Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изыскание новых средств из производных пиримидина и тиобарбитуровой кислоты, повышающих физическую выносливость при адаптации к низким температурам (экспериментальное исследование)

Г 6 од >. б ДПР 1393

Министерство здравоохранения Российской Федерации

Санкт-Петербургский медицинский институт им. акад. И. П. Павлова

на правах рукописи

КИРИЧЕНКО Елизавета Филипповна

УДК:(547.853.3+547.354.83):$12.00Д.53:6«.1С6.9

ИЗЫСКАНИЕ НОВЫХ СРЕДСТВ ИЗ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИМИДИНА И ТИОБАРБИТУРОВОЙ КИСЛОТЫ, ПОВЫШАЮЩИХ ФИЗИЧЕСКУЮ ВЫНОСЛИВОСТЬ ПРИ АДАПТАЦИИ К НИЗКИМ ТЕМПЕРАТУРАМ

( ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ )

14.00.25 - ФАРМАКОЛОГИЯ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени ' кандидата медицинских наук

Санкт - Петербург - 1993

Работа выполнена на кафедре фармакологии (заведующий кафедрой профессор В.А. До-ровских) Благовещенского государственного медицинского института (ректор - профессор В.А. Доровских)

Научный руководитель - доктор медицинских наук профессор В.А, Доровских

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор

П.П.ДЕНИСЕНКО

доктор медицинских наук АТ. БУРБЕЛЛО

Ведущая организация: Санкт - Петербургская Военно-Медицинская Академия.

Автореферат разослан " ^" апреля 1993 г.

Защита состоится " 1993 г. на

заседании Специализированного Ученого совета Санкт-Петербургского медицинского института нм. акад. И.П. Павлова (197089, г. Санкт-Петербург» ул. Льва Толстого, 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института

Ученый секретарь совета - доктор медицинских наук Э.Э. Зсартау

Актуальность проблема:

Процесс взаимодействия человека.о окружаяеей средой на различных территориях развивается неравноиерно. Наиболее глубокие и быстр)е изменения осуществляются в регионах страны с максимальной гошеьтрецие.т нових крупна* промыиленкэ-хозяистведашх комплексов - это Западная, Восточная Скбирь, Дальний Восток, Крайний Север, где .уже сегодня и еве многие года будет увеличиваться миграция людей. Одним из стрессирутацвх факторов, с которыми приходится ствлкизатьсл призлому населению, является холод. Адаптация дается дорогой ценой. Во-г. ера их, это длительная процесс (по данхям Н.Р. Деряпа и ^ябинина (1977) юает продолжаться до 5-7 лет), во-зг-орых, сопровождается целнн рядом морфо-Функционольных измз нений.

3 сложном комплексе адаптационных изменений важное иесто занимает нарушение целостности клеточных нембрач, активирование пе~ рекисного окисления липидов, нарушение антиокяслительной активности ли.шдог, напряжение кислородного режима, нарушение реологических свойств-крови, приводящие к снижению работоспособности (В. П. Казначеев, 1980), Лля того, чтоб* избежать этих негативных явления, есть два-пути. " /

Первый - создание изолируящих приспособления, скафандров, одекди с подогревом, но "-то ограничивает движения, возможность выполнения трудовых манипуляция. ЗгорсЯ путь - применение фармакологических веществ, облегчагадих адаптацию. Но однако круг таких веществ, стоящих на вооружении метадинн, ограничен.

Целыд'настоядез работы явилось: изыскание в ряду производных тиобарбитуровоЯ кислоты новых актопротекторов, облегчающих адаптацию к холоду.

В задачу работы входило;

1. Провести сравнительяуч оценку новнх производных тиобарбитуровоЯ кислоты на физическую выносливость при длительном Холодове м воздействии. -

2. Чнявйть основные элементы механизма завдтяого действия препаратов при адаптации к холоду.

-Ч -

Э. Лать экспериментальное о боен свеч и с для углубленного исследования наиболее, активного соединения в качестве актопротек-

тора. . ••■ .'..-'

Так как в формировании патологии пси хоздовом воздействии ваннуз роль играют гипоксия, активирование лизосом, активирование перекисного окисления липидав, 'угнетение антиокислительной активности липидов ('О.В.Владииирезз, A.M. Арчаков, Ф.З.Чеерсон, 1972), мы выбрали такие вещества, среди которн*.уке выявлены вещества с актопротекторноЯ активностью в обычных условиях и в условиях переграния (П.Оенисенко, й.А.Полякова, 1972, 1973, 1975}, а также вещества, повывавдие физичзскуч выносливость при длительном холодовом воздействии СВ.А.Лорозскях, 1982).

Работа С.покер-гос. регистрации .. ) выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакологии Благовещенского медицинского института в рамках всесоюзной проблемы "Изыскание и изучение новых фармакологических средств".

Научная новизна результатов исследования:

I. Среди новых производных тиобарйитуровоЯ кислоты найдено соединение (ТБ-52), сказывающее выраженное защитное действие прл адаптации к холоду, повышающее фиэкческуз выносливость в этих условиях.

2.. Установлена завися кость между химическим строением , и фармакологической активностью в ряду новых производных тиобарбитуло-воя кислота: защитные свойства нарастают по мере увеличения рада-кала or Cgfij ДО CgHjj»

3. Выявлены новые механизмы защитного -э^екта производных тиобардитуровой кислоты: снижение активация гипо^из-надпочечнико-вой и гипофиз-тиреоуной систем при ссрессорньх воздействиях, сочетающееся с выраженный антиоксилант'ныи' действием.

Практическая ценность результатов работ'ч:

Зкспериювтально обоснована возможность с помощь«) Т&-52 облегчать и ускорять.адаптацию'.к холоду, сохраняя и повышая <Н:зи-ческуп работоспособность в этих условиях. Основные механизмы такого благоприятного действия ТБ-52 вклячаот: защитное влияние на

гормональная статус организма при холодовом стресс-воздействии; положительное влияние на кислородный режим организма; макбрано-стабилизир^вдее влияние..

Положения, выносимые на закигу: . ;

1. Производное тиобарбктуровой кислоты ТБ-52 облегчает адаптация к длительному холодовому воздействии, сохраняет и повышает физическуо выносливость в этих условиях. • ; ' ,

2. Препарат ТБ-52 снижбет выраженность стрессовой реакции животных, адаптирующихся к холоду. :

3. ТБ-52 стабилизирует клзточные »«мбранн в условиях холодов о го воздействия.

Дичное участие автора в выполнении работы: ,

Автор вел все эксперименты, самостоятельно вводил препараты, осуществлял контроль за животными, самостоятельно выполнял физиологические, биохимические и га сто химические исследования. Самостоятельно проведен анализ и статистическая обработка всех экспериментальных данных и. результатов лабораторных исследований.

Гистохимические исследовеямя виполнеда на базе кафедры гистологии и эмбриологии,, биохимические исследования выполнены на базе кафедр биохимии, рентгенологии и радиологии Благовещенского медицинского института.

Апробация и внедрение результатов работа:

Материала диссертации доложена на заседании проблемной комиссии Благовещенского медицинского института (ноябрь 1990г.); на научно-практическоч конференции "Поиск новых лекарственных средств и их использование в клинике" (Чита, 1990г.); на региональной конференции »Медико-зкологические аспекты.морфологии легких" (Благовещенск, 1939г.); на межкафедральнсй конферёнции-(ВГМЙ, 1991г.). По материалам диссертации получена приоритетная справка на изобретение.- ' •

Структура диссертации; . ' • ■ , * . ..

Лиссертагия состоит из згеяения, обзора литературы, описения материала и методов исследования, собственных данных, обсуждения

результатов исследований, закл^ч^кия, ветодов и указателя литературы, который воччает Xисточнике не русс::он я источника на иностранных языках.

В работе использовано 5000 крыс, ICC-0 мыпей.

Текст изложен на 150 страницах машинописного текста, иллюстрирован 21 тай лицей, ^отогрфтт.

МАТЕРИНЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты внполченв í® jCOO~;< белнх беспородных крнсах-самцах нассоЗ 160-160,0 г к ка-белах беспородных мыаах нассоя 18-20,0 г. Проведено 22 с ерш. Крысы п кнаи были '¿ыбраш потому, что -они более незааисида от случегшх изнзнс.чий среды и достаточно изучены при воздействии иеб.тегспрлрт.ч:;;, Факторов.

В каждой серии опкгоз Ейделяли 4 группы аивотш« no 20-25: интактные - содерк&шгоя вовсе дт экспериигнга в обнчннх условиях вивария; холодозше - подвергаемое ежедневному хозодовому воздействию; подопытные - .который вводили изучаемый препарат к подвергали охлаждению; группа, срезнекъя - жадотны:-: отой группы вводили препарат сравнения к охлаждали в кликатокашре«

. Вое опыт и проводили в сдяо а то же время суток, посла ночного голодания (12 чесов). %«:д,-:гвно ке протяжении 60 дней для хо-лодового воздействия животных внутренние часа 'помещали на ? часа в оиматшсамеру fuptM íeatrca СГЛР) при температуре -15°С. В работе камеры предусматривались: подача воздуха для предупреждения гипоксии, световой "режии, нахождение животных в сзободаом состоянии. В хачестве контроля служили животине, находящиеся при температуре 1б-20°С в о бичи их условиях вивария. ЗвдвннаЯ-рктм охлаждения был подобран экспериментально. За Ю дней до начала эксперимента и на протяжении всех двух' месяцев .животные получали полноценный пищевой рацион в соответствии с. существующими нормами содержания лабораторных животных. .

Были изучены 4 соединения, являющиеся .производными тчобарби-туровой кислоты. Они бнли синтезированы кандидатом химических наук С.Г.Соболевой под руководством академика С. А. Андронатя. Это соединения: ТБ-2, ТБ-4, ТБ-10, ТБ-52.

Действие названных соединений сравнивалось с известными пое-

паратами (амгизоя, витамин Е), при месте ад ни в медицинской практике для поэшения неспецифичесхой сопротиэяягшсти, ускорения регенерации и синтеза белка, предупреждения повреждений мембран клеток, улучшения работоспособности.

Все вещества вводили в дозе 10 мг/яг внутрибрвашнно, ежедневно за 30 минут до холодового воздействия (крысы подвергались 3-х чрсовому воздействия, ига и - одночасовому).

В восьми сериях изучено влияние производных тиобарбитуровоГЗ кислоты и амтизола на продолжительность плавания До отказа мышей с грузом 5% от веса. Зремя плавания до отказа сравнивалось с временен плавания животных, подвергавшихся.только холоаззому воздействии, и результатами, получеккики на интектннх животных, е. также с данными опытов с п^кенекиен аити§ада. и витамина Е,

В,четырех сериях изучено влияние препарата ТБ-52, витамина Е и акгизола па фоне холодозого воздействия на время бега на- ■ тредбане с последующим сравнением данных, полученных на холодо-внх яивотннх (животные ежедневно подвергались тренировке, результаты снимались на 7, 14, 21, 25, 60 день). Влияние указанных веществ на сгатическу» " выносливость Свисеяие на вертикальной сетке До отказа) изучено в спит ах: Fia интахтных животных, подвергавшихся холодовому -воздействия, и на животных, получавших перед Холодовым воздействием ТБ-52, омтизол и витамин Е. Результаты снимались на 7, И, 21, 28, 60 дни эксперимента,-

Пютохимическя исследовали влияние производных ткобарбиту-ровоЯ кислоты на активность кислой ФосФатазн в икроножноЯ мапце голени крас по Гонори. %пя выявления влияния ТБ-52 на гормональный фон пользовались радиоизотопнами методами (Г. А.Ткачева, Ба~ даболкин, И. П.Ларичева, ISS3). О состоянии энергетического обмена судили по активности ферментов и содержание махроэргов и субг стратов. .

Активность ферментов определяли: . .

1. Фосфоэнолпируваткиназа (ФЭ1ВКК выражалась в мк. моль г" белка час? (по методу Нордли) упт. по А.Г.Александрович и др.,1978).

2. Глюкозо-б-фосфатаза (Г-б-фаза) - по нарастание неорганического фосфата с гомогенатом ткани (В.С.Асатиани, 1969) в мк.моль. , мг^белка часГ*

3. АТФ - в перхлорном.Экстракте из тканей с помощью теста .(Фирма

Берингер Пан Хейм, ФРГ).

Креатинфосфат - в пер хлорной экстракте из ткани хромато графически на колонке с.Яауэкс-50 (В.С.Асатиани, 1965). 5. Гликоген с антроновыи реактивом, пирузати. лактат - калориметрически (А. А.Пскроаский, 3359). , .

Весь-цифровой материал статистически обработан по общепринятым методам (М. Л.Беленький, 1953; М.З.Рокицкий, 1964).- достоверность результатов учитывалась только пр! "'"' менее 0,05. ■

РЕЗУЛЬТАТЫ ЖСЩОЗАНИа

I. Установлено влияние производных тиобарбитурозоЯ кислота ' на показатели физической зннослизосчи хр^с « мышея при длительном холодовом воздействии (табл. 1-Ю).

. , Таблица I

Продолжительность плевания (мич.) кркс резных групп

Группы животных 7 день.

А Интектные 15,18±1,0

В Подвергнутые холодовому воздействия 9,2*4 б ■

С Холодовое воздействие + ТБ-2 7,5б±0,75

Д Холодовое воздействие + ТБ-52 в дозе Ю мг/кг 15,52±1,0

. Таблица 2 , . Продолжительность плевания шшей 0®н.) с грузом на 7 день холодового воздействия

Группы кизотных ■'• ■ 7:день-

А йнтактные ' , . 4, С9±С, 3

. 3 Подвергнутые хо ледовому воздействия 3,95^0,2

С Холодовое воздействие +, ТБ-4 3,8 ±0,25

Таблица 5

Продолжительность плав&чия (мкн.) разных групп ктас на 7 дею эксперимента

_Группы жив отных__ 7 да нь_

А Интактние 15,2^0,6

3 Подвергнутые холодов о «у I и 5^0 7

воздействий ' '

С Холодовое воздействие + ТБ-4 7 н-т Л в дозе 10 от/кг

' • Таблица 4 '. Продолжительность плевания крнс (мнО разных групп

_Группы животных : .7 день_IЧ дець

А Пнтактные 10, £0,7 10,910,9 •

В Подзергнутые холодов ому <£л £ ТО (АО к

воздействию >>,э-и,ь хи.о-и.р

С

Холодовое воздействие + 4 г+0 о д -з+л б

ТЕ-10 з доза 10 мг/кг " 61

Таблица 5

Продолжительность плавания мшей (кин.) разных групп

на ? день эксперимента .. .

_Группы животных ; 7 день____

А Кнтайтнне ■ 2,3^0,1

В Подвергнутые холодовому . ; т у« тс-воздействия . .

С воздействие + ь т+л

ТБ-52 в дозе 10 кг/кг . ^З-и^г

, Р : -0,05

Д : Холодовое воздействие + - 0 ~ ~ амгизол в дозе 30 да/кг

'_ - . ' '--Р__<0,05 '

-Таблица б

Продолжительность плавания крас разных групп в различные дни эксперимента ' .

Гпуппы животных 7лень 14день 21де:>ь 26день -5Сдень -А Интактные 12,94,0 18,2И,9 18,05,9 17,2И,2 19,711,9

В Подвергнутые холо- 7 А п тс с+п о т? 210 "5 20 ¿¿о Я т«5 ^О о довоку ВОЗДеЯСТБИЭ * * О, „-и,,

С Холодовое воздейст-' . , , * , "

вие - ТЕ-52 в дозе12,9И,Э 55,711,0 о\бЮ, 9 76^*1,1 107,811,2 Юмг/кг

, Р. с0,0® <0,05 <0,001 4 0,001 ¿0,001

Л Холодовое воздеяст-' -.* . " ,

вие + витамин Е в 2Э,2Ю,6 83,б?-0,8 С,84,0 Э4,СИ0,9 Ю0,9±0,8 дозе Юмг/кг . ... . . ,

" . Р <0,001 ^0,001 <0,001 <0,05' ¿0,001

'.,'";'•■ •'■ Таблица 7

Продолжительность плазгшя (шш.) крас разних групп в,различные. Дни зксвериита- .г •

Группы■ животных ■-7день -Х%аиь 21день 28день * 50декь А йнтактназ а,15ЙТо1[8^ХО,9 17,0*0,5'

Б б,£¿0,510,010,7 12,0^1,1 120,^0,б 17,910,9

••стеий.." • '..-■.

С т1!МСв°!оэеЗЯ,+ 9. 5*0,9 52,5*1,0 68,9lO.fi 5 73,0*1,1 78,0*1,0 Ю иг/кг • ::'. \

""" ~ ~ - --у " "' хо,^ <_07Ш[~ "< 0^С(П ~ < 0,0(1 1 О, ОСИ

Д Холодовое В03Д.+ .,' - „_•„+_, „ .

дозе 7,5*0, 5 12,711,0 32,311,1 ,77.911.1 59,811,0

У у.-У,- 0,05 <0,05 < о,оса „ <0,001

Таблица б

Длительность Скин.) бега на тредбане крыс, ад: лтирувщихся к холоду на фоне введения ТБ-52 в дозе Ю мг/кг и витамина Е в дозе 10 иг/кг

'Группы животных 7день 14день 21день 26день 50день I Лнтастные 11,8*1,0 13,£ 16,6*0.9 12,0*1,05 11,0*1,05

В ïoSдо^о^"8 15, sí0,52 9,3¿0,48 б, 5*0, б 7, 6*0,51 4,8*0, 4 воздействию

С Холодовое воз- . . ...

действие + ТБ-52 . , . ,

в дозе Юнг/кг 15,£1,5? 21,85.4 32,8*1,53 28,8*1,4 33,8*1,2

Р ¿ 0,05 с 0,05 ¿ 0,001 ¿ 0,05 ¿ 0,001

Д » Холодовое воз- - - - - . - ' ^нТведазеИ" 8'911'6 9'8±1»5 18,5*0,69 .32,1*0,7 Í0 мг/кг

Р ¿0,05 <0,05 <0,05 < 0,001 ¿0,001

• Таблица 9

Продолжительность в лее ни я на вертикально!? сетке (мин. ) крыс разных групп в различные дни эксперимента

Группа животных 7день 14день 21 дет, 28денъ 50декь А Интактные 10,8*0,6 8,6*0,9 8,8*1,0 8,7*1,1 8.8Î0.6

В ЙЭД" б,oto,95 16,9*0,85 18,1*1,0 24,5*0,5 13,9*0,6

воздействию

С 1Т<9+о>8 r5j5tI>0 16,9*1,1 15,9*0,9 ■

10 мг/кг

Р <~0705 ~ " Ô,05~ ~<~0~Ô5 ~с 0,05" ~<~0~С5 ~

Л Холодовое возд.

+ витамин f в 14,9*1,0 21,9*0,9 25,5*0,85 27.5*1,1 29,9*0,85 дозе 10мг/кг

Р < 0,05 <0,001 ¿0,05 * 0,05 ¿ 0,05

Таблице Ю

Продолжите юность висения на вертикальной сетке <"мин.) . - - ' крыс разных групп в различные дни эксперимента

Группы животных 7 день 14день 21 лет 28день '^Одень А Интактные 10,8-0,6 8.6Î0.9 8,f£l,0 8,723,1 8,eïQ,$

В ЙмдовонуЫе о,Ci0,95 I6,9t0,85 18,1-1.0 24,5^0,5 Г:,9±С,б • воздействию

С Холодовое воз- , ■ ' " ' . '

действие +ТБ-52 17, £0,6 I7,9Î0,8 I5.5ÎI.O I5,9il,I I5,9i0,9 в дозе Ю мг/кг

^ Р /< 0,05 ^0,05 <0,05 ¿0,05 -¿0,05

Л Холодозсе вез- - ; ' -

действие + а и- й giT -т .л с&п g 5 gin я й Й 2 5 Otl О - тизол в дозе -

ÎO кг/кг

•P < 0,05 <0,05 i C,05 ■<• 0,05 < 0,05

Данные опытов говорят, что хояодсзое воздействие ушньшает ' устойчивость "к утоьаениг), псниу.е.ет .работоспособность и у крис, 'и у мышей, особенно .это заметно ? начальные сроки едептагии. " А - , введение предварительна препаратов влияло нг эти показатели неоднозначно. Так, взедеш'.е ТБ-2, TS-'t.. ТБ-Ю способствовало снижении »того показателя по сравнения с интектныки и хслодовыки, наблюдалась гибель животных. Введение ТВр52 увеличивало сти показатели, ускоряло наступление адаптации.

. 2, Устеновдено:„влияние произвогшого-тиобарбитуровэЯ кислоты ТБ-52 на уровень кортикостерона ч тиреотропного гормона в сыворотке крови крыс^ вдаптирующихсяк холоду (табл. II-I21.

3. Выявлена „способность-ТБ-52 интегрировать несколько мета- ' болических циклов в райках единой системы метаболических и энергопроизводящих процессов в условиях длительного хо л о доз о го воздействия (табл. 12-19), , . •:

Таблица II

Группы животных 7 день 14 день 21 г день

Интактние II (£5,1 12416,5 8214,0

Подвергнутые Холодове ку воздействию 220^6,8 16215,5 16516,0

т> <0,001 - < 0,05 < 0,05

Холодовое воздействие + ТЕ-52 123-5,1 15314,9 10214,5

Р < 0,05 4 0, 05 4 0,05

Влияние ТБ-52 на адаптирующихся к Таблипа 12 уровень ТТГ в сыворотке крови крыс, холоду, в различные дни эксперимента

Группы низотных 7 день 14 день 21 день

Интактние о.йо.я . •. о,б!о,ог 0,610,01

Подвергнутые холодо-вону воздействию 3,2±0Д 2,610, И 1,бЮ,1

Р <. 0,0® <0,001 г с, 05

Хол^д^ое воздействие 1,г±о,01 1,010,02 1,010,01

Р < 0,0СГ < 0,005 г 0,05

Таблица 13

Активность гликозо-6-^осфатазн в печени при действии холода и введении ТБ-52 (як моль мг белке час-'')

Условия эксперимента_7" день день _ 28 дзнь

Интактние 3,7310,82 7,7510,82 7,7?10,82

Подветзгнутые ХОЛОДОВОМу <> Огг+Л СО д чч^л ле й <3 +П 75 воздействии . о,». -и,(с

? -0,001 ¿0,01 ¿0,05

Холод + ТБ-52 4,5(£0,50 3,1010,02 7,3 10, <5?

Р <0,01 ¿0,001 -¿0,05

Таблица 14

Гликоген в печени кркс при действии холода и введении ТБ-52 Сиг %)

Условия эксперимента

' день

14 день

28 день

■Интакткые

Подвергнутые холодо-£ ому воздействия

V

Холодовое воздействие введение ТБ-52

I -

, Р

21001110 21001110 гюйно

320141 . 1190197 <0,001 <0,01

15001105 0,(3

1240112,0 22701108 • 19201130 <0,Я 4 0,001 . <0,001

Таблица 15

Активность §ЭПК-азы при холодовои воздействии и введении ТБ-52 (мк. иоль.мг-^ белка час~М

Условия эксперимента 7 день 14 день 28 день

Интактние 2,40Ю,4? 2,4010,4? 2,4010,43

Подвергнутые холодсвому воздейств ию Р 1.6210,28 4 0,001 1,9910,22 2,0310,24 < 0,01 < 0,01

Холодовое воздействие + ТБ-52 Р 1,6910,32 < 0,05 2,8310,39 2,5910,28 4 0,01 4 0,05

'Таблица Содержание гликогена в -мышечной ткани при холодовом воздействии и введении ТБ-52

Условия эксперимента 7 день 14 день

Интзктные I50H2 I5ÄI2

Подвергнутые холедовому воздействию V 30t4,0 ^ 0,001 5014,5 4 0,01

Холод * ТБ-52 Р •4513,8 4 0,05. вей, о ; ^ 0,01

Таблице 17

Содержание лактата. (мг и пирувата Смг Г> в мышечной ткани крыс при холодов о и воздействии и введении ТБ-52

•Условия окспе-' ''нтекгные Холод Холод +• ТБ-52

Чока- рикента кгасы 7лень 14день 7день 14день

зетели _

■Ьктатмг;? 14,81' 42,912,9 38,11?, О 28, £2,7 19,?И, 8

Р а 0,0а < 0,Ш <0,(1 ¿0,01

ГЬпуватмгЯ 1,70Ю,17 1,42Ю,И 1,9С£0,13 1,43Ю,13 1,851

0,17

Р 4 0,01 ¿0,01

Т?<5лица 18 Содержание АТФ (мк. моль. в ткани

У' спг1-* у.? нта

7 день

14 день

/1нтактные

Подчергнутц; холодовому ■воздействию

Р

Хо -год + ТБ-52

2,210,19

1,1*1.0 ' ^ 0,01 1,210,17.

2,210,19

1,4*0,14

0,Я . 1,810,2 ^ 0,01

Теб.дае 19

Углобия э^опе^чмента 7 день 14 ".е нь

"нтаетные з, £о,з 3, 410,3

Хоподовое воздействие 1,710,21

Р 4 0,001 4 0,01

Холод + ТВ-52 I, $0,25 2,7310,21

т> < 0,05

Анализируя динамику показателей углеводного обмена как в печени, так и в е:<е*етной шине» мокно оказать, что осуществляется переход на более элективный путь использования глюкозы с одно!} стороны, так как накапливается макроэрш, а с другой стороны способствует использование лактата на пгахонеогенез, повшая кол:;-честзо ■ макроэргов, регулирует скорость 1'лккодиза, иунтирует метаболизм глзкозы на путь образования пируэета, в конечном итоге, по-видимому, способствуя повышение и сохранении работоспособности,

. ^ Установлено влияние ТБ-52 на содержание 2,3-ДФГ в эрптро-ситах крови крыс, адапткрутоихся к холоду (табл,20\

Таблица 20

Содержание 2,3-ЗФГ а зритгспитвх крыс при де1ств!м ннзгих температур и введением ТЕ-52 (в мк"/г гемо глобина"»

Рруппн животных 7день 1,4деиь 28 день 50день

Янтактные 18,^,7 18,611,7 1Р.6И.7

Холодозое возд. 12,^1,2 19,911,5 29,213,0 23,912,2

Р < 0,01 <0,01 < О.СТ < 0,Я

Холод + ТБ-52 18,3*1,8 25,4±2,3 29,143,0 33,0*3,1

Р - < 0,001 < 0,01 < 0,01

Следовательно, можно полагать, что ТБ-52 при холодовом'воздействии способствует увеличении скорости доставки кислорода к местам его потребления. является, не нш взгляд, одной из основных причин актопротек-орного действия.

5. Установлено влияние ТБ-52 на активность кислой фосфатазы з скелетной мылие крыс, адаптирующихся к холоду.

Ланные, 'полученные с помощь» зтого метода, позволяют обна-гунить повышение уровня активности кислой йюсфатазы в • кроножных шпшах крыс, подвергнутых холодовому воздействию, что подтверждает литературные "данные о лвбилизации лизосомального аппарата, а в ::кроно.-кних мышцах крае, подвергнутых воздействию холода на фоне ТЕ-52, уровень активности ниже интактных, что еще раз подтверждает возможность применения этого препарата как стабилизатора клеточных мембран.

ОБСУЖДЕНИЕ

Как следует из результатов наших опытов, выполненных на беспородных белых мышах и белых крысах, ежедневное содержание в кли-матокамере при температуре -15РС на фоне. введения препаратов показало неоднозначность их влияния не устойчивость к утомлению.

Так, введение ТБ-2, ТБ-4, ТБ-10 не способствовало сохранения устойчивости к утомлению и даже снижало этот показатель по сравнение с-контрольной группой и у мышей, и у крыс, потенцируя, по-видимому, действие холода. Поэтому эксперименты с этими производными тиобарбитуровой кислоты были оставлены, так как препараты посчитали неперспективными с точки зрения актопротекторного действия.

Введение ТБ-52 на £оне холодового воздействия способствовало сохранению и повышении работоспособности и у мышей, и у крыс. 3 качестве контроля наш были взягги актизол, известный акт о протектор, и витамин Е, антиоксидант.

Зведение амгизола способствовало увеличении выносливости только 3.14 дня, но однако его эффект уступал, действию ТБ-52 пси динамических нагрузках. АктопротекторннЯ эффект у ТБ-52 оказался более выраженная и по сравнении с ектиокекдантом - витамином Е, при этом эК'еиы от введения нвблчлавтея с 7 дня зкепертмента, а

эффект от витамина Е начинает проявиться наиболее демонстративно только с 21 дня эксперимента.

Исследуя влияние ТБ-52 на устойчивость к статической нагрузке при холодозом воздействии были получены данные, говоряяие об активирующем влиянии ТБ-52 на этот показатель, на 7 день эксперимента и до конца время висения на вертикальной сетке достоверно было больше интакт'ной группн и оставалось на стабильном урозн». Введение амтизола не способствовало во все дни эксперимента сохранения устойчивости к утомления при статической нагрузке и , по всея вероятности, только одного актигипоксантного действия не достаточно для сохранения работоспособности в условиях ходо-дового воздействия. А устойчивость к статическим нагрузкам является объективным показателей для характеристики работоспособности (В.Я.Русин, В.А.Барашков, 1978). Более демонстративно было действие витамина Е, обладающего актиоксиданткнм действием. По всей вероятности, в механизме влияния ТБ-52 на работоспособность проявляется его антигипоксантно-антиоксидантное действие, при этом можно предположить, что антиокеидвнтное действие выражено в больней .-степени.

Но каков же механизм Над евтоношют внутриклеточными филогенетически более древними механизиаш р<2гуля?ии энергетического обмена стоят более поздние нейро-эндокриннне механизмы. Они дифференцированно изменяют состояние-энергетического обмена в клетках внсокоспециализированнах органов, обеспечивая реализацию энергоемких процессов на уровне, целого организма.' Исходя из этого, мы реиили проверить, как влияет на гормональный ftoH.организма, е.даптирувдегося к холоду, .введение TP-52.

Полученные наш.данные показали, что длительное хс ходовое воздействие способствует повчипняч гокцентгев'ии гортикостегона. в сыворотке крови грнс на 7, 14, 21 дни эксперимента достоверно в 1,4-2 раза. Ззедение_ ТБ-52 крысам, адептируяцихя к холоду,достоверно-по сгавненш/'й контрольной-группой- снижало »гот показатель в 1,5-1,8 раза во все дня эксперимента, однако эти показатели были несколько зше показателей интактной группы.

Учитазая, что в предшествуадих опытах мы наблюдали повышение устойчивости- к физическим нагрузкем на фоне -ТБ-52 и холодзво-го воздействия, мопно полагать, что данное вещество чергз измене-

кия уровня корта«: остероидов способствует более рациональному, более экономному течении энергетического обмена, направленному на умзньпение стрессорного повреждения. А это очень ва^но для сохранения устойчивости организма к физическим нагрузкам в условиях холодов ого воздействия.

Как отмечает ряд авторов СЕ.М^СтамбровскиЯ, К.Ф. К>ровнн, 1971 ; Н.И.Бобров, В.П.Тихомиров, 1969; Ï.Buad, fi.Warchaffc ,1970; В.Я.^усин, 1979\ работа гипоталято-гапофизарно-недпочечникозой система и китовидной -железа является барометром холодового воздействия. Поэтому ш решили посмотреть, как ТБ-52 в условиях хо-лодозого воздействия влияет на ТТГ.

Адаптация к холоду сопров¡идается усилением метаболизма ти-реодных гормонов в тканях, что могло бы привести ,к первоначальному уменьшении их конттентреиии в крови. А отмеченная потребность проявляется в стимулировании с;итоеидной железы через гипоталямус, гипофиз, через выделение в частности ТТГ. Выявленное нами повышение ТТГ в сыворотке крови крис, адаптирующихся к холоду, является проявлением ахтивесии гипоталямо-гипо^изарноЯ регуляции щитовидкой железы и вследствие этого имеет место повышение концентрации таре одних горюнов, а характеристика показателей энергетического обмена при холодовом воздействии совпадает с показателями, наблэдееиаии в случае повышения их концентрации гормонов.

Снижение же концентрации ТТГ на Фоне' введения ТБ-52 приводит, к упорядочиванию обменных процессов, вероятнее всего это сопряжено с уменьшение!« катаболических процессов»

А каковы же при этой метаболические перестройки в организме? Введение ТБ-52 красам на фоне длительного холодов о го-воздействия приводило к изменению-жирового обмена (В. А.воровских, 1987; Е. А. Очарез, 19851,, способствовало уменьшения свободао-редикального окисления, увеличения ферментативного окисления, к увеличения focifop'.î лирования. '

А как изменяется углеводный о б nerf? Введение ТБ-52 на фоне -длительного холодового воздействия, уке начиная с первой недели, препятствует, снизенио глихогенг в печени, в мшарах, пипувата, какроэргоз, препятствует накопления лактата. Задетаивает активность Г-5-«*».зы s печени. Активность ФЭПВК-езы остается сниженной. К концу второй недели достоверно увеличивает гликоген в шишах,

в печени, пируват, макроэрги и снюкэет лактат в vrauax. А ото свидетельствует о переходе на более эффективный путь использования глокоэы, накапливая макроэрги, а с другой стороны об использовании лактата на глгаконеогенез (в печени), снижая утомляемость и повышая работоспособность. В печени растет активность Г-6-íasu, ФЭПВК-азы, достигая уровня интахтных крыс в 4 неделе.

Таким образом, такая динамика, показателей углеводного обмена говорит* что под влиянием ТБ-52 сохранение и повышение физической работоспособности может быть связано с метаболическим перестройка)®, направленными на оптимизацию ли пи дно го и углеводного обменов, направленных на улучшение субстратного обеспечения ррботы мышц НЭ1К-аки, глюкозой» способствуя накопления кекроэр-гоз, уменьшая количество недоокисленных продуктов, шунтируя метаболизм глюкозы на путь образования пирузата.

Как известно, ведущим механизмом ответной реакпш-при воздействии холода является гипоксия (А. Л.Избинский, 194?; Ф.З.Ие-срсон, I9RI; П.П.'энисенко, М.А,Полякова, 1972, 197?, 197 5\ Введение животным ТБ-52 уже в первую неделю действия низких температур на организм задерживало снижение 2,!?-Д®Г в крови, а начиная с IА дня опыта, количество этого метаболита в эритроцитах 'увеличивалось, что соответственно говорит о с.ччжении сродства геиогло-. бина к кислороду,и тек садам способствовало его более полной отдаче в тканях. Таким обрезом," введете животным ТБ-52 сокращает процесс формирования едаптивной перестройки метаболизма в эритроцит ех, тем самым способствуя улучшению кислородного реатма организма, препятствуя гипоксии, и, как видно из предаествуацих опытов, способствует сохранение и позышекиа работоспособности.

3 следуоиих сериях опытов были получены данные о влиянии ТБ-52 на уровень кислой фосфатаза скелетных мши.

Исследуя гистохимически активность кислой Фосфатазч в икроножной ишце голени, ju выявили (визуально), что более высокая активность кислой ^осфатази фиксируется в икроногноЯ мышце кр:!С, подвергнутых холодовому воздействию, в в т. зга цех крыс, которым перед- Холодовым воздействием вводили Т^-52, активность данного фермента была нггке активности мша инталткнх крас, что, йо всеП вероятности, способствует стабилизации лйзосом, клеточных мембран.

Таким образом, подытоживая результата нашего исследования по выяснению возможности коррекции физической работоспособности в условиях холодозого воздействия, мы прияли к следующему закля-чени-о: наЯден препарат среди произзодных тиобарбитуровой кислоты, способный сохранять и улучшать работоспособность, тем самым облегеая и уменьшая отрицательные сдвиги в организме, вазывае-!'.Ы5 холодом. На ней взгляд, главным, ведущим в действии изученного нага препарата является »нтигипоксантко-антиоксидг-нгное действие. Подтверадением этому является слабо выраженное действие у эталонных препаратов - аэтизола, известного антигипоксан-те, и .^-токоферола, известного антиоксиданта. Исследуемые нами Т?-2, ТБ-4, ТВ-10, по все. 1 вероятности, таким сочетекным действием не обладаэт, ток как ектизности от их применения при хо-ло "новом воздействии на физическую выносливость не зыявилось. Наиболее объективным оказался ТБ-52. Исследуя механизм действия этого прзперата, мы установили, что ТБ-52 обладает мемб рано модули ругаВ!:: действием, влияет на кислородный реким животных, подвергаемых длительному холодовому воздействие, препятствует перекисному окисления липидов, оптики зирует углеводная, жировой, белковый-обмен, воздействуя на гипоталяио-гипо&изерно-надлочечниковуп, симпато-адреналовуо системы, цитовиднуи железу. При этом как бы способствуя более региональному воздействие на эти систеш,. оптимизируя ■уровень-гормонов в крови, препятствует чрезмерному поступлению их 2 кс.озь, но .сохраняет адаптивную их реакции на стрессор. к это позволяет сделать заключение, о целесообразности использования ТЕ-52 для случаев экстренного^и пролонгированного повышения работоспособности, поддержания общей устойчивости организма в профилактическом и реабилитационном аспектах, при длительном пребывании в физиологически осложненных условиях обитания с развитием процессов глубокого утомления.

3 и 3 О д ы

1. Производное тиобарбитуровой кислоты ТЕ-52 оказывает выра-ззннай задитныя э'^ект. при длительном холодовом воздействии, по-въчзаат |?из;!ческуз выносливость.

2. ТБ-5? наряду с антигипоксантнцми свойствами проявляет вн-

раженное антиоксидактное действие.

3. Фармакологическая активность в ряду изученных соединений максимально проявляется при увеличении радикала до

Производное тиобарбитуровой кислоты Т£-52 в дозе Ю мг/кг ограничивает образование продуктов перекисного окисления липидов. повивает антиокислительную активность, улучиает кислородный режим, увеличивая в эритроцитах содержание тетаболк-та гликолитического иунта 2,3-®Г, увеличивая энергетически;"; потенциал за счет сопряжения процессов окисления и фосфорилирове-ния, способствует стабилизации лизосом, клеточных мембран.

5. ТБ-52 в условиях длительного холодового воздействия сохраняет адаптивкуи реакция организма на стрессор, сохраняя активность гипоталяод-пшофизарно-надпочечниковой и симгтато-едре-наловоЯ систем, а также щитовидной железы, способствуя при этом более оптимальному гормональному Фону.

6, Целесообразно провести полное доклиническое изучение соединения ТБ-52 в качестве средства, повышающего физическую выносливость и облегчающего адаптапив к холоду.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шриченко Е.Ф., Кириченко В.И,' Фармакологическая коррекция адаптивной реакции организма и некоторых его систем в условиях холоДозого стресса и физической нагрузки'. - Тезисы док-патов региональной конференции "''етоко-экологич^ские аспекты морфологии легких", 1939, С.29-Я.

2. Шриченко I.*. Влияние прободных пиримидина м. сопртгев.тяе-мость г динамической нагрузке. - Вопрос» морфогенеза сосудис- . то!3 систем!, Б!т.?,Рлеговеаенск, 15Р?, С.109-1И,

?. Шриченко Влияние производных пиримидина на работоспособность животных, аааотиоуащахся к холоду. - Тезисы докладов не-учно-практичэсго*?-гон^еренции "Поиск новых лекарственны;: средств и их использование в клинике". Чита, 1990, С.2?~2Ч. V Кириченко 5.Ф. Влияние производных пиримидина на показатели физической работоспособности кыиеГ' и крю да Фонг длкттльного холодозого воздействия. - В сб.: Фармакологическая регул«а-кя Холодовых воздействия. Благовещенск, 1990, С.19-21,

5. Кириченко йфиченко В,И. НеЯроморфология органов дыхательной системы при холодовом стрессе и фармакологическая коррекция адаптивных реакций. - В сб.: Фармакологическая регуляция холодовых воздействия. Благозещенск, 1990, С.36-40.