Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование влияния комбинированного применения ацетилсалициловой кислоты и производных 3-гидроксипиридина и таурина на некоторые показатели гемостаза в эксперименте

На правах рукописи

КОЧЕТКОВ СЕРГЕЙ ЮРЬЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ И ПРОИЗВОДНЫХ 3-ГИДРОКСИПИРИДИНА И ТАУРИНА НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ГЕМОСТАЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 — фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 О "^Ч 2015

005569961

Саранск-2015

005569961

Работа выполнена в центральной научно-исследовательской лаборатории Медицинского института Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва»

Научный руководитель: Зорькина Ангелина Владимировна, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой поликлинической терапии и функциональной диагностики Медицинского института ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» Министерства образования и науки Российской Федерации, г. Саранск

Официальные оппоненты: Новиков Василий Егорович, доктор медицинских

наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии ГБОУ ВПО «Смоленский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Смоленск

Рузов Виктор Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой факультетской терапии ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации, г. Ульяновск

Ведущая организация: ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», Министерства образования и науки Российской Федерации, г. Белгород

Защита состоится «29» июня 2015 года в «12» часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.08 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430032, г. Саранск, ул. Ульянова, 26а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» www.mrsu.ru и сайте ВАК Минобрнауки России http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан « »_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Распространённость различных форм ише-мической болезни сердца (ИБС) в России очень велика. Важную роль в лечении ИБС и профилактике повторных инфарктов миокарда играет приём антитромбо-тических средств. Ацетилсалициловая кислота (АСК) - наиболее широко применяемый с этой целью препарат (Карпов Ю.А., 2008; Верткин А.Л. с соавт., 2012; Шальнова С.А., Деев А.Д., 2011).

Основной (антитромбоцитарный) эффект АСК обусловлен подавлением агрегации тромбоцитов за счёт необратимого ингибирования циклооксигеназы-1 - ЦОГ[ (Панченко Е.П., 2005). Однако было показано, что АСК недостаточно подавляет агрегацию тромбоцитов (определяемую лабораторно) в ряде случаев (Горячева Е.В. с соавт., 2008, Воробьева Н.М., 2013; Michelson A.D. et al., 2005; Hankey G.J., Eikelboom J.W., 2006). Имеется высокая распространённость «аспи-ринорезистентности», что противоречит положительным клиническим результатам применения препарата (Бокарев И.Н., Попова JI.B., 2012; Герасимов A.A., Вилковыский Ф.А., 2013; Гринштейн Ю.И. с соавт., 2013; Лагута П.С. с соавт., 2014; Mason P.J. et al., 2005; Dorsch M.P. et al., 2007; Biondi-Zoccai G., Lotrionte M., 2008). Указанное несоответствие побудило более широко рассматривать спектр действия АСК, поэтому в последнее время всё большее значение придают антикоагулянтным эффектам препарата: АСК ингибирует образование фибрина через подавление тромбинообразования и функционального состояния фибриногена, влияет на активацию фибринолиза через высвобождение активаторов плазминогена и «разрыхление» волокон фибрина (Остроумова О.Д., 2003; Михайлова И.Е., Перепеч Н.Б., 2007; Кропачева Е.С., 2008; Данковцева E.H., 2013).

С использованием АСК связан повышенный риск желудочно-кишечных кровотечений, а также тромбозов при отмене препарата (Чудакова Е.А. с соавт., 2007; Явелов И.С., 2007; Collet J.P., et al., 2004). У прекративших приём АСК был отмечен и существенно больший риск кровотечений, в том числе и по сравнению с регулярно принимавшими АСК в последние 3 недели (Collet J.P. et al., 2004). И если наклонность к тромбозам можно объяснить постдепрессорной гиперактивностью тромбоцитов, подтверждаемой лабораторно (Beving Н. et al., 1996), то повышение риска кровотечений не укладывается ни в одну концепцию влияния АСК на тромбоциты.

Анализ одновременного существования двух разнонаправленных сдвигов (с сторону тромботических и геморрагических осложнений) побудил нас обратить внимание на влияние препарата на факторы коагуляционного гемостаза. Учитывая имеющиеся данные о гастропротекторном действии лекарственных препаратов и соединений антиоксидантного действия в условиях введения нестероидных противовоспалительных средств (Зорькина A.B., Ямашкина Е.И., 2002; Гришкина О.П., 2006; Зорькин М.В., Аткарская O.A., 2014), а также опыты по их применению для коррекции гемостаза (Джаналина П.Х. с соавт., 1996;

Спасов A.A. с соавт., 1997; Воронина Т.А. с соавт., 2002; Зорькина A.B., Нанкина Э.И., 2002; Зорькина A.B. с соавт., 2008) целесообразным представляется исследование новых антиоксидантов в сочетании с АСК.

Цель работы: исследование влияния курсового введения и отмены ацетилсалициловой кислоты и её комбинаций с 3-гидроксипиридина мапатом и производными таурина - соединениями ЛХТК 646, JIXTK 648 на некоторые показатели гемостаза.

В ходе выполнения работы решались следующие задачи:

1. Исследование влияния введения ацетилсалициловой кислоты в дозе 4 мг/кг, а также её отмены на гемостаз и некоторые биохимические показатели в эксперименте.

2. Исследование влияния комбинации ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) и 3-гидроксипиридина сукцината (5 мг/кг) при курсовом введении и после отмены на ряд показателей гемостаза, липидного, углеводного и белкового обмена в эксперименте.

3. Оценка влияния курсового введения и отмены комбинации ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) и 3-гидроксипиридина мапата (5,3 мг/кг) на некоторые биохимические показатели и гемостаз в эксперименте.

4. Исследование влияния курсового введения и отмены комбинации ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) и производных таурина ЛХТК 646 (7,2 мг/кг) и ЛХТК 648 (5,9 мг/кг) на некоторые показатели гемостаза, липидноо и углеводного обмена в эксперименте.

Научная новизна работы. На основании комплексного исследования ряда показателей тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза, биохимических параметров, исследовано долговременное влияние ацетилсалициловой кислоты после ее отмены на гомеостаз в эксперименте. Показано, что к 7-10-м суткам отмены ацетилсалициловой кислоты наблюдается нарастающее снижение коагуляционного потенциала, показаны гиперкоагуляционные изменения на 14-24 сутки после отмены препарата и вновь гипокоагуляционная направленность динамики показателей гемостаза на 24-57 сутки после отмены с постепенной стабилизацией исследуемых параметров и приближением большинства маркеров гемостаза к исходным показателям.

Отмечено, что комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты и 3-гидроксипиридина малата потенцирует гипокоагуляционное действие ацетилсалициловой кислоты при её курсовом введении и пролонгирует ее гипокоа-гуляционный эффект после отмены в большей степени, чем при использовании комбинации ацетилсалициловой кислоты и 3-гидроксипиридина сукцината.

Показано, что комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты и производных таурина с лабораторным шифром ЛХТК 646 и ЛХТК 648 потенцирует гипокоагуляционное действие ацетилсалициловой кислоты при её применении и укорачивает период последействия после отмены.

Научно-практическая ценность работы. Полученные результаты углубляют представление о фармакодинамике ацетилсалициловой кислоты, а также указывают перспективы для повышения эффективности и безопасности терапии ацетилсалициловой кислотой путём моделирования выявленного эффекта комбинацией ацетилсалициловой кислоты с 3-гидроксипиридина манатом или производными таурина ЛХТК 646 и ЛХТК 648. Результаты работы являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейших клинических исследований комбинированного применения ацетилсалициловой кислоты и 3-гидроксипиридина малата с целью повышения эффективности дез-агрегантной терапии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При введении АСК (4 мг/кг) в течение 10 суток наблюдались как про-коагуляционные, так и гипокоагуляционные сдвиги гемостаза. После отмены ацетилсалициловой кислоты до 57 суток наблюдаются фазные изменения гемо-коагуляционного потенциала крови.

2. Комбинированное введение 3-гидроксипиридина малата и ацетилсалициловой кислоты позволяет значительно усилить и пролонгировать гипокоагу-ляционный эффект последней в большей степени, чем при комбинации с 3-гидроксипиридина сукцинатом в изученных дозах, за счёт чего достигнутое действие сохраняется в течение 14 суток после отмены ацетилсалициловой кислоты.

3. Комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты и производных таурина (ЛХТК 646 и ЛХТК 648), в отличие от комбинации АСК с 3-оксипиридина сукцинатом в изученных дозах, усиливает гипокоагуляционный эффект препарата, а после его отмены позволяет сократить период последействия, предотвратить гиперкоагуляционные сдвиги, а также снизить атероген-ный потенциал сыворотки крови.

Внедрение в практику. Полученные результаты используются в научно-исследовательской и учебной работе кафедры фармакологии и клинической фармакологии и кафедры поликлинической терапии и функциональной диагностики ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П.Огарева».

Личный вклад автора. Автор лично выполнял все этапы исследования: проводил аналитический обзора отечественной и зарубежной научной литературы, разрабатывал дизайн исследования, осуществлял постановку экспериментов, выполнял лабораторные исследования, статистическую обработку полученных результатов, проводил их анализ, подготавливал публикации.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2008), на XXXVII научной конференции «Огаревские чтения» Мордовского государственного университета (Саранск, 2008), на Х-м Международном конгрессе

«Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2009), IV Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2009), на XVIII Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011), II Международной научно-практич. конференции «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности»(Пенза, 2012).

Публикации. По теме диссертационного исследования имеется 10 публикаций, в том числе 3 в журналах, рекомендованном ВАК, в материалах международного и национального конгрессов.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 145 страницах текста компьютерного набора, включает в себя обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы результатов собственных исследований, заключения, выводы, практические рекомендации и список использованной литературы, представленный 330 источником, в том числе 127 зарубежными и 203 отечественными. Работа иллюстрирована 28 таблицами, 21 рисунком.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для исследования были выбраны следующие препараты: 3-гидроксипиридина малат - (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиний гид-роксибутандиоат), ингибитор свободнорадикальных процессов, оказывает мем-бранопротекторное, антигипоксическое, ноотропное, противосудорожное, анксиолитическое действие, повышает устойчивость организма к стрессу, обладает антиишемическими свойствами, ограничивает зону ишемического повреждения, обнаруживает гиполипидемическое действие, повышает резистентность организма к кислородзависимым патологическим состояниям. Оказывает противоаритмическое действие, корригирует эндотелиальную дисфункцию (Сернов Л.Н. и соавт., 2008; Блинов Д.С. и соавт., 2009; Покровский М.В. и со-авт., 2010). Препарат синтезирован специалистами Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ под руководством лауреата Государственной премии РФ, доктора химических наук, профессора С.Я. Скачиловой (ВНЦ БАВ, Старая Купавна, Россия, директор Н.М.Митрохин), запатентован под названием «этоксидол».

но-сн—соо

I

CR, —С00Н

Рис. 1. Структура 3-гидроксипиридина малата.

В работе исследовались новые производные таурина (2-аминоэтансульфоновой кислоты с химической формулой C2H7NO3S), также синтезированные специалистами ВНЦ БАВ, с лабораторными шифрами

ЛХТК646 (молекулярная масса- 365,2 г/моль) и ЛХТК648 (молекулярная масса-302,2 г/моль).

Н

I

1Ч-СН2-СН2-803 I I

н к

Рис. 2. Общая структура производных таурина.

В качестве препарата сравнения в оценке фармакологических эффектов комбинированного применения АСК с антиоксидантами использовался 3-гидроксипиридина сукцинат (3-окси-6-метил-2-этил-пиридина сукцинат), фармакологические эффекты которого обусловлены антиоксидантным и мем-бранопротекторным действием (Воронина Т.А., 2005; Новиков В.Е. с соавт., 2010). В работе использовался препарат мексидол производства ООО «НПК «ФАРМАСОФТ» (г. Москва), по 2 мл - 5% раствор (100 мг).

В исследовании использовали ацетилсалициловую кислоту - препарат «Упсарин УПСА» производства Бристол-Майерс Сквибб, Франция.

Исследование было проведено на 72 половозрелых кроликах обоего пола породы «шиншилла» массой 2,6-3,8 кг. Экспериментальные исследования проведены в соответствии с этическими требованиями по работе с экспериментальными животными (Федеральный закон о защите животных от жестокого обращения от 01.01.1997 и Приказ Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении Правил лабораторной практики»), одобрены локальным этическим комитетом.

Животные содержались в условиях вивария с соблюдением светового и температурного режима, в клетках размером 50x50x60 см, на стандартном рационе (зерно, сено, корнеплоды) со свободным доступом к пище и воде.

В первой серии эксперимента (контроль, п=22) всем животным вводили только АСК в дозе 4 мг/кг ежедневно внутрижелудочно зондовым способом в течение 10 суток. Венозную кровь забирали у 12 кроликов для исследования параметров коагуляционного гемостаза и подсчёта тромбоцитов - до начала эксперимента, на 1-е, 7-е, 10-е, 14-е, 17-е, 20-е, 24-е, 27-е, 43-е и 57-е сутки после окончания введения АСК. У 10 кроликов брали кровь для исследования биохимических показателей - до начала эксперимента, на 1-е, 14-е и 20-е сутки после окончания введения АСК.

Во 2-Й-5-Й сериях животным вводили АСК в дозе 4 мг/кг внутрижелудочно ежедневно в течение 10 суток. Кроме того, во 2-й серии эксперимента (группа сравнения, п=12) животным вводили мексидол (5 мг/кг в/м) ежедневно в течение 10 суток1. В 3-й опытной серии (п=14) животным ежедневно вводили этоксидол (5,3 мг/кг в/м). В 4-й серии (п=12) вводили соединение ЛХТК 646 в дозе 7,2 мг/кг в/м. В 5-й серии эксперимента всем животным (п=12) вводили

' Данная серия была выполнена совместно с Юртаевой И.В.

соединение JIXTK 648 в дозе 5,9 мг/кг в/м. Все препараты и соединения вводились ежедневно в течение 10 суток в дозах, изомолярных указанной для мекси-дола.

Во 2, 3, 4 и 5-й сериях венозную кровь забирали для исследования параметров коагуляционного гемостаза и подсчёта тромбоцитов - до начала эксперимента, на 1-е и 14-е сутки после окончания введения комбинаций; для исследования биохимических показателей - до начала эксперимента и на 14-е сутки после окончания введения комбинаций.

Все исследуемые показатели определяли в венозной крови. Кровь забирали из краевой вены уха кроликов с помощью венесекции: для определения параметров гемостаза- в пробирку с 3,8%-ым (112ммоль/л) раствором цитрата натрия (соотношение крови к раствору цитрата натрия 9:1); для определения биохимических показателей - в чистую пробирку; для подсчёта тромбоцитов -в системы «MICROVETTE® 200» (Sarstedt, Германия).

Для комплексной оценки коагуляционного гемостаза исследовали ряд показателей венозной крови: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), время рекальцификации плазмы (BP), тромбиновое время (ТВ), активность антитромбина III (AT III), протромбиновый индекс (ПТИ), концентрацию фибриногена, а также степень тромботеста (TT) и этанолового теста; кроме того, подсчитывали количество тромбоцитов в венозной крови для косвенной оценки реакции тромбоцитарного звена гемостаза.

Биохимические показатели определяли на автоматическом биохимическом анализаторе «BioChem Analette» (HTI, США) с использованием реагентов ЗАО «Вектор-Бест» (Россия): концентрацию общего белка, мочевины, креатинина, общего билирубина, глюкозы, общего холестерина (ОХС), холестерина липо-протеинов высокой плотности (ХС ЛПВП), общих липидов, триглицеридов, активность аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Индекс атерогенности (ИА) вычисляли по формуле H.A. Климова (1977 г.): ИА = (ОХС - ХС ЛПВП) / ХС ЛПВП.

Статистическая обработка результатов проводилась на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Office Excel 2003 и SPSS Statiscics 17.0. Данные выражены в виде средних арифметических (М) и ошибок средних (±ш). Достоверность различий (р) между сравниваемыми вариационными рядами оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента. Для сравнения различий между исследуемыми группами использовали дисперсионный анализ (ANOVA). Различия признавались статистически достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На фоне введения АСК в течение 10 суток в дозе 4 мг/кг наблюдалось изменение показателей гемостаза, характеризующих 1-ю фазу свертывания крови. Величина АЧТВ не менялась по сравнению с исходными данными (р>0,05)

(рис. 3). Наблюдалось увеличение ПТИ на 19% (р<0,01). Изменение изученных показателей, характеризующих 2-ю фазу свертывания крови, заключалось в некотором сокращении ТВ на 9% (р<0,05) и увеличении содержания фибриногена на 26% (р<0,01). ВР возрастало на 17% по сравнению с исходным (р<0,01). Отмеченные изменения сопровождались ростом активности AT III с 73±1 до 79±1% (р<0,05) на фоне резкого увеличения содержания тромбоцитов на 34% (р<0,01) (рис. 4, рис. 5). Кроме того, на фоне введения кроликам АСК в течение 10 суток наблюдался рост ИА на 16% (р<0,05) за счёт повышения концентрации ОХС на 14% (р<0,05) и снижения ХС ЛПВП на 10% (р<0,05). Регистрировался рост активности ACT на 68% (р<0,01).

После отмены АСК сохранялись выраженные изменения коагуляционного потенциала. Так, к 7-м суткам после отмены препарата нарастали гипокоагуля-ционные изменения крови: по сравнению с данными после окончания курса введения АСК показатель АЧТВ снижался на 9% (р<0,05), ПТИ оставался на 15% выше исходных данных. ВР составило 120% от исходного уровня (р<0,05) (рис. 3).

Активированное частичное тромбопластиновое время

исход I

10 14 17 20 24 27 43 57Сутки

Рис. 3. Изменение некоторых показателей гемостаза после прекращения введения АСК (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

Показатели гемостаза, характеризующие 2-ю фазу свёртывания: ТВ и степень ТТ сохранялись на уровне предыдущего срока исследования, содержание

фибриногена снижалось на 10% (р<0,05), но оставалось выше исходного уровня. При этом активность AT III превышала исходные данные на 11% (рис. 4). Содержание тромбоцитов также по-прежнему сохранялось на высоком уровнена 32% выше исходного (рис. 5).

Через 10 суток после отмены АСК нарастание гипокоагуляционного потенциала стало более выраженным: ПТИ снизился по сравнению с предыдущим сроком наблюдения и с исходными данными на 31% (р<0,05). ТВ резко возросло как по сравнению с предыдущим сроком наблюдения (на 55%, р<0,05), так и с исходным уровнем (на 43%, р<0,05). Степень тромботеста, содержание фибриногена, активность AT III и содержание тромбоцитов достоверно не менялись по сравнению с данными предыдущего срока наблюдения.

160

80

Тромбиновое время

140 -120

100 91 93

100 4- I

исход 1

100 I

100 I

100 I

ю 14 17 20 24 27 43 57Сутки

140 -120 -100 80 60

-4-

исход 1

130 120 110 100

90 J-

Фибриноген

114* 109 116*

109*

100 J02

76* 84* 90

Антитромбин III

ю 14 17 20 24 27 43 57 Сутки

111* 111* 110* 110* _Г_ т т I 112" и

1 I 1 § X

111*

s 7 10 14 17 20 24 27 43 57СУТКИ

Рис. 4. Динамика некоторых показателей гемостаза венозной крови кроликов на фоне отмены АСК (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

94

27

96

43

57Сутки

Рис. 5. Динамика содержания тромбоцитов (в процентах к исходным данным, принятым за 100%) на фоне отмены АСК; * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями.

Механизм действия АСК связан с необратимым ингибированием циклоок-сигеназы тромбоцитов (Панченко Е.П., 2005), срок жизни которых составляет 10-12 суток. Поэтому особенно интересно было исследование показателей через 14 суток после отмены препарата. Оказалось, что, несмотря на сроки, соответствующие появлению в периферической крови новой популяции тромбоцитов, не наблюдалось снижения их количества, но при этом регистрировалась динамика показателей, свидетельствующая о некоторых гиперкоагуляционных сдвигах (рост ПТИ на 54%, уменьшение ТВ на 30%).

Через 17 суток после отмены АСК ВР, степень ТТ (4,6±0,3), активность АТ Ш и содержание тромбоцитов сохранялись на прежнем уровне, не восстанавливаясь до исходных показателей. При этом АЧТВ впервые стало достоверно ниже исходного уровня на 12% (р<0,05), а ПТИ - выше на 13% (р<0,05), ТВ сокращалось на 10% (р<0,05), содержание фибриногена снижалось на 14%, достигая исходного уровня. Таким образом, по сравнению с предыдущим сроком наблюдения регистрировалась в большей степени гиперкоагуляционная направленность сдвигов показателей гемостаза, в качестве компенсаторной реакции снижалось содержание фибриногена.

Через 20 суток после отмены АСК, по сравнению с предыдущим сроком наблюдения, продолжали нарастать гиперкоагуляционные сдвиги, что соответствуют данным Юртаевой И.В. (2009). Сохранялись на прежнем уровне АЧТВ, ПТИ, ТВ, содержание фибриногена, степень ТТ, активность АТ Ш. Однако при этом сокращалось ВР на 10% (р<0,05) от показателя предыдущего срока исследования, отмечался дальнейший прогрессивный рост содержания тромбоцитов. Через 24 суток после отмены АСК ВР несколько увеличивалось, ПТИ начинало снижаться, ТВ - сокращалось до исходного уровня. Содержание тромбоцитов также начинает постепенно снижаться, но пока еще оставалось выше исходного на 20%.

Через 27 суток после отмены АСК происходило восстановление до исходного уровня ряда показателей (содержания тромбоцитов, степень ТТ, ПТИ, ТВ, АЧТВ). Но при этом сохранялась на прежнем повышенном уровне активность

АТ Щ, ВР оставалось больше исходного, а содержание фибриногена снижалось на 24%. То есть, в этот период в целом динамика показателей характеризовалась гипокоагуляционной направленностью.

Через 43 суток после отмены АСК все еще не наблюдалось полной нормализации показателей: ВР еще не достигало исходных данных, фибриноген все еше сохранялся на несколько сниженном уровне, активность АТ Ш была выше исходных данных. Через 57 суток после отмены АСК подавляющее большинство изученных показателей возвращалось к исходному уровню.

Таким образом, до 57 суток после отмены АСК наблюдались колебания показателей гемостаза, характеризующих сначала гипокоагуляционную направленность (к 7-10-м суткам: увеличение тромбинового ВР, активности АТ Ш, уменьшение ПТИ и концентрации фибриногена), затем - гиперкоагуля-ционную (14-24 сутки: к 14-м суткам возросла концентрация фибриногена; АЧТВ достигло минимума на 17-е сутки; возрос ПТИ с максимумом на 20-е сутки; ТВ снизилось и оставалось в диапазоне наименьших значений на 17-20-е сутки; нарастала степень ТТ с пиком на 24-е сутки). Кроме того, содержание тромбоцитов увеличилось к 20-м суткам, что в сочетании с предполагаемым восстановлением их активности также свидетельствует о росте тромбогенного потенциала крови. После 24 суток (27-53 сутки) динамика показателей характеризует вновь гипокоагуляционные тенденции, происходит постепенная стабилизация исследуемых параметров: их колебания становятся сглаженными, а сами значения в большинстве случаев приближаются к исходным.

Кроме колебаний показателей гемостаза на фоне отмены АСК сохранялись изменения липидного обмена, регистрировавшиеся на фоне курсового введения препарата. Так, к 14 суток после отмены АСК содержание ОХС превышало исходный уровень на 27% (р<0,01). Концентрация ХС ЛПВП также сохранялась на прежнем уровне и была на 10% ниже исходных данных, ИА превышал исходные показатели на 19% (р<0,05), ХС ЛПНП - на 24%. Некоторая тенденция к нормализации показателей наблюдалась только к 20-м суткам после отмены АСК. Уровень ОХС несколько снизился, но всё ещё был на 12% выше исходного (р<0,05) и достоверно не отличался от данных на фоне введения АСК (р>0,05). Концентрация ХСЛПВП достигла исходного уровня (р>0,05). В итоге ИА тоже понизился до 0,64±0,02, хотя и остался выше исходного на 10% (р<0,01). Уровень ХС ЛПНП превышал исходные данные на 55%.

В контрольной группе на 20-е сутки после прекращения введения АСК активность АСТ снизилась на 22%, по сравнению со значением предыдущего срока наблюдения (р<0,01), но оставалась выше исходной величины (р<0,05).

В серии сравнения на фоне комбинированного введения АСК и 3-гидроксипиридина сукцината (3-ГПС) (в дозах 4 мг/кг и 5 мг/кг соответственно) не наблюдалось достоверной разницы в динамике показателей АЧТВ, ПТИ, ВР, ТТ, АТ Ш. Увеличилось ТВ, ограничивался рост фибриногена и количества тромбоцитов (рис. 6).

AT III Tp

■ Через 14 суток после отмены АСК 3 Введение комбинации АСК+З-ГПС (мексидол) □ Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 6. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК 4 мг/кг и 3-гид рокснпп р иди на сукцината в дозе 5 мг/кг (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; по сравнению с данными в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр -количество тромбоцитов. 160 -

| I40 й а

>, I20

135'* 137*' -----т_

125'" 1 111 «fes ,19- I ш в I i,, 114-

103 В □в ш Ш i П г* ш Гт~-ГОГ---1 Ш !

' ВЯ 92 Q1*

АЧТВ

AT III Tp

О Введение АСК 4 мг/кг ■ Через 14 суток после отмены АСК

И Введение комбинации АСК+З-ГПМ (зтоксидол) ® Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 7. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и 3-гидроксипиридина малата (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями;

- по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф -концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

Через 14 суток после отмены комбинации, в отличие от данных группы контроля, ПТИ и ВР сохранялись на прежнем уровне, наблюдалось снижение до исходного уровня содержания фибриногена и количества тромбоцитов. Применение комбинации АСК и 3-ГПС в дозе 5 мг/кг позволило ограничить изменения показателей липидного обмена. Через 14 суток после отмены комбинации, в отличие от контрольной группы, уровень изученных показателей липидного обмена достоверно не отличался от исходных данных.

Комбинированное применение АСК и 3-гидроксигшридина малата (3-ГТ1М) в изученных дозах в течение 10 суток привело к достоверному увеличению ВР на 19% по сравнению с исходным, ПТИ - на 35%; возросла и активность AT 1П - на 15% (рис. 7).

Через 14 суток после отмены комбинации препаратов почти по всем показателям сохранялась предыдущая динамика: продолжался рост АЧТВ, активности AT III и ПТИ, показатели превысили данные исходного уровня на 25%, 22% и 37% соответственно. При этом концентрация фибриногена была на 24% ниже исходных цифр (р<0,05). ВР также несколько снизилось, но все еще превышало исходные данные на 14%. Показатели липидного обмена так же, как и в серии сравнения, в отличие от контрольной группы, не носили достоверного отличия от исходных данных.

Комбинированное применение АСК и соединения ЛХТК 646 в изученных дозах в течение 10 суток привело к усилению гипокоагуляционных сдвигов крови: увеличению ВР на 32% по сравнению с исходным, АЧТВ - на 39%, ПТИ — на 18%. Активность AT III возросла на 34%. Количество тромбоцитов на фоне введения комбинации увеличилось с 349±41109/л до 461±32 1 09/л (р<0,05) (рис. 8).

Через 14 суток после отмены комбинации АСК и ЛХТК 646 снизилось ВР и активность AT III до исходного уровня. Напротив, ПТИ продолжил нарастать и достиг 202±9% (на 24% больше исходного значения). ТВ сократилось и достигло 8,0±0,2 с, что на 14% меньше исходных цифр. Концентрация фибриногена (2197±60 мг/л) была меньше на 36% показателя предыдущего срока наблюдения и на 28%- исходных цифр. Количество тромбоцитов составило 398±62-109/л и не отличалось от исходных данных. После отмены комбинации АСК и ЛХТК 646 в изученных дозах к 14 суткам наблюдалось значимое снижение И А (на 40%; р<0,01) за счёт снижения концентрации ОХС (на 29%; р<0,05), в то время как ХС ЛПВП не изменился (0,62±0,03 и 0,66±0,05; р>0,05). Снизилась концентрация мочевины (на 32%), возрасла концентрация креатинина (на 19%). Как и в случае введения одной только АСК, увеличилась активность ACT на 42% (с 0,38±0,01 до 0,55±0,04 ммоль/ч л; р<0,05). Активность АЛТ, как и в контрольной группе, достоверно не менялась (р>0,05).

Комбинированное применение АСК и ЛХТК 648 в изученных дозах в течение 10 суток привело к увеличению ВР на 29% (р<0,05) по сравнению с исходным, АЧТВ - на 27% (р<0,05), ПТИ - на 25% (р<0,05). Значительно возрос-

ла и активность АТIII - на 36% (р<0,05). В то же время наблюдалась противоположная динамика по ТВ: показатель сократился на 14% (с 9,6±0,3 до 8,3±0,2 с, р<0,05). Количество тромбоцитов на фоне комбинированного курсового введения АСК и ЛХТК 648 возросло почти в 1,5 раза: с 347±44 до 507±55Т09/л. (р<0,001) (рис. 9).

160

TT Ф AT 111 Tp

13 Введение АСК 4 мг/кг ■ Через 14 суток после отмены АСК

□ Введение комбинации АСК+ЛХТК 646 ОЧерез 14 суток после отмены комбинации

Рис. 8. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и соединения JIXTK 646 (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

Через 14 суток после отмены комбинации АСК и ЛХТК 648 значительно снизились ВР и активность AT III. Напротив, ПТИ продолжил увеличиваться и достиг 207±14% индекса (на 30% больше исходного значения, р<0,01). ТВ сократилось до 8,0±0,3 с, что на 17% меньше исходных данных (р<0,05). Концентрация фибриногена была на 19% меньше исходных цифр (2240±135 против исходных 2777±139 мг/л; р<0,05). Количество тромбоцитов не отличалось от исходных показателей, составив 363±58-107л.

Кроме того, через 14 суток после отмены комбинации АСК и ЛХТК 648 наблюдалось значимое снижение ИА (на 30%; р<0,05) за счёт снижения концентрации ОХС (на 20%; р>0,05) и увеличения концентрации ХС ЛПВП (на

13%; р>0,05). Значимо снизилось содержание мочевины (на 31%, р<0,05) одновременно с повышением концентрации креатинина (на 23%, р<0,05). Как и в серии сравнения с введением АСК в виде монотерапии увеличилась активность АСТ - на 69% (с 0,27±0,02 до 0,46±0,05 ммоль/ч-л; р<0,05). Активность АЛТ, как и в серии сравнения, повысилась менее значительно - на 29% (р<0,05).

Сравнительный анализ исследуемых данных показал, что исходные показатели в различных сериях достоверно не отличались. На фоне введения препаратов различия наблюдались по целому ряду параметров. Так, ВР и активность АТIII оказались выше в 4-ой (АСК и ЛХТК 646) и 5-ей сериях (АСК и ЛХТК 648) (р<0,05).

160 -

S о X

R

AT III Тр

0 Введение АСК 4 мг/кг В Через 14 суток после отмены АСК

И Введение комбинации АСК+ЛХТК 648 □ Через 14 суток после отмены комбинации

Рис. 9. Динамика некоторых показателей гемостаза на фоне введения и отмены комбинации АСК и соединения ЛХТК 648 (в процентах к исходным данным, принятым за 100%); * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с исходными показателями; " - достоверность различия р<0,05 по сравнению с изменением показателя в контрольной группе (только АСК 4 мг/кг). Ф - концентрация фибриногена, Тр - количество тромбоцитов.

По сравнению со всеми остальными сериями, в 3-ей серии (АСК и 3-гидроксипиридина мапат) концентрация фибриногена оказалась самой низкой

(р<0,05), а показатель ТВ - самым большим (р<0,05). Во 2-ой серии (АСК и 3-гидроксипиридина сукцииат) рост фибриногена тоже ограничивался, хотя и не так выражено, как в 3-ей. Повышение содержания тромбоцитов после введения АСК и 3-ГПС, как и после комбинации АСК и 3-ГПМ, было значительно меньше, чем после введения комбинации АСК и соединений (р<0,05). АЧТВ повысилось более значимо в сериях с применением производных таурина, особенно во 4-ой серии (АСК и JIXTK 646) (р<0,05) по сравнению с введением АСК в виде монотерапии и сочетанием АСК и 3-гидроксипиридина малата. Хотя повышение ПТИ в 3-ей серии (АСК и 3-ГПМ) было довольно значимым, в абсолютном выражении цифры оказались сравнимы с другими сериями.

Через 14 суток после отмены изученных комбинаций в 1-ой серии (АСК) продолжалось увеличение ВР, в то время как в остальных сериях показатель возвращался к исходным значениям. Также повысилось ТВ, однако в абсолютном выражении максимум остался в 3-ей серии (АСК и 3-ГПМ) - только в этой серии показатель стал больше исходного значения по сравнению с комбинациями АСК и производных таурина.

В 1-ой серии (АСК) ПТИ после отмены препарата стал возвращаться к исходному значению (снизился на 10%, р<0,05), тогда как во всех опытных сериях показатель продолжал нарастать.

Величина АЧТВ возрастала после отмены препаратов только в 3-ой серии (АСК и 3-ГПМ), в остальных опытных сериях только ограничивалась степень снижения показателя по сравнению с контрольными данными (отмена АСК) (Р<0,05).

В 4-ой (АСК и ЛХТК 646) и 5-ой сериях (АСК и ЛХТК 648) было отмечено выраженное снижение концентрации фибриногена (на 36% и 30% соответственно; р<0,05) и активности AT III (на 16% и 19% соответственно; р<0,05), тогда как в остальных сериях снижение концентрации фибриногена не было значимым, а активность AT III даже возрастала. Во всех сериях снизилась степень TT и содержание тромбоцитов в крови.

Таким образом, на фоне введения кроликам АСК и АСК в комбинации с антиоксидантами изменения параметров гемостаза были различными. В случае применения только АСК в течение 10 суток наблюдались как прокоагуляцион-ные (увеличение концентрации фибриногена, ПТИ и количества тромбоцитов, снижение ТВ), так и гипокоагуляционные сдвиги (увеличение ВР, АЧТВ и активности AT III). Сочетание АСК с производными таурина (ЛХТК 646 и ЛХТК 648) дало такой же по направлению, но гораздо более выраженный эффект. Применение комбинаций АСК с 3-гидроксипиридина сукцинатом и АСК с 3-гидроксипиридина малатом позволило достичь исключительно гипокоагу-ляционного эффекта, и даже степень повышения содержания тромбоцитов оказалась в этих сериях наименьшей.

После отмены препаратов динамика также была различной. К 14-м суткам после отмены АСК показатели сместились в сторону увеличения коагуляцион-

ного потенциала: АЧТВ стало ниже исходного, а концентрация фибриногена -выше. После отмены комбинаций АСК с производными таурина достигнутый за 10 суток применения комбинаций гипокоагуляционный эффект почти полностью нивелировался. Комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты с 3-гироксипиридина манатом, напротив, пролонгировало достигнутое гипо-коагуляционное действие.

Биохимические показатели перед началом серий также были примерно одинаковы. Через 14 суток после прекращения введения комбинации АСК и этоксидола изученные показатели липидного обмена не отличались от исходных данных. Наиболее значимые отличия наблюдались в сериях с производными таурина. Если в 1-ой серии ИА вырос в среднем на 21%, то в 4-ой и 5-ой он снизился на 31% и 23% соответственно (р<0,05). Это произошло как за счёт разнонаправленной динамики показателей ОХС, так и ХС ЛПВП. При этом в 4-ой серии (АСК и ЛХТК 646) более значимым оказалось снижение концентрации ОХС (с 1,38±0,09 до 0,98±0,08 ммоль/л; р<0,05), то в 5-ой (АСК и ЛХТК 648) -повышение содержания ХС ЛПВП (с 0,74±0,02 до 0,83±0,05 ммоль/л; р<0,05).

ВЫВОДЫ

1. При введении ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) в течение 10 суток наблюдается увеличение концентрации фибриногена, величины протромбиново-го индекса и количества тромбоцитов, снижение тромбинового времени (проко-агуляционные сдвиги), а также увеличение времени рекальцификации, активированного частичного тромбопластинового времени и активности антитромбина III (гипокоагуляционные сдвиги).

2. После отмены ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) наблюдаются выраженные изменения гемокоагуляционного потенциала: сначала в сторону гипо-коагуляции (к 7-10-м суткам), затем - гиперкоагуляции (к 17-24-м суткам) и менее выраженное смещение в сторону гипокоагуляции после 24-х суток с постепенной стабилизацией большинства исследуемых параметров к 43-57 суткам.

3. Комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) и 3-гидроксипиридина малата (5,3 мг/кг) позволяет усилить гипокоагуляционный эффект на фоне введения препаратов (увеличение времени рекальцификации, протромбинового индекса и активности антитромбина III) в большей степени, чем при комбинации ацетилсалициловой кислоты с 3-гидроксипиридина сукци-натом (5 мг/кг).

4. Комбинация ацетилсалициловой кислоты (4 мг/кг) и 3-гидроксипиридина малата (5,3 мг/кг) позволяет пролонгировать гипокоагуляционный эффект до 14 суток после отмены препаратов (увеличение АЧТВ, активности антитромбина III, протромбинового индекса, уменьшение концентрации фибриногена) в большей степени, чем при комбинации с 3-гидроксипиридина сукци-натом (5 мг/кг).

5. Комбинированное применение ацетилсалициловой кислоты и производных таурина с лабораторными шифрами J1XTK 646 (7,2 мг/кг) и JIXTK 648 (5,9 мг/кг) приводит к усилению гипокоагуляционного эффекта по сравнению с применением ацетилсалициловой кислоты в виде монотерапии (увеличение времени рекальцификации, АЧТВ, протромбинового индекса, активности AT III) в большей степени, чем при комбинации ацетилсалициловой кислоты с 3-гидроксипиридина сукцинатом (5 мг/кг), и позволяет предотвратить проатеро-генные сдвиги липидного спектра сыворотки крови, наблюдающиеся при курсовом введении ацетилсалициловой кислоты.

6. Комбинация ацетилсалициловой кислоты и производных таурина с лабораторными шифрами JIXTK 646 (7,2 мг/кг) и JIXTK 648 (5,9 мг/кг), в отличие от применения ацетилсалициловой кислоты в виде монотерапии, приводит к уменьшению гипокоагуляционного эффекта к 14 суткам после отмены препаратов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Целесообразно дальнейшее доклиническое исследование комбинаций ацетилсалициловой кислоты и производных таурина J1XTK 646 и JIXTK 648 как перспективных в плане возможного повышения эффективности и безопасности антитромботического действия; целесообразно также продолжение клинических исследований коминированного применения ацетилсалициловой кислоты и 3-гидроксипиридина малата с целью профилактики аспиринорезистентности. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. ЮртаеваИ.В. Влияние комбинированного применения мексидола и ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели гемостаза в эксперименте / Юртаева И.В., Кочетков С.Ю. // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте: материалы XIII науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов мед. фак. Мордов. гос. ун-та. - Выпуск 8. - Саранск: Референт, 2008. - С. 20-23.

2. Юртаева И.В. Некоторые показатели гемостаза при курсовом введении ацетилсалициловой кислоты в эксперименте / Юртаева И.В., Кочетков С.Ю., Зайчикова Н.П. // Материалы XXXVII науч. конф. «Огаревские чтения» мед. инст-та Мордов. гос. ун-та. -Выпуск 9. - Саранск: Референт, 2008.-С. 22-24.

3. Усанова A.A. Непосредственное и отсроченное влияние курсового применения ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели коагуляционного гемостаза / Усанова A.A., Кочетков С.Ю., Зорькина A.B. // Материалы Х-го Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке».-М.:2009. -С. 895-898.

4. Кочетков С.Ю. Оценка влияния на гемостаз гидроксиникотиновой соли таурина и ацетилсалициловой кислоты / Кочетков С.Ю. // Материалы IV Национального конгресса терапевтов. — М.: 2009. - С. 128-129.

5. Кочетков С.Ю. К вопросу о безопасности применения ацетилсалициловой кислоты/ Кочетков С.Ю., МалкинаН.В., Зауралова Н.М. // Медицинский вестник Башкортостана. - 2010. -№ 2. - С. 71-72.

6. Зорькина A.B. Некоторые аспекты фармакологического действия ацетилсалициловой кислоты в эксперименте / Зорькина A.B., Кочетков С.Ю., Малкина Н.В., Зауралова Н.М. // Врач-аспирант. - 2010. - № 4. - С. 42-48.

7. Усанова A.A. Некоторые особенности метаболического влияния ацетилсалициловой кислоты на фоне дислипидемии / A.A. Усанова, A.B. Зорькина, Н.М. Зауралова, Н.В. Малкина, С.Ю. Кочетков // Материалы XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М.: 2011. - Москва, 2011. - С. 489-490.

8. Усанова A.A. Особенности влияния курсового введения и отмены ацетилсалициловой кислоты на некоторые показатели гемостаза в условиях дислипидемии / Усанова A.A., Зорькина A.B., Малкина Н.В., Зауралова Н.М., Кочетков С.Ю. // Материалы XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М.: 2011. - С. 490.

9. Кочетков С.Ю. Влияние ацетилсалициловой кислоты и некоторых антиокси-дантов на коагуляционный гемостаз в эксперименте / С.Ю. Кочетков // Материалы II Межд. науч.-практ. конф.«Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтич. промышленности. Развитие инновац. и кадрового потенциала Пензенской области»: электронное научн. издание. -ФГУП НТЦ «Информрегистр», Депозитарий электронных изданий, 2012,-С. 72-76. - доступно с http://medic.pnzgu.ru/conCdocs/sbomic_conf2012.pdf.

10. Кочетков С.Ю. Влияние комбинированного применения ацетилсалициловой кислоты и производных таурина JIXTK-646 и JIXTK-648 на некоторые показатели гемостаза // Современные проблемы науки и образования. - 2015. -№ 1; URL: http://www.science-education.ru/121-17649

Подписано в печать 29.04.15. Объем 1,25 п. л. Тираж 150 экз. Заказ № 488. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24