Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологическая коррекция нарушений иммунитета и структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина при патологии органов панкреатобилиарной области

На правах рукописи

Орлова Екатерина Александровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУНИТЕТА И СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ ПРОИЗВОДНЫМИ 3-ОКСИПИРИДИНА ПРИ ПАТОЛОГИИ ОРГАНОВ ПАНКРЕАТОБИЛИАРНОЙ ОБЛАСТИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-1 ДЕК 2011

Курск-2011

005003347

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Конопля Александр Иванович доктор биологических наук Авдеева Елена Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лазарев Алексей Иванович доктор медицинских наук Николаев Сергей Борисович

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Защита состоится « 1 г. в /^^часов на заседании

диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан «

2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Патология органов панкреатобилиарной зоны занимает ведущее место среди болезней органов пищеварения, которыми, по различным статистическим данным, страдают до 2 миллиардов человек. В странах СНГ ежегодно регистрируется до 1 миллиона человек, страдающих патологией печени и поджелудочной железы, что в 100 раз превышает распространенность ВИЧ-инфекции (Подымова С.Д., 2010).

В развитии заболеваний печени и поджелудочной железы значительную роль играют иммунометаболические и оксидантные нарушения, в связи с этим особого внимания заслуживают работы, в которых изучаются механизмы регулирования иммунного и оксидантного гомеостаза, в том числе протекающие с участием эритроцитов (Лазарева Г.А., 2006; Шульпекова Ю.О., 2006; Конопля А.И., 2008). Важная роль этих клеток в регуляции гомеостаза обусловлена тем, что изменение структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов входит в цепь приспособительных механизмов, поддерживающих постоянство внутренней среды как в норме, так и в условиях патологии (Прокопенко Л.Г., 2006; Гаврилюк В.П., 2009; Конопля A.A., 2010).

Принимая во внимание то, что нарушение иммунологических функций при многих видах патологии, в том числе при заболеваниях печени и поджелудочной железы, обусловлено дезорганизацией мембран клеток различных органов и тканей, иммуноцитов и клеток их микроокружения, в том числе и эритроцитов, есть основания полагать, что выраженного иммуномодулирующего и репаративного эффекта в этих условиях можно ожидать от введения препаратов, обладающих иммуномодулирующими, антиоксидантными и мембранопро-тективными эффектами.

Особое место среди подобных препаратов занимают производные 3-оксипиридина (3-ОП), относящиеся к простейшим гетероциклическим аналогам ароматических фенолов и проявляющие различные свойства. Являясь структурными аналогами соединений группы витамина В6, играющих важную роль в жизнедеятельности организма, производные 3-ОП обладают широким спектром биологического действия. В ряде исследований у препаратов этой группы были обнаружены выраженные иммуномодулирующие, антиоксидантные и противо-ишемические эффекты (Авдеева Е.В., 2007; Рыбников В.Н. и др., 2008; Николаев С.Б., 2010). Вместе с тем в норме, в условиях токсического поражения печени и острого панкреатита, иммунометаболические эффекты и способность модифицировать белково-липидный спектр мембраны эритроцитов производных 3-ОП изучены недостаточно.

Цель работы: установление фармакологической эффективности производных 3-оксипиридина в коррекции нарушений иммунитета и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой экспериментальной патологии панкреатобилиарной области.

Задачи работы.

1. Оценить влияние «Этоксидола», нового производного 3-ОП (соединения с лабораторным шифром ХС-9) и «Мексидола» на формирование гумо-

ральной и клеточной форм иммунного ответа, функциональную активность нейтрофилов периферической крови здоровых животных.

2. Изучить корригирующие эффекты производных 3-оксипиридина в коррекции нарушений врожденного и адаптивного иммунитета у животных с экспериментальными острым токсическим поражением печени и острым панкреатитом.

3. Установить влияние «Этоксидола», соединения ХС-9 и «Мексидола» на структурно-функциональные свойства эритроцитов интактных крыс.

4. Определить характер и выраженность изменения содержания белков и липидов в мембране эритроцитов животных с острым токсическим поражением печени и острым панкреатитом.

5. Оценить влияние производных 3-оксипиридина на изменения белкового и липидного спектра мембраны эритроцитов животных с экспериментальной патологией панкреатобилиарной области.

Научная новизна. Впервые экспериментально установлены выраженные стимулирующие эффекты «Этоксидола» и соединения с лабораторным шифром ХС-9 на формирование адаптивного и врожденного иммунитета. «Мексидол», в большей степени «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9, оказывают выраженные иммуномодулирующие эффекты у животных как с повышенной, так и со сниженной иммунной реактивностью, обусловленной развитием патологии панкреатобилиарной области. Впервые выявлена способность производных 3-оксипиридина нормализовать изменения показателей структурно-функциональных свойств эритроцитарной мембраны у животных с острым токсическим поражением печени, вызванным различными по химической структуре токсикантами, и в условиях экспериментального острого панкреатита.

Практическая значимость. Результаты работы устанавливают закономерности иммуномодулирующего, антиоксидантного и мембранопротекторно-го действия изученных производных 3-ОП при экспериментальной патологии органов панкреатобилиарной области. Выявленные фармакологические эффекты «Мексидола» и «Этоксидола» при острой токсической гепатопатии и остром панкреатите обосновывают возможность их клинического применения для коррекции нарушений структурно:функциональных свойств эритроцитов при патологии органов панкреатобилиарной области. Установленные свойства соединения с лабораторным шифром ХС-9 открывают перспективы его испытаний в клинической практике при остром токсическом поражении печени и остром панкреатите.

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского государственного медицинского университета, Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, Воронежского государственного университета, медицинского института Орловского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У интактНых животных «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9 оказывают выраженные стимулирующие эффекты на формирование адаптивного и врожденного иммунитета, увеличивают в мембране эритроцитов содержание анионтранспортного белка, актина, тропомиозина, глице-ральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, глутатион-8-трансферазы, снижают уровень глидеридов, холестерола и его эфиров.

2. При острой токсической гепатопатии и остром панкреатите введение «Мексидола» корригирует, но не до показателей здоровых животных, иммунную реактивность и функциональную активность нейтрофилов периферической крови, «Этоксидол» нормализует развитие гуморального и клеточного иммунитета, соединение с лабораторным шифром ХС-9 нормализует функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

3. В условиях панкреатобилиарной патологии возможности коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина располагаются в следующей последовательности по мере убывания их эффектов: соединение с лабораторным шифром ХС-9-> «Этоксидол»-» «Мексидол».

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации представлены на конференциях Курского государственного медицинского университета: 74-й научной конференции КГМУ, сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: Теория, практика, инновации» (Курск, 2009), межвузовской научной конференции, посвященной памяти профессора В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ «Актуальные вопросы фармакологии и фармации» (Курск, 2009), 76-й Всероссийской научной сессии сотрудников Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: Взгляд в будущее» (Курск, 2011); III Всероссийской конференции молодых ученых, организованной Воронежской государственной медицинской академией им. H.H. Бурденко и КГМУ (Воронеж, 2009); X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009); XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010); XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011); совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, фармации ФПО, управления и экономики фармации, фармакогнозии и ботаники, нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета (2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 7 в рекомендуемых ВАК РФ изданиях. В работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Личный вклад автора. Автором составлен план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проведены экспериментальные исследования, проанализированы совместно с руководителями полученные результаты, сделаны выводы

и практические рекомендации. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей личного участия автора 75-95%.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 таблицами и 7 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 110 отечественных и 74 иностранных источника.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования. Исследования проведены на 447 здоровых половозрелых крысах породы Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 ч. с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Животных выводили из опыта декапитацией под эфирным наркозом. Для исследования от животных получали печень, селезенку, форменные элементы и плазму крови.

Исследуемые препараты и соединения. Были исследованы производные 3-ОП («Этоксидол», соединение с лабораторным шифром ХС-91 и, в качестве препарата сравнения, «Мексидол»), которые вводили пятикратно, через 24 часа, внутрибрюшинно, в дозах: ХС-9 - 35 мг/кг, «Этоксидол» и «Мексидол» по 50 мг/кг. Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м2) для крысы и человека в зависимости от массы тела (Freireich E.J., 1966). Производные 3-ОП начинали вводить одновременно с токсикантом или моделированием ЭОП.

Модель воспроизведения острого токсического поражения печени и острого панкреатита. Острое токсическое поражение печени у лабораторных животных моделировали путем внутримышечного введения четыреххлористого углерода (3 мл/кг в виде 50% раствора в оливковом масле пятикратно с интервалом 24 ч.) (Алексеева H.H. и др., 1991) или внутрижелудочным введением индометацина (трехкратно, с интервалом 24 ч., по 5 мг/кг) (Скакун Н.П., Клим-нюк Е.В., 1990).

1 «Этоксидол» и соединение ХС-9 синтезированы в ОАО «ВНЦ БАВ» (Московская обл., г. Старая Купавна) и любезно предоставлены для исследований профессором Л.Н. Серновым.

Острый панкреатит моделировали по R.N. Wang (1995) в модификации С.А. Алехина (2006) путем перевязки протока левой и правой доли поджелудочной железы и стимуляцией прозерином трехкратно через каждый час в дозе 0,2 мг/кг.

Оценка иммунной реактивности, функциональной активности ней-трофилов периферической крови. В качестве антигена в опытах использовались эритроциты барана. Для развития гуморального иммунного ответа ЭБ вводили внутрибрюшинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела. Выраженность ГИО оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа АОК (Мальберг К., Зигль Э., 1987).

ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 M раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл физраствора (разрешающая доза). О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них карио-цитов (Федосеева Т.В. и др., 1993).

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась по фагоцитарному показателю, фагоцитарному числу и индексу активности фагоцитоза (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991). Кислородзависимую активность оценивали фотометрически в реакции восстановления нитросинего тетразолия по показателям оптической плотности (mOD) в НСТ тестах спонтанном, стимулированном неопсонизированным и опсонизированным зимоза-ном. Кроме того, вычисляли коэффициенты функционального резерва - КАо (отношение опсонизированного НСТ-теста к спонтанной реакции), КАн (отношение неопсонизированного НСТ-теста к спонтанной реакции) и КО (соотношение опсонизированного и неопсонизированного НСТ-теста) (Зинкин В.Ю., Годков В.Г., 2004). Выведение животных из опыта осуществляли через 24 часа после последнего введения производных 3-ОП.

Определение биохимических показателей. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию ацилгидропереки-сей и малонового диальдегида в плазме крови (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977). Кроме этого, определяли активность каталазы (Королюк MA. и др., 1988). Общую антиокислительную активность плазмы крови определяли методом, основанным на степени ингибирования аскорбат- и ферроиндуцированно-го окисления твина-80 до МДА. Оптическую плотность измеряли при 532 нм ' через 48 часов инкубации при 40°С (Галактионова Л.П. и др., 1998)2.

Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу Е. Beutler (1985) с незначительной модификацией. Цельную кровь отстаивали дважды в растворе 10 мМ Na-фосфатного буфера (рН=7,4), содержащего 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37°С. После

2 Все исследования проведены в лабораториях биохимии и иммуноферментнога анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета и клинико-диагностической лаборатории МУЗ «Городская клиническая больница № 4 г. Курска», за что мы выражаем сотрудникам данных подразделений глубокую признательность.

этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографи-ческой колонке через HBS-целлюлозу.

В целях определения общей сорбционной способности эритроцитов, обусловленной наружной архитектоникой клеточцой мембраны по отношению к витальным красителям, 1 мл суспензии эритроцитов смешивали в пробирке с 3 мл 0,025% раствора метиленового синего, инкубировали 10 мин при комнатной температуре и центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин. При длине волны 630 нм определяли оптическую плотность исходного раствора и надосадочной жидкости в единицах экстинкции по отношению к изотоническому раствору натрия хлорида (Тогайбаев А.А. и др., 1988). Количество поглощенного красителя выражали в процентах по формуле:

ССЭ = 100- IOOC2/C1,

где ССЭ - сорбционная способность эритроцитов в % поглощенного красителя;

С | - оптическая плотность раствора до инкубации с эритроцитами в ед. экстинкции;

Сг - оптическая плотность раствора после инкубации с эритроцитами, ед. экстинкции.

Исследовали также сорбционную емкость гликокаликса эритроцитов, обусловленную олиго- или полисахаридными цепями гликопротеидов, для аль-цианового синего, который является катионным красителем фталоцианиновой группы и обладает способностью связываться с гликолипидами, гликопротеи-дами и кислыми мукополисахаридами. В низкой концентрации альциановый синий не повреждает клетки, не проникает в цитоплазму, но сорбируется в количестве, пропорциональном содержанию белков и углеводов в гликокаликсе, отражая степень его вязкости (Семко Г.А., 1998). Для определения сорбционной емкости гликокаликса 1 мл суспензии эритроцитов, содержащей 4 • 107 клеток, смешивали с равным объемом изотонического раствора натрия хлорида, содержащего 0,005% альцианового синего, инкубировали 10 мин при температуре 21°С и центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин. При длине волны 617 нм, используя в качестве контроля изотонический раствор натрия хлорида, измеряли концентрацию красителя в надосадочной жидкости. Количество поглощенного альцианового синего рассчитывали в граммах на 1 эритроцит.

О функциональном состоянии эритроцитов судили также по накоплению малонового диальдегида, который определяли в мембранах эритроцитов соответственно уровню связывания его с тиобарбитуровой кислотой (Банкова В.В. и др., 1987). Результаты выражали в нмоль в 10б эритроцитов (нмоль • 106эр.).

Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в растворе 10 мМ Na-фосфатного буфера, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в растворе 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатного буфера.

Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике

G. Fairbanks (1971). Денситометрирование одномерных электрофореграмм проводили на лазерном денситометре "UltroscanXL". Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего как маркерный белок. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроцитов.

Содержание липидов в мембране эритроцитов также определяли при помощи электрофореза. Проявление хроматограмм осуществляли опрыскиванием 5% спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты с последующим нагреванием пластин в термостате при 100°С в течение 5 мин до появления голубых пятен липидов. После проявления пластину сразу же денситометрирова-ли. Для идентификации липидных пятен применяли стандартные образцы нейтральных липидов и фосфолипидов производства фирмы "Sigma" (США), определяя относительную подвижность фракций. Уровень содержания определяли денситометрическим методом, с использованием программы "One Dscan" в отраженном свете. Распределение липидного материала в пятне практически соответствовало гауссовой кривой и обеспечивало пропорциональность между количеством липидов и площадью их пиков.

Статистическая обработка материала. Статистическую обработку материала проводили путем вычисления средней арифметической и ошибки средней. Существенность различий средних величин оценивали с помощью критериев Стьюдента, Вилкоксона и Манна-Уитни. Достоверными считали различия при р<0,05 (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Влияние производных З-оксппириднна на формирование адаптивного и врожденного иммунитета, оксидантные показатели, структурно-функциональные свойства эритроцитов интактных животных. При исследовании формирования гуморальной формы иммунного ответа у интактных животных, которым вводили производные 3-ОП, было установлено, что введение «Мексидола» не влияло, а «Этоксидола» и соединения с лабораторным шифром ХС-9 повышало в селезенке количество иммунных АОК на ЭБ. В отношении формирования ГЗТ на ЭБ у интактных животных на фоне применения производных 3-ОП было обнаружено, что введение «Мексидола» и «Этоксидола», но в большей степени соединения с лабораторным шифром ХС-9 повышало РМ и PK по сравнению с контрольной группой животных (рис. 1).

При исследовании фагоцитарной активности гранулоцитов было установлено, что применение соединения ХС-9 и «Мексидола» повышало, а введение «Этоксидола» не влияло на поглощающую способность нейтрофилов здоровых животных. Введение «Мексидола» или «Этоксидола» не оказывало влияния ни на один показатель кислородзависимой активности полиморфноядерных лейкоцитов здоровых животных (рис. 1).

Рис. 1. Влияние производных 3-ОП на формирование адаптивного и врожденного иммунитета у интактных животных. Условные обозначения:

1 радиусом окружности отмечены показатели здоровых животных,

2 - I I - показатели интактных животных, которым вводили «Мексидол»,

3 -__- показатели интактных животных, которым вводили «Этоксидол»;

4 - - - показатель интактных животных, которым вводили ХС-9;

5 - ® ~ Р<0,05, показатели, достоверно отличающиеся от нормы;

6 - ~ Р<0,05, показатели животных, получавших «Этоксидол»,

достоверно отличающиеся от показателей животных, получавших «Мексидол»;

7 - * - р<0,05, показатели животных, получавших соединение ХС-9,

достоверно отличающиеся от показателей животных, получавших «Мексидол»;

Применение соединения ХС-9 повышало метаболическую способность гранулоцитов в спонтанном и стимулированном неопсонизированным и опсо-низированным зимозаном НСТ-тестах. При этом, на фоне повышения кисло-родзависимой активности нейтрофилов периферической крови, резервы клеточной активности (КАн, КАо и КО) в этой группе животных оставались нормальными (рис. 1).

Таким образом, у интактных животных все производные 3-ОП стимулируют развитие адаптивного и врожденного иммунитета, при этом «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9 в большей степени стимулируют формирование ГИО, а соединение ХС-9 - развитие ГЗТ на ЭБ и функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

Введение производных 3-ОП интакгным животным снижало содержание как промежуточных, так и конечных продуктов ПОЛ. «Мексидол», «Этокси-дол», но в большей степени соединение ХС-9 повышали активность катапазы, ОАА и уровень СМК0 плазмы крови здоровых животных (табл. 1).

Таблица 1

Влияние производных З-ОП на оксидантные показатели и содержание СМко У интакгных животных

Показатель Единицы измерения 1 2 3 4

Контрольная группа Введение «Мексидола» Введение «Этоксидола» Введение ХС-9

МДА мкмоль/л 2,76±0,07 1,53±0,07-1 1,84±0,08'' 1,18±0,1Г'

АГП усл. ед. 1,1±0,03 0,5±0,12"' 0,8±0,Г' 0,7±0,03''

Каталаза мккат/л 11Д±0,51 17,7±1,7'' 20,0±0,8"' 25,1±0,5''"J

ОАА о/ /О 47,9±0,55 50,8±0,57м 52,4±0,55*' 62,9±0,35''"3

СМмо мкмоль/л 1,75±0,09 2,58±0,14*' 3,43±0,14'и 3,15±0,12*u

Примечание. Здесь и в последующих таблицах * - р<0,05; цифра рядом со звездочкой указывает на группу, по отношению к которой отличие достоверно.

Таким образом, все изученные производные 3-ОП обладали антиокси-дантными эффектами, более выраженными у «Этоксидола» и соединения с лабораторным шифром ХС-9.

При изучении влияния производных 3-ОП на структурно-функциональные свойства эритроцитов интакгных животных установлено, что введение «Мексидола», соединения ХС-9, в большей степени «Этоксидола», повышало в мембране эритроцитов интактных животных представительность АТБ, актина, тропомиозина, Г-З-ФД, Г-S-T, увеличивало сорбционные показатели и снижало уровень МДА. Производные 3-ОП не влияли на большинство показателей фосфолипидного спектра мембраны эритроцитов здоровых животных, незначительно, но статистически достоверно снижали уровень глицери-дов, холестерола и его эфиров.

Коррекция иммунных и оксидантных нарушений, структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина при остром токсическом поражении печени. В настоящее время не вызывает сомнения значительная роль нарушений иммунного гомеостаза в развитии различных патологий, однако сами заболевания вносят не меньший вклад в формирование нарушений иммунитета, взаимно усугубляя друг друга (Гаврилюк В.П. и др., 2007). Пусковым звеном механизма развития метаболической имму-носупрессии при гепатопатиях и остром панкреатите является нарушение структуры и проницаемости клеточных мембран, обусловленное сдвигом тканевого баланса про- и антиоксидантов в сторону снижения последних, усиление свободнорадикальных процессов и перекисного окисления липидов клеточных мембран и выходом в сосудистое русло и образованием в нем многочисленных соединений, обладающих как иммуностимулирующими (гликозаминогликаны, протеолитические ферменты и др.), так и иммуносупрессирующими (окислительно-модифицированный холестерин, ai-антипротеазы, а2-макроглобулин, билирубин, липопротеиды очень низкой и низкой плотности, ацилгидропереки-

си, малоновый диальдегид, желчные кислоты, С-реактивный белок и др.) эффектами (Прокопенко Л.Г., Конопля А.И., 2000; Конопля А.И., 2008).

При изучении формирования адаптивного иммунитета на ЭБ было установлено, что у животных с ОТПП, вызванным введением ЧХУ, наблюдалась стимуляция развития как ГИО, так и ГЗТ. При ОТПП, вызванном введением ЧХУ, применение «Мексидола» корригировало, но не до контрольных значений, а «Этоксидола» и соединения ХС-9 - нормализовало количество иммунных АОК на ЭБ в селезенке отравленных животных и показатели, характеризующие ГЗТ.

У крыс с токсическим поражением печени, вызванным введением индо-метацина, наблюдалось угнетение ГИО и ГЗТ на ЭБ. При острой токсической гепатопатии, вызванной поступлением в организм индометацина, применение «Мексидола» не влияло, соединения ХС-9 корригировало, а «Этоксидола» нормализовало показатели иммунной реактивности. При этом все производные 3-ОП нормализовали развитие ГЗТ на ЭБ.

Таким образом, производные 3-ОП («Мексидол», в большей степени «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9) оказывают выраженные иммуномодулирующие эффекты у животных, как с повышенной, так и со сниженной иммунной реактивностью, обусловленной развитием патологии панкреатобилиарной области.

У крыс с токсическим поражением печени, вызванным введением различных по химической структуре токсикантов, установлено снижение фагоцитарной и повышение кислородзависимой активности гранулоцитов. Функциональные резервы нейтрофилов периферической крови (КАн, КАо, КО) в группе животных с острой четыреххлористой гепатопатией снижались, а у крыс с токсическим поражением печени, вызванным индометацином, частично повышались.

Введение производных 3-ОП крысам с токсическим поражением печени, вызванным ЧХУ, корригировало, но не до уровня контрольной группы показатели функциональной активности нейтрофилов периферической крови. У животных с острой индометациновой гепатопатией «Мексидол» корригировал, а «Этоксидол» и соединение с шифром ХС-9 - нормализовали фагоцитарную и кислородзависимую активность гранулоцитов периферической крови.

Таким образом, проведенные исследования указывают на выраженные иммуномодулирующие свойства производных 3-ОП (в большей степени «Этоксидола» и соединения ХС-9) в условиях токсического поражения печени, вызванного различными по природе и механизму действия гепатотропными токсикантами. Исследованные производные 3-ОП обладают выраженными, по всей видимости, опосредованными иммуномодулирующими эффектами, корригируя показатели иммунного гомеостаза как в условиях повышенной, так и в условиях сниженной иммунной реактивности. Учитывая, что формирование иммунного ответа в норме и при патологии зависит от наличия и активности гуморальных факторов, выделяемых клетками селезенки в ответ на антигенный стимул (Конопля А.И. и др., 1985; Кашкин К.Н., 1998), можно допустить, что иммуномодулирующий эффект этих соединений связан с влиянием на выработ-

ку гуморальных факторов как иммуноцитами, так и клетками различных органов и тканей (в первую очередь гепатоцитами) при измененной иммунной реактивности в условиях патологии, характеризующейся нарушением процессов перекисного окисления липидов и, как следствие, нарушением целостности клеточных мембран, так как патогенез многих заболеваний, в том числе и патология органов панкреатобилиарной области, напрямую связан с нарушением равновесия между процессами образования и нейтрализации продуктов ПОЛ (Смирнов Л.Д., 2005; ЕсМт М., 2003).

У крыс с ОТПП, вызванным введением тетрахлорметана или индомета-цина, выявлено статистически значимое повышение содержания продуктов ПОЛ (АГП - в 1,84-5,6 раза, МДА - в 1,4-8,2 раза), СМц0 - в 4,1 раза. При этом, достоверно снижалась активность каталазы и ОАА.

У всех исследуемых соединений 3-ОП при ОТПП обнаружены выраженные антиоксидантные эффекты, поскольку после их введения нормализовался уровень АГП и МДА. Активность каталазы после введения «Мексидола» нормализовалась, а при применении «Этоксидола» и ХС-9 - повышалась по сравнению с контрольной группой. ОАА плазмы крови на фоне введения «Мексидола» и «Этоксидола», в большей степени ХС-9, повышалась, но не до показателей здоровых животных. Кроме этого, введение «Мексидола» или «Этоксидола» частично (не до показателей здоровых животных), а соединение ХС-9 -полностью нормализовало уровень СМда-

Известно, что адаптивные реакции, протекающие в организме, в том числе при оксидантно.м стрессе, вовлекают множество систем и физиологических процессов, одним из которых является метаболизм наиболее универсального регуляторного фактора - оксида азота, эффекты которого напрямую зависят от его концентрации. Как избыток, так и дефицит этого метаболита крайне неблагоприятны для организма. При этом основной механизм токсического действия оксида азота - это реакция с супероксидом и образование пероксинитрит иона, который наиболее интенсивно окисляет белки, липиды и генетический аппарат клетки. Повреждение нуклеиновых кислот в клетке активирует ядерный фермент полиаденозинтрифосфат-рибозо-полимеразу. Массивная активация этого фермента приводит к аденозин-дифосфат-рибозилированию и истощению запасов никотинамиднуклеитида, в попытке ресинтезировать который истощается аденозинтрифосфат. В условиях запускаются механизмы некроза или апоптоза клеток.

Введение производных 3-ОП интактным животным вызывало умеренное, но достоверное повышение концентрации СМмо в плазме крови, что, учитывая описанные механизмы, можно охарактеризовать как положительный эффект, так как результатом этих эффектов будет увеличение энергетического потенциала клеток. В то же время при токсической гепатопатии, вызванной введением тетрахлорметана, наблюдалось значительное повышение концентрации в плазме крови СМко, вероятно, обусловленное активацией фермента ¡N0-синтазы или процессов ПОЛ. В условиях острой токсической гепатопатии препараты («Мексидол» и «Этоксидол») корригировали, а соединение ХС-9 - нормализовало уровень СМШ. Описанные эффекты, вероятно, опосредованные и обусловлены антиоксидантной активностью производных 3-ОП, так как при от-

сутствии активных радикалов кислорода прекращается синтез пероксинитри-тиона. Однако не исключено и их ингибирующее влияние на фермент iNO-синтазу производных 3-ОП.

При моделировании острого токсического поражения печени, вызванного введением ЧХУ, у животных были выявлены изменения ряда показателей, характеризующих структурно-функциональные свойства эритроцитов. Наблюдалось снижение представительности а- и /3-спсктрина, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, Г-З-ФД, Г-S-T, СЕГ, ССЭ и повышение уровня белка полосы 4.1, пал-лидина, дематина, актина. Кроме этого, в данной группе животных повышалась внутриклеточная концентрация МДА (табл. 2). После моделирования у животных ОТПП в эритроцитарной мембране повышался уровень X, СЖК, МГ, ДГ, ЛФ и снижался - ЭХ, ТГ, ФХ, ФЭ, ФИ и СМ.

Использование у животных с ОТПП, вызванным введением ЧХУ, «Мексидола» корригировало в мембране эритроцитов уровень обеих подфракций спектринов, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, актина, Г-S-T, СЕГ, ССЭ и внутриклеточную концентрацию МДА. Введение отравленным животным соединения ХС-9 в отличие от «Мексидола» нормализовало уровень в мембране красных клеток крови обеих подфракций спектринов, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, дематина, Г-З-ФД, тропомиозина, СЕГ, ССЭ. Применение «Этоксидола» более эффективно корригировало и нормализовало представительность белков и липидов в мембране красных клеток крови у животных с ОТПП: нормализовало уровень обеих подфракций спектринов, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, дематина, Г-З-ФД, тропомиозина, СЕГ, ССЭ, максимально приближая показатели к их значениям у интактных животных (табл. 2).

В отношении липидного спектра мембран эритроцитов у крыс с ОТПП, введение «Мексидола» корригировало уровень холестерина и его эфиров, СЖК, глицеридов, ФХ, ЛФ и ФИ. Инъекции животным соединения ХС-9 в отличие от «Мексидола» нормализовали концентрацию в мембране клеток СЖК, ТГ, ФХ, ФЭ, ЛФ и СМ, а использование «Этоксидола» - более эффективно по сравнению с другими производными 3-ОП корригировало и нормализовало содержание X, СЖК, ТГ, ФХ, ФЭ, ЛФ и СМ.

Таким образом, в условиях ОТПП введение «Мексидола» корригирует, но не до уровня здоровых животных показатели иммунной реактивности на ЭБ, функциональной активности нейтрофилов периферической крови и структурно-функциональных свойств эритроцитов. Соединение с лабораторным шифром ХС-9 нормализует фагоцитарную и кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови, «Этоксидол» - развитие гуморального и клеточного иммунитета. Кроме этого, препарат и соединение в большей степени по сравнению с «Мексидолом» корригируют нарушения структурно-функциональных свойств эритроцитов.

Таблица 2

Коррекция нарушений представительности белков в мембране эритроцитов производными 3-ОП у животных с ОТТП, вызванным введением ЧХУ

Показатели Единицы измерения 1 2 3 4 5

Контроль Без препаратов Введение «Мексидола» Введение ХС-9 Введение «Этоксидола»

а-спектрин (1а) М1'% 110,3±5,21 74,3±3,8 т 78,4±4,Г' 91,5±4,ЗГ1,2 88,5±3,12'и

0-спектрин (10) мг% 93,1±4,31 79,5±4,3"' 82,4±3,П°' 85,6±2,74*' 87,1±3,07"м

Анкирин (2) мг% 71,0±2,04 52,6±2,74'' бода.ог''"1 64,3±3,41"''2 66,2±3,71'2

ЛТБ (3) мг% 169,6±6,22 142,7±5,47*' 150,7±4,81'' 159,5±4Д''"' 164,7±5,89'2"4

Белок полосы 4.1 (4.1) мг% 81,4±4,1 96,1±5,3' 90,3±5,12 88,1±2,17'2 86,3±3,2'2

Паллидин (4.2) мг% 62,13±4,09 74,7±4,8"' 75,2±3,31"' 73,3±4,7'' 70,2±2,2''

Белок полосы 4.5 (4.5) мг% 69,79±3,13 52,6±3,82м 60,2±2,27"''2 64,7±3,12'2 65,8±4,3'2

Дематин (4.9) мг% 41,2±2,05 45,6±3,33 42,9±2,83 40,2±4,5 39,0±3,21

Актин (5) мг% 101,1±4,15 117,7±5,64"' 114,2±5,83'' 110,3*4,81'' 113,8±4,25 м

Г-З-ФД (6) мг% 54,3±2,0 40,7±3,14'' 39,5±2,81*' 45,8±2,12'' 48,2±3,2'м

Тропомиозин (7) мг% 65,3±3,09 56,2±3,81м 60,8±4,03 59,6±5,12 62,8±4,81

Г-5-Т(8) мг% 59,2±2,45 44,3±2,9]м 52,8±ЗЛ2''-2 64,3±3,7Г2':| 68,5±3,91''"3

СЕГ 10"12 г/эр. 2,4±0,12 1,8±0,09'' 2,01±0,08'1'2 2,31±ОДГ2,1 2,51±0,13'2''

ССЭ % 46,2±3,0 12,2±4,84'' 30,4±1,1842 35,6±1,Г'^ 36,1±1,83''"3

МДА нмоль * 10ь эр. 3,21±0,09 7,27±0,39'' 5,01±0,8Г1,2 4,12±0,33"'"5 4,05±0,81'1'3

Эффективность производных 3-оксипиридина при экспериментальном остром панкреатите. У крыс с ЭОП наблюдалось угнетение ГИО и ГЗТ на ЭБ. «Мексидол» у экспериментальных животных корригировал, но не до показателей здоровых животных, а «Этоксидол» и соединение ХС-9 - нормализовали количество иммунных АОК на ЭБ в селезенке крыс. При этом все производные 3-ОП нормализовали развитие ГЗТ на ЭБ. Таким образом, как и у животных с ОТПП, производные 3-ОП («Мексидол», в большей степени «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9) оказывают выраженные иммуно-модулирующие эффекты (табл. 3).

Таблица 3

Коррекция ГИО и ГЗТ, функциональной активности нейтрофилов периферической крови производными 3-ОП у животных с ЭОП

Показатель Единицы измерения 1 2 3 4 5

Контроль Без препаратов Введение «Мексидола» Введение ХС-9 Введение «Этоксидола»

АОК тыс./орг. 26,4±2,1 7,7*1,8"' 14,2*2,О*1'2 26,2*1,3"2"' 25,2*1, Г2'3

РМ мг 2,43±0,02 0,24*0,01"' 2,3*0,02'' 2,51*0,02"г 2,5±0,05*2

РК 10'" 1,81±0,03 0,11*0,03'' 1,72±0,05'2 1,71*0,Об"2 1,82*0,03'2

ФП % 77,5*2,6 50,3*2,8'1 65,1*2,9*'•2 75,3*4,1'2,3 63,4*3, Г'*4

ФЧ абс. 2,18±0,03 1,2*0,08'' 1,9*0,07'''2 2,3*0,1 Г2"3 1,8*0,06*'А4

ИАФ — 1,62±0,099 0,6*0,04'' 1,2*0,09'''2 1,7*0,1*^ 1,1*0,04'1,2'4

НСТ-сп. шОО 0,85±0,04 2,55*0,08'' 1,70*0,03"'"' 1,13*0,15'2"' 1,76*0,02*',2'4

НСТ-ст. н/з шОП 1,31*0,03 3,74*0,Об*1 1,92*0,04*и 1,18±0,13*2'3 1,91±0,0442'4

НСТ-ст. о/з тОБ 1,6±0,07 3,85*0,07'' 1,99*0,ОЗ"1'2 1,43±0,18*2'3 1,98±0,03'''2'4

КАн — 1,54±0,02 1,40*0,01"' 1,12*0,09'1,2 1,04*0,05''"3 1,08*0,04''-1

КАо — 1,88±0,01 1,50*0,08"' 1,17*0,09"'"' 1,26*0,05'''2 1,12*0,05'1А4

КО — 1,22±0,03 1,02*0,04"' 1,03*0,06"' 1,21*0, ОЗ'2"* 1,03*0,04''-4

При моделировании ЭОП наблюдалось снижение фагоцитарной и повышение кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, при этом резервы функциональной активности клеток в этой группе животных снижались. В условиях ЭОП наиболее эффективным оказалось соединение ХС-9, так как нормализовало большинство параметров функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов, в то время как «Мексидол» и «Этоксидол» оказывали корригирующие эффекты (табл. 3).

При оценке оксидантных показателей установлено, что у животных с ЭОП повышалось содержание в плазме крови как промежуточных, так и конечных продуктов ПОЛ при снижении активности каталазы, ОАА и снижении содержания СМмо. Введение «Мексидола» животным с ЭОП снижало концентрацию МДА и АГП (но не до уровня здоровых крыс) и нормализовало активность каталазы, ОАА и уровень СМК0. «Этоксидол» и соединение ХС-9 - нормализовали содержание МДА СМда, ОАА, кроме того, более существенно снижали уровень АГП по сравнению с «Мексидолом», но не до значений контроля и повышали активность каталазы по сравнению со здоровыми животными.

В условиях ЭОП к 5-м суткам моделирования наблюдалось снижение представительности а- и /3-спектрина, анкирина, АТБ, актина, Г-З-ФД, Г-8-Т и повышение уровня белков полосы 4.1 и 4.5, паллидина, дематина, тропомиози-иа. Кроме этого, в данной группе животных повышалось СЕГ, ССЭ и внутриклеточная концентрация МДА, уровень холестерина и его эфиров, СЖК, ЛФ, снижение концентрации глицеридов, ФХ, ФЭ, ФИ и СМ (табл. 4).

Использование у животных с ЭОП «Мексидола» корригировало в мембране эритроцитов уровень обеих подфракций спектринов, анкирина, АТБ, белка полосы 4.5, актина, Г-З-ФД, Г-Б-Т, СЕГ, ССЭ и внутриклеточную концентрацию МДА. Введение животным с ЭОП соединения ХС-9 в отличие от «Мексидола» нормализовало уровень в мембране красных клеток крови АТБ, белка полосы 4.5, Г-З-ФД, триглицеридов, а внутри клеток, концентрацию МДА. Наиболее эффективным, так же как и в условиях ОТПП, оказалось применение «Этоксидола», так как нормализовало представительность белков в мембране красных клеток крови и сорбционную емкость их гликокаликса у животных с ЭОП.

Производные 3-ОП оказались эффективными в коррекции нарушений содержания липидов в эритроцитарной мембране у крыс с ЭОП. Введение «Мексидола» корригировало содержание СЖК, ФХ, ФИ и СМ. Инъекции соединения ХС-9 в отличие от «Мексидола» дополнительно нормализовали концентрацию триглицеридов. Наиболее эффективным оказался «Этоксидол», введение которого дополнительно нормализовало уровень ФХ, ЛФ и ФИ (табл. 4).

Таблица 4

Коррекция нарушений структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов производными З-ОП у животных с ЭОП

Показатели Единицы измерения 1 2 3 4 5

Контроль Без препаратов Введение «Мексидола» Введение ХС-9 Введение «Этоксидола»

X мг% 43,0±2,14 51,4±3,12м 47,4±2,17 48,51±3,1 46,6±3,23

ЭХ мг% 38,03±2,21 43,7±2,41'' 42,4±1,19"' 40,4±2,16 41,7±2,27

СЖК мг% 4,3 ±0,17 6,31±0,2'1 5,75±0,3l'u 5,21±0,4"1,'i 4,98±0,15'1,2

МГ, ДГ мг% 10,43*0,42 8,1±0,ЗГ' 9,33±1,12 10,0Ш,1 9,96±1,03

ТГ мг% 15,63±1,17 10,51±1,14'' 11,б±1,2*' 13,9±1,31''!'J 14,2±1,7'AÍ

ФХ мг% 24,0±1,87 1б,2±1,03'' 20,3±l,2l'u 19,8±l,3'w 21,6±1,82*2

ФЭ мг% 24,63=Н2,12 19,4±1,83*' 18,4±0,82"' 20,7±1,37"' 19,2±1,05"'

ЛФ мг% 22,3±0,13 26,7±1,33'' 27,4±0,92"' 25,5±1,0Г'

ФИ мг% 5,1±0,06 4,0±0,07м 4,41±0,12'1'2 4,62±0,2*''2 4,7±0,31*2

см мг% 11,8±0,49 8,13±0,32*' 9,12±0,28*1,2 10,2±0,33*1J I0,4±0,22*w

Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях бел-ково-липидного спектра в мембране красных клеток крови у животных при ОТПП, вызванном введением ЧХУ и ЭОП. Исходя из функций мембранных белков, выявленные изменения направлены на уменьшение прочности и деформируемости эритроцитарной мембраны, повышение общей сорбционной способности эритроцитов и их гликокаликса и снижение их метаболической ак-

тивности, играющих важную роль в патогенезе иммунологических расстройств при данной нозологии, при этом использование производных 3-ОП позволяет корригировать и нормализовать ряд показателей структурно-функциональных свойств эритроцитарной мембраны, при этом, большей эффективностью обладают «Этоксидол» и соединение ХС-9 по сравнению с «Мексидолом».

Таким образом, результаты проведенного экспериментального исследования обосновывают целесообразность применения производных 3-ОП при остром панкреатите и ОТПП, вызванном различными по химической структуре и механизму действия токсикантами. Учитывая механизмы действия препаратов, при их назначении следует придерживаться принципа опережения, направленного на прерывание патологических процессов, приводящих к нарушению функции органов и тканей. Это позволит избежать прогрессирования расстройств гомеостаза особенно синдрома системного воспалительного ответа, в тот период болезни, когда на фоне компенсаторного напряжения защитные силы организма еще способны мобилизовать «сохранившиеся» резервы. С другой стороны, полученные данные углубляют теоретические представления о механизмах действия препаратов, способствующих коррекции иммунометаболиче-ских нарушений и структурно-функциональных свойств эритроцитов, сущности и направленности реакций, лежащих в основе мембранопротекторного эффекта антиоксидантной терапии при токсическим поражении печени и остром панкреатите.

ВЫВОДЫ

1. Введение здоровым животным «Мексидола» не влияет, «Этоксидола» и соединения с лабораторным шифром ХС-9 стимулирует формирование гуморального иммунного ответа. Все производные 3-оксипиридина повышают развитие гиперчувствительности замедленного типа, «Мексидол» и ХС-9 - функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

2. У здоровых животных «Мексидол», в большей степени соединение ХС-9 и «Этоксидол», снижают в мембране эритроцитов уровень глицеролов, холе-стерола и его эфиров, анионтранспортного белка, актина, тропомиозина, ферментов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и глутатион-Б-трансферазы, а в плазме крови повышают активность антиоксидантных ферментов и концентрацию стабильных метаболитов оксида азота

3. В условиях острой патологии органов панкреатобилиарной области «Мексидол» корригирует, не до уровня нормы, показатели адаптивного и врожденного иммунитета, «Этоксидол» нормализует формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, а соединение ХС-9 - функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

4. При острой панкреатобилиарной патологии снижается прочность, деформируемость, проницаемость, микровязкость мембраны эритроцитов, повышаются сорбционные показатели, внутриклеточные липолитические и метаболические процессы. Введение «Мексидола», в большей степени «Этоксидола»

иди соединения ХС-9, нормализует структурно-функциональные свойства эритроцитов.

5. Применение «Мексидола» при острой гепатопатии и панкреатите нормализует нарушенные показатели иммунитета и структурно-функциональных свойств эритроцитов соответственно в 16,3% и 16,6%, «Этоксидола» - 55,1% и 33,3%, а соединения с лабораторным шифром ХС-9 53,1% и 91,6%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать применение в клинической практике «Мексидола» и «Этоксидола» для коррекции нарушений иммунного статуса и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой токсической патологии печени и остром панкреатите.

2. Полученные сведения о фармакологических эффектах соединения с лабораторным шифром ХС-9 использовать для проведения доклинических и клинических испытаний и разработки на его основе препаратов.

3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания о возможности коррекции иммунометаболических нарушений и структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина при патологии органов панкреатобилиарной области.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Авдеева, Е.В. Исследование влияния новых производных 3-гидроксипиридина на иммунный ответ в условиях токсической гепатопатии / Е.В. Авдеева, В.А. Рагулина, Е.А. Орлова // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр, межвуз. науч. конф., посвященной памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск, 2009. - С. 74-75.

2. Влияние новых производных гидроксиникотиновон кислоты II З-гидроксипиридина на функциональную активность нейтрофилов крыс / В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева, Е.А. Орлова, Н.В. Стабровская // Мед. иммунология. - 2009. - Т. 11, № 4-5. - С. 332.

3. Орлова, Е.А. Влияние новых производных оксипиридина и оксиникоти-новой кислоты на состояние клеточного иммунитета при остром экспериментальном панкреатите / Е.А. Орлова, Н.В. Стабровская // Материалы III Всерос. конф. молодых ученых, организованной Воронежской гос. мед. акад. им. H.H. Бурденко и КГМУ. - Воронеж, 2009. - Т. 2. -С. 271-274.

4. Орлова, Е.А. Новые производные 3-гидроксипиридииа и иммунная реактивность / Е.А. Орлова, В.А. Рагулина, Н.В. Стабровская // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. межвуз. науч. конф., посвященной памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. Курск, 2009. -С. 276-277.

5. Рагулина, В.А. Влияние новых производных 3-гидроксипиридина на иммунную реактивность в условиях токсической гепатопатии /В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева, Е.А. Орлова // Современные проблемы аллерголо-

гии,иммунологии и иммунофармакологии: сб. тр. X междунар. конгр. -Казань, 2009. - С. 383.

6. Антиоксидантные эффекты производных З-гидроксшшридшш в норме и при острой тетрахлорметановой гепатопатии / В.А. Рагули-на, М.В. Покровский, Е.А. Орлова и др. // Кубанский науч. мед. вести. - 2010, № 7. - С. 124-127.

7. Влияние производных 3-гидроксипиридина на функциональную активность нейтрофилов периферической крови при токсическом поражении печени / Е.А. Орлова, Е.В. Авдеева, В.А. Рагулина, А.И. Конопля // Систем, анализ и управление в биомед. систем. - 2010. - Т. 9, № 2. - С. 435-438.

8. Коррекция нарушений иммунного гомеостаза производными 3-гидроксипиридина при патологии органов панкреатобилиарной области / В.А. Рагулина, А.Л. Локтионов, А.И. Конопля и др. // Систем. анализ и управ, в биомед. системах. - 2010. - Т. 9, № 4. -С. 759-763.

9. Коррекция функциональной активности нейтрофилов периферической крови производными 3-гидроксипиридина при остром токсическом поражении печени / В.А. Рагулина, Е.А. Орлова, О.В. Белоконо-ва и др. // Рос. аллергол. журн. - 2010. - № 5, Вып. 1. - С. 236-237.

10. Производные 3-гидроксипиридина в коррекции функциональной активности нейтрофилов при остром токсическом поражении печени /

B.А. Рагулина, Е.А. Орлова, Е.В. Авдеева, А.И. Конопля // Междунар. журн. по иммунореабилитации. - 2010. - Т. 12, № 2. - С. 231.

И. Иммуномодулирующие эффекты производных З-гидроксипиридипа при панкреатобилиарной патологии / В.А. Рагулина, А.И. Конопля, Е.А. Орлова, Е.В. Авдеева // Мед. иммунол. - 2011. - Т. 13, № 4-5. -

C. 530-531.

12. Исследование антиоксидантных эффектов производных 3-гидроксипиридина при токсическом поражении печени / В.А. Рагулина, Е.А. Орлова, Е.В, Авдеева и др. // Междунар. журн. прикладных и фун-дам. исслед. - 2011. - № 3. - С. 119.

13. Орлова, Е.А. Влияние производных 3-гидроксипиридина на процессы пе-рекисного окисления липидов в норме и при патологии / Е.А. Орлова, Е.В. Авдеева // Университетская наука: Взгляд в будущее: материалы итог. науч. конф. сотрудников КГМУ, Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН и отд-ния РАЕН. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2011. - Т. 1.-С. 3-7.

14. Орлова, Е.А. Коррекция нарушений адаптивного и врожденного иммунитета производными 3-гидроксипиридина при токсическом поражении печени / Е.А. Орлова, В.А. Рагулина, Е.В. Авдеева // Сб. материалов XVIII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (тез. докл.), 11-15 апреля 2011 г. -М., 2011.-С. 468-469.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АГП - ацилгидроперекиси, усл. ед.

АОК - антителообразующие клетки, тыс./селезенку

АТБ - анионтранспоргный белок, мг%

Г-З-ФД - глутатион-3-фосфатдегидрогеназа

Г-S-T - глутатион-8-трансфераза, мг%

ГЗТ - гиперчувствителыюсть замедленного типа

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ЛФ - лизофосфатидилхолин, мг%

мг,дг - моно- и диглицеролы, мг%

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л; нмольх106 эритроцитов

плазмы крови, %

ОАА - общая антиокислительная активность

ОТПП - острое токсическое поражение печени

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РК - разница кариоцитов, 106

РМ - разница массы лимфатических узлов, мг

СЕГ - сорбционная емкость гликокаликса, 10"12 г/эр.

СЖК - свободные жирные кислоты, мг%

СМ - сфингомиелин, мг%

CMN0 - стабильные метаболиты оксида азота, мкмоль/л

ссэ - сорбционная способность эритроцитов, %

ТГ - триглицериды, мг%

3-ОП - 3-оксипиридин

ФИ - фосфатидилинозитол, мг%

ФХ - фосфатидилхолин, мг%

ФЭ - фосфатидилэтаноламин, мг%

X - холестерол, мг%

ЧХУ - четыреххлористый углерод

ЭБ - эритроциты барана

ЭОП - экспериментальный острый панкреатит

эх - эфиры холестерола, мг%

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 07.11.2011 г. Подписано в печать 10.11.2011 г. Формат 30х42'/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 178 «А». Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Актуальность проблемы. Патология органов панкреатобилиарной зоны занимает ведущее место среди болезней органов пищеварения, которыми, по различным статистическим данным, страдают до 2 миллиардов человек. В странах СНГ ежегодно регистрируется до 1 миллиона человек, страдающих патологией печени и поджелудочной железы, что в 100 раз превышает распространенность ВИЧ-инфекции (Подымова С.Д., 2010).

В развитии заболеваний печени и поджелудочной железы значительную роль играют иммунометаболические и оксидантные нарушения, в связи с этим особого внимания заслуживают работы, в которых изучаются механизмы регулирования иммунного и оксидантного гомеостаза, в том числе протекающие с участием эритроцитов (Лазарева Г.А., 2006; Шульпекова Ю.О., 2006; Конопля А.И., 2008). Важная роль этих клеток в регуляции гомеостаза обусловлена тем, что изменение структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов входит в цепь приспособительных механизмов, поддерживающих постоянство внутренней среды как в норме, так и в условиях патологии (Прокопенко Л.Г., 2006; Гаврилюк В.П., 2010; Конопля А.А., 2010).

Принимая во внимание то, что нарушение иммунологических функций при многих видах патологии, в том числе при заболеваниях печени и поджелудочной железы, обусловлено дезорганизацией мембран клеток различных органов и тканей, иммуноцитов и клеток их микроокружения, в том числе и эритроцитов, есть основания полагать, что выраженного иммуномодулиру-ющего и репаративного эффекта в этих условиях можно ожидать от введения препаратов, обладающих иммуномодулирующими, антиоксидантными и мембранопротективными эффектами.

Особое место среди подобных препаратов занимают производные 3-оксипиридина (3-ОП), относящиеся к простейшим гетероциклическим аналогам ароматических фенолов и проявляющие различные свойства. Являясь структурными аналогами соединений группы витамина В6, играющих важную роль в жизнедеятельности организма, производные 3-ОП обладают широким спектром биологического действия. В ряде исследований у препаратов этой группы были обнаружены выраженные иммуномодулирующие, антиок-сидантные и противоишемические эффекты (Авдеева Е.В., 2007; Рыбников В.Н. и др., 2008; Николаев С.Б., 2010). Вместе с тем в норме, в условиях токсического поражения печени и острого панкреатита, иммунометаболические эффекты и способность модифицировать белково-липидный спектр мембраны эритроцитов производных 3-ОП изучены недостаточно.

Цель работы: установление фармакологической эффективности производных 3-оксипиридина в коррекции нарушений иммунитета и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой экспериментальной патологии панкреатобилиарной области.

Задачи работы.

1. Оценить влияние «Этоксидола», нового производного 3-ОП (соединения с лабораторным шифром ХС-9) и «Мексидола» на формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, функциональную активность нейтрофилов периферической крови здоровых животных.

2. Изучить корригирующие эффекты производных 3-оксипиридина в - коррекции нарушений врожденного и адаптивного иммунитета у животных с экспериментальными острым токсическим поражением печени и острым панкреатитом.

3. Установить влияние «Этоксидола», соединения ХС-9 и «Мексидола» на структурно-функциональные свойства эритроцитов интактных крыс.

4. Определить характер и выраженность изменения содержания белков и липидов в мембране эритроцитов животных с острым токсическим поражением печени и острым панкреатитом.

5. Оценить влияние производных 3-оксипиридина на изменения белкового и липидного спектра мембраны эритроцитов животных с экспериментальной патологией панкреатобилиарной области.

Научная новизна. Впервые экспериментально установлены выраженные стимулирующие эффекты «Этоксидола» и соединения с лабораторным шифром ХС-9 на формирование адаптивного и врожденного иммунитета. «Мексидол», в большей степени «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9, оказывают выраженные иммуномодулирующие эффекты у животных как с повышенной, так и со сниженной иммунной реактивностью, обусловленной развитием патологии панкреатобилиарной области. Впервые выявлена способность производных 3-оксипиридина нормализовать изменения показателей структурно-функциональных свойств эритроцитарной мембраны у животных с острым токсическим поражением печени, вызванным различными по химической структуре токсикантами, и в условиях экспериментального острого панкреатита.

Практическая значимость. Результаты работы устанавливают зако номерности иммуномодулирующего, антиоксидантного и мембранопротек-торного действия изученных производных 3-ОП при экспериментальной патологии органов панкреатобилиарной области. Выявленные фармакологические эффекты «Мексидола» и «Этоксидола» при острой токсической гепато-патии и остром панкреатите обосновывают возможность их клинического применения для коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов при патологии органов панкреатобилиарной области. Установленные свойства соединения с лабораторным шифром ХС-9 открывают перспективы его испытаний в клинической практике при остром токсическом поражении печени и остром панкреатите.

Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского государственного медицинского университета, Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, Воронежского государственного университета, медицинского института Орловского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У интактных животных «Этоксидол» и соединение с лабораторным шифром ХС-9 оказывают выраженные стимулирующие эффекты на формирование адаптивного и врожденного иммунитета, увеличивают в мембране эритроцитов содержание анионтранспортного белка, актина, тропомиозина, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, глутатион-8-трансферазы, снижают уровень глицеридов, холестерола и его эфиров.

2. При острой токсической гепатопатии и остром панкреатите введение «Мексидола» корригирует, но не до показателей здоровых животных, иммунную реактивность и функциональную активность нейтрофилов периферической крови, «Этоксидол» нормализует развитие гуморального и клеточного иммунитета, соединение с лабораторным шифром ХС-9 нормализует функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

3. В условиях панкреатобилиарной патологии возможности коррекции нарушений структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина располагаются в следующей последовательности по мере убывания их эффектов: соединение с лабораторным шифром ХС-9 —> «Этоксидол» —» «Мексидол».

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации представлены на конференциях Курского государственного медицинского университета: 74-й научной конференции КГМУ, сессии Центрально

Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: Теория, практика, инновации» (Курск, 2009), межвузовской научной конференции, посвященной памяти профессора В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ «Актуальные вопросы фармакологии и фармации» (Курск, 2009), 76-й Всероссийской научной сессии сотрудников Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: Взгляд в будущее» (Курск, 2011); III Всероссийской конференции молодых ученых, организованной Воронежской государственной медицинской академией им. H.H. Бурденко и КГМУ (Воронеж, 2009); X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009); XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и имму-нореабилитации (Дубай, 2010); XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011); совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, фармации ФПО, управления и экономики фармации, фармакогнозии и ботаники, нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета (2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 7 в рекомендуемых ВАК РФ изданиях. В работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Личный вклад автора. Автором составлен план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертации, лично проведены экспериментальные исследования, проанализированы совместно с руководителями полученные результаты, сделаны выводы и практические рекомендации. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей личного участия автора 75-95%.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 таблицами и 7 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 110 отечественных и 74 иностранных источника.

ВЫВОДЫ

1. Введение здоровым животным «Мексидола» не влияет, «Этоксидо-ла» и соединения с лабораторным шифром ХС-9 стимулирует формирование гуморального иммунного ответа. Все производные 3-оксипиридина повышают развитие гиперчувствительности замедленного типа, «Мексидол» и ХС-9 - функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

2. У здоровых животных «Мексидол», в большей степени соединение ХС-9 и «Этоксидол», снижают в мембране эритроцитов уровень глицеролов, холестерола и его эфиров, анионтранспортного белка, актина, тропомиозина, ферментов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и глутатион-8-трансферазы, а в плазме крови повышают активность антиоксидантных ферментов и концентрацию стабильных метаболитов оксида азота

3. В условиях острой патологии органов панкреатобилиарной области «Мексидол» корригирует, не до уровня нормы, показатели адаптивного и врожденного иммунитета, «Этоксидол» нормализует формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, а соединение ХС-9 - функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

4. При острой панкреатобилиарной патологии снижается прочность, деформируемость, проницаемость, микровязкость мембраны эритроцитов, повышаются сорбционные показатели, внутриклеточные липолитические и метаболические процессы. Введение «Мексидола», в большей степени «Этоксидола» или соединения ХС-9, нормализует структурно-функциональные свойства эритроцитов.

5. Применение «Мексидола» при острой гепатопатии и панкреатите нормализует нарушенные показатели иммунитета и структурно-функциональных свойств эритроцитов соответственно в 16,3% и 16,6%, «Этоксидола» - 55,1% и 33,3%, а соединения с лабораторным шифром ХС-9 53,1% и 91,6%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать применение в клинической практике «Мексидола» и «Этоксидола» для коррекции нарушений иммунного статуса и структурно-функциональных свойств эритроцитов при острой токсической патологии печени и остром панкреатите.

2. Полученные сведения о фармакологических эффектах соединения с лабораторным шифром ХС-9 использовать для проведения доклинических и клинических испытаний и разработки на его основе препаратов.

3. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания о возможности коррекции иммунометаболических нарушений и структурно-функциональных свойств эритроцитов производными 3-оксипиридина при патологии органов панкреатобилиарной области.