Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Кардио- и гепатопротекторное действие некоторых производных оксиникотиновой кислоты и пространственно затрудненных фенолов



На правах рукописи

ЕЛЬКОВА Катерина Владиславовна

КАРДИО- И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ

ОКСИНИКОТИНОВОЙ кислоты и ПРОСТРАНСТВЕННО ЗАТРУДНЕННЫХ ФЕНОЛОВ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских н?"*

14.00.25 - фармакология

Москва -1996

Работа выполнена во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор JI.H. Сернов

Научный консультант: доктор медицинских наук A.C. Кинзирский

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор А.И. Епысин доктор медицинских наук, профессор Е.Г. Изюмов

Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет

7

Защита диссертации состоится "УК" М^А 1997 года в / 3 часов на заседании диссертационного совета Д 084. 08. 01 при Московском медицинском стоматологическом институте (103473, Москва, ул. Долгоруковская, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (ул. Вучетича, 10 а).

Автореферат разослан " "^1996 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Л Л. Кириченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Несмотря на многочисленные эксперименты и клинические исследования, фармакотерапия ИБС нуждается в изыскании и внедрении в практику новых препаратов (Климов А.Н., 1989; Оганов Р.Г., 1990; Чичканов Г.Г., 1994; Метелица В.И. и др., 1995; Померанцев В.П. и др., 1996). Важным резервом в этом плане могут служить синтетические антиоксиданты производные оксиникотиновой кислоты (Гацура В.В», Смирнов Л .Д., 1992; Сернов Л.Н., 1995), обладающие мембраностабилизирующим, противоишемическим, антиаритмическин, коронародилатирующим действием (Светликова И.В., 1993; Нехипеяова А.А., 1996).

Известно, что при многих патологических процессах (ишемия миокарда, аритмии сердца, злокачественный рост, лучевая болезнь, интоксикация цитостатиками, гепатотоксинами и др.) поражение мембранных структур в результате интенсификации процессов ПОЛ играет основную роль в патогенезе. Следует отметить и тот факт, что имеется определенное сходство в характере нарушений в мембранах клеток миокарда при ишемии миокарда и в непораженных органах животного опухоленосителя, особенно в печени: происходит резкое уменьшение и в том и в другом случае содержания эндогенных антиоксид антов (при злокачественном росте вследствие их оттока в растущую опухоль, при ишемии миокарда - из-за разрушения при рекомбинации с активными радикалами), что способствует последовательному накоплению в мембранах гидроперекисей, алкипере-кисей, кетоальдегидов и др. Следствием этого являются глубокие перестройки метаболизма клетки и в конечном итоге ее деградация, а в случаях злокачественного роста происходит снижение устойчивости внутренних органов к метасгазированию (Кинзирский А.С., 1994). Материалы конгрессов Европейской секции международного общества по изучению сердца (1991, 1992) свидетельствуют о том, что решение проблемы фармакологического торможения ПОЛ при инфаркте миокарда продолжает оставаться одной из важных задач кардиофармакологии.

В ВНЦ БАВ ведется целенаправленный поиск антиоксид антов производных оксиникотиновой кислоты для защиты миокарда от ишемических и реперфузионных повреждений и производных пространственно затрудненных фенолов для применения в онкологии в качестве гепатопротекторов (Кинзирский А.С., 1991, 1992; Королева А.М., Кинзирский А.С., 1992). Пространственно затрудненные фенолы являются наиболее активными ингибиторами свободных ра-

дикалов, что придает им гепатопротекторные свойства при токсических поражениях печени, сопровождающихся интенсификацией ПОЛ, в той числе при канцерогенезе.

Учитывая неудовлетворенность практической кардиологии в препаратах с антиоксидантными свойствами, оправданным являются дальнейшие исследования кардиопротекторного действия новых производных оксиникотиновой кислоты и пространственно затрудненных фенолов. Что касается проблемы защиты печени от метаста-зирования злокачественных опухолей с помощью пространственно затрудненных фенолов, следует отметать отсутствие систематических исследований в этом плане, несмотря на очевидную практическую значимость этих работ.

Настоящее диссертационное исследование выполнено по плану НИР ВНЦ БАВ в рамках комплексной научно-технической программы: "Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза".

Тема утверждена на заседании Ученого Совета ВНЦ БАВ 7 февраля 1995 года.

Цель исследования. Изучить кардиопротекторное действие антиоксидантов производных оксиникотиновой кислоты при окк-люзионноы инфаркте миокарда, аритмиях и кальциевой перегрузке сердца и гепатопротекгорное действие пространственно затрудненных фенолов при карциноме легкого Льюис и токсическом поражении печени чеггыреххлористым углеродом (CCI«).

Основные задачи исследование.

1. Изучить влияние трех производных оксиникотиновой кислоты (5-гидроксиникотината этаноламина - ЛБК-10, 5-гидроксинико-тнната-трис-(р-гидроксиэтил) аммония - ЛБК-137, 5-падроксини-котина-ЙК-диметил-Р-гидроксиэтил аммония - ЛБК-138) и одного соединения из класса пространственно затрудненных фенолов - (4,4'-(шопронилнденедитио)-бис-2,6-ди-1-бутиленфенола - фенбутола) на формирование зоны некроза миокарда и кардиогемодинамику после окклюзии коронарной артерии в опытах на крысах и собаках.

2. Изучить протнвоаритмическое действие производных оксиникотиновой кислоты при окклюзионных, реперфузионных, адреналиновой и аконнтиновой аритмиях в опытах на крысах и кошках.

3. Изучить значение токсической гепатопатии, вызванной CCI«, в процессах метастазировапия карциномы легкого Льюис и оценить гепатопротекторное действие двух пространственно затрудненных фенолов (фенбутола и фенбудитола) при этой патологии.

Научи ас новизна. Показано, что исследованные производные оксиникотиновой кислоты повышают порог ишемии миокарда, оказывают кардиопротекторное действие при оккшозионном ин-

фаргге миокарда, кальциевой перегрузке кардиомиоцнтов и акони-тиновой аритмии, обладают профилактическим антифибрнллятор-ным действием при окклюзии н реперфузии ншемизированного миокарда, не влияют на переживаемость миокарда в условиях острой аноксии.

Установлено, что ЛБК-10 улучшает показатели метаболизма в ишемизнрованпом участке миокарда, снижает ацидоз в пробах венозной крови из зоны ишемии, уменьшает депрессию сократимости миокарда после коронарной окклюзии. Установлено, что фенбутол уменьшает размеры поражения миокарда при окхлюзнонном инфаркте.

Впервые установлена эффективность антнохсндантов из класса пространственно затрудненных фенолов в плане защиты печени от метастазировання при токсической гепатопатии у животных опухо-леносителен карциномы легкого Льюис.

Практическая ценность. Полученные экспериментальные данные о противоишемическом н антифнбрилляторном действии антиоксидантов производных оксннихотиновой кислоты служат обоснованием для направленного синтеза кардиопротекторных соединений этого класса для внедрения в практическую кардиолоппо в качестве протекторов при свободнорадикальных повреждениях миокарда.

Обоснована целесообразность применения антиоксндантов из класса пространственно затрудненных фенолов при злокачественных новообразованиях в качестве гепатопротехторов.

Материалы исследования внедрены в учебный процесс н тематику НИР кафедр фармакологии Курского государственного медицинского университета, Воронежской и Кемеровской государственных медицинских академий.

Пологлешю, вмиостше на защиту.

1. Исследованные производные окснншсотпновой кислоты относятся к классу практически нетоксичных соединений, обладают выраженным протнвоишемическнм и антифибршшяторньш действием, оказывают кардиопротекторное действие при кальциевой перегрузке кар диомиоцнтов; ЛБК-10 оптимизирует биоэнергетику в ишеми-знроваяном участке миокарда.

2. Фенбутол уменьшает зону некроза миокарда при 4-часовой окклюзии коронарной артерии.

3. Пространственно затрудненные фенолы фенбутол н фенбуди-тол обладают гепатопротехторньш действием при гепатопатии, вызванной СС1д у животных опухоленосителей карциномы легкого Льюис, ингнбнруют метастазнрованне карциномы в печень при токсической гепатопатии.

Основные сведения об апробации работы. Результаты диссертационного исследования докладывались на Всероссийской конференции "Научная работа на кафедре как основа творческого роста преподавателя" (Волгоград, 1993), II и III Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 1995, 1996), I съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), итоговой научной конференции Курского государственного медицинского университета (Курск, 1996).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста (из них 33 страницы занимает список литературы) и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав, в которых изложены результаты собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает в себя 275 источников, из которых 113 иностранных. Таблиц 17, рисунков 10.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 12 кроликах, 29 собаках, 302 крысах, 48 кошках, 30 лягушках, 382 мышах (из них на 95 мышах изучено гагатопротекторное действие при карциноме легкого Льюис). Манипуляции, причиняющие боль, проводили под этаминал-натриевым наркозом (40 мг/кг внугрибрюшинно).

Исследование кардиопротекторного действия. Изучена активность производных оксиникотиновой кислоты ЛБК-10, ЛБК-137, ЛБК-138 и пространственно затрудненного фенола - фенбугола, синтезированных в отделе химии ВНЦ БАВ (зав. - проф. Л .Д. Смирнов). В качестве препаратов сравнения на разных моделях использовали оксиникотиновую кислоту, анаприлин, никорандил, ыексидол, эмоксшшн, лидокаин, тримекаин, натрия оксибутират.

Влияние на порог ишемии миокарда оценивали на бодрствующих кроликах с применением предварительно имплантированного коронарного окклюдера, с помощью которого осуществляли дозированное уменьшение просвета коронарной артерии до появления ЭКГ-признаков ишемии (Розонов Ю.Б., Морозова Т.В., 1984).

Действие на размеры зон ишемии и некроза миокарда после 4-часовой окклюзии коронарной артерии исследовали на нелинейных крысах с помощью дифференциального индикаторного метода (Сернов Л.Н., Гацура В.В, 1989).

Сократимость миокарда, коллатеральное коронарное кровообращение и метаболизм в зоне ишемии миокарда исследовали в опытах на наркотизированных собаках с 60-мннугаой окклюзией коронарной артерии. Регистрировали ретроградный приток крови в зону ишемии и давление в дистальном отрезке литерованной коронарной артерии (Гацура В.В., 1969, 1993). Осуществляли взятие проб крови, дренирующей ишемический очаг (Пичугин В.В., Должиков А.П., 1973). В пробах крови определяли содержание лактата и значения pH. В бедренной артерии регистрировали артериальное давление, с помощью дифференциатора - первую производную левожелудочко-вого давления (dp/dt шах), электрокардиографически определяли частоту сердечных сокращений.

Действие на сердце в условиях острой аноксии оценивали на наркотизированных мышах с регистрацией ЭКГ в грудном отведении (Alano I. et al., 1961).

Антиаритмическое действие изучали в опытах на наркотизированных крысах и кошках с моделированием окклюзионных (в течение 10-мннутной окклюзии) н реперфузионных (в течение 5 мин после восстановления коронарного кровотока) аритмиях. ЭКГ оценивали визуально на кардиоскопе "6-Nek".

Кардиопротекторное действие исследовали на наркотизированных крысах при введении в бедренную вену 10% раствора кальция хлорида в дозе 200 мг/кг (время инфузии 10 с) и при моделировании строфантиновой контрактуры сердца лягушки «in situ» (4 мг/кг в лимфатический мешок). Регистрировали число выживших и время жизни погибших крыс, характер аритмий, время до развития строфантиновой контрактуры сердца.

Исследование гепатопротекторного действия. Эксперименты проводили на мышах линии С57Б1/6, содержавшихся в условиях вивария ВНЦ Б AB. Действие на печень фенбутола и фенбуди-тола при токсической гепатопатии изучали на животных с перевиваемой опухолью карциномы легкого Льюис, полученной из банка опухолевых штаммов ОНЦ РАМН.

Гепатопатню вызывали пер оральным введением 2,5% масляного раствора CCU в объеме 0,2 мл, 2 раза в неделю в течение 2-х недель. Опухолевую ткань имплантировали через 24 ч после второго введения CCI4. Осуществляли общую патоморфологическую оценку легких и печени, проводили подсчет среднего числа метастазов на 1мм2 площади среза планиметрическим методом, рассчитывали индекс ингибировапия метастазов (Автандилов Г.Г., 1990).

Изучение острой токсичности. Эксперименты проводили в опытах на белых мышах массой 18-20 г с определением LD50 по методу Литчфнлда н Уплкоксона (Беленький МЛ., 1963). Исследован-

ные соединения вводили внугрибрюшинно, наблюдение за животными осуществляли в течение двух недель.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с использованием r-критерня Стьюдента, считая достоверными различия с контролем при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Кардиопротекторное действие

Противошпемическое действие ЛБК-10, ЛБК-137, ЛБК-138 и фенбутола исследовано на наркотизированных крысах с окклюзи-онным инфарктом миокарда. Изучаемые соединения и препараты сравнения вводили внутривенно сразу после цитирования коронарной артерии. В качестве препаратов сравнения использовали ана-прилин (1 мгЛсг), никорандил (0,5 мгЛсг) и мексидол (30 мг/кг). Оценка влияния этих соединений на формирование зоны некроза миокарда по отношению к зоне ишемии является важнейшей отправной точкой для характеристики соединений, предлагаемых для лечения ИБС (Сернов Л.Н., 1991; Гацура В.В., Иматдиева P.M., 1994).

Как следует из рис.1, ЛБК-10, также как анаприпин и мексидол, не изменяет площадь зоны ишемии по отношению к общей массе миокарда, тогда как активатор К+-АТФ - чувствительных каналов никорандил уменьшает значение этого параметра. Вместе с тем, ЛБК-10 вызывает дозозависимое, сопоставимое с действием ана-прилина, но менее выраженное, чем после введения никорандила, уменьшение зоны некроза по отношению к зоне ишемии и к общей массе миокарда (рис.1).

О том, что ЛБК-10 обладает противоишемическим действием, говорят и результаты экспериментов с определением порога ишемии миокарда, выполненные на бодрствующих кроликах с предварительно имплантированным окклюдером коронарной артерии. ЛБК-10 (0,2, 1,5, 25 мг/кг) и препараты сравнения анаприлин (1 мг/кг) и никорандил (0,1 и 0,5 мг/кг) повышали порог ишемии. Учитывая, что влияние ЛБК-10 на зону некроза миокарда оказалось менее выраженным, чем в экспериментах с активатором К+-АТФ-чувствительных каналов никорандил он, можно заключить, что ан-тишпемический эффект ЛБК-10 не связан с этой точкой приложения действие.

Отсутствие у ЛБК-10 карднопротекторного действия при острой аноксин указывает па то, что исследованное соединение не оказывает прямого действия на метаболизм е ишеинзнровапном участке миокарда. Это заключение косвенно подтверждается исследованиями A.A. Ниашеловой (1996) о том, что эиергопродукция в пзолнро-

60

50

40 -

30 •

20 ■

10

зона ишемии в % к обшей массе миокарда

зона некроза в % к обшей массе миокарда

зона некроза в%к зоне ишемии

К I 2 3 4 5 6

К 1 2 3 4 5 6 К 1 2 3 4 5 6

Рис. 1. Влияние ЛБК-10 на размеры зон ишемии и некроза при окклюзионном инфаркте миокарда у крыс.

По оси абсцисс: К-контроль; 1,2,3 - ЛБК-10 (5, 20, 100 мг/кг соответственно); 4 - аналрилин (1 мг/кг); 5 - никорандил (0,05 мг/кг); 6 -мексидол (30 мг/кг); * - при р<0,05 в сравнении с контролем.

ванных митохондриях печени при введении производных оксинико-тнновой кислоты не изменяется.

Для углубления представлений о механизме противоишемиче-ского действия ЛБК-10 выполнены эксперименты на наркотизированных собаках с окклюзией коронарной артерии. Внутривенное введение ЛБК-10 на 5-й мин после лнгнрования коронарной артерии в дозе 100 мг/кг приводит к увеличению объемной скорости коллатерального коронарного кровотока (ККК) в течение 45 мин наблюдения (рис. 2) и ретроградного давления в днстальном отрезке лиги-рованной коронарной артерии. Это свидетельствует об улучшении

кровоснабжения миокарда в бассейне литерованной коронарной артерии (Гацура В.В. и др. 1974).

Обращает на себя внимание, что эффект ЛБК-10 развивается на фоне нерезкого повышения артериального давления (АД), особенно на 15-й мин наблюдения (рис. 2), о чем свидетельствует значение ко-

2

Рис. 2. Влияние ЛБК-10 на коллатеральный коронарный кровоток при окклюзионном инфаркте миокарда у собак.

По оси абсцисс: время после коронарной окклюзии (в мин), К -контроль, 1 - ЛБК-10 (100 мг/кг), 2 - анаприлин (1 мг/кг); по оси ординат: изменение кровотока (в % от исходного уровня); * - при р<0,05 в сравнении с контролем.

эффициента К, равное 1.33 (коэффициент К - отношение изменений объемной скорости ККК к изменениям АД, выраженным в % исходного уровня).

Уменьшение объемной скорости ККК (рис.2) и давления в днс-тальном участке литерованной коронарной артерии, зарегистрированное в опытах с анапршшном, говорит о том, что анаприлин, в отличие от ЛБК-10, снижает уровень ретроградного притока крови в зону ишемии.

Повышение уровня ККК в опытах с ЛБК-10 сопровождается снижением ацидоза в пробах крови, дренирующей ишемический очаг, на что указывает уменьшение электроотрицательности АрН и значений прироста лактата в пробах крови, оттекающей из зоны ишемии (рис. 3). После введения анаприлина также имеет место статистически значимое снижение лактата и ацидоза в пробах крови из зоны ишемии миокарда, однако этот эффект был менее выраженным, чем в опытах с ЛБК-10. Из рис. 3 также следует, что при увеличении содержания лактата в венозной крови из зоны ишемии увеличивается значения ДрН в этих пробах крови, что указывает на объективность использованных биохимических критериев оценки состояния метаболизма в зоне ишемии миокарда.

Повышение уровня ККК и уменьшение ацидоза в ишемизиро-ванном участке мнокарда после введения ЛБК-10 сочетается с повышением контрактнльных свойств сердечной мышцы.

Об этом свидетельствует повышение скоростных характеристик сокращения миокарда (dp/dt max), стабилизация уровня артериального давления и частоты сердечных сокращений па значениях, зарегистрированных до литерования коронарной артерии, тогда как в контрольных экспериментах с моделированием оюслюзнонного инфаркта нпокарда артериальное давление и dp/dt шах существенно снижались (табл. 1). При этом важно отметить, что анаприлин в аналогичных условиях, снижая тканевой ацидоз в зоне ишемии миокарда, вызывает депрессию сократимости ишемнзированного миокарда, на что указывает более резкое, чем в контроле падение dp/dt max (табл. 1). ЛБК-10 обладает более выраженным, чем анаприлин, антиацпдотнческим действием. Так, отрицательные значения АрН в течение 60 мин после окклюзии коронарной артерии в экспериментах с ЛБК-10 были в 2-2,5 раза ниже, чем в опытах с анапршшном (рис. 3). Вероятно этот эффект ЛБК-10 связан с улучшением доставки кислорода к ншемизнрованньш кардиомиоцитам, в связи с повышением уровня ККК и стабилизацией мембран сократительных клеток мнокарда из-за угнетения процессов ПОЛ.

На втором этапе исследований установлено положительное действие ЛБК-10 на развитие ранних постокклюзионных и реперфузи-

300 % ЛАКТАТ

200 - *

100 - * * * * *

К т 2 К 1 2 К 1 2

15 30 60 мин

-0.10 - * * * * *

-0.20

-0.30 - * рН

-о.4о ад

Рис. 3. Влияние ЛБК-10 на содержание лактата и рН крови, оттекающей из зоны ишемии миокарда после окклюзии коронарной артерии у собак.

По оси абсцисс: время после окклюзии коронарной артерии; К -контроль; 1 - ЛБК-10 (100 мг/кг); 2 - анаприлин (1 мг/кг); по оси ординат: изменения содержания лактата (в % от исходного уровня) и рН (в ед.); *- при р<0,05 в сравнении с контролем.

Таблица 1

Влияние ЛБК-10 на некоторые показатели кардиогемодинамики после окклюзии коронарной артерии (ОКА) у собак (в % от исходного уровня, М±т)

Серия Время по- АД (1р/(ктах ЧСС

опытов сле ОКА

Контроль 15 -22±4,5 -24±5,4 +5±4,3

30 -23±3,6 -28±4,5 +6±4,7

60 -35±4,3 -40±5,6 +7±3,4

ЛБК-10, 15 +4±5,4* +13±5,0* +2±2,5

100 мг/кг 30 +9±5,2* +7±3,5* -1±2,5

60 -12±2,7* -3±2,4* -12±3,3*

Анаприлин, 15 -14±7,3 -27±3,7 +1±3,2

1 мг/кг 30 -21±8,8 -36±6,7 -3216,6*

60 -40±7,1 -46±7,1 -35±6,2*

Примечание: * - при р<0,05 в сравнении с контролем. Обозначения параметров даны в тексте.

о иных фибрилляций сердца в опытах на крысах и кошках. В частности, при моделировании ранних постокклюзионных аритмий на крысах и кошках ЛБК-10 (20 мг/кг внутривенно) оказывает выраженное противофибршшяторное действие, не уступая по активности анаприлину, тримекаину и лидокаину. Аналогичный эффект наблюдается и при моделировании реперфузнонных аритмии, в том числе и при профилактическом пероральном введении этого соединения крысам за сутки до опыта в суммарной дозе 200 мг/кг. В отличие от препаратов сравнения, влияние ЛБК-10 на развитие тахикардия, экстрасистолии мало отличалось от контроля как в ранний постокк-люзпонный период, так и после реоксигенацни зоны ишемии. Такая специфика антнаритмического действия ЛБК-10 заслуживает внимания.

Учитывая важное значение перегрузки кардиомиоцитов нонамн кальция в развитии нарушений ритмической деятельности сердца, нами исследовано действие ЛБК-10 при моделировании хлорпдкаль-циевой фибрилляции сердца у крыс и строфантнновон контрактуры сердца в опытах па лягушках. Установлено защитное действие этого соединения при кальциевой перегрузке кардиомноцнтов, что монет быть связало с нормализацией внутриклеточного транспорта попоз галыщя.

Исследование кардиопротекторного действия при окклюзионном инфаркте миокарда двух других производных оксиникотиновой кислоты - соединений под лабораторными шифрами ЛБК-137 и Л БК-138 - также выявило у них способность уменьшать зону некроза миокарда после 4-часовой окклюзии коронарной артерии.

Необходимо отметить, что протекторное действие исследованных производных оксиникотиновой кислоты, сопоставимое с действием препаратов сравнения анапршшна и никорандила, реализуется при введении в дозах, составляющих 0,14-2,8% от LDso- Учитывая, что ЛБК-10, ЛБК-137 и ЛБК-138 относятся к группе практически нетоксичных соединений, эти результаты говорят об их достаточно высокой фармакологической активности при экспериментальном инфаркте миокарда.

Для расширения представлений о фармакологической активности ЛБК-137 и ЛБК-138 при повреждениях миокарда, в генезе которых участвуют те же механизмы, что и при интенсификации ПОЛ (гиперадреналинемия, деструкция фосфолипидов мембран сердечных клеток, кальциевая перегрузка кардиомиоцитов), исследовано их действие в условиях острой аноксии, при адреналиновой и акони-тиновой интоксикациях, а также при кальциевой перегрузке кардиомиоцитов, вызванной токсическими дозами кальция хлорида (200 мг/кг в вену крысам) и строфантина (4 ыг/кт в лимфатический мешок лягушкам).

Выявлено умеренное защитное действие ЛБК-138 (20 мг/кг) при адреналнновой интоксикации при еще более слабой активности ЛБК-137 (100 мг/кг) на этой модели. При острой аноксии, также как в экспериментах с ЛБК-10, кардиопротекторного действия не отмечено.

При аконитиновой интоксикации, в развитии которой существенное значение имеет перехненая деградация фосфолипидов мембран кардиомиоцитов (Скрупский В.А., ПлаксинС.Е., 1994), установлено, что при профилактическом введении ЛБК-137 и ЛБК-138 в тех же дозах, что и экспериментах с адреналином, увеличивается число выживших животных соответственно до 77% и 80% (при 100% гибели в контроле) и продолжительность жизни погибших. Эти данные позволяют сделать заключение о тон, что действие ЛБК-137 и ЛБК-138 при аконитиновой интоксикации связано с нормализацией этих процессов.

Результаты экспериментов с кальциевой перегрузкой кардиомиоцитов подкрепляют это заключение. В частности, наблюдавшееся в опытах на крысах н лягушках снижение летальности крыс и увеличение времени развития строфантиновой контрактуры сердца, веро ятно, связаны в увеличением количества ненасыщенных фосфолипи-

дов в мембранах саркоплазматического ретикулума (Бурлакова Е.Б., 1980), что приводит к увеличению захвата ионов кальция, повышению активности Са2+- АТФ-азы (Iwasa I., Honsey М.М., 1983). Это может способствовать сохранению ионного гомеостаза при кальциевой перегрузке индуцированной ПОЛ, нормализации электрофизиологических свойств сердечных клеток, угнетению автоматизма эктопических водителей ритма, повышению порога возбудимости миокарда и антифибрилляторному действию производных оксиникотиновой кислоты.

Исследование противоишемического действия представителя класса пространственно затрудненных фенолов фенбутола осуществлено с целью изыскания препаратов более эффективных, чем дибу-нол и лишенных присущих ему недостатков - синдрома отмены, неадекватного повышения сократимости миокарда в острый период инфаркта миокарда (Голиков А.П. и др. 1986). Нами показано, что фенбутол (nb 50 мг/кг в течение 3 дней до опыта) уменьшает зону некроза по отношению к зоне ишемии до 50±2,5% при 68±4,3% в контроле. Это действие сопоставимо с действием исследованных производных оксиникотиновой кислоты, но уступает по эффекту алапршшну (1 мг/кг в вену) и мексидолу (50 мг/кг в вену). Полученные результаты свидетельствуют о перспективности внедрения в практическую кардиологию фенбутола и целесообразности дальнейших исследований противоишемической активности соединений в ряду пространственно затрудненных фенолов.

2. Гепатопротекторное действие

Учитывая, что при онкологических заболеваниях, а также в результате применения противобластомных средств нередко имеет место специфическое и неспецифическое поражение печени, нами в опытах на мышах исследован характер диссеминации в печень неопластического роста у опухоленосителей карциномы легкого Льюис (LLC) с экспериментальной токсической гепатопатией, вызванной CCI4.

Выполнено 3 группы экспериментов:

- 1 группа. Выполнено 5 серий: интактный контроль; моделирование карциномы легкого Льюис (LLC); моделирование LLC у животных с токсической гепатопатией (LLC+ТГ); лечение опухоленосителей LLC+ТГ циклофосфаном (5 мг/кг внутрибрюшинно) (LLC+ТГ+Ц); лечение опухоленосителей LLC+ТГ проспидином (20 мг/кг внутрибрюшинно) (LLC+ТГ+П).

- 2 группа. Выполнено 4 серии: моделирование LLC; LLC+ТГ; лечение опухоленосителей LLC+ТГ винкристином (0,1 мг/кг внут-рибрюпшнно) (LLC+ТГ+В); лечение опухоленосителей LLC с ток-

сичсской гепатопатией рубомицином (2 мг/кг внугрибрюпшнно) (LLC+ТГ+Р).

- 3 группа. Выполнено 4 серии: моделирование LLC; LLC+ТГ; лечение опухоленоснтелей LLC+ТГ фенбутолом (50 мг/кг перораль-но) (LLC+ТГ+Ф); лечение опухоленоснтелей LLC+ТГ фенбудито-лом (50 мг/кг перорально) (LLC+ТГ+Ф БД).

При гистологическом изучении печени опухоленоснтелей с токсической гепатопатией выявлено, что, в отличие от действия противоопухолевых препаратов циклофосфана, проспидина, винкристина и рубомицина, не влиявших на гисгоструктуру органа, фенбутол и фенбуднтол уменьшают число периваскулярных и гранулоцитарных инфильтратов и дистрофических проявлений, возникающих при отравлении CCI4. Эш данные перекликаются с известными представлениями о гепатопротекторном действии антиоксидантов при патологии печени (Саратиков А.С., Венгеровский А.И., 1995). Нами выявлено, что и в условиях канцерогенеза антиоксиданты из класса пространственно затрудненных фенолов фепбутол и фенбуднтол сохраняют гепатопротекторное действие при токсической гепатопа-тни, вызванной С CL,. Из таблицы 2 следует, что метастазированне в печень карциномы легкого Льюис при токсической гепатопатин выше , чем у животных без этой патологии, что указывает на существенное значение функционального состояния органа для устойчивости в отношении развития метастазов в нем. Установлена прямая зависимость между числом микрометастазов и частотой появления лнмфо-гистпоцитарных инфильтратов в поврежденной печени. При анализе результатов представленных в таблице 2, обращает на себя внимание различие в диссеминации опухолевых клеток LLC в печени экспериментальных животных с токсической гепатопатией, получавших противоопухолевые препараты щпслофосфап, проспидин, вншсрисган и рубомицнн: цнклофосфан и проспидин увеличивали число метастазов в печени, а рубомицин и, особенно, винкристнн число метастазов в печени снижали. Однако, наиболее сильное гепатопротекторное действие оказывал антиоксид ант фенбутол. Фенбуднтол действовал несколько слабее (индекс ннгибирования метаста-знрования в опытах с фенбудитолом составил 50%, в опытах с фенбутолом - 100%). При этом они не влияли на рост первичной карциномы легкого Льюис.

Выявленное нами свойство фенбутола и фенбудитола защищать поврежденную печень от развития в ней вторичных опухолей свидетельствует о возможности повышения эффективности фармакотерапии вторичных опухолей, в том числе и путем использования анти-оксидантов из класса пространственно затрудненных фенолов.

Таблица 2

Влияние циклофосфана, проспидина, вишсристина, рубомицнна, фенбутола и фенбуднтола на процессы метастазирования карциномы LLC в печени

Группа Серия Частота Число Индекс

опытов опытов метаста- метастазов ингибнрова-

зирова- в 1 мм2 ния мета-

ния (в%) (М±ш) стазирова-

ния (в % от

контроля)

LLC 67,7 0,13±0,03

I LLC+ТГ 100 0,32±0,07* -263,6

LLC+ТГ+Ц 100 0,57±0,14* -547,7

LLC+ТГ+П 100 0,60±0,14* -581,8

LLC 100 0,25±0,05

II LLC+ТГ 100 0,56±0,02* -124,0

LLC+ТГ+В 100 0,10±0,03* 60,0

LLC+ТГ+Р 100 0,20±0,06 20,0

LLC 100 0,06±0,02

III LLC+ТГ 100 0,15±0,05 -150,0

LLC+ТГ+Ф 0 0 100

LLC+ТГ+ФБД 20 0,03±0,001* 50,0

Примечание: обозначение серии опытов дано в тексте; * - при р<0,05 в сравнении с LLC и LLC+ТГ.

В заключение следует отметить, что антиокснданты производные оксиникотиновой кислоты и пространственно затрудненных фенолов можно рассматривать как перспективные классы химических соединений для изыскания новых противоншемических, антифибрилля-торных и гепатопротекторных средств (в том числе для защиты печени в условиях опухолевого роста).

ВЫВОДЫ

1. ЛБК-10 повышает порог ишемии миокарда, уменьшает зону некроза мнокарда при 4-часовой окклюзии коронарной артерии, устраняет депрессию сократимости миокарда после коронарной окклюзии, не влияет на пережнваемость мнохарда в условиях острой аиокснн.

2. ЛБК-10 увеличивает объемную скорость коллатерального коронарного кровообращения, уменьшает ацидоз и содержание лак-тата в крови, оттекающей из зоны ишемии.

3. ЛБК-10 оказывает протекторное действие при окклюзионных и реперфузионных фибрилляциях сердца и кальциевой перегрузке кардномиоцитов.

4. ЛБК-137, ЛБК-138 и фенбутол уменьшают зону некроза миокарда при 4-часовой окклюзии коронарной артерии; ЛБК-137 и ЛБК-138 уменьшают число фибрилляций желудочков при хлорид-кальциевой интоксикации, повышают выживаемость животных при введении токсической дозы аконитина, увеличивают время развития строфантиновой контрактуры, не обладают кардиопротекгорным действием при острой аноксии.

5. Фенбутол и фенбудитол, в отличие от противоопухолевых препаратов цикпофосфана, проспидина, винкрисгина и рубомицина уменьшают циркуляторные расстройства, число периваскулярных и гранулоцитарных инфильтратов в печени при токсической гепато-патии у животных опухоленосителей карциномы легкого Льюис.

6. Токсическая гепатопатия, вызванная ССЦ, способствует увеличению числа метастазов в печени при карциноме легкого Льюис; цшслофосфан и проспидин интенсифицируют их развитие; фенбудитол и, особенно, фенбутол оказывают гепатопротекторное действие в отношении развития в ней вторичных опухолей.

7. Производные оксиникотиновой кислоты и пространственно затрудненных фенолов перспективны в плане изыскания кар дно- и гепатопротекторных средств для лечения заболеваний, патогенетически связанных с интенсификацией ПОЛ.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется проведение исследовании по изысканию проти-воишемических средств среди новых производных оксиникотиновой кислоты и пространственно затрудненных фенолов для расширения арсенала средств, оказывающих антиоксидантное действие.

2. Производные оксиникотиновой кислоты ЛБК-10 и ЛБК-138 рекомендуются для проведения доклинических токсикологических исследований с целью подготовки материалов в Фармакологический государственный комитет МЗМП РФ для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

3. Для профилактики развития метастазов печени при канцерогенезе рекомендуется продолжить исследования о возможности приме-

нения антноксидаятов производных пространственно затрудненных фенолов в качестве гепатопротекторов при этой патологии.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Покровский М.В., Елькова К.В. Защитное действие эмоксн-пина на моделях питуитрин-изадрииовой миокардиопатии, стрес-сорных повреждений миокарда и коарктации аорты //Науч. работа на каф. как основа творч. роста преподавателя: Тез. докл. Всерос. конф.- Волгоград, 1993. - С.63.

2. Некоторые аспекты поиска антифибриллянтов/Л.А. Белова, И.В. Светликова, К.В. Елькова и др7/Н Рос. нац. Конгр. «Человек и лекарство»: Тез. докл. - М.: РЦ «Фармединфо», 1995. - С.69.

3. Оптимизация действия противоишемических средств /Л .А. Белова, A.A. Некипелова, C.B. Зюзина и др. //Фундамент, исследования как основа создания лекарств, средств: Сб. тез. I съезда Рос. науч. о-ва фармакологов. - М., 1995. - С.42.

4. Исследование спектра противошпемической активности некоторых групп потенциальных кардиофармакологических средств /И.В. Светликова, К.В. Елькова, Т.В. Костычева и др. //III Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: Тез. докл. - М.: РЦ «Фармединфо», 1996. - С.47.

5. Елькова К.В. Модифицирующее влияние экспериментальной гепатопатни на процессы диссеминации карциномы легкого Льюис //Достижения соврем, фармацевт, науки и практики на рубеже 21 века: Материалы науч.-практич. конф., посвящ. 30-летию фармацевт. фак. Курского гос. мед. ун-та. - Курск, 1996. - С.268-269.

Подписано в печать 19.11.96. Формат 60 х 84 1/16. Бумага для копировальных аппаратов. Печать на копировальном аппарате. Усплечл.1,0. Тираж 100 экз.