Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и их клеточного микроокружения в тканях плоскоклеточных раков влагалищной порции шейки матки

На правах рукописи

СУДИЛОВСКАЯ Варвара Владимировна

ОСОБЕННОСТИ ГИСТОАРХИТЕКТОНИКИ ВЕГЕТАТИВНЫХ НЕРВНЫХ ТЕРМИНАЛЕЙ И ИХ КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ В ТКАНЯХ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫХ РАКОВ ВЛАГАЛИЩНОЙ ПОРЦИИ ШЕЙКИ МАТКИ

14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-8 ДЕК 2011

Саратов-2011

005006527

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Абросимов Сергей Юрьевич.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Волощук Ирина Николаевна;

доктор медицинских наук Мозеров Сергей Алексеевич.

Ведущая организация: Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт морфологии человека РАМН.

Защита состоится и^уСг, 2011 года в часов

на заседании диссертационного совета Д 208.094.01 при ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Б.Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Маслякова Г.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Рак шейки матки занимает в мире второе место среди всех злокачественных новообразований женских половых органов и третье место среди раков у женщин (Бохман Я.В., 2002; Herrington C.S., 1994). Диагностика различных патологических состояний и рака шейки матки относительно легка благодаря доступности шейки матки для обследования и взятия биопсийного материала (Василевская JI.H., 1986; Прилепская В.Н., 2000). Несмотря на это, по данным ВОЗ, ежегодно выявляется около 370 ООО новых случаев заболеваниями 190 000 женщин умирают от него (Brinton L., 1993; Herrington С., 1994). В России доля рака шейки матки 3-4 стадии составляет 39.8% (Козаченко В.П., 2000; Прилепская В.Н., 2000). В последние годы рост заболеваемости раком шейки матки снижается, однако прослеживается тенденция увеличения частоты встречаемости у молодых женщин в возрасте до 40 лет, особенно в возрастной популяции до 29 лет. Это особенно актуально, так как данный контингент является репродуктивно и социально значимой частью населения (Трушина О.И., 2005; Minoz N.. 1996). Несмотря на наличие сформировавшихся классических подходов к профилактике, диагностике и лечению, рак шейки матки продолжает оставаться важнейшей проблемой онкологии (Берштейн JI.M., 2000).

Рост числа случаев злокачественных новообразований указанной локализации закономерно обуславливает стремление исследователей к детальному изучению причин, интимных механизмов и новых диагностических критериев, способных уточнить особенности морфогенеза и облегчить раннюю диагностику рака шейки матки, которая является залогом успешного лечения (Козаченко В.П., 2000; Заридзе Д.Г., 2004).

Дистальны'е отделы женского репродуктивного тракта находятся в особенных условиях, связанных с постоянными экзогенными и эндогенными воздействиями, оказывающими значительное модулирующее влияние на течение различных процессов. Эти особые факторы вынуждают функционировать основные регулирующие системы в сложных условиях, что приводит к их постоянному многокомпонентному взаимодействию (Гурин В.Н., 1989; Барышников А.Ю., 2003; Заридзе Д.Г., 2004).

Для выяснения особенностей становления и развития опухоли, взаимодействий ее с организмом, особый интерес представляет изучение канцерогенеза с позиций паренхиматозно-стромальных взаимоотношений (Саркисов Д.С., 1977; Дикштейн Е.А., 1987; Пальцев М.А., 1995). Эти взаимодействия являются сложными, взаиморегулируемыми процессами в связи с многокомпонентностью составляющих их систем и большим числом свойственных им особенностей. «Клеточные взаимодействия - есть не что иное, как гомеостатические реакции, назначение которых - поддержание генетически детерминированного постоянства клеточного состава тканей и соответствующей схемы биосинтетаческих процессов» (Коган Е.А., 2002).

Большинство научных работ, посвященных выявлению морфологических признаков малигнизации, как правило, основаны на изучении злокачественной трансформации эпителия шейки матки (Берштейн JI.M., 2000; Киселев Ф.Л., 2000;

Villa L., 1997). Естественно, что такой значительный патоморфоз эпителиальных клеток, как их злокачественное перерождение, не может не привести к биохимическим, генетическим и иммунологическим изменениям, которые, несомненно, отразятся на состоянии прилежащей стромы (Николаев А.А., 1975; Дикштейн Е.А., 1997). При этом особенности стромы при становлении и развитии рака шейки матки до сих пор изучены крайне скудно (Доросевич А.Е., 2009). В настоящее время доказано, что изучение процесса становления и развития опухоли целесообразно с точки зрения «коммуникационных систем», под которыми подразумеваются «открытые системы, состоящие из совокупности структурно-функциональных единиц: сосуды микроциркуляторного русла, нервные терминали, клеточное микроокружение этих структур, находящиеся в гистофизиологических взаимоотношениях и обеспечивающие структурные основы гомеостаза» (Абросимов С.Ю., 2002; Доросевич А.Е., 2007).

Известно, что стромальный компонент принимает активное участие в развитии злокачественных опухолей эпителиального происхождения (Дикштейн Е.А., 1987; Коган ЕЛ., 2002), а его неотъемлемая часть - терминальное звено вегетативной нервной системы может создавать локализованный гуморальный эффект и вносить коррекцию в течение физиологических и опухолевых процессов, что особенно важно в гормонально зависимых органах (Гурин В.Н., 1989; Исмагйлов М.Ф., 1991).

Следбвательно, изучение особенностей гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и их клеточного микроокружения с позиций коммуникационных систем в тканях плоскоклеточного рака шейки матки является актуальной проблемой, решение которой имеет важное теоретическое и прикладное значение.

Исходя из вышесказанного, нами были определены цель, новизна и практическая значимость данной работы.

Цель исследования

Изучить гистоархитектонику и морфологические особенности клеточного микроокружения адренергических нервных терминалей и холинергических нервных терминалей в тканях плоскоклеточного рака влагалищной порции шейки матки как звеньев морфогенеза опухоли.

Задачи исследования

1. Изучить гистоархитектонику вегетативных нервных терминалей в ткани плоскоклеточного рака шейки матки и ткани контрлатеральной стороны при раке шейки матки.

2. Изучить особенности клеточного микроокружения вегетативных нервных терминалей (абсолютные значения фибробластов, фиброцитов, плазмоцитов, лимфоцитов, гранулоцитов, макрофагов и клеток паренхимы) в тканях плоскоклеточного рака шейки матки и ткани контрлатеральной стороны при раке шейки матки.

3. Выявить с помощью статистических методов исследования

особенности взаимоотношений клеточных популяций в непосредственной близости от адренергических и холинергических нервных терминалей в ткани плоскоклеточного рака шейки матки и в ткани контрлатеральной стороны.

4. Показать, что нервный компонент коммуникационных систем является гистофизиологически значимой единицей морфогенеза рака шейки матки.

Научная новизна исследования

Впервые изучены гистотопографические особенности терминального звена ВНС с учетом медиаторной принадлежности нервных волокон и вариабельность их клеточного микроокружения в плоскоклеточном раке шейки матки, участках, визуально не пораженных злокачественным ростом при раке шейки матки, в интактной шейке матки.

Практическая значимость

1. Отработаны методические аспекты выявления вегетативных нервных терминалей в ткани шейки матки в норме, плоскоклеточном раке шейки матки и участках, визуально не пораженных злокачественным ростом.

2. В результате выявления особенностей взаимоотношений клеточных популяций, находящихся в непосредственной близости от вегетативных нервных терминалей, можно более объективно оценить морфологический характер различных поражений шейки матки, включая фоновые и злокачественные процессы.

3. Особенности гистологических характеристик нервного компонента коммуникационных систем в различных участках пораженной и непораженной шейки матки являются своеобразным морфологическим отражением изменений вегетативной нервной системы на местном уровне у больных РШМ при комплексном клиническом изучении.

Положения, выносимые на защиту

1. Целостное представление о морфогенезе рака шейки матки возможно только при комплексном изучении стромального и эпителиального компонентов с позиций коммуникационных систем и уточнения гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей, их непосредственного клеточного окружения.

2. Изучение гистотопографической характеристики адренергических и холинергических нервных терминалей и их клеточного микроокружения конкретизирует особенности паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в тканях шейки матки при различных патологических состояниях (цервикальная эктопия, папилломавирусное поражение), что, возможно, позволит выявить новые морфологические маркеры развития рака на фоне указанных заболеваний шейки матки.

3. Морфометрический анализ демонстрирует значимые различия в распределении клеточных популяций вокруг вегетативных нервных терминалей при фоновых заболеваниях и плоскоклеточном раке шейки матки.

4. Корреляционный анализ морфометрических данных, полученных при

изучении непосредственного клеточного окружения адренергического и холинергического звена вегетативной нервной системы позволяет уточнить особенности становления и развития плоскоклеточного рака шейки матки.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 33-й конференции молодых ученых (Смоленск, 2005); 34-й конференции молодых ученых (Смоленск, 2006); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы морфологической диагностики заболеваний» (Витебск, 2010); заседании кафедры патологической анатомии (Смоленск, 2011). Материалы диссертационного исследования доложены 4 июля 2011 года на совместном заседании кафедр патологической анатомии с биопсийно-секционным курсом, онкологии, акушерства и гинекологии с курсом пренатальной диагностики; сотрудников центральной научно-исследовательской лаборатории Смоленской государственной медицинской академии.

Публикации по теме диссертации

По теме данной диссертации опубликовано 7 печатных работ, 3 из них в ВАК - рецензируемых журналах.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложений.

Данная диссертационная работа иллюстрирована 57 рисунками и 28 таблицами. Список литературы содержит 162 источника, из них 115 отечественных и 47 иностранных.

Содержание работы Материалы и методы

В качестве материала для исследования в проведенной работе использовалась ткань шейки матки, полученная от 60 женщин в возрасте до 44 лет, разделенных на две группы наблюдений. В первую группу (30 наблюдений) был включен материал, полученный от женщин с плоскоклеточными раками шейки матки разной степени дифференцировки. При этом опухоль должна имела размеры не более 4,0 см и была ограничена пределами шейки матки, что в соответствии с классификацией по системе TNM не превышает стадию pTlbl (Виттекинд К., 2007). Данный материал забирали после проведения оперативного лечения (операция Вертгейма) в патологоанатомическом отделении Смоленского областного клинического онкологического диспансера сразу после удаления органа. В предоперационной из шейки матки вырезались кусочки ткани непосредственно из опухоли через всю толщу органа (ткань РШМ) и из противоположной части шейки матки, не пораженной опухолевым процессом

(ткань контрлатеральной стороны). Во вторую группу (30 наблюдений) был включен материал шейки матки, полученный от женщин, умерших от насильственных причин или острой коронарной недостаточности. Забор ткани шейки матки производился на базе отделения клинической патологии № 2 Смоленского Областного института патологии, танатологического отделения Смоленского областного бюро судебно-медицинской экспертизы. Сразу после окончания аутопсии из шейки матки при отсутствии видимых макроскопических изменений (поверхность экзоцервикса - гладкая, блестящая, серо-розового цвета) через всю толщу органа вырезались кусочки ткани (ткань ШМ в норме). При заборе материала строго соблюдали временной интервал - не более 10 часов после смерти. В течение этого периода времени, по данным литературы (Ра1ск В., 1962), не происходит разрушения биогенных аминов, и, соответственно, результаты, полученные при соблюдении данного условия, отражают реальное состояние вегетативной иннервации органа.

Сразу после вырезки кусочков ткань подвергалась глубокой заморозке в парах жидкого азота в специальном контейнере для криообработки биологического материала (Абросимов С.Ю., 1993). После этого из кусочков ткани на замораживающем микротоме готовили серийные гистологические срезы толщиной 5 мкм, которые подвергались дальнейшей гистохимической обработке. Кусочки тканей, оставшиеся после криостатной резки, фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине с последующей стандартной проводкой и заливкой в парафин.

Параллельные криостатные гистологические срезы обрабатывали по следующим методикам:

1. По методу В. Ра1ск с соавторами в модификации Е.М. Крохиной (Крохина Е.М., 1973) для выявления адренергических нервных терминален (АНТ) (ЯаЬк В., 1962). Гистологические срезы обрабатывались на аппарате оригинальной конструкции, разработанных С.Ю. Абросимовым и А.Е. Доросевичем (Абросимов С.Ю., 1993).

2. Окраска гематоксилином и эозином для обзорной микроскопии и микроморфометрии.

3. По методу КагпоУБку-Яо^з для выявления холинергических нервных терминалей (ХНТ). Для этого использовали ацетилтиохолиниодид, который опосредованно выявляет ХНТ (Лойда 3., 1982; Кагпоувку МЛ., 1964). В последующем для усовершенствования гистологической методики и более точной идентификации гистотопографии ХНТ полученные срезы докрашивались гематоксилином.

Обзорную и спектральную оценку гистологических срезов проводили на микроскопе «ЛЮМАМ - ИЗ». Для идентификации спектра люминесценции катехоламинов в АНТ использовали интерференционный светофильтр с длиной волны 480 нм. Помимо этого использовали светофильтры, срезающие инфракрасную область спектра, и запирающий светофильтр.

Микроморфометрическое исследование проводили в определённой последовательности. Первоначально осуществлялась обзорная оценка гистологического среза с целью определения характера морфологического

процесса. Затем на параллельных криостатных срезах, обработанных по методу Karnovsky-Roots и Falck, находили участки, содержащие ХНТ или АНТ, и оценивали их гистотопографию.

При микроморфометрическом исследовании при увеличении микроскопа х 400 (окуляр х 10 и объектив х 40) в каждом гистологическом препарате в 10 полях зрения подсчитывали абсолютное количество эпителиальных клеток и клеточных элементов стромы: фиброцитов, фибробластов, лимфоцитов, плазмоцитов, гранулоцитов и макрофагов. При этом интересующую нас структуру (АНТ, ХНТ) помещали в центр поля зрения для исключения «перекрывания» периневральных зон. Для этого в окуляры устанавливали измерительную шкалу с ценой деления 100 мкм. С учетом технических характеристик микроскопа при данном увеличении диаметр поля зрения составляет 2100 мкм и соответственно радиус подсчета от изучаемой структуры равен 1050 мкм (10,5) делений линейки.

В дальнейшем полученные данные морфометрических исследований подвергались статистическому анализу. Его задача заключалась в проверке статистических гипотез, которые выражаются в том, что статистические распределения изучаемых клеток в ткани рака шейки матки (выборка VI), ткани контрлатеральной стороны (выборка V2) и в ткани шейки матки в норме (выборка V3) не имеют статистически значимых различий. Альтернативная гипотеза, состояла в том, что имеют место статистически значимые различия.

Анализ выборочных статистических распределений всех изучаемых клеток в VI, V2 и V3 значимо отличается от нормального распределения (р < 0,05). С учетом данного факта использовать среднее арифметическое значение, как показатель типичного значения изучаемого признака невозможно (Медик В.А., 2000). Для количественной оценки типичного числа клеточных элементов в поле зрения использовалась медиана выборочного статистического распределения, (Гланц С., 1998), или типичный уровень, который в непараметрических ранговых критериях отражается средним рангом (Кобзарь А.И., 2006).

Дальнейший статистический анализ сводился к проверке статистической гипотезы об отсутствии статистически значимых различий между медианами/типичными уровнями анализируемых статистических распределений, для чего использовался непараметрический критерий Манна - Уитни (Гланц С., 1998; Герасимов А.Н., 2007). Алгоритм вычислений по критерию Манна - Уитни автоматизирован в профессиональном статистическом пакете StatGraphics Centurion.

Структура статистических распределений части изучаемых клеточных популяций (лимфоцитов, плазмоцитов, гранулоцитов, макрофагов) в VI, V2 и V3 значимо отличается от нормального распределения, а их структурные средние -мода и медиана равны нулю (Медик В.А., 2004). В связи с этим для проведения дальнейшего статистического анализа исследуемые выборки были подвергнуты категоризации, которая позволяет количественно оценить типичность и вариацию в изучаемом статистическом распределении. В результате категоризации из исходных выборок образуются катетеризированные статистические распределения, которые и подлежат дальнейшему статистическому анализу. Для каждой образованной категории можно определить абсолютные частоты,

относительные частоты (доли) и соответствующие им доверительные интервалы. Доверительные интервалы для долей вычислялись точным биномиальным методом (Гланц С., 1998; Медик В.А., 2004). Дальнейший статистический анализ выборок сводился к проверке статистических гипотез о равномерности категоризированных статистических распределений, полученных из выборок VI, V2 и V3. Для этого целесообразно использовать односторонний биноминальный критерий (Кобзарь А.И., 2006).

В последующем, применяя точный критерий Фишера, проведем проверку гипотезы об отсутствии статистически значимых различий между категоризированными статистическими распределениями лимфоцитов, плазмоцитов, гранулоцитов и макрофагов в VI, V2, V3 (Герасимов А.Н., 2007).

Для количественной оценки статистической связи между изучаемыми клеточными популяциями использовался коэффициент ранговой корреляции Спирмена. В отношении вычисленных коэффициентов корреляции проверялась гипотеза об отсутствии значимых отличий вычисленных коэффициентов корреляции от нуля (проверка значимости коэффициентов корреляции).

Для оценки корреляционных связей использовалась шкала Чеддока (Медик В.А., 2004). В дальнейшем проводился анализ полученных корреляционных взаимосвязей между изучаемыми клеточными популяциями в VI, V2 и в V3, как зонах, отражающих этапы становления рака шейки матки. Кроме того, был проведен анализ сопряженности изменений непосредственного клеточного окружения в зависимости от медиаторной принадлежности нервной терминали (АНТ и ХНТ).

Результаты исследования и их обсуждение Несомненно, что опухолевый рост является одним из наиболее значимых и наиболее агрессивных изменений в макроорганизме. Он приводит к резким сдвигам гомеостаза внутренней среды, нарушениям взаимодействия его систем на всех уровнях и приобретению пулом опухолевых клеток так называемой «автономности». Изучению этого процесса посвящены многие исследования (Кавецкий Р.Е., 1962; Саркисов Д.С., 1977; Israel M.S., 1999; Коган Е.А., 2002 и др.), в ходе которых установлено, что автономность опухоли носит относительный характер и, по сути, представляет собой новый уровень взаимоотношения опухолевых клеток с системами макроорганизма. Эти взаимоотношения осуществляются через непосредственное микроокружение и контролируются регуляторными системами макроорганизма, ведущей из которых является нервная система (Гурин В.Н., 1989; Гуркало В.К., 1989, Israels L., 1999).

Гистоархитектоника вегетативных нервных терминами в ткани шейки матки в норме Проведенное гистохимическое исследование показало наличие в шейке матки иннервации, представленной обоими отделами вегетативной нервной системы - парасимпатическим и симпатическим. Интраорганные терминальные отделы парасимпатической части (основным медиатором в которой является ацетилхолин) и симпатической части (основным медиатором в которой является адреналин и норадреналин) обнаруживали как в глубоких, так и в поверхностных

отделах ткани шейки матки.

В. ткани неизмененной шейки матки ХНТ были представлены волокнами различного диаметра. При этом в большинстве наблюдений содержание в них ацетилхолинэстеразы прямо пропорционально зависело от диаметра волокна. В волокнах среднего и мелкого диаметра отмечали участки гранулярного строения и булавовидные утолщения терминальных участков с более высокой интенсивностью окрашивания и соответственно с более высоким содержанием фермента. Данные участки мы расценивали как зоны депонирования медиатора. Волокна мелкого диаметра представляли собой массивную сеть с их скоплением в непосредственной близости от сосудов и рядом с многослойным плоским неороговевающим эпителием. При этом в непосредственной близости от базальных отделов эпителиального пласта по ходу волокон наблюдались множественные участки депонирования ацетилхолинэстеразы, а терминальные веточки достигали базальных клеток. Данный факт интересен с тех позиций, что именно базальные клетки многослойного плоского эпителия являются «камбиальными» и обеспечивают рост и дифференцировку эпителиального пласта (Минкина Г.Н., 2001; Вашенко С.Н., 2009). Вероятно, что именно ростковая зона эпителия находится под непосредственным регуляторным контролем нервной системы, что, возможно, играет роль в правильной дифференцировке эпителиального пласта в целом.

Под регуляторным воздействием нервной системы находится и сосудистое русло (Доросевич А.Е. 2004; Жвирдаускас С.И., 1967), что подтверждается выявлением обширных холинергических сплетений вокруг сосудов в ткани шейки матки в норме. Терминальные ветви периваскулярных сплетений входят в толщу сосудистой стенки, достигая непосредственно субэндотелиальных отделов. Факт тесного взаимодействия сосудистой и нервной систем с контролирующей функцией последней совпадает с данными многих работ по изучению паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в различных органах (Вельская Г.Д., 1989; Новиков A.C., 1998).

АНТ в ткани шейки матки в норме выявлялись в меньшем количестве по сравнению с холинергическими волокнами, что соответствует данным об иннервации органа (Егорова Т.А., 1995; Афанасьев Ю.И., 2001). Именно преобладание холинергической иннервации в ШМ и адренергической в теле матки, как «условных» функциональных антагонистов, обеспечивает биомеханизм родов (Павлович Е.Р., 2006), а нарушение адренергической иннервации стенки сосудов тела матки обуславливает некоторые клинические проявления при ряде патологических состояний, например маточные кровотечения при миоме матки (Вельская Г.Д., 1989).

Большая часть обнаруженных АНТ встречалась в виде крупных нервных стволиков с характерным изумрудно-зеленым свечением и равномерным распределением медиатора по ходу волокна. Отходившие от них более мелкие волокна, как правило, свободно располагались в строме органа. Часть из них оплетала сосуды, давая терминальные ветви в толщу сосудистой стенки, и достигала субэндотелиальных отделов. Участков, где терминальные отделы АНТ достигали паренхиматозного компонента, нами обнаружено не было.

Анализируя характер распределения клеточных элементов необходимо отметить однотипность их распределения вне зависимости от медиаторной принадлежности волокна. Наиболее часто встречаемым клеточным элементом, обнаруженным в непосредственной близости как от ХНТ, так и от АНТ, являлись фибробласты. Реже встречались фиброциты и далее по убыванию клетки паренхимы, лимфоциты, плазмоциты, гранулоциты и макрофаги.

Таким образом, анализируя данные полученные при изучении шейки матки в норме, можно говорить об обильной вегетативной иннервации в органе с преобладанием холинергического звена, что совпадает с данными литературных источников (Синельников Р.Д., 1996).

Гистоархитектоника вегетативных нервных терминалей в ткани контрлатеральной стороны при раке шейки матки

Ткань КЛС при РШМ в данной работе рассматривается нами как зона, отражающая те патологические процессы, которые предшествовали злокачественной трансформации эпителиального пласта, и, вероятно, демонстрируют морфологические изменения не только паренхиматозного, но и, прежде всего, стромального компонента.

В тканях контралатеральной стороны был обнаружен ряд морфологических особенностей, относящихся не только к изменению вегетативной иннервации, но и отражающих имеющиеся в ней патологические процессы. В 18 наблюдениях обнаруживались морфологические признаки НРУ-инфекции. Ее морфологическими проявлениями являются папилломатоз и акантоз многослойного плоского эпителия, наличие койлоцитов. В некоторых случаях обнаруживали формирование кондилом. В двух случаях на фоне описанных изменений имелись фокусы паракератоза и лейкоплакии.

В 8 наблюдениях отмечали морфологическую картину цервикальной эктопии, иногда в сочетании с активным воспалительным процессом. В участках цервикальной эктопии имелись признаки эпидермизации за счет пролиферации и дифференцировки клеток резервного эпителия. В других случаях эпидермизация отмечалась за счет подрастания многослойного плоского эпителия с формированием Наботовых кист.

Гистоархитектоника вегетативных нервных терминалей в ткани контрлатеральной стороны претерпела ряд характерных изменений.

ХНТ также выявлялись в большом количестве в виде крупных стволов, расположенных преимущественно в глубоких отделах стромы шейки матки. Как правило, эти волокна состояли из нескольких волоконец меньшего диаметра, которые местами имели прерывистый ход. В таких крупных нервных волокнах отмечали высокое содержание ацетилхолинэстеразы; они интенсивно воспринимали ацетилтиохолиниодид и соответственно окрашивались в насыщенно коричневый цвет. В отдельных волокнах ацетилхолинэстераза располагалась в виде мелких гранул, неравномерно расположенных по ходу волокон. Часть волокон неравномерно воспринимали краситель - участки, окрашенные в темно-коричневый цвет, чередовались с участками, слабо воспринимающими краситель.

Высокая концентрация нервных терминалей была обнаружена в участках

цервикальной эктопии. Волокна образовывали достаточно мощные сплетения, а их терминальные ветви непосредственно достигали железистого эпителия. При этом в участках стромы, непосредственно прилежащих к железистым структурам с гиперплазией резервных клеток эпителия, содержание холинергических структур уменьшалось. Ход волокон был прерывистым, а распределение красителя неравномерным. По ходу волокон появились участки варикозного утолщения с их более интенсивной окраской.

В участках стромы контрлатеральной стороны, расположенных под многослойным плоским эпителием, архитектоника ХНТ не была столь упорядоченной, как в шейке матки в норме. Волоконца имели более разнонаправленный ход; структура их была прерывистой, а содержание ацетилхолинэстеразы умеренным. По ходу волокон определялись участки варикозного утолщения с более высоким содержанием фермента, а прилежащая к ним строма содержала пылевидные специфически окрашенные частицы, что может указывать на диффузию ацетилхолинэстеразы из нервного волокна и соответственно её свободное расположение в строме. Кроме того, в некоторых случаях встречалось достаточно интенсивное специфическое окрашивание клеток базального слоя. Как правило, в таких случаях имелись морфологические признаки папилломавирусного поражения. При этом признаки диспластических изменений в эпителиальном пласте отсутствовали. Напротив, в базальных отделах эпителиального пласта с признаками CIN окрашивания эпителиоцитов не наблюдали, хотя в субэпителиальных отделах имелись ХНТ, порой достигающие базальной мембраны. Данный факт заставляет задуматься о непосредственном влиянии ацетилхолина на камбиальные клетки, к которым относятся базальные клетки многослойного плоского эпителия и резервные клетки эпителия цервикального типа. Возможно, ацетилхолин является медиатором, обеспечивающим правильную дифференцировку и рост эпителиального пласта и препятствующим возникновению диспластических изменений (Гурин В.Н., 1989; Гуркало В.К., 1989).

Сохранялась тенденция волокон к их концентрическому расположению в непосредственной близости от сосудистого компонента стромы. Однако их количество и интенсивность ветвления в сосудистой стенке были снижены по сравнению с шейкой матки в норме. В стенке некоторых сосудов определялось слабое диффузное специфическое окрашивание в бледно-коричневый цвет. Эти изменения, безусловно, свидетельствуют об изменении иннервации сосудистой стенки при развитии различных патологических процессов в ткани шейки матки.

Адренергическое звено вегетативной нервной системы в контрлатеральной стороне было представлено немногочисленными нервными терминалями, количество которых было достоверно снижено по сравнению с тканью шейки матки в норме, а распределение медиатора отличалось неравномерностью -имелись варикозно расширенные зоны с умеренной люминесценцией, чередующиеся с участками слабого свечения. В строме контрлатеральной стороны определялись единичные фрагментированные АНТ, окруженные небольшими участками стромы с ее «пылевидным» свечением. Как правило, именно такие структуры находились вблизи от эпителиального компонента.

Гистоархитектоника АНТ по отношению к сосудистому руслу в ткани КЛС также сохранялась по сравнению с шейкой матки в норме. Однако количество АНТ, обнаруженных в стенке сосудов, было снижено, периваскулярные сплетения практически не определялись. В единичных сосудах имелись участки пылевидной люминесценции внутреннего контура.

Исходя из проведенного морфометрического анализа, преобладающим клеточным элементом, встречающимся в непосредственной близости как от ХНТ, так и АНТ, были фибробласты и клетки паренхимы. При этом их количество по сравнению с тканью шейки матки в норме возросло. Количество фиброцитов уменьшилось по сравнению с тканью шейки матки в норме. Далее, по частоте встречаемости, в непосредственной близости от ХНТ определялись лимфоциты, плазмоциты и гранулоциты, незначительное количество макрофагов. Частота встречаемости лимфоцитов в непосредственной близости от АНТ по сравнению с тканью шейки матки в норме осталась прежней, несмотря на достоверное ее увеличение в непосредственной близости от ХНТ. Далее по убыванию в непосредственной близости от АНТ встречались плазмоциты, гранулоциты и макрофаги.

Гистоархитектоника вегетативных нервных терминалей в ткани плоскоклеточного рака шейки матки

Анализируя данные, полученные при изучении вегетативных нервных терминалей в ткани рака шейки матки, можно смело говорить о существенном снижении их количества и изменении гистоархитектоники.

Количество ХНТ в ткани рака шейки матки было снижено по сравнению с тканью контрлатеральной стороны и шейкой матки в норме. Кроме того, прослеживается достаточно выраженная зависимость количества ХНТ от степени дифференцировки эпителиального компонента. В участках опухоли без признаков ороговения ХНТ практически не выявлялись. В таких участках имелись лишь очень мелкие зоны слабого специфического пылевидного окрашивания, локализованного в строме, как правило, в отдалении от эпителиальных комплексов и стенках достаточно крупных сосудов преимущественно артериального типа. Напротив, в ткани ороговевающего рака были выявлены терминальные нервные структуры.

В части наблюдений в ткани рака шейки матки нами выявлено интенсивное специфическое окрашивание групп опухолевых клеток и «раковых жемчужин», характерных для плоскоклеточного ороговевающего рака, что может указывать на высокое содержание в них ацетилхолинэстеразы. В доступной нам литературе мы не нашли описания этого феномена и соответственно его объяснения. С другой стороны необходимо отметить, что это явление может иметь артифициальный характер, что связано с химизмом самого метода обработки - наличие большого количества дисульфидных связей (за счет высокого содержания цистеина и метионина) в кератине клеток и их взаимодействие с йодсодержащим пигментом, высвобождающимся при расщеплении красителя (Лойда 3, 1982; КагпоуБку МЛ., 1964).

В строме ороговевающих раков шейки матки ХНТ крупного диаметра были единичными. Локализовались такие структуры, как правило, в глубоких отделах

стромы. Распределение в них ацетилхолинэстеразы было неравномерным; интенсивность окрашивания слабой. В непосредственной близости от опухолевых комплексов определялись лишь мелкие, фрагментированные волокна. Гистоархитектоника их была резко нарушена. Нервные сплетения, имевшиеся в ткани контрлатеральной стороны и шейке матки в норме, не выявлялись, а волокна имели разнонаправленный прерывистый хаотичный ход. Интенсивность окрашивания их также резко отличалась от остальных групп наблюдения и была снижена. АцетиЛхолинэстераза определялась в виде гранул, расположенных на отдельных участках волокон. В нескольких случаях визуализировались своеобразные «туннельные» структуры в виде полых цилиндров, по периферии которых имелись веретеновидные клетки, расположенные в один слой. По ходу таких структур определялись мелкие участки, воспринимающие краситель и окрашивающиеся с разной степенью интенсивности. Эти структуры напоминали ((пустые» миелиновые оболочки. В части наблюдений рака шейки матки имелось диффузное интенсивное «пылевидное» окрашивание стромы.

Обнаруженные в нашей работе особенности гистоахитектоники ХНТ в тканях рака шейки матки в сравнении с таковыми в ткани контрлатеральной стороны и шейке матки в норме мы склонны трактовать как изменения дистрофического характера.

Особенностью, выявленной нами при изучении раков шейки матки, является обнаружение групп клеток, напоминающих ганглионарные. Особенно интересен этот факт с учетом того, что интраорганная локализация ганглионарных структур не характерна для шейки матки (Егорова Т.А., 1995; Павлович В.Р., 2006). В ткани шейки матки в норме нервные ганглии обнаружены не были.

Следует обратить внимание на изменение гистоархитектоники ХНТ по отношению к сосудистому руслу. Описанные в ткани контралатеральной стороны и ткани шейки матки в норме периваскулярные сплетения не выявлялись. Лишь в единичных сосудах, причем артериального типа, имелось очень слабое диффузное окрашивание их стенки в бледно-коричневый цвет. На наш взгляд, данные сосуды можно рассматривать как предсуществующие сосуды органа, так как они имеют хорошо развитую стенку с дифференцировкой ее слоев. Такое строение не характерно для ангиогенеза в новообразованиях, где сосуды построены по типу неполноценных капилляров с прерывистой базальной мембраной и нарушенной эндотелиальной выстилкой (Жвирдаускас С.И., 1967; Жданов В.А,, 1974; Пальцем М.А., 1995; Капланская И.Б., 2005).

Вероятно, венозное звено, как эфферентный участок сосудистого русла, в первую очередь, выходит из-под регуляторных воздействий макроорганизма, обеспечивая относительно автономное поступление продуктов, синтезирующихся опухолью, обуславливая развитие паранеопластических синдромов и беспрепятственное распространение опухолевых эмболов (Бережная Н.М., 2009; Ганусевич И.И., 2010).

Гистоархитектоника симпатического звена вегетативной нервной системы в ткани рака шейки матки также претерпела ряд изменений.

Количество АНТ было резко снижено. Нервные волокна были представлены

единичными, очень тонкими, как правило, «разволокнёнными» структурами с низкой интенсивностью люминесценции. Расположение их было хаотичным, ход прерывистым. Определялись мелкие зоны депонирования медиатора в виде варикозного утолщения по ходу волокна. Кроме того, в строме имелись участки излития медиатора в виде слабого «пылевидного» изумрудно-зеленого свечения. АНТ, расположенных в непосредственной близости от эпителиального компонента, обнаружено не было.

В зоне расположения сосудов АНТ нам удалось вьивить лишь в единичных случаях. В большинстве наблюдений нервные волокна в сосудистой стенке не определялись. Вокруг крупных сосудов на отдалении от опухоли АНТ выглядели в виде коротких, отдельно лежащих отрезков с неравномерным распределением нейромедиатора и низкой степенью люминесценции

Преобладающим клеточным элементом, обнаруженным в непосредственной близости от АНТ, были фибробласты. Далее по мере убывания частоты встречаемости клеточных элементов встречались лимфоциты, плазмоциты, фиброциты и макрофаги. Обращает на себя внимание, что частота встречаемости клеток паренхимы и гранулоцитов достоверно не отличается от таковой в ткани контрлатеральной стороны.

Статистический анализ распределения клеточных популяций

Резюмируя данные проведенного статистического анализа, преобладающим клеточным элементом, обнаруженным в непосредственной близости от вегетативных нервных терминалей, были фибробласты.

Анализируя материалы, полученные при проведении статистической обработки морфометрических данных, были выявлены определенные стереотипные распределения клеточных элементов в непосредственной близости от ХНТ. Данный тип распространения был характерен для большинства изучаемых в нашей работе клеток. Так, количество встречаемых клеточных элементов - лимфоцитов, плазмоцитов, макрофагов и клеток паренхимы, возрастало в определенной последовательности. Соответственно количество клеток было минимальным в шейке матки в норме, возрастало в ткани контрлатеральной стороны и было максимальным в ткани рака шейки матки. Распределение фиброцитов также имело стереотипный характер, но оно было противоположным. Количество фиброцитов в ткани шейки матки в норме было максимальным, затем снизилось в ткани контрлатеральной стороны и было минимальным в ткани рака шейки матки.

Однако статистический анализ позволил выявить определенные отклонения в характере распределения клеточных популяций. Так, количество встречаемых фибробластов в ткани контрлатеральной стороны и шейке матки в норме не имело достоверных различий. Сравнивая характер их распределения в раках шейки матки, можно говорить о достоверном увеличении их количества. Кроме того, количество гранулоцитов было одинаковым в ткани контрлатеральной стороны и ткани шейки матки в норме и достоверно возрастало в ткани рака шейки матки (табл. 1).

Таблица 1

Сравнительная таблица встречаемости клеточных популяций вокруг ХНТ в ткани шейки матки в норме (Н), ткани контралатеральной стороны (КЛС) и ткани

рака шейки матки (О)

Фибро-бласты 0<КЛС Фиброциты 0<КЛС Лимфоциты ОЖЛС Плазмо-циты ОЖЛС Грануло-циты ОЖЛС Макрофаги ОЖЛС Клетки паренхимы ОЖЛС

КЛС=Н КЛС<Н КЛОН КЛОН КЛС=Н КЛОН КЛОН

0<Н 0<Н ОН 0>Н 0>Н 0>Н 0>Н

Анализируя статистически достоверные взаимосвязи между клеточными популяциями необходимо отметить изменение их количества и характера в зависимости от нарастания степени выраженности морфологических изменений (табл. 2,3).

Таблица 2

Характер и сила корреляционных связей между клеточными популяциями в ткани контрлатеральной стороны в непосредственном окружении от ХНТ

Клетки Фибробласты Фиброциты Лимфоциты Плазмоциты Грануло шпы Макрофаги Клетки паренхимы

Фибробласты

Фиброциты 0,411 -0,1849 -0,1503

Лимфоциты ---------- -0,359 0,3003 0,1320

Плазмоциты Гранулоциты -0,212 -0,14 0,297 0,4612 0,1563

0,271 0,495 0,1236 0,1307

Макрофаги

Клетки паренхимы

Примечание: *жирным шрифтом выделены корреляционные связи, не встречающиеся в сравниваемой выборке (рак шейки матки).

Таблица 3

Характер и сила корреляционных связей между клеточными популяциями в ткани рака шейки матки в непосредственном окружении от ХНТ

Клетки Фибробласты Фиброциты Лимфоциты Плазмо -цшы Грануло питы Макрофаги Клетки паренхимы

Фибробласты -0.3326

Фиброциты 0,625 -0,3082

Лимфоциты -0,238 -0,147 0,1364

Плазмоциты -0,144 0,114 0,3021

Гранулоциты Макрофаги -0,222 -0,196 0,199 0.337 -------------- 0,2306

Клетки паренхимы

Примечание: *жирным шрифтом выделены корреляционные связи, не встречающие в сравниваемой выборке (контрлатеральная сторона).

Так, обнаруженные в ткани контрлатеральной стороны корреляционные связи между следующими клеточными популяциями фибробласты-фиброциты, фиброциты-лимфоциты, фиброциты-гранулоциты, лимфоциты-плазмоциты, лимфоциты-гранулоциты, плазмоциты-гранулоциты, макрофаги-лимфоциты, макрофаги-плазмоциты, макрофаги-гранулоциты, клетки паренхимы-гранулоциты сохранились и в ткани рака шейки матки. Однако сила корреляционных связей между ними изменилась. Связи фибробласты-фиброциты, фиброциты-гранулоциты, макрофаги-гранулоциты и клетки паренхимы-фиброциты усилились, а остальные из имеющихся клеточных взаимосвязей ослабли в ткани рака шейки матки. Некоторые из имевшихся в контрлатеральной стороне взаимосвязей между клеточными популяциями были утрачены в ткани рака. К таким связям относятся фиброциты-плазмоциты, макрофаги-фиброциты, клетки паренхимы-лимфоциты, клетки паренхимы-плазмоциты, клетки паренхимы-гранулоциты. В свою очередь, в ткани рака были выявлены новообразованные связи между клеточными популяциями фибробласты-лимфоциты, фибробласты-плазмоциты, фибробласты-гранулоциты,

фиброфласты-клетки паренхимы, причем все они являются обратными.

При оценке результатов проведенного статистического анализа морфометрических показателей, распределения клеточных популяций, находящихся в непосредственном окружении от АНТ также был выявлен ряд стереотипных распределений. Так, количество фибробластов и фиброцитов в непосредственной близости от АНТ достоверно снижалось, начиная от ткани неизмененной шейки матки, ткани контрлатеральной стороны и было минимальным в ткани рака шейки матки. Сравнивая характер распределения данных клеточных популяций, в зависимости от медиаторной принадлежности волокна, следует отметить, что такой характер распределения данных клеточных популяций в непосредственной близости от ХНТ был характерен лишь для фиброцитов. Количество фибробластов уменьшилось лишь в ткани рака шейки матки, сохраняя свой характер распределения в ткани контрлатеральной стороны и ткани шейки матки в норме одинаковым.

Характер распределения таких клеточных элементов, как плазмоциты и макрофаги был стереотипным и не зависел от медиаторной принадлежности волокна. Количество данных клеточных элементов возрастало в следующей последовательности: шейка матки в норме - контрлатеральная сторона - рак.

Анализируя характер распределения лимфоцитов, прежде всего, следует отметить равномерность их распределения в ткани рака шейки матки. С учетом проведенного статистического анализа, данный факт указывает нам на разделение всех изученных нами раков на две группы: опухоли, содержащие выраженный лимфоцитарный инфильтрат, и опухоли, лишенные его, что вероятнее всего, указывает на наличие в ряде случаев мощной антигенной стимуляции. Кроме того, количество лимфоцитов в непосредственной близости от АНТ не имело достоверных различий в ткани шейки матки в норме и ткани контрлатеральной стороны и возрастало лишь в ткани рака шейки матки. Таких особенностей распределения лимфоцитов не отмечалось в непосредственной близости от ХНТ.

Особого внимания заслуживают выявленные изменения в характере

распределения гранулоцитов в непосредственной близости от АНТ. В ткани шейки матки в норме их количество достоверно не отличалось от такового в ткани .контрлатеральной стороны, а их количество в ткани контрлатеральной стороны достоверно не отличалось от их количества в ткани рака шейки матки. При этом в непосредственной близости от ХНТ в ткани рака было отмечено достоверное увеличение их количества по сравнению с тканью шейки матки в норме и тканью контрлатеральной стороны.

Кроме того, в непосредственной близости от АНТ в рака и ткани контрлатеральной стороны количество клеток паренхимы достоверно не различалось, чего не было отмечено в непосредственной близости от ХНТ (табл.4).

Таблица 4

Сравнительная таблица встречаемости клеточных популяций вокруг АНТ в ткани шейки матки в норме (Н), ткани контралатеральной стороны (КЛС) и ткани

рака шейки матки (О)

Фибро-бласты Фиброциты Лимфоциты Плазмо-циты Грануло-щпы Макрофаги Клетки паренхимы

0<КЛС 0<КЛС ОКЛС ОЖЛС о=клс ОКЛС 0=КЛС

КЛС<Н КЛС<Н КЛС=Н КЛОН КЛС=Н КЛОН КЛОН

0<Н 0<Н . 0>Н 0>Н ОН 0>Н 0>Н

При выявлении корреляционных связей между клеточными популяциями, необходимо отметить изменения их характера и силы в исследуемых группах (табл. 5, 6). Так, в ткани контрлатеральной стороны, были обнаружены корреляционные связи между: фибробласты-фиброциты, фибробласты-лимфоциты, фибробласты-плазмоциты, фибробласты-гранулоциты, фиброциты-лимфоциты, фиброциты-плазмоциты, фиброциты-гранулоциты, лимфоциты-плазмоциты, плазмоциты-гранулоциты, макрофаги-фиброциты, макрофаги-лимфоциты, макрофаги-плазмоциты, макрофаги-гранулоциты, клетки паренхимы-фибробласты. При развитии рака часть из этих связей исчезла. К таким взаимодействиям относятся: фибробласты-плазмоциты, лимфоциты-плазмоциты, макрофаги-фиброциты, макрофаги-лимфоциты, макрофаги-плазмоциты. В ряде сохранившихся связей изменилась их сила. Так корреляционная связь фибробласты-фиброциты и клетки паренхимы-фибробласты усилилась. Кроме того появились новые корреляции: обратная -между клетки паренхимы-фиброциты, прямая - между клетки паренхимы-плазмоциты, клетки паренхимы-гранулоциты и лимфоциты-гранулоциты.

Таблица 5

Характер и сила корреляционных связей между клеточными популяциями в ткани контрлатеральной стороны в непосредственном окружении от АНТ

Клетки Фибробласты Фиброциты Лимфоциты Плазмоциты Гранулоциты Макрофаги Клетки паренхимы

Фибробласты -0,1248

Фиброциты 0,437 -0,2186*

Лимфоциты -0,147 - 0,262 0,4072*

Плазмоциты -0,119* - 0,276 0399* 0,5447*

Гранулоциты - 0,284 -0,164 -------------- 0,225 0,2623

Макрофаги

Клетки паренхимы

Примечание: *жирным шрифтом выделены корреляционные связи, не

встречаемые в сравниваемой выборке (РШМ).

Таблица 6

Характер и сила (значимые КС) корреляционных связей между клеточными популяциями в ткани РШМ в непосредственном окружении от АНТ

Клетки Фибробласты Фиброциты Лимфоциты Плазмоциты Гранул оциты Макрофаги Клетки паренхимы

Фибробласты -0,3923

Фиброциты 0,581 -0,3603*

Лимфоциты -0,145 -0,217

Плазмоциты -0,167 0,1226*

Гранулоциты -0,277 -0,281 0,139* 0,294 0,1738 0,1769*

Макрофаги

Клетки паренхимы

Примечание: "'жирным шрифтом выделены корреляционные связи, не встречаемые в сравниваемой выборке (КЛС).

Данные изменения убедительно демонстрируют глубокие, доступные для оценки морфологом нарушения взаимоотношений между системами обеспечения и поддержания гомеостаза.

Выводы

1. В тканях рака шейки матки и тканях контрлатеральной стороны имеются выраженные изменения гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей в виде уменьшения их представительства, фрагментации, неравномерного распределения медиатора. Данные изменения касаются, прежде всего, вегетативных нервных терминалей, расположенных в непосредственной близости от эпителиального компонента и стенок сосудов. Они нарастают по мере усиления неопластических изменений.

2. Выраженность иннервации ткани плоскоклеточных раков шейки матки зависит от степени дифференцировки опухоли. В ороговевающих раках

наблюдается большее количество вегетативных нервных терминален, а в неороговевающих раках они практически отсутствуют.

3. В тканях плоскоклеточных раков и тканях контрлатеральной стороны выявлено специфическое окрашивание ацетилтиохолинйодидом структур вне нервных волокон: базальных клеток многослойного плоского эпителия, опухолевых клеток в ороговевающих плоскоклеточных раках и гранул, свободно расположенных в строме. Данный факт, видимо, указывает на непосредственное участие холинергического звена вегетативной нервной системы в процессах дифференцировки многослойного плоского эпителия.

4. Проведенное морфометрическое исследование выявило значимую неоднородность распределения клеточных популяций в непосредственной близости от холинергических и адренергических нервных терминалей в тканях плоскоклеточного рака шейки матки и тканях контрлатеральной стороны. Частота встречаемости фибробластов и фиброцитов уменьшалась параллельно с нарастанием выраженности морфологических изменений. Частота встречаемости эпителиальных клеток, лимфоцитов, плазматических клеток, гранулоцитов и макрофагов увеличивалась параллельно с нарастанием выраженности морфологических изменений, связанных с наличием папилломавирусного поражения, цервикальной эктопии и рака шейки матки.

5. Морфометрическое исследование выявило неоднородность распределения клеточных популяций в зависимости от медиаторной принадлежности вегетативного нервного волокна. В непосредственной близости от адренергических нервных терминалей частота встречаемости эпителиальных клеток и гранулоцитов в ткани рака шейки матки и контралатеральной стороны была однотипной. В непосредственной близости от холинергических нервных терминалей количество указанных клеточных популяций значимо увеличивалось.

6. Проведенный статический анализ выявил особенности перераспределения корреляционных взаимосвязей между клеточными популяциями в непосредственной близости от адренергических и холинергических терминальных структур. В ткани контралатеральной стороны в непосредственной близости от адренергических нервных волокон отмечены вновь образованные связи макрофагов с фиброцитами, лимфоцитами и плазматическими клетками. В непосредственной близости от холинергических нервных волокон в ткани контралатеральной стороны лимфоциты, плазматические клетки и гранулоциты значимо коррелировали с эпителиальными клетками. Такие же связи выявлены и в тканях рака шейки матки, но они касаются только клеточного окружения адренергических терминалей. В непосредственной близости от холинергических нервных волокон в ткани рака шейки матки выявлены значимые связи фибробластов с лимфоцитами, плазматическими клетками, гранулоцитами и эпителиальными клетками.

7. Выявленные особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и клеточного микроокружения наглядно демонстрируют их значимость в морфогенезе различных патологических состояний шейки матки (цервикальная эктопия, папилломавкрусное поражение) и плоскоклеточного рака.

Практические рекомендации

1. Учет особенностей гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей в непосредственной близости от эпителия и сосудов позволит конкретизировать диагностику предрака и рака шейки матки.

2. Специфическое окрашивание базальных клеток многослойного плоского эпителия требует пристального изучения для дальнейшего поиска маркеров ранних этапов развития неоплазий шейки матки.

3. Однотипность распределения лимфоцитов и гранулоцитов в непосредственной близости от адренергических нервных волокон, а также фибробластов и гранулоцитов в непосредственной близости от холинергических нервных волокон в шейке матке в норме и тканях с морфологическими признаками папилломавирусного поражения и цервикальной эктопии позволяет патологоанатому при исследовании мультифокальных биоптатов шейки матки предположить неблагоприятное течение данных патологических процессов и рекомендовать врачу гинекологу пристальное динамическое наблюдение за пациентками с вышеуказанными изменениями.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Судиловская, В.В. Патоморфология тканевых процессов и особенности гистоархитектоники холинергических нервных терминалей во внеопухолевой зоне шейки матки при плоскоклеточном раке / В.В. Судиловская // Материалы 33-ей конференции молодых ученых. - Смоленск, 2005. - С. 82 - 83.

2. Судиловская, В.В. Особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и их клеточного окружения в тканях рака влагалищной порции шейки матки / А.Е. Доросевич, И.А. Бехтерева, В.В. Судиловская // Современные проблемы клинической патоморфологии // Материалы Всероссийской конференции, посвященной памяти профессора O.K. Хмельницкого,- С-Пб, 2005. - С. 25 - 27.

3. Судиловская, В.В. Нервный компонент коммуникационных систем в тканях плоскоклеточного рака шейки матки / И.А. Бехтерева, А.Е. Доросевич,

B.В. Судиловская // Новые методы и разработки в онкоморфологии: IV конференция российских патологоанатомов. СД-версия: MedMcorp.- М., 2005. -

C.-13-14.

4. Судиловская, В.В. Особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей в тканях плоскоклеточного рака шейки матки /В.В. Судиловская // Материалы 34-ей конференции молодых ученых. - Смоленск, 2006. - С. 87 - 88.

5. Судиловская В.В. Морфологические особенности нервного и сосудистого компонентов коммуникационных систем в тканях рака шейки матки / А.Е. Доросевич, И.А. Бехтерева, В.В. Судиловская II Архив патологии .- 2009. - Т. 71, № 5. - С. 43 - 46.

6. Судиловская, В.В. Особенности взаимоотношений холинергических нервных терминалей и их непосредственного клеточного микроокружения при становлении и прогрессии плоскоклеточного рака шейки матки / В.В. Судиловская П Вестник Национального медико-хирургического Центра им. Н.И.Пирогова. - 2011. -Т.6, №2. - С. 115-121.

7. Судиловская, В.В. Роль эпителиально-сосудистых взаимоотношений в становлении и развитии рака шейки матки / И.А. Бехтерева, В.В. Судиловская // Вестник Национального медико-хирургического Центра им. Н.И. Пирогова. -2011. - Т.6, №3. - С. 98- 104.

Отпечатано в издательско-полиграфической фирме ЗАО «Лика» Россия, Москва, 105203, ул. Нижняя Первомайская, д. 47 Тел.:(495)465-1154; Факс:(495)465-4769 www.licka.ru; e-mail: likal28@yandex.ru 3аказ№310от 18.11.2011 Усл. п.л. 1. Формат (60x90) 1/16. Тираж 100 экз.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Рак шейки матки занимает в мире второе место среди всех злокачественных новообразований женских половых органов и третье место среди раков у женщин (после рака молочной железы и толстой кишки) [8, 20]. Диагностика различных патологических состояний и РШМ относительно легка благодаря доступности шейки матки для обследования и взятия биопсийного материала [24, 87]. Несмотря на это, по данным ВОЗ, ежегодно выявляется около 370 ООО новых случаев заболевания, и 190 ООО женщин умирают от него [118, 1 26]. В России доля РШМ 3-4 стадии составляет 39.8% [8, 60, 63, 88]. В последние годы рост заболеваемости РШМ снижается, однако, прослеживается тенденция увеличения частоты встречаемости у молодых женщин в возрасте до 40 лет, особенно в возрастной популяции до 29 лет. Это особенно актуально, так как данный контингент является репродуктивно и социально значимой частью населения [34, 90, 1 02, 1 42]. Несмотря на наличие сформировавшихся классических подходов к профилактике, диагностике и лечению, РШМ продолжает оставаться важнейшей проблемой онкологии [8, 11, 17, 117, 126].

Рост числа случаев злокачественных новообразований указанной локализации закономерно влечет стремление исследователей к детальному изучению причин, интимных механизмов и новых диагностических критериев, способных уточнить особенности морфогенеза и облегчить раннюю диагностику РШМ, которая является залогом успешного лечения [55,60, 131].

Дистальные отделы женского репродуктивного тракта находятся в особенных условиях, связанных с постоянными экзогенными и эндогенными воздействиями, оказывающими значительное модулирующее влияние на течение различных процессов. Эти особые факторы вынуждают функционировать основные регулирующие системы в сложных условиях, что приводит к их постоянному многокомпонентному взаимодействию [23, 46,

Для выяснения особенностей становления и развития опухоли, взаимодействий ее с организмом, особый интерес представляет изучение канцерогенеза с позиций паренхиматозно-стромальных взаимоотношений [38, 80, 92]. Эти взаимодействия являются сложными, взаиморегулируемыми процессами, в связи с многокомпонентностью составляющих их систем и большим числом свойственных им особенностей. «Клеточные взаимодействия есть не что иное, как гомеостатические реакции, назначение которых - поддержание генетически детерминированного постоянства клеточного состава тканей и соответствующей схемы биосинтетических процессов» [59, 80].

Большинство научных работ, посвященных выявлению морфологических признаков малигнизации, как правило, основаны на изучении злокачественной трансформации эпителия ШМ [17, 54, 85, 158]. Естественно, что такой значительный патоморфоз эпителиальных клеток, как их злокачественное перерождение, не может не привести к биохимическим, генетическим и иммунологическим изменениям, которые, несомненно, отразятся на состоянии прилежащей стромы [37, 76, 77]. При этом особенности стромы при становлении и развитии РШМ изучены крайне скудно [25, 46]. В настоящее время доказано, что изучение процесса становления и развития опухоли целесообразно с точки зрения «коммуникационных систем», под которыми подразумеваются «открытые системы, состоящие из совокупности структурно-функциональных единиц: сосуды микроциркуляторного русла, нервные терминали, клеточное микроокружение этих структур, находящиеся в гистофизиологических взаимоотношениях и обеспечивающие структурные основы гомеостаза» [2, 39, 78].

Известно, что стромальный компонент принимает активное участие в развитии злокачественных опухолей эпителиального происхождения [37, 59], а его неотъемлемая часть - терминальное звено вегетативной нервной системы может создавать локализованный гуморальный эффект и вносить коррекцию в течение физиологических и опухолевых процессов, что особенно важно в гормонально зависимых органах [27,46, 49].

Следовательно, изучение особенностей гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и их клеточного микроокружения с позиций коммуникационных систем в тканях плоскоклеточного РШМ является актуальной проблемой, решение которой имеет важное теоретическое и прикладное значение.

Исходя из вышесказанного, нами была определена цель, новизна и практическая значимость данной работы.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить гистоархитектонику и морфологические особенности клеточного микроокружения адренергических нервных терминалей и холинергических нервных терминалей в тканях плоскоклеточного рака влагалищной порции шейки матки, как звеньев морфогенеза опухоли.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить гистоархитектонику вегетативных нервных терминалей в ткани плоскоклеточного рака шейки матки и ткани контрлатеральной стороны при раке шейки матки.

2. Изучить особенности клеточного микроокружения вегетативных нервных терминалей (абсолютные значения фибробластов, фиброцитов, плазмоцитов, лимфоцитов, гранулоцитов, макрофагов и клеток паренхимы) в тканях плоскоклеточного рака шейки матки и ткани контрлатеральной стороны при раке шейки матки.

3. Выявить с помощью статистических методов исследования особенности взаимоотношений клеточных популяций в непосредственной близости от адренергических и холинергических нервных терминалей в ткани плоскоклеточного рака шейки матки и в ткани контрлатеральной стороны.

4. Показать, что нервный компонент коммуникационных систем является гистофизиологически значимой единицей морфогенеза рака шейки матки.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые изучены гистотопографические особенности терминального звена ВНС с учетом медиаторной принадлежности нервных волокон и вариабельность их клеточного микроокружения в плоскоклеточном раке шейки матки, участках, визуально не пораженных злокачественным ростом при раке шейки матки, в интактной шейке матки.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

1. Отработаны методические аспекты выявления вегетативных нервных терминалей в ткани шейки матки в норме, плоскоклеточном раке шейки матки и участках, визуально не пораженных злокачественным ростом.

2. В результате выявления особенностей взаимоотношений клеточных популяций, находящихся в непосредственной близости от вегетативных нервных терминалей, можно более объективно оценить морфологический характер различных поражений шейки матки, включая фоновые и злокачественные процессы.

3. Особенности гистологических характеристик нервного компонента коммуникационных систем в различных участках пораженной и непораженной шейки матки являются своеобразным морфологическим отражением изменений вегетативной нервной системы на местном уровне у больных РШМ при комплексном клиническом изучении.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Целостное представление о морфогенезе рака шейки матки возможно только при комплексном изучении стромального и эпителиального компонентов с позиций коммуникационных систем и уточнения гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей, их непосредственного клеточного окружения.

2. Изучение гистотопографической характеристики адренергических и холинергических нервных терминалей и их клеточного микроокружения конкретизирует особенности паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в тканях шейки матки при различных патологических состояниях (цервикальная эктопия, папилломавирусное поражение), что, возможно, позволит выявить новые морфологические маркеры развития рака на фоне указанных заболеваний шейки матки.

3. Морфометрический анализ демонстрирует значимые различия в распределении клеточных популяций вокруг вегетативных нервных терминалей при фоновых заболеваниях и плоскоклеточном раке шейки матки.

4. Корреляционный анализ морфометрических данных, полученных при изучении непосредственного клеточного окружения адренергического и холинергического звена вегетативной нервной системы позволяет уточнить особенности становления и развития плоскоклеточного рака шейки матки.

ВЫВОДЫ

1. В тканях рака шейки матки и тканях контрлатеральной стороны имеются выраженные изменения гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей в виде уменьшения их представительства, фрагментации, неравномерного распределения медиатора. Данные изменения касаются, прежде всего, вегетативных нервных терминалей, расположенных в непосредственной близости от эпителиального компонента и стенок сосудов. Они нарастают по мере усиления неопластических изменений.

2. Выраженность иннервации ткани плоскоклеточных раков шейки матки зависит от степени дифференцировки опухоли. В ороговевающих раках наблюдается большее количество вегетативных нервных терминалей, а в неороговевающих раках они практически отсутствуют.

3. В тканях плоско клеточных раков и тканях контрлатеральной стороны выявлено специфическое окрашивание ацетилтиохолиниодидом структур вне нервных волокон: базальных клеток многослойного плоского эпителия, опухолевых клеток в ороговевающих плоскоклеточных раках и гранул свободно расположенных в строме. Данный факт, видимо, указывает на непосредственное участие холинергического звена вегетативной нервной системы в процессах дифференцировки многослойного плоского эпителия.

4. Проведенное морфометрическое исследование выявило значимую неоднородность распределения клеточных популяций в непосредственной близости от холинергических и адренергических нервных терминалей в тканях плоскоклеточного рака шейки матки и тканях контрлатеральной стороны. Частота встречаемости фибробластов и фиброцитов уменьшалась параллельно с нарастанием степени анаплазии эпителия. Частота встречаемости эпителиальных клеток, лимфоцитов, плазматических клеток, гранулоцитов и макрофагов увеличивалась параллельно с нарастанием выраженности морфологических изменений, связанных с наличием папилломавирусного поражения, цервикальной эктопии и рака шейки матки.

5. Морфометрическое исследование выявило неоднородность распределения клеточных популяций в зависимости от медиаторной принадлежности вегетативного нервного волокна. В непосредственной близости от адренергических нервных терминалей частота встречаемости эпителиальных клеток и гранулоцитов в ткани рака шейки матки и контралатеральной стороны была однотипной. В непосредственной близости от холинергических нервных терминалей количество указанных клеточных популяций значимо увеличивалось.

6. Проведенный статический анализ выявил особенности перераспределения корреляционных взаимосвязей между клеточными популяциями в непосредственной близости от адренергических и холинергических терминальных структур. В ткани контралатеральной стороны в непосредственной близости от адренергических нервных волокон отмечены вновь образованные связи макрофагов с фиброцитами, лимфоцитами, плазматическими клетками. В непосредственной близости от холинергических нервных волокон в ткани контралатеральной стороны лимфоциты, плазматические клетки и гранулоциты значимо коррелировали с эпителиальными клетками. Такие же связи выявлены и в тканях рака шейки матки, но они касаются только клеточного окружения адренергических терминалей. В непосредственной близости от холинергических нервных волокон в ткани рака шейки матки выявлены значимые связи фибробластов с лимфоцитами, плазматическими клетками, гранулоцитами и эпителиальными клетками.

7. Выявленные особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и клеточного микроокружения наглядно демонстрируют их значимость в морфогенезе различных патологических состояний шейки матки (цервикальная эктопия, папилломавирусное поражение) и плоскоклеточного рака.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Учет особенностей гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей в непосредственной близости от эпителия и сосудов позволит конкретизировать диагностику предрака и рака шейки матки.

2. Специфическое окрашивание базальных клеток многослойного плоского эпителия требует пристального изучения для дальнейшего поиска маркеров ранних этапов развития неоплазий шейки матки.

3. Однотипность распределения лимфоцитов и гранулоцитов в непосредственной близости от адренергических нервных волокон, а также фибробластов и гранулоцитов в непосредственной близости от холинергических нервных волокон в шейке матке в норме и тканях с морфологическими признаками папилломавирусного поражения и цервикальной эктопии позволяет патологоанатому при исследовании мультифокальных биоптатов шейки матки предположить неблагоприятное течение данных патологических процессов и рекомендовать врачу гинекологу пристальное динамическое наблюдение за пациентками с вышеуказанными изменениями.