Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Изучение влияния комбинированного применения соединений ЛХТК 646, ЛХТК 648, этоксидола и ацетилсалициловой кислоты на ряд показателей гемостаза

На правах рукописи

КОЧЕТКОВ СЕРГЕИ ЮРЬЕВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ СОЕДИНЕНИЙ ЛХТК 646, ЛХТК 648, ЭТОКСИДОЛА И АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА РЯД ПОКАЗАТЕЛЕЙ ГЕМОСТАЗА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

18 АПР 2013

Старая Купавна - 2013

005057647

005057647

Работа выполнена на кафедре поликлинической терапии и функциональной диагностики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Зорькина Ангелина Владимировна

Официальные оппоненты: Утешев Даниил Борисович,

доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра семейной медицины, профессор кафедры;

Блинов Дмитрий Сергеевич,

доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва», кафедра общественного здоровья и здравоохранения медицинского института, заведующий кафедрой

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

. Зо

Защита состоится « £ » 2013 года в « 4¿>» часов на заседании

диссертационного совета Д 217.004.01, созданного на базе ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (ОАО «ВНЦ БАВ», 142450, Московская область, Ногинский район, г. Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОАО «ВНЦ БАВ».

Автореферат разослан « £ » 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук Яснецов Виктор Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Хроническими формами ишемической болезни сердца (ИБС) страдают около 14% населения России, причём Россия относится к странам наиболее высокого риска (Верткин А.Л., Ларюшкина Е.Д., Соснин П.С., 2012; Шальнова С.А., ДеевА.Д., 2011). Ацетилсалициловая кислота (АСК)- наиболее широко применяемый с этой целью препарат (Карпов Ю.А., 2008).

Основной (антитромбоцитарный) эффект АСК обусловлен подавлением агрегации тромбоцитов за счёт необратимого ингибирования циклооксигена-зы - ЦОГ, (Панченко Е.П., 2005). Однако в последнее время всё большее значение придают также антикоагулянтным эффектам препарата (Кропачева Е.С., 2008). Наряду с торможением агрегации тромбоцитов АСК оказывает влияние на другие звенья свертывающей и противосвертывающей систем крови (Михайлова И.Е., Перепеч Н.Б., 2007). Однако влияние на образование реактивных форм кислорода (Бышевский А.Ш., Умутбаева М.К., 2004), ульцерогенное действие (Ахмедов В.А. и соавт., 2007; Верткин А.Л. и соавт., 2007), а также рост относительного риска сердечно-сосудистых осложнений при прекращении использования АСК, в том числе, перед хирургическими вмешательствами или вследствие ненадлежащей приверженности пациентов к лечению (Явелов И.С., 2007; Collet J.P., Montalescot G„ Blanchet В. et al„ 2004), обусловливают интерес к поиску методов, усиливающих эффекты (Кириченко A.A., 2007) и обеспечивающих коррекцию побочного действия препарата.

Использование в комплексной терапии ИБС препаратов антиоксидантного типа действия, уменьшающих последствия окислительного стресса (Шо-пин А.Н. и соавт., 2003; Щегольков А.М и соавт., 2012), улучшающих реологические свойства крови (Голиков А.Л. и соавт., 2004), а так же оказывающих выраженный гастропротекторный эффект при введении нестероидных противовоспалительных средств (Зорькина A.B., Ямашкина Е.И., 2002; Начкина Э.И., 2003; Гришкина О.П., 2006), обуславливает интерес к более подробному исследованию перспектив комбинированного применения антиоксидантов с АСК и влияния на показатели гомеостаза (Зорькина A.B. и соавт., 2008).

Цель работы: исследование влияния комбинаций этоксидола и производных таурина ЛХТК 646 и ЛХТК 648 с ацетилсалициловой кислотой при курсовом введении с последующей отменой на некоторые параметры гемостаза и биохимические показатели венозной крови в эксперименте.

В ходе выполнения работы решались следующие задачи:

1. Исследование влияния АСК при курсовом введении в дозе 4 мг/кг, а также её отмены на некоторые биохимические показатели и гемостаз в эксперименте.

2. Исследование влияния комбинации АСК (4 мг/кг) и мексидола (5 мг/кг) при курсовом введении и последующей отмене на некоторые показатели гемостаза венозной крови кроликов в эксперименте.

3. Оценка влияния комбинации АСК (4 мг/кг) и этоксидола (5,3 мг/кг) при курсовом введении и последующей отмене на некоторые биохимические показатели и гемостаз в эксперименте.

4. Исследование влияния комбинации АСК и соединений J1XTK 646 (7,2 мг/кг) и JIXTK 648 (5,9 мг/кг) при курсовом введении и последующей отмене на некоторые биохимические показатели и гемостаз в эксперименте.

Научная новизна работы. На основании комплексного исследования ряда показателей тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза показано, что комбинированное применение АСК и этоксидола оказывает более выраженное ги-покоагуляционное действие, чем введение АСК в виде монотерапии, увеличивая продолжительность тромбинового времени, снижая содержание фибриногена. В отличие от комбинации АСК с мексидолом в изученных дозах, комбинированное применение этоксидола с АСК обеспечивает рост активности антитромбина III и предупреждает рост тромбоцитов.

Комбинированное применение АСК и производных таурина ЛХТК 646 или JIXTK 648 повышает гипокоагуляционный эффект, по сравнению с введением АСК в виде монотерапии, в большей степени, чем при комбинации с мексидолом в изученных дозах, удлиняя время рекальцификации плазмы и АЧТВ, повышая активность антитромбина III и предотвращая рост фибриногена.

Через 14 суток после отмены комбинации АСК и этоксидола, в отличие от данных соответствующего срока наблюдения после прекращения введения АСК, сохраняется гипокоагуляционный эффект, нормализуется количество тромбоцитов и показатели липидного обмена.

Через 14 суток после прекращения введения комбинации АСК и соединений ЛХТК 648 или ЛХТК 646, в отличие от данных после отмены АСК соответствующего срока наблюдения, нормализуется большинство изученных показателей гемостаза и количество тромбоцитов, наблюдается снижение индекса атерогенности.

Научно-практическая значимость. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейших доклинических и клинических исследований комбинированного применения ацетилсали-

циловой кислоты и этоксидола, а также указывают на перспективность применения комбинации ацетилсалициловой кислоты с производными таурина с целью повышения эффективности и безопасности дезагрегантной терапии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При введении АСК (4 мг/кг) в течение 10 суток наблюдаются как прокоагу-ляционные, так и гипокоагуляционные сдвиги гемостаза. После отмены АСК наблюдаются фазные изменения гемокоагуляционного потенциала крови.

2. Комбинированное введение этоксидола и АСК позволяет значительно усилить и пролонгировать гипокоагуляционный эффект последней, за счёт чего достигнутое действие сохраняется в течение 14 суток после отмены АСК.

3. Применение комбинации АСК и производных таурина (ЛХТК 646 и ЛХТК 648) позволяет усилить гипокоагуляционный эффект препарата, и в отличие от комбинации АСК с мексидолом, после ее отмены сократить период последействия и снизить проатерогенный потенциал плазмы крови.

Личный вклад автора. На основе проведённого автором аналитического обзора отечественной и зарубежной литературы им осуществлялась разработка методических подходов и дизайна исследований. Автор непосредственно участвовал в проведении экспериментов, заборе крови для анализов, выполнении лабораторных исследований, проведении статистической обработки полученных результатов, их анализе, обобщении и подготовке публикаций.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на X Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2009), IV Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2009), на XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского государственного университета (Саранск, 2008), на XXXVII научной конференции «Огаревские чтения» медицинского института Мордовского государственного университета (Саранск, 2008), на II Международной научно-практической конференции «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности» (Пенза, 2012).

Публикации. По теме диссертационного исследования имеется 9 публикаций, в том числе 2 в журналах, рекомендованном Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки РФ.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста, включает в себя обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы результатов собственных исследований, обсуждение

полученных результатов, выводы, практические рекомендации и список использованной литературы, представленный 273 источниками, в том числе 127 зарубежными и 146 отечественными. Работа иллюстрирована 31 таблицей и 21 рисунком.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для исследования были выбраны следующие препараты:

Этоксидол (этилметилгидроксипиридина малат)— ингибитор свободно-радикальных процессов, оказывает мембранопротекторное, антигипоксическое, ноотропное, противосудорожное, анксиолитическое действие, повышает устойчивость организма к стрессу, обладает антиишемическими свойствами, ограничивает зону ищемического повреждения, обнаруживает гиполипидеми-ческое действие, повышает резистентность организма к кислородзависимым патологическим состояниям. Оказывает противоаритмическое действие, корригирует эндотелиальную дисфункцию (Сернов Л.Н. и соавт., 2008; Блинов Д.С. и соавт., 2009; Покровский М.В. и соавт., 2010).

Производные таурина с лабораторными шифрами ЛХТК646 (таурина бромникотинат) и ЛХТК 648 (таурина сорбат). ЛХТК646- соль таурина с бромникотиновой кислотой, молекулярная масса - 365,2 г/моль. ЛХТК 648 - соль таурина с гидроксиникотиновой кислотой, молекулярная масса- 302,2 г/моль.

В качестве препарата сравнения в оценке фармакологических эффектов комбинированного применения АСК с антиоксидантами использовался мекси-дол (этилметилгидроксипиридина сукцинат), фармакологические эффекты которого обусловлены антиоксидантным и мембранопротекторным действием (Воронина Т.А., 2005; Новиков В.Е. и соавт., 2010). В работе использовался препарат мексидол производства ООО «НПК «ФАРМАСОФТ» (г. Москва), по 2 мл - 5% раствор (100 мг).

В исследовании использовали ацетилсалициловую кислоту- препарат «Упсарин УПСА» производства Бристол-Майерс Сквибб, Франция, регистрационный номер П № 011386/01.

Исследование было проведено на 72 половозрелых кроликах обоего пола породы «шиншилла» массой 2,6-3,8 кг. Экспериментальные исследования проведены в соответствии с этическими требованиями по работе с экспериментальными животными (Федеральный закон о защите животных от жестокого обращения от 01.01.1997 и Приказ Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики»), одобрены локальным этическим комитетом.

Животные содержались в условиях вивария с соблюдением светового и температурного режима, в клетках размером 50x50x60 см, на стандартном рационе (зерно, сено, корнеплоды) со свободным доступом к пище и воде.

В первой серии эксперимента (контроль, п=22) всем животным вводили только АСК в дозе 4 мг/кг ежедневно внутрижелудочно зондовым способом в течение 10 суток. Венозную кровь забирали у 12 кроликов для исследования параметров коагуляционного гемостаза и подсчёта тромбоцитов - до начала эксперимента, на 1-е, 7-е, 10-е, 14-е, 17-е, 20-е, 24-е, 27-е, 43-е и 57-е сутки после окончания введения АСК. У 10 кроликов брали кровь для исследования биохимических показателей - до начала эксперимента, на 1-е, 14-е и 20-е сутки после окончания введения АСК.

Во второй серии эксперимента (группа сравнения, п=12) животным вводили АСК в дозе 4 мг/кг внутрижелудочно и мексидол 5 мг/кг внутримышечно (в/м) ежедневно в течение 10 суток1. Все остальные антиоксиданты вводили в дозах, изомолярных указанной для мексидола.

В третьей серии эксперимента (п=14) животным ежедневно вводили АСК в дозе 4 мг/кг внутрижелудочно и этоксидол в дозе 5,3 мг/кг в/м. В четвертой серии (п=12) вводили АСК внутрижелудочно в дозе 4 мг/кг и соединение JIXTK 646 в дозе 7,2 мг/кг в/м. В пятой серии эксперимента всем животным (п=12) вводили АСК в дозе 4 мг/кг внутрижелудочно и соединение JIXTK 648 в дозе 5,9 мг/кг в/м. Все препараты и соединения вводились ежедневно в течение 10 суток.

Во 2, 3, 4 и 5-й сериях венозную кровь забирали для исследования параметров коагуляционного гемостаза и подсчёта тромбоцитов - до начала эксперимента, на 1-е и 14-е сутки после окончания введения АСК или комбинаций; для исследования биохимических показателей - до начала эксперимента и на 14-е сутки после окончания введения АСК или комбинаций.

Все исследуемые показатели определяли в венозной крови. Кровь забирали из краевой вены уха кроликов с помощью веносекции: для определения параметров гемостаза- в пробирку с 3,8%-ым (112ммоль/л) раствором цитрата натрия (соотношение крови к раствору цитрата натрия было 9:1); для определения биохимических показателей - в чистую пробирку; для подсчёта тромбоцитов - в системы «MICROVETTE® 200» (Sarstedt, Германия).

Для комплексной оценки коагуляционного гемостаза исследовали ряд показателей венозной крови: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), время рекальцификации плазмы (ВР), тромбиновое время (ТВ), активность антитромбина III (AT III), протромбиновый индекс (ПТИ), концентрацию фибриногена, а также степень тромботеста (TT) и этанолового теста;

1 Данная серия была выполнена совместно с Юртаевой И.В.

кроме того, подсчитывали количество тромбоцитов в венозной крови для косвенной оценки реакции тромбоцитарного звена гемостаза.

Биохимические показатели определяли на автоматическом биохимическом анализаторе «BioChem Analette» (HTI, США) с использованием реагентов ЗАО «Вектор-Бест» (Россия): концентрацию общего белка, мочевины, креатинина, общего билирубина, глюкозы, общего холестерина (ОХС), холестерина липо-протеинов высокой плотности (ХС ЛПВП), общих липидов, триглицеридов, активность аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Индекс атерогенности (ИА) вычисляли по формуле H.A. Климова (1977 г.): ИА = (ОХС - ХС ЛПВП) / ХС ЛПВП.

Статистическая обработка результатов проводилась на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Office Excel 2003 и SPSS Statiscics 17.0. Данные выражены в виде средних арифметических (М) и ошибок средних (±ш). Достоверность различий (р) между сравниваемыми вариационными рядами оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента. Для сравнения различий между исследуемыми группами использовали дисперсионный анализ (ANOVA). Различия признавались статистически достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На фоне введения АСК в течение 10 суток в дозе 4 мг/кг наблюдалось изменение показателей гемостаза, характеризующих 1-ю фазу свертывания крови. Величина АЧТВ не менялась по сравнению с исходными данными (р>0,05) (рис. 1). Наблюдалось увеличение ПТИ на 19% (р<0,01). Изменение изученных показателей, характеризующих 2-ю фазу свертывания крови, заключалось в некотором сокращении ТВ на 9% (р<0,05) и увеличении содержания фибриногена на 26% (р<0,01). BP возрастало на 17% по сравнению с исходным (р<0,01). Отмеченные изменения сопровождались ростом активности AT III с 73±1 до 79±1% (р<0,05) на фоне резкого увеличения содержания тромбоцитов на 34% (р<0,01) (рис. 2, рис. 3). Кроме того, на фоне введения кроликам АСК в течение 10 суток наблюдался рост ИА на 16% (р<0,05) за счёт повышения концентрации ОХС на 14% (р<0,05) и снижения ХС ЛПВП на 10% (р<0,05). Регистрировался рост активности ACT на 68% (р<0,01).

I 10

100

90

80

Активированное частичное тромбопластиновое время

103

100 ■ т

т Ф

Г Ш

I

+

Ю1 юо 1£1

98

исход I 7 Ю 14 17 20 24 27 43 5уСутки

Ji 1т 100 101 Й ф .J _

ИСХОД I 7 10 14 17 20 24 27 43 5уСутки

Рис. 1. Изменение некоторых показателей гемостаза после прекращения введения АСК (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

После отмены АСК сохранялись выраженные изменения коагуляционного потенциала. Так, к 7-м суткам после отмены препарата нарастали гипокоагуля-ционные изменения крови: по сравнению с данными после окончания курса введения АСК показатель АЧТВ снижался на 9% (р<0,05), ПТИ оставался на 15% выше исходных данных. ВР составило 120% от исходного уровня (р<0,05) (рис. 1). Показатели гемостаза, характеризующие 2-ю фазу свёртывания: ТВ и степень TT сохранялись на уровне предыдущего срока исследования, содержание фибриногена снижалось на 10% (р<0,05), но оставалось выше исходного уровня. При этом активность AT III превышала исходные данные на 11% (рис. 2). Содержание тромбоцитов также по-прежнему сохранялось на высоком уровне - на 32% выше исходного (рис. 3).

160 140 120

100 91 93 100 —

80

Тромбиновое время

I

100 90 89 96 Ю0 99 100

"I-ет-ЕЯЗ-ЕЙ-I--5--

1 7 10 14 17 20 24 27

43 57СУтки

130

120

110

90

Антитромбин III

117*

10

14

20

43

Сутки

ШШШЯш

57

Сутки

Рис. 2. Динамика некоторых показателей гемостаза венозной крови кроликов на фоне отмены АСК (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

Через 10 суток после отмены АСК нарастание гипокоагуляционного потенциала стало более выраженным: ПТИ снизился по сравнению с предыдущим сроком наблюдения и с исходными данными на 31% (р<0,05). ТВ резко возросло как по сравнению с предыдущим сроком наблюдения (на 55%, р<0,05), так и с исходным уровнем (на 43%, р<0,05). Степень тромботеста, со-

держание фибриногена, активность AT III и содержание тромбоцитов достоверно не менялись по сравнению с данными предыдущего срока наблюдения.

Рис. 3. Динамика содержания тромбоцитов (в процентах к исходным данным, принятым за 100%) на фоне отмены АСК; *- достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

Механизм действия АСК связан с необратимым ингибированием циклоок-сигеназы тромбоцитов (Панченко Е.П., 2005), срок жизни которых составляет 10-12 суток. Поэтому особенно интересно было исследование показателей через 14 суток после отмены препарата. Оказалось, что, несмотря на сроки, соответствующие появлению в периферической крови новой популяции тромбоцитов, не наблюдалось снижения их количества, но при этом регистрировалась динамика показателей, свидетельствующая о некоторых гиперкоагуляционных сдвигах (рост ПТИ на 54%, уменьшение ТВ на 30%).

Через 17 суток после отмены АСК ВР, степень TT (4,6±0,3), активность AT III и содержание тромбоцитов сохранялись на прежнем уровне, не восстанавливаясь до исходных показателей. При этом АЧТВ впервые стало достоверно ниже исходного уровня на 12% (р<0,05), а ПТИ - выше на 13% (р<0,05), ТВ сокращалось на 10% (р<0,05), содержание фибриногена снижалось на 14%, достигая исходного уровня. Таким образом, по сравнению с предыдущим сроком наблюдения регистрировалась в большей степени гиперкоагуляционная направленность сдвигов показателей гемостаза, в качестве компенсаторной реакции снижалось содержание фибриногена.

Через 20 суток после отмены АСК, по сравнению с предыдущим сроком наблюдения, продолжали нарастать гиперкоагуляционные сдвиги, что соответствуют данным Юртаевой И.В. (2009). Сохранялись на прежнем уровне АЧТВ, ПТИ, ТВ, содержание фибриногена, степень TT, активность AT III. Однако при этом сокращалось ВР на 10% (р<0,05) от показателя предыдущего срока исследования, отмечался дальнейший прогрессивный рост содержания тромбоцитов.

Через 24 суток после отмены АСК наблюдалась тенденция к нормализации отдельных изученных показателей гемостаза: ВР несколько увеличивалось, ПТИ начинало снижаться, ТВ - сокращалось до исходного уровня. Содержание тромбоцитов также начинает постепенно снижаться, но пока еще оставалось выше исходного на 20%. Через 27 суток после отмены АСК происходило восстановление до исходного уровня большинства показателей (содержания тромбоцитов, степень TT, ПТИ, ТВ, АЧТВ). Но при этом сохранялась на прежнем повышенном уровне активность AT III, BP оставалось больше исходного, а содержание фибриногена снижалось на 24%. То есть, в этот период в целом динамика показателей характеризовалась гипокоагуляционной направленностью.

Через 43 суток после отмены АСК все еще не наблюдалось полной нормализации показателей: ВР еще не достигало исходных данных, фибриноген все еще сохранялся на несколько сниженном уровне, активность AT III была выше исходных данных. Через 57 суток после отмены АСК подавляющее большинство изученных показателей возвращалось к исходному уровню.

Таким образом, до 57 суток после отмены АСК наблюдались колебания показателей гемостаза, характеризующих сначала гипокоагуляционную направленность (к 7-10-м суткам: увеличение тромбинового ВР, активности AT III, уменьшение ПТИ и концентрации фибриногена), затем - гиперкоагуля-ционную (14-24 сутки: к 14-м суткам возросла концентрация фибриногена; АЧТВ достигло минимума на 17-е сутки; возрос ПТИ с максимумом на 20-е сутки; ТВ снизилось и оставалось в диапазоне наименьших значений на 17-20-е сутки; нарастала степень TT с пиком на 24-е сутки). Кроме того, содержание тромбоцитов увеличилось к 20-м суткам, что в сочетании с предполагаемым восстановлением их активности также свидетельствует о росте тромбогенного потенциала крови. После 24 суток (27-53 сутки) динамика показателей характеризует вновь гипокоагуляционные тенденции, происходит постепенная стабилизация исследуемых параметров: их колебания становятся сглаженными, а сами значения в большинстве случаев приближаются к исходным.

Кроме колебаний показателей гемостаза на фоне отмены АСК сохранялись изменения липидного обмена, регистрировавшиеся на фоне курсового введения препарата. Так, к 14 суток после отмены АСК содержание ОХС превышало исходный уровень на 27% (р<0,01). Концентрация ХС ЛПВП также сохранялась на прежнем уровне и была на 10% ниже исходных данных, ИА превышал исходные показатели на 19% (р<0,05), ХС ЛПНП- на 24%. Некоторая тенденция к нормализации показателей наблюдалась только к 20-м суткам после отмены АСК. Уровень ОХС несколько снизился, но всё ещё был на 12% выше исходного (р<0,05) и достоверно не отличался от данных на фоне введения АСК (р>0,05). Концентрация ХС ЛПВП достигла исходного уровня

(р>0,05). В итоге ИА тоже понизился до 0,64±0,02, хотя и остался выше исходного на 10% (р<0,01). Уровень ХС ЛПНП превышал исходные данные на 55%.

В контрольной группе на 20-е сутки после прекращения введения АСК активность АСТ снизилась на 22%, по сравнению со значением предыдущего срока наблюдения (р<0,01), но оставалась выше исходной величины (р<0,05).

В серии сравнения на фоне комбинированного введения АСК и мексидола

(в дозах 4 мг/кг и 5 мг/кг соответственно) не наблюдалось достоверной разницы в динамике показателей АЧТВ, ПТИ, ВР, ТТ, АТ III. Увеличилось ТВ, ограничивался рост фибриногена и количества тромбоцитов (рис. 4).

АЧТВ пти bp тв

ТТ Ф AT III Tp

□ Введение АСК 4 мг/кг ■ Через 14 суток после отмены АСК

□ Введение комбинации АСК+мексидол И Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 4. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК 4 мг/кг и мексидола 5 мг/кг (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; " - достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

Через 14 суток после отмены комбинации, в отличие от данных группы контроля, ПТИ и ВР сохранялись на прежнем уровне, наблюдалось снижение до исходного уровня содержания фибриногена и количества тромбоцитов.

Применение комбинации АСК и мексидола в дозе 5 мг/кг позволило ограничить изменения показателей липидного обмена. Через 14 суток после отмены комбинации, в отличие от контрольной группы, уровень изученных показателей липидного обмена достоверно не отличался от исходных данных.

Комбинированное применение АСК и этоксидола в изученных дозах в течение 10 суток привело к достоверному увеличению ВР на 19% по сравнению с исходным, ПТИ - на 35%; возросла и активность АТ III - на 15% (рис. 5).

101

7W

не*

109*110

Т134*

122* 1 I 122*

А— иг

■ а

60

76*'

Ф

AT III Tp

□ Введение АСК 4 мг/кг ■ Через 14 суток после отмены АСК

0 Введение комбинации АСК+этоксидол □ Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 5. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и этоксидола (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); *- достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

Через 14 суток после отмены комбинации препаратов почти по всем показателям сохранялась предыдущая динамика: продолжался рост АЧТВ, активности AT III и ПТИ, показатели превысили данные исходного уровня на 25%, 22% и 37% соответственно. При этом концентрация фибриногена была на 24% ниже исходных цифр (р<0,05). ВР также несколько снизилось, но все еще превышало исходные данные на 14%.

Показатели липидного обмена так же, как и в серии сравнения, в отличие от контрольной группы, не носили достоверного отличия от исходных данных.

Комбинированное применение АСК и ЛХТК 646 в изученных дозах в течение 10 суток привело к усилению гипокоагуляционных сдвигов крови: увеличению ВР на 32% по сравнению с исходным, АЧТВ - на 39%, ПТИ - на 18%. Активность AT III возросла на 34%. Количество тромбоцитов на фоне введения комбинации увеличилось с 349±41Т0% до 461±32-109/л (р<0,05) (рис. 6).

AT III Тр

□ Введение АСК 4 мг/кг ■ Через 14 суток после отмены АСК

Q Введение комбинации АСК+ЛХТК 646 □ Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 6. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и соединения ЛХТК 646 (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

К 14 суткам после отмены комбинации АСК и J1XTK 646 снизилось ВР и активность AT III до исходного уровня. Напротив, ПТИ продолжил нарастать и достиг 202±9% (на 24% больше исходного значения). ТВ сократилось и достигло 8,0±0,2 с, что на 14% меньше исходных цифр. Концентрация фибриногена (2197±60 мг/л) была меньше на 36% показателя предыдущего срока наблюдения и на 28% — исходных цифр. Количество тромбоцитов составило 398±62Т09/л и не отличалось от исходных данных. После отмены комбинации АСК и JLXTK 646 в изученных дозах к 14 суткам наблюдалось значимое снижение И А (на 40%; р<0,01) за счёт снижения концентрации ОХС (на 29%; р<0,05), в то время как ХС ЛПВП практически не изменился (0,62±0,03 и 0,66±0,05; р>0,05). Значимо снизилась концентрация мочевины (на 32%) одновременно с повышением концентрации креатинина (на 19%). Как и в случае введения одной только АСК, увеличилась активность ACT на 42% (с 0,38±0,01 до 0,55±0,04 ммоль/ч л; р<0,05). Активность АЛТ, как и в контрольной группе, достоверно не менялась (р>0,05).

Комбинированное применение АСК и JIXTK 648 в изученных дозах в течение 10 суток привело к увеличению ВР на 29% (р<0,05) по сравнению с исходным, АЧТВ- на 27% (р<0,05), ПТИ - на 25% (р<0,05). Значительно возросла и активность AT III - на 36% (р<0,05). В то же время наблюдалась противоположная динамика по ТВ: показатель сократился на 14% (с 9,6±0,3 до 8,3±0,2 с, р<0,05). Количество тромбоцитов на фоне комбинированного курсового введения АСК и ЛХТК 648 возросло почти в 1,5 раза: с 347±44 до 507±55Т09/л. (р<0,001) (рис. 7).

Через 14 суток после отмены комбинации АСК и ЛХТК 648 значительно снизились ВР и активность AT III. Напротив, ПТИ продолжил увеличиваться и достиг 207±14% индекса (на 30% больше исходного значения, р<0,01). ТВ сократилось до 8,0±0,3 с, что на 17% меньше исходных данных (р<0,05). Концентрация фибриногена была на 19% меньше исходных цифр (2240±135 против исходных 2777±139 мг/л; р<0,05). Количество тромбоцитов не отличалось от исходных показателей, составив 363±58Т09/л.

Кроме того, через 14 суток после отмены комбинации АСК и ЛХТК 648 наблюдалось значимое снижение ИА (на 30%; р<0,05) за счёт снижения концентрации ОХС (на 20%; р>0,05) и увеличения концентрации ХСЛПВП (на 13%; р>0,05). Значимо снизилось содержание мочевины (на 31%, р<0,05) одновременно с повышением концентрации креатинина (на 23%, р<0,05). Как и в серии сравнения с введением АСК в виде монотерапии увеличилась активность ACT - на 69% (с 0,27±0,02 до 0,46±0,05 ммоль/ч-л; р<0,05). Активность АЛТ, как и в серии сравнения, повысилась менее значительно - на 29% (р<0,05).

AT III Tp

□ Введение ACK 4 мг/кг В Через 14 суток после отмены АСК

И Введение комбинации АСК+ЛХТК 648 □ Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 7. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и соединения ЛХТК 648 (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

Сравнительный анализ исследуемых данных показал, что исходные показатели в различных сериях достоверно не отличались.

На фоне введения препаратов различия наблюдались по целому ряду параметров. Так, ВР и активность АТIII оказались выше в 4-ой (АСК и ЛХТК 646) и 5-ей сериях (АСК и ЛХТК 648) (р<0,05). По сравнению со всеми остальными сериями, в 3-ей серии (АСК и этоксидол) концентрация фибриногена оказалась самой низкой (р<0,05), а показатель ТВ - самым большим (р<0,05). Во 2-ой серии (АСК и мексидол) рост фибриногена тоже ограничивался, хотя и не так выражено, как в 3-ей. Повышение содержания тромбоцитов после введения АСК и мексидола, равно как и АСК и этоксидола было значительно меньше, чем после введения комбинации АСК и соединений (р<0,05). АЧТВ повысилось более значимо в сериях с применением производных таури-

на, особенно во 4-ой серии (АСК и JIXTK 646) (р<0,05) по сравнению с введением АСК в виде монотерапии и сочетанием АСК и этоксидола. Хотя повышение ПТИ в 3-ей серии (АСК и этоксидол) было довольно значимым, в абсолютном выражении цифры оказались сравнимы с другими сериями.

Через 14 суток после отмены изученных комбинаций в 1-ой серии (АСК) продолжалось увеличение ВР, в то время как в остальных сериях показатель возвращался к исходным значениям. Также повысилось ТВ, однако в абсолютном выражении максимум остался в 3-ей серии (АСК и этоксидол) - только в этой серии показатель стал больше исходного значения по сравнению с комбинациями АСК и производных таурина. В 1 -ой серии (АСК) ПТИ после отмены препарата стал возвращаться к исходному значению (снизился на 10%, р<0,05), тогда как во всех опытных сериях показатель продолжал нарастать. Величина АЧТВ возрастала после отмены препаратов только в 3-ой серии (АСК и этоксидол), в остальных опытных сериях только ограничивалась степень снижения показателя по сравнению с контрольными данными (отмена АСК) (р<0,05). В 4-ой (АСК и JIXTK 646) и 5-ой сериях (АСК и JIXTK 648) было отмечено выраженное снижение концентрации фибриногена (на 36% и 30% соответственно; р<0,05) и активности AT III (на 16% и 19% соответственно; р<0,05), тогда как в остальных сериях снижение концентрации фибриногена не было значимым, а активность AT III даже возрастала. Во всех сериях снизилась степень TT и содержание тромбоцитов в крови.

Таким образом, на фоне введения кроликам АСК и АСК в комбинации с антиоксидантами изменения параметров гемостаза были различными. В случае применения только АСК в течение 10 суток наблюдались как прокоагуляцион-ные (увеличение концентрации фибриногена, ПТИ и количества тромбоцитов, снижение ТВ), так и гипокоагуляционные сдвиги (увеличение ВР, АЧТВ и активности AT III). Сочетание АСК с производными таурина (JIXTK 646 и JIXTK 648) дало такой же по направлению, но гораздо более выраженный эффект. Применение комбинаций АСК с мексидолом и АСК с этоксидолом позволило достичь исключительно гипокоагуляционного эффекта, и даже степень повышения содержания тромбоцитов оказалась в этой серии наименьшей.

После отмены препаратов динамика также была разнородной. К 14-м суткам после отмены АСК показатели начали возвращаться к исходным значениям, однако сместились в сторону увеличения коагуляционного потенциала: АЧТВ стало ниже исходного, а концентрация фибриногена - выше. После отмены комбинаций АСК с производными таурина достигнутый за 10 суток применения комбинаций эффект почти полностью нивелировался. Добавление к АСК мексидола или этоксидола, напротив, пролонгировало достигнутую путём применения комбинации препаратов тенденцию.

Биохимические показатели перед началом серий также были примерно одинаковы. Через 14 суток после прекращения введения комбинации АСК и этоксидола изученные показатели липидного обмена не отличались от исходных данных. Наиболее значимые отличия наблюдались в сериях с производными таурина. Если в 1-ой серии ИА вырос в среднем на 21%, то в 4-ой и 5-ой он снизился на 31% и 23% соответственно (р<0,05). Это произошло как за счёт разнонаправленной динамики показателей ОХС, так и ХС ЛПВП. При этом в 4-ой серии (АСК и ЛХТК 646) более значимым оказалось снижение концентрации ОХС (с 1,38±0,09 до 0,98±0,08 ммоль/л; р<0,05), то в 5-ой (АСК и ЛХТК 648)-повышение содержания ХС ЛПВП (с 0,74±0,02 до 0,83±0,05 ммоль/л; р<0,05).

ВЫВОДЫ

1. После отмены ацетилсалициловой кислоты (АСК, 4 мг/кг) наблюдаются выраженные изменения гемокоагуляционного потенциала: сначала в сторону гипокоагуляции (к 7-10-м суткам), затем - гиперкоагуляции (17-24-м сутки) и менее выраженное смещение в сторону гипокоагуляции после 24-х суток с постепенной стабилизацией большинства исследуемых параметров венозной крови кроликов.

2. Комбинированное применение АСК (4 мг/кг) и этоксидола (5,3 мг/кг) оказывает более выраженный гипокоагуляционный эффект, по сравнению с введением АСК в виде монотерапии, увеличивая тромбиновое время, снижая содержание фибриногена; и в отличие от комбинации АСК с мексидолом в изученных дозах, обеспечивает рост активности антитромбина III и предупреждает увеличение количества тромбоцитов в венозной крови кроликов.

3. Через 14 суток после отмены комбинации АСК (4 мг/кг) и этоксидола (5,3 мг/кг), в отличие от показателей соответствующего срока наблюдения после прекращения введения АСК, предотвращаются проатерогенные сдвиги липидного спектра сыворотки крови и сохраняется гипокоагуляционный эффект, более выраженный, чем после отмены комбинации АСК с мексидолом в изученных дозах.

4. Комбинированное применение АСК и соединений ЛХТК 646 (7,2 мг/кг) или ЛХТК 648 (5,9 мг/кг), по сравнению с введением АСК в виде монотерапии, оказывает более выраженное гипокоагуляционное действие, удлиняя время ре-кальцификации плазмы и АЧТВ, повышая активность антитромбина III, а также предотвращая рост содержания фибриногена.

5. Гипокоагуляционное действие комбинаций АСК и соединений ЛХТК 646 или ЛХТК 648 при курсовом введении более выражено, чем комбинаций АСК с мексидолом или этоксидолом в изученных дозах: в большей степени увеличивается время рекальцификации, АЧТВ, активность антитромбина III, но

при этом не предупреждается рост количества тромбоцитов в венозной крови кроликов.

6. Через 14 суток после прекращения введения комбинации АСК и соединений ЛХТК 646 и особенно ЛХТ 648, в отличие от данных после отмены АСК соответствующего срока наблюдения, нормализуется большинство изученных показателей гемостаза, а также снижается индекс атерогенности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Целесообразно дальнейшее экспериментальное исследование комбинированного применения ацетилсалициловой кислоты и соединений или лекарственных препаратов антиоксидантного типа действия для повышения эффективности и коррекции побочных эффектов дезагрегантной терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Юртаева И.В., Кочетков С.Ю. Влияние комбинированного применения мек-сидола и ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели гемостаза в эксперименте // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте: материалы XIII науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов мед. фак. Мордов. гос. ун-та. - Выпуск 8. - Саранск: Референт, 2008. - С. 20-23.

2. Юртаева И.В., Кочетков С.Ю., Зайчикова Н.П. Некоторые показатели гемостаза при курсовом введении ацетилсалициловой кислоты в эксперименте // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте: материалы XXXVII науч. конф. «Огаревские чтения» мед. инст-та Мордов. гос. ун-та. - Выпуск 9. - Саранск: Референт, 2008. - С. 2224.

3. Усанова A.A., Кочетков С.Ю., Зорькина A.B. Непосредственное и отсроченное влияние курсового применения ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели коагуляционного гемостаза // Материалы Х-го Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке». - М.: 2009. - С. 895898.

4. Кочетков С.Ю. Оценка влияния на гемостаз гидроксиникотиновой соли тау-рина и ацетилсалициловой кислоты // Материалы IV Национапьн. конгресса терапевтов. - М.: 2009. - С. 128-129.

5. Кочетков С.Ю., Малкина Н.В., Зауралова Н.М. К вопросу о безопасности применения ацетилсалициловой кислоты // Медицинский вестник Башкортостана. - 2010. - № 2. - С. 71-72.

6. Зорькина A.B., Кочетков С.Ю., Малкина Н.В., Зауралова Н.М. Некоторые аспекты фармакологического действия ацетилсалициловой кислоты в эксперименте // Врач-аспирант. - 2010. - № 4. - С. 42-48.

7. Усанова A.A. Некоторые особенности метаболического влияния ацетилсалициловой кислоты на фоне дислипидемии / Усанова A.A., Зорькина A.B., Зауралова Н.М., Малкина Н.В., Кочетков С.Ю. // Материалы XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М.: 2011. - Москва, 2011. - С. 489^90.

8. Усанова A.A. Особенности влияния курсового введения и отмены ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели гемостаза в условиях дислипидемии / Усанова A.A., Зорькина A.B., Малкина Н.В., Зауралова Н.М., Кочетков С.Ю. // Материалы XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М.: 2011. - С. 490.

9. Кочетков С.Ю. Влияние ацетилсалициловой кислоты и некоторых антиокси-дантов на коагуляционный гемостаз в эксперименте / С.Ю. Кочетков // Материалы II Международной научно-практической конференции «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности. Развитие инновационного и кадрового потенциала Пензенской области»: электронное научн. издание. - ФГУП НТЦ «Информре-гистр», Депозитарий электронных изданий, 2012,- С. 72-76. — доступно с http://medic.pnzgu.ru/conf/docs/sbornic_conf2012.pdf (проверено 26.02.2013).

ДЛЯ ЗАМЕТОК

Подписано в печать 26.02.2013 г. отпечатано в ООО «Центр полиграфических услуг «Радуга» 115280, Москва, ул. Автозаводская, 25. Усл. п.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 273-2а