Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Клинические признаки иммунных нарушений и мембранные свойства мононуклеарных фагоцитов у больных рассеянным склерозом

На правах рукописи

Султанова Ирина Вячеславовна

Клинические признаки иммунных нарушений и мембранные свойства мононуклеарных фагоцитов у больных рассеянным склерозом

14.00.13 - нервные болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Казань-2005

Работа выполнена на кафедре неврологии и нейрохирургии факультета последипломного образования Казанского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Матвеева Татьяна Всеволодовна Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Иваничев Георгий Александрович доктор медицинских наук, доцент Менделевич Елена Геннадьевна

Ведущее учреждение: Нижегородская государственная медицинская академия (г Нижний Новгород)

Защита состоится « 2S » . __2005 г в « /3 » часов на заседании

диссертационного совета Д 208 003 02 при ГОУ ДПО ('Казанская государственная медицинская академия МЗ и CP РФ» (420012, г Казань, ул Муштари, дом 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия МЗ и CP РФ» (420012, г Казань, ул Муштари, дом 11)

Автореферат разослан « /б » 2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Ларюкова Е К

WW

Д^-щ Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В последние годы убедительно доказана ведущая роль иммунопатологических реакций в патогенезе рассеянного склероза (PC) (Йегер J1, 1990, Чекнев СБ, 1994, Завалишин И А, Головкин ВИ, 2000, Гусев ЕИ, Бойко АН, 2001, Шмидт Т Е, Яхно Н.Н., 2003).

Обнаруживаемые при PC изменения иммунологических показателей во многом схожи с таковыми при ряде классических аутоиммунных заболеваний (fteiep JI, 1990, Бойко А Н , Фаворова ОО, 1995, Hafler DA et al, 1989) В частности, в крови и спинномозговой жидкости у больных PC выявляется широкий спектр аутоантител, характерных для заболеваний аутоиммунной природы, в том числе аугоантитела к компонентам ядра (Барановский А Г с соавт, 1998, Могельницкий А С , 2001, Allinquant В , Schuller Е , 1987, Roussel V et al, 2000, Williamson R A et al, 2001), антинуклсарные (ANA) (Fukasawa T et al, 1997, Tourbah A et al, 1998, Speciale L et al, 2000), антифосфолипидные (aPL) (Ijdo J W et al, 1999, Roussel V et al, 2000, de Andres С et al, 2001), антимитохондриальные антитела (AMA), антитела к тиреоцитам, париетальным клеткам (РСА), гладкой мускулатуре (SMA) (de Keyser J, 1988, Sparado M. et al, 1999)

Более того, некоторые заболевания соединительной ткани, такие как системная красная волчанка (СКВ), первичный синдром Шегрена, системная склеродермия (ССД), антифосфолипидный синдром, в ряде случаев имитируют PC (Pender М Р, Chalk J В , 1989, Kira J, Goto 1, 1994, Cordoliani MA et al, 1998, Cuadrado M J et al, 2000, Iniquez С et al, 2001)

Вместе с тем, изучение клинических проявлений иммунной недостаточности у больных PC с различными клиническими характеристиками заболевания (типом и характером течения, стадиями и фазами патологического процесса) не проводилось

Особое значение в иммунопатологии PC придается мононуклеарным фагоцитам (Шмидт ТЕ , Яхно НН, 2003) Моноциты, циркулирующие в крови, поглощают инородный материал (вирусы') и "представляют" его антигены с формированием тримолекулярного комплекса Т-лимфоцитам, запуская иммунный ответ Активированные макрофаги в ЦНС, помимо фагоцитоза миелина и "представления" его антигенов (аутоантигенов) на своей поверхности, секретируют протеазы, разрушающие миелин, а также провоспалительные цитокины и простагландины, поддерживающие воспалительный процесс (Imamura К et al, 1993, Zoukos Y et al, 1994, Cuzner M L , 1997, Peters С et al, 1998)

Как известно, нормальное функционирование одноядерных фагоцитов определяется вязкостью их плазматических мембран (Лопухин ЮМ с соавт, 1983, Владимиров ЮА,

1989, Бернштейн JIM с соавт, 1994), кфхДОСймии»аиад№1»„гзрисит от фракционного и

«НБДИОТЕКА I

з ^""«Hiit йпгЛ

жирнокислотного состава фосфолипидов, от содержания холестерина в липидном бислое, от состояния процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Зубарева Б В с соавт, 1991, Сапрыкина Э В с соавт, 1991, Марри Р с соавт, 1993, Иупау В , 1980)

Однако, работ, посвященных исследованию морфофункционального состояния мембран мононуклеарных фагоцитов при РС, не проводилось Остается открытым вопрос, имеются ли ассоциации между выраженностью аутоиммунных проявлений у больных РС и клиническими вариантами заболевания, а также мембранными свойствами клеток моноцито-макрофагальной системы

В связи с вышеизложенным целью исследования явилось выявление клинико-лабораторных признаков иммунной недостаточности и изучение структурно-функциональных особенностей мононуклеарных фагоцитов у больных РС с разной клинической характеристикой

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи

1 Провести клинико-иммунологическое обследование больных РС с целью обнаружения признаков иммунной недостаточности, характерных для системных аутоиммунных заболеваний

2 Определить в сыворотке крови больных РС содержание аутоантител, патогномоничных для аутоиммунной патологии (антител к нативной и денатурированной ДНК, волчаночного антикоагулянта, ревматоидного фактора)

3 Исследовать микровязкость клеточных мембран моноцитов периферической крови у больных РС

4 Изучить содержание холестерина в моноцитах и в плазматических мембранах моноцитов, а также содержание холестерина и общих липидов в сыворотке крови у больных РС

5 Сопоставить полученные результаты с клинической характеристикой РС (типами и характером течения, стадиями и фазами РС)

Научная новизна работы. Выявлена высокая частота клинических признаков нарушенного функционирования иммунной системы у больных РС Обнаружена ассоциация повышенного уровня аутоантител к ДНК в крови с ремиттирующим характером течения, I стадией РС, незначительным неврологическим дефицитом Выявлено повышение микровязкости мембран моноцитов у лиц с благоприятным течением, начальными проявлениями заболевания, в период ремиссии РС, низкой степенью инвалидизации Обнаружено снижение уровня холестерина в клеточных мембранах моноцитов у больных

Практическая ценность работы. Обнаруженная высокая частота встречаемости

РС

клинических

иммунной системы у больных РС

указывает на целесообразность поиска у пациентов, страдающих РС, клинических проявлений классических аутоиммунных заболеваний

Исследование у больных РС содержания аутоантител к ДНК, волчаночного антикоагулянта, а также микровязкости мембран моноцитов периферической крови позволяет уточнить тип и характер течения заболевания, фазу патологического процесса

Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в практическую работу Республиканского клинико-диагностического центра по рассеянному склерозу МЗ РТ на базе неврологического отделения ПСБ № 7 г Казани, в учебный процесс на кафедре неврологии и нейрохирургии факультета последипломного образования Казанского государственного медицинского университета

Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсуждены на международной конференции «Улучшение качества жизни инвалидов - больных рассеянным склерозом в странах Восточной Европы» (Самара, 1999), IX научно-практической конференции неврологов «Итоги Программы «Десятилетие мозга» Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, 2000), П Российской конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2001), VHI Всероссийском съезде неврологов (Казань, 2001), I Съезде Общероссийской Общественной Организации Инвалидов - больных рассеянным склерозом (Самара, 2001), VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В И Йоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Сантг-Петербург, 200"?), VIII научно-практической конференции молодых ученых Казанского государственного медицинского университета (Казань, 2003), конференции «Неврологические аспекты системных ревматических заболеваний» (Ярославль, 2004), Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики, лечения больных рассеянным склерозом и их медико-социальная реабилитация» (Казань, 2004), межкафедральной конференции сотрудников кафедры неврологии и рефлексотерапии Казанской государственной медицинской академии и кафедры неврологии и нейрохирургии факультета последипломного образования Казанского государственного медицинского университета (Казань, 2004)

Положения, выносимые на защиту:

1 У больных РС обнаруживаются клинические признаки нарушения функционирования иммунной системы, сближающие его с классическими заболеваниями соединительной ткани

2 Уровень аутоантител к ДНК в крови у больных РС ассоциирован с характером течения, стадиями РС и степенью инвалидизации

3 Структурно-функциональные особенности мембран моноцитов у больных PC зависят от типа течения, стадии, фазы заболевания, тяжести неврологического дефицита

4 Нарушения метаболизма холестерина не оказывают влияния на клинические характеристики PC

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 16 научных

работ

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, который содержит 107 отечественных и 154 иностранных автора Работа иллюстрирована 51 таблицей и 19 рисунками

Содержание работы Материалы и методы исследования

Проведено обследование 155 больных с достоверным PC в возрасте от 15 до 57 лет (средний возраст 36,4±8,5 лет) - 116 женщин (74,8%) и 39 мужчин (25,2%), находившихся на стационарном лечении в Республиканском клинико-диагностическом центре по рассеянному склерозу МЗ РТ на базе неврологического отделения городской клинической больницы №7 г Казани (главный врач Сафин Г M )

Диагноз «рассеянный склероз» устанавливался согласно диагностическим критериям Т В Матвеевой (1987) и С M Poser et al (1983) с учетом рекомендаций W Ian McDonald et al (2000) на основании тщательного изучения анамнеза, неврологического обследования больных в сопоставлении с данными МРТ головного и спинного мозга, вызванных потенциалов, динамического наблюдения за больными Анализ клинического материала проводился с использованием методологии изучения PC, разработанной на кафедре нервных болезней Казанского государственного института усовершенствования врачей (ТВ Матвеева 1987), с учетом длительности заболевания, возраста дебюта PC, типов и характера течения, стадий и фаз патологического процесса Клиническая оценка тяжести состояния больных PC проводилась по шкалам повреждений функциональных систем Kurtzke и инвалидизации EDSS (Kurtzke J F , 1983)

У преобладающего большинства пациентов (140 человек) наблюдалась типичная цереброспинальная форма заболевания (90,3%), 5 больных (3,2%) имели спинальную и 10 больных (6,5%) - стволовую форму PC

У 28 пациентов клиническая манифестация РС произошла в возрасте до 20 лет (18,1%), у 62 больных - в возрастном интервале от 21 до 30 лет (40%), 65 человек заболели в возрасте старше 30 лет (41,9%) Средний возраст начала заболевания составил 28,7*8,6 лет

На момент обследования длительность патологического процесса до 2 лет зарегистрирована у 25 больных РС (16,1%), от 2 до 5 лег - у 38 пациентов (24,5%) и свыше 5 лет -- у 92 больных (59,4%) Средняя продолжительность заболевания составила 7,7+6 лет

Благоприятное течение РС наблюдалось у 99 пациетов (63,9%), неблагоприятное - у 46 больных (29,7%), в 10 случаях имела место реверсия благоприятного типа течения в неблагоприятный (6,4%)

Наиболее частым (84 человека) было вторично-прогредиентное течение РС (54,2%), ремитшрующее течение, характеризующееся сменой обострений и ремиссий, имело место у 61 пациента (39,3%), в 10 случаях (6,5%) наблюдался первично-прогредиентный характер течения заболевания

В I стадии патологического процесса находились 33 больных РС (21,3%), во П - 117 пациентов (75,5%), III стадия наблюдалась у 5 человек (3,2%)

Фаза обострения диагностирована у 101 больного РС (65,2%), фаза ремиссии - у 44 пациентов (28,4%) 10 больных имели стационарное течение заболевания (6,4%)

Наиболее значимые изменения обнаруживались в мозжечковой (2,77±0,8 балла) и пирамидной системах (2,39+1,2 балла) Менее выраженными были симптомы поражения ствола мозга (2,12+0,9 балла) и сенсорной системы (1,70+1,4 балла) Степень тазовых, зрительных, а также когнитивных нарушений была самой низкой (1,50+1,0 и 1,43+1,9, 1,14+0,9 балла)

Тяжесть состояния больных РС по шкале инвалидизации ЕОББ колебалась от 2 до 9 баллов (в среднем 4,6±1,6 баллов)

В контрольную группу были включены 126 здоровых добровольцев в возрасте от 18 до 78 лет (средний возраст 37±14 лет), из них 94 женщины (74,6%) и 32 мужчины (25,4%), не имеющие аутоиммунных заболеваний и отягощенного семейного анамнеза

Клинико-иммунологическое обследование больных РС проводилось в соответствии с рекомендациями Института иммунологии МЗ РФ (Петров РВ с соавт, 1992) с целью выявления у них синдромов нарушенного функционирования иммунной системы -инфекционного, аутоиммунного, аллергического, лимфопролиферативного Для верификации клинических признаков иммунной недостаточности больные РС осматривались ревматологом (с н с, кандидат мед наук М И Арлеевская) При необходимости проводилось обследование пациентов в терапевтической клинике Казанской государственной медицинской академии.

Биохимические исследования выполнены в ЦНИЛе КГМА (зав лабораторией - д м н , доц В Ю Терещенко), лаборатории физиологии растений Института биологии Казанского филиала РАН (зав лабораторией - снс,кбн АИ Заботин), на кафедре биохимии КГУ (зав кафедрой - д б н, проф В Г Винтер), на кафедре клинической лабораторной диагностики КГМА (зав кафедрой - д м н , проф А П Цибулькин)

В сыворотке крови больных PC определяли содержание аутоантител, паюгномоничных для аутоиммунной патологии

1) аутоантител к нативной и денатурированной ДНК (ААТ к нДНК и дДНК) -методом твердофазного иммуноферментного анализа (Саттарова ЛИ с соавт, 1994) Исследование ААТ к ДНК проводили в лаборатории биохимии нуклеиновых кислот КГУ (н с , к б н Ю О Коликова),

2) волчаночного антикоагулянта (ВА) в плазме - в фосфолипидзависимых коагуляционных реакциях (Баркаган 3 С , Момот А П, 1999),

3) ревматоидного фактора (РФ) - методом иммуноферментного анализа

2 Для характеристики структурно-функциональной организации клеточных мембран моноцитов у больных PC исследовались

1) микровязкость клеточных мембран моноцитов периферической крови - с помощью флюоресцентного зонда пирена (Sigma, USA) (В А Владимиров, Г Е Добрецов, 1980),

2) содержание холестерина в моноцитах больных PC - ферментативным методом,

3) уровень холестерина в клеточных мембранах моноцитов периферической крови - с помощью флюоресцентного зонда филипина (Fluka, Швейцария)

3 Для характеристики липидного метаболизма определяли содержание некоторых липидных фракций (холестерина, общих липидов) в сыворотке крови больных PC ферментативным методом с использованием стандартных биохимических наборов

Результаты клинико-биохимических исследований обработаны с использованием прикладных программных пакетов Microsoft Excel и STAT1STICA Анализировались средняя, ошибка средней Для оценки различий в группах использовали t-критерий Стьюдента, критерий сопряженности %2 Достоверными считали различия при уровне значимости р<0,05 Для оценки взаимосвязей между клиническими и лабораторными данными использовался однофакторный дисперсионный анализ с фиксированными эффектами, корреляционный анализ

Результаты исследования и их обсувдение

Клинические признаки нарушения функционирования иммунной системы обнаружены нами у 44 из 54 обследованных больных PC (81,5%), что достоверно выше, чем

в контроле (р<0,001) В их числе проявления аутоиммунного синдрома выявлены у 4! пациента (75,9%), инфекционный синдром встречался у 25 больных РС (46,3%), что достоверно превышало частоту их обнаружения у здоровых добровольцев (р<0,0005 и р<0,05, соответственно)

Среди инфекционных проявлений у пациентов с РС преобладали ОРВИ (27,8%) и хронический бронхит (13%), что достоверно превышало аналогичные показатели в группе сравнения (р<0,01 и р<0,05) В структуре аутоиммунного синдрома выявлялись такие признаки как синдром Рейно (38,9%), ливедо сетчатое (37%), повышенная кровоточивость (синячковость и др) (31,5%), а также очаговые поражения кожи (16,7%), фотосенсибилизация (11,1%) Следует отметить, что частота вышеперечисленных аутоиммунных проявлений достоверно превышала таковую в контрольной группе (р<0,001), ряд из них встречались только у лиц, страдающих РС

Наиболее часто (в 94,1% случаев) клинические признаки нарушения функционирования иммунной системы выявлялись у больных с выраженной степенью инвалидизации по шкале ЕБвБ (более 5 баллов) (р<0,05)

Инфекционные проявления чаще наблюдались у пациентов младшей возрастной группы (до 40 лет) (в 56,8% случаев), с дебютом заболевания до 30 лет (у 70% больных РС), р<0,05 На частоту аутоиммунных проявлений клинические характеристики РС статистически значимого влияния не оказывали (р>0,05), однако имелась тенденция к большей их встречаемости у лиц с ранним началом заболевания (до 30 лет), длительностью РС более 5 лет

Получены положительные корреляции одновременного обнаружения при РС некоторых проявлений инфекционного и аутоиммунного синдромов Так, артралгии у больных РС наиболее часто сочетались с наличием у них в анамнезе частых ОРВИ (г=0,323, р=0,017), фурункулеза (г=0,354, р=0,009) и лимфоаденопатии (г=0,354, р=0,009) Наиболее выраженные связи обнаружены между трофическими нарушениями и сепсисом в анамнезе (г=0,614, р=0,000) Имелись корреляции между частотой геморрагических проявлений и герпетической инфекции (т=0,358, р=0,008), а также синдрома Рейно и лимфоаденопатии (г=0,304, р=0,025)

Имеется ряд работ, посвященных оценке встречаемости у больных РС клинических признаков системных аутоиммунных нарушений, напоминающих заболевания соединительной ткани (Ьогсепе В. е1 а1, 1989, МагиНо в ег а1, 1993, ТоигЬаЬ А Ма1, 1998, Цёо IАУ е1а1, 1999)

Подтверждением полученных нами результатов может служить исследование А ТоигЬаЬ е1 а! (1998), по данным которых 52,1% больных РС имели в прошлом хотя бы один

признак, напоминающий системное аутоиммунное заболевание, но при этом значительных различий по возрасту дебюта заболевания, неврологическим проявлениям, течению болезни среди больных РС с аутоиммунными нарушениями и без них авторами обнаружено не было При пятилетнем наблюдении больных с достоверным РС признаки системных аутоиммунных заболеваний сохранялись у 13,3% пациентов (ТоигЬаЬ А е1 а! , 1998)

В литературе также имеются указания на частые острые респираторные вирусные заболевания, предшествующие развитию РС и являющиеся признаком измененной иммунной реактивности организма (Шмидт Т Е , Яхно Н Н , 2003)

Однако другие исследователи придерживаются противоположной точки зрения В частности, 3 <1е Кеувег (1988) провел анализ медицинской документации большой группы пациентов с РС и пришел к выводу, что нарушения, в которых возможную роль играют аутоиммунные механизмы, у больных РС обнаруживаются лишь в 4,8% случаев, что не превышает их частоту в общей популяции

Непременным атрибутом аутоиммунного процесса считается наличие в крови различных аутоантител Наиболее патогномоничным маркером классических заболеваний соединительной ткани являются аутоантитела к ДНК (КпгаЬ МК е1 а1, 1996, Сапёоге в е! а!, 1997, Маркина О А с соавт, 2001), в низких титрах выявляющиеся и у здоровых лиц (Несвижский Ю В , Воробьев А А, 1996)

В нашей работе уровень антител к нативной и денатурированной ДНК исследовался в сыворотке крови 43 больных РС ААТ к ДНК выявлены нами в крови у 100% обследованных пациентов В целом по группе больных РС наблюдалось достоверное повышение содержания ААТ к нДНК по сравнению с контролем (0,239±0,025 и 0,125±0,012 отн ед, соответственно, р<0,005) Показано, что с возрастом уровень ААТ к нДНК у пациентов снижается (р<0,05) Достоверно высокие значения ААТ как к нДНК, так и к дДНК характерны для больных с 1 стадией РС (0,425±0,0">5 и 0,454±0,05 отнед, р<0,0001), ремиттирующим течением заболевания (0,299±0,039 и 0,331±0,037 отнед, р<0,05) Повышенное содержание ААТ к обоим видам ДНК выявлено у больных с минимальными мозжечковыми (0,338±0,047 и 0,386±0,047 отнед, р<0,005), тазовыми (0,388±0,045 и 0,416±0,044 отнед, р<0,0001) и когнитивными нарушениями (0,345±0,089 и 0,380±0,094 отн ед, р<0,05) или при отсутствии таковых, а также при низких баллах инвалидизации по шкале Е088 (0,467±0,05 и 0,478±0,054 отнед, р<0,0001) Высокие уровни ААТ к ДНК наблюдались также у лиц с малым количеством очагов демиелинизации (0,615±0,048 и 0,609±0,019 отнед, р<0,005) и отсутствием атрофических изменений на МРТ головного мозга (0,477±0,097 и 0,500±0,088 отн ед, р<0,005)

Обнаружены также тенденции к более высокому содержанию ААТ к ДНК у пациентов с ранним дебютом PC, небольшим стажем заболевания (до 5 лет), благоприятным типом течения

Проведенный корреляционный анализ подтвердил значимость взаимосвязей между содержанием антител к ДНК и стадиями PC (г=-0,676, р=0,000), типом течения заболевания (r=-0,308, р=0,044), а также тяжестью инвалидизации по шкале EDSS (г=-0,566, р=0,000) Статистически значимые корреляции определялись между содержанием антител к нДНК и дДНК и степенью поражения мозжечковой системы (г=-0,456 и г—0,522, р 0,002), тазовых расстройств (г--0,633, р=0,000) и когнитивных нарушений (г=-0,344 и r=-0,375, р<0,05), а также атрофией головного мозга (г=0,544 и г=0,524, соответственно, р-0,001)

Результаты других независимых исследований согласуются с полученными нами данными В частности, ААТ к ДНК были обнаружены в сыворотке у 95,8%, а в ликворе - у 100% больных PC (Baranovskii A G et al, 1998, 2001)

Однако имеются сообщения, что антитела к двухцепочечной ДНК выявлены в крови лишь у 28% больных PC (Roussel V et al, 2000), а антитела к ДНК генотипа 16/6 - у 17% пациентов, страдающих этим заболеванием, причем была показана их полиспецифичность в перекрестных реакциях с синтетическими полинуклеотидами и кардиолипином (Shoenfeld Y et al, 1988)

В работе Р Matsiota et al (1988) различий в содержании аутоантител к ДНК в сыворотке здоровых, больных PC и другими неврологическими заболеваниями не отмечено

В ряде исследований показана зависимость уровня и активности ААТ к ДНК от клинических характеристик PC Так, имеются указания на повышение активности абзимов в реакции гидролиза двухцепочечной ДНК и одноцепочечных ДНК и РНК в крови у больных при вторично-прогрессирующем течении PC в стадии обострения и первично-прогрессирующем течении (Могельницкий А.С , 2001)

В работе О Г Кулаковой с соавт (2003) проводилось изучение взаимосвязей содержания ААТ к ДНК с фазами PC, однако полученные авторами результаты противоположны нашим В частности, выявлено достоверное уменьшение уровня антител к нативной и денатурированной ДНК за месяц до обострения PC и отчетливое увеличение их количества во время и после него (Кулакова О Г с соавт, 2003)

Как известно, ААТ к ДНК могут образовываться в ответ на деструкцию клеток, которая имеет место и при PC Выявленное нами повышение уровня ААТ к ДНК у больных в начальную стадию PC, с благоприятным ремитгирующим течением заболевания, низким уровнем неврологического дефицита, с минимальными изменениями на МРТ головного мозга может свидетельствовать о неспецифической лимфоидной активации и о более

«сильном» иммунном ответе у этой категории больных По всей видимости, относительное снижение уровня ААТ к ДНК у лиц с неблагоприятным прогрессирующим течением РС может указывать на истощение гуморального иммунитета

При изучении частоты выявления волчаночного антикоагулянта (ВА) у больных РС он был обнаружен нами в плазме крови у 22 из 40 обследованных пациентов (55%), что достоверно чаще, чем в контроле (р<0,005) В 54,6% случаях ВА выявлялся одновременно в двух функциональных тестах, в 40,9% - в одной, в 4,5% - в трех фосфолипид-зависимых реакциях (р<0,001) Наиболее часто наблюдалось удлинение времени свертывания в тесте с ядом гадюки Рассела (47,5%) и АПТВ (41,7%), р<0,05 Обнаружены достоверные ассоциации большей частоты выявления В А у пациентов с длительностью РС более 5 лет (в 72,7% случаев) и вторично-прогредиентным течением заболевания (у 71,4% пациентов), р<0 05

В литературе имеются лишь единичные сообщения об исследованиях частоты выявления ВА у больных РС По данным В МюМе1$еп8 & а! (1991), В А обнаружен только у 4,2% больных РС, при этом связь с сосудистым или системным аутоиммунным заболеванием авторы отрицают

Нами также проведено сравнительное исследование встречаемости одного из патогномоничных маркеров аутоиммунных заболеваний - ревматоидного фактора (РФ) - у больных РС и ревматоидным артритом Показано, что у больных РС частота выявления РФ достоверно ниже - у 9 из 58 обследованных (15,5%), чем в группе пациентов с классическим заболеванием ревматического круга - ревматоидным артритом (45,9%), р<0,005 РФ был обнаружен только у женщин, страдающих РС (р<0,05) Статистически значимых различий во встречаемости РФ у больных с разными клиническими характеристиками РС не получено (р>0,05)

Проведено сопоставление клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы у больных РС с частотой выявления у них в крови исследованных нами аутоантител - ААТ к ДНК, ВА, РФ (п=17, 20 и 26, соответственно) Выявлены ассоциации высоких значений ААТ к нДНК и частоты у пациентов с РС ряда проявлений инфекционного синдрома (фурункулеза, сепсиса, лимфоаденопатии) (р<0,05) Высокие уровни обоих видов ААТ к ДНК коррелировали с встречаемостью у больных РС синдрома Рейно и трофических нарушений (р<0,005)

Клинические признаки иммунной недостаточности обнаружены у 90% ВА- и 75% РФ-положительных больных РС Получены также умеренные корреляции частоты одновременного обнаружения у пациентов с РС ВА и синдрома Рейно (в 60% случаев), а также РФ и некоторых инфекционных проявлений, в частности, хронического бронхита (г^0,409, р=0,038), хронического тонзиллита (р=0,469, р=0,016), эпизодов субфебрилитета

неясного гснеза (г=0,409, р=Ю,038) По всей видимости, относительно редкая встречаемость (15,5%) и связь лишь с инфекционным синдромом не может свидетельствовать о каком-либо значении РФ в патогенезе РС

В литературе также имеются указания на сочетание у больных РС клинических и лабораторных проявлений иммунной недостаточности Отмечено, что пациенты с РС с высокими титрами антифосфолипидных антител отличаются преобладанием миелитического варианта заболевания, а также наличием суставного, кожного < синяковость, ливедо), вазоспастического и цефалгического синдромов (Спирин НН с соавт, 2002) По данным Щек» е! а! (1999), большинство аРЬ-положительных больных РС также имели скрытые симптомы ревматических заболеваний или отягощенный семейный анамнез

Проведенное нами исследование микровязкости мембран моноцитов периферической крови у больных РС (п=70) и здоровых (п=30) с помощью флуоресцентною зонда пирена выявило достоверное снижение коэффициентов эксимеризации пирена в клеточных мембранах моноцитов в целом по группе пациентов с РС, что свидетельствовало о повышении микровязкости их клеточной стенки (р<0,0001) (Рис 1)

р<0,0001 С, мкМ

Рис 1 Коэффициенты эксимеризации пирена в клеточных мембранах моноцитов здоровых и больных РС

Пол, возраст больных, а также форма РС не оказывали влияния на микровязкость липидного бислоя моноцитов (р>0,05) У пациентов с ранним дебютом (до 20 лет) и небольшой длительностью заболевания (до 2 лет) выявлялась тенденция к повышению микровязкости моноцитарных мембран

Обнаруживалась зависимость микровязкости мембран моноцитов от типа течения РС У лиц с благоприятным течением заболевания в период обострения отмечалось снижение микровязкости моноцитарных мембран по сравнению с фазой ремиссии (р<0,005) Больные с

неблагоприятным типом течения РС характеризовались снижением микровязкости мембран моноцитов в обе фазы патологического процесса (р<0,0001)

У больных с I стадией РС микровязкость моноцитарных мембран в обе фазы патологического процесса была достоверно повышена (р<0,0001), причем в большей степени в период ремиссии У лиц со И стадией заболевания при экзацербации РС имело место снижение микровязкости клеточных стенок моноцитов, в фазу ремиссии микровязкость мембран увеличивалась (р<0,05)

Характер течения РС также оказывал заметное влияние на жидкостные характеристики клеточных мембран моноцитов Так, самые «жесткие» мембраны имели больные с ремиттирующим характером течения РС, а наибольшим уровнем эксимеров пирена и, соответственно, наименьшей микровязкостью характеризовались клеточные стенки моноцитов пациентов с первично-прогредиентным течением заболевания (р<0,0001)

Выявлена зависимость динамических свойств моноцитарных мембран у больных РС от тяжести состояния и степени поражения некоторых функциональных систем В частности, пациенты с более вязкими мембранами имели самые низкие баллы пирамидных, мозжечковых и тазовых нарушений, а также легкую степень инвалидизации по шкале EDSS (р<0,001)

Как известно, при РС происходит активация мононуклеарных фагоцитов, в большей степени выраженная у больных с прогрессирующим течением, в период обострения заболевания (Imamura К et а!, 1993, Maimone D et al, 1993, Navikas V et ai, 1996, Kivisakk P et al, 1998), то есть чем выше активность патологического процесса, тем «агрессивнее» «поведение» моноцитов (выше секреция провоспалительных цитокинов, выше антигенпрезентирующая способность и т д), то есть тем выше их функциональная активность Более того, благоприятный эффект патогенетической терапии РС достигается за счет ингибирования функций мононуклеарных фагоцитов (Moneada S, Higgs ЕА, 1993, Arnason BG, 1996, Li Q et al, 1998, Porrini AM et al, 1998), иными словами, для стабилизации заболевания необходимо «затормозить» активность моноцитов

Известно также, что повышение вязкости плазматических мембран сопровождается снижением функциональной активности клеток (Ляшенко В А с соавт, 1988, Rivnay В, 1980) Выявленное в нашем исследовании повышение микровязкости мембран моноцитов у больных с благоприятным течением, начальными проявлениями РС, в период ремиссии свидетельствует о том, что функциональная активность моноцитов у этой категории пациентов снижена Лица же с неблагоприятным течением заболевания, в период обострения РС имели сниженные значения вязкости моноцитарных мембран, что сопоставимо с

повышением функциональной способности моноцитов при указанных клинических вариантах РС

Таким образом, можно предположить, что обнаруженное нами увеличение микровязкости мембран моноцитов у больных с «благоприятными» вариантами РС, свидетельствующее об уменьшении активности изучаемых клеток, является защитным механизмом, препятствующим активации патологического процесса и дальнейшему прогрессированию заболевания

Известно, что вязкость биологических мембран зависит от их липидного состава, прежде всего от фракционного и жирнокислотного состава фосфолипидов, от содержания холестерина, от состояния процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Владимиров Ю А , 1989, Зубарева Б В с соавт, 1991, Сапрыкина Э В с соавт, 1991, Марри Р с соав г, 1993, ШупауВ, 1980)

Учитывая важную роль холестерина в поддержании жидкокристаллического состояния клеточной стенки (Владимиров Ю А, Добрецов Г Е, 1980, Матылевич Н П, 1986, Марри Р с соавт, 1993, Завалишин И А, Головкин В И, 2000, Евдокимов В Н, 2002), мы изучили его содержание в моноцитах в целом и в их клеточных мембранах у больных РС в сравнении со здоровыми добровольцами

Содержание общего холестерина (ОХС) в моноцитах у 19 обследованных больных РС (142,6=15,4 мкг/10бкл) имело тенденцию к снижению по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы (164,1±14,4 мкг/106кл), р>0,05 Уровень ОХС в моноцитах мужчин, страдающих РС, был выше, чем у женщин (р<0,05) Имелась тенденция к некоторому снижению содержания ОХС в клетках у лиц с неблагоприятным течением, стволовой формой заболевания

Исследование с помощью флуоресцентного зонда филипина выявило достоверное снижение уровня холестерина в клеточных мембранах моноцитов у больных РС (п=14) по сравнению с контролем (р<0,0001) (Рис 2) Отмечено несколько более выраженное снижение уровня холестерина у лиц с начальными и поздними проявлениями РС, в период ремиссии заболевания

Поскольку липиды, входящие в состав клеточных мембран легко подвижны и обмениваются с плазматическим фондом липидов, составляя с ним единую метаболическую систему (Лопухин ЮМ с соавт, 1983, Леонова В Г, 1987), нами проведено исследование липидного состава сыворотки крови больных РС и здоровых добровольцев

Выявлено достоверное повышение уровня ОХС в сыворотке у больных РС (п=38) по сравнению с контрольной группой (4,90±0,16 и 4,03±0,33 ммоль/л, соответственно, р<0,05) и тенденция к увеличению у пациентов (п=33) содержания в крови общих липидов (ОЛ)

(5,21*0,32 и 4,86±0,46 г/л, соответственно, р>0,05) Отмечено некоторое снижение обеих фракций липидов в сыворотке у лиц с ранним дебютом и небольшой длительностью заболевания

1000 ед ялп \

830,4

841,4

0

2 10 20 30

Здоровые

40 50 60 Я 'РС С, мкМ

Рис 2 Зависимость флюоресценции комплексов «филипин-холестерин» в мембранах моноцитов здоровых и больных РС (уел ед ) от концентрации метки в растворе (мкМ)

(р<0,0001)

Нарушения липидного обмена у больных РС отмечены рядом исследователей В частности, наши результаты согласуются с данными, полученными в работе А В Анисимовой (1988), которая выявила гиперлипидемию у больных РС - увеличение сывороточных липидов за счет фракций свободного и эстерифицированного холестерина Наибольшие изменения липидного спектра крови имели место при обострении РС, неуклонном прогрессировании заболевания В качестве модели для изучения содержания мембранных липидов у больных РС в той же работе были выбраны эритроциты Выявленные ,*

при этом изменения количественных соотношений различных липидных фракций в клеточных мембранах эритроцитов уровня холестерина не касались (Анисимова А В , 1988)

На увеличение концентрации холестерина в сыворотке крови больных РС указывают и исследования Я Я Гордеева (1988) Автор отмечает, что изменения липидного спектра обнаруживались уже в дебюте РС, выраженность метаболических нарушений находилась в прямой зависимости от активности патологического процесса

Однако в литературе имеются сведения о несколько иной направленности дизлипидемии при РС В частности, в работе Я В Власова (1996) показано наличие у

больных РС гипохолестеринемии, выраженность которой нарастала с возрастом, длительностью РС, тяжестью течения заболевания Обнаруженное увеличение ПОЛ и сниженные значения электродиффузионного пробоя мембран эритроцитов у больных РС позволили автору высказать косвенное предположение о повышении содержания холестерина в эритроцитарных мембранах у этих пациентов, сходном с таковым у больных с церебральным атеросклерозом, и прийти к выводу о патологическом ускорении старения организма при РС

Были попытки классифицировать особенности липидного обмена при РС как гипербеталипидемию 2а типа (Тте^кБоп О 8 й а1, 1978) и установить ее взаимосвязь с гиперкортикоидно-гипотиреоидным типом эндокринной регуляции (Завалишин И А, Головкин В И, 2000), поскольку у трети больных РС выявлялись ремнантные фракции липопротеидов и хиломикронемия, которые устранялись только после плазмаферсза

Нарушения липидного метаболизма при РС некоторые аиоры связывают с наследственной предрасположенностью к заболеванию, другие рассматривают дизлипидемию как вторичную, являющуюся следствием распада миелина (Головкин В И, 1992, Климов А.Н, Никульчева Н Г , 1995)

Таким образом, проведенные нами исследования уровня холестерина в моноцитах и сыворотке крови у больных РС показали снижение содержания ОХС в плазматических мембранах моноцитов при наличии гиперхолестеринемии Полученные результаты свидетельствуют, что выявленное нами повышение микровязкости клеточных мембран моноцитов у больных РС не связано с содержанием в них холестерина, а, по всей видимости, обусловлено другими причинами, в частности, изменением фракционного состава фосфолипидов, особенностями белок-липидных взаимодействий или повышением процессов свободнорадикального окисления липидов, что требует более глубокого изучения структуры мембран моноцитов

Выявленная тесная связь между иммунопатологическими реакциями и липидозависимыми процессами при РС значительно расширяет наше представление о механизмах развития заболевания, формировании различных типов его течения

Таким образом, анализ клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы у больных РС выявил их наличие у большинства обследованных, причем более чем у половины пациентов обнаруживались проявления аутоиммунного синдрома, несколько реже - склонность к инфекционным заболеваниям Эти результаты совпадали с повышением уровня аутоантител к ДНК, частым наличием ВА в крови В связи с тем, что при РС происходит деструкция тканей, высокое содержание аутоангител может быть ее следствием или проявлением неспецифической лимфоидной активации

Обнаружено изменение физико-химических свойств мембран моноцитов у больных РС, которое выражалось в повышение микровязкости их липидного бислоя Выявленные особенности мембран моноцитов можно было бы объяснить, с одной стороны, несостоятельностью моноцитарного звена иммунитета у больных РС, с другой -структурными изменениями мембран клеток Однако, нам не удалось доказать зависимость повышенной вязкости плазматических мембран моноцитов у пациентов, страдающих РС, от содержания в них холестерина Обращает на себя внимание наибольшая вязкость клеточной стенки моноцитов у лиц с благоприятным течением, начальными проявлениями РС, ремиссией патологического процесса Это позволило нам высказать предположение о том, что повышение микровязкости мембран мононуклеарных фагоцитов отражает адаптивные механизмы и является мерой предупреждения разрушения Показана безусловная роль клеток моноцито-макрофагальной системы в патогенезе РС, что делает перспективным дальнейшее изучение их свойств

Выводы

1 У больных РС имеет место высокая частота встречаемости клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы (проявлений инфекционного и аутоиммунного синдромов) Признаки иммунной недостаточности ассоциируются с тяжестью инвалидизации Инфекционные проявления более характерны для больных РС молодого возраста, с ранним дебютом заболевания

2 Пациенты с I стадией РС, ремиттирующим течением заболевания, незначительным неврологическим дефицитом характеризуются повышением содержания аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в крови, лица с большой длительностью и вторично-прогредиентным течением РС - частым обнаружением в плазме волчаночного антикоагулянта Выявление ревматоидного фактора у больных РС ассоциируется с наличием у них инфекционного синдрома

3 Больные РС, преимущественно лица с благоприятным течением, I стадией, в фазе ремиссии, с низкой степенью инвалидизации характеризуются повышением микровязкости мембран моноцитов периферической крови У пациентов с неблагоприятным течением РС микровязкость мембран моноцитов снижена

4 У больных РС выявлено достоверное снижение уровня холестерина в клеточных мембранах моноцитов периферической крови. Повышенная вязкость мембран моноцитов у пациентов, страдающих РС, может быть обусловлена изменением других структурных компонентов липидного бислоя моноцитов, что требует дальнейшего изучения

5 Изменения сывороточных липидов у больных РС не ассоциируются с содержанием холестерина в мембранах моноцитов и клиническими вариантами заболевания

Практические рекомендации

1 Обнаруженная высокая частота встречаемости клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы у больных РС обязывает к включению в алгоритм обследования пациентов, страдающих РС, осмотра ревматолога, проведению дифференциальной диагностики с другими аутоиммунными заболеваниями

2 Выявленная склонность больных РС к инфекционным заболеваниям и их ассоциация с тяжелыми вариантами течения РС требует выявления хронических очагов инфекции у пациентов и их санации

3 Для прогнозирования течения заболевания и определения тактики ведения пациентов целесообразно исследование содержания в крови у больных РС аутоантител к ДНК и волчаночного антикоагулянта

4 Исследование микровязкости мембран моноцитов периферической крови у больных РС может быть использовано для уточнения типа течения заболевания, фазы патологического процесса

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Исследование мембранных свойств мононуклеарных фагоцитов у больных рассеянным склерозом с помощью пиренового зонда' соавт Т В Матвеева, М И Арлеевская// Итоги Программы «Десятилетие мозга» Нейроиммунология/IX научно-пракжческая конференция неврологов, Санкт-Петербург, апрель 2000 г - СПб, 2000 - С 80-81

2 Характеристика клеточных мембран клеток моноцито-макрофагальной системы при рассеянном склерозе// Современные проблемы медицинской науки и практики/ Конференция, посвященная 80-летию КГМА, Казань, июнь 2000 г - Казань, 2000 С 202 203

3 Физико-химический критерий обострения рассеянного склероза// V научно-практическая конференция молодых ученых, Казань, июнь 2000 г - Казань, 2001 С 72-73

4 Уровень содержания аутоантител к ДНК в сыворотке крови при обострении и ремиссии рассеянного склероза/ соавт Т В Матвеева, Ю О Коликова, М И Арлеевская, Д Г Ишмухаметова// Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины/ II Российская конференция молодых ученых России с международным участием, Москва, апрель 2001 г -М , 2001 - Том I - С 370

5 Клинические признаки иммунологических нарушений у больных рассеянным склерозом/ соавт М И Арлеевская, Т В Матвеева// VIII Всероссийский съезд неврологов, Казань, май 2001 г - Казань, 2001 -С 50-51

6 Содержание ААТ к ДНК у больных рассеянным склерозом в зависимости от активности процесса/ соавт Т В Матвеева, Ю О Коликова, М И Арлеевская, Д Г Ишмухаметова, В Г Винтер// Vin Всероссийский съезд неврологов, Казань, май 2001 г - Казань, 2001 - С 8485

7 Структурные особенности мембран моноцитов при рассеянном склерозе// VI научно-практическая конференция молодых ученых, Казань, июнь 2001 г - Казань 2001 - С 99 -100

8 Особенности липидного состава плазматических мембран моноцитов при рассеянном склерозе/ соавт МИ Арлеевская, ТВ Матвеева// Нейроиммунология Исследования, клиника, лечение/ XI Всероссийская научно-практическая конференция неврологов, Санкт-Петербург, май 2002 года - СПб, 2002 - С 280

9 Определение волчаночного антикоагулянта у больных рассеянным склерозом/ соавт ИР Минуллина// VII научно-практическая конференция молодых ученых, Казань, июнь 2002 г -Казань, 2002 -С 133-134

10 Клинические и иммунологические признаки диффузных заболеваний соединительной ткани у больных рассеянным склерозом/ соавт ЮО Коликова, ДГ Ишмухаметова, ТВ Матвеева, МИ Арлеевская// Неврологический вестник - 2003 - № 1-2 - С 18-21 -Библиогр с 21 (8 назв) - ISSN 1027-4898

11 Клинико-лабораторные параллели между системной склеродермией и рассеянным склерозом/ соавт JI3 Идиятуллина// Научно-практическая ревматология - 2003 - № 2 (Приложение) -С 45 -ISBN5-98169-002-10

12 Физико-химические особенности клеточных мембран мононуклеарных фагоцитов при рассеянном склерозе/ соавт Д Г Халиуллина// Медицинская иммунология - 2003 - Том 5 -№3-4 -С 271-272 - ISSN 1563-0625

13 Исследование микровязкости мембран мононуклеарных фагоцитов при системной склеродермии и рассеянном склерозе/ соавт JI3 Идиятуллина// VTII научно-практическая конференция молодых ученых, Казань, июнь 2003 г - Казань, 2003 - С 27 -28

14 Некоторые сходства и различия между рассеянным склерозом и системной склеродермией/ соавт JI3 Идиятуллина// VIII научно-практическая конференция молодых ученых, Казань, июнь 2003 г - Казань, 2003. - С 60

15 Мононуклеарные фагоциты в патогенезе рассеянного склероза (обзор литературы)/ соавт ТВ Матвеева//Вестник МКДЦ - 2003 - Том II - Выпуск 1 -С 174-180 Библиогр с 179-180 (70 назв ) - ISSN 1726-6149

16 Сывороточные антитела к ДНК при рассеянном склерозе/' Молодые ученые в медицине/ IX Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 190-летию КГМУ, Казань, апрель 2004 г - Казань, 2004 - С 92

i

т

Подписано к печати 14.02.2005. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. , Формат 80*108шб. Усл. печ. л 1,25.

Уч -изд. л. 1,5. Печать ризографическая. Тираж 100 экз. Заказ 001.

Отпечатано КМЦ ЧП Ольшанская А С ИНН 165807164663 Св-во о гос. регистрации № 22519 от 6.09.01 г. Казань, ул. Бутлерова, 30а Тел. 36-42-59

»-4723

РНБ Русский фонд

2006-4 10824

Актуальность темы: В последние годы убедительно доказана ведущая роль иммунопатологических реакций в патогенезе рассеянного склероза (PC) (Йегер Л., 1990, Чекнев С.Б., 1994, Завалишин И.А., Головкин В.И., 2000, Гусев Е.И., Бойко А.Н., 2001, Шмидт Т.Е., Яхно H.H., 2003).

Обнаруживаемые при PC изменения иммунологических показателей во многом схожи с таковыми при ряде классических аутоиммунных заболеваний (Йегер Л., 1990, Бойко А.Н., Фаворова О.О., 1995, Hafler D.A., Weiner H.L., 1989). В частности, в крови и спинномозговой жидкости у больных PC обнаруживается широкий спектр аутоантител, характерных для заболеваний аутоиммунной природы, в том числе аутоантитела к компонентам ядра (Барановский А.Г., Канышкова Т.Г., Могельницкий A.C. с соавт, 1998, Могельницкий A.C., 2001, Allinquant В., Schul 1er Е., 1987, Roussel V., Yi F., Jauberteau M.O. et al., 2000, Williamson R.A., Burgoon M.P., Owens G.P. et al., 2001), аитинуклеарные (ANA) (Fukasawa T., ICikuchi S., Sasaki H. et al., 1997, Tourbah A., Clapin A., Gout О. et al., 1998, Speciale L., Saresella M., Caputo D. et al., 2000), антифосфолипид-ные (aPL) (Ijdo J.W., Conti-Kelly A.M., Greco P. et al., 1999, Roussel V., Yi F., Jauberteau M.O. et al., 2000, de Andres С., Guillem A., Rodriguez-Mahou M. et al., 2001), антимитохондриальные антитела (AMA), антитела к тиреоцитам, париетальным клеткам (РСА), гладкой мускулатуре (SMA) (de Keyser J., 1988, Sparado M., Amendolea M. A., Mazzucconi M.G., 1999).

Более того, существует широкий спектр заболеваний соединительной ткани, имитирующих в ряде случаев PC, который включает системную красную волчанку (СКВ), первичный синдром Шегрена и системную склеродермию (ССД), антифосфолипидный синдром (Pender М.Р., Chalk J.В., 1989, Kira J., Goto I., 1994, Cordoliani M.A., Michon-Pasturel U., Rerat K. et al., 1998, Cuadrado M.J., Khamashta M.A., Ballesteros A. et al., 2000, Iniquez C., Mauri J., Medrano M. et al., 2001).

Вместе с тем, изучение клинических проявлений аутоиммунной недостаточности у больных PC с различными клиническими характеристиками заболевания (типом и характером течения, стадиями и фазами патологического процесса) не проводилось.

Особое значение в иммунопатологии PC придается мононуклеарным фагоцитам (Шмидт Т.Е., Яхио Н.Н., 2003). Моноциты, циркулирующие в крови, поглощают инородный материал (вирусы?) и "представляют" его антигены с формированием тримолекулярного комплекса Т-лимфоцитам, запуская иммунный ответ. Активированные макрофаги в ЦНС, помимо фагоцитоза миелина и "представления" его антигенов (аутоантигенов) на своей поверхности, секрети-руют протеазы, разрушающие миелин, а также провоспалительные цитокины и простагландины, поддерживающие воспалительный процесс (Imamura К., Suzumura A., Hayashi F. et al., 1993, Zoukos Y., Kidd D., Woodroofe M.N. et al., 1994, Cuzner M.L., 1997, Peters C., Lotzerich H., Raabe-Oekter A. et al., 1998).

Как известно, нормальное функционирование одноядерных фагоцитов определяется вязкостью их плазматических мембран (Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А. с соавт., 1983, Владимиров Ю.А., 1989, Бернштейн JI.M., Остроумова М.И., Порошина Т.Е. с соавт., 1994), которая, в свою очередь, зависит от фракционного и жирнокислотного состава фосфолипидов, от содержания холестерина в липидном бислое, от состояния процессов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) (Зубарева Б.В., Сеферова Р.И., Денисова Н.А., 1991, Сапрыкина Э.В., Ветошкина Т.В., Соснина Н.В. с соавт., 1991, Марри Р., Греннер Д., Мейес П. с соавт., 1993, Rivnay В., 1980).

Однако, работ, посвященных исследованию морфофункционального состояния мембран мононуклеарпых фагоцитов при PC, не проводилось. Остается открытым вопрос, имеются ли ассоциации между выраженностью аутоиммунных проявлений у больных PC и клиническими вариантами заболевания, а также мембранными свойствами клеток моноцито-макрофагальной системы.

В связи с этим целыо исследования явилось выявление клинико-лабораторных признаков иммунной недостаточности и изучение структурно-функциональных особенностей мопонуклеарных фагоцитов у больных PC с разной клинической характеристикой. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1) провести клинико-иммунологическое обследование больных РС с целью обнаружения признаков иммунной недостаточности, характерных для системных аутоиммунных заболеваний;

2) определить в сыворотке крови больных РС содержание аутоантител, патог-номоничных для аутоиммунной патологии (антител к нативной и денатурированной ДНК, волчаночного антикоагулянта, ревматоидного фактора);

3) исследовать микровязкость клеточных мембран моноцитов периферической крови у больных РС;

4) изучить содержание холестерина в моноцитах и в плазматических мембранах моноцитов, а также содержание холестерина и общих липидов в сыворотке крови у больных РС;

5) сопоставить полученные результаты с клинической характеристикой РС (типами и характером течения, стадиями и фазами РС).

Научная новизна« Выявлена высокая частота клинических признаков нарушенного функционирования иммунной системы у больных РС. Обнаружена ассоциация повышенного уровня ААТ к ДНК с ремиттирующим характером течения, I стадией РС. Выявлено повышение микровязкости мембран моноцитов у лиц с благоприятным течением, начальными проявлениями заболевания, в период ремиссии РС, низкой степенью инвалидизации. Обнаружено снижение уровня холестерина в клеточных мембранах моноцитов у больных РС.

Практическая значимость. Обнаруженная высокая частота встречаемости клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы у больных РС указывает на целесообразность поиска у пациентов, страдающих РС, клинических проявлений классических аутоиммунных заболеваний.

Исследование у больных РС содержания аутоантител к ДНК, волчаночного антикоагулянта, а также микровязкости мембран моноцитов периферической крови позволяет уточнить тип и характер течения заболевания, фазу патологического процесса.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в практическую работу Республиканского клинико-диагностического центра по РС на базе неврологического отделения городской клинической больницы № 7 г. Казани, в учебный процесс на кафедре неврологии и нейрохирургии факультета последипломного образования Казанского государственного медицинского университета.

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ.

Положения, выносимые на защиту:

1. У больных РС обнаруживаются клинические признаки нарушения функционирования иммунной системы, сближающие его с классическими заболеваниями соединительной ткани.

2. Уровень ААТ к ДНК в крови у больных РС ассоциирован с характером течения, стадиями РС и степенью инвалидизации.

3. Структурно-функциональные особенности мембран моноцитов у больных РС зависят от типа течения, стадии, фазы заболевания, тяжести неврологического дефицита.

4. Нарушения метаболизма холестерина не оказывают влияния на клинические характеристики РС.

ВЫВОДЫ:

1. У больных РС имеет место высокая частота встречаемости клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы (проявлений инфекционного и аутоиммунного синдромов). Признаки иммунной недостаточности ассоциируются с тяжестью инвалидизации. Инфекционные проявления более характерны для больных РС молодого возраста, с ранним дебютом заболевания.

2. Пациенты с I стадией РС, ремиттирующим течением заболевания, незначительным неврологическим дефицитом характеризуются повышением содержания аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в крови, лица с большой длительностью и вторично-прогредиентным течением РС -частым обнаружением в плазме волчаночного антикоагулянта. Выявление ревматоидного фактора у больных РС ассоциируется с наличием у них инфекционного синдрома.

3. Больные РС, преимущественно лица с благоприятным течением, I стадией, в фазе ремиссии, с низкой степенью инвалидизации характеризуются повышением микровязкости мембран моноцитов периферической крови. У пациентов с неблагоприятным течением РС микровязкость мембран моноцитов снижена.

4. У больных РС выявлено достоверное снижение уровня холестерина в клеточных мембранах моноцитов периферической крови. Повышенная вязкость мембран моноцитов у пациентов, страдающих РС, может быть обусловлена изменением других структурных компонентов липидного бислоя моноцитов, что требует дальнейшего изучения.

5. Изменения сывороточных липидов у больных РС не ассоциируются с содержанием холестерина в мембранах моноцитов и клиническими вариантами заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Обнаруженная высокая частота встречаемости клинических признаков нарушения функционирования иммунной системы у больных РС обязывает к включению в алгоритм обследования пациентов, страдающих РС, осмотра ревматолога, проведению дифференциальной диагностики с другими аутоиммунными заболеваниями.

2. Выявленная склонность больных РС к инфекционным заболеваниям и их ассоциация с тяжелыми вариантами течения РС требует выявления хронических очагов инфекции у пациентов и их санации.

3. Для прогнозирования течения заболевания и определения тактики ведения пациентов целесообразно исследование содержания в крови у больных РС аутоантител к ДНК и волчаночного антикоагулянта.

4. Исследование микровязкости мембран моноцитов периферической крови у больных РС может быть использовано для уточнения типа течения заболевания, фазы патологического процесса.