достоверные результаты.

Уже через сутки после моделирования ИМ активность Р-глюкозидазы и [5-галактозндазы повышалась. По повышение свободной и общей активности [}-глюкозидазы носило кратковременный характер и наблюдалось лишь в первые два дня после коронароокклюзии. Повышение активности р-галактозидазы было более продолжительным и отмечалось на протяжении 8 дней после коронароокклюзии. Изменения свободной и общгй активности фермента носили неоднозначный характер. Свободная активность фермента повышалась в первые пять дней после моделирования ИМ, затем возвращалась к исходному уровню. Общая активность р-гапактозидазы возрастала в первые три дня после коронароокклюзии, затем она нормализовалась, а через 5,6,7 сугок наблюдения вновь повышалась.

Следует отметить, что изменения активности лизосомальных ферментов при ИМ по времени совпадают с повреждением слизистой оболочки желудка.

Повышение активности р-глюкозидаз;ы и Р-галактозидазы в начале исследования (через 2-3 суток после коронароокклюзии) предшествует появлению язвенных и эрозивных дефектов на СОЖ. Второе повышение активности Р-галактозидазы (через 5,6 и 7 суток после моделирования ИМ) предшествует максимальному повреждению СОЖ, что подтверждается корреляционным анализом ( г=0.395-0,731). Следовательно, лизосомальные ферменты р-глюкозидаза и р-галактозидаза участвуют в патогенезе повреждения СОЖ при ИМ.

Выводы:

1. У больных острым инфарктом миокарда в 54,3% случаев выявлены нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта, проявляющиеся желудочными кровотечениями, болевым синдромом, диспептическими проявлениями, что повышает риск применения тромболитической терапии.

2. При экспериментальном инфаркте миокарда у крыс нарушается целостность слизистой оболочки желудка Эрозии и язвы появляются через 3 дня после перевязки коронарной артерии (у 20% животных) и сохраняются до 15 дня наблюдения. Через 7 дней их количество достигает максимальных значений (у 60% животных).

3. Специфотеское связывание ['Н]-серотоннна с мембранной фракцией гомоге-ната желудка уменьшается в первые 3 дня после коронароокклюзии, увеличивается в последующие сроки наблюдения и возвращается к исходному уровню через 15 суток.

4. Связывание [3Н]-гистамина с тканями желудка повышается через I и 5 дней после моделирования инфаркта миокарда, в остальные сроки исследования уровень связывания лиганда понижается.

5. При инфаркте миокарда с первого дня исследования повышается активность лизосомальных ферментов желудка. Активность р-глюкозидазы возрастает в

первые 2 дня исследования, активность ß-галактозидазы возвращается к исходному уровню лишь через 15 суток.

6. Повышение уровня связывания ['l 1]-гистамина с мембранной фракцией гомо-геиата желудка и активности ферментов лизосом в желудке крыс с инфарктом миокарда по времени предшествует повреждению слизистой оболочки желудка, а повышение уровня связывания Н]-серотонина совпадает с появлением язв и эрозий.

Практические рекомендации

Результаты работы позволяют рекомендовать для профилактики и лечения абдоминального синдрома при ИМ использование в первые дни после возникновения ИМ 5НТ| агонистов, а в последующие - 5НТ| антагонистов. Оправдано также применение Hi гистаминоблокаторов, лизосомотропных средств и стабилизаторов клеточных мембран.

Список опубликованных работ

1. Насыров В.Х., ?Лингазетдинова Л.Н., Валеева Л.А., Насыров Х.М. Клинико-экспериментальиые аспекты желудочных кровотечений при остром инфаркте миокарда // В тез. IV Российского нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1997.-С. 90.

2. Валеева Л.А., Насыров В.Х., Мингазетдинова Л.Н. Изменение плотности участков связывания гистамина и серотонина в желудке крыс при экспериментальном инфаркте миокарда // В тез. V Российского нац. конгресса "Человек и лекарство" - М., 199S.-C. 551.

» 3. Насыров В.Х., Валеева Л.А., Мингазетдинова Л.Н. К патогенезу повреждения слизистой оболочки желудка при инфаркте миокарда // В сб. трудов БГМУ "Проблемы теоретической медицины. - Уфа, 1999. - С. 102-103.

4. Максютова С.С., Максютова Л.Ф., Мингазетдинова Л.Н., Власова H.A., Коншина М.Е., Белкина М.В., Газюова А.Э. Сыртланова Э.Р., Пумкарева А.Э. Насыров В.Х. Клинико-гемодинамическая эффективность изосорбид-S-мононитрата у больных инфарктом миокарда // Здравоохранение Башкортостана. - 1999,№2.-С. 81-82.

5. Максютова Л.Ф., Мингазетдинова Л.Н., Валеева Л.А., Максютова С.С., Сыртланова Э.Р., Катков H.H., Голубкова В Н., Насыров В.Х. Эффективность и переносимость кардиолога при лечении острого инфаркта миокарда // Здравоохранение Башкортостана. - 1599, № 2. - С.83-85.