Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки.

Хунова, Лилия Заудиновна

Диссертации по медицине → Онкология

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки.

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Хунова, Лилия Заудиновна Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.12

Автореферат диссертации по медицине на тему Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки.

На правах рукописи

ХУНОВА Лилия Заудиновна

КАЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ РАННЕГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА ШЕЙКИ МАТКИ

(14.01.12 - онкология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

12 янв тг

Москва-2011

005007400

Работа выполнена в ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития России (директор - член-корр. РАМН, профессор Солодкий В. А.)

Научные руководители: член-корр. РАМН, профессор

Ашрафян Левон Андреевич

доктор медицинских наук, профессор Боженко Владимир Константинович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Рожкова Надежда Ивановна

доктор медицинских наук, Подистов Юрий Игоревич

Ведущая организация: ФБГУ «Медицинский радиологический научный центр» Минздравсоцразвития России (249036, Калужская область, г. Обнинск, ул. Королева, 4)

Защита состоится « 23 » января 2012 г в 13.00 часов, на заседании диссертационного совета Д 208.081.01при ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития России (117997, Москва, ул. Профсоюзная, 86)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития России (117997, Москва, ул. Профсоюзная, 86)

Автореферат разослан « » декабря 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

д.м.н., профессор

З.С. Цаллагова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы.

Рак шейки матки (РШМ) в настоящее время в России является третьим по частоте злокачественным процессом женских половых органов и встречается с частотой примерно 12,2% на 100. тыс. населения (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2008).

Значительным достижением в борьбе за снижение заболеваемости раком шейки матки явилась разработка и внедрение в практическое здравоохранение методов цитологического скрининга, в тоже время активно развиваются разработки молекулярно-биологических методов диагностики и скрининга РШМ.

Одним из основных направлений вторичной профилактики рака шейки матки является своевременная диагностика и лечение предопухоле-вых состояний. Согласно международной классификации основной патологией, предшествующей раку шейки матки, является дисплазия или церви-кальная интраэпителиальная неоплазия (CIN), которая подразделяется на 3 степени: легкая, средняя и тяжелая (или прединвазивная карцинома). Согласно эпидемиологическим данным, лишь 15% цервикальных интраэпите-лиальных неоплазий III степени (CIN III) прогрессирует в инвазивную карциному. При более легких вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий этот процент еще ниже.

Учитывая эти данные, вполне закономерной становится проблема разработки методов прогноза развития цервикальных интраэпителиальных неоплазий. В соответствии с современными представлениями начальные этапы канцерогенеза РШМ представляют собой каскад определенных молеку-лярно-генетических изменений. При этом изменяется функциональность таких основных клеточных процессов, как пролиферация клетки, апоптоз, межклеточное взаимодействие. Углубленный анализ этих изменений позво-ляетт расширить спектр методов уточняющей диагностики преодопухолевых

и опухолевых процессов шейки матки (Семиглазов В.Ф. и др., 2008). Возможность проспективного прогнозирования за последние годы показана при исследовании тканевых молекулярно-биологических маркеров для таких сложных событий, как рецидив опухоли в период до 10 лет.

Ключевыми регуляторами апоптоза являются семейства белков BCL2, В АХ,BAG. Белок, кодируемый геном BCL-2, является белком-супрессором апоптоза. Выключение BCL-2 приводит к массивному р53 зависимому апоптозу. В настоящее время большое внимание уделяется оценке экспрессии мРНК BCL-2 в эпителии шейки матки как потенциального маркера значимых этапов в патогенезе цервикальных интраэпителиальных не-оплазий (Koskimaa Н.М. и др. 2010). Семейство генов BAG - группа муль-тифункциональных генов, взаимодеймтвующих с шаперонами (Hsp70) и ин-гибирующих их. Одна из функций BAG - связывание с BCL2, что приводит к подавлению апоптоза.

Процесс пролиферации контролируется большим количеством генов. В тоже время найден ряд ключевых маркеров пролиферации, одним из таких универсальных маркеров пролиферации считается белок, кодируемый геном Ki-67. Он экспрессируется в течении всех фаз клеточного цикла делящейся клетки. В литературе отмечается, что цервикальные интраэпителиальные не-оплазии характеризуются его повышенной экспрессией (Saha В. и др. 2007). Другой важный маркер пролиферации - ген CCNB] (Циклин В), контролирующий прохождение клетками М-фазы клеточного цикла. Ряд исследователей обнаружили его гиперэкспрессию при раке шейки матки. Кроме того, ключевым фактором неограниченной пролиферации принято считать активацию в опухолевых клетках фермента теломеразы. Показано, что около 85% опухолей человека обладают теломеразной активностью, однако количественные закономерности экспрессии данного фермента при различных стадиях неоплазии изучены недостаточно. (Егоров Е.Е. 2001г., Griffith J.D. 1999г.).

Необходимо также сказать, что в подавляющем большинстве случаев, канцерогенез в шейке матки происходит на фоне вирусной инфекции. Наиболее часто встречается вирус папилломы человека (ВГ1Ч). В настоящее время принято считать, что продукты экспрессии вирусного генома - белки Е7, Е6 непосредственно участвуют в канцерогенезе. Однако соотношение уровней экспрессии вирусных белков и белков - регуляторов пролиферации и апоптоза изучено недостаточно. В связи с выше сказанным нами были сформулированы следующие цель и задачи.

Цель работы. Исследовать соотношение процессов пролиферации и апоптоза и сформировать спектр основных факторов, отражающих процессы начального канцерогенеза в клетках эпителия шейки матки.

Задачи исследования:

1. Изучить уровень экспрессии белка Е7 при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки и в группе контроля.

2. Изучить степень теломеразной активности при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки и в группе контроля.

3. Изучить уровень экспрессии молекулярных маркеров пролиферации (Ki67, CCNBi) и апаптоза (BCL2, ВАХ, BAG) при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки и в группе контроля.

4. Определить молекулярно-биологические критерии раннего канцерогенеза при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях.

Научная новизна.

Изучены варианты экспрессии онкобелка Е7.

Определен уровень теломеразной активности при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки.

Впервые проведен сравнительный анализ уровня экспрессии генов пролиферации (Ki67, CCNB1) и генов апаптоза (BCL2, В АХ, BAG) при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазив-ном раке шейки матки.

Впервые обнаружено отличие экспрессии основных молекулярных маркеров пролиферации и апоптоза в группах, содержащих и не содержащих вирус ВПЧ.

Определены молекулярные критерии начальных этапов кацерогенеза

РШМ.

Практическая значимость. Обнаруженные в работе молекулярные маркеры раннего канцерогенеза могут быть положены в основу метода дифференциальной диагностики интраэпителиальных неоплазий. Полученные молекулярно-генетические данные могут войти в комплекс прогностических маркеров, отражающих возможные пути развития гиперпролиферативных заболеваний шейки матки, что позволит сформировать дифференцированный подход и лечение цервикальных интраэпителиальных неоплазий, широко используя консервативные методы терапии, и улучшить качество медицинской помощи при патологии шейки матки.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Большинство наблюдений цервикальных интраэпителиальных неоплазий III ст. (er in situ) и инвазивный рак шейки матки сопровождаются экспрессией онкобелка Е? в сочетании с ВПЧ высокого онкологического риска.

2. Высокий уровень теломеразной активности выявляется при CIN III и ивазивном раке шейки матки.

3. При цервикальных интраэпителиальных неоплазиях увеличивается экспрессия генов, контролирующих пролиферацию и уменьшение экспрессии генов, контролирующих апоптоз.

4. Лечение цервикальных интраэпителиальных нсоплазий в группе пациенток раннего репродуктивного возраста должно сопровождаться и опираться на результаты молекулярно-биологических методов

Апробация работы.

Основные результаты работы представлены и доложены на Всероссийском научном форуме «Радиология 2005», (Москва, Центр международной торговли 31мая-3 июня 2005г.) Российский Форум «Мать и дитя», «Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний» ( Москва, 4-9 июня 2007г.) Международный конгресс молодых ученых «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии» (ФГУ РНЦ РР Москва 2007г.), Международный конгресс молодых ученых «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии» (ФГУ РНЦ РР Москва 2008г.). 13th Biennial Meeting of the International Gynecologic Cancer Society which will be held in Prague, Czech Republic. 2010.

Материалы диссертации доложены на VIII конгрессе «Человек и лекарство» 11-15 апреля 2011г.

Апробация диссертации состоялась 18 июля 2011 года на научно-практической конференции ФГУ «РНЦ РР» Минздравсоцразвития России.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рецензируемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 290 источника, из них 84 отечественных и 116 зарубежных. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 14 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика пациентов и методов исследования

Исследование основано на клшшко-морфологическом и молекуляр-ио-биологическом обследовании 76 пациенток, из которых: 16 пациенток с гистологически подтвержденным плоскоклеточным раком шейки матки, средний возраст лет 41,1±9,6 лет, 40 пациенток с гистологически подтвержденным диагнозом цервикалыюй интраэпителиальной неоплазш различной степени (CIN 1, CIN2, CIN 3 (плоскоклеточный рак in situ)) средний возраст 37,5±10,5 лет, находившихся на лечении в ФГБУ РНЦРР в период с 20062010 год. Контрольную группу составили 20 женщин с морфологически неизмененным эпителием шейки матки, средний возраст составил 38±12,4.

Диагностика цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки основывалась на комплексном клиническом обследовании, результатах расширенной кольпосконии (электроконизация шейки матки, аппарат «Сургитрон»), цитологического и гистологического исследования в соответствии с отраслевыми стандартами объемов обследования и лечения в гинекологии (Кулаков В.И. и соавт.,1999) и алгоритмами объемов диагностики и лечения злокачественных новообразований в онкологии (Сухих Г.Т., Солодкий В.А., Ашрафян Л.А., Рожкова Н.И. 2011). Критерием отбора больных являлся морфологически подтвержденный диагноз цервикалыюй интраэпителиальной неоплазии (CIN) и рака шейки матки. Стадирование эпителиальных дисплазий проводилась в соответствии с МКБ-Х (1995), ГКО женского полового тракта ВОЗ (1995) и рака шейки матки в соответствии с классификацией TNM и FIGO (1997).

Цитологическое исследование цервикалышх мазков и гистологическое исследование биоптатов шейки матки и операционного материала (шейка матки, регионарные лиматические узлы) выполняли по стандартной методике цитологического (Меркулов Г. А., 1969; Лилли Р., 1969) и гистологиче-

ского (Хмельницкий O.K., 1994, 1999; Автандилов Г.Г., 2002; Семченко В.В., 2003) методов исследования.

Детекция ВПЧ проводилась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) по стандартной методике (К.Муллис 1983г.).

Для оценки экспрессия мРНК генов Ki67, BAG ,CCNBi, BCL2 использован материал соскобов и биопсий шейки матки. Для ПЦР-исследований забор материала соскобов цервикального канала и поражений шейки матки осуществлялся одноразовыми зондами до проведения комплексного обследования и начала лечения заболеваний шейки матки в пробирки со средой для стабилизации РНК. Хранение материала до начала исследования осуществляли при -70°С.

Для выделения нуклеиновых кислот использовали наборы "Проба НК" (ДНК-Технология, Россия). Реакцию обратной транскрипции ставили в объеме 40 мкл (в реакцию брали 33 мкл образца). Для обратной транскрипции использовались коммерческие реактивы (ДНК-Технология, Россия). Реакцию проводили при температуре 40° С в течение 30 мин, с последующей инактивацией обратной транскриптазы при 95СС в течение 5 минут.

Исследование количества к-ДНК проводили в режиме "реального времени" в объеме 35 мкл по следующей программе: 1 цикл - 80°С 30 сек, 94°С 1 мин 30 сек; 50 циклов - 94°С 20 сек, 64°С 20 сек; 10°С - хранение 94°С на приборе "ДТ-964". ДНК-зонды, использовавшиеся для детекции продуктов амплификации исследуемых и референсных генов, были помечены FAM. Для повышения чувствительности и специфичности ПЦР был применен "горячий старт", который обеспечивался использованием парафина. Измерение уровня флуоресценции проводили на каждом цикле при температуре 64°С. Реакцию ставили в двух повторах для каждой точки.

Нормировка проводилась по пяти референсным генам HPRT1, ТВР, В2М, GUSB, ABL. Обработка результатов осуществлялась с помощью

программы EXCEL на основании данных, полученных с помощью прибора. Использован метод сравнения индикаторных циклов (метод AACq).

Статистическая обработка исследуемых переменных выявила, что распределение значений не может быть аппроксимировано нормальной функцией распределения, поэтому для оценки достоверности отличия средних значений в группах на равнее с критерием Стьюдента использовались непараметрические методы: ранговый тест Краскелла-Уолллиса , медианный тест.

Данные обрабатывались при помощи пакета статистических программ «STATISTICAL», разработанного фирмой Statsoft (USA). При этом соблюдались общие рекомендации для медицинских исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Папилломавирусная инфекция и онкобелок Е7 у больных раком шейки матки.

С целыо определения наличия вирусов в зависимости от стадии заболевания (местной распространенности процесса) и детекции при этом онко-белка Е7. В таблице 1 представлены частоты обнаружения ВПЧ при различной патологии шейки матки.

Табл. 1.Частота определения ВПЧ (абс. число/%) в образцах опухолевой и нормальной ткани шейки матки.__

Группа исследования N ВПЧ-позитивные образцы ВПЧ-негативные образцы

CINI 17 13 (78,1%) 4(21,9%)

CINII 11 8 (69,7%) 3 (30,3%)

CINIII (er in situ) 12 10(91%) 2 (9%)

Инвазивный РШМ 16 13(83,8%) 3 (16,2%)

Контрольная агуппа 20 9(49%) 11 (51%)

р<0,05

Известно около 100 видов ВПЧ. Мы определяли ВПЧ высокого и низкого риска. Этим объясняется факт достаточно широкого носительства этой инфекции в контрольной группе. Случаи выявления ВПЧ среднего и

низкого риска отмечались только в группе CIS - 3 случая (выявили 33 серо-тип) и в контрольной группе, где с наибольшей частотой обнаруживались вирусы 6 и 11 серотипов (6 наблюдений), а также по 1 наблюдению 33, 52, 83 серотипы. Мы уже упоминали о высокой распространенности ВПЧ в человеческой популяции. Это было отмечено многими исследователями. В большинстве случаев поражение носит транзиторный характер, и даже при дис-плазиях различной степени тяжести в большинстве случаев регрессирует.

Доказанным фактом является этиологическая связь папилломави-русной инфекции с возникновением злокачественных новообразований шейки матки. Само инфицирование вирусом, однако, не является достаточным условием для заболевания и не означает непременное его развитие. Данные, представленные в таблице демонстрируют неуклонное увеличение количества инфицированных пациенток в зависимости от степени дисплазии и при инвазивном раке шейки матки. Следует также отметить, что при микро-ивазивном и инвазивном раке шейки матки в 100% вируспозитивных наблюдений мы зарегистрировали наличие ВПЧ высокого риска (16 и 18 серотипы). В то же время ВПЧ-позитивные образцы получены и в контрольной группе.

Эти данные свидетельствуют о необходимости разработки дополнительных методов исследования, позволяющих точнее сформировать прогноз заболевания шейки матки и разработать на всех этапах лечебные и профилактические мероприятия.

2. Онкобелок Е7 при цервикальных интраэпитслиальных неопла-зиях и инвазивном раке шейки матки.

Актуальность изучения онкобелока Е7 обусловлена его трансформирующим эффектом на клетки эптелия шейки матки. В злокачественных опухолях вирусный геном персистирует в интегрированной форме, причем разрыв в вирусном геноме, который необходим для встраивания в клеточный, происходит в области генов ErE2. Таким образом, в трансформированных клетках гены Еб и Е7 остаются интактными. При этом интеграция ДНК ВПЧ

в геном клеток сопровождается двумя молекулярными событиями. Встраивание вирусной ДНК в хромосому всегда сопровождается нарушением структуры генаЕ2, который является репрессором Е7. При интеграции ДНК-вируса синтез белка Е2 прекращается вследствие нарушения структуры соответствующего гена и активируется синтез белка Е7.

Из этого следует, что наличие онкобелка Е7 в пробах из опухоли может рассматриваться как свидетельство вирус-интегрирования. Неоспоримым достоинством Е7 как маркера, является то, что в норме этот белок в тканях не синтезируется. Его происхождение полностью связано с жизненным циклом интегративной формы ВПЧ-ияфекции.

Таким образом, измерение уровня онкобелка Е7 позволяет уточнить характер вирусной инфекции, ее обратимость и потенциальную возможность злокачественной трансформации в случае интеграции ВПЧ в клеточный геном.

В нашем исследование проведено определении онкобелка E^ в группах больных CIN I-II, CIN III и инвазивном раке шейки матки. Данные представлены на рисунках 1-3.

5Ü

-ей

И ВГ№ Е7+ О ВПЧ -Е7+ 0 ВПЧ+ Е7-0 ВПЧ- Е7-

Рис1. Частота выявления ВПЧ и белка Е7 у больных с церви-кальными интраэпителиальными неоплазиями I-II ст. (п=28).

В группе больных CIN I—II у 16 пациенток из 28 (57 %) определялся как ВПЧ, так и онкобелок Е7. У 5 пациенток (17,9%) в пробах ткани шейки матки отсутствовал ВПЧ и не определялся онкобелок Е7. У таком же количестве исследований 5 (17%) при наличии ВПЧ, онкобелок не определялся.

в ВПШ- Е7+ □ ВПЧ-Е7+ 0 ВПЧ+ Е7-В ВПЧ- Е7-

Рис2. Частота выявления ВПЧ и белка Е7 у больных с преинва-зивным раком (CIS) (п=12).

э ВПЧ+ Е7+ □ ВПЧ-Е7+ И ВПЧ+- Е7-В ВПЧ- Е7-

РисЗ. Частота выявления ВПЧ и белка Е7 у больных с инвазив-ным раком шейки матки (п=16).

В группе больных CIN III -CIS одновременное обнаружение в пробах

тканей ВПЧ и онкобелка Е7 констатировано у 9 (75%) больных. Остальные варианты распределения ВПЧ и Е7 определялись гораздо реже - в 1 пробе в каждой группе (8,3%).

В целом, в группах обследованных больных позитивные результаты анализа на онкобелок Е7 распеределялись следующим образом - 64,3% в

группе пациенток с CIN I-II, 83,3% в группе CIN III и 62,5% в группе больных инвазивным РШМ. В контрольной группе из 9 случаев ВПЧ положительных образцов ни в одном случае не было выявлено наличие онкобелка Е7. (Табл. 2)

Табл. 2. Частота определения окомаркера Е7 при цервикальных интраэпйтелиальных иеоплазиях и инвазивном раке шейки матки._

Группа N Еу -позитивные Е7 -негативные

исследования образцы образцы

CIN I-II 28 18 (64,3%) 10(35,7%)

CIN III (er in situ) 12 10 (83,3) 2 (16,7%)

Инвазивный РШМ 16 10 (62,5%) 6 (37,5%)

Контрольная группа 9 - 9(100%)

р<0,05

В группе больных ивазивным раком шейки матки отмечено уменьшение числа наблюдений с позитивными анализами на ВПЧ и одновременным обнаружением онкобелка Е7 (56,3%), что свидетельствует о присоединении других механизмов злокачественной трансформации в ситуации обширного, прогрессирующего опухолевого процесса.

Таким образом, установлено, что вариант ВПЧ+, Е7+ чаще всего встречается в группе CIN Ill-CIS (75%), Данное сочетание реже обнаруживается в группе больных с CIN I-II и инвазивным раком. Полученные результаты свидетельствуют о значительной роли онкобелка Е7, как маркера начальных этапов злокачественной неоплазии шейки матки. Несомненно, наибольший клинический интерес представляет выявление Е7 при сг in situ (CIN 3), а также CIN 1-2.

3. Экспрессия теломеразы при цервикальных интраэпителиаль-ных иеоплазиях и инвазивном раке шейки матки.

Теломераза (TERT) являет ферментом, который способен не только поддерживать размер теломерного повтора, но и синтезировать теломеры de novo. Его активация является необходимой для поддержания неограниченного деления клетки. Представляет интерес вопрос, на какой стадии канцерогенеза происходит включение этого механизма. В таблице 5 показан относи-

тельный уровень экспрессии мРНК гена ТЕЩ в ткани шейки матки в зависимости от различной степени неоплазии.

Табл. 3. Значения уровня экспрессия ТЕЯТ при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях и ннвазивном раке шейки матки.

Группа исследования N Уровень экспрессии Р

CIN I-II 40 0,42±1,16

Инвазивный РШМ 16 0,91±1,22 р3 =0,109 р4=0,096

Контрольная группа 20 0,08±0,18 р'=0,0558 р2=0,0146

р1 - статистическая значимость различий по сравнению с группой CIN Ш, р2 - достоверность отличия в группах норма-рак, р3-достоверность отличия в группах CINII-рак, р4 - в группах CINl-рак.

Обнаруживается существенное, статистически достоверное (на уровне менее р<0,1) повышение уровня экспрессии теломеразы при CIN Ш и инвазивном РШМ по сравнению с контрольной группой. Интересно, что если CINIII объединить в одну группу с группой рака шейки матки, то достоверность отличия между объединенной группой и группой объединяющей CIN I+CINII повышается до 0,03 (при этом отличие между объединенной группой CINIII + рак и группой «норма» составляет 0,02). При этом достоверных отличий в уровне экспрессии мРНК гена TERT при CIN I-II не обнаружено.

Граф»! ср«вм«х {Р«1ул«т»7ы_03_0Э_11 31v*7Sc}

Рис.4. Средние значения и стандартная ошибка изменений относительного количества мРНК теломеразы в эпителии шейки матки.

На рисунке 4 приводятся значения средней активности теломеразы

при различных стадиях интраэпителиальной неоплазии. Приведенные ре-

зультаты четко показывают, что критическое увеличение активности теломе-разы в клетках эпителия шейки матки происходит только при переходе неопластического процесса в стадию CIN III и ее высокая активность сохраняется при раке.

1. Гены пролиферации и апоптоза при цервнкальных интраэпи-телиальных неоплазиях и раке шейки матки.

В современной литературе большое значение уделяется разработке объективных молекулярно-генетических критериев прогнозирования течения заболеваний шейки матки. Особый интерес вызывает анализ изменений генов пролиферации, апоптоза и дифференцировки в цервикальных интраэпи-телиальных неоплазиях (CIN) и раке шейки матки. Мы исследовали экспрессию мРНК генов регулирующих апоптоз: Вс12 и BAG - антиапоптотические, ВАХ- проапоптотический ген. В качестве генов, отражающих активность пролиферации были выбраны: ген Ki67 - который экспрессируется только в пролиферирующих клетках и ген циклина Bt - активирующийся только в S-G2 фазах клеточного цикла и не экспрессирующийся в неделящихся клетках. Как видно из рис. 5-6 активность исследованиых генов, контролирующих пролиферацию, возрастает в ряду «нормальная ткань эпителия шейки матки» -«группа CIN»-«рак». Отличия статистически достоверны.

0,9 0.8 0.7 О.В

O.Z O.I

C'N ЕЕ ¡£"n«0.»5-SS

COD диагноз

Рис.5 .Изменение количества мРНК гена Ki67 в ткани шейки матки.

норма CIN рак

COD диагноз

Анализ количества мРНК генов, контролирующих апотоз (гены BCL2, ВАХ, BAG) показал, что в отличии от генов Ki67 и циклина Вь активирующихся при процессах пролиферации, их активность снижается.

График средни* <Резупьтнгы_ОЭ_ОЭ_11 31V7bc)

Рис.6 . Изменение относительного количества мРНК гена циклина Bi в ткани шейки матки.

( рде ynwr ят ы_03_0Э„11 S1V7Sc)

Рис.7 . Изменение относительного количества мРНК гена BCL2 в

ткани шеики матки

График средних(Рлаупьт»гы_ОЭ_ОЭ_11 31<Л75с)

Рис.8 . Изменение относительного количества мРНК гена ВАС в ткани шейки матки.

При этом достоверное снижение наблюдается в группе больных раком шейки матки (Рис. 8,9,10). Таким образом, сравнение этих групп генов, контролирующих пролиферацию и апоптоз, обнаружило обратную направленность изменений при развитии злокачественной трансформации. Интересно, что снижение уровня экспрессии наблюдается как для антиапоптоти-ческих генов (BCL2, BAG), так и для проапоптотического гена ВАХ. Анализ изменения уровня экспрессии генов пролиферации внутри группы CIN показал, что оно имеет аналогичный вид с изменением активности гена теломера-зы (Рис.4), критическое увеличение происходит при переходе процесса не-оплазии от CIN II к CIN III.

Г рафик средних (Рва^»1ь.тятм_03__р3_11 31V75c)

CIN COO диагноз

I М earxtO, 9S*S££

Рис.9 . Изменение относительного количества мРНК гена ВАХ в ткани шейки матки.

График средних (Реэультаты_03_03_11 31 У*75с)

норма CIN I CIN II CIN III рак -j- ¡£"^„.3,5

Диагноз

Рис.10 . Изменение относительно количества гена циклипа В1 в ткани шейки матки.

Как видно из данных, приведенных на рис.10, наибольшие изменения активности гена циклина В1 происходят при переходе процесса трансформации от CINII в CINIII. Высокая экспрессия гена Ki67 и гена циклина Bi сохраняется в группе рака шейки матки.

Интерес представляет возможность использования обнаруженных изменения для дифференцировки групп CIN II с группой CIN III и группы CIN III с группой рака шейки матки.

С этой целью мы оценили достоверность отличия средних значений уровней экспрессии мРНК проанализированных генов. (Табл. 4-5).

Табл. 4 . Сравнение достоверности отличия средних значений уровней экспрессии в группах РШМ -СЮШ.

Ген/группа РШМ CINIII t-value P N N

Kie7 0,763242 0,574298 1,31822 0,198927 16 12

CCNBi 1,114222 0,973774 0,39433 0,696551 16 12

BAG L 0,809870 2,104724 -2,59340 0,022283 10 5

BCL2 1,396958 2,070176 -0,84022 0,408166 16 13

BAX 1,047137 1,546418 -1,18205 0,260080 10 4

Из значений, приведенных в табл.4 видно, что только для проапоп-тотического гена BAG наблюдается достоверные изменения для групп РШМ-CINIII.

Табл. 5 . Сравнение достоверности отличия средних значений уровней экспрессии в группах CIN II - CIN III.

Ген/группа CINII CINIII t-value P N N

Ki67 0,276297 0,574298 -2,31417 0,031410 10 12

CCNBi 0,391481 0,973774 -1,83593 0,081281 10 12

BAG 1,392006 2,104724 -1,06277 0,318911 5 5

BCL2 2,402130 2,070176 0,35243 0,728025 10 13

BAX 0,945415 1,546418 -1,31735 0,235789 4 4

Сравнение достоверности отличий уровней экспрессии генов для групп CIN II и CIN III показывает, что уровни активности генов Ki67 и CCNBi достоверно отличаются для этих групп.

Таким образом, анализ молекулярных процессов в клетках эпителия шейки матки показал, что на фоне вирусной инфекции и активации вирусного генома (экспрессия белка Е7) происходят закономерные изменения процессов пролиферации апоптоза. При этом, критические изменения уровня пролиферации наблюдаются при переходе стадии интраэлителиалыгой не-оплазии с CINII к CIN III. Именно на этой стадии происходит активация те-ломеразы, обеспечивающая неограниченность деления клеток.

Противоположная зависимость (снижение уровня экспрессии) обнаружена для генов, контролирующих апоптоз, однако определить стадию ин-траэпителиальной неоплазии, на которой происходят наиболее выраженные изменения уровня экспрессии генов, контролирующих апоптоз, выявить не удалось. Снижение их активности происходит постепенно - по мере увеличения степени неоплазии.

ВЫВОДЫ

1. Экспрессия белка Е7 при скрининговом обследовании женщин является важным диагностическим критерием неблагоприятного прогноза развития интраэпителиалльных неоплазий шейки матки, требующим углубленной диагностики и мониторинга. Отсутствие экспрессии белка Е7 даже при морфологическом диагнозе CIN может быть критерием широкого использования консервативных методов лечения и наблюдения.

2. Активность теломеразы значительно увеличивается при диспла-зии шейки матки III степени й сохраняется высокой при инвазивном раке шейки матки.

3. Развитие цервикальных интраэпителиальных неоплазий сопровождается увеличением экспрессии генов (Ki67 (при CIN 0,47 в группе контроля 0,29), CCNBi (при CIN 0,61 в группе контроля 0,29)), контролирующих пролиферацию и снижением активности генов (BCL2 (при CIN 1,97, в группе контроля 2,64), ВАХ и BAG (при CIN 1,59, в группе контроля 1,38), контролирующих апоптоз.

4. Определение уровня экспрессия генов циклина В, теломеразы, KÍ67 может быть дополнительным диагностическим критерием для дифференциации степени иитраэпителиальных неоплазий шейки матки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Уровень теломеразной активности при CUSI дает возможность дифференцировать терапевтическую тактику. Высокий уровень активности теломеразы, циклина В1 и KÍ67 являются фактором неблагоприятного прогноза при предраке шейки матки и формируют более активные лечебные мероприятия.

2. Определение ВПЧ при CIN I-III ст. более целесообразно осуществлять в комплексе с изучением уровня онкобелка Е7, что позволит более целенаправленно проводить как противовирусную терапию, так и различные диагностические и лечебные воздействия. Во всех ситуациях при положительном анализе Е7 необходимо применение опережающих видов терапии.

3. Комплекс стандартных мероприятий при скрининге рака шейки матки в лечебно-профилактических учреждениях необходимо дополнить анализами на онкобелок Е7 и опредение уровня активности Теломеразы.

Список опубликованных работ:

1. Хунова Л.З. Применение рентгеновской денситометрии при склеротическом лишае вульвы / Ашрафян Л.А., Бабаева H.A., Ивашина C.B., Акопова Н.Б., Хунова Л.З. // Материалы Всероссийского научного форума «Радиология 2005», Москва, 2005,- С.21-23

2. Хунова Л.З. Определение уровня теломеразной активности как раннего маркера злокачественной трансформации эпителия шейки // Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии». - Москва, 2007- С. 68-69.

3. Хунова Л.З. Молекулярно-биологические аспекты злокачественных трансформаций цервикальных иитраэпителиальных неоплазий// Ашра-

фян Л.А., Антонова И.Б., Бударина С.О., Бабаева H.A., Басова И.О., Хунова Л.3.//Материалы юбилейной конференции «Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний», Москва, 2007. - С. 440442

4. Хунова Л.З. Теломераза как диагностический маркер цервикаль-ных интраэптителиальных неоплазий и микроинвазивного рака шейки матки // Материалы научно-практической конеренции «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии»,- Москва, 2008,- С. 21-23.

5. Хунова Л.З. Neoadjuvant chemotherapy in locally advanced cervical carcinoma HB-IIIB stages /Ashrafyan L.A., Antonova I.B., Aleshikova O.I., Khu-nova L.Z., Slonov A.V. // 13th Biennial Meeting of the International Gynecologic Cancer Society which will be held in Prague, Czech Republic, 2010. A-214-0001-01373 P. 305-307.

6. Хунова Л.З. Анализ экспрессии генов пролиферации и апоптоза при цервикальпых интраэпителиальных неоплазиях и раке шейки матки / Ашрафян Л.А, Боженко В.К.,.Антонова И.Б, Мельникова Н.В., Бурменская О.Н., Трофимов Д.Ю., Кудинова Е.А., Хунова Л.З., Слонов

A.B., Близнюков О.П.// «Опухоли женской репродустивной системы». -2011. - №4. - С. 54-59.

7. Хунова Л.З Экспрессия генов пролиферации и апоптоза при цервикальной интраэпнтелиалыюй неоплазии и раке шейки матки./ Боженко В.К., Ашрафян Л.А., Антонова И.Б., Мельникова Н.В., Бурменская О.Н., Трофимов Д.Ю., Кудинова Е.А., Хунова Л.З.// Вестник Российского научного центра рентренораднологии, 2011. (URL : http//vesynik.rncrr/vestnik/v3/vll.htm)

8. Хунова Л.З. Особенности экспрессии генов пролиферации и апоптоза, ассоциированные с вирусом папилломы человека при цервикальной интраэпителиальной неоплазии и раке шейки матки // Боженко

B.К., Ашрафян Л.А., Антонова И.Б., Мельникова Н.В., Бурменская О.Н.,

Трофимов Д.Ю, Кудинова Е.А., Хунова Л.З., Близнюков О.П. // «Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии». - 2011.-№12. - С28-32

Список сокращений.

• РШМ - рак шейки матки

• ПЦР - иолимеразная цепная реакция

• ВПЧ (HPV) - вирус папилломы человека

• CIN - цервикальная интраэпителиальная неоплазия

• TERP - теломераза

• CCNBj - циклин В1

• Р53 - транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл

• Е7 - онкобелок вируса папилломы человека

• BCL2 - белок (маркер) пролиферативной активности

• BAG - белок (маркер) апоптозной активности

• ВАХ - белок (маркер) апоптозной активности

• Ki67 - белок (маркер) пролиферативной активности

Подписано в печать:

23.12.2011

Заказ № 6441 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Введение диссертации по теме "Онкология", Хунова, Лилия Заудиновна, автореферат

Актуальность работы.

Рак шейки матки (РШМ) в настоящее время в России является третьим по частоте злокачественным процессом женских половых органов, встречается с частотой примерно в 12,2 на 100. тыс. населения.

Одним из основных направлений вторичной профилактики рака шейки матки является своевременная диагностика и лечение предопухолевых состояний. Согласно международной классификации основной патологий, предшествующей раку шейки матки является дисплазия или цервикальная интраэпителиальная неоплазия. (CIN), которая подразделяется на 3 степени: легкая, средняя и тяжелая (или прединвазивная карцинома). Разница между этими тремя состояниями формируется на уровне патогистологического анализа и отражает, ту или иную степень изменения рядности плоского эпителия шейки матки. Методы лечения, используемые при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях достаточно разнообразны и варьируют в диапазоне от использования консервативных методов до ампутации шейки матки, и даже до экстирпации матки. Согласно эпидемиологическим данным, лишь 15% цервикальных интраэпителиальных неоплазий III степени (CIN III) прогрессирует в инвазивную карциному. При более легких вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий этот процент еще ниже.

Учитывая эти данные вполне закономерна становится проблема качественной оценки характера цервикальных интраэпителиальных неоплазий ее нацеленность на прогрессию в ивазивную карциному. Возможность проспективного прогнозирования за последние годы появилась при исследовании ряда биологических маркеров канцерогенеза плоскоклеточного рака шейки матки.

В соответствии с современными представлениями, начальные этапы канцерогенеза РШМ, представляют собой каскад определенных молекулярно-генетических изменений. При этом изменяется функциональность таких основных клеточных процессов, как пролиферация клетки, апоптоз, мелсклеточное взаимодействие. Углубленный анализ этих изменений позволит расширить спектр методов уточняющей диагностики преодопухолевых и опухолевых процессов шейки матки.

Таким образом, основная цель работы - исследовать соотношение процессов пролиферации и апоптоза и сформировать спектр основных факторов, отражающих процессы начального канцерогенеза в клетках эпителия шейки матки.

Реализация этой цели сопряжена с решением следующих задач:

3. Изучить уровень экспрессии молекулярных маркеров пролиферации (Ki 67, CCNB1) и апаптоза (BCL2, В АХ, BAG) при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки и в группе контроля.

Научная новизна: Изучены варианты экспрессии онкобелка Е7.

Впервые проведен сравнительный анализ уровня экспрессии генов пролиферации (Ki 67, CCNB1) и генов апаптоза (BCL2, В АХ, BAG) при различных вариантах цервикальных интраэпителиальных неоплазий, инвазивном раке шейки матки.

Определены молекулярные критерии начальных этапов кацерогенеза РШМ

Практическая значимость работы:

Обнаруженные в работе молекулярные маркеры раннего канцерогенеза могут быть положены в основу метода дифференциальной диагностики интраэпителиальных неоплазий. Полученные молекулярно-генетические данные могут войти в комплекс прогностических маркеров, отражающих возможные пути развития гиперпролиферативных заболеваний шейки матки, что позволит сформировать дифференцированный подход и лечение цервикальных интраэпителиальных неоплазий, широко используя консервативные методы терапии, и улучшить качество медицинской помощи при патологии шейки матки.

Положения, выносимые на защиту.

1. Большинство наблюдений цервикальных интраэпителиальных неоплазий III ст. (са in situ) и инвазивный рак шейки матки, сопровождаются экспрессией онкобелка Е7 в сочетании с ВПЧ высокого онкологического риска.

2. Высокий уровень теломеразной активности выявляется при CIN III и ивазивном раке шейки матки.

4. Лечение цервикальных интраэпителиальных неоплазий в группе пациенток раннего репродуктивного возраста должно сопровождаться и опираться на результаты молекулярно-биологических методов

Апробация работы.

Основные результаты работы представлены и доложены на Всероссийском научном форуме «Радиология 2005», (Москва, Центр международной торговли 31мая-3 июня 2005г.) Российский Форум «Мать и дитя», «Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний» (Москва, 4-9 июня 2007г.). Международный конгресс молодых ученых «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии» (ФГУ РНЦ РР Москва 2007г.), Международный конгресс молодых ученых «Актуальные вопросы лучевой диагностики и онкологии» (ФГУ РНЦ РР Москва 2008г.). 13th Biennial Meeting of the International Gynecologic Cancer Society which will be held in Prague, Czech Republic. 2010.

Материалы диссертации доложены на VIII конгрессе «Человек и лекарство» 11-15 апреля 2011г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рецензируемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 290 источника, из них 84 отечественных и 116 зарубежных. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 17 рисунками.

Заключение диссертационного исследования на тему "Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки."

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Уровень теломеразной активности при CIN дает возможность дифференцировать терапевтическую тактику. Высокий уровень активности теломеразы, циклина В1 и Ki67 являются фактором неблагоприятного прогноза при предраке шейки матки и формируют более активные лечебные мероприятия.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Хунова, Лилия Заудиновна

1. Адамян Л.В. Сохранение репродуктивной функции у онкологических больных / Л.В. Адамян, К.И. Жорданиа, С.Ф. Белобородов // Энциклопедия клинической онкологии: Руководство для практических врачей (М.И.Давыдов ред). - М.: РЛС.-2005. - С.931-937.

2. Акопова Н.Б. Возможности рентгеновской денситометрии в диагностике инволюционно-атрофических и гиперпластических процессов у женщин в постменопаузальном периоде. Автореф. дис. . канд.мед. наук.: 14.00.19, 14.00.01/РНЦРР.- Москва, 2002.-22с.

3. Анисимов В.Н. Рак у пожилых / В.Н. Анисимов, В.М. Моисеенко, К.П. Хансон.- С-Пб.: ООО Изд-во Н.-Л, 2004.-336с.

4. Аполихина И.А. Папилломавирусная инфекция гениталий у женщин. Под ред. В.И. Кулакова. / И.А. Аполихина М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002.-112с.

5. Артымук Н.В. Ожирение и онкологические заболевания женских половых органов / Н.В. Артымук, Ю.А. Магарилл // Медицина в Кузбассе: Материалы научно-практич. межрегион, конф. Ленинск-Кузнецкий, 2004.-№ 11.-С.27-28.

6. Ашрафян Л.А. Опухоли репродуктивных органов (этиология и патогенез) / Л.А. Ашрафян, В.И. Киселев.-М.: Димитрейд График Групп, 2007,- 216с.

7. Здоровье женщин и менопауза. / Пер. с английского; Гл. редактор Н.К. Венгер.-М.:ГЭОТАГ-МЕД,2004.-528с.

8. Здравоохранение в России. 2008. Стат. сб. / Росстат. М.: Пр.-изд. комб. ВИНИТИ, 2009. - 365с.

9. Зильбер Л.А. Эволюция вирусно-генетической теории возникновения опухолей / JI.A. Зильбер.-М.:Наука, 1975.-286с.

10. Злокачественные новообразования в России в 2006 году (заболеваемость и смертность)./ Под ред. В.И.Чиссова, В.В.Старинского, Г.В.Петровой.-М.: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2008.-248с.

11. Исследование проблем менопаузы в 90-х годах. Доклад на-уч.гр. ВОЗ 866./М.: Медицина, 1996.-155с.

12. Канцерогенез / Под ред. Д.Г. Заридзе.- М.: Медицина, 2004.-576с.

13. Карселадзе А.И. Некоторые проблемы клинической морфологии эпителиальных опухолей яичников / А.И. Карселадзе // Практическая онкология.-2000.-№4.-С. 14-18.

14. Киселев В.И. Этиологическая роль вируса папилломы человека в развитии рака шейки матки: генетические и патогенетические механизмы / В.И. Киселев, О.И. Киселев // Цитокины и воспаление, 2003.- Т. 2,- № 4.- С. 31-38.

15. Киселев В .И. Молекулярные механизмы регуляции гиперпластических процессов./ В.И. Киселев, A.A. Ляшенко.- М.: Изд-во «Димитрейд Грасрик Групп», 2005.- 346 с.

16. Киселев Ф.Л. Вирус-ассоциированные опухоли человека: Рак шейки матки и вирус папилломы / Ф.Л. Киселев // Биохимия, 2000.- № 1.- Т.65.- С. 79-91.

17. Клиническая эффективность заместительной гормонотерапии / В.Н. Серов, В.П. Сметник, В.Е. Балан, Я.З. Зайдиева, Г.А. Мельниченко // Пособие для врачей.-М.-2001.-37с.

18. Кулинский В.Н., Колесниченко Л.С. Молекулярные механизмы действия гормонов. Рецепторы. Нейромедиаторы. Системы со вторыми посредниками / В.Н. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Биохимия, 2005.- №.1.-Т.70- С. 33-50.

19. Козлова В.И. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий / В.И. Козлова, А.Ф. Пухнер. -М.: Триада-Х, 2003.-440с.

20. Козаченко В.П. Клиническая онкогинекология: руководство для врачей / В.П. Козаченко.- М.: Медицина, 2005. 376 с.

21. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза./ Б.П. Копнин // Биохимия, 2000.- Т.65.- С.5- 33.

22. Кубанов A.A. Современные методы диагностики вируса папилломы человека / A.A. Кубанов // Вестник Дерматологии и венерологии, 2005.-№1.-С. 26-35.t

23. Левин Ю.М., Свиридкина Л.П. Эндоэкологическая концепция лечения, предотвращения преждевременного старения и вымирания.// Альманах «Геронтология и гериартрия».-2001.-№1.-С. 29-32.

24. Макацария О.Д. Заместительная гормональная терапия: «за и против». Часть I. / О.Д. Макацария, В.О. Бицадзе // Атмосфера. Кардиология, 2003.-№1.-С. 29-33.

25. Максимов С.Я. Факторы риска возникновения злокачественных новообразований органов репродуктивной системы женщин / С.Я. Максимов // Вопр. Онкологии, 2003.- Т. 49.- С. 496-501.

26. Манухин И.Б. Заболевания наружных половых органов / И.Б. Манухин, Н.И. Кондриков, Т.П. Крапошина.-М.:МИА, 2002.-303с.

27. Манухин И.Б. Клинические лекции по гинекологической эндокринологии. Руководство для врачей / И.Б. Манухин, Л.Г. Тумилович, М.А. Геворкян .- Москва: Геотар-Мед, 2006.-320с.

28. Манухин И.Б. Здоровье женщины в климактерии / И.Б. Манухин, В.Г. Тактаров, C.B. Шмелева.-М.:Литтерра, 2010.-256с.

29. Мацко Д.Е. Современные методы в практической онкоморфологии / Д.Е. Мацко, К.Е. Шелихова // Практическая онкология, 2007.-№4.-Т.8.-С.182-187.

30. Минкина Г.Н. Предрак шейки матки / Г.Н. Минкина, И.Б. Манухин, Г.А. Франк. — Москва: Аэрограф-медиа, 2001.-112с.

31. Неизбежность реформы нормативно-правового регулирования здравоохранения. / А.Г. Аганбегян, Ю.В. Варшавский, В.В. Китаев, В. Д. Жуковский и др // Экономическая политика.-2007.- №1.- С. 151-160.

32. Никитин Ю.П. Распространенность компонентов метаболического синдрома X в неорганизованной городской популяции (эпидемиологическое исследование) / Ю.П. Никитин, Г.Р. Казека, Г.И. Симонова // Кардиология.-2001.-№ 9.-С. 37-40.

33. Нечушкина В.М. Заместительная гормонотерапия после лечения злокачественных опухолей женских половых органов. / В.М. Нечушкина, К.Ю. Морхов В.В.Кузнецов // Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2007.-Т.18.-№4.- С. 13-18.

34. Оловников A.M. Редусомная гипотеза старения и контроля биологического времени в индивидуальном развитии / A.M. Оловников // Биохимия, 2003.-Т.68.-Вып. 1.- С. 7-41.

35. Петрова A.C. Роль и место цитологической диагностики в клинической практике/А.С.Петрова, К.А.Агамова, А.Г.Ермолаева// Клин, лабораторная диагностика.- 1996.- № 4.- С.4-7.

36. Прилепская В.Н. Патогенетические основы ожирения и нарушения репродуктивной функции женщины / В.Н. Прилепская, Е.В. Цаллагова // Акушерство и гинекология, 2006.-№5.- С.51-55.

37. Руководство по эндокринной гинекологии / Под ред. Е.М. Вихляевой.-М.: 2002.-768с.

38. Серов В.Н. Климактерический период: нормальное состояние или патология? / В.Н. Серов.- Рос. Мед. Журнал, 2002.- Т. 10.- №18,- С. 791-794.

39. Сметник В.П. Медицина климактерия. / В.П. Сметник.- М.-Литерра, 2006.-848с.

40. Сметник В.П. Современные представления о менопаузальном метаболическом синдроме/ В.П. Сметник, И.Г. Шестакова // Consilium medicum, 2003.- Т.5.-№ 9. -С. 543-546.

41. Стрижаков А.Н. Генитальные инфекции / А.Н. Стрижаков, А.И. Давыдов, O.P. Баев. -М.: Издательский дом «Династия», 2003,- 140с.

42. Урманчеева Д.Ф. Вопросы эпидемиологии и диагностики рака яичников / Д.Ф. Урманчеева, И.Е. Мешкова // Практическая онкология., 2000.-№4.- С. 7-13.

43. Урманчеева А.Ф. Онкологические вопросы эстрогенной заместительной гормонотерапии (клиническая лекция) / А.Ф. Урманчеева, Л.М. Берштейн, М.М. Бурнина. СПб.: ОРИОН ФАРМА, 2002. - 20 с.

44. Урогенитальные расстройства в климактерии. Руководство по климактерию / В.Е. Балан, В.П. Сметник, A.C. Анкирская, В.В. Муравьева, Г.Т. Сухих. -М.: Мед.информ.агентство. -2007.-С 194-264.

45. Хансон К.П. Молекулярная генетика рака яичников / К.П. Хансон, E.H. Имянитов // Практическая онкология, 2000. -№4.- С.3-6.

46. Хмельницкий O.K., Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки матки / O.K. Хмельницкий.- СПб.: Сотис, 2000.- 333с.

47. Цейтлин О.Я. Минеральная плотность костной ткани, показатели ее метаболизма и кальций-фосфорного обмена у пожилых и старых людей.// Альманах «Геронтология и гериартрия», 2001.-вып.№1.-с49-52.

48. Чазова И.Е. Метаболический синдром. / И.Е.Чазова, В.Б.Мычка // Consilium medicum-2002.- Том 04,- N11-С.587-590.

49. Чижова Г. В. Медицинские аспекты физиологической и индуцированной постменопаузы / Г.В.Чижова, Т.Ф.Алтухова, Л.Ю.Канина, Т.И:Баранова, Л.Ф; Гнатюк // Дальневост. мед. журн, 2000, N 3. С.52-55.

50. Чиссов В.И. Состояние онкологической помощи в России в 2007г./

51. B.И.Чиссов, В.В.Старинский, Г.В.Петрова.- М.: ФГУ МНИОИ им.П.А.Герцена, 2008.-184с.

52. Чернова Т.О; Методы денситометрическош. исследования . / Т.О.Чернова, В.Я.Игнатков //Вопросы акуш.гинек. иперинат.,2003.-Т.2.-№1.1. C.71-77.

53. Чулкова О.В. Диагностика и лечение фоновых и предраковых заболеваний вульвы / О.В.Чулкова, Е.Г. Новикова, В.В. Соколов, Е.А. ■ Чулкова // Практическая онкология, 2006.-Т.7.-№4.- С. 197-204.

54. Шаталова Т.М. Рак яичников у женщин пожилого и старческого возраста/ Т.М.Шаталова, В.В.Кузнецов, А.Г.Блюменберг, В.А.Горбунова //Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, 2003.- №2,- С.69-71.

55. Шестаков М.В. Дисфункция эндотелия — причина или следствие метаболического синдрома? / М.В. Шестаков // Русский мед. журн., 2001, т. 9, № 2.

56. Шипицына Е.В. Папилломавирусная инфекция: факторы риска цервикальной неопластической прогрессии / Е.В. Шипицына, К.А. Бабкина, Е.А. Оржесковская // Журнал акушерства и женских болезней, 2004. Т. LIII.- № 3.- С. 38-45.

57. Abu-Abid S. Obesity and cancer. / S. Abu-Abid, A. Szold, J.Klausner // J.Med., 2002.-Vol. 33 (1-4).-P. 73-86.

58. Andreyko J. Concordant suppression of serum immuno-reactive LH. / J. Andreyko, S. Monroe // J. Clin. Endicrinol. Metab.-1992, -Vol. 74. -P. 399.

59. Aoki M. Retroviral oncogenes and TOR./ M. Aoki, P.K. Vogt // Current topics in microbiology and immunology, 2004.- Vol.279.-P.321-338.

60. Armamento-Villareal R.C. The oxidative metabolism of estrogen modulates response to ERT/HRT in postmenopausal women. / R.C. Armamento-Villareal, N. Napoli, T. Klug, R. Civitelli // J. Bone, 2004. -Vol.35.-P. 682-688.

61. Asian G. Sexual function in women with urinary incontinence / G. Asian, H. Koseoglu, O. Sadie // Int. J. Import. Res., 2005.-Vol.17.- P. 248-251.

62. Auborn K. Estrogen metabolism and laryngeal papillomatosis a pilot study on dietary prevention / K. Auborn, A. Abramson // Anticancer research, 1998. -Vol. 18.-P. 4574-4589.

63. Barnard P. The human papillomavirus Baud V. Signal transduction by tumor necrosis factor and its relatives / V. Baud, M. Karin // Trends Cell Biol. -2000. -Vol. 11. -P. 372-377.

64. E7 protein is able to inhibit the antiviral and anti-growth functions of interferon / P. Barnard P., E. Payne, N.A McMillan // J. Virology, 2000. -Vol. 277. -P. 411 -419.

65. Becagli L. Hormone receptors in dystrophic and neoplastic vulvar disease / L Becagli, F. Scrimin, "D.De Salva // Preliminary consideration. Clin. exp. Obstet. Gynecol., 1983. -Vol. 23, -P. 145-49.

66. Bedell M.A. The E6-E7 region of human papillomavirus type 18 is sufficient for transformation of NIH 3T3 and rat-1 cells / M.A Bedell, K.H Jones, L.A. Laimins // J Virol., 1987. -Vol. 61. -P. 3635-3640.

67. Beral V Evidence from randomised trials on the long-term effects of hormone replacement therapy / V., Beral, E. Banks, G.Reeves // Lancet, 2002.-Vol.360.-P.942-944.

68. Berek J. Practical gynecologic oncology / J. Berek, N. Haker // Cancer Treatment. 4th ed. Philadelphia:Saunders., 2005. 908p.

69. Bernard H.U. Transcriptional control and cell type specifity of HPV gene expression / Bernard H.U., D. Apt // Arch. Dermatol., 1994. -Vol. 130. -P. 210215.

70. Bishop J.M. Cellular oncogenes and retroviruses / J.M. Bishop // Ann.Rev. Biochem.-1983. -Vol.52. -P.301-354.

71. Bishop J.M. Molecular themes in oncogenesis / J.M. Bishop // Cell., 1991. -Vol.64.-P. 235-248.

72. Bjorntorp P. Adipose tissue distribution and function / P. Bjorntorp // int.J. Obes., 1991. -Vol. 15(2). -P. 67-81.

73. Bokhman J. Two pathogenetic types of endometrial carcinoma / J. Bokhman // Gynecol. Oncol., 1983. -Vol. 15. -P. 10-17.

74. Bosch F.X. The viral etiology of cervical cancer./ F. X.Bosch, N.Munoz // Virus Res., 2002. -Vol.89(2). -P. 183-190.

75. Bray G. Obesity: a time bomb to be defused / G. Bray //Lancet., 1998.-Vol.68(6).-P. 160-161.

76. Bruning P.F. Insulin resistance and breast cancer risk. / P.F. Bruning, J.M.G. Bonfrer, P.A.H. van Noord, W.J. Nooijen // IntJ.Cancer, 1992. Vol. -Vol.52. -P. 511-516.

77. Burger H.G. A review of hormonal changes during the menopausal transition: focus on findings from the Melbourne Women's Midlife Health Project /

78. H.G. Burger, G.E. Hale, D.M. Robertson, L. Dennerstein // Human Reproduction, 2007. -Vol. 13.-N.6. -P.559-565.

79. Butel J.S. Viral carcinogebesis: revelation of molecular mechanisms and etiology of human disease / J.S. Butel // Cancerogenesis, 2000.-Vol.21.-P. 405426.

80. Calle E.E. Postmenopausal hormone use and breast cancer associations differ by hormone regimen and histologic subtype / E.E. Calle, H.S. Feigelson, J.S. Hildebrand, L.R. Teras et al. // Cancer, 2009. -Vol. 115(5), -P. 936-945.

81. Campisi J. Between Scilla and Charibda: p53 links tumor suppression and aging / J. Campisi // Mech.Ageing Dev., 2002.-Vol.l23.-P.567-573.

82. Campos H. Differences in low density lipoprotein subtractions andapolipoproteins in premenopausal and postmenopausal women / H. Campos, J.R. McNamara, P.W. Wilson //J.Clin. EndocrinolMetab., 1988. -Vol.67.-P.30.

83. Chen Z. Within-person variability of the ratios of urinary 2-hydroxyestrone to 16alpha-hydroxyestrone in Caucasian women / Z. Chen, W. Zheng, L.M. Dunning, K.G. Anderson, R.S. Parrish, J.L. // Steroids., 1999,-Vol. 64.-P. 856-859.

84. Chong H. Structure and expression of a membrane component of the inhibin receptor system / H. Chong, S.A. Pangas, D.J. Bernard, E.Wang, J. Gitch // Endocrinology, 2000.- Vol. 14.-No.7.- P. 2600-2607

85. Colditz G.A. Hormone replacement therapy and the risk of breast cancer; results from epidemiologic studies / G.A. Colditz, K.M. Egan, M.J. Stampfer // Am.J. ObstetGynaecol., 1993.-Vol. 168. -P.473-1480.

86. Colditz G.A. The use of estrogen and progestins and risk of breast cancer in postmenopausal woman / G.A. Colditz, S.E. Hankinson, D.J. Hunter et al. // N. English J. Med., 1995. -P.1589-1593.

87. Coop J. Hormonal and nongormonal interventions for menopausal symptoms / J. Coop // Maturitas, 1996. -Vol. 23. -P. 159-168.

88. Cordozo L. Estriol in the treatment of postmenopausal urgency / L. Cordozo, H. Rekers, A. Tapp // A multycentral stady. Maturitas, 1993. -Vol. 18(1). -P.47-53.

89. Creasman W.T. Recent advances in endometrial cancer / W.T. Creasman, L.E. Gary // J. of Surgical Oncology, 2003.- vol. 6.- I.6.-P.339-342.

90. Crodstein F. Postmenopausal hormone therapy and mortality / F.Crodstein, M.J. Stampfer, C.A. Colditz //N. Engl. J. Med., 1997. -Vol.336. -P. 1769-1775.

91. Cummings S.R. Lifetime risk of hip. Colins or vertebral fracture and coronary heart disease among white postmenopausal women / S.R. Cummings, D.M. Black, S.M. Rubin //Arch. Intern. Med., 1989. -Vol.l49.-P.2445-48.

92. Dadmarz R. CD4+T lymphocytes infiltrating human breast cancer recognise autulogous tumor in an MHC-class-11 restracted fashion / R. Dadmarz,

93. M. Sgagias, S. Rosenberg // Cancer Immunol. Immunother., 1995.-Vol.40(l),-P.l-9.

94. Davis D.L. Medical hypothesis: bifunctional genetic-hormonal pathways to breast cancer. / D.L. Davis, N.T. Telang, M.P. Osborne, H.L.Bradlow// Environ. Health Perspect., 1997. -Vol.105. -P.571 -576.

95. Derogatis L.R. The female sexual distress Scale: initial validation of a standartized scale for assessment of sexually related personal distress in women / L.R. Derogatis, R. Rosen, S. Lieblum et al // Sex. Marital Therapy., 2002.-V.28.-P.217-330.

96. De Laet C.E. Fractures in the elderly : epidemiology and demography / C.E. De Laet, H.A. Pols // Baillities Best Pract. Res Clin. Endocrinol. Metab., 2000.-V.14.-No.2--P. 171 -179.

97. Dennerstein L. A prospective population-based study of menopausal symptoms / L. Dennerstein, E.C. Dudley, J.L. Hopper et al. // Obstet. Gynecol., 2000. -Vol.96. N.3.-P.351-358.

98. Dennerstein L. Modeling women's health during the menopausal transition: a longitudinal analysis / L. Dennerstein, P. Lehert, J.R. Guthrie, H.G. Burger // Menopause, 2007.-V.14.-P.1-10

99. DePinho R.A. The age and cancer / R.A. DePinho // Nature, 2000.-Vol.408.-P.248-254.

100. Dolle M.E.T. Mutational fingerprints of aging / M.E.T. Dolle, W.K. Snyder, D.B. Dunson, J. Vijg //Nucleic Acids Res., 2002.-Vol.30.-P.545-549.

101. Dunne E.F. Prevalence of HPV infection among females in the United States./ E.F. Dunne, E.R. Unger, M. Sternberg, G. McQuillan et al // JAMA., 2007.-Vol.297.-P.813-819.

102. Dyson N. The human papilloma virus-16 E7 oncoprotein is able to bind to the retinoblastoma gene product / N. Dyson, P.M. Howley, K. Munger, E. Harlow // Sciece. -1986. -Vol. 243. -P. 934-937.

103. Eifel P.J. Gynecologic cancer / P.J. Eifel, D.M. Gershenson, J.J. Kavanagh, E.G. Silva. USA: Springer, 2006.-289 p.

104. Eiken P. Continuous combined Hormone Replacement Therapy for osteoporosis 10 yeardata on Klibgest/ P. Eiken // Eur. Menopause J., 1996. -Vol.3. -P.141-146.

105. Efeyan A. p53: guardian of the genome and policeman of the oncogenes / A. Efeyan, M. Serrano // J.Cell cycle., 2007.-Vol.6.-No.l0.-P. 1006-1010.

106. Engeland A. Height, body mass index, and ovarian cancer / A. Engeland, S. Tretli, T. Bjorge //J. Natl. Cancer Inst., 2003. -Vol.95.- N.16.-P.1244-1248.

107. Enmark E. Human estrogen-receptor beta-gene structure, chromosomal localization, and expressiob pattern / E. Enmark, M. Pelto-Huikko et al. // J.Clin.Endocrinol. Metab., 1997. -Vol.82.-P.4258-4265.

108. Enzi G. et al. Bone mineral density and body composition in underweight and normal elderly subjests, // Osteopor.lnt., 2000. -Vol. 11(12). -P. 1043-1050.

109. Epstein M. Historical background; Burkit's Lymphoma and Epstein-Barr virus/ M. Epstein // IARC Sci Publ., 1985. Vol. 60. -P 17-27.

110. Eriksen E.F. Evidence of estrogen receptor in normal human osteoblast-like cells / E.F. Eriksen, D.S. Colvard, N.J. Berg et al.// Science., 1988. -P.241-84.

111. Faddy M. Accelerated disappearance of ovarian follicles in mid-life: implications for forecasting menopause / M. Faddy, R.Y. Gosden, A. Gougeon // Hum.Re-prod., 1992. -Vol.7.-P.1342

112. Falk R.T. Urinary Estrogen Metabolites and Their Ratio among Asian American Women / R.T. Falk, T.R. Fears, X. Xu, R.N. Hoover et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 2005.-Vol.14.-P. 221-226.

113. Finch E.C. The regulation of physiological changes during mammalian aging, Q. Rev. Biol. / E.C. Finch, 1976.- Vol. 51.-N.1.- P. 49-83.

114. Fisher D.A. Endocrinology. Test Selection and Interpretation. Fourth Edition/ D.A. Fisher// Gonadal Function.- USA: Quest Diagnostics Incorporated, 2007.-P.8-10.150; Fishman J. Oxidative metabolism of estradiol / J. Fishman, I I.I. 13radlow,

115. T.F. Gallagher//J. Biol. Chem.,1960. -Vol.235. -P.3104-3107.

116. Fishman J. The role of estrogen in mammary carcinogenesis / J. Fishman, M.P. Osborne, N.T. Telang//Ann. NY Acad. Sci., 1995. -Vol.768. -P;91-100.

117. Ford E. Prevalence of the Metabolic syndrome among US Adults / E. Ford , W. Giles, W. Dietz// JAMA., 2002.-Vol.287.-P.356-359.

118. Ford C.H. Impact of Molecular Biology on Cancer Treatment: I Therapeutic Targets / C.H. Ford // Kuwait Medical Journal., 2003. -Vol.35(4). -P.253-262.

119. Fowke J.H. Urinary estrogen metabolites and breast cancer: differential pattern of risk found with pre- versus post-treatment collection / J.H. Fowke, D. Qi, H.L. Bradlow, X.O. Shu, Y.T. Gao, J.R. Cheng et.al.// J. Steroids, 2003.-Vol.68.- P. 65-72.

120. Franco E.L. Epidemiologic evidence and human papillomavirus infection as nessesary cause of cervical cancer / E.L.Franco, T.E. Rohan, L.L.Villa. //J.Nat.Cancer Inst., 1999.-Vol.91.-P.506-511.

121. Fuller A. Uterine cancer / A. Fuller, M. Seiden, R. Young R.London: Martin Dunitz., 2004.- 230p.

122. Genazzani A.R. Hormone replacement therapy and cancer / A.R. Genazzani // The Current Status of Research and Practice/' Paryhenon Publishing Group., 2002.-P.281.

123. Gethmann U. Effect of 2-hydroxyoestrone on lutropin (LH) and follitropin (FSH) secretion in the ovarectomized primed rat / U. Gethmann U., R. Knuppen // Hoppe-Seyler'sZ. Physiol. Chem., 1976. -Vol.357.-P.1011-1013.

124. Gillum R. Body fat distribution, obesity, overweight and stroke incidence in women and men: the NHANES I Epidemic Follow-up Study / R. Gillum, M. Mussolino, J. Madans // Int. J Obes. Relat. Metab. Disord., 2001. -Vol.25.-P. 628-638.

125. Ginsburg E.S. Half-life of estradiol in postmenopausal women / E.S. Ginsburg, X. Gao, B.F. Shea, R.L. Barbieri // Gynecol. Obstet. Invest., 1998. -Vol.45.-P.45-48.

126. Ghosh S. Missing pieces in the NF-B puzzle / S. Ghosh, M. Karin // J. Cell, 2002. -Vol.109. -P.81-96.

127. Gold E.B. Factors associated with age at natural menopause in a multiethnic sample of midlife women / E.B. Gold, J. Bromberger, S. Crawford et al // Am.J.Epidemiol., 2001.-Vol.153.-P.865-874.

128. Gomperts B.D. Signal Transduction / B.D. Gomperts, Kramer I.M., Tatham PER // Elsevier Academic Press, USA, Orlando, Florida. -2003. -P. 257-392.

129. Gordon J. Steroids and lipid metabolism: The hypocholesteremic effect of estrogen metabolites / J. Gordon, W. Cantrall, H. Alberts et al. // J. Steroids., 1964. -Vol.4. -P.267-291.

130. Gosden R. Follicular status at menopause / R. Gosden // J. Hum. Reprod., 1987. -VoL2.-P.617.

131. Gtannini S.L. Cytokine expression in squamous intraepilheial lesions of the uterine cervix: impications for the generation of local immunos uppression / S.L. Gtannini et al // Clin. Exp. Immunol., 1998. -Vol.113.-P.183-189.

132. Gupta J. Association of human papillomavirus type 16 with neoplastic lesion of the vulva and other genital sites by in sity hybridization / J. Gupta, S. Piltti, F. Rilke, K. Shan //Am.J. Pathol., 1987.-Vol.l27.-P.206-215.

133. Gustafsson J.A., Warner M. Estrogen receptor in the breast: role \n+ estrogen responsiveness and development of breast cancer / J.A. Gustafsson, M. Warner//J. SteroiaBiochem. Mol. Biol., 2000. -Vol.74.-P.245-248.

134. Harlan W. Secular trends in body mass in the United States / W. Harlan, J. Landis, K. Regal 11 Am.J.Epidemiol., 1988. -Vol.128.-P.1065.

135. Hachisuga T. Human papillomavirus and p53 overexpression in carcinomas of uterine cervix, low uterine segment and endometrium / T. Hachisuga, N. Matsuo, T. Iwasaka Et al // Pathology., 1996.-Vol.28.-P.28-31.

136. Hasegava M. Expression of p21/WAF-l/ status of apoptpsis and p53 mutation in esophageal squamous cell carcinoma with HPV infection / M. Hasegava, I. Ohoka, K. Yamazaki Et al. // J. Pathol.Int., 2002 -Vol.52.-P. 442-450.

137. Hauner H. Plasma concentration of TNFa and its soluble receptors in obese subjects / H. Hauner, M. Bender, F. Hube // Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 1998. -Vol.22.-P.1239-43.

138. Hebert-Croteau N.A. A meta — analysis of hormone replacement therapy and colon cancer in women / N.A. Hebert-Croteau // Cancer Epidemiol. Biomark.and Prevent., 1998.-Vol.7. -P.653-660.

139. Hee J. Perimenopausal patterns of gonadotropins, immunoreactive inhibin, estradiol and progesterone / J. Hee, J. MacNaughton, M. Banhag // Maturitas., 1993.-Vol.18. -P. 9.

140. Henderson B.E. Hormonal cancerogenesis / B.E. Henderson, H.S. Feigelson // Cancerogenesis, 2000.-Vol.21.-P.427-433.

141. Hess G. Changes in mechanisms of hormone and neurotransmitter action during aging: current status of the role receptor and postreceptor alteration / G. Hess, G.S. Roth // Mech. Ageing Dev., 1982. -Vol.20(3). -P. 175-194.

142. Hildesheim A. Host and viral genetics and risk of cervical cancer/ A. Hildesheim, S.S. Wang // Virus Res., 2002.-Vol.89.-P.229-240/

143. Hoskins W. J. Principles and practice of gynecologic oncology /W.J. Hoskins, C.A. Perez, R.C. Young, R. Barracat et al // USA: Fourth edition Lippincot Williams & Wilkins, Philadelphia, 2005. -PP.3-33, 561-586.

144. Im A. Urinary estrogen metabolites in women at high risk for breast cancer / A. Im, V.G. Vogel, G. Ahrendt, S. Lloyd et al. //Carcinogenesis., 2009. -Vol.30.-N.9. -P. 1532-1535.

145. Imreh S. Mechanisms of oncogene perturbation. In Peters G. Vousdeb K.H: Oncogenes and tumor suppressors / S. Imreh, L. Szekely, K.G. Wiman, G. Klein // UK: Oxford University Press, 1997. -P.3-32.

146. Isaacs S. Hormonal balance: understanding hormones, weigh, and your metabolism / S.Isaacs, T. Leopold // Bull Publishing Company., 2002. -P. 397.

147. International Agency for Research on Cancer. / IARC Biennial Report 2008-2009.- Leon:Cedex 08, 2009. -145p.

148. International Expert Consensus on Primary Therapy of Early Breast Cancer / Switz. St Gallen, 2009.- 23p.

149. Jee S.H. Polymorphysm p53 codon-72 and invasive cervical cancer: meta analysis / S.H. Jee, S.Y. Won, J.E. Yun et al. // Int.J.Gynaecol.Obstet., 2004. -Vol.85.- N.3. -P.301-308.

150. Jonsson F. Obesity and hormon-dependent tumors / F. Jonsson, A. Wolk, N. Pedersen et al. // Int J Cancer, 2003. -Vol.l06(4).-P.594-599.

151. Iversen T. Intraepithelial! and invasive squamous cell neoplasia of the vulva / T. Iversen, S. Tretli // Obstet. And Gyn., 1998. -Vol.91. -P. 969-972.

152. Kaaks R. Effects of weight control and physical activity in cancer prevantion: role of endogenous hormone metabolism / R. Kaaks, A. Lukanova // Ann. N. Y. Acad. Sci., 2002.- Vol. 96.- P. 3268-3281.

153. Kaaks R. Obesity, endogenous hormones and endometrial cancer risk: synthetic review / R. Kaaks, A. Lukanova, M. Kurzer // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 2002. -Vol.11(12).-P.1531-43.

154. Kabat G.C. Urinary estrogen metabolites and breast cancer: a case-control study./ G.C. Kabat, C.J.Chang, J.A. Sparano et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 1997. -Vol.6. -P.505-509.

155. Kaelin W.J. Functions of retinoblastoma protein / W.J. Kaelin // Bioessay, 1999.-Vol.21.-P. 950-958.

156. Katiyar S. Polymorphism of the p53 codon 72 Arg/Pro and risk of HPV type 16/18-assosiated cervical and oral cancer in India. / S. Katiyar, B.K. Thelma, N.S. Murthy et al. // Mol.Cell. Biochem., 2003.-Vol. 252(l-2).-P. 117-124.

157. Kaufman J.M. Pharmacokinetics of oestrogens and hormone replacement therapy / J.M. Kaufman // Gur. Menopause J., 1997. -Vol. 4. -P. 14-22.

158. Khan S.A. Estrogen receptor expression in bening breast epithelium and breast cancer risk / S.A. Khan, M.A.M. Rogers, K.K. Khurana et al, // J.Nat.Cancer Inst., 1998. -Vol. 90. -P.37-42.

159. Klein-Hitpass L. Specific binding of estrogen receptor to the estrogen responce element / L. Klein-Hitpass, S.Y. Tsai, G.L. Greene, J.H.Clark et al // Mol. Cell. Biol., 1989.-Vol.9.-No. 1 .-P.43-49.

160. Krtolica A. Senescent fibroblasts promote epithelian cell grouth ^ rr -id tumorogenesis: a link between cancer and aging / A. Krtolica, S.Parinello,1.skett at al // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 200l.-Vol.98.-P. 12072-12077.

161. Kuchta K.F. Pathophysiologic changes of obesity / K.F. Kuchta // J". Anesthesiology Clin! N. Am., 2005.- Vol.23.-P.421-429.

162. Kuller L.H. Estrogens and women's health: Interrelation of coronary hea:disease, breast cancer, and osteoporosis / L.H. Kuller, K.A. Matthews, E- '1 Meilhan // J Steroid Biochem. Mol. Biol., 2000.-Vol. 74.-P. 297-309.

163. Labrie F. Is dehydroepiandrosterone a hormone? / F. Labrie, V. Luu-TT Tue, A. Belanger, S.X. Lin, J. Simard, G. Pelletier, C.J. Labrie // Endocrinol., 200^11. Vol. 187.- P: 169-196.

164. Lacey J. Obesity as a potential risk factor for adenocarcinomasquamous cell carcinomas of the uterine cervix. / J. Lacey, C. Swanson et al— // Cancer,-2003. -Vol.15.- N.98.- N.4. -P.814-21.

165. Lai C. HPV in benigh and malignant ovarian and endometrial tissues / Lai, S. Hsueh, C. Lin et al. // Int. Gyn. Pathol., 1992. -Vol.1. -P.210-215. •

166. Lange C.A. Hipothesis: progesterone primes breast cancer cells for cro^==^stalk with proliferative or antiproliferative signals / C.A. Lange, J.K. Richer, KI-IB.

167. Horwitz //MoI.Endocrinol., 1999. -Vol.13. -P. 829-836.

168. Lapinska-Szumczyk S. Obesity, hypertension and diabetes melitus in patients with endometrial cancer / S. Lapinska-Szumczyk, Emerich Janusz^ // Gynecol. Pol., 2003. -Vol.74.- N.4. -P.274-277.

169. Lauritzen C., Studd J. Current management of the menopause / <3. Lauritzen, J. Studd//Taylor & Frances., 2005. -P.448.

170. Leelawattana R. The oxidative metabolism of estradiol conditions p< ^st-menopausal bone density and bone loss / R. Leelawattana, K. Ziambaras-=- J.

171. Roodman-Weiss, C. Lyss et al // J. Bone Miner. Res., 2000. -Vol. 15.-P. 25132520.

172. Lehn H. Physical state and biological activity of human papillomavirus genomes in precanrous lesions of the female genital tract / H. Lehn, L.L. Villa, F. Marziona, M. Hilgarth, H.G. Hillemans, G. Sauer // J Gen Virol., 1988. -Vol. 69. -P.187-196.

173. Lechner M.S. Ingibition of p53 tumor suppresspr gene / M.S. Lechner, L.A. Laimins //Nature., 1991.-Vol.351.-P.453-456.

174. Lin S.C. Regulation of the gp 80 and gp 130 subunits of the IL-6 receptors by sex steroids in the murine bone marrow / S.C. Lin, T. Yamate, Y. Taguchi et al. // J. Clin. Invest., 1997. -Vol. 100(8). -P. 1980-1990.

175. Lippman M.E. Autocrine and paracrine growth regulation of human breast cancer / M.E. Lippman, R.B. Dickson, S. Bates // Breast Cancer Res. Treat., 1986. Vol.7.- P.59-70.

176. Littman A.J. Assosiation between late age at infectious mononucleosis, Eipstein-Barr virus antibodies, and ovarian cancer risk / A.J. Littman, M.A. Rossing, M.M. Madeliene et al // Scand.J. Infect.Dis., 2003.-Vol.35.-P.728-735.

177. Liehr J.D. Hormone-associated cancer: mechanistic similarities between human breast cancer and estrogen-induced kidney carcinogenesis in hamsters / J.D. Liehr//Environmental health perspectives, 1997.- Vol.105.-Suppl.3.-P.565-569.

178. Liu H-P. Epstein-Barr virus latent membran protein / H.-P. Liu, Y.S.Chang // J. Biomed.Sci., 2003. -Vol.l0.-N.5. -P. 490-504.

179. Liu M. Epstein-Barr Virus latent membran protein 1 represses p53-mediated DNA repair and transcriptional activity / M. Liu, Y. Chang, S. Chen // Oncogen., 2005. -Vol. 24(16). -P. 2635-2646.

180. Longscope C. Endocrine Function of the Postmenopausal Ovary / C. Longscope //J. of the Society for Gynecologic Investigation, 2001.-Vol. 8.- No. 1. -P. S67-S68.

181. Lopez V. Epstein-Barr virus-associated cancer / V. Lopez, L. Young, P. Murray // Aetiology and Treatment. Herpes., 2003. -Vol. 10,-N.3. -P. 78-82.

182. Lord R.S. Estrogen metabolism and the diet-cancer connection: rationale for assessing the ratio of urinary hydroxylated estrogen metabolites /R.S. Lord, B. Bongiovanni, J.A. Bralley // Altern Med Rev., 2002. -Vol.7. -P. 12-29.

183. Loricz A.T. Human papillomavirus infection of cervix: relative risk associations of 15 common anogenital types / A.T. Loricz, R. Reid, A.B. Jenson // Obstet.Gynecol., 1992.-Vol 79.-P.328-337.

184. Lover R.R. Effects of Tamoxifen on bone marrow density in postmenopausal women with breast cancer / R.R. Lover, R.B. Mazess, H.S. Barden et al. //N. Engl. J.Med., 1992. -Vol.336. -P. 852-856.

185. Lustig R. Obesity and Cancer / R. Lustig, H. Bradlow. In Medical Care of the Cancer Patients, ed. by Sai-Ching Jim Yeung,Carmen P. Escalante,Robert F. Gagel // BC Decker Inc., 2009. -Vol 25. P 216-225.

186. MacNaughton J. Age related changes in follicle simulating hormone, luteinizing, hormone, estradiol and immunoreactive inhibin in women of reproductive age / J. MacNaughton, M. Banah, P. McCloud // Clin. Endocrinol., 1992.-Vol.36. -P.339.

187. Manolitsas T. Synchronous ovarian and cervical squamous intraepithelial neoplasia: an analysis of HPV status / T. Manolitsas, S. Lanham, A. Hitchcock, R. Watson // Gynec. Oncol., 1998. -Vol. 70. -P.428-431.

188. Marsh M.S. Hormone replacement Therapy and the Menopause / M.S. Marsh, J. Compston // Martin Dunitz Ltd., 2002. -P.43-59.

189. Mas S. Cancer, genes, and catechol estrogen metabolites/ S. Mas, N. Laso, M.J. Lafuente, A. Lafuente, R. Molina et al // Int. Journal of Clinical Oncology., 2003. -Vol.8(1). -P'1341-9625.

190. Matlashewski G. Human papillomavirus type 16 DNA cooperation with activated ras transforming primary cells / G. Matlashewski, J. Schneider, L. Banes, N. Jones, A. Murray, L. Granford // EMBO J., 1987. -Vol.6. -P.1741 -1746.

191. Matzuk M.M. Editorial: In Search of Binding—Identification of Inhibin Receptors / M.M. Matzuk // Endocrinology, 2000.- Vol.141.- No.7.-P.2281-2284.

192. Matthews C.E. Physical activity, body size, and estrogen metabolism in women / C.E. Matthews, J.H. Fowke, Q. Dai, L.H. Bradlow et al // Cancer Causes Control., 2004.-Vol. 15.-P. 473-481.

193. McCance D.J. The biology of E7 protein of HPV 16. In Papillomavirus research from natural history to vaccines and beyond Ed. by M. Saveria Campo / D.J. McCance // Gr. Britain: Caister Academic Press, 2006,- P.133-144.

194. McDonnell D.P. Connections and Regulation of the Human Estrogen Receptor / D.P. McDonnell, J.D. Norris // Science, 2002.-Vol. 296.-No. 5573.- P. 1642 1644

195. Meng Q. lndole-3-carbinol is a negative regulator of estrogen receptor-alpha signaling in human tumor cells / Q. Meng, R. Yuan, I.D. Goldberg // J. Nutr., 2000. -Vol.130. -P.2927-2931.

196. Michnovicz J.J. Increased estrogen 2-hydroxylation in obese women using oral indole-3-carbinol / J.J. Michnovicz // Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 1998. -Vol.22. -P.227-229.

197. Miller R.A. Gerontology as oncology / R.A. Miller //Cancer, 1991.-Vol.68.-P.2496-2501.

198. Modugno F. Epidemiology Obesity, hormone therapy, estrogen metabolism and risk of postmenopausal breast cancer / F. Modugno, E.K. Kevin, B. Cochrane, L. Kuller, T.L. Klug et al //Int.J.of Cancer., 2005.-Vol.18.is.105.-p. 1292-1301.

199. Montenarh M. Biochemical properties of the grouth supressor/oncoprotein p53 / M. Montenarh//Oncogene, 1992.-Vol.7.-P. 1673-1680.

200. Moodley M. The role of steroid contraceptive hormones in the pathogenesis of invasive cervical cancer: a review / M. Moodley, J. Moodley, R. Chetty, C.S. Herrington //Int. J. Gynecol Cancer, 2003. -Vol.13.- N.2. -P. 103-110.

201. Mori M. Recent progress in epidemiologic research of uterine cancer / M. Mori, S. Sagae // Gan To Kagaku Ryoho, 2001.-Vol. 28.- P.174-178.

202. Mosselman S. ER beta: identification and characterization of a novel human estrogen receptor / S. Mosselman, J. Polman, R. Dijkema // FEBS Lett., 1996. -Vol.392(l). -P. 49-53.

203. Mueck A.O. Estrogen-dependent Neoplasia What is the significance of estradiol metabolites / A.O. Mueck, H. Seeger, T.H. Lippert // Zentralbl. Gynakol., 2003.-Vol. 125.-P. 458-66.

204. Muir L. C. Cancer lence in five continents / L.C. Muir, J. Waterhouse, T. Mack, J. Powell, S. Whelan S. et al // France:International Agency for Can-b., 1987. -Vol. 5. -P. 88.

205. Munger K. The role of human papillomaviruses in human cancer / K. Munger //Front. Biosci.-2002.-Vol.7.-P.d641-d649.

206. Muti P. Estrogen metabolism and risk of breast cancer: a prospective study of the 2:16alpha-hydroxyestrone ratio in premenopausal and postmenopausal women / P. Muti, H.I. Bradlow, A. Micheli et al. // J. Epidemiology., 2000. -Vol.11. -P.635-640.

207. Napoli N. Effect of CYP1A1 Gene Polymorphisms on Estrogen Metabolism and Bone Density/ N. Napoli, D.T. Villareal, S. Mumm, L. Halstead, S. Sheikh et al // J. Bone Miner. Res., 2005.-Vol.20.-P. 232-239.

208. Nees M. Papillomavirus typel6 oncogenes downregulate expression of interieron-responsive genes and upregulate proiferation-associated NF-kBresponsive genes in cervical keratinocytes/ M. Nees // J. Vrd, 2001. -P. 42834296.

209. Newcomb P.A. Long-term hormone replacement therapy and risk of breast cancer in postmenopausal women/ P.A.Newcomb, M.P.Longnecker, B.E.Storer et al//Am. J. Epidem, 1995. -Vol.142. -P.788-795.

210. Nilsson S. Mechanisms of estrogen actions / S. Nilsson, S Macela., E. Treuter, M.Tujague, J. Tomsen // Physiol. Rev, 2001.-Vol.81.-No.4.-P.1535-1 565.

211. Ostor A.G. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia: a critical review./ A.G.Ostor// Int J Gynecol Pathol, 1993.-Vol. 12 (2).-P. 186-192.

212. Oren M. P53: The ultimate tumor suppressor gene / M. Oren // FASEB J, 1992.-Vol. 6.-P.3169-3176.

213. Papanicolaou D. lnterleukin-6: the endocrine cytokine / D. Papanicolaou // J.Clin. Endocrinol. Metab, 2000. -Vol.85. -P. 1331-1333.

214. Park J.S. Inactivation of interferon regulatory factor-1 tumor supressor protein by HPV E7 oncoprotein. Implication for the E7-medated immune evasion macharism in cervical carcinogenesis / J.S. Park et at // J. Biol. Chem. -2000. -P. 6764-6769.

215. Parker E. International weight loss and incidence of obesity-related cancer / E. Parker, A. Folsom // the Iowa Women,s Health Study, lnt.J.Obes.Relati-IVIe-tab.Disord, 2003. -Vol.Dec.27(12). -P. 1447-1452.

216. Parkin D.M. The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002 / D.M. Parkin. // Int J Cancer, 2006.- Vol. 118.-No.12.-P. 3030-3044.

217. Persson I. The risk of endometrial and breast cancer after estrogen treatment. A review of epidemiological studies / I. Persson // Acta Obstet. Gynecol. Scand. Suppl., 1985. -Vol.130. -P.59-66.

218. Peto J. Cancer epidemiology in the last century and the next decade / J. Peto // Nature, 2001.-Vol.411.-P.390-3 95.

219. Pfister H. Papillomaviruses: Particles, genom organization and proteins. In Papillomavirus and human disease / H. Pfister, P.G. Fuchs. Ed. K. Sujanen, L. Glissman, L.G. Koss // Ger.: Springer, Heidelberg., 1990.-P. 1-18.

220. Phelps W.C. Human papillomavirus: molecular targers and.prospects" for antiviral therapy / W.C. Phelps, J.A. Barnes, D.C. Loba // International Antiviral news, 1999.-Vol.7.-P.4-7.

221. Pinzger G. Diagnosis and therapy of vulvar dystrophy. // G. Pinzger, K. Heim K. et al. // Gynacol. Rundsch., 1991. -Vol.31. -Suppl.2. -P.225-229.

222. Pitot H.C. Fundamentals of oncology. Fourth edition revised and expanded / H.C. Pitot, D.D. Loeb // New-York: Marcer Dekker, Inc., 2002. 998p.

223. Ponten J. Precancer of human cervix. Precancer: Biology, Importance and possible prevention / J. Ponten, Z. Guo // Cancer Surveys, 1998.-Vol.32.-P. 201229.

224. Raab-Traub N. Epstein-Barr virus, lymphoproliferative diseases and nasopharyngeal carcinoma / N. Raab-Traub // UK.: Oxford University Press, Oxford, 1999. -P. 180-206.

225. Rask E. Tissue-specific dysregulation of Cortisol metabolism in human obesity / E. Rask, T. Olson, S. Soderberg // J Clin. Endocrinol. Metab., 2001. -Vol.86. -P.1418-1421.

226. Ravussin E. Pathophysiology of obesity / E. Ravussin, B.A. Swinburn // Lancet., 1992. -P.340-404.

227. Rees M. The Menopause: What you need to know. / M. Rees, D.W. Purdie, S. Hope //UK.: British Society of Menopause., 2006. -P. 8-23.

228. Reid I.R. Determinants of total body and regional bone mineral density in normal postmenopausal women — a key role for fat mass / I.R. Reid, R. Ames, M.C. Evans, S. Sharpe et al. // Journ. of din. endocrin. and metabolism, 1992. -Vol.75. -P.45-51.

229. Reznek R:H. Cancer of the ovary / R.H. Reznek // UK.: Cambridge University Press, 2007. 176 p.

230. Riza E. Urinary estrogen metabolites and mammographic parenchymal patterns in postmenopausal women / E. Riza, I. dos Santos Silva, B. De Stavola, H.L. Bradlow et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 2001. -Vol. 10: -P. 627634.

231. Roger P. Decreased Expresion of Estrogen Receptor Protein in Proliferative Preinvasive Mammary / P. Roger, M.E. Sahla, S. Makela et al. // Tumors Cancer Research., 2001. -Vol.61. -P.2537-2541.

232. Ross J.S. Breast cancer biomarkers and molecule medicine / J.S. Ross, G.P. Linette, J. Stec et al. // Expert Rev. Mol. Diagn., 2003. -Vol.3.-n.5. -P. 573-585.

233. Saville M.K. Regulation of p53 by the ubiquitin-conjugating enzymes UbcH5B/C in vivo. / M.K. Saville, A. Sparks, D.P. Xirodimas, J. Wardrop et al // J. Biol. Chem., 2004.-Vol. 279.-No.40.-P.42169-42181.9^/7

234. Scully R. Tumors of the Ovary, Maldeveloped Gonads, Fallopian Tube, and Broad Ligament: Atlas of Tumor Pathology (Afip Atlas of Tumor Pathology No. 23) / R. Scully, R. Young, P. Clement // American Registry of Pathology, 1 ed., 1999. 527p .

235. Sherman B. The menopausal transition / B. Sherman, J. West, S. Korenman // J.Clin. Endocrin.Metab., 1976.- Vol.42.- P. 629.

236. Seavey S.E. The E7 oncoprotein of human papillomavirus type 16 stabilizes p53 through a mechanism independent of pi9 (ARF) / S.E. Seavey, M. Holubar, L.J. Sausedo, M.E. Perry//J. Virol.-1999.-Vol.73.-P. 7590-7598.

237. Seidell J. The worldwide epidemic of obesity / J. Seidell // 8th International congress on obesity, London., 1999. -P.661-668.

238. Schneider H.P.J. Menopause. The State of the Art in research and management / H.P.J. Schneider // The Panthenon publishing group, 2003. -540p.

239. Segars J.H. Estrogen action and cytoplasmic sygnalling cascades. Part 1, membrsne assosiated signalling complexes / J.H. Segars, P.H. Driggers // TRENDS Endocrinol Metab.,2002.-Vol.l3.-No.8.-P.349-354.

240. Settnes A. Hysterectomy in a Danish cohort. Prevalence, incidence and sociodemographic characteristics/ A. Settnes, T. Jorgensen // Acta Obstet.Gynec.Scand., 1996.-VoI.75.-P.274-280.

241. Shenk T. Adenoviridae: the viruses and their replication. Fields Virology. 3rd edn./ T. Shenk In B.N. Fields, D.M. Knipe, P.M. Hovey, R.M. Chanock et al. // USA: Philadelphia, P.A, 1996. -Vol.2. -P. 2111-3674.

242. Schiffman M.N. Epidemiology of cervical human papillomavirus infection M.N. Schiffman// Curr.Top.MicrobioI.Immunol., 1994. -v0u86. -P.55-81.

243. Schneider A. Distribution pattern of human virus 16 genome in cervical neoplasia by molecular in situ hybridization of tissue sections / A. Schneider, T. Olterdorf, V. Schneider, L. Gissmann // Int J Cancer., 1987. -Vol.39.-P.717-21.

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки.

Автореферат диссертации по медицине на тему Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки.

Введение диссертации по теме "Онкология", Хунова, Лилия Заудиновна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Качественная оценка молекулярно-биологических факторов раннего канцерогенеза шейки матки."

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Хунова, Лилия Заудиновна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций