Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Клиническое значение определения активности N-ацетил-бета-Д-глюкозаминидазы в сыворотке крови больных хроническими диффузными заболеваниями печени

\

• • МИНИСТЕРСТВО- ЗгРАВООХРАНЕНИЯ -

И Ь1Е11:.111Р1НСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

ПГ. т.-Л —Г~\ Д ТТ'ГТ*

г^имилии ыЬДц.гнцпл

ВОЛГОГРАДСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

Иа правах рукописи

РОДИОНОВА ИРИНА ВИКТОРОВНА

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ М- АЦЕТИЛ- БЕТА-Д- ГЛЮКОЗАпИНИДАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ВОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ДИФФУЗНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ

14.00.05 - Внутренние болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 1935

Работа выполнена в Волгоградской медицинской академии.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В. В. НЕДОГОДА.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук.

профессор Н.А.ОСАДЧУК; доктор медицинских наук, профессор А.А.ДАВЬ!Д0В.

Ведущее учреждение: . Ростовский государственный

медицинский университет.'

*

Защита состоится "_"_ 1997 г. в _ часов ка

заседании Диссертационного Совета Д.034.54.01 Волгоградской .медицинской академии по адресу: 400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться' з библиотеке Волгоградской медицинской академии.

Автореферат разослан. "У" ^ 1996 г.

Ученый Секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицински наук

Ю.К.ФИЛИМОНОВА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ -В РАБОТЕ

АД - артериальное давление •

АЛТ - аланинаминотрансфераза •- ^-••••-•..■-•

ACT - аспартатаминотрансфераза

В/В - внутривенное введение

ГАГ - гликозачингликакы

ЛОК - лазерное облучение крови

ОВГ - острый вирусный гепатит

ОВГА - острый ЕИрускый гепатит А

ОВГВ - острый вирусный гепатит В

ОВГС - острый вирусный гепатит С '

Ф-1-Ф - Фрукто?о-1-фосфаталъдолаза

ХДЗП - хронические диффузные заболевания печени'

ХПГ - хронический "ерспсткрутоший гепатит

HFP - неспещ'фический реактивный гепатит

ХАТ - хронический активный гепатит

ХГ - хронический гепатит

ЦП - цирроз печени

ЧДД - частота дыхательных движений

"СС - частота сердечных сокращений

NAG - М-ацеткл-бета-Д-глокогаминидага

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. ,

Социально-экономическая значимость проблемы хронических заболеваний печени неоднократно подчеркивалась клиницистами всего мира. И это понятно, наблюдается рост числа заболевших лиц трудоспособного возраста хроническим гепатитом и циррозом печени.

Хронизация ОВГ наступает у 10Z больных, а при суперинфицирований HDV достигает 70-90% случаев. Прогрессировали ХГ до ЦП происходит в различные сроки с частотой 15-30% при ХГВ, 20Х при ХГС, 70-80% при ХГД (Апросина З.Г., Серов В.В., 1995 г.; Сорин-сон С.Н., Шкарин В.В., 1995 г.).

В экономически развитых странах цирроз печени входит в число шести основных причин смерти у лиц в возрасте 35-64 лет (По. дымова С.Д., 1993 г.).

Диагностика хронических вирусных гепатитов по сравнению с острыми представляет значительные трудности, поскольку им большей частою присуще стертое, малосимптомкое течение. В связи с этим очень важен поиск новых высокочувствительных диагностических тестов, которые отра"*али бы. латентные формы хронических гепатитов. К сохалекию, у.рокизация и переход в цирроз печени труд-нопрогноэируемы и трудкодкагкосцируемы. По данным ряда крупных московски:'-, прозектур 14.6",. а в США к Англии 20-40' циррозов были распознаны только на вскрытии (Логинов A.C., Аруик Л.И., 1935 г.; Sherlock S., 1995 г.).

Для диагностики заболеваний печени представляют интерес использование знзимологгческих методов исследования. Комплексное обследование , сывороточных ферментов дает более наглядку» информацию о состоянии патологического процесса, его глубине и течении.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ.

Усовершенствование диагностики ХДЗЛ с помощью определения * .)!-ацетил-бета-Д-глюкозаминидазы (NAG) и ее фракций в сыворотке '■'крови, выявление критериев ранней диагностики обострения патологического процесса в печени и трансформации воспалительных изменений в циррЬтические.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

■1. Изучить глюкозаминидазну» и галактозамияидазную актив-

- 3 - --------

зти NAG и ее фракции у больных ХДЗП.

2. Определить критерии раннего, возможно, латентно текущего эстрения процесса в печени.

3. Выявить возможности энзимологической диагностики перехо-ХАГ в ЦП и прогрессирозание последнего.

4. Разработать критерии объективного контроля за эффективные» лечения больных ХДЗП на основе определения в динамике гивности NAG и печеночноспецифических ферментов.

5.Разработать показания к определению активности NAG в сы-ютке крови при диагностике ХДЗП.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЬИОСИШЕ НА ЗАЩИТУ.

1. NAG и ее фракции - NAG-А и NAG-B - являются- новым высо-гувствительным тестом, отражающем выраженность цитолитического адрома и степень пролиферации соединительной ткани в печени.

2. Изменение активности.термолабильной (NAG-А) и термоста-шкой (HAG-В) фракций может быть использовано в диагностике i начальных стадиях цирроза печени. Нарастание коэффициента отношения NAG-A/NAG-B свидетельствует о длительности патологи-;ь:ого процесса и выраженности пролиферации соединительной тка-

3. Динамика изменений активности NAG и ее фракций дает воз-

шость выявить начальные стадии обострения заболевания и более 'боко оценить тяжесть патологического процесса з печени и его

1ГНОЗ.

4. Показатели активности NAG, ' NAG-А и NAG-B в сыворотке ■■' >ви являются важными объективными критериями эффективности

вводимой терапии у больных ХДЗП.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые проведены исследования по определение активности '. . 3 и ее фракции у больных вирусным гепатитом,. . .ХДЗП в .сыворотке -: i

ши. . Впервые" установлено, ■ что определение активности NAQ и ее. ищий в сыворотке крови является новым чувствительным~ лабора->ным тестом, ,отражающим глубину цитолитического синдрома.; Ак- . шость фермента в сыворотке крови отражает динамику; патологи- . ¡кого - процесса и позволяет уточнить 'степень развития соедини-шной ткани в печени. Новизна заключается в определении фер-

мента-маркера перехода ХАГ 5 ЦП.

Определение активности NAG позволит уточнить лечебный эЗ фект лазерной терапии и разработать критерии индивидуальной кур с^вой ионотерапии больных ХДБП.

• ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ.

Настоящая работа представляет собой комплексное клинико-ла бораторкое исследование, направленное на улучшение диагностик хронических диффузных заболеваний печени.

Изучение активности MAG и ее фракций - NAG-А и NAG-В - по казало высокую чувствительность и информативность этих энзкмоло гических тестов.

Исследование активности NAG в динамике свидетельствует надежности метода, отражающего развитие, цитолитического синдро ма. Изменение величины коэффициента соотношения игофор NAG-A/NAG-B может служить новым объективным тестом хронизаци процесса и перехода ХАГ в ЦП.

Определение активности NAG до и после курсового применени внутривенного лазерного облучения крови является достоверны критерием эффективности проводимой терапии.

Метод исследования активности NAG, NAG-A и NAG-В доотаточн прост в выполнении, поэтому доступен клиническим лабораториям : может дополнить стандартные биохимические пробы.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы исследований доложены на II межвузовской научно-практической конференции студентоз и молодых ученых Волгоградской области по направлению "Медицина, охрана здоровья, физкультура и спорт" (1995 г.), где работа "Определение активноси NAG у больных ХДЗП" заняла II место; научной конференции БМ] "Экспериментальные'и клинические аспекты патологии органов пище; ВареНИЯ"'(1996 Г.). ..

Результата^ "работы внедрены в лечебную практику-области клинической больницы'N1 г.Волгограда. .:; _ . ,

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ.

■Диссертаций' изложена на 124 страницах .машинописного текста, ' иллюстрирована 17 таблицами, 6 рисунками, 4. выписками .из исторш

>

-болезни,- Работа состоит извведения, обзора литературы, описания методов исследования и характеристики больных, 6-и глав с изложением полученных результатов, обсуждения, выводов, практических рекомендаций. Список литературы включает в себя 183 источника, из них 91 отечественных и 92-иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

. Для решения поставленных в работе задач нами научена активность MAG и ее двух главных фракций NAG-А и NAG-В у 50 здоровых лиц. ( контрольная группа ), 410 больных с поражением гепатобили-арной системы ( профильная группа ) и 130 больных с патологией других органоз и систем. Среди обследованных профильной группы 30 человек с острым вирусным гепатитом, 75 - неспецифическим реактивным гепатитом, 112 - хроническим персистирущим гепатитом, 106 - хроническим активным гепатитом, 70 - циррозом печени, 17 -ХАГ с переходом в ЦП.

Группу больных с ОВГ составили 8 человек с вирусным гепатитом А, 11 - В, S - С и 5 больных с сочетанием двух форм вирусной инфекции - В и С.

Таб.. Н 1. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ И ЛИД КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЫ ПО ПОЛУ, ВОЗРАСТУ И ДЛИТЕЛЬНОСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Нозологические п Муж Жен. Средний Длительность заболевания

формы возраст до 5 лет 6-10 лет >10лет

Острый вирусный 30 22 8 24,3i2,4

гепатит

НРГ 75 58 17 37,8±2,7 38 22 15

хпг 112 62 50 32,6±2,2 37 43 27

ХАГ 106 70 36 30,2+2,3 64 30 12

ХАГ с переходом 12' ■ 5 . 42,0*2,9 12 ■ . -5 -

в ЦП

ЦП 70 60 10, 45,7±2,4 52- . ■ .• 10, / 8

Всего больных 410 284 126 V ,

'; Контрольная 50 18 32 28,4±3,7

группа

j

i I

Неспецифический реактивный гепатит развился на фоне хрони-■ ческого холецистита у 37 больных, гастрита и язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки - 22, хронического панкреатита - 6, хронического колита - 3, следствием постхолецкстзктоми-ческого синдрома явился у 7.

В основу определения активности NAG положена методика O'Brien et al. (1970), базирующаяся на определении концентрации пара-нитрофенола, образующегося в процессе реакции расщепления синтетического субстрата пара-нитрофенил-М-ацетил-бета-Д-^люко-заминида под воздействием сывороточной М-ацетил-бета-Д-глюкоза-минвдазы. '

Наряду с тщательным клиническим наблюдением у больных использовались лабораторные и биохимические тесты, такие как: общий анализ крови и мочи, общий белок и белковые фракции сыво-: ротки крови, холестерин, билирубин и его фракции, сулемовая и тимоловая пробы, аланшовая и аспарагиновая трансаминазы, НВз-антиген, HBs-антитела.

Для оценки выраженности цитолитического синдрома исследовались органоспецифические ферменты печени - уроканиназа, гистида-за, фруктозо-1-фосфатальдолаза.

Для уточнения диагноза проводилась сцинтиграфия печени на ¡аппарате MB-910Q (Венгрия), ультрасонографил на аппарате TOSHIBA '(Япония) в радиозотопной лаборатории ОКБ N1.

Клинический диагноз был подтвержден выполнением лапароскопии с прицельной биопсией у 27 больных с ЦП, 19 - ХАГ, 8 - ХПГ. j Статистическая обработка полученных данных производилась на ПК IEM-PC-AT286 с использованием статистической программы "ARCADA" для оценки сравниваемых величин.

Для проведения^ ' внутривенного- лазерного облучения крови использовался аппарат АЛ0Кг1 (длина волны 0,63 мкм, ■ мощность на конце световода 1' мВт). Курс лечения состоял из 5 ежедневных ! процедур по 30-40 минут каждая. , •

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

В доступной нам литературе имеются' единичные данные по определению общей активности N-ацетил-бета-Д-гдгакозаминидазы при патологии печени. Зарубежными исследователями приводятся сведения о роли лизосомалькых ферментов в диагностике гепатоцеллюляр-ной карциномы (Zhang S.M., 1992). Изучалась активность MAG у пациентов, страдающих алкоголизмом (Hultberg В. et al., 1934; Poi-kolalnen К. et al., 1990 г.). Надо отметить, что проводимые анализы активности были недостаточно полными, охватывали малые группы больных, исследуемой средой чаще являлась моча. Изучение изменений содержания термолабильнсй и термостабильной фракций не проводилось.

Предметом настоящего исследования явились изучение активности NAG и двух ее фракций NAG-A и HAG-В в динамике и клиническая оценка ее диагностического значения при ХДЗП.

N-ацетил-Сета-Д-глзокозаминидаэа (К. Ф. 3.2.1.30) - фермент иизосом, маннозосодержащии кислый гликопротеид. Первоначально 5ыл описан Conchie et al. в 1959 году. Если принять содержание фермента в ткани почек крысы за 100*, распределение NAG в других )ргаках и тканях составит: в печени 45%, . селезенке 25%, легких .6%, кишечнике и надпочечниках по 15%, ткани мозга 177,. При определении активности NAG в тканях человека, установленной на ма-■ериале аутопсии, получены сходные результаты - ткань печени и ;егких богата ферментом, почки содержали его наибольшее коли-:ество (Torres H.H.; Olavarrjla J.M., 1964; Powell S. et al., 983).

В сыворотке крови контрольной группы активность общей NAG оставила 9,67+1,27 ныолъ/мд/мин, NAG-А 51,72+1,21%, NAG-8 8,28±1,21Я. Коэффициент, отражающий соотношение термолабильной термостабшгьной изоформ, NAG-A/NAG-B у здоровых лиц равен ,07. • •

При исследовании-зависимости' активности фермента от пола и ззраста, выявили, что активность общей NAG у мужчин 10,23±0,5 юль/мл/мин, • что на -.5,?9Х ; -(р<0^05) ':'" больше' средних ' величин сонтрольная, группа.-.-v. 9,В7±1,27), а у' женщин 9,25±0,62 юль/мл/мин, что на 0,87% (р<0,05) меньше средних величин. Мак-шадьные величины активности встречались в. возрасте 20-50 лет в ;еделах от 10,17+0,89 до 10,57±1,04 нмоль/мл/мин. После 60 лет

I прослеживалось небольшое снижение по сравнению со средними вел}

; чинами - 7,б6±0,66 нмоль/шг/мин. гг

В исследованиях удалось выявить некоторую сезонность актин ности фермента. Из 15 человек у 9 наблюдалось повышение средня показателей в летнее, время на 17,13%, хотя эти данные и не дос товерны.

Была изучена зависимость активности общей HAG от времен исследования после забора крови. Потери активности нет, если е определяют сразу после забора и спустя 12 часов хранения при +4 С. При хранений сыворотки крови при +4° С спустя 48 часов актив ность уменьшается на 8,33% (р<0,05), спустя 72 чзса - на 29,73: (р<0,05). При замораживании сыворотки и хранении ее при -18° С : течение двух месяцев выявлено снижение активности всего на 2,33: (р<0,05).

Исследована сыворотка крови 20 больных нефрологического отделения с диагнозом: Хронический гломерулонефрит, стадия обострения, без явлений ХПН на'момент исследования. Длительность заболевания составила 3-5 лет.- Активность оказалась равной в среднем 17,83±3,4 нмоль/мл/мин. '

Выявлено влияние' антибиотиков на активность общей MAG. Активность фермента в сыворотке крови до начала лечения составил; 20,05±4,64 нмоль/мл/мин (контрольная группа - 9,67±1,27). После ; курса лечения отмечено снижение активности' NAG в среднем на

61,75% (12,33±0,89 нмоль/мл/мин). При взаимодействии пенициллина с энзимом происходит расщепление бета-лактамного кольца и обра! зование комплекса пенициллин-фермент, вследствие чего подавляется активность фермента (С.М.Навашин, И.П.Фомина, 1982 г..).

Также изучалось влияние гормонов на активность общей - HAG. ; Активность NAG до лечения составила в среднем 25,41±9,14

I нмоль/мл/мин (контрольная группа- 9,б?±1,27). Спустя две недели

I с момента лечения выявлено снижение, активности NAG в среднем на 57,81%. Снижение активности фермента отражает меыбранотабидизи-рухщее действиеглюкокортиковдов, ••,• механизм .которого,: '" конечно, I требует специального изучения.... , • - • ' :

! Интересными оказались результаты, полученные при-определе-

нии активности общей NAG в сыворотке крови больных острым вирусным гепатитом (n=30), . у которых легкая форма вирусного гепатита была отмечена у 9 больных,, средняя - у 21. Пальпаторно.у 18 па-

:енхоз определялось увеличение печени на 1,5-2 см ниже края ре-'рной дуги, у 9 - на 3-4 см, у 3 - более 5 см. Активность NAG [ределяли в первые 3 дня при поступлении, она составила з сред-■м 63,46±30,7 нмоль/мл/мин, у 6 пациентов показатели NAG дости-ли 109,2-120,0 нмоль/мл/мш. Обращало на себя внимание то, что еле лечения у больных перед выпиской при нормализации пок&за-лей билирубина, траксаминаз и осадочных проб, а иногда и пече-чкоспецифических ферментов, активность NAG оставалась повышен-й - 41,81¿25,57 нмоль/мл/мин (контрольная группа - 9,67+1,27). этого следует, что больные с ОВГ при наличии повышенное ак-вности NAG требуют не только тшдтельного наблюдения, но и ле-ния.

Полученные результаты позволяют говорить о высокой чувстни-льности фермента, повышенные цифры которого могут быть индикаром цитолит>гческого синдрома, а таете иметь валкое прогности-ское значение в- период реконвзлесценции.

При изучении результатов исследования больных ХПГ выявили, з общепринятые биохимические тесты не всегда отражают каруше-э функционального состояния печени, тем самым затруднял объек-зкую диагностику патологического процесса. Так, гшербшшруби-иия наблюдалась в 23,1% случаев, изменение осадочных проб в , АЛТ увеличилась у 227. больных, ACT у 15%. Активность урока-*азы и гистидазы'оказалась повышенной в 64,3% случаев. Актиз-;ть общей NAG оказалась увеличенной в 85£ случаев, уровень козой составил в среднем 22,08 нмоль/мл/мин. (контрольная группа 9,67). Коэффициент, отражающий,соотношение термолабильной и змостабильной фракций, NAG-A/NAG-B оказался равным 3,27 (конт-1ьная группа - 1,07), т. е. втрое превышал норму.

Повышение активности исследуемого фермента позволяет выска-ъ мысль о том, что показатели активности NAG и особенно ее кций зысоко информативны. - .. .

полученные результаты свидетельствуют, что NAQ является на- . •: лее высокочувствительным тестом для верификации диагноза. У ьных. НРГ общепринятые показатели мало отличались от нормаль-; . Незначительное- увеличение общего билирубина встречалось в случаев, трансамин аз - в ИХ. Активность общей NAG была ложной' у 74Z пациентов и оказалась равной в среднем 17,34 •/мл/мин (контрольная группа - 9,67). Коэффициент

таб. N2. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ У БОЛЬНЫХ ХПГ (N=112

Показатель, ед.измерения

Данные зд-ых лиц, М±т

Данные б-ных ХПГ, М±т

Частота пат.' показ-ля, 7.

NAG, нмоль/мл/мин MAG-А, % NAG-В' 7, Уроканиназа, ед Гиотидаза, ед Фруктозо-1-фосфзт альдолаза, ед АЛТ, мккзт/л ACT, мккзт/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл

Тимоловая проба,

Гаммз-гдсбудшы, Z

СОЗ, мм/ч

9,67±1,26

51,72+1,2

43 28±1 2 О О

0,4+0,08

0,07+0,02 0!l2+0.03 12,26+0,38

1,95+0,1

2,74+0,13

19,25í4,3S

12,34±1,6

22,08±1,39

76,6+0,91 23,4+0 9 0,83+0 13 О 87+0 16 l|09+0¡07

0,58+0,04 О!38+0 03 16,9+1,32

1,72¿0,04

3,32+0,03

26,3±0,28

13,27+2,3

85,0

85,0

85.0 64,3

64.3

52.4

22,0 15 О

23.1

9,0 9,0

27.2 12,0

< О

< О

< О

< о;

< 2'

< о,

> о,

> й> о,

> о,

> о,

< о;

< О,'

Таб. N 3. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ ПРИМЕНЕНИЯ В/В Л0К У БОЛЬНЫХ

И ПОСЛЕ КУРСОВОГО Г (N=60)

Показатель, ед.измерения До лечения, М+т После курса, Mim Снижен. акт-ти показателя, X

NAG, нмоль/мл/мин NAG-A, % nag-b! % Уроканиназа, ед Гиотидаза. ед Фруктого-1-фосфат-аль'долаза, ед АЛТ, мккзт/л ACT, мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл Тимоловая проба, ' ед Гамма- глобулины, С0Э, мм/ч 22',08±1,39 76,6+0,91 23.4+0,9 0,¿3+0 13 0 87+0,16 l'09±ö,07 0,58+0,05 О'38+0 03 1ё,9+1)32 1,72+0,04 13,75±0,94 62,3±1,01 37¡7±1 01 0,34+0 02 0 48±0,01 0,88±0,1 0,44+0,02 0121+0 04 lá,2±0,07 1,84±0,01 37,73 18,67 рост на 61,11 59,04 44 83 19*27 24,14 44 74 21,89 рост на 6,97 < С < С < с < 0 < 0 < 0 > 0: > 0 > 0 > 0

3,32+0,03 2,98+0,01 10,24 > 0

26,3±0,28 21,35+0,06 18,82 >0

13,27+2,3 12,8+0,03 3,54 < 0

-

Таб. М 4. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ У БОЛЬНЫХ НРГ (N=75)

Показатель, ед.измерения

Данные эд-ых лиц, Mim

Данные б-нък НРГ, М+т

Частота пат. показ-ля, У.

. NAG, нмоль/мл/мин HAG-А, X HAG-B! % Уоокакиназа, ед Гистидаза. ея Фруктозо-1-фосфат адьдолаза, ед АЛТ, мккат/л ACT, мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл

Тимоловая проба, „ '6Д -

Гамма-глобулины,

СОЭ, мм/ч

9.67+1,26 51,72*1,2 48,28*1,2

О . О

О,4*0,08

0,07+0,02 0!I2+0.03 lS,26*0,38

1,95*0,1

2,74*0,13

19,25+4,38 12,34+1,6

17,34+1.46 69'2*1,¿8 30,8+1 28 0,41+0 06 О 41±0,06 0,87+0)14

0,42+0,01 О'26+0'02 13,65±Ö,03

1,8*0,03

3,05*0,02

22,73*0,04 10,08*2,82

74,0 74,0

74.0 51 3 51 3 47,4

12.1 ll'O 5,1

7,4

7,4

12,0 2,09

0,01 0,01 О Ol О 05 О 05 0'05

> 0,05

> 0 05

> о;об

> 0,05

> 0,05

< 0,05

< 0,05

Таб. N 5. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ ДО И ПОСЛЕ КУРСОВОГО ПРИМЕНЕНИЯ В/В ЛОК У БОЛЬНЫХ НРГ (N=30)

- Показатель, ед.измерения До лечения, М+ш После курса, М±т Снижен, акт-ти показателя, 7. Р

NAG, нмоль/мл/мин NAG-А, % MAG-8, % Урокэнинзэа, ед Гистидаза. ед Фруктозо-1-фосфат альдолаза, ед АЛТ, мккат/д ACT, мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл Тимоловая проба, ед Гамма-глобулины, СОЭ, мм/ч • 17,34*1,46 69,2*1,28 30,8*1,28 0,41+0 06 о 41*о;об 0^87*0,14 0,42*0,01 0.26+0,02 lä, 65+0,03 1,8*0,08 3,05+0,02 22,73*0,04 10,08+2,82 10,34*1.0 54,7+0,6 45.3+0.5 0,2*0,04 0,51*0,03 0,13+0,02 0,15*0,07 12,0+1,08 1,88*0,05 2,67+0,04 20,08*1,1 3,74*1,3 40.37 20 95 рост'на 47,08 51,22 51 22 41.38 69,05 42,31 12,09 рост на 4,4 12,46 . 11,66 3,38 < 0,01 < 0,01 < 0 01 < 0,05 < 0 05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05

NAG-A/NAG-B равен 2,24 (контрольная группа - 1,07).

У лиц контрольной группы были получены устойчивые покззате-. ли активности фермента. Так, исследования сыворотки крови через 1, 2, 3 суток давали практически одинаковые значения. Этот факт дает основание считать, что отклонение величины активности от нормальных отражало даже легкие формы патологического процесса в печени.

У больных ХАТ увеличение активности исследуемого фермента выявлено в 96% случаев. Ее значения возросли до 31,96 нмоль/мл/мин (контрольная группа - 9,67). Отмечался рост актива ностя термолабильной фракции NAG-A до 80,56¿0,73% (контрольная группа - 51,72±1,2%) и снижение активности термостабильной фракции HAG-B ДО 19,4410,737. (контрольная группа - 48,28±1,2%) (р<0,05). Коэффициент соотношения фракций NAG-A/NAG-B равен в среднем 4,14 (контрольная группа - 1,07). Повышенный уровень общего билирубина, разный в среднем 26,72 мкмоль/ч (контрольная группа - 12,26), определялся у 43,2% больных. АЛТ увеличивалась i в 30,07% .случаев (1,83 мккат/л, контрольная группа - 0,07), ACT в 28,04% (1,44 мккзт/л, контрольная группа - 0,12). Осадочные пробы оказались измененными в 217. случаев. | Сравнивая данные биохимических тестов с полученными значе-

ниями активности HAG в сыворотке крови больных ХАГ, можно отметить, что показатели исследуемого фермента достаточно четко коррелируют с клинической картиной заболевания, достоверно отражая степень поражения органа. Кроме того, NAG можно считать новым и весьма ценным "прогностическим маркером" перехода ХАГ в ЦП.

Максимальное увеличение активности NAG отмечалось в сыворотке крови больных ЦП в 91% случаев, когда значения были равны в среднем б7,99±17,84 нмоль/мл/мин. Тогда как повышение органос-пецифических ферментов (уроканиназы, • гиотидаэы, фруктозо-1-фЬс-фатальдолазы). наблюдалось у 80,2%. .больных. Выявлен значительный рост термолабильной фракции NAG-A до94,9±2,77% и крайне низкая активность термостабильной фракций NAG-B - 5,1±2,77% при, нор-1 мальных'-'' значениях' * 48,28±1,2%! Коэффициент соотношения, NAG-A/NAG-B равен в среднем .18,6:. (контрольная группа - 1,07).

Эти'данные свидетельствуют, что N-ацетил-бета-Д-глюкоазми-• нидаза Солее достоверно отражает степень хронизации. процесса и разрастание соединительной ткани, чем общепринятые биохимические

Таб. N 6. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ У БОЛЬНЫХ ХАГ (Н=106)

Показатель, ед.измерения Данные зд-ых лиц, М±т Данные б-ных ХАГ, М±т Частота пат. показ-ля, 7. Р

HAG, нмоль/мл/мин NAG-A, X mag-b' z Уроканиназа, ед Гяотидаэа, ед Фруктоза-1-фосфат альдолаэа, ед АЛТ, мккат/л ACT, мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл Тимоловая проба, ед Гамма^глобулины, 9,67+1,26 51,72+1,2 48,28±1,2 Q 0,4+0,08 0,07+0,02 0,12+0,03 12,26+0,38 1,35+0,1 31,96+3,73 80,56+0,73 19,44±0.73 1,47+0,14 1,57+0 1 2,22+0,28 ■ 1,88+0,51 1.44+0.38 2ё,72+6,43 1,48+0,14 96,0 96'; о 96,0 72,7 , 72 7 7410 30,07 28,04 43,2 21,0 < < < < < < > > > > 0,01 0,01 0,01 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05

2,74+0,13 4,31+0,07 21,0 > 0,05

19/25+4,33 29,27+0,27 48,6 < 0,05

СОЭ, мм/ч 12,34+1,6 25,52+7,21 71,9 < 0,05

Таб.Н 7. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ ДО И ПОСЛЕ КУРСОВОГО ПРИМЕНЕНИЯ В/В ЛОК У БОЛЬНЫХ ХАГ (N=50)

Показатель, ед.измерения До лечения, М±т После курса, М±т Снижен, акт-ти показателя, % Р

NAG, нмоль/мл/мин NAG-A, 7. NAG-В, % Уооканиназа, ед Гистидазз. ед ■Spy ктозо-1 - фосфат альдолаэа, ед АЛТ, мккат/л ACT. мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л. Сулемовая проба, мл Тимоловая проба, ед Гамма-глобулины, СОЭ? мм/ч 31,96+3,73 80,56+0,73 19.44+0.73 1,47+0,14 1,57±0,1 2,22±0,28 1,88+0,51 1,44+0,38 26,72±6,43 1,48±0,14 4,31±0,07 29,27±0,27 25,52±7,21 15,33+1,06 66-,4±1,5 33,6+1,5 0,57+0,02 0,87+0.02 1,1+0,01 1,0+0,03 0.98+0,04 15,53±1,21 1,86+0,3 : 2,67±0,23 23,4±0,05 14,3+2,41. 52,03 15,58 рост на 72,84 54,42 57,33 50,45 46,81 31,95 4l|88 РОСТ на 25,67 " ¿,05 10,93 43,97 < 0-,01 < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05

j Таб. N 8. ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ У БОЛЬНЫХ ЦП (N=70)

Показатель, ед.измерения

Данные зд-ых лиц, м±ш

Данные б-ных ЦП, М±го

Частота пат. показ-ля, %

NAG, нмоль/мл/мин NAG-А, % NAG-B, Z Урокзниназа, ед Гистидаза. ед Фруктоза-1-фосфат алъдолазз, ед АЛТ, мккат/л ACT, мккат/л Билирубин общ., мкМолъ/л Сулемовая проба, мл

Тимоловая проба, еД

Гамма-глобулины, СОЭ, мм/ч

•3,67+1,26

51,72+1,2 48,28*1,2 О О

0,4+0,03

0,07+0,02 о'12+0.03 lfc,26±0,S8

1,95±0,1

2,74+0,13

19,25±4,38

12,34±1,6

67,99±17,84

94.9+2,77 5,1±2,77 1,94+0,13 2,04+0,18 2,36±0,32

2,15+0,26

35,65±ё,63

■1,64+0,25

3,7±0,98

32,Q5i0,27

29,3+6,77

91,0

91.0 91 О 80 2 80 2 84,13

54,3 48 6 42l2

44.1 46,1

'52,5 67,3

< 0,01

< 0,01

< 0,01

< О 05

< О 05

< 0,05

> 0,05

> 0,05

> 0,05

> 0,05

> 0,05

< 0,05

< 0,05

Таб. N 9, ПОКАЗАТЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ТЕСТОВ ДО И ПОСЛЕ КУРСОВОГО ПРИМЕНЕНИЯ В/В ЛОК У БОЛЬНЫХ ЦП (N=35)

I

Показатель, ед.измерения До лечения, М±ш После курса, М±ш Снижен, акт-ти показателя, % Р

NAG, кмоль/мл/мин NAG-А, % . NAG-B, % Уроканиназа, ед Гистидаза. ед Фруктозо-1-фосфат альдолаза, ед АЛТ, мккат/л ACT, мккат/л Билирубин общ., мкмоль/л Сулемовая проба, мл Тимоловая пробз, Гамма-глобулины, СОЭ, мм/ч 67,99+17,84 94.9+2,77 5,1+2,Ь 1 94+0,13 2 04±0,18 2)36±о132 2,15+0,26 l'34±0l43 Зё,65±ё,68 1,64±0,25 3,7+0,98 32,05±0,27 29,3±б,77 31,5±1,43 67,8+1,72 3212+1,72 0,76+0,5 0,84+0 5 1,0+0,1з 1,56+0,37 О'87+0 21 20,4±1,16 1,77+0,17 2,91+0,19 24,3±1,5 1б,7±2,34 53,67 28 ,'56 рост на 531,37 60,83 58 82 57^63 27,44 35 08 42^78 рост на 7,93 21,35 24,18 43,0 < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0 05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > О!05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05

показатели.

Определение активности NAG в сыворотке крови больных ЦП отражает глубокое поражение печени. Интерес представляет не только оценка патогенетического значения, но и клиническая интерпретация биохимических сдвигов в организме с последующей разработкой соответствующей терапевтической' тактики.

Меняющееся соотношение фракций NAG свидетельствует о глубокой перестройке обмена гидролаз и подтверждает положение о меняющейся кинетике ферментов, их изоферментного спектра. Следовательно, динамическое изучение позволит судить о направленности патологического процесса - обострении, стабилизации или его регрессии. Таким образом, NAG является надежным маркером патологического процесса в печени, отражающим прежде всего глубину цитолиза и степень разрастания соединительной ткани. Это подтверждается нашими исследованиями больных, получавших з/в ЛОК.

Больным профильной группы (ХПГ - 60, ХАТ - 50, ХАГ с переходом в ЦП - 10, НРГ - 30, ЦП - 35) было проведено курсовое внутривенное лазерное облучение крови (5 ежедневных процедур по 30-40 минут, мощность на конце световода 1 мВт), после чего вновь определялась активность NAG, ее фракций й общепринятых биохимических тестов. Курсовое применение в/в ЛОК привело к практической нормализации показателей при НРГ. Значительное снижение активности исследуемого фермента выявлено у больных ХПГ и ХАГ. При ЦП отмечалась частичная нормализация показателей активности NAS, значения которой, тем не менее, достоверны.

Полученные результаты активности фермента и его фракций позволяют использовать NAG в качестве контроля за эффективностью лечения.

Весьма перспективным является изучение фракций N-ацетил-бета- Д-глюкозаминидазы. Литературные данные и наши собственные наблюдения выявили наибольшую подвижность активности двух фракций - термолабильной NAG-А и термостабильной NAG-B.' Нами впервые была исследована?"иХ- активность у больных ХДЗП!' Для наглядности ... изменения активности изоформ' нами!,предложен гаэйициент^.отража-вдий'их соотношение, NAG-A/NACH3/ В группам ¿даровых' лиц он ока- . зался равен 1;07, у больных НРГ'- 2,24, ХПГ ~ 3,27, ХАГ - .4,14, ЦП - 18,6^:. По мере нарастания тяжести заболевания увеличивается и коэффициент, что дает основание рекомендовать его как очень

надежный критерий в диагностике хронизации процесса, позволяющий | клиницисту заподозрить переход ХАТ в ЦП на ранних этапах, j Исходя из полученных данных, можно сказать, что высокая ак-! тивность NAG при ЦП отражает наличие фиброзирования. Тем самым подтверждает имевшее место в литературе доказательство изменения ' координированной'деятельности лизосомальных ГАГ-гидролаз, уро-

■ вень которых характеризует наличие, степень выраженности и дина, мику обмена основного вещества соединительной ткани (Логинов i A.C., Привалекко М.Н., Скобелева Т.В.; 1981,1983).

Результаты исследований дают основание считать N-ацетил-бе-та-Д-глюкоэамикидазу маркерным ферментом при острых и хронических диффузных заболеваниях печени. Он может быть рекомендован в • качестве надежного объективного биохимического теста в широкой клинической практике. А учитывая его чувствительность, он также может быть рекомендован в качестве скринингового теста.

ВЫВОДЫ

1. N-ацетил-бета-Д-глюкоааминидаза и ее фракции HAG-А и , NAG-В являются новым высокочувствительным тестом при диагностике i хронических диффузных заболеваний печени и может использоваться

как маркер патологического процесса в печени.

2. Высокая активность HAG свидетельствует о выраженности цитолитического синдрома, а также степени пролиферации соедини-

j тельной.ткани, что дзет основание судить о глубине патологичес-

■ кого процесса в печени.

3. Динамика активности NAG - нарастание или ее снижение ' -является надежным энэимологическим тестом, свидетельствующим о характере и# направленности патологического процесса в печени.

4. Нарастание активности термолабильной фракции (NAG-A) и ; увеличение коэффициента соотношения фракций NAG-A/NAG-B являются , новым и весьма ценным знзимологическим тестом цирроза,, свидетельствуют о длительности патологического процесса, и. степени-разрастания соединительной ткани. , '■•.-..:'.: . :.•

5. Сопоставление показателен активности NAG о. показателями -

|печеночноспецифических ферментов..,-.. уроканиназы,-., гистидазш и;н ;фруктоэо-1-фосфатат'дрлаэы - дает,основание говорить о---.высокой ! информативности и большей чувствительности NAG.; Частота,увеличе- - ■ ния активности MAG и печеночноспецифических ферментов составила

^ответственно (X)" У больных КРГ - 74,0 и 51,3; - 85,0 « 1,3; ХАГ - 96,0 И 72,7; ЦГ1 - 91,0 И 80,2.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Фотоэлектрокалориметрическое определение активности аб-•й MAG и выявление фракций NAG-А и NAG-В на основе тепловой ¡активации в сыворотке крови являются высокочувствительны!.«! [ецпфическими тестали и могут быть использованы з бнохпм;песь:пк •борзториях при обследовании больных с поражением гелатобилиар->й системы. Показатели активности общей NAG у здоровых, лиц 67±1,27 ныоль/мл/мин. Увеличение показателя в 3-4 раза cbvsде-•льстзует о значительном поражении печени.

2. Исследование активности общей MAG в динамике можно счи-¡ть надежным методом, характеризующим развитие цитолитического :ндрома и степень пролиферации соединительной ткани. Активность щей NAG у больных: НРГ - 17,34:1,46; ХПГ - 22,08*1,39; ХАГ -,55*3,73; ЦП - 67,99*17,84 нмоль/мл/мин.

3. Рост значения коэффициента, отражающего соотношение акций, NAG-А/NAG-В является достоверным показателем хронигации оцесса и перехода ХГ в ЦП. Соотношение NAG-A/NAG-B у здоровых ц равно в среднем 1,07; у больных НРГ - 2,24; ХПГ - 3,27; ХАГ 4,14; ЦП - 18,6.

4. Способ определения активности общей NAG и фракций зкоио-ческн гыгоден и при наличии реактива может дополнить или заметь многие стандартные биохимические пробы.

5. Определение-активности NAG и ее изоформ при курсовом в/в зерном облучении крови является объективным критерием эффектности проводимого лечения.

»

i I

Соотношение показателей активности общей NAG у здоровых лиц и больных ХДЗП (нмоль/мл/мин)

Я до лечения В после в/в ЛОЗ

здоровые

♦

Н9-

Соотношение показателей активности ЫАО-А у

здоровых лиц и больных ХДЗП (%) ) ---

а ■

-ао-

Соотношение показателей активности N AG-B у здоровых лиц и больных ХДЗП (%)

о*

<С X

ПУБЛИКА Ц И И

1. Активность NAG у больных хроническими диффузными заболе-аниями печени (Соазт. В.В.Недогода)//Тезисы докладов: Последние остетения в области заболеваний пищеварительного тракта.- Кис-эзодск.- 1995,- С.30-31.

2. Клиническое значение определения активности N-ацеткл-бе-i-Д-глюкозаминидзгы в сыворотке крови больных ХДЗП (Соазт.

,В.Недогода)//Сб. тезисов: Аллергия, иммунитет, патология внут-?кнпх органов.- Рязань.- 1995.- С.149.

3. Энзимодиагностикз ХДЗП (Соавт. В.В. Недогода, С..М. Тома-

И.Ю.Стацекко и др.)//Вестник ЕМА.- Волгоград.- 1935,- Т.51,

и.1.-С.100-102.

4. Новый энэимологический тест диагностики обострений и 'епени развития соединительной ткани при ХДЗП (Соавт. В.В.Недо-да)//Тезисы стендовых докладов: Новые направления в гепатоло-и. - Санкт-Петербург. - '1996. - С. 271.

5. Активность NAG у больных ХДЗП и ее динамика под зоздеис-ием проводимого внутризекного лазерного облучения крови (Сот. В.В.Недогода)//Тезисы: Экспериментальные и клинические ас-кты патологии органов пищеварения,- Волгоград.- 1596.30-31.

6. Диагностическое значение определения активности NAG у зьных ХДЗП1(Соавз. В.В. Недогода)//Материалы Всероссийской конвенции инфекционистов.- Москва-Волгоград.- 1996.- С.163-164.