Автореферат и диссертация по медицине (14.01.22) на тему:Клинико-диагностичечское значение определения антител к гуанозину у больных системной красной волчанкой

Системная красная волчанка (СКВ) является аутоиммунным воспалительным заболеванием, имеющим различные клинические проявления и может протекать как относительно1 благоприятно, поражая преимущественно кожные покровы и' суставы, так и фатально с быстрым развитием терминальной почечной недостаточности и тяжелых нарушений со стороны нервной системы.

Распространенность воспалительных ревматических заболеваний в мире остается достаточно высокой и отмечается тенденция к ее нарастанию практически во всех возрастных группах. Системная красная волчанка на протяжении многих лет находится в центре внимания медицинской • общественности; в первую очередь, из-за большого социально-экономического и ¡медицинского значения [110, 124, 240, 251, 238]. Несмотря на* достигнутые успехи' в диагностике и лечении СКВ; задача своевременной постановки диагноза, назначения адекватной терапии и контроля её эффективности часто бывает осложнена вариабельностью клинической картины и полиморфизмом проявлений, а также недостаточностью знаний этиологии и патогенеза этого тяжелого страдания [40,214,216,220].

Специфический для СКВ механизм активации аутоиммунитета до настоящего времени достоверно не установлен [24]: Наиболее перспективным направлением считается гипотеза о возможности взаимосвязи между индукцией иммунного ответа к аутоантигенам и нарушением процессов апоптоза при СКВ [213, 223, 236].

По современным представлениям системное поражение при данном заболевании является следствием не только развивающихся иммунопатологических нарушений, но и различных нарушений, связанных с метаболическими процессами, происходящими на клеточном или субклеточном уровнях.

Иммунологическая картина СКВ характеризуется широким спектром ауто-антител (Ат), включая антитела к ферментам и антитела к нуклеозидам ДНК. Самым- иммунологически активным из которых, по мнению ряда исследователей (Colburn К.К., Green L.M., 2006), считается гуанозин. Гуанозин является типичным примером промежуточного субстрата при метаболизме пуринов, который осуществляет регуляторную функцию. В тоже время, гуанозин и гуаниновые нук-леотиды представляют собой вещества с выраженной физиологической активностью: они • являются составной частью нуклеиновых кислот, участвуют в , процессах белкового синтеза, регулируют взаимодействие гормонов с рецепторами (Domek-Lopacinska К., Strosznajder J.B., 2005).

В'настоящее время имеются единичные работы, посвященные определению аутоантител к гуанозину при СКВ. Установлено, что данные антитела способны проникать в клетки, в частности, в лимфоциты и инактивировать митохондриаль-нуюь функцию, ингибируя энзиматическую деятельность (Colburn К.К., 2003, 2006). Также обсуждается вопрос о связи аутоантител к гуанозину с клиническими1 проявлениями СКВ и активностью заболевания. В этом плане разработка доступной лабораторной методики выявления антител к гуанозину и выяснение их влияния на иммунологическую картину СКВ представляет собой актуальную задачу, так как позволит раскрыть новые детали патогенеза данного заболевания и будет способствовать выработке усовершенствованных способов диагностики СКВ. Результаты исследования могут дать дополнительные критерии оценки активности СКВ и эффективности проводимой терапии, что, в конечном итоге, поможет своевременно установить диагноз и назначить адекватное лечение, а, значит, облегчить состояние больных и уменьшить затраты, связанные с этим страданием.

Настоящая работа является фрагментом^ отраслевой научно-технической программы в области медицины.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования является усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики» и объективизация контроля эффективности проводимой терапии путем исследования антителооб-разования к гуанозину у больных системной красной волчанкой.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. адаптировать иммуноферментный метод выявления аутоантител к гуанозину с использованием иммобилизированной формы антигена; провести выбор предпочтительной методики для определения антител к гуанозину в сыворотке крови больных СКВ;

2. определить границы нормы; оценить диагностическую ценность данного метода при СКВ.

3. изучить содержание антител к гуанозину в сыворотке крови больных СКВ в зависимости от активности, повреждения, характера течения, клинических особенностей заболевания.

4. изучить динамику антителообразования к гуанозину у больных СКВ в процессе стационарного лечения; оценить возможность использования теста по определению антител к гуанозину в качестве объективного критерия эффективности проводимой терапии.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые для иммунодиагностики СКВ «был разработан и применен вариант иммуноферментного метода анализа на основе иммобилизированной формы гуанозина в качестве антигенной матрицы; подобраны оптимальные условия его постановки. Установлено, что при СКВ вырабатываются* аутоантитела к гуанозину. Показано, что уровень аутоантител к гуанозину коррелируют с активностью патологического процесса при СКВ. Выявлено, что аутоантитела к гуанозину чаще выявляются у больных СКВ с высокой активностью болезни и при наличии признаков поражения почек и нервной системы. Показана возможность оценки активности СКВ с использованием показателей уровня антител к гуанозину. Установлена способность исследованных показателей к изменению под влиянием лечения, что позволяет прогнозировать клиническое течение СКВ и обеспечивает возможность оценки эффективности терапевтического воздействия.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика5 иммуноферментного определения уровня антител к гуанозину на основе иммобилизированной формы нуклеозида в качестве антигенной матрицы. Получены доказательства эффективности данного .теста при дифференциальной диагностике СКВ от других аутоиммунных ревматических заболеваний (ревматоидного артрита; системной склеродермии, системных васкулитов, дерматомиозита, болезни Шегрена). Выявление антител к гуанозину в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста в комплексной диагностике: СКВ для; характеристики активности патологического процесса, клинических вариантов заболевания, а также как критерий эффективности лечения.СКВ на стационарном этапе восстановительной терапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

На защиту выносится положение о возможности использования определения антител к гуанозину с помощью метода иммуноферментного анализа в качестве дополнительного теста для выделения степени активности, клинических вариантов СКВ, оценки эффективности проводимой терапии.

ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

По теме диссертации опубликовано ! 6 печатных работ, из которых 9 - в центральной, 4 - в материалах Всероссийских научных съездов и конференций;

3 - в местной печати; в том числе 9 работ в изданиях, рекомендованных ВАК для опубликования основных результатов диссертаций на соискание ученой' степени кандидата и доктора медицинских наук.

Основные теоретические- положения и практические рекомендации- проведенного исследования были представлены на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета (2009, 2010 гг.); научных, конференциях НИИ-КиЭР РАМН (2008, 2009,' 2010, 201Г гг.); XV Международном, конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореа-билитации (Дубай, ОАЭ, 2010); ежегодной научно-практической конференции «Системные ревматические болезни и спондилиты» (Москва, 2010), Российской-научно-практической конференции «Современные подходы к диагностике и лечению сердечно-сосудистых заболеваний» (Москва, 2010); Всероссийском научно-образовательном форуме «Профилактическая кардиология* 2010» (Москва, 2010); Научно-практической конференции "Лабораторная наука - практике: первое десятилетие XXI века" в рамках IV Съезда Научного общества спе-циалистов-клинической лабораторной диагностики России (Москва; 2010); Российской научно-практической конференции «Терапевтические проблемы пожилого человека» (Санкт-Петербург, 2010, 2011); V Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2010); II конгрессе ревматологов России (Ярославль, 2011); Национальной конференции по вопросам внутренней медицины в Республике Молдова с международным участием (Кишинев, 2011); Съезде кардиологов и терапевтов Центрального федерального округа России «От научных достижений до реализации в практику» (Рязань, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Казанская школа терапевтов», посвященной 235-летию Мудрова М.Я. (Казань, 2011); Ш Международном конгрессе <<Современные проблемы иммунологии; аллергологии и иммунофармакологии» (Москва; 2011), II Съезде терапевтов; Юга России (Ростов-на-Дону, 2011), XV форуме «Национальные дни лабораторной-медицины России - 2011» (Москва; 2011).

Информация, полученная в ходе: данной работы, была использована при составлении заявки на патент РФ на изобретение (Александров А.Вц Макарова Т.С., Еонтарь ИШ^, Зборовская И.А. «Способ: полученияшммоби-лизированного гуанозина для определения специфических, антител», исх. №3/10-08-11); Результаты диссертации были апробированы на совместном заседании ученого совета НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии Е0У ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» 14 июня 2011 г. (Протокол № 3).

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Иммуноферментный метод определения антител к гуанозину в сыворотке крови больных СКВ внедрен в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда и муниципального' учреждения здравоохранения «Городская^ больница №1 им. С.З.Фишера» г. Волжского. Материалы проведенного исследования входят в лекционный курс на кафедре госпитальной терапии Волгоградского государственного медицинского университета, а также используются на семинарах, научно-практических и клинических конференциях врачей.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из введения, 7 глав, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами, 15 рисунками, 3 выписками из истории болезни. Указатель литературы содержит 286 источников, в том числе 96 отечественных и 190 иностранных.

Результаты исследования содержания антител к гуанозину - 0,282 е.о.п. (резко положительно)

Клинический диагноз: Системная красная волчанка, подострое течение, высокая активность, с поражением суставов, сердца, почек, периферической и центральной нервной системы, LE феномен.

Больной была выполнена пульс-терапия 1000 мг метилпреднизолона в/в N3, назначен азатиоприн в суточной дозе 100 мг и курс плазмафереза, а также терапия, направленная на улучшение микроциркуляции. На фоне проводимой терапии уменьшились явления суставного синдрома и периферической нейро-патии, нивелировался псевдобульбарный синдром и улучшилось общее состояние больной.

Обследование при выписке: эритроциты 3.95х1012/л, Hb 128 г/л, СОЭ 18 мм/ч, лейкоциты 6,0x109/л, общий анализ мочи без патологии. Содержание антител к гуанозину - 0,177 е.о.п. (положительно).