Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение влияния ХТОС-404 на обучение животных в водном и радиальном лабиринтах

ГБ ОД

5 ПОП ^о

На правах рукописи

БОРИСОВА АЛЛА ОЛЕГОВНА

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХЮС-404 НА ОБУЧЕНИЕ ЖИВОТНЫХ В ВОДНОМ И РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТАХ

специальность - фармакология 14.00.25

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Купавна - 1996

Работа выполнена во Всероссийском научном центре по безопасности биологически аюивных веществ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Ю.В.Буров

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, академик РАМН, профессор М.М.Хананашвили

доктор медицинских наук, профессор ТА.Воронина

Ведущая организация:

Центр химии лекарственных средств -Всероссийский научно-исследовательский химико-фармацевтический институт.

Защита диссертации состоится "_"_1996 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д 098.01.02 во Всесоюзном научном центре по безопасности биологически активных веществ по адресу: 142450, п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23, ВНЦ БАВ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ

Автореферат разослан"_"_1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук Т.Н.Робакидзе

-31. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ"

- г

Актуальность проблемы. Одной из наиболее важных проблем современного общества является увеличение числа людей, страдающих сенильной деменцией. В настоящее время не существует достаточно эффективных лекарственных средств для лечения болезни Альцгеймера и другах нейродегенеративных заболеваний. Используемые в гериатрической практике препараты, в частности ноотропы, в этом случае удовлетворительных результатов не дают. Имеются лекарственные средства, облегчающие симптоматику болезни Альцгеймера (такрин, амиридин), однако они токсичны и обладают рядом побочных отрицательных свойств. .

В " связи с этим актуальна задача ' создания новых отечественных препаратов, улучшающих мнестические и интеллектуальные функции человека при различных заболеваниях центральной нервной системы, в особенности, связанных с нейродеструктивными процессами..

Во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (ВНЦ БАВ) был синтезирован ряд новых химических соединений, производных аминоакридина, являющихся аналогами такрина (С.Б. Гончаренко). По результатам предварительного исследования для дальнейшего изучения было выбрано наиболее перспективное соединение ХТСЮ-404,-показавшёе в ряде поведенческих тестов выраженную антиамнестическую активность (Буров и др., 1994).

В лаборатории психонейрофармакологии ВНЦ БАВ было показано, что эффективность амирндина и такрина обусловлена их .влиянием .ка чнейрональные, мембраны, а именно, активацией калиевой проводимости, нормализацией микровязкости и содержания холестерина, а не связана с ингибированием

ацетипхолинестеразы, как считалось раннее (Буров и др., 1991,6, 1992,г, 1993,6). Именно поэтому для дальнейшего изучения было выбрано малотоксичное соединение ХТОС-404 - слабый ингибитор ацетилхолинестеразы, но обладающее выраженной способностью активировать калиевые каналы нервного волокна. В лаборатории психонейрофармакологии были проведены исследования ноотропной и антиамнестической активности ХТОС-404 с использованием тестов активного и пассивного избегания. Было показано, что ХТОС-404 улучшает обучение старых и кастрированных крыс, эффективен при амнестическом.синдроме - модели амнезии, вызванной длительным введением скополамина (Робакидзе и др., 1996). Однако влияние ХТОС-404 на разные виды памяти исследовано не было. Исходя из этого представляется целесообразным дальнейшее, более детальное экспериментальное изучение влияния ХТОС-404 на мнестические функции, что могло бы помочь в прогнозе его клинического применения.-

Цель и задачи исследования. Целью исследования является углубленное изучение фармакологических свойств нового производного аминоакридина - ХТОС-404 при использовании лабиринтных моделей обучения, выявление особенностей его действия относительно препаратов сравнения: амиридина, такрина, ноотропов пирацетама и пикамилона, изучение его влияния на виды памяти, в наибольшей степени пораженные при болезни Альцгеймера. Для достижения указаннрй цели были поставлены следующие задачи: .

• изучение влияния ХТОС-404 на обучение интактных крыс в радиальном лабиринте;

• изучение влияния ХТОС-404 на обучение интактных мышей. в водном лабиринте;

• отработка методик скополаминовой амнезии при обучении животных в водной и радиальном лабиринтах;

• исследование обучения гонад оэктомированных крыс, как модели ухудшения обучения и памяти при старении;

• изучение влияния ХТОС-404 на обучение животных в водном и ^ радиальном лабиринтах на моделях амнезии.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение влияния потенциального средства для лечения когнитивных расстройств ХГОС-404 на обучение экспериментальных животных с . использованием лабиринтных методик в норме и на моделях амнезии. Обнаружено, что соединение ХТОС-404 улучшает обучение интактных мышей и крыс в У-образном и 8-лучевом радиальном лабиринтах. Вещество обладало антиамнестической активностью на фоне скополамина лишь в радиальном лабиринте.

Установлено, что препараты амиридин и такрин, используемые для лечения деменций, / улучшают обучение интактных крыс в 8-лучевом радиальном лабиринте- и' активны на модели • патологии памяти, вызванной скополамином.

Практическая значимость. При использовании лабиринтных методик обучения показано, что ХТ00404 обладает антиамнестической "активностью, сравнимой с действием амиридина и та крина, имея при этом значительно меньшую токсичность., Материалы диссертации являются частью доклинических исследований ХТОС-404 в качестве потенциального средства для леченйя когнитивных расстройств, в частности болезни Альцгеймера. На основании, способности ХТОС-404 улучшать память интактных животных подобно пикамилону, можно предполагать клиническую эффективность4., этого препарата как ноотропа С помощью поставленных моделей амнезии возможно дальнейшее изучение вновь синтезированных препаратов.

Апробация работы. Материалы доложены и обсуждены на конференциях молодых ученых ВНЦ БАВ (Купавна, 1992,1993, 1994).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из

введения, обзора литературы, главы материалы и методы,

экспериментальной части, в которую ' входят результаты

\

исследований и их обсуждение (главы 1-7), заключения, выводов и указателя литературы, включающего 146 наименования, из них 70 отечественных и 76 зарубежных. Работа изложена на 100 страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 рисунками и 4 таблицами.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на белых нелинейных крысах-самцах весом 200-300 г и белых нелинейных мышах-самцах весом 18-28 г. Животные содержались при температуре 20-22 С и стандартном 12-часовом режиме освещения. Доступ к воде ad libitum. Эксперименты •проводили в звукоизолированной комнате при искусственном освещении. Животных обучали в радиальном (крысы) и водном (мыши) лабиринтах,-

1 Обучение в радиальном лабиринте

Были проведены следующие эксперименты: обучение интактных крыс, введение скопапамина обученным животным, обучение кастрированных крыс, обучение на фоне скополамина.

Обучение интактных крыс в радиальном лабиринте проводили через сутки в течение 40 дней (20 сеансов обучения), при использовании моделей амнезии животных обучали ежедневно, гонадоэктомированных в течение 12 дней, на фоне скополаминовой амнезии - 14 дней. Перед обучением крыс подвергали режиму пищевой депривации, при котором пища была доступна ежедневно в

течение 1 часа до достижения 85% от исходной массы (Буреш и др., 1991). В дальнейшем пищу животным давали непосредственно после обучения, т.е. перед опытом крыс не кормили в течение 48 (при обучении интактных животных) или 24 часов (при обучении на моделях амнезии) (Ковалев, 1990).

Используемый в работе В-лучевой радиальный лабиринт состоял из центральной площадки диаметром 50 см, имеющей стенки из органического стекла высотой 50 см. Через отверстия в стенке центральная площадка соединялась с рукавами (диаметр 10 см, длина 50 см). Эксперимент начинался с предварительного тестирования: помещения животного в лабиринт при отсутствии подкрепления в рукавах. В течение трех минут регистрировали двигательную активность, обнюхивание, замирание, количество стоек и заходов в рукава. Крыс, посетивших за это время менее трех рукавов, исключали из эксперимента. По результатам предварительного тестирования животные были разделены на группы, не различающиеся между' собой по двигательной активности, по количеству заходов в рукава. Для приучения к лабиринту крыс еще в течение двух дней помещали на три минуты в лабиринт в отсутствии подкрепления. После отбора и приучения к лабиринту начинали обучение. Крысу помещали на центральную площадку напротив первого рукава. Подкрепление (кусочки хлеба массой 100-200 г) находилось во 2, 4, б и 8 рукавах (Ковалев, 1989). После посещения четырех подкрепляемых, восьми любых рукавов или спустя три минутй животное извлекали из установки. Исследуемые вещества вводили животным внутрибрюшинно за час до помещения в лабиринт, в дозах: ХТОС-404, амиридин и такрин 0, 1 мг/кг, пикамилон 10ч мг/кг, пирацетам 250 -мг/кг. Дозы. пирацэтама и пикамилона были взяты на основании данных литературы (Ковалев, 1989), а дозы амиридина, такрина и ХТОС-404 - из предыдущих

данных лаборатории (Буров и др., 1992,а; Литинская, 1994). Скополамин вводили внутрибргашинно за 15 минут до помещения в лабиринт: 1 - обученным интактным животным перед 21 сеансом обучения в дозе 3 мг/кп 2 - при обучении на фоне скаполамина в дозе

1 мг/кг (скополамин вводили, начиная с 5 сеанса до окончания

\

обучения). Дозы скололамина также взяты на основании данных лаборатории. При обучении интактных животных исследуемые вещества вводили через сутки, при обучении на фоне схополамина исследуемые вещества и скополамин вводили ежедневно.

Кастрации подвергались трехмесячные крысы. Операция проводилась под легким офирным наркозом. Контролем служили ложнооперированные животные. Обучение начинали через месяц после операции.

Для оценки влияния препаратов использовали следующие показатели обучения и памяти: количество повторных заходов в подкрепляемые рукава (ошибка рабочей памяти) и последовательное посещение трех подкрепляемых рукавов (долговременная память) (Ковалев, 1989, 1990). Так как при обучении на фоне скополамина посещение крысами рукавов значительно сократилось и не достигало восьми в течение трех минут, состояние долговременной памяти оценивали по количеству посещений подкрепляемых рукавов во время первых четырех выборов.

2 Обучение в водном лабиринте

/-образный лабиринт, изготовленный из органического стекла состоял из начального отсека длиной 20 см и шириной 6 см и двух рукавов длиной 20 см и шириной 5 см. Лабиринт заполнялся холодной водой (1=15 С) таким образом, чтобы прозрачная площадка для животного в одном из его рукавов была лишь немного скрыта под ее поверхностью. Перед началом опыта мышь помещали в

стартовый отсек. Животным давалось 10 последовательных предъявлений ежедневно. В случае выбора правильного рукава и , обнаружения площадки животному давалось время для отдыха: межсигнальный интервал составлял 60 секунд, при неправильном выборе рукава животное сразу же возвращали в стартовый отсек. Обучение интактных мышей проводили в течение двух дней: первый день - непосредственное обучение на фоне введенного препарата, второй день - тестирование. При использовании модели скополаминовой амнезии обучение проводили в течение трех дней, скополамин и препараты вводили ежедневно.Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно за 20 минут до опыта в дозах 0, 1 мг/кг и 1 мг/кг при обучении интактных животных и в дозе 0, 1 мг/кг при обучении на фоне скополамина. Скополамин вводили внутрибрюшинно за 15 минут до опыта в дозе 1 мг/кг. Для ' оценки влияния препаратов учитывали число правильных нахождений выхода. 1

Статистическая обработка экспериментальных данных. проведена с использованием критерия Стъюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУ)!(ДЕНИЕ

Гпава 1. Влияние ХТОС-404, змиридина, такрина, пирацетзма и . пикзмилона на обучение интактных крыс в радиальном лабиринте.

Одним из проявлений болезни Альцгеймера является нарушение ориентации в пространстве (Izquierdo, 1S87). Поэтому для опенки фармакологического действия ХТОС-404 использовались лабиринтные методики, позволяющие сцепить • пространственный . компонент памяти,.

В наибольшей степени при болезни Апьцгеймера повреждается память на недавние события (Sagar, 1988). Для оценки влияния веществ на этот вид памяти в работе использовался радиальный лабиринт, позволяющий оценить состояние рабочей и долговременной памяти.

\

При обучении крыс в радиальном лабиринте было установлено, что ХТОС-404 улучшает формирование долговременной памяти на уровне препаратов сравнения. Так, выявлено статистически значимое улучшение долговременной памяти под влиянием ХТОС-404 (8-12 сеансы обучения), амиридина (5-16 сеансы), такрина (5-20 сеансы) и пикамилона (5-16 сеансы) (Рис.1). В отличие от амиридина, такрина и пирацетама, ХТОС-404 и пикамилон оказывали положительное влияние на состояние рабочей памяти. XTOC-4Q4 был эффективен на начальном этапе обучения (14 сеансы). Пикамилон же был эффективен на средней и заключительной стадии (13 - 20 сеансы ). (Рис.2).

Обнаруженное нами улучшение обучения крыс в радиальном лабиринте под влиянием пикамилона и отсутствие эффекта пирацетама согласуется с данными литературы (Ковалев, 1989). Отсутствие эффекта пирацетама можно объяснить следствием активации норадренергической и дофаминергической систем переднего мозга при хроническом _ введении пирацетама, что замедляет выработку навыка на моделях с положительным подкреплением (Громова, 1980).

'В литературе имеются данные о том, что такрин не оказывает влияние- на обучение интактных животных, однако проявляет активность на различных моделях амнезии (Cacabelos et al, 1994). Нами же впервые- обнаружено активное участие такрина в процессах формирования долговременной памяти интактных крыс:

В настоящей работе показано улучшение формирования лишь долговременной памяти интактных крыс под действием амиридина, . на рабочую память препарат не влиял. Учитывая данные японских исследователей о том, что амиридин улучшает рабочую память в условиях амнезии (Уагпато{о е1 а!, 1993), можно предположить, что амиридин оказывает положительное влияние на состояние рабочей памяти лишь при патологии. Можно отметить, что амиридин оказывал

положительное влияние на обучение крыс в радиальном лабиринте,

»

несмотря на его введение перед опытом, хотя согласно данным литературы этот препарат был эффективен только при введении после сеанса обучения (МапшэЬ) е{ а1,1993). Данное противоречие может быть объяснено курсовым введением препарата.

Глава 2. Влияние ХТОС-404, амиридина и такрина на обучение крыс в радиальном лабиринте на фоне скополамина.

Известно, что одной из основных причин нарушения памяти при болезни Альцгеймера является дегенерация хсшкнергической системы (М11соск е! а1,б, 1982). Исходя из этого, представляется целесообразным моделирование дисфункции этой системы. В качестве амнестирующего агента был использован блокатор м-холино-рецепторсв скополамин.

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ ДОЛГОВРЕМЕННОЙ ПАМЯТИ ИНТАКТНЫХ КРЫС ПРИ ОБУЧЕНИИ В РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТЕ

3.5

2.5

1.5 -

0.5 -

-ХТОС-404 амиридин^ ■такрип ■ пиками лош • пирацетам о - контроль !--

1-4

.5-8

9-12

13-16

17-20

* - р < 0,05 отпосетельно контроля

** - р < 0,001 относительно короля

По оси абсцисс - сеансы обучения, по оси ординат -

количество трех последовательных заходов в подкрепляемые

рукава

?мЛ

-4Ъ-

ВЛШ1ШГЕ ПРЕПАРАТОВ ПА СОСТОЯНИЕ РАБОЧЕЙ ПАМЯТИ ПРИ ОБУЧЕНИИ В РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТЕ ИНТАКТНЫХ

КРЫС

:.5

1.5

-ХТОС-404 <-,"1

---амирндин'«-«'

......такрин^«а;

----пикамшгон 1*--^'

----пирадеггам:'"*'"

-----контроль'»-

0.5 -

1-4

5-8

9-12

13-16

17-20

* - р < 0,05 относительно контроля

** - р < 0,001 относительно контроля По оси абсцисс - сеансы обучения, по оси ординат -количество повторных згходов в подкрепляемые рукава 4 ь

Под действием скополамина наблюдалось статистически значимое ухудшение показателей формирования долговременной памяти (во время 5-10 сеансов). Ухудшение состояния рабочей памяти было статистически значимо в течение всего периода обучения (Рис. 3 и 4). ХТОС-404 уменьшал выраженность амнезии при обучении крыс в радиальном лабиринте на фоне скополамина. Антиамнестическая активность ХТОС-404 была сопоставима с действием амиридина и такрина. Так, ХТОС-404, амиридин и такрин достоверно улучшали формирование долговременной памяти относительно • скополаминового контроля (ХТОС-404 и тахрин во время 5-10 сеансов, амиридин - 7-10 сеансов) (Рис.3). Статистически значимое улучшение состояния рабочей памяти относительно скополаминового контроля было достигнуто под действием амиридина во время 1-4 сеансов, ХТОС-404 и такрина - 3-4 сеансов. Препараты не влияли на рабочую . память на последующих этапах обучения (Рис.4). Можно предположить, что это обусловлено невозможностью предотвратить- нарушения нейрональных мембран, вызываемые хроническим введением скополамина (Буров и др., 1991,6).

Глава 3. Влияние кастрации на обучение крыс в радиальном лабиринте.

Одной из перспективных моделей амнезии является гонадо- -эктомия. Известно, • что при гонадоэктомии наблюдаются значительные нарушения биохимических показателей мозга. ( Вигоу е1 а1, 1993). Так, отмечено увеличение микровязкости и количества холестерина синаптосом, снижение активности ацетилхолинестеразы коры мозга крыс. Направленность этих изменений нейрональных мембран совпадает с нарушениями у стареющих крыс.

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ ДОЛГОВРЕМЕННОЙ ПАМЯТИ ПРИ ОБУЧЕНИИ КРЫС В РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТЕ НА ФОНЕ

СКОПОЛАМИНОВОЙЛМНЕЗИИ

-контроль /•«-<¿7

---скополамин.»=^'

......амиридин +

скополамин '<•= ■><■

----такрин +

скополамин

----ХТОС-404+

скополамин

3-4 5-6 7-8 9-10

р < 0,05 относительно контроля

- р < 0,001 относительно контроля

р <0,05 относительно скополаминового контроля

оси абсцисс - сеансы обучения, по оси ординат -

[ичество заходов в подкрепляемые рукава в первые четыре выбора

Рис-3

-ЛЕ-

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ НА СОСТОЯНИЕ РАБОЧЕЙ ПАМЯТИ ПРИ ОБУЧЕНИИ КРЫС В РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТЕ НА ФОНЕ

СКОПОЛАМИНОВОЙ АМНЕЗИИ

4.5

-контроль

---скополамии /"'О

......амиридик +

скополамии'«г«)

----такрин +

скополамии <ъ.

----ХТОС-404+

скополамин ¡•^■ч)

9-10

* - р < 0,05 относительно контроля

** - р <0,001 -"+ - р <0,05 относительно скополаминового контроля ++-р<0,001 - "По оси абсцисс - сеансы обучения, поюси ординат -количество повторных заходов в подкрепляемые рукава Рио.Н

В поведенческих тестах было показано ухудшение способности кастрированных крыс к выработке условной реакции пассивного избегания (Вигоу е1 а1, 1993). Представлялось интересным изучение влияния гонадоэктомии на разные виды памяти и постановка методики, позволяющей оценивать влияние исследуемых веществ на обучение кастрированных животных, при использовании положительного подкрепления.

В эксперименте не было обнаружено статистически значимых отличий в обучении гонадоэктомированных и контрольных животных. Состояние рабочей памяти под влиянием кастрации также не ухудшилось.

Интересно отметить, что кастрация, проведенная в этом же возрасте, нарушала выработку у крыс условной реакции пассивного избегания (Вигоу е1 а1,1993). Различие этих результатов может быть объяснено использованием подкреплений разной модальности и, следовательно, неодинаковым участием медиаторных систем мозга.

Глава 4. Действие скополамина на долговременную и рабочую память обученных в радиальном лабиринте интактных крыс.

Модели патологии на животных демонстрируют, как правило, дефицит только в приобретении . и хранении информации. При деменции же, в отличие от амнестического синдрома, нарушается и праксис. Поэтому представлялось целесообразным использование

методик, включающих тестирование моторных и других навыков, *

приобретенных до применения агентов, вызывающих когнитивные нарушения. С. этой целью скополамин вводили уже обученным в лабиринте животным.

' Однократное ..введение скополамина обученным животным призело к статистически значимому ухудшению показателей долговременной и рабочей памяти (Табл.1,2). ХТОС-404 не

предотвратил нарушения долговременной и рабочей памяти после введения скопаламина крысам, предварительно обученным в радиальном лабиринте. Нарушения воспроизведения навыка прохождения лабиринта не происходило только под влиянием амиридина и пикамилона (Табл.1). Достоверного ухудшения рабочей памяти не наблюдалось только под влиянием пирацетама (Табл.2).

Исходя из того, что такрин, вызывающий улучшение когнитивных функций при болезни Альцгеймера, при использовании данной модели обучения оказался неэффективным, а также, что амиридин, оказывающий положительное влияние на кратковременную память пациентов с болезнью Альцгеймера, не предотвращал ухудшения рабочей памяти после введения скополамина, можно считать, что данные условия вызывают амнезию слишком глубокую для выявления антиамнестической активности веществ. Следовательно нельзя утверждать, что ХТОС-404 не будет способствовать востановлению нарушенных навыков, приобретенных до начала заболевания.

Гпава 5. Влияние ХТОС-404, амиридина и такрина на обучение интактных мышей в водном лабиринте.

При первичном отборе соединений с предполагаемыми

антиамнестическими свойствами представляется целесообразным использовать водный У-образный лабиринт, представляющий собой частный случай активного избегания аверсивной ситуации.

Выбор данной методики, наряду с использованием радиального лабиринта, вызван тем, что для успешного выявления ноотропной и антиамнестической активности вновь синтезированных веществ желательно применять методики различной степени сложности'(обучение в-водном лабиринте является для животных более легкой задачей), проведения экспериментов не менее, чем на двух видах животных, а также использование моделей обучения,

имеющих подкрепление разной модальности, так как в тестах с положительным и отрицательным подкреплением задействованы различные медиаторные системы, и ноотропное действие может проявляться только при использовании подкрепления определенной модальности.

В результате проведения данного эксперимента показано, что ХТОС-404 (в дозе 1 мг/кг) оказывает положительный эффект при обучении интакгных мышей в водном У-образном лабиринте. Так, выявлены статистически значимые различия между обучением и тестированием под действием ХТОС-404 (1 мг/кг), а также такрина (0,1 мг/кг). Кроме того такрин в дозе 1 мг/кг улучшал обучение уже в первый день, столь же высокий уровень правильного выбора сохранился и через 24 часа при тестировании. Амиридин при однократном введении положительного влияния не оказал (Табл.3).

Таблица 1

ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТОВ И СКОПОЛАМИНА НА ДОЛГОВРЕМЕННУЮ ПАМЯТЬ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ОБУЧЕННЫХ В РАДИАЛЬНОМ /. ЛАБИРИНТЕ КРЫС

Количество заходов в

Г1 Доза подкрепляемые рукава за первые четыре выбора

- мг/кг без введения скополамина после введения скополамина

контроль 5 - 3,2 ±0,49 3,2 ±0,37

скополаминовыи контроль 10 - 3,4 ± 0,27 2,6 *± 0,16

ХТОС-404 + скополамин 9 0,1 3,56 ±0,24 2,56*+0,17

амиридин + скополамин 10 0,1 3,4 + 0,27 2,8 ± 0,33

такрир + скополамин 11 0.1 3,91 ± 0,09 3,18 *± 0,23

пикамилон + скополамин 11 10 3,73 ±0,19 3,18 ±0,32

пирацетам + скополамин 9 250 3,4 ± 0,24 2,33 *± 0,29 .

* - р < 0,05 статистически достоверны отличия между опытами без введения скополамина и после введения скополамина

Таблица 2

ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТОВ И СКОПОЛАМИНА НА РАБОЧУЮ ПАМЯТЬ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ОБУЧЕННЫХ В РАДИАЛЬНОМ ЛАБИРИНТЕ КРЫС

Количество повторных

п Доз а заходов в подкрепляемые рукава

мг/к без введе- после

г ния скополамина введения скополамина

контроль 5 - 0,2 ±0,2 0

скополаминовыи контроль 10 - 0 1,2* ±0,4

ХТОС-404 + скополамин 9 0,1 0,11 ±0,1 1,33* ±0,37

амиридин + скополамин 10 0,1 0,3 ± 0,21 1,7 *± 0,39

такрин + скополамин 11 0,1 0 1,55 *± 0,21 •

пикамипон + скополамин 11 10 0 , 1,18*+0,35

пирацетам + скополамин 9 250 0,33 ±0,16 1,0 ±0,37

* - р < 0,5 статистически достоверны отличия между опытами без введения скололамина и после введения скополамина

Таблица 3

ВЛИЯНИЕ АМИРИДИНА, ТАКРИНА И ХТОС-404 НА ОБУЧЕНИЕ ИНТАКТНЫХ МЫШЕЙ В ВОДНОМ ЛАБИРИНТЕ_

П Доза мг/кг • % выбора правильного рукава

при обучении при тестировании

контроль 82 - 55,8 73,3

амиридин 10 0,1 45,0 63,0

амиридин 20 1,0 61,5 74,5

такрин 10 0,1 • 59,0 80,0Л

такрин 10 1,0 82,0* 84,0

ХТОС-404 20 0.1 65,5 69,0

ХТОС-404 10 1,0 45,5 71,0Л

* - р < 0,05 разница с контролем статистически достоверна л - р < 0,05 статистически достоверны различия между обучением и тестированием

Гпава 6. Влияние ХТОС-404, амиридина и такрина на обучение мышей в водном лабиринте на фоне скополаминовой амнезии.

Под действием скополамина (1 мг/кг) наблюдалось статистически значимое ухудшение обучения мышей з водном

лабиринте (Рис.5). ХТОС-404, а также препараты сравнения амиридин и такрин не предотвращали ухудшение обучения (Рис.5).

Для оценки антиамнестической способности фармакологических веществ скополаминовая амнезия считается жесткой моделью (Шабанов, Бородкин, 1989), поэтому отсутствие стимулирующего действия у вещества при использовании этого теста еще не является достаточным основанием для утверждения, что оно потенциально не может улучшать нарушенную память. Как было отмечено раннее, исследуемые вещества улучшают нарушенную скополамином память при обучении крыс в радиальном лабиринте.

Итак, на основании одинаковой эффективности ХТОС-404 и препаратов сравнения амиридина и такрина на моделях, позволяющих оценить влияние веществ на пространственный компонент памяти и действие при нарушении холинергической системы, а также положительное влияние на рабочую память при значительно меньшей токсичности позволяет рекомендовать ХТОС-404 в качестве потенциального средства для лечения когнитивных расстройств, в частности болезни Альцгеймера.

ВЛИЯНИЕ АМИРИДИНА, ТАКРИНА И ХТОС-404 НА ОБУЧЕНИЕ МЫШЕЙ В ВОДНОМ ЛАБИРИНТЕ НА ФОНЕ СКОПОЛАМИНОВОЙ АМНЕЗИИ

-контроль

---скополами

......амиридин-

скополами

----такрин +

скополами;

----ХТОС-404-

скополами

* - р < 0,05 относительно контроля ** - р < 0,001 относительно контроля По оси абсцисс - дни обучения, по оси ординат -количество выборов правильного рукава

4. ВЫВОДЫ

1 Показано, что ХТОС-404 (0,1 мг/кг) улучшает формирование долговременной памяти при обучении интактных крыс в радиальном лабиринте на уровне препаратов сравнения: амиридина (0,1 мг/кг), такрина (0,1 мг/кг). и пикамилона (10 мг/кг). Рабочую память в зтих условиях улучшают только ХТОС-404 (0,1 мг/кг) и пикамилон (10 мг/кг).

2 Показано, что ХТОС-404 (0,1 мг/кг) не предотвращает нарушение долговременной и рабочей памяти после введения скополамина (3 мг/кг) предварительно обученным в радиальном лабиринте крысам. В этом случае долговременная память не ухудшалась только при использовании амиридина (0,1 мг/кг) и пикамилона (10 мг/кг), а рабочая - пирацетама (250 мг/кг).

3 ХТОС-404 (0,1 мг/кг) уменьшал выраженность амнезии при обучении крыс в радиальном лабиринте на фоне скополамина. Антиамнестическая активность ХТОС-404 сопоставима с действием амиридина (0,1 мг/кг) и такрина (0,1 мг/кг). Под действием ХТОС-404, амиридина и такрина происходило улучшение показателей долговременной и рабочей памяти относительно скополаминового контроля.

4 Обнаружено, что кастрация не влияет на рабочую и долговременную память память крыс при обучении в радиальном лабиринте.

5 Показано, что ХТОС-404 (1 мг/кг) оказывает положительный эффект при обучении мышей в водном лабиринте после

однократного введения. Такрин улучшал обучение в дозах как

0.1.мг/кг, так и 1 иг/кг. Амиридин в. зтсм случае был неэффективен.

6 ХТОС-404 (0,1 мг/кг), а также амиридин (0,1 мг/кг) и такрин (0,1 мг/кг) не предотвращали скополаминовую амнезию (1 мг/кг) при обучении.мышей в водном лабиринте.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Борисова А.О. Сравнительное изучение влияния амиридина на обучение крыс в радиальном лабиринте. II Тез. докл. ежегодной конференции молодых ученых Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ. Купавна, 1992. С.6.

2. Борисова А.О. Влияние скополамина и кастрации на обучение и память крыс в радиальном лабиринте. // Тез. докл. ежегодной конференции молодых'ученых Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ. Купавна, 1993. С. 12.

3. Борисова А.О. Сравнительное изучение влияния ХТ00404 на обучение крыс в радиальном лабиринтев норме и на фоне скополаминовой амнезии. // Тез. докл. ежегодной конференции молодых ученых Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ. Купавна, 1994. С. 14.

4. Буров Ю.В., Борисова А.О., Робакидзе Т.Н. Сравнительное изучение влияния амиридина на обучение крыс в радиальном лабиринте.// Бюл. экспер. биол. 199S. N5. С.526-523.