Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Клеточные механизмы нейроиммунных взаимодействий в реализации ориентировочно-исследовательского поведения.

МАРКОВА Евгения Валерьевна

На правах рукописи

4842891

КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ НЕЙРОИММУННЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В РЕАЛИЗАЦИИ ОРИЕНТИРОВОЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ПОВЕДЕНИЯ

14.03.09-Клиническая иммунология, аллергология

Я/у з

т

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск - 2010

4842891

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН.

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН

Владимир Александрович Козлов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Владимир Сергеевич Кожевников

Иван Германович Козлов

Анна Вениаминовна Шурлыгина

Ведущее учреждение:

Учреждение Российской академии медицинских наук научно-исследовательский институт психического здоровья Сибирского отделения РАМН.

Защита состоится 03 марта 2011 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 НИИ клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630099 г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ клинической иммунологии СО РАМН.

Автореферат разослан 11 января 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Новая интегративная наука, психо-нейроиммунология, появившаяся в последней трети XX века, с каждым годом все больше привлекает внимание исследователей. Это обусловлено тем, что понимание функционального единства нервной и иммунной систем, характера взаимодействия между ними открывает впечатляющие перспективы в самых различных областях экспериментальной и клинической медицины, позволяет пересмотреть лечебную тактику при борьбе со многими заболеваниями. Взаимодействие основных адаптационных систем организма подразумевает регулирующее влияние со стороны иммунной системы на функции центральной нервной системы (ЦНС); при этом одной из ключевых проблем является расшифровка связи между процессами высшей нервной деятельности (ВНД) и иммунным статусом человека и животных. Однако, именно этот аспект является одним из наименее изученных в нейроиммунологии.

Известно, что ЦНС испытывает влияние со стороны иммунной системы. Исследования, проведенные в этом направлении в России и за рубежом, позволили установить, что как в интактном организме, так и в процессе формирования иммунного ответа в ЦНС перманентно возникают закономерные модуляции на уровне электрофизиологических, биохимических и молекулярно-биологических параметров. Показано, что продукты иммунокомпетентных клеток (ИКК) обладают психо- и нейротропной активностью; участвуют в физиологических механизмах памяти, регуляции сна и бодрствования, активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, реализации стресс-реакции (Девойно Л.В. с соавт., 1998-2009; Yayley S. 1999; Корнева Е.А. с соавт., 2000, 2003; Арушанян Э.Б., Бейер Э.В., 2004; Dantzer R. 2003-2006; Wrona D. 2006; Jafe-riA, Bhatnager S., 2007; Quah N., Banks W.A. 2007 и др.). Формирование иммунного ответа на различные антигены сопровождается модуляцией процессов ВНД, в том числе поведения, модификация которого в процессе активации иммунной системы имеет адаптивное значение (Vidal J., 1999; Клименко В.М.,1999; Hanisch U.K., 2001; Ветлугина Т.П. 2001; Мошкин М.П. с соав. 2003; Lane E.L., et al, 2006; Hopkins S.J., 2007; Учакин П.Н. 2008 и др.). Тем не менее, вопрос о том, какими путями реализуется афферентное звено взаимодействия иммунной и нервной систем остается спорным. В качестве триггерных факторов, приводящих к модуляции поведения в процессе иммуногенеза, выступают по всей видимости изменение мембранного потенциала активированных ИКК и продуцируемые ими цитокины (Turrin N.P., Plata-Salaman C.R., 2000; Larson S.J., Dunn A.J, 2001; Dantzer R. 2007 и др.). Показано, что строма и паренхима лимфоидных органов имеет богатое представительство афферентных нервных окончаний (БшшчГ.Л. Сапин М.Р., 2007; Орлов P.C., Ноздрачев А.Д., 2009 и др.). При этом ИКК и нервные окончания образуют своеобразные синапсы, активирующиеся при изменении мембранного потенциала указанных клеток, а также при воздействии цитокинов, продуцируемых ИКК (Веселовский Н.С., Федулова С.А., 1983; Feiten S.Y., Feiten D.L., 1991; Bluthe R.M. et al., 1996; Dantzer R. et al., 1999).

Установлено, что клетки мозга (нервные и глиальные) подобно клеткам иммунной системы, несут на мембране рецепторы цитокинов; причем синтез и

3

продукция ряда цитокинов изменяются при воздействии различных иммунных стимулов (Van Dam A. et al., 1995; Dantzer R., 2004, 2007; Ader R., 2007; Siegel A., Zalcman S.S., 2009 и др.). Можно сказать, что мозг способен "чувствовать" продукцию цитокинов при развитии той или иной иммунной реакции в организме и отвечать на эту реакцию синтезом цитокинов в клетках нервной ткани, отражением чего является модуляция поведенческих реакций. Существенную роль при этом играют и нейромедиаторные системы мозга, активность которых также подвержена влиянию со стороны иммунной системы (Turrin N.P., Plata-Salaman C.R., 2000; Larson S.J., Dunn A.J., 2001, 2006 и др.).

Более того, установлено, что синтез и базовая продукция большинства про- и противовоспалительных цитокинов в структурах мозга, наблюдаются также у животных в нормальных физиологических условиях (Neveu PJ.,1998; Клименко В.М, 1999; Dantzer R, 2004,2006; Siegel A., Zalcman S.S., 2009; Захаров Ю.М. 2007-2009 и др.), что предполагает их участие в реализации функций ЦНС, в том числе и в формировании определенного стереотипа поведения.

В то же время, иммунная и нервная системы не только обладают общим полем гуморальных факторов (включающим интерлейкины, интерфероны, простагландины, нейромедиаторы, нейропептиды и др.), но и постоянно контактируют посредством своих клеточных элементов, характеризующихся выраженным фенотипическим и функциональным сходством (Хаитов P.M., 1997; Kadiiski D et al., 2001; Ader R., 2007). Как указывалось выше, в строме и паренхиме лимфоидных органов имеются отростки различных нейронов -сенсорные и вегетативные нервные окончания. В свою очередь, ИКК, как описано в ряде работ, обладают способностью проникать в паренхиму нервной ткани через неповрежденный гематоэнцефалический барьер и непосредственно контактировать с нейронами и глиальными клетками, модулируя их функциональную активность. (Gordon S. et all, 1993; Беляева И.А., с соавт. 1999; HickeyW.F., 1999). Поскольку способность к непосредственному контакту и взаимодействию клеток иммунной и нервной систем приобретается на ранних этапах эмбриогенеза (Hickey W.F., 1999), не исключено влияние иммунной системы и, в частности ее ¿неточных элементов, на формирование и регуляцию поведенческих реакций индивидуума. Тем не менее, именно этот аспект взаимодействия указанных систем остается одним из наименее изученных.

Актуальность исследования афферентной организации взаимодействия иммунной и нервной систем, изучения механизмов ответа мозга на активацию иммунной системы, участия иммуногенных факторов и клеточных элементов иммунной системы в реализации поведенческих реакций, определяется как наличием широкого спектра неврозоподобных, аффективно-личностных, когнитивных и поведенческих нарушений, возникающих при вторичных иммунодефицитах вследствие повторных и хронически действующих экологических и социальных стрессоров; так и довольно активным проведением в настоящее время различных иммунотерапевтических мероприятий, в том числе и клеточной терапии, при инфекционных, иммунодефицитных, аллергических, аутоиммунных и других заболеваниях. 4

Активное поведение в условиях неопределенности - значимый фактор соматического здоровья, предотвращающий возникновение психосоматических заболеваний и повышающий устойчивость организма к стрессу. Напротив, отказ от поиска ведет к снижению сопротивляемости организма, подавляет иммунную систему, являясь тем самым неспецифической и универсальной предпосылкой к развитию самых разнообразных форм патологии (Ротенберг B.C., Аршавский В.В., 1976, 1999; Айрапетянц М.Г. с соавт., 1986; Александер Ф. 2002 и др.) Ориентировочно-исследовательское поведение (ОИП), таким образом, представляет собой один из важнейших типов поведения, который обеспечивает индивидуума знанием об окружающей среде и является существенным психологическим механизмом адаптации высших позвоночных. Изучение механизмов его реализации со стороны иммунной системы и ее клеточных элементов позволит расширить имеющиеся представления об интегративном взаимодействии иммунной и нервной систем и открывает новые перспективы в профилактике и коррекции психосоматических расстройств.

Ярким примером психосоматической патологии является хроническая зависимость от морфина Морфин, как известно, взаимодействует с опиатными рецепторами головного мозга и обладает выраженным влиянием на поведенческие реакции. Вместе с тем, известны и его супрессивные эффекты (как прямые, так и опосредованные через центральные механизмы) на функции иммунной системы (Peterson Р.К. et al., 1998; Ветлугина Т.П., 2001; Saurer T.B. et al., 2003); в связи с чем актуальным и социально значимым является разработка эффективных методов профилактики и терапии патологии нервной и иммунной систем организма, возникающих у наркозависимых, равно как и поиск новых подходов к реабилитации последних.

В связи с вышеизложенным, цель исследования заключалась в установлении особенностей функционирования иммунной системы у экспериментальных животных с различным уровнем ОИП и выявлении закономерностей изменения ОИП при активации иммунной системы и при трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить характер ОИП у экспериментальных животных и провести морфологическое исследование сенсомоторной коры головного мозга животных с различным уровнем ОИП.

2. Охарактеризовать уровень мРНК ИЛ-lß, рецептора ИЛ-1 первого типа (ИЛ-1-Р), рецептора эритропоэтина (ЭП-Р) и содержание цитокинов в лизатах клеток головного мозга животных с активным и пассивным типом ОИП.

3. Исследовать интенсивность клеточного и гуморального иммунного ответа, пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток, уровень мРНК ИЛ-lß, ИЛ-1-Р, ЭП-Р и содержание цитокинов в лизатах спленоцитов, культу-ральных супернатантах моноцитарно-макрофагалышх и лимфоидных клеток селезенки животных с активным и пассивным типом ОИП.

4. Определить характер изменения параметров ОИП у животных с его различным уровнем при стимуляции клеточного и гуморального звеньев иммунной системы.

5. Исследовать влияние трансплантации неразделенных клеток селезенки на параметры ОИП у сингенных животных с активным и пассивным типом ОИП.

6. Изучить влияние трансплантации моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки на функциональную активность нервной системы (ОИП, экспрессию генов Ш1-1Р, ИЛ-1-Р и ЭП-Р в клетках головного мозга) и иммунной системы (клеточный и гуморальный иммунный ответ, пролиферативную активность им-мунокомпетентных клеток, экспрессию генов ИЛ-1р, ИЛ-1-Р и ЭП-Р в сплено-цитах) у сингенных животных с активным и пассивным типом ОИП.

7. Изучить влияние трансплантации непршшпающих к пластику клеток селезенки на функциональную активность нервной системы (ОИП, экспрессию генов ИЛ-1р, ИЛ-1-Р и ЭП-Р в клетках головного мозга) и иммунной системы (клеточный и гуморальный иммунный ответ, пролиферативную активность им-мунокомпетентных клеток, экспрессию генов ИЛ-1р, ИЛ-1-Р и ЭП-Р в сплено-цитах) у сингенных животных с активным и пассивным типом ОИП.

8. Изучить влияние трансплантации ИКК на характерные проявления функциональной активности иммунной и нервной систем у экспериментальных животных в состоянии хронической зависимости от морфина.

Научная новизна:

В результате проведенных исследований продемонстрирована взаимосвязь уровня ОИП с особенностями структурно-функциональной организации ЦНС и функциональной активности иммунной системы у экспериментальных животных. Показано, что мыши (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с активным типом ОИП характеризуются относительно большим количеством нейронов в сенсомоторной коре головного мозга по сравнению с мышами с пассивным типом ОИП. У последних, в свою очередь, в коре мозга выявлены выраженные перицеллю-лярные отеки, и наличие групп сжатых клеток. При этом установлено, что клетки головного мозга мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с пассивным типом ОИП отличаются от таковых у мышей с активным типом поведения более высокой экспрессией генов ИЛ-1Р и ИЛ-1Р первого типа, равно как и превалирующим содержанием цитокинов ИЛ-1р, ИЛ-6, ФНОа, ИНФу в их лизатах. Впервые выявлена относительно высокая экспрессия гена ЭП-Р в клетках головного мозга мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с активным типом ОИП. Показано стимулирующее влияние ЭП на показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП.

Впервые показаны различия синтеза и продукции ряда цитокинов ИКК мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с активным и пассивным типом ОИП. Так, у мышей с высоким уровнем ОИП выявлена болеЬ низкая экспрессия гена ЭП-Р как в мак-рофагальных, так и в лимфоидных клетках селезенки. В тоже время у этих животных установлен относительно высокий уровень мРНК ИЛ-1-Р первого типа в спленоцитах и мРНК ИЛ-1Р в их моноцитарно-макрофагальной фракции. При этом в лизатах спленоцитов мышей с активным типом ОИП показано более высокое содержание цитокинов ИЛ-6, ФНОа и ИНФу, равно как и ИЛ-1р, ИЛ-6, ФНОа в культуральном супернатанте их моноцитарно-макрофагальной фракции. Спленоциты лимфоидного ряда мышей (СВА х С57В1/'6)Р1 с активным типом ОИП отличаются повышенной продукцией ИЛ-6. 6

При исследовании функциональной активности ИКК у мышей (СВА х C57B1/6)F1 с высоким и низким уровнем ОИП выявлены также достоверные различия в их пролиферативной активности. Показано, что животные с активным типом ОИП характеризуются более высокой спонтанной и митогениндуцирован-ной пролиферативной активностью тимоцитов и спленоцитов.

Впервые установлено, что характер изменения параметров ОИП у мышей (СВА х C57B1/6)F1 при формировании как гуморального, так и клеточного иммунного ответа определяется исходным поведенческим статусом животных. Впервые выявлена тесная взаимосвязь между уровнем ОИП и выраженностью реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), характеризующей состояние клеточного звена иммунной системы, наблюдаемая у мышей линий (СВА х C57BL/6)F1, С57В1/6, Balb/c и у крыс Вистар и OXIS; у последних продемонстрировано также дозозависимое повышение показателей горизонтальной двигательной активности при стимуляции клеточного звена иммунной системы.

Научная новизна работы заключается также в том, что впервые продемонстрирован феномен направленного изменения уровня ОИП у сингенных животных путем трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками; и показаны эффекты влияния моноцитарно-макрофагальных и лимфоидных клеток селезенки на параметры ОИП мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным и пассивным типом поведения в норме и в состоянии хронической зависимости от морфина.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Теоретическая значимость работы заключается в установлении принципиально нового феномена: направленного изменения параметров ОИП у экспериментальных животных путем трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками. Представленные в работе результаты, раскрывающие основные механизмы влияния ИКК на параметры ОИП, значительно расширяют существующие представления о процессах функционального взаимодействия двух важнейших гомеостатических систем организма - иммунной и нервной. Выявленные взаимосвязи между функциональной активностью иммунной системы и уровнем ОИП у интактных животных, а также закономерности влияния активации иммунной системы, ее клеточного и гуморального звеньев на параметры ОИП раскрывают механизмы иммунорегуляции форм поведения как врожденных, так и приобретенных в ходе индивидуального опыта.

Практическая значимость полученных результатов заключается в обосновании необходимости оценки и учета индивидуально-типологических особенностей пациента при проведении иммунотерапевтических мероприятий, в частности, клеточной терапии, поскольку имеются основания полагать, что при этом имеет место не только ожидаемый непосредственный эффект на уровне иммунной системы реципиента, но и опосредованный эффект на функции центральной нервной системы. Выявленные в работе закономерности и взаимосвязи между параметрами поведения и функциональной активностью иммунной системы открывают новые перспективы в самых различных областях экспериментальной и клинической медицины; позволяют расширить возможности как иммунокоррекции (в том числе посредством коррекции поведенческих функций); так и регуляции поведения пу-

тем воздействия на параметры иммунитета. Практическая ценность работы заключается также в том, что предложенная экспериментальная модель и полученные результаты могут быть использованы для разработки новых биологических методов и стратегии патогенетической терапии различных форм психосоматических заболеваний, протекающих с нарушением нейроиммунных взаимодействий, в том числе и наркотической зависимости.

Положения, выносимые на защиту.

1. У животных с активным и пассивным типами ОИП различна функциональная активность клеточного звена иммунной системы.

2. Уровень ОИП ассоциирован с уровнем синтеза цитокинов в клетках иммунной системы и ЦНС.

3. Трансплантация иммунокомпетентных клеток является способом изменения ОИП у экспериментальных животных.

Личный вклад автора в проведение исследования.

Все представленные результаты экспериментальных исследований получены лично автором, либо при его непосредственном участии.

Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации представлены в виде докладов на следующих научных мероприятиях: International Congress ISNIM-99 (Lugano, Switzerland, September, 1999); Eighth NIDA International Forum on Building International Research (Miami, USA, June, 2003); Съезде РНОИ (Сочи, 2004); Drug Discovery Technology / InfoTech Pharma Conference (London, March 2005); Российско-германском симпозиуме «Патофизиология психических расстройств» (Томск, сентябрь 2006); Симпозиуме «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007); 3-rd International Conference "Basic Science for Medicine" (Novosibirsk, September, 2007); Съездах ней-роиммунологов (Санкт-Петербург, май-июнь 2005, 2007, 2009); Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, июнь-июль 2008); "EHRLICH И 2nd World Conference on Magic Bullets" (Nürnberg, Germany, October 2008); 2nd European Congress of Immunology (Berlin, September, 2009); шестой Российской конференции по нейроиммунопатологии (Москва, июнь, 2010).

Результаты работы представлены также на итоговых научных сессиях ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 2000,2003, 2006); заседании Президиума СО РАМН (Новосибирск, июнь 2009 г.); заседании проблемной комиссии МНС № 55.07 «Иммунология» СО РАМН (сентябрь 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано в российских и зарубежных изданиях 60 научных работ, в том числе 33 статьи (из них 25 в изданиях, рекомендуемых ВАК для публикации материалов диссертационных работ). Результаты исследований вошли также в монографии "Основы нейроиммунологии", М., 2004; и "Патофизиология психических расстройств", Томск, 2006.

Структура и объем диссертации.

Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав, содержащих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения и выводов. Диссертация изложена на 251 странице машинописного 8

текста, иллюстрирована 21 рисунком и 21 таблицей. Список цитируемой литературы включает 599 источников, из них 147 работ отечественных авторов.

Работа выполнена в лаборатории нейроиммунологии отдела экспериментальной иммунологии НИИ клинической иммунологии СО РАМН.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Экспериментальные животные.

В работе использовались мыши-самцы (СВА х C57B1)F1, BALB/c, С57В1/6, в количестве 2140 особей; средний вес животных составлял 18-20 г, возраст 3 месяца; а также мыши (СВА х C57B1)F1 в возрасте 7 и 14 месяцев. Животные были получены из питомника НИЛЭМ СО РАМН (г. Томск) и лаборатории экспериментальных животных (моделей) НИИКИ СО РАМН (г.Новосибирск). Крысы линий Вистар и OXYS, в количестве 110 особей, самцы, средний вес животных составлял 200-250 г, возраст 3 месяца; получены из лаборатории разведения экспериментальных животных Института цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск). Животные содержались в условиях лабораторного вивария в клетках по 5-10 особей, в течение не менее двух недель до начала эксперимента на стандартной диете, при свободном доступе к воде и нормальном световом режиме.

2. Экспериментальные воздействия.

1. Иммунизация взвесью эритроцитов барана (ЭБ). ЭБ отмывали три раза пятью объемами среды 199. Затем готовили 5% взвесь на среде 199 и вводили внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл.

2. В качестве стимулятора реакции ГЗТ использовалась туберкулезная вакцина (БЦЖ) сухая (ФГУП «Аллерген»). Вакцину вводили внутрибрюшинно в дозе 50, 250, 600 мкг/кг веса животного в объеме 0,5 мл среды RPMI-1640. Контрольной группе животных в аналогичных условиях эксперимента и в том же объеме вводили растворитель - среду RPMI -1640.

3. Введение рекомбинантного эритропоэтина (Recormon, Boehringer Mannheim GmbH, Германия). Эритропоэтин (ЭП) вводили подкожно по 10 единиц 3 раза в неделю, общая доза препарата составила 30 единиц.

4. Формирование хронической зависимости от морфина. Зависимость у мышей формировалась методом принудительного спаивания в течение 25 дней. Морфин подавался в 2% растворе сахарозы, начиная с дозы 0,1 мг/мл, с последующим ее увеличением до 0,2 мг/мл, 0,3 мг/мл, 0,4 мг/мл через каждые 48 часов. Доза морфина в 0,4 мг/мл оставалась неизменной до конца эксперимента. В качестве контроля использовались животные, принимавшие в аналогичных условиях эксперимента 2 % раствор сахарозы. (Лицензия на деятельность, связанную с оборотом наркотических и психотропных веществ, регистрационный номер-21/000003 от 19.11.02 г.)

3. Иммунологические методы.

3.1. Получение суспензии сгшеноцитов.

Животных забивали путем цервикальной дислокации; в стерильных условиях вскрывали брюшную полость, извлекали селезенки, очищали их от соединительной ткани и помещали во флаконы с охлажденной до 4°С средой 199 (5 мл

9

на селезенку). Выделенные селезенки измельчали на мельчайшие кусочки при помощи ножниц. Образовавшуюся в результате измельчения суспензию клеток осторожно ресуспензировали с помощью шприца, для того, чтобы распались оставшиеся скопления клеток, центрифугировали 8 мин при 150 g. После удаления надосадочной жидкости, находящиеся в осадке спленоциты ресуспензировали в среде RPMI-1640. Жизнеспособность клеток определяли при помощи окраски трипановым синим.

3.2. Трансплантация иммунокомпетентных клеток.

Иммунокомпетентные клетки для трансплантации выделяли из суспензии клеток селезенки мышей - доноров (СВА х С57 B1/6)F1 с высоким или низким уровнем ОИП в тесте "открытое поле".

Моноцитарно-макрофагальную фракцию спленоцитов выделяли адгезией на пластике в течение двух часов при температуре 37°С, предварительно удалив эритроциты методом гемолитического шока. Затем, после 2-кратного отмывания холодной средой 199, оставшиеся клетки снимали с пластика специальным шпателем Cell Scraper (Becton Dickinson) в пробирку. Полученная суспензия на 86-92% состояла из клеток системы мононуклеарных фагоцитов.

Клетки неприлипающей к пластику фракции спленоцитов получали из суспензии клеток селезенки, предварительно удалив моноцитарно-макрофагальную фракцию клеток адгезией на пластике в течение двух часов при температуре 37°С. Полученная суспензия на 88-93% состояла из клеток лимфоидного ряда. Жизнеспособность клеток составляла 93-95%.

Далее, клетки (8-10* 106 в 0,2 мл среды RPMI-1640) доноров с высоким уровнем ОИП внутривенно вводили реципиентам с низким уровнем ОИП и, наоборот. Для трансплантации применялась также и неразделенная суспензия спленоцитов в концентрации 15><106 на одно животное. Контролем в каждой опытной группе служили мыши, которым трансплантация ИКК проводилась в аналогичных условиях эксперимента, за исключением того, что доноры и реципиенты характеризовались одинаковым уровнем ОИП. Концентрация трансплантируемых спленоцитов определялась путем предварительной серии экспериментов: использовалась максимальная концентрация клеток, не изменяющая после их внутривенного введения параметры поведения в "открытом поле" у реципиентов, аналогичных донорам по уровню ОИП.

На 5-е сутки после трансплантации у реципиентов тестировались параметры ОИП, экспрессии генов цитокинов клетками головного мозга и селезенки, количество антителообразующих клеток селезенки (АОК), высота реакции ГЗТ, про-лиферативная активность клеток тимуса и селезенки.

3.3. Определение субпопуляционного состава спленоцитов.

Субпопуляционный состав спленоцитов определялся у мышей (СВА х

C57B1/6)F1 с высоким и низким уровнем ОИП. Фенотипирование клеток селезенки проводилось методом проточной цитофдюорометрии с помощью аналитической системы FACS Calibur (Becton Discinson, USA) согласно инструкции по эксплуатации, прилагаемой к прибору, с моноклональными антителами против CD4, CD8, CD45, CD116 (Becton Discinson, USA), помеченными флюорохрома-ми с отличающимися спектрами эмиссии. 10

3.4. Определение количества антителообразующих клеток в селезенке мышей.

Способность мышей к иммунному ответу на Т-зависимый антиген (ЭБ) оценивали на 5-е сутки после внутрибрюшинной иммунизации ЭБ по количеству локальных зон гемолиза в полужидкой среде модифицированным методом A.J. Cunningham (Cunningham A.J. 1965). Подсчитывали абсолютное число АОК на селезенку и относительное их число на 106 ядросодержащих клеток селезенки. Подсчет ядросодержащих клеток селезенки производили в камере Горяева.

3.5. Определение высоты реакции гиперчувствительности замедленного типа.

Мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением ЭБ (0,5% - 0,5 мл). Разрешающую дозу указанного антигена (50% - 0,05 мл) вводили под апоневроз задней стопы через 96 часов. Формирование реакции ГЗТ оценивали через 24 часа после разрешающей инъекции по степени опухания лапы (изменения её толщины по сравнению с позитивно-контрольной задней лапой того же животного, в которую была введена среда RPMI-1640). Индекс реакции (ИР) определяли для каждой мыши по формуле ИР = (Ро-Рк) / Рк и выражали в процентах (Yoshikai Y., et al 1979).

3.6. Исследование пролиферативной активности клеток.

Пролиферативный ответ спленоцитов и тимоцитов оценивали стандартным

методом по включению в нуклеопротеидные фракции клеток радиоактивной метки (Н3-тимидин). Суспензию клеток в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640, 5% инакгивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES-буфера, 5 х 10"5 М 2-меркаптоэтанола (Sigma) и 80 мкг/мл гентамицина вносили в объеме 50 мкл в 96-луночные круглодонные планшеты (Linbro) в концентрации 5 * 105 тимоцитов и 105 спленоцитов на лунку. К суспензии добавляли по 50 мкл митогена (субоптимальные концентрации ЛПС E.coli 026:В6 (Sigma) и конкавалина A (Pharmacia) определялись в серии предварительных экспериментов и составляли соответственно 25 мкг/мл и 1 мкг/мл) и/или культуральной среды до полного объема 150 мкл на лунку. Клетки культивировались в течение 72 часов при 37°С и 5% содержании С02 в атмосфере. За 18 часов до окончания периода культивирования вносили Н3-тимидин (1мкКю на лунку). По окончании периода инкубации клетки собирали на специальные стекловолокнистые фильтры (Flow Lab.Inc.) с помощью автоматического 12-канального Cell harvester-530 (Flow Lab.Inc.). Оценку радиоактивности материала производили в жидкостном сцинтилляционном счетчике SL-30 (Intertechnic, Франция). Результаты представляли в виде среднего счета в имп/мин.

3.7. Определение цитокинов.

Количественное содержание цитокинов определяли в образцах культураль-ных супернатантов трансплантируемых (донорских) клеток, а также в лизатах головного мозга и селезенки животных с различным уровнем ОИП. Для этого спленоциты культивировали в концентрации 2 * 106/мл в объеме 2 мл в 24-луночных планшетах для иммунологических исследований (Linbro) в полной культуральной среде, содержащей RPMI-1640, 10% инакгивированной эмбрио-

нальной телячьей сыворотки, 2мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES-буфера и 80 мкг/мл гентамицина. По окончании периода культивирования клеточную суспензию собирали, клетки осаждали центрифугированием, а культуральный супернатант использовали для исследования.

Лизаты головного мозга и селезенки животных получали путем гомогенизирования тканей в среде RPMI-1640 с добавлением 0,1% Triton Х-100 (GERBIJ Biotechnik GmbH), с последующим центрифугированием в течение 3 минут при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость использовали для исследования.

Содержание цитокинов в исследуемых образцах оценивали методом ИФА (ELISA) с использованием специфических компонентов к цитокинам мыши производства фирмы "R&D Systems" (Великобритания). Принцип анализа «sandwich» - вариант твердофазного трехстадийного иммуноферментного анализа на планшетах (моноклональные антитела на подложке, конъюгат поликло-нальных антител с биотипом) по технологии, разработанной в ЗАО "Вектор-Бест" для определения цитокинов. Чувствительность наборов для HJI-lß и ИЛ-4 не превышала 5 пг/мл, для ИЛ-6 и ИНФу - 2 пг/мл, для ФНОа-1 пг/мл.

4. Молекулярно-биологические методы.

4.1. Выделение тотальной РНК.

Выделение тотальной РНК из клеток селезенки и головного мозга животных проводили методом фенольной экстракции (Chomczynsy P., SacchiN. 1987) с использованием тест-системы ВектоРНК-экстракция (Вектор-Бест; Новосибирск) в соответствии с прилагаемой инструкцией. Для определения возможной деградации РНК в процессе экстракции использовали электрофорез на 2% геле агарозы в трис-ацетатном буфере, с добавлением 0,00001% бромистого этидия (ВектоДНК-ЭФ, Вектор-Бест, Новосибирск). Пробы РНК визуализировали при помощи трансиллюминатора (Viber Lourmatt, Франция). Пробы с признаками деградации РНК (смещение и размытость полос 18S и 28S рибосомальных РНК) не использовались. Для определения спектрофотометрических характеристик препаратов РНК оптическую плотность образцов определяли на спектрофотометре (Hitachi-320, Япония) при 260 нм и 280 нм, что позволяло судить о чистоте препаратов и о количестве РНК: 1 o.e. при 260 нм соответствует 40 мкг/мл (Ма-ниатис Т. и соавт.,1984).

4.2. Проведение реакции обратной транскрипции.

Для проведения реакции обратной транскрипции к раствору РНК добавляли Змкл раствора случайных праймеров (01igoDT12-i8) (Медиген, Новосибирск) с оптической плотностью 1 o.e.; инкубировали при температуре 65°С в течение 15 мин; затем охлаждали при температуре -18°С в течение 15 мин. После этого в каждую пробирку с РНК добавляли по 25 мкл раствора для ревертирования, состоящего из 2 мклЮО Мм MgCl2 (Медиген, Новосибирск), 1,5 мкл (75 ед.) обратной транскриптазы M - MuLV RT (Promega, USA), 4 мкл 10-кратного буфера для обратной транскриптазы (Медиген, Новосибирск), 9,5 мкл деионизировашюй воды (Медиген, Новосибирск), 8 мкл смеси 20 Мм динуклеотидтрифосфатов (АТР, ТТР, GTP, СТР) (Медиген, Новосибирск), 1 мкл раствора ингибитора РНКаз (20 ед/мкл) (Promega, USA). Реакцию проводили в течение 60 мин в термостате

при температуре 37°С. Фермент обратную транскриптазу инактивировали в конце реакции нагреванием 95°С 5 мин. Пробы содержали при-18°С в течение ночи.

4.3. Проведение полимеразной цепной реакции.

Амплификацию полученной ДНК осуществляли в программируемом ам-плификаторе "Eppendorf", с использованием пар олигонуклеотидных праймеров, гомологичных консервативным участкам антипараллельных цепей ДНК. ПраЙ-меры к ИЛ-1-Р первого типа и к ЭП-Р (Gui-Quan J., Gutierrez-Ramos J.C. 1995), HJI-lß, и ß-актину (Allen R.D. et al., 1993) для полимеразной цепной реакции были синтезированы согласно структуре описанной вышеуказанными авторами. ß-актин использовался в качестве внутреннего контроля для стандартизации и выравнивания результатов полуколичественного анализа исследуемых образцов ДНК. Для проведения амплификации ДНК в каждую пробирку добавляли по 5мкл 10-кратного буфера для Taq ДНК-полимеразы, 2 мкл 100 Мм раствора MgCl2, 2 мкл смеси 8 Мм динуклеотидтрифосфатов (Медиген, Новосибирск), 1 мкл Taq ДНК-полимеразы (5 ед/мкл) (Promega, USA), по 2 мкл смеси соответствующих праймеров (sense, antisense, 1 о.е./мл), 2 мкл исследуемой ДНК, 34 мкл деионизированной воды (Медиген, Новосибирск). Амплификацию проводили в режиме 30 циклов: 94° - 0,5 мин; 69° - 1 мин; 12° - 1 мин.

4.4. Анализ продуктов амплификации.

Полученные фрагменты кДНК анализировали методом электрофореза в 2% геле агарозы с добавлением 0,00001% бромистого этидия (ВектоДНК-ЭФ, Вектор-Бест, Новосибирск). Для этого 9 мкл каждого образца кДНК, смешивали с 1 мкл 10-кратного буфера для нанесения образцов, состоящего из 50% раствора глицерина, 0,25% раствора бромфенолового синего, 0,25% раствора ксиленцианола. Полученную смесь вносили в карманы геля. Первый карман геля заполнялся 10 мкл раствора фрагментов кДНК (100-1000 п.н.), во второй- вносили отрицательный контрольный образец, представляющий собой реакционную смесь, в которую вместо исследуемой кДНК добавлено соответствующее количество деионизированной воды. Электрофорез проводили в трис-ацетатном буфере при напряжении 15 В/см геля. Полученный фрагмент кДНК соответствующего размера (659 п.н. для HJI-lß, 334 п.н. для ИЛ-1-Р первого типа, 247 п.н. для ЭП-Р и 540 п.н. для ß-актина) выявляли в виде дискретной полосы, соответствующей ожидаемому размеру ампликона, после электрофоретического разделения молекул ДНК. Продукты ПЦР визуализировали в денситометре (Pharmacia-LKB). Полуколичественная оценка результатов проводилась с использованием программы Image Master VDS Software (USA). Результаты выражались в относительных единицах оптической плотности (единицы оптической плотности кДНК цитокина/единицы оптической плотности кДНК ß-актина х 100).

5. Психофизиологические методы.

5.1. Изучение поведения животных в тесте "открытое поле".

ОИП животных оценивали в тесте "открытое поле" (Буреш Я., с соавт., 1991). Для этого использовалась большая прямоугольная камера (100 х 100 см) с пластмассовыми стенками высотой 40 см. Полом служил лист белого пластика, на который черной краской нанесена решётка, делящая поле на 100 (10 х 10)

равных квадратов. Освещение проводилось бестеневой лампой мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 100 см над центром поля. Животное помещалось в угол камеры и регистрировалась его моторная и исследовательская активность в течение 5 минут с интервалом в 1 минуту. Для каждого животного под-считывалось число пересеченных центральных и периферических квадратов, число вертикальных стоек (свободных и с опорой на стенку поля), суммарная горизонтальная и вертикальная двигательная активность. С целью определения степени эмоциональной реактивности регистрировалось число фекальных болюсов. Все эксперименты проводились в период времени с 10 до 14 часов.

6. Морфологические методы.

6. 1. Морфологическое исследование тимуса.

У крыс линий OXYS и Вистар методами световой микроскопии исследовали состояние тимусов, которые взвешивали для расчёта массового индекса (мг/100 г массы тела крысы), фиксировали в жидкости Теллесгшцкого при температуре +4°С и заливали в гистопласт. Серийные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, азуром В, эозином Y. Проводили морфометрию структурных компонентов тимуса методом точечного счета с последующим вычислением абсолютных объемов (Сопгап R.M., Nickelson P.A., 1982).

6.2. Гистологическое исследование сенсомоторной коры больших полушарий головного мозга.

Головной мозг мышей (СВА х С57 B1/6)F1 с высоким и низким уровнем ОИП фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящих концентраций, заливали в парафин и готовили срезы толщиной 5-8 мкм, которые окрашивали по методу Ниссля. Материалом исследования служила сенсомоторная кора больших полушарий головного мозга. В образцах проводили количественный и качественный анализ нейронов в 25 полях зрения.

6.3. Морфологическое исследование форменных элементов крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитарной формулы.

Для приготовления мазка забирали кровь из хвостовой вены мышей (СВА х C57B1/6)F1 с различным уровнем ОИП; фиксировали мазок в 96% этаноле в течение 5 минут; с последующей окраской по методу Романовского-Гимзе. В окрашенных мазках периферической крови проводили подсчет процентного содержания моноцитов, лимфоцитов и нейтрофилов путем регистрации всех встречающихся в поле зрения лейкоцитов раздельно по их принадлежности к тем или иным росткам.

7. Статистическая обработка результатов.

Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием t-критерия Стьюдента (при нормальном распределении изучаемого признака) и парного критерия Манна-Уитни в случае отклонения от нормального распределения (компьютерные программы "Jandel Sigma Plot", "Statistica 6.0"); а также факторного анализа ANOVA в программной среде STATGRAPHICS. Для оценки взаимосвязи между параметрами проводился корреляционный анализ. Различия между группами считались достоверными при уровне значимости р <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Структурно-функциональные особенности ЦНС у животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

Параметры ориентировочно-исследовательского поведения у экспериментальных животных различных видов.

В результате проведенных исследований были охарактеризованы параметры ОИП у мышей линий С57В1/6, Ва1Ъ/с, (СВА х С57В1/6)Р1; крыс Вистар и ОХУ8. Полученные результаты свидетельствуют о том, что мыши линий С57В1/6 и Ва1Ь/с являются оппозитными по проявлению изучаемой поведенческой реакции. При этом мыши линии С57В1/6 характеризуются высоким уровнем ОИП, выражающимся в высокой суммарной двигательной активности в тесте "открытое поле" (290±7) и низкой степенью эмоциональной реактивности (уровень дефекации составлял 1,1±0,3). Мыши линии Ва1Ь/с характеризуются низкими параметрами суммарной двигательной активности (83±7, р<0,01) и высокой степенью эмоциональной реактивности (6,0±09,4; р<0,01) относительно мышей линий С57В1/6.

Аналогичный оппозитный характер поведения в тесте "открытое поле" присущ также крысам Вистар и ОХУ5>. Для крыс ОХУБ характерны низкие показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП. Об этом свидетельствуют сниженные в 2,5 раза, по сравнению с крысами Вистар, показатели горизонтальной и вертикальной двигательной активности животных. Число дефекационных болюсов у крыс ОХУВ в 1,4 раза больше, чем у Вистар, частота проявлений реакции груминга - в 3,4 раза ниже, что свидетельствует о повышенной тревожности этих животных.

Исследование характера поведения мышей (СВА х С57ВУ6)Р1 в тесте "открытое поле" выявило разнородность этих животных по параметрам моторного и исследовательского компонентов ОИП (табл. 1).

Таблица 1

Параметры ОИП мышей (СВА х С57В1/6)П в тесте "открытое поле" (М ± Я!))

Группы Горизонтальная двигательная активность Вертикальная двигательная активность

животных периферическая центральная суммарная свободная с опорой на стенку суммарная

1 188,1±33,7 24,3±6,4 212,4±35,3 4,4±1,4 11,4±5,3 15,9±6,7

2 135,7±26,9* 10,2±ЗД* 145,8±29,9** 1,9±0,4* 4Д±1,7* 5,96±2,2*

3 37,3±13,8* 0,0±0,1* 37,3±13,8* 0,Ш,0* 0,27±0,7* 0,27±0,7*

Примечание: п = 130-160 в каждой группе. 1 - группа животных с высоким уровнем ОИП; 2 - группа животных со средним уровнем ОИП; 3 - группа животных с низким уровнем ОИП. * р<0,05; ** р<0, 01 между группами животных.

Для животных с высоким уровнем ОИП (активный тип поведения) свойственна высокая горизонтальная и вертикальная двигательная активность, отражающие моторный и исследовательский компоненты ОИП соответственно, с пиком горизонтальной двигательной активности на второй минуте тестирования. При этом 99% мышей данной группы характеризуются низким уровнем эмоцио-

нальной реактивности (число дефекационных болюсов за время тестирования составило 0,93±0,2).

Мыши (СВА х С57В1/6)Р1 со средним уровнем ОИП, демонстрировали более низкие показатели моторного и исследовательского компонентов поведения по сравнению с таковыми у животных с активным типом ОИП. При этом максимум двигательной активности мышей наблюдался на 3-ей минуте тестирования. Мыши со средним уровнем ОИП более эмоциональны относительно животных с высоким уровнем ОИП (число дефекационных болюсов за время тестирования -1,74±0,4; р < 0,05 по сравнению с животными первой группы).

Мыши с пассивным типом поведения характеризуются низким уровнем ОИП. Число пересеченных ими периферических квадратов "открытого поля" в 5-7 раз меньше по сравнению с таковым у животных со средним уровнем ОИП; пересечение центральных квадратов поля здесь практически не наблюдалось. Эти животные демонстрировали очень низкие показатели вертикальной двигательной активности; причем характерно полное отсутствие свободных стоек. В то же время, мыши с пассивным типом ОИП отличались высоким уровнем эмоциональной реактивности (число дефекационных болюсов за время тестирования составляет 3,8±0,5; р<0,05 по сравнению со второй группой животных).

Анализ поведения мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с различным уровнем ОИП в процессе онтогенеза (до 14 месяцев) показал сохранение выявленных различий в уровне ОИП, что указывает на стабильность данной поведенческой характеристики для каждой отдельной особи в силу того, что исследовательское поведение является внутренней, биологически детерминированной потребностью, а не просто ситуативным явлением, вызванным внешними обстоятельствами.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что не только генетически разнородные, но и животные с одинаковым генотипом также могут отличаться вариабельностью поведения, причина которой, по всей видимости, кроется в средовых, т.е. внешних по отношению к геному факторах. Следовательно, на формирование определенного стереотипа поведения у отдельного индивидуума, помимо генетических, оказывают влияние эпигенетические факторы, причем значимость генетических факторов в организации реагирования не одинакова у разных особей (КайсаА N. е1 а1., 2005); вследствие чего мы и наблюдаем разнородность ОИП у мышей (СВА х С57В1/6)Б 1.

Структурно-функциональные особенности сенсомоторной коры головного мозга экспериментальных животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

Установлено, что мыши с пассивным типом ОИП, по сравнению с таковыми с активным типом ОИП, характеризуются меньшим количеством нейронов в сенсомоторной коре головного мозга (93,6±16,5 и 133,2±25,5 соответственно; р<0,05); выраженными перицеллюлярными отеками (93,7±23,0 и 69,0±9,4 у мышей с низким и высоким уровнем ОИП соответственно; р<0,05); и наличием групп сжатых клеток. У мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с активным типом поведения помимо большего количества нейронов в сенсомоторной коре, отмечается 16

их гипертрофия с гиперхромией ядер, что отражает повышенную функциональную активность указанных клеток. Полученные результаты свидетельствуют о высокой морфофункциональной пластичности корковых структур ЦНС, обусловленной индивидуально-типологическими особенностями экспериментальных животных.

Экспрессия генов ИЛ-lß, ИЛ-1-Р первого типа, ЭЛ-Р и содержание цито-кинов в лизатах головного мозга животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

Участие в регуляции поведенческих реакций показано для многих про- и противовоспалительных цитокинов, при этом среди провоспалительных цитоки-нов лидирующее место здесь отводится ИЛ-1 (Dunn A.J., 2002, 2006; Dantzer R., Wollman E.E., 2003; Gamero A.M., Oppengeim J.J., 2006 и др.), который не только сам индуцирует повышение температуры, сомногенность, снижает двигательную активность, аппетит, коммуникативное и половое поведение, то есть вызывает симптомы "болезненного поведения", но и вмешивается в продукцию и эффекты других цитокинов в головном мозге (ИЛ-6, ИФН, ПГЕ2 и др.), которые действуют как самостоятельные регуляторы поведения (Kubota Т. et al., 2001; Dunn A.J., 2006; Ader R. 2007 и др.). Учитывая вышеизложенное, представляло интерес оценить экспрессию генов ШТ-lß и рецептора ИЛ-1 (ИЛ-IP) первого типа, посредством которого цитокин реализует свое действие на поведенческие реакции; равно как и содержание этого и других цитокинов в головном мозге животных с различным уровнем ОИП.

Нами выявлены достоверные различия в экспрессии клетками головного мозга мышей (СБА х C57BL/6)F1 с активным и пассивным типами ОИП генов ИЛ-lß, ИЛ-IP первого типа и гена рецептора эритропоэтина (ЭП-Р) (рис. 1-А).

45 40 35 30 25 10

I

4 ОО 350 3DQ 250 20Ü ISO 100 50

*

I Iii

НЛ-lp ИЛ-6

ФНОо. ИФН-f НЛ-1

А Б

Рис. I. Содержание цитокинов в головном мозге мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с различным уровнем ОИП в тесте "открытое поле"

Примечание: А - уровень мРНК ИЛ-1(5 (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора эритропоэтина (3) в головном мозге мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с различным уровнем ОИП. По оси ординат -относительные единицы оптической плотности; Б - содержание цитокинов (пг/мл) в лизатах головного мозга мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с различным уровнем ОИП. ■ - группа животных с высоким уровнем ОИП; □ - группа животных с низким уровнем ОИП; п=18-24 в каждой группе; * - р<0,05 между группами животных.

Что касается такого важного цитокина и гормона как эритропоэтин (ЭП), то главная его функция, несомненно, заключается в стимуляции эритропоэза. В то

же время, ЭП на этапе эмбрионального развития организма стимулирует пролиферацию и дифференцировку клеток головного мозга; а в дальнейшем, на более поздних этапах онтогенеза, он обладает выраженным нейротрофическим, антиги-поксическим и антиапоптотическим эффектом в отношении клеток нервной ткани (Sasaki R., et al., 2000; Erbayraktar S. et al., 2003; Захаров Ю.М., 2007-2009), что не может не сказаться на функциональной активности ЦНС, в том числе и на реализации поведенческих реакций. Для ЭП показана также стимуляция функции мотонейронов коры головного мозга, регулирующих локомоторную активность (Mennini Т. et al., 2006). Доказательством участия эритропоэтина в реализации ОИП у экспериментальных животных служат собственные результаты, свидетельствующие о стимулирующем влиянии экзогенного эритропоэтина на параметры указанной поведенческой реакции у мышей (СВА х С57 B1/6)F1.

Выявлено также различное содержание ряда цитокинов в лизатах головного мозга мышей (СВА х С57 B1/6)F1 с активным и пассивным типами ОИП; причем для последних характерно относительно высокое количество провоспалитель-ных цитокинов (рис. 1Б). В связи с этим обращает на себя внимание тот факт, что именно для провоспалительных цитокинов (ИЛ-1(3, ИЛ-6, ФНОа) показано v ингибирующее влияние на экспрессию гена ЭП-Р в нейронах, астроцитах и мик-роглиальных клетках головного мозга (Nagai A. et al, 2001), что согласуется с представленными выше собственными результатами, свидетельствующими об относительно низком количестве мРНК ЭП-Р у животных с пассивным типом ОИП (рис. 1А).

Следовательно, мыши (СВА х С57 B1/6)F1, различающиеся rjo уровню ОИП, различны также по экспрессии клетками головного мозга генов! ИЛ-ip, ИЛ-1-Р первого типа, ЭП-Р; равно как и по количественному содержанию в мозге цитокинов ИЛ-ip, ИЛ-6, ФНОа и ИНФ-у; что, по всей видимости, играет определенную роль в степени выраженности указанной поведенческой реакции у этих животных.

Функциональные особенности иммунной системы у экспериментальных животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

Клеточный и гуморальный иммунный ответ, пролиферативная активность ИКК у экспериментальных животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

При исследовании функциональной активности иммунной системы у мышей (СВА х C57B1/6)F1 с различным уровнем ОИП выявлены достоверные различия в пролиферативной активности ИКК. При этом животные с активным типом ОИП характеризуются более высокой спонтанной и митогениндуцирован-ной пролиферативной активностью тимоцитов и спленоцитов относительно мышей с оппозитным типом поведения (табл. 2). При исследовании развития первичного гуморального иммунного ответа на Т-зависимый антиген (ЭБ) установлено, что мыши (СВА х C57BL/6)FiC различным уровнем ОИП не имели достоверных различий по числу АОК. В то же время оценка интенсивности развиваемой реакции ГЗТ свидетельствует о превалирующем показателе индекса 18

реакции (ИР) в группе животных с высоким уровнем ОИП над таковым у животных со средним и низким уровнем ОИП (табл. 3).

Таблица2

Пролнферятивнаи активность клеток тимуса и селезенки мышей (СВА х С57В1/6)П с различным уровнем ОИП (МаБР)

Группы животных Спленоцигы (имп/мин) Тимоциты (имп/мин)

спонтанная Кон А-индуци-рованная ЛПС-стимули-рованная спонтанная Кон А-индуци-рованная

1 1611,8*282,4 71938±30854 11551,3±1403 527,8±86,6 12935,2*3684,8

2 609,7±73,9** 39880*10160* 3228,7±396,3** 242,0±77,0** 3109,3±447,1*

Примечание: 1 - группа животных с высоким уровнем ОИП; 2 - группа животных с низким уровнем ОИП. * р<0,05; ** р<0,01 между соответствующими показателями в группах животных с оппозит-ными типами ОИП.

Таблица 3

Гуморальный и клеточный иммунный ответ у мышей (СВА х С57В1/6)И с различным уровнем ОИП

Исследуемый параметр Группы животных (п = 45-50 в группе)

высокий уровень ОИП средний уровень ОИП низкий уровень ОИП

Относительное число АОК (АОК/Ю6) 367±56 347±29 436±53

Число АОК на селезенку 9б300±10б5б 79161±6172 96837±6084

Реакция ГЗТ (ИР %) 80,3±7,4 39,0 ±6,5*» 12,7±2,9**

Масса тимуса (мг) 56,4±8,1 45,0±3,6 37,1±5,0*

Примечание: ИР - индекс реакций; п=25-30 в каждой группе; * р<0,05 по сравнению с аналогичным показателем у животных с высоким уровнем ОИП; ** р<0,01 мезвду соответствующим показателем в группах животных с различным уровнем ОИП.

При этом у мышей (СВА х C57Bl/6)Fi выявлена прямая зависимость между суммарной двигательной активностью, определяющей уровень ОИП, и выраженностью реакции ГЗТ (коэффициент корреляции 0,94; р<0,05); а также обратная зависимость указанных показателей от степени эмоциональной реактивности (коэффициент корреляции - 0,79; р<0,05). Данная зависимость прослеживается также у мышей линий С57В1/6 и Balb/c, у крыс Вистар и OXIS, характеризующихся высокими и низкими параметрами поведения в тесте "открытое поле" соответственно.

Полученные результаты демонстрируют существование тесной связи между особенностями поведения и активностью клеточного звена иммунной системы: чем выше уровень ОИП и ниже степень эмоциональной реактивности, тем более выражена реакция ГЗТ и пролиферативная активность ИКК.

Экспрессия генов ИЛ-lß, ИЛ-1-Р первого типа, ЭП-Р и продукция цитокинов клетками селезенки экспериментальных животных с различным уровнем ориентировочно-исследовательского поведения.

Установлено, что ИКК животных с активным и пассивным типами ОИП, различны по экспрессии генов, синтезу и продукции основных регуляторных цитокинов. Так, в клетках селезенки мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным типом ОИП выявлен относительно высокий уровень мРНК рецептора ИЛ-1 первого типа при относительно низкой экспрессии гена ЭП-Р (рис. 2А).

А Б

Рис. 2. Содержание цитокинов в селезенке мышей (СВА \ C57BL'6)F1 с различным уровнем ОИП в тесте "открытое поле".

Примечание: А - уровень мРНК ИЛ-ip (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора ЭП (3) в селезенке мышей (СВА х C57B1/6)F1 с различным уровнем ОИП в тесте "открытое поле". По оси ординат - относительные единицы оптической плотности; Б - содержание цитокинов (пг/мл) в лиза-тах клеток селезенки мышей (СВА х C57B1/6)F1 с различным уровнем ОИП. ■ - группа животных с высоким уровнем ОИП; а - группа животных с низким уровнем ОИП; п=18-24 в каждой группе; * р<0,05 между группами животных.

Спленоциты указанной группы животных характеризуются также более высоким содержанием провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНОа и ИНФу в их лизатах по сравнению с таковым у мышей с пассивным типом ОИП (рис. 2Б). Принимая во внимание тот факт, что именно ФНОа и ИНФ-у являются одними из ключевых элементов вызываемого БЦЖ иммунного ответа (Беклемишев Н.Д. Суходоева Г.С., 1979; Flynn J.L. et al., 1993; Flesch I.E. et al, 1993 и др.), можно предположить, что высокий уровень реакции ГЗТ у животных с активным типом ОИП обусловлен, в частности, высокой продукцией этих цитокинов ИКК.

Различия в экспрессии изучаемых генов (рис. 3) и продукции цитокинов (рис. 4) у мышей (СВА х C57BI/6)F1 с активным и пассивным типами ОИП выявлены также для моноцитарно-макрофагальных и лимфоидных клеток селезенки. Указанное преобладание экспрессии генов и продукции провоспалительных цитокинов, равно как и относительно низкая экспрессия гена противоспалитель-ного цитокина (ЭП-Р) селезеночными макрофагами мышей с активным типом ОИП, позволяет предположить превалирование у этих животных клеток Ml фенотипа в моноцитарно-макрофагальной фракции спленоцитов (Martinez F.O. et al., 2008; Е.Н. Вассерман с соавт., 2010).

Клетки лимфоидного ряда в составе спленоцитов мышей (СВА х C57B1/6)F1 с пассивным типом ОИП отличаются от таковых у животных с активным типом ОИП более высоким уровнем мРНК ЭП-Р (рис. 3), а также относительно низкой продукцией ИЛ-6, о чем свидетельствует меньшее содержание этого цитокина в их культуральных супернатантах (рис. 4).

Следовательно, клетки селезенки мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным и пассивным типами ОИП характеризуются различной функциональной активно^ стью, определяемой по экспрессии генов ИЛ-1р, рецептора ИЛ-1 первого типа и ЭП-Р, равно как и по продукции ими ряда провоспалительных цитокинов.

Рис. 3. Уровень мРНК ИЛ-10 (1)> рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора эритропоэтива (3) в моноцитарно-макрофагальных (А) и лимфоидных (Б) клетке* селезенки мышей (СВА х С57В1/6)П с различным уровнем ОИП

Примечание: по оси ординат - относительные единицы оптической плотности; ■ - группа животных с высоким уровнем ОИП; □ - группа животных с низким уровнем ОИП; * р<0,05; ** р<0,01 между группами животных.

ИЛ-10

■О

ФНОа

шо

ИФНг ИЛ-1

Рис. 4. Спонтанная продукция цитокинов моноцитарно-макрофагальнымн (А) и лимфоидными (Б) клетками селезенки мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с различным уровнем ОИП (пг/мл)

Примечание: ■ - группа животных с высоким уровнем ОИП; □ - группа животных с низким уровнем ОИП; * р<0,05 между группами животных.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что мыши (СВА х С57В1/6)П с активным и пассивным типами ОИП, различны по параметрам функциональной активности иммунной системы, выражающимися в различной пролиферативной активности, экспрессии генов и продукции цитокинов ИКК; интенсивности развиваемых клеточных иммунных реакций. Учитывая выявленные взаимосвязи между структурно-функциональной организацией ЦНС и функциональной активностью иммунной системы у экспериментальных животных, следующим этапом исследования было изучение влияния стимуляции клеточного и гуморального звеньев иммунной системы на параметры ОИП у экспериментальных животных с различным поведенческим статусом.

Влияние стимуляции гуморального и клеточного звеньев иммунной системы на параметры ориентировочно-исследовательского поведения.

В вопросах, касающихся афферентной организации взаимодействия иммунной и нервной систем, немаловажное значение имеет изучение механизмов ответа мозга на активацию иммунной системы, участия иммуногенных факторов в

регуляции его нормальных физиологических функций. Изучение влияния процесса формирования иммунного ответа на интегральные показатели ВИД, в частности на поведение, является одним из наиболее интересных и актуальных, на наш взгляд, направлений научных исследований в данной области.

Анализ поведения в "открытом поле" мышей (СВА х С57 В1/б)П, с активным и пассивным типами ОИП на пике развития первичного гуморального иммунного ответа на введение Т-зависимого антигена (ЭБ) выявил разнонаправленные изменения параметров указанной поведенческой реакции, характер которых определялся исходным поведенческим статусом животных (рис. 5А). Так, мыши с исходно высоким уровнем ОИП реагируют на введение указанного антигена снижением уровня ОИП. У животных со средним уровнем ОИП, напротив, наблюдается активация изучаемой поведенческой реакции, выражающаяся в стимуляции моторного и исследовательского компонентов ОИП. Анализ поведения в "открытом поле" мышей с низким уровнем ОИП не выявил каких-либо достоверно-значимых изменений параметров данной поведенческой реакции в ответ на введение ЭБ.

250

200 "

150 - *

100 - ■ м

50 " |

0

1 2 3

А Б

Рис. 5. Изменение поведения мышей (СВА х C57B1/6)F1 е различным уровнем ОВД1 при стимуляции клеточного и гуморального иммунного ответа

Примечание. А - суммарная двигательная активность после стимуляции клеточного иммунного ответа вакциной БЦЖ;: Б - суммарная двигательная активность после стимуляции гуморального иммунного ответа введением ЭБ; 1 - высокий уровень ОИП; 2 - средний уровень ОИП; 3 - низкий уровень ОИП; □ - группа контрольных животных; ■ - группа животных, после воздействия антигена. Поведение тестировалось на пике выраженности иммунного ответа; л=25-30 в каждой группе; * р<0,05; ** р<0,01 - по сравнению с контрольной группой.

Развитие клеточного иммунного ответа при введении вакцины БЦЖ у мышей с исходно низким и средним уровнем ОИП сопровождалось стимуляцией моторного и исследовательского компонентов поведения. При этом эффект был выражен тем сильнее, чем ниже был исходный уровень ОИП животных (рис. 5Б). Установлено также, что введение вакцины БЦЖ, стимулирующей клеточное звено иммунной системы, вызывает дозозависимое повышение параметров ОИП крыс OXYS с пассивным типом поведения. Ключевыми элементами вызываемого БЦЖ иммунного ответа являются продуцируемые этими клетками ИНФ-у, ФНОа и ИЛ-12 (Беклемишев Н.Д., Суходоева Г.С., 1979; Flynn J.L. et al., 1993; Flesch I.E. et al., 1993 и др.). По всей видимости, указанные цитокины отчасти являются ответственными за выявленные изменения ОИП животных при стимуляции клеточного иммунного ответа.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о том, что стимуляция гуморального и клеточного звеньев иммунной системы сопровожда-. ется изменениями уровня ОИП, характер которых определяется исходным поведенческим статусом животных.

Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на параметры ориентировочно-исследовательского поведения у сингенных животных с активным и пассивным типами поведения.

Как показали представленные выше результаты функциональная активность иммунной системы и, в частности, ее клеточных элементов, связана с уровнем ОИП; в связи с чем представляло интерес исследовать возможность изменения параметров поведения животных трансплантацией ИКК с определенными функциональными характеристиками.

В экспериментах использовались две группы мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным и пассивным типами ОИП. Внутривенное введение спленоцитов, выделенных у мышей-доноров с пассивным типом ОИП сингенным животным с активным типом ОИП сопровождалось достоверным снижением уровня ОИП у мышей-реципиентов. Напротив, трансплантация спленоцитов от доноров, характеризующихся активным типом ОИП сингенным реципиентам с пассивным типом ОИП приводила к достоверном}' повышению у реципиентов уровня данной поведенческой реакции, (табл. 4).

Таблица 4

Параметры ОИП мышей-реципиентов в тесте "открытое поле" после трансплантации неразделенной суспензии спленоцитов (М±ш)

Суммарная двигательная активность животных Вариант трансплантации

1 (п =50) 2 (п =30)

Контрольная группа животных Опытная группа животных Контрольная группа животных Опытная группа животных

Горизонтальная

5 сутки 10.3±5.5 11,8±6,4 115,6±12,6** 99,1±4,6** 160.3±3.2 158,3±17,5 118,3±15.0** 79,4± 13,3*

14 сутки 9,7±5Д 103,3±8Д 210.8±29,3 181,3±20,5 78,3±14,4* 47,4±1,2**

Вертикальная

5 сутки 0,0±0.0 0,6±0,4 10.6±1.8** 10,7±1,7** 12.8±1.1 17,5±2,7 2.6±0.7** 2,6±0,7"

14 сутки 0,0±0,0 8,4±1,2** 20.0±0.8 16,8±5,1 1.8±1,2** 1,2±0,7**

Примечание: вариант трансплантации 1 - доноры с активным типом ОИП, реципиенты е пассивным типом ОИП; вариант трансплантации 2 - доноры с пассивным типом ОИП, реципиенты с активным типом ОИП. Контрольная группа животных - доноры и реципиенты с одинаковым уровнем ОИП, соответствующим ОИП реципиентов. В числителе и знаменателе приведены результаты двух повторяющихся серий экспериментов, выполненных на разных животных и в разное время.* р<0,05, ** р<0,01 между соответствующими показателями в контрольной и опытной группах животных.

При перекрестной трансплантации спленоцитов у мышей-реципиентов наблюдались разнонаправленные изменения как моторного так и исследовательского компонентов ОИП, сохраняющиеся в течение двух недель после введения

ИКК. В то же время трансплантация клеток селезенки не сопровождалась изменением поведения в случае, если донор и реципиент относились к одинаковому типу ОИП (контрольные группы животных).

Таким образом, установлено, что при перекрестной трансплантации иммуно-компетентных клеток с определенными функциональными характеристиками между сингенными животными с активным и пассивным типами ОИП наблюдается направленное изменение параметров ОИП реципиентов.

Влияние трансплантации моноцитарно-макрофагалытх клеток селезенки на функциональную активность нервной и иммунной систем у экспериментальных животных.

Трансплантация суспензии прилипающих к пластшсу спленоцитов, состоящей преимущественно из клеток макрофагального ряда (86-92% от общего числа прилипших к пластику клеток), от мышей-доноров (СВА х С57В1/6)Р1 с высоким уровнем ОИП сингенным реципиентам с низким уровнем ОИП сопровождалась стимуляцией у последних моторного и исследовательского компонентов ОИП, выражающейся в достоверном повышении параметров горизонтальной и вертикальной двигательной активности в тесте "открытое поле". В случае если донорами служили мыши с низким уровнем ОИП, а реципиентами — таковые с высоким уровнем ОИП, наблюдалась обратная реакция; а именно - снижение показателей ОИП реципиентов (табл. 5).

Таблица 5

Параметры ОИП мышей-реципиентов после трансплантации спленоцитов моноцитарно-макрофагального ряда (\liSD)

Группы реципиентов Горизонтальная двигательная активность Вертикальная двигательная активность

периферическая центральная суммарная свободная с опорой на стенку суммарная

Контроль 1 (п- 80) 12,7±5,8 0,0*0,0 12,7±5,8 0,0*0,0 0,27*0,7 0,27±0,7

Опыт 1 (п = 80) 67,7±27,9** 3,2±2,8** 70,9±29,9** 0,9*0,8** 4,)±4,0** 4,96±5,0**

Контроль 2 (п=90) 188,1*33,7 24,3±6,4 212,4±35,3 4,4±1,4 11,4±6,6 15,9±9,2

0пыт2(п = 90) 93,9±26,5** 6,6±5,7** 100,«29,9** 2,4±1,0* 6,1±1,8* 8,4±1,8*

Примечание: контроль 1 - доноры и реципиенты с низким уровнем ОИП; опыт ! - доноры с высоким уровнем ОИП, реципиенты с низким уровнем ОИП; контроль 2 - доноры и реципиенты с высоким уровнем ОИП; опыт 2 - доноры с низким уровнем ОИП, реципиенты с высоким уровнем ОИП. Приведены результаты трех повторяющихся серий экспериментов. * р<0,05; ** р<0,01 между контрольными и опытными группами животных.

При трансплантации клеток системы мононуклеарных фагоцитов наблюдались также разнонаправленные изменения степени эмоционального напряжения мышей-реципиентов, регистрируемой по числу фекальных болюсов: снижение у реципиентов с пассивным типом ОИП (4,7±1,4 и 2,5±1,6 в контрольной и опытной группах животных соответственно; р<0,05) и повышение у реципиентов с активным типом ОИП (0,5±0,8 и 3,6±1,4; р<0,05). В контрольных группах животных, где доноры и реципиенты характеризовались одинаковым типом ОИП, равно как и аналогичной функциональной активностью ИКК, параметры ОИП при трансплантации указанных клеток достоверно не изменя-

лись. Тот факт, что подобные изменения параметров ОИП были получены при трансплантации неразделенной суспензии спленоцитов, свидетельствует о том, что клетки системы мононуклеарных фагоцитов играют в механизмах направленного изменения уровня ОИП при трансплантации ИКК существенную роль.

Модуляция параметров поведения мышей-реципиентов сопровождалась изменениями уровней мРНК цитокинов в клетках головного мозга: повышение уровня ОИП происходило на фоне снижения уровня мРНК ИЛ-1Р и повышения уровня мРНК ИЛ-1-Р и ЭП-Р; снижение уровня ОИП при обратном варианте трансплантации сопровождалось противоположными изменениями экспрессии генов указанных цитокинов (рис. 6), что свидетельствует о влиянии спленоцитов макрофагального ряда на показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП и экспрессию генов цитокинов в клетках головного мозга.

ISO 160 wo 120 100 80 60 40 20 А 1 ЕЖ 11 ГШ 120 100 SO « ■ 40 20 ■ rf --, Б

1 2 3 1 2 S

Рис. 6. Уровень мРНК ИЛ-lß (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора эритропоэтина (3) в клетках головного мозга мышей-реципиентов с различным исходным уровнем ОИП после трансплантации спленоцитов моноцитарно-макрофагального ряда

Примечание'. А - доноры с активным типом ОИП, реципиенты с пассивным типом ОИП; Б - доноры с пассивным типом ОИП, реципиенты с активным типом ОИП. По оси ординат - относительные единицы оптической плотности, а - контрольная группа животных (доноры и реципиенты с одинаковым уровнем ОИП, соответствующим уровню ОИП реципиента); опытная группа животных (доноры и реципиенты с оппозитным типом ОИП); п=15—18 в каждой группе; * р<0,05; ** р<0,01 между контрольными и опытными группами животных.

При оценке функциональной активности иммунной системы мышей-реципиентов после трансплантации спленоцитов моноцитарно-макрофагального ряда выявлены изменения со стороны активности ее клеточного звена: наблюдалось усиление реакции ГЗТ в случае, если донорами служили животные с высоким уровнем ОИП, и снижение высоты реакции при трансплантации клеток от доноров с низким уровнем ОИП (табл. 6). Установленные различия в синтезе и продукции цитокинов селезеночными макрофагами мышей (СВА х C57B1/6)F1 с высоким и низким уровнем ОИП, позволяющие предположить превалирующее содержание в моноцитарно-макрофагальной фракции спленоцитов животных с активным типом поведения клеток с М1 фенотипом, интегрированных в клеточный Thl ответ. Эти клетки, посредством продуцируемых ими провоспалительных цитокинов IL-1, TNF-a, IL-12 и IFN-y потенцируют развитие Th0 клеток в Thi клетки (E.H. Вассерман с соавт., 2010), ответственные за индукцию гиперчувствительности замедленного типа, чем можно объяснить продемонстрированное повышение

интенсивности реакции ГЗТ у реципиентов после трансплантации указанных клеток.

Таблица 6

Гуморальный и клеточный иммунный ответ у мышей-реципиентов с различным уровнем ОИП после трансплантации спленоцитов моноцитарно-макрофагального ряда

(\liSD; п = 30-34)

Исследуемый показатель Вариант трансплантации

1 2

Контрольная группа животных Опытная группа животных Контрольная группа животных Опытная группа животных

Относительное число АОК (АОКЛО6) 85,3±131,4 425,5±209,7 410,6*186,5 463,3*193,2

Число клеток селезенки /Ю6 250,0±94,0 265,0±63,0 167,9*23,0 179,2±21,8

Абсолютное число АОК 87190,7±8117,0 121981,0±37438 68062,5*29220,7 87147,3*41051,1

Реакция ГЗТ (ИР - %) 14,3±8,4 45,9±17,6* 77,2±16,1 34,8*12,9*

| Примечание: вариант трансплантации 1 - доноры с высоким уровнем ОИП, реципиенты с низким уров-| нем ОИП; вариант трансплантации 2 - доноры с низким уровнем ОИП, реципиенты с высоким уровнем ОИП. Контрольная группа животных - доноры и реципиенты с одинаковым уровнем ОИП. * р<0,01 \ между соответствующими показателями в контрольной и опытной группах животных.

| Снижение высоты реакции ГЗТ при трансплантации макрофагальных клеток селезенки мышей с пассивным типом ОИП, продуцирующих низкое количество про-воспалительных цитокинов, может быть следствием действия других монокинов, в . частности ПГЕ2, продуцируемых этими клетками, и обладающих ингибирующим действием на иммунный ответ. Изменение баланса нейромедиаторных систем головного мозга в сторону усиления активности серотонинергической системы, со; провождающей снижение ОИП, также может посредством активации гипоталамо-| гипофизарно-надпочечниковой системы с последующим выбросом гормонов над-I почечников в кровь, привести к снижению интенсивности клеточного иммунного ответа.

| При перекрестной трансплантации моноцитарно-макрофагальной фракции

спленоцитов выявлены также разнонаправленные изменения в экспрессии генов цитокинов в клетках селезенки мышей-реципиентов с различным уровнем ОИП I (рис.7). Так, в случае если донорами были животные с высоким уровнем ОИП, в I спленоцитах реципиентов наблюдалось снижение уровня мРНК ИЛ-1Р и повыше-I ние уровня мРНК ЭП-Р; при обратном варианте трансплантации, когда донорами I служили мыши с низким уровнем ОИП в клетках селезенки реципиентов выявлено I повышение уровня мРНК ИЛ-1 (3 и снижение уровня мРНК ЭП-Р.

При перекрестной трансплантации макрофагальных клеток селезенки регистри-( ровались также разнонаправленные изменения пролиферативной активности ИКК мышей-реципиентов: увеличение спонтанной пролиферативной активности тимоцитов и снижениеЛПС-стимулированной активности спленоцитов у реципиентов с исходно низким уровнем ОИП. Аналогичные, но противоположные по : направленности изменения пролиферативной активности указанных клеток вы-^ явлены у мышей с исходно высоким уровнем ОИП.

! 26

1

__ ___ 180) 4

. А mH М Щ Б I

?Ли.Ш 11llJii

1:1 12 3

I Рис. 7. Уровень иРНК ИЛ-1р (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора эритропоэтина

5 (3) в клетках селезенки мышей-реципиентов с различным исходным уровнем ОИП после

| трансплантации спленоцитов моноцитарно-макрофагального ряда

I Примечание: А - доноры с высоким уровнем ОИП, реципиенты с низким уровнем ОИП; Б - доноры

¡ с низким уровнем ОИП, реципиенты с высоким уровнем ОИП. По оси ординат - единицы отпиче-

¡ ской плотности. □ - контрольная группа животных (доноры и реципиенты с одинаковым уровнем I

j ОИП, соответствующим уровню ОИП реципиента); ■ - опытная группа животных (доноры и реци-

I пиенты с олпозитным типом ОИП; п=15—18 в каждой группе; * р<0,05; ** р<0,01 между контроль- i ными и опытными группами животных. |

i Вышеизложенное указывает на существенную роль клеток системы moho- I

i нуклеарных фагоцитов в механизмах направленного изменения параметров ОИП |

{ у животных при трансплантации ИКК. j

j ' I

I Влияние трансплантации клеток непршипающей к пластику фракции спле-

\ ноцитов на функциональную активность иммунной и нервной систем у экспе- j

I рименталъных животных. j

J Трансплантация клеток неприлипающей к пластику фракции спленоцитов,

] состоящей преимущественно из клеток лимфоидного ряда (88-93% от общего ¡

¡ числа неприлипших к пластику клеток), от доноров с высоким уровнем ОИП

) реципиентам с низким уровнем ОИП сопровождалась у последних стимуляцией

i только исследовательского компонента поведения. В случае если донорами слу-

I жили мыши с низким уровнем ОИП, а реципиентами - таковые с высоким уров-

' нем ОИП, наблюдалась обратная реакция - снижение параметров вертикальной

j двигательной активности, равно как и числа посещений животными централь-

I ных квадратов поля.

¡ В контрольных группах животных, где доноры и реципиенты характеризо-

! вались одинаковым уровнем ОИП, параметры поведения после трансплантации

I указанных клеток селезенки достоверно не изменялись (табл. 7).

j Модуляция исследовательского компонента ОИП при трансплантации лим-

j фоидных клеток селезенки сопровождалась разнонаправленными изменениями

| уровня мРНК ЭП-Р в клетках головного мозга мышей - реципиентов: возраста-

I ние параметров вертикальной двигательной активности происходило на фоне

| повышения экспрессии указанного гена и снижения уровня мРНК ИЛ-1Р

1 первого типа; снижение указанных параметров поведения реципиентов регистри-

' ровалось на фоне снижения уровня мРНК ЭП-Р (рис. 8).

I I

i

i ____________i

А

I I I

i ; s

Таблица 7

Параметры ориентировочно-исследовательского поведения мышей-реципиентов после трансплантации неприлипающих к пластику спленоцитов (М±80)

Группы реципиентов Горизонтальная двигательная активность Вертикальная двигательная активность

периферическая центральная суммарная свободная с опорой на стенку суммарная

Контроль I (п = 72) 18,1±9,1 0,6Н),1 18,7±9,2 о,о±о,о 0,4±0,2 0,4±0,2

Опыт 1 (п = 81) 23,5±16,1 2,6±1,6 26Д±17,4 1,2±Д6** 2,1±0,7** 3,2±1,2**

Контроль 2 (п = 61) 72,6*29,2 12,6±6,7 80,6±34,4 2,7±2,0 4,3±1,8 6,9±3,8

Опыт 2 (п = 90) 80,1±33,3 8,1±7,1* 93,4±37,8 0,<ЭД8* 9i2.fi* 2,5:12,6*

Примечание: контроль 1 - доноры и реципиенты с низким уровнем ОИП; опыт 1 - доноры с высоким уровнем ОИП, реципиенты с низким уровнем ОИП; контроль 2 - доноры и реципиенты с высоким уровнем ОИП; опыт 2 - доноры с низким уровнем ОИП, реципиенты с высоким уровнем ОИП. Приведены результаты трех повторяющихся серий экспериментов. * р<0,05; ** р<0,01 между соответствующими показателями в контрольной и опытной группах животных.

1М -100 А 60 ■; 50 - Б

80 1 « ** г 5 ■10 20 | № ■( 0 4-- 1 1 1 ** 3

Рис. 8. Уровень мРНК ИЛ-1р (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и ЭП-Р (3) в клетках головного мозга мышей-реципиентов с различным исходным уровнем ОИП после трансплантации неприлипающих к пластику спленоцитов

Примечание'. А - доноры с активным типом ОИП, реципиенты с пассивным типом ОИП. Б -доноры с пассивным типом ОИП, реципиенты с активным типом ОИП. По оси ординат - относительные единицы оптической плотности. □ - контрольная группа животных (доноры и реципиенты с одинаковым уровнем ОИП, соответствующим уровню ОИП реципиента); ■ - опытная группа животных (доноры и реципиенты с оппозитными типами ОИП); п=15—18 в каждой группе;* р<0,05; ** р<0,01 между контрольными и опытными группами животных.

При оценке иммунного ответа на введение ЭБ мышей-реципиентов после трансплантации клеток селезенки лимфоидного ряда выявлены определенные изменения со стороны активности его гуморального звена. Так, наблюдалось достоверное увеличение количества АОК (как относительное, так и абсолютное) в случае, если донорами служили животные с высоким уровнем ОИП; при обратном варианте трансплантации, когда донорами служили мыши с низким уровнем ОИП, достоверных различий между контрольной и опытной группами животных по указанным показателям не выявлено (табл. 8).

При перекрестной трансплантации указанных клеток между мышами с оппозитными типами ОИП регистрировались также определенные изменения пролиферативной активности ИКК животных-реципиентов. Так, у мышей с пассивным типом ОИП достоверно повышались спонтанная пролиферативная

активность тимоцитов и митоген - индуцированная активность спленоцитов; у

Таблица 8

Показатели гуморального и клеточного иммунного ответа у мышей-реципиентов е различным уровнем ОИП после трансплантации непрнлипающих к пластику спленоцитов (М±81); п = 24-30)

Исследуемый показатель Вариант трансплантации

1 2

Контрольная группа животных Опытная группа животных Контрольная группа живошых Опытная группа животных

АОК/Ю6 263,7±131,5 604,3±176,3** 420,7*154,8 319,4±113,7

Число клеток селезенки /106 196,4±61,6 240,2±71,2 175,6±62,3 180,1±68,8

Абсолютное число АОК 47655,0±27033,9 125017,9±27763** 78700,6±50336,2 56201,1±25369,1

Реакция ГЗТ (ИР - %) 20,8±18,0 24,3±14 38,4±22,2 35,4±18,5

Примечание. Вариант трансплантации 1 - доноры с высоким уровнем ОИП, реципиенты с низким уровнем ОИП; вариант трансплантации 2 - доноры с низким уровнем ОИП, реципиенты с высоким уровнем ОИП. Контрольная группа животных - доноры и реципиенты с одинаковым уровнем ОИП, соответствующим уровню ОИП реципиента. * р<0,05; ** р<0,01 между соответствующими показателями в контрольной и опытной группах животных.

реципиентов с активным типом ОИП наблюдалось повышение спонтанной пролиферативной активности тимоцитов и снижение Кон А-индуцированной пролиферативной активности спленоцитов.

При трансплантации лимфоидных клеток селезенки выявлены также изменения в экспрессии генов цитокинов в спленоцитах мышей-реципиентов. Так, в случае если донорами были животные с активным типом ОИП, в спленоцитах реципиентов наблюдалось снижение уровня мРНК ЭП-Р. При обратном варианте трансплантации, в клетках селезенки реципиентов выявлено снижение экспрессии гена ИЛ-1Р первого типа (рис. 9).

|||

1 2 3

Рис. 9. Уровень мРНК ИЛ-1Р (1), рецептора ИЛ-1 первого типа (2) и рецептора

эритропоэтина (3) в клетках селезенки мышей-реципиентов с различным типом ОИП после трансплантации непрнлипающих к пластику спленоцитов

Примечание: А - доноры с активным типом ОИП, реципиенты с пассивным типом ОИП; Б - доноры с пассивным типом ОИП, реципиенты с активным типом ОИП. По оси ординат - относительные единицы оптической плотности, о - контрольная группа животных (доноры и реципиенты с одинаковым типом ОИП, соответствующим типу ОИП реципиента); ■ - опытная группа животных (доноры и реципиенты с оппозитными типами ОИП); п=15-18 в каждой группе; * р<0,05; ** р<0,01 между контрольными и опытными группами животных.

Как указывалось выше, лимфоидные клетки селезенки мышей с активным типом ОИП отличались от таковых у животных с оппозитным типом поведения высокой продукцией ИЛ-6, фактора дифференцировки В-клеток, способствую-

щего созреванию В-лимфоцитов в антителопродуцирующие клетки. Трансплантация клеток, с высокой продукцией ИЛ-6 может объяснить описанные выше изменения в интенсивности гуморального иммунного ответа у реципиентов. Последнее может быть связано также со снижением после трансплантации экспрессии гена ЭП-Р в селезенке реципиентов и, следовательно, некоторым ослаблением супрессирующего влияния эндогенного эритропоэтина на гуморальный иммунный ответ. Изменение экспрессии гена ЭП-Р в селезенке и в головном мозге животных-реципиентов, может также являться одной из причин выявленных изменений показателей их вертикальной двигательной активности; поскольку введение экзогенного эритропоэтина, как установлено, оказывало стимулирующее влияние на исследовательский компонент поведения. Повышение параметров вертикальной двигательной активности у мышей-реципиентов может быть связано в том числе и с активацией под действие ИЛ-6 дофаминергической системы головного мозга (га1стап Б, 1994; Бипп АЛ., 2006). Косвенным подтверждением этому служат регистрируемые стимуляция пролиферативной активности клеток тимуса и селезенки данной группы реципиентов, равно как и стимуляция гуморального иммунного ответа (фу У.Н. е! а1., 2005; Девойно Л.В., Идо-^ ва Г.В., Альперина Е.Л., 2009).

Таким образом, клетки селезенки, попадая в организм сингенного, но отличающегося по психофизиологическим показателям реципиента, вызывают у последнего изменения функциональной активности ЦНС, о чем свидетельствуют изменение ОИП и экспрессии генов цитокинов в клетках головного мозга, на фоне изменения функциональной активности иммунной системы, проявляющейся в модуляции пролиферативной активности клеток тимуса и селезенки, экспрессии генов цитокинов в клетках селезенки и интенсивности иммунного ответа. Можно полагать, что цитокины, продуцируемые ИКК, при трансплантации последних выступают в качестве триггерных факторов, приводящих к изменениям функциональных параметров ЦНС у мышей-реципиентов. По всей видимости, мозг реагирует на изменение цитокинового профиля на периферии и отвечает на этот стимул изменением как локального синтеза цитокинов, так и активности нейромедиаторных систем (ОагЛгег Я. 2004, 2006, 2007; Билл А.Г., 2006; Жеп А., Bhatnagar Б., 2007; Бап^огс! Ь.Б. Й а!., 2007 и др.), отражением чего и являются регистрируемые изменения параметров ОИП. Учитывая двусторонний характер нейроиммунных взаимодействий, наблюдаемое в собственных исследованиях изменение показателей функциональной активности иммунной системы реципиентов после трансплантации ИКК может быть следствием как непосредственного воздействия трансплантируемых клеток и продуцируемых ими цитокинов, так и опосредованного влияния ЦНС.

Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на характерные проявления функциональной активности нервной и иммунной систем у животных в состоянии хронической зависимости от морфина.

Выявленные взаимосвязи между показателями функциональной активности иммунной системы и ЦНС у животных с различным типом ОИП, равно как и закономерности влияния ИКК на параметры поведения у экспериментальных жи-30

вотных послужили обоснованием для предпринятых попыток коррекции поведенческих и иммунологических расстройств, возникающих при синдроме хронической зависимости от морфина методом трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками. Выраженность эффектов морфина на поведенческие реакции у животных, как известно, в значительной мере обусловлена их генетическими особенностями (СаЬЛ в., 1993; ВеггейЫ е1 а1., 1994; БшЬг Т. е! а1., 1998 и др.). В настоящем исследовании установлено, что изменения поведения при хроническом воздействии морфина у генетически однородных животных также могут быть неоднозначны; причем характер этих изменений определяется индивидуально-типологическими особенностями ОИП. Хроническая морфиновая зависимость была сформирована у двух групп мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с активным и пассивным типами ОИП. Установлено, что потребление морфина (мг) указанными группами животных, как среднесуточное (1,01±0,2 и 1,2±0,3 соответственно; р>0,05), так и общее за курс (22,85±5,3 и 26,16±6,7 соответственно; р>0,05) было примерно одинаковым. Тем не менее, наблюдались существенные различия в изменении параметров поведения: у животных с пассивным типом ОИП регистрировались стимуляция моторного и исследовательского компонентов поведения, снижение уровня эмоциональной реактивности (число дефекационных болюсов за время тестирования составило 4,8±0,9 и 2,2±1,9 в контрольной и опытной группах соответственно, р<0,05); у мышей с активным типом ОИП достоверных изменений указанных показателей не выявлено (табл. 9).

Таблица 9

Параметры ОИП мышей (СВА х С57В1/б)Р1 с различным исходным поведенческим статусом при синдроме хронической зависимости от морфина и после трансплантации иммунокомпетентных клеток (М±50; п = 12-19)

Группы животных Суммарная горизонтальная двигательная активность Суммарная вертикальная двигательная активность

мыши с активным типом ОИП мыши с пассивным типом ОИП мыши с активным типом ОИП мыши с пассивным типом ОИП

Контроль 270,9±41Д 243±7Д 21Д±3,2 2,7±2Д

Морфинисты 245,6±28,1 138,3±37,4» 23,3±4,6 8,8±3,8*

Трансплантация 1 259,8±473 412*9,1 24,3±1,2 2,9±1,2

Трансплантация 2 247,2i31,3 31,2±8,5 24,3±1,2 1,9±1,2

Примечание: трансплантация 1 - трансплантация неразделенной суспензии спленоцитов; 2 - трансплантация суспешии спленоцитов моноцигарно-макрофагальной ряда. * р<0,05 по сравнению с контрольной группой животных.

Модуляция локомоторной активности при синдроме хронической зависимости от морфина связана с изменением активности дофамин - и серотонинергиче-ских систем мозга (Murphy N.P. et al., 2001; Saurer T.B. et al., 2003 и др.). Различный уровень их активности у животных с высоким и низким уровнем ОИП (StohrT. Et al., 1998; Доведова ЕЛ., Монаков М.Ю., 2000 и др.), может служить причиной выявленного неоднозначного действия морфина на мышей с различным типом поведения. Вместе с тем, установленный в собственных исследованиях различный уровень содержания в клетках головного мозга этих животных цитокинов, в частности ИЛ-lß, может влиять как на активность нейромедиаторных систем головно-

го мозга (Каш-Б. й а!., 1998; Оипп А1, 1988, 2006 идр.), так и на поведенческие эффекты указанного наркотического вещества; поскольку его хроническое воздействие сопровождается достоверным снижением уровня мРНК ИЛ-1 (3 в клетках головного мозга мышей с пассивным типом ОИП (рис. 10). По всей видимости, общий нейромедиаторный и цитокиновый фон организма, на который попадает воздействие морфина и определяет выраженность его поведенческих эффектов.

12 12

Рис. 10. Уровень мРНК Ш1-1р в клетках головного мозга (А) и селезенки (Б) мышей (СБА х С57В1/6)Р1 с синдромом хронической зависимости от морфина и после трансплантации клеток моноцитарно-макрофагальной фракции спленоцитов от здоровых доноров

Примечание. По оси ординат - единицы оптической плотности; по оси абсцисс - животные с активным типом ОИП (1), животные с пассивным типом ОИП (2). □ - контрольная группа животных; заштрихованные столбики - животные с синдромом хронической зависимости от морфина; животные после трансплантации ИКК. * р<0,05 по сравнению с контрольной группой животньк.

У всех животных в состоянии хронической морфиновой зависимости наблюдалось значительное (более чем на 40%) подавление гуморального иммунного ответа, выражающееся в уменьшении количества АОК селезенки (табл. 10) на фоне снижения в спленоцитах экспрессии гена ИЛ-1 (рис. 10).

Таблица 10

Гуморальный иммунный ответу мышей (СБА х С57В1/6)Р1 с синдромом хронической зависимости от морфина и после трансплантации клеток моноцитарно-макрофагальной фракции спленоцитов (\1iSD; п =ч 12-15)

Группы Число АОК/106 ядросодер- Число клеток Число АОК

животных жащих клеток селезенки селезенки/106 на селезенку

Контроль 1121,2±172,8 135,7±34,7 148533,5±21109,0

Морфинисты 675,8±131,7* 163,5±31,5 108724±21312*

Трансплантация 1159,6±238,2 123,0±17,4 142165,8±34073

Примечание: * р<0,01 по сравнению с контрольной группой животных.

Трансплантация спленоцитов от здоровых доноров сингенным реципиентам с синдромом хронической зависимости от морфина приводила к коррекции у последних вышеуказанных поведенческих и иммунологических сдвигов, при условии, что доноры и реципиенты характеризовались одинаковым исходным типом ОИП (табл. 9, 10). В группе животных с синдромом хронической зависимости от морфина, которым трансплантация ИКК не была проведена, указанные выше поведенческие и иммунологические расстройства сохранялись. Аналогичные результаты были получены при трансплантации спленоцитов макрофагального ряда (табл. 9, 10; рис. 10), что, с одной стороны, подтверждает сделанный ранее вывод о существенной роли этих клеток в механизмах

реализации поведения; а с другой, указывает на определенную роль макрофагов в патогенезе наркотической зависимости.

Представленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что характер изменений параметров ОИП при синдроме хронической зависимости от морфина у животных определяется их исходным типом поведения. Наблюдаемые при этом поведенческие сдвиги, равно как и супрессия гуморального иммунного ответа, снижение пролиферативной активности спленоцитов и экспрессии ими и клетками головного мозга гена ИЛ-10, могут быть скорректированы трансплантацией ИКК с определенными функциональными характеристиками, соответствующими таковым у здоровых животных. Представленные результаты позволяют рассматривать трансплантацию ИКК в качестве возможного перспективного биологического метода терапии наркотической зависимости.

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что нейро-иммунные взаимодействия лежат в основе формирования индивидуально-типологических особенностей поведения экспериментальных животных. Выявленные взаимосвязи между показателями функциональной активности иммунной и центральной нервной систем у животных с различным типом ОИП, равно как и закономерности изменения поведения при активации иммунной системы и при трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками позволяют расширить имеющиеся представления об интегративном взаимодействии двух важнейших регуляторных систем организма, выполняющих в организме базисные функции по адаптации к изменяющимся условиям внешней и внутренней среды и открывают новые перспективы в профилактике и коррекции психосоматических расстройств, расширяя возможности как иммунокоррекции, в том числе посредством коррекции поведенческих функций; так и регуляции поведения путем воздействия на функциональные параметры иммунной системы.

ВЫВОДЫ

1. Мыши (СВА х С57В1/6)Р1 с активным и пассивным типами ОИП отличаются структурно-функциональными параметрами ЦНС, о чем свидетельствуют относительно низкое количество нейронов в сенсомоторной коре головного мозга, низкая экспрессия гена ЭП-Р, высокая экспрессия генов ИЛ-1Р, ИЛ-1-Р первого типа в клетках головного мозга и превалирующее содержание в их лиза-тах цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНОа, ИНФу, регистрируемые у животных с пассивным типом ОИП по сравнению с аналогичными показателями у мышей с активным типом ОИП.

2. Мыши (СВА х С57В1/6)Р1 с активным и пассивным типами ОИП характеризуются различной функциональной активностью ИКК, о чем свидетельствуют: более высокая спонтанная и митогениндуцированная пролиферативная активность клеток тимуса и селезенки у животных с активным типом ОИП по сравнению с таковыми у мышей с пассивным типом ОИП; а также различия в синтезе и продукции ряда цитокинов, оцениваемые по экспрессии генов, содержанию цитокинов в лизатах и культуральных супернатантах ИКК. У мышей с активным типом ОИП относительно животных с оппозитным типом поведения

регистрируется низкий уровень мРНК ЭП-Р при более высоком уровне мРНК ИЛ-1-Р первого типа в спленоцитах и мРНК ИЛ-lß в их моноцитарно-макрофагальной фракции. В лизатах спленоцитов мышей с активным типом ОИП установлено более высокое содержание цитокинов ИЛ-6, ФНОа и ИНФу, равно как и ИЛ-lß, ИЛ-6, ФНОа в кулыуральном супернатанте клеток их моно-цитарно-макрофагальной фракции.

3. Выявлена тесная взаимосвязь между активностью клеточного звена иммунной системы и уровнем ОИП, демонстрируемая соответствием интенсивности реакции ГЗТ и уровня ОИП, наблюдаемым у мышей линий Balb/c, С57В1/6, (СВА х C57BL/6)F1 и у крыс Wistar и OXIS, а также дозозависимым повышением уровня ОИП у животных с пассивным типом поведения при стимуляции клеточного звена иммунной системы.

4. Трансплантация неразделенных клеток селезенки мышей (СВА х C57B1/6)F1 от доноров, характеризующихся пассивным типом ОИП, сингенным реципиентам с активным типом ОИП приводит к снижению уровня ОИП реципиентов; трансплантация спленоцитов от доноров, характеризующихся активным типом ОИП сингенным реципиентам с пассивным типом ОИП приводит к повышению у реципиентов уровня данной поведенческой реакции, что свидетельствует о влиянии периферических ИКК на параметры ОИП.

5. Трансплантация моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки от мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным типом ОИП сингенным реципиентам с пассивным типом ОИП приводит у реципиентов к повышению параметров вертикальной и горизонтальной двигательной активности на фоне снижения уровня мРНК ИЛ-lß и повышения уровня мРНК ИЛ-1-Р и ЭП-Р в клетках головного мозга. Трансплантация клеток от доноров с пассивным типом ОИП реципиентам с активным типом ОИП сопровождается противоположными изменениями параметров ОИП и экспрессии указанных генов цитокинов в клетках головного мозга, что свидетельствует о влиянии клеток системы мононуклеарных фагоцитов на показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП и экспрессию генов цитокинов в клетках головного мозга.

6. Трансплантации моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки между сингенными животными с оппозитными типами ОИП приводит к разнонаправленным изменениям функциональных показателей иммунной системы реципиентов, о чем свидетельствуют повышение спонтанной пролиферативной активности тимоцитов, снижение ЛПС-стимулированной пролиферативной активности спленоцитов, повышение уровня мРНК ЭП-Р, снижение уровня мРНК ИЛ-lß в клетках селезенки и усиление реакции ГЗТ в случае, если донорами служили мыши с активным типом ОИП. При обратном варианте трансплантации, когда донорами выступали животные с пассивным типом ОИП, а реципиентами-мыши с активным типом ОИП, у последних регистрировались противоположные по направленности изменения указанных параметров.

7. Трансплантация неприлипающих к пластику спленоцитов с превалирующим содержанием клеток димфоидного ряда от мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным типом ОИП сингенным реципиентам с пассивным типом ОИП приводит у реципиентов к усилению вертикальной двигательной активности на фоне 34

повышения уровня мРНК ЭП-Р и снижения уровня мРНК ИЛ-1-Р в клетках головного мозга; трансплантация указанных клеток от доноров с пассивным типом ОИП реципиентам с активным типом ОИП сопровождается снижением параметров вертикальной двигательной активности на фоне снижения уровня мРНК ЭП-Р в клетках головного мозга, что свидетельствует о влиянии указанных клеток на параметры исследовательского компонентов ОИП и экспрессию гена ЭП-Р в клетках головного мозга.

8. Перекрестная трансплантации фракции спленоцитов, состоящей преимущественно из лимфоидных клеток, между сингенными животными с оппо-зитными типами ОИП сопровождается изменением функциональных показателей иммунной системы реципиентов, о чем свидетельствует стимуляция проли-феративной активности клеток тимуса и селезенки, снижение экспрессии гена ЭП-Р в спленоцитах и стимуляция гуморального иммунного ответа, оцениваемого по числу АОК в селезенке в случае, если донорами выступали животные с активным типом ОИП. При обратном варианте трансплантации у реципиентов регистрируется повышение спонтанной пролиферативной активности клеток тимуса, снижение митогениндуцированной пролиферативной активности клеток селезенки, равно как и экспрессии в них гена ИЛ-1-Р.

9. Трансплантация моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки от здоровых сингенных доноров, соответствующих животным в состоянии хронической зависимости от морфина по их исходному поведенческому статусу, приводит у реципиентов к коррекции параметров ОИП до значений, аналогичных здоровым животным на фоне стимуляции гуморального иммунного ответа, о чем свидетельствует повышение числа АОК селезенки, и восстановления сниженной под действием морфина экспрессии гена ИЛ-lß в селезенке и в головном мозге, что подтверждается повышением уровней соответствующих мРНК.

10. Индивидуально-типологические особенности ориентировочно-исследовательского поведения связаны с функциональными характеристиками иммунной системы, клетки которой при трансплантации способны изменять уровень указанного поведения.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Взаимозависимость иммунологических и поведенческих параметров у мышей //Russian J. of Immunology. - 1999. -N4. -Supp 1.1. - P. 319.

2. Markova E.V., Gromykhina N.Yu., Abramov V.V., Kozlov V.A. Dependence of behavior reaction on the initial immune state in mice. Annual of the International Congress ISN1M - 99. Switzerland, Lugano, 1999. - P. 58.

3. Markova E.V., Gromykhina N.Yu., Abramov V.V Kozlov V.A. The peculiarities of the immune status in mice with different level of behavioral reaction // Russian J. of Immunology. - 2000. — V. 5. -Nl.-P. 89-95.

4. Маркова E.B., Громыхина Н.Ю., Абрамов B.B., Козлов В.А. Иммунологические параметры у мышей с различным поведением в тесте «открытого поля» // Иммунология. - 2000. - № 3. -С. 15-18.

5. Маркова Е.В., Короткова H.A., Абрамов В.В., Козлов В.А. Показатели гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа у мышей с различным исходным уровнем поведенческих реакций. Иммунная система: функционирование в норме, при экстремальных экологических воздействиях, при патологии. Тез. докладов научной конференции. - Новосибирск, 2000. - С. 74-75.

6. Абрамов В.В., Повещенко А.Ф., Маркова Е.В., Гонтова Й.А., Якушенко Е.В., Козлов В.А. ИМЭН - система: факты и предположения //Аллергология и иммунология. - 2000. - Т. 1. - №2. -С. 165.

7. Повещенко А.Ф., Маркова Е.В., Короткова Н.А., Якушенко Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Экспрессия генов цитокинов в полушариях головного мозга и поведенческие реакции у мышей (CBAxC57BL)Fl //Сибирский вестник психиатрии и наркологии.-2001.-№3.-С. 38-39.

8. Abramov V.V., Markova E.V., Gontova I.A., Yakushenko E.V., KorotkovaN.A., Abramo-vaT.Ya., Kozlov V.A. The interdependence of behavior and immunity: possible mechanisms and significance II Russian J. of Immunology. - 2001. - V. 6. - N 2. - P. 215-220.

9. Yakushenko E.V., Poveschenko A.F., Markova E.V., Korotkova N.A., Abramov V.V. The expression of mRNA of cytokines in hemispheres and behavior reactions of (CBA x C57BI/6)FI mice // Scand. J. of Immunol., 11th International Congress of immunology. - 2001. - V. 54, Suppl. 1. - A3, 5.15, 1322.-P. 115.

10. Маркова E.B., Абрамов B.B., Короткова H.A., Гольдина И.А., Козлов В.А. Модуляция исследовательского поведения у мышей при активации клеточного звена иммунного ответа // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 132. - № 10. - С. 424-426.

И. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Повещенко А.Ф., Якушенко Е.В., КоротковаН.А., Козлов В.А. Модуляция ориентировочно-исследовательского поведения у мышей в процессе развития гуморального иммунного ответа // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. -Т. 133,-№5.-С. 534-536.

12. Повещенко А.Ф., Маркова Е.В., Короткова Н.А., Якушенко Е.В., Абрамов В.В., Козлов

B.А. Экспрессия генов цитокинов в полушариях головного мозга и поведенческие реакции у мышей (CBAxC57B!)Fl // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - Т. 133. - № 1. -

C. 78-80.

13. Абрамов В.В., Маркова Е.В., Короткова Н.А., Козлов В.А. Модуляция ориентировочно-исследовательского поведения мышей (CBA х C57BL/6)F1 иммунокомпетентными клетками // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - Т. 134. - № 9. - С. 319-321.

14. Повещенко А.Ф., Маркова Е.В., Якушенко Е.В., Короткова Н.А., Абрамов В.В., Козлов В.А. Влияние введения эригропоэтина на экспрессию генов цитокинов (IL-1, IL-1R, EPO-R) в лимфоидной и нервной тканях и их функциональные параметры у мышей (CBAxC57BL/6)Fl // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т. 1. - № 2. - С. 17.

15. Маркова Е.В., Короткова Н.А., Абрамов В.В., Козлов В.А. Регуляция поведенческих реакций у мышей путем трансплантации иммунокомпетентных клеток. Иммунология, иммуногенетика, иммунопатология. Тез. докладов научной конференции. - Новосибирск, 2003. - С. 114-115.

16. Маркова Е.В., Обухова Л.А. Колосова Н.Г. Показатели активности клеточного звена иммунного ответа крыс линий Вистар и OXYS и особенности их поведения в тесте «открытого поля» // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003. - Т. 135. - № 10. - С. 427-429.

17. Markova E.V., Abramov V.V. Neuroimmunoregulation and new perspective in the correction of drug - induced behavior changes. Building International Research: Emerging Trends and Pattern in drug Abuse Around the World. Miami, Florida, 2003. - P. 4S^t7.

18. Маркова E.B., Обухова JI.A. Колосова Н.Г. Клеточный иммунный ответ крыс ВИСТАР и OXYS и особенности их поведения в тесте «открытого поля» // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003. - Т. 136. - № 12. - С. 667-669.

19. Маркова Е.В., Короткова Н.А., Абрамов В.В., Козлов В.А. Регуляция поведенческих реакций у мышей путем трансплантации иммунокомпетентных клеток // Russian Journal of Immunology. -2004. - V. 9, Supp 1.1. - P. 90.

20. Markova E.V., Abramov V.V Kozlov V.A. Regulation of the Behavior Reactions by the Immune Cells Transplantation // Clinical and Investigative Medicine. - 2004. - Vol. 27. - № 4. - 729 AM. -W 50...53(817).

21. E. Markova, N. Michnevich, I. Goldina, V. Abramov, V Kozlov. Behavior and immune disorders in mice with morphine withdrawal: mechanisms and correction. Abstracts of CPDD 66th Annual Scientific Meeting, Sun Juane, Puerto Rico, 2004. - Abstract 948.

22. Основы нейроиммунологии: учебное пособие / В.В. Абрамов и др. - Новосибирск: Изд. НГПУ, 2004.-264 с.

23. Маркова Е.В., Чернова Т.Г, Филлимонов П.Н., Короткова Н.А., Абрамов В.В. Козлов В.А. Иммуноморфологические особенности животных с разным уровнем ориентировочно-

исследовательского поведения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. -Т. 138.-№10.-С. 466-469.

24. Основы нейроиммунологии / Абрамов В.В. и др. - М.: Академия наук о Земле. Золотая серия национальных научных достижений, 2004. - 100 с.

25. Е.В.Маркова, В.В.Абрамов, М.В.Старостина, Н.Михневич, В.А.Козлов. Иммунологические и поведенческие расстройства при хронической морфиновой зависимости: механизмы и возможные подходы к коррекции // Цитокины и воспаление. - 2005. - Т. 4. - № 2. - С. 76.

26. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Экспрессия генов цитокинов в головном мозге животных при трансплантации иммунокомпетентных клеток // Цитокины и воспаление. - 2005. -Т. 4,-№2.-С. 86.

27. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения животных путем трансплантации иммунокомпетентных клеток // Нейроиммунология. -2005.-Т. 2,-№2.-С. 165.

28. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Трансплантация иммунокомпетентных клеток как возможный перспективный метод терапии наркотической зависимости И Нейроиммунология. -

2005.-Т. 2,-№2.-С. 196.

29. Е. Markova, M. Starostina, Abramov V.V., Kozlov V.A. A new approach in the correction of morphine-induced behavior and immune disorders. Drug Discovery Technology / InfoTech Pharma Conférence. London, March 2005, Abstract booklet. - part II. - P. 38.

30. Маркова E.B., В.А. Козлов, H.A. Трофимова, Н.Г. Колосова. Стимуляция клеточного звена иммунного ответа активизирует исследовательское поведение преждевременно стареющих крыс OXYS Л Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 140. - X» 9. - С. 332-334.

31. Маркова Е.В., Старостина М.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на поведенческие и иммунологические параметры у животных с синдромом хронической морфиновой зависимости // Наркология. - 2006. - № 5. - С. 27-31.

32. Козлов В.А., Маркова Е.В., Абрамов В.В. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения у животных путем трансплантации иммунокомпетентных клеток // Патофизиология психических расстройств: коллект. монография под научн. ред. акад. РАМН В.Я. Семке и проф. Ф. Лан-га. - Томск: Изд. ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН, 2006. - С. 233-241.

33. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Старостина М.В., Михневич Н.Д., Козлов В.А. Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на поведенческие и иммунологические параметры у животных с синдромом хронической зависимости от морфина //Сибирский вестник психиатрии и наркологии. - 2006. - Т. 3. - С. 43-47.

34. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Короткова Н.А., Козлов В.А. Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на ориентировочно-исследовательское поведение и экспрессию генов цитокинов в головном мозге у животных // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -

2006. - Т. 142. -Кг 9. - С. 309-312.

35. Маркова Е.В., Старостина М.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на поведенческие и иммунологические параметры у животных в норме и при синдроме хронической морфиновой зависимости // Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике. - Новосибирск, 2006. - С. 110-113.

36. Markova E.V., Abramov V.V Kozlov V.A. Régulation of the behavior reactions by the immune cells transplantation, 3-rd International Conférence "Basic Science for Medicine". Novosibirsk, 2007. - C. 148.

37. E. Markova, M. Starostina, Abramov V.V Kozlov V.A. Immune cell transplantation: new perspectives in the correction of morphine-induced immune and behavior disorders. - 3rd International Conférence "Basic Science for Medicine". -Novosibirsk, 2007. - C. 147.

38. Маркова E.B., Абрамов B.B., Козлов В.А. Влияние трансплантации клеток системы моно-нуклеарных фагоцитов на поведенческие и иммунологические параметры у животных // Нейроиммунология. - 2007. - Т. 5. - № 2. - С. 77.

39. Маркова Е.В., Абрамов В.В. Козлов В.А. Иммунокомпетентные клетки и регуляция поведения у животных // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - 2007. - № 2 (124). - С. 6-9.

40. Маркова Е.В., Абрамов В.В. Козлов В.А. Клетки иммунной системы в регуляции ориентировочно-исследовательского поведения у экспериментальных животных // Омский научный вестник. - 2007. - № 3 (61). - С. 36-39.

41. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Старостина М.В., Козлов В.А. Влияние трансплантации клеток иммунной системы на поведенческие и иммунологические параметры у животных в норме и в

состоянии хронической зависимости от морфина. Современные проблемы биологической психиатрии и наркологии. - Томск, 2008. - С. 150-152.

42. Абрамов В.В., Маркова Е.В., Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения у животных иммунокомпетентными клетками // Патогенез. - 2008. -№ 2. - С. 16-20.

43. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения у мышей (СВА х C57B1/6)F1 иммунокомпетентными клетками // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2(11). - № 2-3. - С. 152.

44. Markova E.V., Kolosova N. G., Abramov V.V., Kozlov V.A. Activation of exploratory behavior in senescence accelerated OXYS rats by stimulation of cell-mediated immune response with BCG vaccine. EHRLICH II - 2nd World Conference on Magic Bullet. Celebrating the 100th Anniversary of the Nobel Prize Award to Paul Ehrlich. Nürnberg, Germany, October 3-5,2008. Abstract book, p. 200.

45. Маркова E.B., Старостина M.B., Абрамов B.B., Козлов В.А. Транспла1ггация иммунокомпетентных клеток в качестве возможного метода терапии хронической зависимости опт морфина // Нейроиммунология. - 2009. - Т. VII. - № 1. - С. 65.

46. Маркова Е.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Влияние трансплантации лимфоидных клеток селезенки на поведенческие и иммунологические параметры у животных // Нейроиммунология. -2009. - Т. VII. -№ 1.-С. 64.

47. Е. Markova, М. Starostina, V.Abramov, V Kozlov. Immune Cell Transplantation: New Perspectives in the Correction of Morphine - Induced Immune and Behavior Disorders. 2nd European Congress of Immunology, Berlin, September 13,2009. - p. 552.

48. E. Markova, V.Abramov, V Kozlov. Regulation of the behavior reactions by the immune cells transplantation. 2nd European Congress of Immunology, Berlin, September 13,2009. - p. 274.

49. Маркова E.B., Абрамов B.B., Рябичева Т.Г., Козлов В А. Влияние трансплантации лимфоидных клеток селезенки на функциональную активность иммунной и нервной систем у экспериментальных животных // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 147. - № 4. -С.435-441.

50. Маркова Е.В., Старостина М.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Коррекция иммунологических и поведенческих расстройств при синдроме хронической зависимости от морфина путем трансплантации иммунокомпетентных клеток // Вестник уральской медицинской академической науки. -2009. -№2/1. - С. 217-219.

51. Маркова Е.В., Абрамов В.В. Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения у животных клетками системы мононуклеарных фагоцитов // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2009. - № 2/1. - С. 271-273.

52. Маркова Е.В., Старостина М.В., Абрамов В.В., Козлов В.А. Трансплантация иммунокомпетентных клеток в качестве возможного метода коррекции поведенческих и иммунологических расстройств при синдроме хронической зависимости от морфина // Клеточные технологии: Теоретические и прикладные аспекты: сб. науч. тр. Под ред. В.А. Козлова, С.В. Сенникова, Е.Р. Черных, A.A. Останина. - Новосибирск: Наука, 2009. - С. 114-122.

53. Абрамов В.В., Маркова Е.В., Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения мышей (СВА х C57/B1/6)F1 клетками системы мононуклеарных фагоцитов // Клеточные технологии: Теоретические и прикладные аспекты: сб. науч. тр. Под ред. В.А. Козлова, С.В. Сенникова, Е.Р. Черных, A.A. Останина. - Новосибирск: Наука, 2009. - С. 105-113.

54. Маркова Е.В., Фомичева М.А., Абрамов В.В., Козлов В.А. Параметры функциональной активности иммунной и нервной систем при трансплантации иммунокомпетентных клеток, обработанных нейролептиком // Якутский медицинский журнал. - 2009. - № 3. - С. 33-34.

55. Маркова Е.В., Абрамов В.В. Козлов В.А. Регуляция ориентировочно-исследовательского поведения у животных путем трансплантации иммунокомпетентных клеток // Успехи современной биологии.-2009.-Т. 129,-№4.-С. 348-355.

56. Е. Markova, М. Starostina, V. Abramov, V. Kozlov. Immune Cell Transplantation: New Perspectives in the Correction of Morphine - Induced Immune and Behavior Disorders. Proceedings of the 2nd European Congress of Immunology. Free Papers. Editors Reinhold E. Schmidt. MEDIMOND S.r.l., Bolon-ga, Italy, 2009.-P. 423-429.

57. E. Markova,.V. Abramov, V. Kozlov. Regulation of the behavior reactions by the immune cells transplantation. Proceedings of the 2nd European Congress of Immunology. Free Papers. Editors Reinhold E. Schmidt. MEDIMOND S.r.l., Bolonga, Italy, 2009. - P. 551-555.

58. Маркова Е.В., Козлов В.А. Механизмы регуляции ориентировочно-исследовательского поведения у экспериментальных животных трансплантацией иммунокомпетентных клеток // Патогенез. - 2010. - Т. 8. - № 1. - С. 52.

59. Маркова Е.В., Колосова Н.Г., Козлов В.А. Клеточный иммунный ответ и ориентировочно-исследовательское поведение у экспериментальных животных // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2010. - № 2/1. - С. 48-49.

60. Маркова Е.В., Козлов В.А. Механизмы регуляции ориентировочно-исследовательского поведения мышей (СВА х С57В1/6)Р1 иммунокомпетентными клетками // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2010. - № 2/1. - С. 49-51.

Подписано в печать 30.11.2010 г. Формат 60*84 7)6. Объем 2 п. л. Заказ № 144. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ИИЦ ГНУ СибНСХБ СО Россельхозакадемии 630501, Новосибирская обл., пос. Краснообск

Актуальность проблемы. Новая интегративная наука, психонейроиммунология, появившаяся в последней трети XX века, с каждым годом все больше привлекает внимание исследователей. Это обусловлено тем, что понимание функционального единства нервной и иммунной систем, характера взаимодействия, между ними открывает впечатляющие перспективы в самых различных областях экспериментальной и клинической медицины, позволяет пересмотреть лечебную тактику при борьбе со многими заболеваниями.

Общность иммунной и нервной систем к настоящему времени является хорошо известным фактом и подтверждается наличием у этих систем памяти, способности воспринимать и перерабатывать информацию, формировать ответ; а также существованием сетевых взаимоотношений и саморегуляции функций (Толкунов Б.Ф., 1978; Козлов В.А с соавт., 1982; Девойно JI.B. с соавт., 1998-2009; Акмаев И.Г., 1996; Wegent D.A., Blalock J.E., 1997; Raber J. 1998; Cohen F. 1999; Yayley S 1999; Корнева E.A. 2000; Судаков K.B., 2000; Wong M. 2000; Turin N. 2001; Anisman M. 2002, 2003; Dantzer R. 2000, 2004; Elenkov J. et al., 2000, 2006; Wrona D. 2006; Мюльберг A.A. 2006 и др.).

Взаимодействие основных адаптационных систем организма подразумевает регулирующее влияние со стороны иммунной системы на функции центральной нервной системы; при этом одной из ключевых проблем является расшифровка связи между процессами высшей нервной деятельности и иммунным статусом человека и животных. Однако, именно этот аспект является одним из наименее изученных в нейроиммунологии.

Известно, что нервная система испытывает влияние со стороны иммунной системы. Показано, что продукты ИКК обладают психо- и нейротропной активностью; участвуют в физиологических механизмах памяти, регуляции сна и бодрствования, активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, реализации стресс-реакции (Девойно Л.В. 1991, 1998; Raber J. 1998; Krueger J.V. et al., 1998; Cohen F.

1999; Yayley S. 1999; Корнева E.A. с соавт., 2000, 2003;Wong M. 2000; Turin N. 2001; Anisman M. 2002, 2003; Арушанян Э.Б., Бейер Э.В., 2004; Dantzer R. 2003, 2004, 2006; Elenkov J. 2006; Wrona D. 2006; Мюльберг A.A. 2006; Jaferi A., Bhatnager S., 2007; Quah N., Banks W.A. 2007 и др.). Формирование иммунного ответа на различные антигены, равно как и действие на организм активаторов иммунной системы, сопровождается модуляцией процессов высшей нервной деятельности, в том числе поведения, модификация которого имеет адаптивное значение (Buttini М., Boddeke Н., 1995; Хаитов P.M., 1997; Dantzer R., Wollman Е., 1998; Blutte R. 1998; Vidal J., 1999; Клименко В.М.,1999; Hanisch U.K., 2001; Ветлугина Т.П. 2001; Мошкин М.П. с соав. 2003; Shen Y-A et al., 2004; Weil Z.V., et al, 2006; Lane E.L., et al, 2006; Ching S., et al, 2006; Hopkins S.J., 2007; Учакин П.Н. 2008 и др.).

Тем не менее, вопрос о том, какими путями может реализоваться афферентное звено взаимодействия иммунной и нервной систем остается спорным. В качестве триггерных факторов, приводящих к модуляции высшей нервной деятельности в процессе иммуногенеза, выступают изменение мембранного потенциала активированных ИКК и продуцируемые ими цитокины (интерлейкины, интерфероны и др.), (Клименко В.М., 1999; Turrin N.P., Plata-Salaman C.R. , 2000; Larson S.J., Dunn A.J, 2001; Dantzer R. 2007 и др.). Показано, что строма и паренхима лимфоидных органов имеет богатое представительство афферентных нервных окончаний (Сапин М.Р.,1987; Филиппова Л.В., Ноздрачев А.Д., 2007; Билич Г.Л. Сапин М.Р., 2007; Орлов P.C., Ноздрачев А.Д., 2009 и др.). При этом ИКК и нервные окончания образуют своеобразные синапсы, активирующиеся при изменении мембранного потенциала указанных клеток, а также при воздействии цитокинов, продуцируемых ИКК (Веселовский Н.С., Федулова С.А., 1983; Абрамов В.В., 1988; Feiten S.Y., Feiten D.L., 1991; Bluthe, R. M. et al., 1994, 1996; Dantzer R. et al., 1999).

Установлено, что клетки мозга (нервные и глиальные) подобно клеткам иммунной системы, несут на мембране рецепторы цитокинов; причем, синтез и продукция ряда цитокинов, равно как и экспрессия их рецепторов в головном мозге, изменяются при воздействии различных иммунных стимулов (Reinisch N., et.al., 1994; Van Dam A., et.al., 1995; Eriksson C., et.al., 2000; Carpenter D. 2002; Dantzer R., 2004; Болдырев А. А., Тунева E. O., 2005; Dantzer R., 2007; Ader R., 2007; Siegel A., Zalcman S.S., 2009 и др.). Можно сказать, что мозг способен "чувствовать" продукцию цитокинов при развитии той или иной иммунной реакции в организме и отвечать на5 эту реакцию синтезом цитокинов в клетках нервной ткани, отражением чего является модуляция процессов высшей нервной деятельности, в том числе и поведенческих реакций. Существенную роль при этом играют и нейромедиаторные системы мозга, активность^ которых также подвержена влиянию со стороны иммунной системы (Hayles S. Et al., 1999; Brebnen К. et.al., 2000; Turrin N.P., Plata-Salaman C.R., 2000; Larson S .J., Dunn-A J., 2001, 2006).

Более того, обнаружено, что синтез некоторых цитокинов, в том числе ИЛ-1 ß,-2,-4,-6,-10,-18,-23, ИЛ-1-Р, ЭИ-Р, ФНОа и др. в структурах мозга, наблюдается не только в результате активации иммунной системы, но и у животных в нормальных физиологических условиях (Neveu P.J.,1998; Клименко В .M, 1999; Dantzer R., 2004, 2006; Siegel A., Zalcman S.S., 2009; Захаров Ю. M., 2007 - 2009 и др.). Следовательно, имеет место базовый уровень экспрессии цитокинов и их рецепторов, равно как и конститутивная выработка большинства про- и противовоспалительных цитокинов в мозге, что предполагает их участие в реализации нормальных физиологических функций нервной системы в том числе и в формировании определенного стереотипа поведения.

В то же время, иммунная и нервная системы не только обладают общим полем гуморальных факторов (включающим интерлейкины, интерфероны, простагландины, нейромедиаторы, нейропептиды и др.), но и постоянно контактируют посредством своих клеточных элементов, характеризующихся выраженным фенотипическим и функциональным сходством (Хаитов P.M., 1997; Kadiiski D et al., 2001). Как указывалось выше, в строме и паренхиме лимфоидных органов имеются отростки различных нейронов - сенсорные и вегетативные нервные окончания. В свою очередь, РИСК, как описано в ряде работ, обладают способностью проникать в паренхиму нервной ткани через неповрежденный гематоэнцефалический барьер и непосредственно контактировать с нейронами и глиальными клетками, модулируя их функциональную активность. (Gordon S., et all, 1993; Беляева И.А., с соавт 1999; Hickey W.F., 1999). Поскольку способность к непосредственному контакту и взаимодействию клеток иммунной и нервной систем приобретается на ранних этапах эмбриогенеза (Hickey W.F., 1999), не исключено влияние иммунной системы и, в частности ее клеточных элементов, на формирование и регуляцию поведенческих реакций индивидуума. Тем не менее, именно этот аспект взаимодействия указанных систем остается одним из наименее изученных.

Актуальность исследования афферентной организации взаимодействия иммунной и нервной систем, изучения механизмов ответа мозга на активацию иммунной системы, участия иммуногенных факторов и клеточных элементов иммунной системы в реализации его физиологических функций, в частности поведенческих реакций, определяется как наличием широкого спектра неврозоподобных, аффективно-личностных, когнитивных и поведенческих нарушений, возникающих при вторичных иммунодефицитах вследствие повторных и хронически действующих экологических и социальных стрессоров; так и довольно активным проведением в настоящее время различных иммунотерапевтических мероприятий, в том числе и клеточной терапии, при инфекционных, иммунодефицитных, аллергических, аутоиммунных и других заболеваниях.

Активное поведение в условиях неопределенности (поисковое поведение) - значимый фактор соматического здоровья, предотвращающий возникновение психосоматических заболеваний и повышающий устойчивость организма к стрессу. Напротив, отказ от поиска ведет к снижению сопротивляемости организма, подавляет иммунную систему, являясь тем самым неспецифической и универсальной предпосылкой к развитию самых разнообразных форм патологии (Ротенберг B.C., Аршавский В.В., 1976, 1999; Айрапетянц М.Г. с соавт., 1986; Александер Ф. 2002 и др.) Ориентировочно-исследовательское поведение (ОИП), таким образом, представляет собой один из важнейших типов поведения, который обеспечивает индивидуума знанием об окружающей среде и является существенным психологическим механизмом адаптации высших позвоночных. Изучение механизмов его регуляции со стороны иммунной системы и ее клеточных элементов позволит расширить имеющиеся представления об интегративном взаимодействии иммунной и нервной систем и открывает новые перспективы в профилактике и коррекции психосоматических расстройств.

Ярким примером психосоматической патологии является хроническая зависимость от морфина Морфин, как известно, взаимодействует с опиатными рецепторами головного мозга и обладает выраженным влиянием на поведенческие реакции. Вместе с тем, известны и его супрессивные эффекты (как прямые, так и опосредованные через центральные механизмы) на функции иммунной системы (Peterson Р.К., et al., 1998; Ветлугина Т.П., 2001; Saurer Т.В., et al., 2003); в связи с чем актуальным и социально значимым является разработка эффективных методов профилактики и терапии патологии нервной и иммунной систем организма, возникающих у наркозависимых, равно как и поиск новых подходов к реабилитации последних.

В связи с вышеизложенным, цель исследования заключалась в установлении особенностей функционирования иммунной системы у экспериментальных животных с различным уровнем ОИП и выявлении закономерностей изменения ОИП при активации иммунной системы и при трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить характер ориентировочно — исследовательского поведения у экспериментальных животных и провести морфологическое исследование сенсомоторной коры головного мозга животных с различным уровнем ОИП.

2. Охарактеризовать уровень мРНК ИЛ-10, ИЛ-1-Р, ЭПО-Р и содержание цитокинов в лизатах клеток головного мозга животных с активным и пассивным типами ОИП.

3. Исследовать интенсивность клеточного и гуморального иммунного ответа, пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток, уровень мРНК ИЛ-1(3, ИЛ-1-Р1 и ЭПО-Р и содержание цитокинов в лизатах селезенки, культуральных супернатантах моноцитарно-макрофагальной и лимфоидной фракций спленоцитов животных с активным и пассивным типами ОИП.

4. Определить характер изменения параметров ОИП у животных с его различным уровнем при стимуляции клеточного и гуморального звеньев иммунной системы.

5. Исследовать влияние трансплантации неразделенных клеток селезенки на параметры ОИП у сингенных животных с активным и пассивным типами ОИП.

6. Изучить влияние трансплантации моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки на функциональную активность нервной системы (ОИП, экспрессию генов ИЛ-1(3, ИЛ-1-Р и ЭПО-Р в клетках головного мозга) и иммунной системы (клеточный и гуморальный иммунный ответ, пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток, экспрессию генов ИЛ-1(3, ИЛ-1-Р и ЭПО-Р в спленоцитах) у сингенных животных с с активным и пассивным типами ОИП.

7. Изучить влияние трансплантации непирилипающих к пластику клеток селезенки на функциональную активность нервной системы (ОИП, экспрессию генов ИЛ-10, ИЛ-1-Р и ЭПО-Р в клетках головного мозга) и иммунной системы (клеточный и гуморальный иммунный ответ, пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток, экспрессию генов ИЛ-1Р, ИЛ-1-Р и ЭПО-Р в спленоцитах) у сингенных животных с активным и пассивным типами ОИП.

8. Изучить влияние трансплантации иммунокомпетентных клеток на характерные проявления функциональной активности иммунной и нервной систем у экспериментальных животных в состоянии хронической зависимости от морфина.

Основные результаты исследования и их новизна:

Научная новизна работы заключается в том, что в результате проведенных исследований продемонстрирована взаимосвязь уровня ОИП с особенностями структурно- функциональной организации ЦНС и функциональной активности иммунной системы у экспериментальных животных.

Показано, что мыши (СВА х С57ВЪ/6)Р1 с активным типом ОИП характеризуются относительно большим количеством нейронов в сенсомоторной коре головного мозга по сравнению с мышами с пассивным типом ОИП. У последних, в свою очередь, в коре мозга выявлены выраженные перицеллюлярные отеки, тенденция к увеличению количества клеток-теней и наличие групп сжатых клеток.

При этом установлено, что клетки головного мозга мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с пассивным типом ОИП отличаются от таковых у мышей с активным типом поведения более высокой экспрессией генов ИЛ-1(3 и ИЛ-1Р первого типа, равно как и превалирующим содержанием цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНОа, ИНФу в их лизатах. Впервые выявлена относительно высокая экспрессия гена ЭПО-Р в клетках головного мозга мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с активным типом ОИП. Показано стимулирующее влияние ЭП на показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП.

Впервые показаны различия синтеза и продукции ряда цитокинов ИКК мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным и пассивным типом ОИП. Так, у мышей с высоким уровнем ОИП в клетках селезенки выявлена более низкая экспрессия гена ЭПО-Р. В тоже время у этих животных установлен относительно высокий уровень мРНК ИЛ-1-Р первого типа в спленоцитах и мРНК ИЛ-lß в их моноцитарно-макрофагальной фракции. При этом в лизатах спленоцитов мышей с активным типом ОИП показано более высокое содержание цитокинов ИЛ-6, ФНОа и ИНФу, равно как и ИЛ-1 ß, ИЛ-6, ФНОа в культуральном супернатанте их моноцитарно-макрофагальной фракции. Неприлипающие к пластику клетки селезенки мышей (СВА х C57B1/6)F1 с активным типом ОИП отличаются повышенной продукцией ИЛ-6.

При исследовании функциональной активности ИКК у мышей (СВА х C57B1/6)F1 с высоким и низким уровнем ОИП выявлены также достоверные различия в их пролиферативной активности. Показано, что животные с активным типом ОИП характеризуются относительно более высокой спонтанной и митогениндуцированной пролиферативной активностью тимоцитов и спленоцитов.

Впервые установлено, что характер изменениями параметров ОИП у мышей (СВА х C57B1/6)F1 при формировании как гуморального, так и клеточного иммунного ответа определяется исходным поведенческим < статусом животных. Впервые продемонстрирована прямая зависимость между уровнем ОИП и выраженностью реакции ГЗТ, характеризующей состояние клеточного звена иммунной системы. Данная зависимость показана у мышей линий Balb/c, С57В1/6, (СВА х C57BL/6)F1 и у крыс Wistar и OXIS, характеризующихся высокими и низкими параметрами поведения в тесте "открытое поле" соответственно, что указывает на ее универсальный характер; более того, у последних продемонстрировано также дозозависимое повышение показателей горизонтальной двигательной активности при формировании клеточного иммунного ответа.

Научная новизна работы заключается также в том, что впервые продемонстрирована возможность направленного изменения уровня ОИП у животных путем трансплантации иммунокомпетентных клеток; и установлены клеточные и молекулярные механизмы влияния клеток селезенки на параметры ОИП экспериментальных животных с различным поведенческим статусом в норме и в состоянии хронической зависимости от морфина.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Теоретическая, значимость работы заключается в установлении принципиально нового феномена: направленного изменения параметров ОИП у экспериментальных животных путем трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками. Представленные в работе результаты, раскрывающие основные механизмы влияния ИКК на ОИП, значительно расширяют существующие представления о процессах функционального взаимодействия двух важнейших гомеостатических систем организма - нервной и иммунной. Выявленные взаимосвязи между функциональной активностью иммунной системы и уровнем ОИП у интактных животных, а также закономерности влияния активации иммунной системы, ее клеточного и гуморального звеньев на параметры ОИП раскрывают механизмы иммунорегуляции форм поведения как врожденных, так и приобретенных в ходе индивидуального опыта.

Практическая значимость полученных результатов заключается в обосновании целесообразности оценки и учета индивидуально-типологических особенностей пациента при проведении иммунотерапевтических мероприятий, в частности, клеточной терапии, поскольку имеются основания полагать, что при этом имеет место не только ожидаемый непосредственный эффект на уровне иммунной системы реципиента, но и опосредованный эффект на функции центральной нервной системы. Выявленные в работе закономерности и взаимосвязи между параметрами поведения и функциональной активностью иммунной системы открывают новые перспективы в самых различных областях экспериментальной и клинической медицины; позволяют расширить возможности как иммунокоррекции (в том числе посредством коррекции поведенческих функций); так и регуляции поведения путем воздействия на параметры иммунитета. Практическая ценность работы заключается также в том, что предложенная экспериментальная модель и полученные результаты могут быть использованы для разработки новых биологических методов и стратегии патогенетической терапии различных форм психосоматических заболеваний, протекающих с нарушением нейроиммунных взаимодействий, в том числе и наркотической зависимости.

Положения, выносимые на защиту.

1. У животных с активным и пассивным типами ОИП различна функциональная активность клеточного звена иммунной системы.

2. Уровень ОИП ассоциирован с уровнем синтеза цитокинов в клетках иммунной системы и ЦНС.

3. Трансплантация иммунокомпетентных клеток является способом изменения ОИП у экспериментальных животных.

Личный вклад автора в проведение исследования.

Все представленные результаты экспериментальных исследований получены лично автором, либо при его непосредственном участии.

Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации представлены в виде докладов на следующих научных мероприятиях: International Congress ISNIM - 99 (Lugano, Switzerland, September, 1999); Eighth NIDA International Forum on Building International Research (Miami, USA, June, 2003); Съезде РНОИ (Сочи, 2004); Drug Discovery Technology / InfoTech Pharma Conference (London, March 2005); Российско-германском симпозиуме «Патофизиология психических расстройств» (Томск, сентябрь 2006); Симпозиуме «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007); 3-rd International Conference "Basic Science for Medicine" (Novosibirsk, September, 2007); Съездах нейроиммунологов

Санкт-Петербург, май-июнь 2005, 2007, 2009); Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, июнь-июль 2008); "EHRLICH II 2nd World Conference on Magic Bullets" (Nürnberg, Germany, October 2008); 2nd European Congress of Immunology (Berlin, September, 2009); шестой Российской конференции по нейроиммунопатологии (Москва, июнь, 2010).

Результаты работы представлены также на итоговых научных сессиях ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 2000, 2003, 2006); заседании Президиума СО РАМН (Новосибирск, июнь 2009); заседании проблемной комиссии МНС № 55.07 «Иммунология» СО РАМН (Новосибирск, сентябрь 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 60 научных работ, в том числе в российских и зарубежных изданиях 33 статьи (из них 25 в изданиях, рекомендуемых ВАК для публикации материалов диссертационных работ). Результаты исследований вошли также в монографии "Основы нейроиммунологии", М., 2004; и "Патофизиология психических расстройств", Томск, 2006.

Структура и объем диссертации.

Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав, содержащих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения и выводов. Диссертация изложена на 251 странице машинописного текста, иллюстрирована 21 рисунком и 21 таблицей. Список цитируемой литературы включает 599 источников, из них 147 работотечественных авторов.

ВЫВОДЫ.

1. Мыши (СВА х С57В1/б)Р1 с активным и пассивным типами ОИП отличаются структурно-функциональными параметрами центральной нервной системы, о чем свидетельствуют относительно низкое количество нейронов в сенсомоторной коре головного мозга, низкая экспрессия гена ЭП-Р и более высокая экспрессия генов ИЛ-1 [3, ИЛ-1-Р первого типа в клетках головного мозга и превалирующее содержание в их лизатах цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНОа, ИНФу, регистрируемое у животных с пассивным типом ОИП по сравнению с мышами с активным типом ОИП.

2. Мыши (СВА х С57В1/6)Р1 с активным и пассивным типами ОИП характеризуются различной функциональной активностью ИКК, о чем свидетельствуют: более высокая спонтанная и митогениндуцированная пролиферативная активность клеток тимуса и селезенки у животных с активным типом ОИП по сравнению с таковыми у мышей с пассивным типом ОИП; а также различия в синтезе и продукции ряда цитокинов, оцениваемые по экспрессии генов, содержанию цитокинов в лизатах и культуральных супернатантах ИКК. У мышей с активным типом ОИП относительно животных с оппозитным типом поведения регистрируется низкий уровень мРНК ЭП-Р при более высоком уровне мРНК ИЛ-1-Р первого типа в спленоцитах и мРНК ИЛ-1Р в их моноцитарно-макрофагальной фракции. В лизатах спленоцитов мышей с активным типом ОИП установлено более высокое содержание цитокинов ИЛ-б, ФНОа и ИНФу, равно как и ИЛ-1р, ИЛ-6, ФНОа в культуральном супернатанте клеток их моноцитарно-макрофагальной фракции.

3. Выявлена тесная: взаимосвязь между активностью клеточного звена иммунной; системы и ОИГ1, демонстрируемая соответствием интенсивности реакции ГЗТ и уровня - ОИП, наблюдаемым у мышей линий Balb/c, С57В1/6, (СВА х C57BL/6)F1 и у крыс Вистар и OXIS, а также дозозависимым повышением уровня ОИП у животных с пассивным; типом, поведения при стимуляции клеточного звена иммунной системы. .

4. Трансплантация неразделенных клеток селезеньей мышей' (СВА х C57B1/6)F1 от доноров, характеризующихся пассивным; типом ОИП, сингенным реципиентам с активным, типом ОИП приводит к снижению уровня ОИП реципиентов; трансплантация спленоцитов от доноров, характеризующихся активным типом: ОИП? сингенным; реципиентам с пассивным типом ОИП приводит к повышению у реципиентов уровня данной поведенческой реакции, что свидетельствует о влиянии периферических ИКК на параметры ОИП.

5. Трансплантация моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки от мышей (СВА х G57B1/6)F1 с активным типом ОИП' сингенным» реципиентам с: пассивным типом ОИП приводит у реципиентов к повышению параметров вертикальной и горизонтальной двигательной активности на фоне снижения уровня мРНК ИЛ-lß и повышения уровня мРНК ИЛ-1-Р и ЭП-Р в клетках головного мозга. Трансплантация клеток от доноров с пассивным типом ОИП реципиентам с активным типом ОИП сопровождается противоположными изменениями параметров ОИП и экспрессии указанных генов цитокинов в клетках головного мозга, что свидетельствует о влиянии клеток системы мононуклеарных фагоцитов; на показатели моторного и исследовательского компонентов ОИП и экспрессию генов цитокинов в клетках головного мозга.

6. Трансплантации моноцитарно-макрофагальных клеток селезенки между сингенными животными с оппозитными типами ОИП приводит к разнонаправленным изменениям функциональных показателей иммунной системы реципиентов, о чем свидетельствуют повышение спонтанной пролиферативной активности тимоцитов, снижение ЛПС-стимулированной пролиферативной активности спленоцитов, повышение уровня мРНК ЭП-Р, снижение уровня мРНК ИЛ-1Р в клетках селезенки и усиление реакции ГЗТ в случае, если донорами служили мыши с активным типом ОИП. При обратном варианте трансплантации, когда донорами выступали животные с пассивным типом ОИП, а реципиентами - мыши с активным типом ОИП, у последних регистрировались противоположные по направленности изменения указанных параметров.

7. Трансплантация неприлипающих к пластику спленоцитов с превалирующим содержанием клеток лимфоидного ряда от мышей (СВА х С57В1/6)Р1 с активным типом ОИП сингенным реципиентам с пассивным типом ОИП приводит у реципиентов к усилению вертикальной двигательной активности на фоне повышения уровня мРНК ЭП-Р и снижения уровня мРНК ИЛ-1-Р в клетках головного мозга; трансплантация указанных клеток от доноров с пассивным типом ОИП реципиентам с активным типом ОИП сопровождается снижением параметров вертикальной двигательной активности на фоне снижения уровня мРНК ЭП-Р в клетках головного мозга, что свидетельствует о влиянии указанных клеток на параметры исследовательского компонентов ОИП и экспрессию гена ЭП-Р в клетках головного мозга.

8. Перекрестная трансплантации фракции спленоцитов, состоящей преимущественно из лимфоидных клеток, между сингенными животными с оппозитными типами ОИП сопровождается изменением функциональных показателей иммунной системы реципиентов, о чем свидетельствует стимуляция пролиферативной активности клеток тимуса и селезенки, снижение экспрессии гена ЭП-Р в спленоцитах и стимуляция гуморального иммунного ответа, оцениваемого по числу АОК в селезенке в случае, если донорами выступали животные с активным типом ОИП. При обратном варианте трансплантации у реципиентов регистрируется повышение спонтанной пролиферативной активности клеток тимуса, снижение митогениндуцированной пролиферативной активности клеток селезенки, равно как и экспрессии в них гена ИЛ-1-Р.

9. Трансплантация моноцитарно-макрофагальньгх клеток селезенки от здоровых сингенных доноров, соответствующих животным в состоянии хронической зависимости от морфина по их исходному поведенческому статусу, приводит у реципиентов к коррекции параметров ОИП до значений, аналогичных здоровым животным на фоне стимуляции гуморального иммунного ответа, о чем свидетельствует повышение числа АОК селезенки, и восстановления сниженной под действием морфина экспрессии гена ИЛ-1 р в селезенке и в головном мозге, что подтверждается повышением уровней соответствующих мРНК.

10. Индивидуально-типологические особенности ориентировочно-исследовательского поведения связаны с функциональными характеристиками иммунной системы, клетки которой при трансплантации способны изменять уровень указанного поведения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. В'ходе многочисленных специальных экспериментов, направленных на изучение особенностей исследовательского поведения людей и животных, неоднократно было доказано, что указанное поведение следует рассматривать как неотъемлемое проявление жизненной активности любого живого существа. Исследовательское поведение выполняет важнейшую функцию - функцию развития; последняя обеспечивает адаптацию организма к динамичному внешнему окружению и в конечном итоге является гарантией выживания данного организма и вида в целом.

Важным для понимания механизмов, лежащих в основе индивидуальных различий ОИП и их физиологического значения является исследование особенностей функционирования физиологических систем у животных и человека с противоположной выраженностью потребности в двигательной активности. Как свидетельствуют результаты собственных исследований и литературные данные в основе индивидуально-типологических различий ОИП лежат не только свойства нервной системы, определяемые структурно-морфологическими, молекулярно-биологическими и биохимическими особенностями функционирования различных образований головного мозга, но и особенности функционирования иммунной системы.

В настоящей работе показано, что ИКК мышей (СВА х С57ВЬ/6)Р1 с активным и пассивным типами ОИП различаются по спонтанной и митоген-индуцированной пролиферативной активности; по экспрессии генов и продукции ряда цитокинов. При этом, формирование как гуморального, так и клеточного иммунного ответа сопровождается модуляцией исследовательского поведения, причем характер изменений ОИП определяется исходным поведенческим статусом животных. Выявлена тесная взаимосвязь между активностью клеточного звена иммунной системы и исследовательским поведением, определяемая соответствием интенсивности развиваемой реакции ГЗТ и уровня ОИП, регистрируемым у мышей линий Balb/c, С57В1/6, (СВА х C57BL/6)F1 и у крыс Вистар и OXIS; у последних показано также дозозависимое повышение параметров поведения в тесте "открытое поле" при стимуляции клеточного звена иммунной системы. По всей видимости, высокая иммунореактивность, обеспечивающая успешную адаптацию организма в новой антигенной среде, создает также возможность активного поведения особи в условиях неопределенности при освоении незнакомых территорий с новым потенциальным паразитарным окружением, что реализуется в высоком уровне ОИП и позволяет организму сохранить баланс с внешним миром вопреки действию нетипичных и даже угрожающих факторов и обстоятельств. ЦНС получает информацию от иммунной системы, как от сенсорного рецептора, распознающего присутствие антигена; информация передается в ЦНС посредством нейрогуморальных механизмов, что вызывает закономерные модуляции на уровне электрофизиологических, биохимических и молекулярно-биологических параметров, отражением чего является в частности изменение поведения, модификация которого в процессе активации иммунной системы имеет адаптивное значение.

Вовлечение иммунологических механизмов в реализацию ОИП подтверждается также продемонстрированной в настоящей работе способностью периферических ИКК с определенными функциональными характеристиками при трансплантации направленно изменять параметры указанного поведения животных-реципиентов. Установлено, что клетки селезенки, попадая в организм сингенного, но отличающегося по психофизиологическим показателям реципиента, вызывают у последнего I определенные изменения функциональной активности ЦНС, о чем свидетельствуют изменение параметров ОИП и экспрессии генов цитокинов в клетках головного мозга, на фоне изменения функциональной активности иммунной системы, проявляющейся в модуляции пролиферативной активности клеток тимуса и селезенки, экспрессии генов цитокинов в клетках селезенки и интенсивности иммунного ответа. Можно полагать, что в качестве триггерных факторов, приводящих к изменениям функциональной активности ЦНС у мышей-реципиентов при трансплантации ИКК выступают продуцируемые этими клетками цитокины. По всей видимости, головной мозг реагирует на изменение цитокинового профиля на периферии и отвечает на этот стимул модуляцией как собственного локального синтеза цитокинов, так и активности центральных нейромедиаторных систем, следствием чего и являются регистрируемые изменения параметров ОИП. Известно, что цитокины, гормоны, нейротрансмиттеры, растворимые мессенджеры и их рецепторы, общие для иммунной и нервной систем, выполняют двусторонние коммуникативные функции между указанными гомеостатическими системами организма, в силу чего лимфоидные органы можно рассматривать в качестве чувствительных и эффекторных органов. Учитывая двусторонний характер нейроиммунных взаимодействий, наблюдаемые в собственных исследованиях изменения показателей функциональной активности иммунной системы реципиентов после трансплантации ИКК могут быть следствием как непосредственного воздействия трансплантируемых клеток и продуцируемых ими цитокинов, так и опосредованного влияния ЦНС. В настоящем исследовании показано, что особенности интегративного взаимодействия иммунной и нервной систем, определяющие тип ОИП, определяют также характер изменения указанного поведения при хроническом воздействии морфина, что выражается в неоднозначном эффекте этого наркотического вещества на функциональную активность ЦНС у генетически однородных мышей с активным и пассивным типами ОИП. Наблюдаемые поведенческие сдвиги, равно как и супрессия под действием морфина гуморального иммунного ответа, снижение пролиферативной активности спленоцитов и экспрессии ими и клетками головного мозга гена ИЛ-1 (3, могут быть скорректированы трансплантацией ИКК с определенными функциональными характеристиками, соответствующими таковым у здоровых животных, что позволяет рассматривать трансплантацию ИКК в качестве возможного перспективного биологического метода терапии наркотической зависимости.

Таким образом, подводя итог вышеизложенному можно заключить, что нейроиммунные взаимодействия лежат в основе формирования индивидуально-типологических особенностей поведения экспериментальных животных. Выявленные взаимосвязи между показателями функциональной активности иммунной и центральной нервной систем у животных с различным типом ОИП, равно как и закономерности изменения поведения при активации иммунной системы и при трансплантации ИКК с определенными функциональными характеристиками позволяют расширить имеющиеся представления об интегративном взаимодействии двух важнейших регуляторных систем организма, выполняющих в организме базисные функции по адаптации к изменяющимся условиям внешней и внутренней среды и открывают новые перспективы в профилактике и коррекции психосоматических расстройств, расширяя возможности как иммунокоррекции, в том числе посредством коррекции поведенческих функций; так и регуляции поведения путем воздействия на функциональные параметры иммунной системы.