Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Изучение влияния химической модификации новых пентациклических тритерпеноидов на их фармакологические свойства

На правах рукописи

БАЕВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ НОВЫХ ПЕНТАЦИКЛИЧЕСКИХ ТРИТЕРЛЕНОИДОВ НА ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 7 МА? 20.1

Томск - 2011

4840653

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Новосибирском институте органической химии им. H.H. Ворожцова СО РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Толстнкова Татьяна Генриховна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Плотников Марк Борисович

доктор биологических наук

Ахмеджанов Рафик Равильевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО . «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН

Автореферат разослан "_" февраля 2011 г.

Защита состоится

»

.2011 г. в_часов на заседании

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова E.H.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Широкое распространение, фармакоэкономическая доступность и высокая физиологическая активность сделали привлекательным практическое применение тритерпеноидов ряда лупана и урсана. Весьма ценным свойством является легкость химической модификации лупановых и урсановых структур, которая позволяет получать новые агенты с улучшенными фармакологическими свойствами. Поэтому в настоящее время проводится интенсивное изучение связи между структурой и активностью лупанов и урсанов. Скрининг фармакологической активности новых производных ряда лупана и урсана представляется весьма перспективным для поиска агентов с высокой активностью для дальнейшей разработки модификаторов метаболических реакций, которые можно будет применять в терапии различных заболеваний человека. Представляется актуальным направленный скрининг больших библиотек новых производных, который позволяет эффективно выявлять новые агенты с потенциально высокой активностью. Такой скрининг может быть выполнен с помощью виртуальных скрининговых систем поиска связи «структура - активность» и установления потенциального спектра фармакологической активности соединений.

В настоящее время существенное внимание исследователей уделяется изучению биологической активности природных тритерпенов, среди которых найдены соединения с высокой противовирусной, противоопухолевой, противовоспалительной, антноксидантной и гепатопротекторной активностью (Толстикова и соавт., 2006; Baltina et а]., 2003, Cichewicz et al., 2004; Ikcda et al., 2008; Fulda, 2009). Эти природные высокоактивные агенты обладают низкой токсичностью (Laszczyk, 2009), проявляют эффект в малых дозах и легко подвергаются химическим модификациям (Kessler et al., 2007) Наиболее полно на сегодняшний момент изучена биологическая активность тритерпенов ряда лупана -бетулиновой кислоты, бетулина, лупеола и их производных, а также производных глицирретовой, олсаноловой и, в меньшей степени, урсоловой кислоты. Особенно активно в последнее десятилетие изучаются фармакологические свойства, молекулярные механизмы бетулиновой, олеаноловой кислот и их производных (Liby, 2009). В настоящее время ряд исследованных производных прошли клинические испытания (Petronelli et al., 2009)

Однако относительно малоизученными остаются производные лупанового тритерпенокда бетулоновой кислоты и производные урсанового ряда, обладающие широким спектром биологической активности и представляющие большой интерес в качестве платформы для создания высокоэффективных противоопухолевых препаратов с антиметастатическими и онкопрофилактическими свойствами.

Фармакологическое действие бетулоновой кислоты и ряда ее производных на протяжении 10 лет изучается в лаборатории фармакологических исследований НИОХ СО РАН (зав. лаб. д.б.к. Толстикова Т.Г.). Среди них обнаружены, исследованы и запатентованы высокоэффективные противоопухолевые агенты - аланинамидные производные бетулоновой кислоты, охарактеризованные как группа корректоров токсических эффектов цитостатиков (Сорокина и соавт., 2006; Толстикова и соавт., патент № 2353623,27.04.2009).

В этой связи, несомненно, весьма перспективным и актуальным представляется продолжение изучения фармакологической активности новых производных бетулоновой и урсоловой кислоты с целью поиска высокоэффективных агентов, обладающих комплексным действием на механизмы возникновения опухолей, их роста и метастазирования. Обнаружение у этих соединений противовоспалительного, гепатопротекторного и антиоксидантного действия в сочетании с противоопухолевым эффектом может быть использовано для создания препаратов, способных потенциировать действие классических цитостатиков, а также снижать их побочное действие на здоровые органы и ткани.

Целью данного исследования является оценка влияния структурных модификаций новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты на их фармакологические свойства и выявление потенциально важных для медицины препаратов с комплексным действием.

Задачи исследования.

1. Провести компьютерный анализ спектра биологической активности новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты и оценить вероятность наличия основных фармакологических активностей для наиболее перспективных

1. Провести фармакологический скрининг новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты /я vivo на:

• противовоспалительную активность;

• гепатопротекторную и антиоксидантную активность;

• противоопухолевую активность;

3. Установить влияние модификации химической структуры на степень проявления противовоспалительной, гепатопротекторной, антиоксидантной и противоопухолевой активности новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты на основе данных компьютерного прогнозирования и экспериментальных данных

4. На основании экспериментальных данных выбрать перспективный агент и провести более детальные исследования по выявлению корректорных свойств в условиях опухолевой модели на фоне введения препаратов экспериментальной полихимиотерапии.

Научная новизна работы. В настоящей работе впервые проведен подробный сравнительный анализ связи «структура - активность» 21 нового производного лупанового и 13 производных урсанового ряда на основе компьютерного прогнозирования и экспериментальных данных. Установлено влияние модификации химической структуры на степень проявления противовоспалительной, гепатопротекторной, антиоксидантной и противоопухолевой активности. Выявлены перспективные соединения с выраженной противовоспалительной, гепатопротекторной и противоопухолевой активностью, которые могут быть использованы для создания нового класса препаратов - корректоров побочного действия цитостатиков.

Научно-практическая ценность работы. Производное лупанового ряда 3-okco-28-(N-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (агент Of 41) предложен как перспективный корректор побочных эффектов экспериментальной полихимиотерпаии с цитопротекторным и антиоксидантным действием, обладающий собственной противоопухолевой активностью. Обнаружен целый класс новых высокоэффективных агентов тритерпеновой природы, способных повышать эффективность противоопухолевой терапии, снижать её токсичность, а, следовательно, повышать качество жизни пациентов с онкологическими заболеваниями, получающих высокотоксичные препараты ПХТ.

1. На основании анализа данных компьютерного прогнозирования и экспериментальных исследований установлено влияние химической модификации новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты на их фармакологические свойства.

2. Выявлены перспективные пентациклические тритерпеноиды, обладающие противовоспалительной, гепатопротекторной, антиоксидантной и перотивоопухолевой активностью.

3. Выбрано наиболее активное производное бетулоновой кислоты 3-оксо-28-(Ы-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (агент (Н 41), проявляющее цитопротективное и антиоксидантное действие в условиях опухолевой модели на фоне введения препаратов экспериментальной полихимиотерапии.

4. Показано, что производное ОГ 41, проявляющее противоопухолевый, цитопротективный и антиоксидантный эффект, не обладает токсическим воздействием на организм животных и может быть предложено в качестве перспективного полифункционального препарата-корректора побочного действия цитостатиков для расширенного доклинического исследования.

агентов.

Апробация результатов. Основные результаты работы были представлены на конференциях: (I международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, Республика Казахстан, 10-13 октября 2007 года), III всероссийской конференции с международным участием «Новые информационные технологии в медицине» (Волгоград, 2008), VII ежегодном конгрессе международных исследований и технологий в области разработки лекарственных препаратов (Шанхай, КНР, 24 - 28 октября 2009 года), VIII ежегодном конгрессе международных исследований и технологий в области разработки лекарственных препаратов (Пекин, КНР. 22 - 27 октября 2010 года).

Публикации. По теме хчиссертации опубликовано 3 статьи в журналах, рекомендованных перечнем ВАК, получено 4 патента.

Работа выполнена при поддержке программ Президиума РАН: «Фундаментальные науки - медицине», Междисциплинарных проектов СО РАН: № 54 - «Научные основы разработки новых лекарственных препаратов. Перспективы использования возобновляемого сырья», N° 93 - «Развитие исследований в области медицинской химии и фармакологии как научной основы разработки отечественных лекарственных препаратов», №104 «Поиск и создание новых препаратов для противоопухолевой терапии на основе модифицированных природных соединений».

Структура и объем работы.

Диссертация включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований и обсуждение, заключение, выводы и список литературы, включающий 270 ссылки. Работа игтожена на 146 страницах, содержит 48 таблиц.

Фармакологический скрининг проводился на 1200 белых беспородных мышах весом 20 - 25 г. и 200 мышах линии C57BL/6J, полученных из вивария Института цитологии и генетики СО РАН. Животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и стандартному гранулированному корму.

Новые производные бетулина и бетулоновой кислоты (лупановый ряд) были синтезированы в лаборатории тонкого органического синтеза института органической химии Уфимского научного центра РАН (д.х.н. Казакова О.Б.) на основе тритерпеновой структуры бетулоновой кислоты и бетулина посредством введения различных заместителей во 2, 3, 20, 24 положения их молекул. Новые производные урсоловой кислоты (урсановый ряд) были синтезированы в ОХЦ Новосибирского института органической химии СО РАН (к.х.н. Попов С.А.). Для исследования было представлено более 50 структур лупанового ряда и более 30 структур урсанового ряда, из которых с помощью компьютерного скрининга в программе PASS были выбраны наиболее перспективные агенты, представленные в этом исследовании.

Ниже представлены базовые структуры бетулина и бетулоновой кислоты и исследованные производные лупанового ряда.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

J

J

J.

J,

Of3. Зр,28-ди-<;-никотинат бетулина

-J

Бетулин

Бстулоновая кислота

Of 2; 3-оксим бетулоновой кислоты

j.

О" * J у,., а-дм-*./-

метокскциянамат бетулина

Of 5 33,28-ди-О-шшнамат бетулина

Of 6: метиловый эфир [3,2-с]-пиразол-луп-20(29}-ен-28-овой кислоты

Of 7. 3-оксо-17(3-

карбамоил-28-иорлуп-

20(29>ен

О '

..-фСйг

ОГ 8. метиловый -эфир 2-фурфурилиаен-бстулоновой кислоты

] ч

/

ОГ 9 метиловый -эфир 2-беизилиден-бетулоновой кислоты

J

,0.

„ .....^""Т

л л х 1 '

ОГ 12 метиловый эфир 3- ОГ 13 3.28-ди-О-зцетил-

еемикарба'эон-от'лоновой 29-норлул-20-он кислоты

А.-«1

"V

ОП6 3|?-гидрокси-22(17- ОП8 3,28-ди-(}-ацетил-

2Я>-йбсо-луп-] 7(281 29-норлуя-20-охсим 20(29)-диен

ОПО 2-фурфуридкден-■ бегулоковая кислота

.и ] 0>

ОГ 14 никотннат 3-оксима от'лонояой кислоты

Г,-О)

о

ОГ19 З-оксо-:«-!«"-

метил-/."Изолейиино)-

кар6онил-28-луп-20(29)-

. X

ОГ 11 3-охсо-ПМ!ч-

де1шдурсидо)-25-норлуп-

2Ц29)-ен

4

ГГ'9г°

ОГ15 метиловый эфир ?.20-диоксимино-29-норлуп-28-овой кислоты

V

•'Х-

* / .

ОГ 29 3-охсо-:№-к'Ярбон и л ■()'- м ст и л- /. -метионин)-луп-20(29)-еи

~ Г) д.)'

,44

ОГ40 3-счгсо-28-(4.4'- ОГ41 3-оксо-28-(М-

диаминодифекилсульфон)- метилпиперазин)-

кар6оиня-луп-20(29)-ен карбонил-луп-20(29)-ен

V М-^^о-

ОГ 46 Х-метилпиперазид сюима бетулоновон кислоты

Далее представлена базовая структура урсоловой кислоты производные урсанового ряда.

члй:

Урсодовая кислота

г

16 З-ацетат урсоловой кислоты

гНИ

ал н л ч

«А,. Д.. у но X '

35 урсоловый ~>фир гликолевой кислоты

Л'")

- ! • И • • ¿^А.}

14 бензилурсолат

33 4- н итробе и з нл урс о я ат

/-V. J н

л С| Г*>"

V

но >' ✓ ' н

36 амид Р-панина урсоловой кислоты

и исследованные

15. урсоновая кислота

I •-! '•й 1 А^ '

34 эфир этмлгликолла урсоловой кислоты

-Т)

Г.Т^

М0

37; 2,3-эпоксипропионат урсоловой кислоты

38 бензилурсонат

40 урсоламид уОДиномаслямой кислоты

ОН

39 N-нмидоэолиламид 3-ацетата урсоловой кислоты

г

+Í.....1

N. X

'ОН

НО

41 амнд а-аланнна \рсаловой кислоты

42 калиевая соль гл и кол яга урсоловой кислоты

Для прогнозирован»» спектра биологической активности производных бетулоновой кислоты применялась программа PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances, 2007, V. Poroikov, D. Filimonov and associates). Результаты прогноза представлены в виде расчетных оценок вероятностей наличия (Ра) вероятных видов фармакологической активности. Для выполнения прогноза спектра биологической активности s программе PASS использовались структурные формулы соединений в стандарте MDL molecular file, созданные в редакторе ISIS Draw 2.4 и Chem Draw Uita 9.0. Прежде всего, оценивался параметр drug-likeness для каждого из производных в виде вероятности полного соответствия по фармакологическому действию известному фармпрепарату в интервале 0 - I. С целью оценки потенциального фармакологического действия соединений для скрининга были отобраны наиболее характерные для этих структур активности. Вероятность натичия активности Р, оценивалась в интервале 0,4 - 1. Вероятность наличия каждой из активностей сравнивалась для всех соединений с вероятностью drug-likeness с целью опенки её вклада в обшую потенциальную фармакологическую активность агента.

Скрининг противовоспалительной активности проводили на модели отека, вызванного у мышей введением в апоневроз задней лапы водного раствора флогогена (1,5% каррагенина или 0,1% гистамина) в объеме 0,05 мл. Тестируемые соединения вводили внутрижелудочно в виде водно-твиновой взвеси за 1 ч до введения флогогена в дозе 20 мг/кг. Доза 20 мг/кг является средней эффективной дозой для бетулоновой кислоты. Препаратом сравнения была субстанция иклометацина («Fluka») в дозе 20 мг/кг. Контрольным животным вводили эквивалентное количество воды с твином. Через 5 ч после введения флогогена животных умерщвляли путем кранио-цервикальной дислокации и определяли массу обеих задних лап ниже голеностопного сустава с отеком и без него. Индексы воспаления рассчитывались как отношение разности здоровой и воспаленной лапы к массе здоровой, выраженной в процентах. Противовоспалительный эффект оценивался по разнице между относительными значениями индексов отека в контрольной и опытной группах.

СС14-индуцированного гепатита путем однократного введения в желудок мышам 25% раствора CCU в растительном масле. Исследуемые соединения вводили однократно внутрижелудочно в виде водно-твиновой взвеси в дозе 50 мг/кг (средняя эффективная доза бетулоновой кислоты) за 1 ч до токсического воздействия. В качестве соединения сравнения использовали известный антиоксидант дигидроквериетин, который вводили в желудок в эффективной дозе 100 мг/кг (Теселкин и соавт., 1996). Контрольные животные получали водно-твиновую взвесь в эквивалентном объеме. Гепатопротекториые свойства оценивали через сутки по снижению в сыворотке крови активности трансаминаз (АЛТ и ACT) и щелочной фосфатазы (ЩФ) с использованием стандартных наборов реактивов («Biocon», «Olvex Diagnosticum»). Антиоксидантнын эффект определяли у этих же животных по

проводили на модели

уменьшению в крови концентрации соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (TBARS), согласно общепринятой методике (Камышников, 2000).

Для изучения противоопухолевой и корректорной активности соединений экспериментальным животным перевивались штаммы опухолей с разной степенью злокачественности и чувствительности к циклофосфану. Весь перевивочный материал был получен из банка опухолей лаборатории регуляции экспрессии генов Института цитологии и генетики СО РАН. (к.б.н. В.И.Каледин, к.м.н. В.П.Николин, к.б.н. Н.А.Попова). В работе использовали следующие штаммы опухолей:

- карциному легких Льюис (LLC), возникающую спонтанно у мышей линии С57В1/6, растущую в виде солидного узла и метастазирующую гематогенно в легкие практически в 100% случаев (Zupi et al., 1980). Перевивали внутримышечно в бедро задней лапы по 1 -6x106 опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора;

- лимфому RLS - субштамм лимфомы LS, возникший у мышей CBA/Lac в результате многочисленных пассажей на фоне введения повышающихся доз циклофосфана. Характеризуется агрессивным течением и устойчивостью к циклофосфану, спонтанной регрессии не подвергается, метастазирует гематогенно в печень и почки. Перевивали внутримышечно в бедро задней лапы по 1x10' опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора.

Для изучения противоопухолевой активности соединений лупановые тритерпеноиды вводили мышам линии C57Black на фоне сформированного первичного узла ежедневно по 50 мг/кг течение 8 дней (средняя эффективная доза амидов бетулоновой кислоты). Критерием противоопухолевого эффекта было уменьшение объемов опухоли по отношению к контролю, которые измеряли в период от начала ее визуализации до наступления массовой гибели животных в группе.

Для изучения корректорного действия тритерпеноидов лупанового ряда и их влияния на противоопухолевую и антиметастатическую эффективность цитостатической полихимиотерапии животных с перевиваемыми опухолями применяли модель экспериментальной полихимиотерапии. Использовали классическую схему CHOP, адаптированную для лабораторных животных (Каледин и соавт., 2000; Грек и соавт., 2002). Однократно парентерально вводили комплекс цитостатических препаратов в дозах, составляющих 1/5 от ЛД50 для мышей: циклофосфан («Биохимик», Саранск) - 50 мг/кг; доксорубицин - («ЛЭНС-Фарм», Москва) - 4,0 мг/кг; винкристин («Гидеон Рихтер», Венгрия) - 0,1 мг/кг, преднизолон («Гидеон Рихтер», Венгрия) - 5,0 мг/кг. Контрольным животным вводили эквивалентное количество физиологического раствора.

Полихимиотерапию CHOP проводили у мышей с перевиваемыми опухолями LLC и RLS соответственно на 10-й и 5-й дни после перевивки. Изучаемые соединения вводили через сутки после цитостатиков внутрижелудочно в курсовом режиме в дозе 50 мг/кг в течение 8 дней. Животным группы сравнения проводили только лолихимиотерпию. Контрольной служила группа животных-опухоленосителей, которая получала внутрь водно-твиновую взвесь. В период введения агентов оценивали их влияние на рост опухолевых умов путем измерения их размеров штангенциркулем в трех взаимно перпендикулярных направлениях. Противоопухолевый эффект определяли по величине индекса торможения роста опухоли (ТРО), который рассчитывали как отношение разности средних объемов опухолей в контрольной и опытной группах к ее среднему объему в контроле.

В сыворотке крови определяли активность трансаминаз (AJIT, ACT) и концентрацию вторичных продуктов окисления (TBARS). Для морфологического анализа и определения степени метастатического поражения брали ткани легких, печени и почек.

Гистологическое исследование. Полученный для морфологического исследования материал подвергали гистологической обработке на комплексе MICROM («Карл Цейс» Германия) по стандартной методике. Окрашенные препараты исследовали методом световой микроскопии в проходящем свете на микроскопе Axioskop 40, с последующим микрофотографированием с использованием фотокамеры AxioCam MRc и программного обеспечения AxioVision 4.5.

Объёмную плотность (Vv%) метастазов подсчитывали по методу Автандилова

(Автандилов, 1990) с использованием окулярной сетки на 289 точек. Поверхностную аютность метастазов (Sv %) определяли путем подсчета плошали метастатических очагов с помощью программы «Видео-Тест». Интенсивность процесса метастазирования оценивали по частоте метастазирования (4M) (отношение чиста животных с метастазами к общему количеству животных в группе) и индексу ингибировамия метастазирования (НИМ): (А ,_х В ,.)-(А х В) х 100%, где

(А. х В.)

А , - частота метастазирования в контрольной группе, А - частота метастазирования в опытной группе, В * - плотность метастазов у животных контрольной группы, В -аютность метастазов у животных опытной группы.

Статистическая обработка данных экспериментов осуществлялась с использованием лзкета программ «Statisiica 7.0» (Statsoll). Уровень достоверности различий между экспериментальными и контрольной группой оценивался по ! критерию Стыодента и и критерию Вллкоксонл-Малиа-Унтни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В процессе компьютерного прогнозирования спектра биологической активности соединений в программе PASS были получены значения вероятности drug-likeness для производных трнтерпенондов лупанового ряда - бетулина и бетулоновой кислоты, а также для производных урсоловой кислоты. С использованием программы PASS проанатизировано наличие у 21 производного ряда лупана и 14 производных ряда урсана широкого спектра фармакологических активностей с коэффициентом вероятности выше 0,4. Такие данные могут стать основой для выявления тон или иной активности при проведении экспериментального скрининга in viro. В частности, для всех исследованных в данной работе трнтерпеноидов лупанового и урсанового ряда установлена высокая вероятность наличия противовоспалительной, гепатопротекторной и противоопухолевой активности, что согласуется с литературными данными (Толстикова и соавт., 2006; Fulda, 2009, Ikeda et al., 2008).B таблице 1 представлены вероятности наличия различных типов активности для производных лупановго ряда.

Таблица I. Вероятность и значения р„ различных видов биологической активности для соединений лупанового ряда_________^____________________

Шифр Drug-likeness Противоопухолевая Противовоспалительная Гепатопротесторная

Бегт\лин 0.995 0,733 0.61 0,965

БК 0.99 L 0,719 0.723 0,802

Of 2 0,945 0,664 0.647 0,666

Ot"3 0,974 0,634 0,661 0,876

Of 4 0.977 0,688 0,659 0,915

Of 5 0.9S5 0.7! 0.673 0.887

Of 6 0.959 0,731 0,499 0.582

Of 7 0.98 0,653 0.676 0.657

Of 8 0.919 0,667 0.626 0,585

Of 9 0,937 0.6S2 0,687 0,668

Of 10 0,934 0.658 0,642 0,496

Of 11 0.945 0.527 0,407 0,477

Of 12 0,886 0,6 0,507 0,639

Of 13 0,986 0,71 1 0,701 0,836

Of 14 0,964 0,569 0,63 0,568

Of ¡5 0.X 19 0,533 0.572 0,498

Of 16 0,991 0,737 0,668 0,798

Of is 0,957 0,630 0,68 0.651

Of 19 0,971 0,559 0,487 0.648

Of 29 0,942 0.614 0.482 0,919

Of <10 0,793 0,51 0.61 0.337

Of 41 0,988 0,606 0,806 0,55)

Of 46 1 0.942 0,539 0,764 0.399

Все новые производные бетулина и бетулоновой кислоты являются потенциально

высокоактивными фармакологическими агентами. Значения вероятности drug-likeness для них укладывается в диапазон 0,79 - 0,99. Для производных Of 7 (3-оксо-17Ь-карбамоил-28-норлуп-20(29)-ен), Of 14 (никотинат 3-оксима бетулоновой кислоты), Of 19 (3-оксо-28-(<Э'-метил-1-изолейцино)-карбонил-28-луп-20(29)-ен) и Of 41 (3-оксо-28-(К-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен) значения вероятности их активностей были максимальными. Самое высокое значение вероятности drug-likeness (0,988), сравнимое со значением для бетулоновой кислоты (0,99), было определено для Of 41 - производного бетулоновой кислоты с метилпиперазином по 28 положению.

Среди новых производных бетулина и бетулоновой кислоты выявлен ряд агентов, потенциальная биологическая активность которых превышает таковую для исходных соединений. В частности, среди производных бетулина с более высокой потенциальной противовоспалительной активностью оказались соединения Of 3 (ЗЬ,28-ди-0-никотинат бетулина), Of 4 (ЗЬ,28-ди-0-метоксициннамат бетулина), Of 5 (ЗЬ,28-ди-0-циннамат бетулина), Of 13 (3,28-ди-0-ацетил-29-норлуп-20-он) и Of 18 (3,28-ди-0-ацетил-29-норлуп-20-оксим). Производное бетулоновой кислоты Of 16 (ЗЬ-гидрокси-22(17-28)-абео-луп-17(28), 20(29)-диен) демонстрирует более высокую вероятность drug-likeness и вероятность наличия противоопухолевой активности. Для производных бетулоновой кислоты Of 41 (З-оксо-28-(Ы-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен) и Of 46 (N-метилпиперазид оксима бетулоновой кислоты) показана более высокая по сравнению с исходным соединением потенциальная противовоспалительная активность. Для соединения Of 29 (3-okco-28-(N-карбонил-0'-метил-£-метионин)-луп-2О(29)-ен) установлена несколько более высокая, чем у других производных, гепатопротекторная активность, а у соединения Of 6 (метиловый эфир [3, 2-с]-пиразол-луп-20(29)-ен-28-овой кислоты) - противоопухолевая активность.

Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что введение в структуру бетулина остатков различных органических кислот (уксусной, никотиновой, коричной, метоксикоричной) в 3 и 28 положение с образованием сложных эфиров бетулина приводит к повышению потенциальной противовоспалительной активности. Все рассматриваемые модификации бетулина не приводят к существенному снижению гепатопротекторной и противоопухолевой активности.

Влияние заместителей на потенциальную фармакологическую активность бетулоновой кислоты неоднозначно. Потенциальная общая фармакологическая и противоопухолевая активность возрастает в результате изменения тритерпенового остова в случае нор-производного бетулоновой кислоты с измененной структурой - агент Of 16 (ЗЬ-карбокси-22(17-28)-абео-луп-17(28),20(29)-диен). Отличия этой молекулы от базовой структуры -перегруппировка атома С28 с образованием шестичленного цикла Е и двойной связи между С17 и С28, а также наличие остатка уксусной кислоты в 3 положении. Потенциальную противоопухолевую активность также усиливает образование дополнительного гетероцикла по 2 и 3 положениям цикла А бетулоновой кислоты у производного Of 6 (метиловый эфир [3, 2-с]-пиразол-луп-20(29)-ен-28-овой кислоты). Повышение потенциальной противовоспалительной активности наблюдалось у производных Of 41 и Of 46, что может быть связано с наличием у этих соединений N-метилпиперазиновой группы в 28 положении, хотя, по сравнению с оксимом бетулоновой кислоты Of 2, у N-метилпиперазид оксима бетулоновой кислоты Of 46 существенно снижается потенциальная противоопухолевая и гепатопротекторная активность. Повышение потенциальной гепатопротекторной активности наблюдается у производного Of 29, которое является амидом бетулоновой кислоты, где карбоксильная группа при С28 связана с остатком метилметионина.

В таблице 2 представлены результаты компьютерного прогнозирования потенциальной биологической активности производных урсанового ряда.

Таблица 2 Вероятность <1шу-1|келс55 и значения р. различных видов биологической активности для производных тритерпеноидов урсановою ряда ___

Шифр Огий-Нкеп«« 1 Противоопухолевая Противовоспалительная Гепатопротекторная

УК 0,995 0.704 0.651 0,937

14 0.990 0.659 0.609 0,981

15 0.991 0,641 0.677 0.864

16 0,994 0,665 | 0.674 0.988

33 0.957 0.62.3 1 0,524 0.971

34 0,992 0.613 1 0.683 0,990

35 0,994 0.634 0,674 0,992

36 0.983 0.554 0,456 0.943

37 0.991 0.701 0.591 0.953

Зв 0,975 1 0,597 , 0,635 0.805

39 0.992 ! 0,611 0.843 0.693

40 0,990 0.558 0.452 0.978

41 0.989 0,564 0.463 0.983

42 1 0,094 0,545 0,582 0,959

Все новые производные урсоловой кислоты показывают высокую вероятность с!яш-НкелевБ в диапазоне 0,957 - 0,994, что говорит о выраженной фармакологической активности этих соединений.

Таким образом, модификация структуры урсоловой кислоты до производных 15, 16,34, 35 и 39 повысила вероятность наличия у них противовоспапительной активности. Повышение вероятности наличия гепатопротекторной активности отмечено у производного 35 Все синтезированные производные сохраняют вероятность наличия гепатопротекторной активности на уровне урсоловой кислоты, кроме соединения 39 В результате всех рассмотренных модификаций структуры урсоловой кислоты снижается вероятность наличия противоопухолевой активности, кроме производного 37, которое демонстрирует сохранение уровня потенциальной противоопухолевой активности на уровне урсоловой кислоты.

Вероятность начичия противовоспалительной активности возрастает в результате введения в структуру урсоловой кислоты заместителей как в 3, так и 28 положение. Потенциальная противовоспалительная активность возрастает в результате окисления гидроксилыюго радикала при СЗ до окси-группы (агент 15), введения в СЗ остатка уксусной кислоты (агент 16). Такой же эффект наблюдается в случае образования сложного эфира урсоловой кислоты по С28 и этоксиацетата (агент 34), а также сложного эфира урсоловой кислоты по С28 и глнколсвой кислоты (агент 35). Существенно возрастает вероятность наличия противовоспалительной активности в результате введения в молекулу З-ацетата урсоловой кислоты (агент 15) имидазола в 28 положение (агент 39).

Гепатопротекторная активность всех рассмотренных производных мало зависит от заместителей по 3 и 28 положению, что, видимо, связано с высокой базовой гепатопротекторной активностью тритерпеновой структуры урсоловой кислоты. Исключением является соединение 39, в структуру которого был введён имидазод по 28 положению. По сравнению с производным 15 (аналогичная молекула без имидазола) гепатопротекторная активность агента 39 существенно снижается.

Введение заместителей в структуру урсоловой кислоты по 3 и 28 положению снижает вероятность наличия противоопухолевой активности у всех новых производных, за исключением агента 37, в структуре которого присутствует оксирановый цикл по 28 положению.

2-гидроксиаллил урсолат (агент 35), являясь основанием, обладает значительно более выраженной потенциальной противовоепшштельной и противоопухолевой активностью по сравнению со своей калиевой солью (агент 42).

Таким образом, в результате виртуального скрининга в программе РАЭБ для новых производных были установлены наиболее перспективные фармакологические эффекты, которые мотут быть обнаружены в экспериментальных исследованиях.

Противовоспалительная ак-тиввость производных лупаяового ряда изучпась на модели гистачинового отека. Результаты исследования представлены в таблице 3

Противовоспалительная актиппость производных урсавового ряда изучалась на моделях каррагенинового и гистаминового отёка. Результаты исследования представлены в таблицах 4 и 5. Все соединения вводили в дозе 20 мг/кг однократно внутрибрюшинно.

Таблица 3. Противовоспалительная активность производных лупанового ряда на модели гистаминового отёка.

Группа ио, %

Контроль 19,8*1,53

Индом етацин 12,24*0,98**

Бстулин 13,31*1,06*

БК 14,22*1,13*

012 12,12*4,31

оп 11,76*0,94**

0(4 13,48*3,59

ОП 14,69*2,34

ОГ 6 17,6*1,64

ОГ 7 21,15±1,69

ОГ 8 18,89*1,51

ОГ 9 19,84*1,61

ОГ 10 18,3*1,5

ОГ 11 ю,1б*о,81**

ОТ 12 19,15*2,03

опз 17.4i3.21

ОП4 19,44*1,55

ОП5 12,36*0,99»

ОГ 16 14,75*4,26

ОГ 18 17,56*1,8

ОТ 19 18,16*1,45

ОТ 29 20,28*1,62

ОГ 40 14,95*1,19*

ОГ 41 20,53*1,64

ОГ 46 19,52*1,34

Таблица 4. Противовоспалительная активность производных урсанового ряда на модели каррагенинового отека.

Таблица 5. Противовоспалительная активность производных урсанового ряда на модели гистаминового отека

Группа ИО, %

Контроль 59,3 ±2,от

33 62,8*3,4##

34 61,0*4,1#

36 54,6*4,2

37 63,0*2,8##

40 54,4*4,9

41 71,0±4,5*##

42 64,6*5,0«

35 68,8*3,7*»

Индом етацин 43,4*3,5**

Группа ИО, %

Контроль 79,07*4,23»

УК 74,95*4,2

14 78,13*3,43#

15 70.57*2.34

16 70,55*2,74

38 74.63*1,46

39 74,73*3,99«

Индомегацнн 64,07*4,57*

Группа ИО, %

Контроль 29,57*3,11Н

УК 16,82*3,00*

14 15,67*2,47*

15 23,76*3,03»

16 19,3*2,56

35 15,21*1,65**

38 13,07*1,02**'

16,94*1,06**

Индомегацнн 13,83*1,55**

Группа ИО, %

Контроль 21,26*2,63«

33 19,03*1,80«

34 14,23*2,34

36 16,39*0,99

37 16,66*1,79

39 16,32*1,48

40 14,56*1,79

41 11,39*1,38«

Индом етацин 12,50*1,83*

*р<С) 05, **р<0,С1 - по сравнению с контролем;

' р"' 0,05, "р<0,0! - по сравнению с группой сравнения.

*р<0,05; **р<0,01, •♦•рс0,001 -яо сравнению с контролем; "р<0,05; "р''0,01 - по сравнению с группой сравнения.

*р<0,05; **р<0,01 - по сравнению с контролем

В результате экспериментального исследования противовоспалительной активности новых производных бетулина и бетулоновой кислоты достоверный противовоспалительный эффект проявили бегулин, бетулоновая кислота и их производные ОГ 3, ОГ11, ОГ 15, ОГ 40. Выраженность противовоспалительного действия бетулина (32,8%) и бетулоновой кислоты (28,2%) была ниже препарата сравнения индометацина (38,2%), Модификация бетулина до его 3,28-диникотината ОГ 3 вызвала достоверное повышение противовоспалительной активности до 40,6% от контрольной группы, что сравнимо с действием референсного препарата. Выраженную достоверную противовоспалительную активность проявило производное бетулоновой кислоты ОГ И (3-оксо-17ЩМ-децилуреидо)-28-норлуп-20(29)-еи). Противовоспалительная активность ОГ 11 (З-оксо-17(5-(Ы-децилуреидо)-28-норлуп-20(29)-ен) выше, чем у индометацина (38,2%) и составляет 48,7% по отношению к контрольной группе. Сравнимую с индометацином достоверную противовоспалительную активность (37,6%) показало соединение с диоксииминовыми группами при СЗ и С28 в структуре метилового эфира бетулоновой кислоты ОГ 15. Для диаминодифенилсульфонового производного бетулоновой кислоты ОГ 40 была обнаружена достоверная противовоспалительная активность (24,5%).

Таким образом, достоверное повышение противовоспалительного эффекта наблюдалось в результате: введения в тритерпеновую структуру лупанового типа остатков никотиновой кислоты по 3 и 28 положению (ОГ 3), модификации структуры бетулоновой кислоты путём введения Ы-децилуреидного фрагмента с образованием 3-оксо-17{ЦЫ-децилуреидо)-28-норлуп-20(29)-ен (ОГ 11), введения диоксииминовых групп в структуру метилового эфира бетулоновой кислоты (ОГ 15Х а также при введении в структуру

бетулоновой кислоты диаминодифенилсульфонового фрагмента (ОГ 40).

По результатам эксперимента на модели каррагенинового отёка установлено, что ни одно из производных урсоловой кислоты не проявило значимой противовоспалительной активности (достоверного снижения индексов отска по сравнению с контролем не выявлено) на каррагениновой модели воспаления. Тем не менее, можно отметить соединения № 15,16, 36, 38, 40 и урсоловую кислоту как агентов с потенциально возможными противовоспалительными свойствами, поскольку они продемонстрировали слабый противовоспалительный эффект, незначимо отличающийся от препарата сравнения. Следует отметить, что в условиях данной модели два агента - № 35 и 41 - оказали провоспапительное действие, достоверно повысив индекс отека относительно контроля.

В результате исследования противовоспалительной активности на модели гистаминового отека установлено, что урсоловая кислота, агенты № 14, 35, 38, 41 и 42 проявили значимую противовоспалительную активность (достоверные различия с контрольной группой). Наиболее выраженный противовоспалительный эффект отмечен у агентов № 35,38 и 41. Интересным является тот факт, что соединения № 35 и № 41 проявили активность на модели гистаминового отёка, но оказали провоспалительное действие на каррагениновой модели. Можно предположить, что оба агента селективно взаимодействуют с Н1-рецепторами, ингибируя гистаминовый отёк.

Изучение антиоксидавтного и гепатопротекгориого действия нронзводньп лупанового в урсанового ряда.

В следующей серии экспериментов были проведены исследования фармакологического действия производных лупанового и урсанового ряда в условиях модели острого токсического поражения печени. В рамках этой модели изучается влияние агентов на уровни шаивности трансаминаз АЛТ и АСТ, щелочной фосфатазы (ЩФ), а также на концентрацию продуктов ТВ АКБ. Результаты исследования агентов лупанового ряда представлены в таблице 6, агентов урсанового ряда - в таблице 7. Все агенты вводили в дозе 50 мг/кг однократно внутрижелудочно.

Таблица 6. Биохимические параметры крови животных с введением производных лупанового ряда в условиях СС1, -гепатита_ __________________

Группа АЛТ, Ел/л АСТ, Ед/л ЩФ, Ед/л ТВАИ8, мкмоль/л

Контроль 259,4421,8 323,1434,1 421,3436,8 4,440,6

Дигидрокверцитин ]45,84!2,3«* 181,3419,1* 463,4445,7 3,440,5*

Бетулин 141,6431,3« 184,8419,5** 420,5±34,2 3,240,4*

БК ! 15,449,7*« 134,4±14,2** 460,5±39,1 340,4««

ОГ 2 144,2412,1* 181,6419,2* 500,9452,1 3,140,4««

огз 243,6±20,6 348,9441,5 418,8432,7 3,140,6«

ОГ 4 299,3±25,2 224,6454,6 428±44,1 2,9±0,4»

ОГ 5 210,6434,8 224,9451,3 450,4442,1 3,641,1

ОТ 6 224,6431,6 298,5434,8 421,7±36,8 3,940,8

ОГ 7 219,5429,4 254446,3 457,1±40,4 3.341,2

ОГ 8 159,8±13,4* 209,4422,1* 276,8424,2* 3,940,7

ОГ 9 228.5±23,4 241,7416,8* 339,6456,3 4,640,4

ОТ 10 353,8429,7* 386,1434,6 412436,7 5,140,7

ОГ 11 156,7451,6 228,8454,8 389,7444,6 3,240,9

ОГ 12 256,8±17,4 248,5*57,8 401,1433,5 3,840,4

ОГ 13 239,2±31,8 270,8±44,6 406,1±38,1 440,4

ОГ 14 203,4±78,4 273443,2 391±43,8 4,240,5

ОГ 15 192416,32 259,1427,3* 298,7426,1 * 2,541,4

ОГ 16 200,3432,6 253156,6 420,5*43,2 3,140,7

ОГ 18 218,7428,4 326,9±38,2 435,6436,9 1,540,2"

ОТ 19 126,1 ±10,6* 161,9417,1* 425,5±4б,8 3,540,7

ОГ29 242,8416,7 276,6432,1 418,8433,8 3,840,5

ОГ 40 355,1±56,3 401,9458,8 415,8±48,4 5,840,9

ОГ 41 384,9±62,4 363,8424,5 463,9±54,2 5,240,6

ОГ 46 260,2424,2 341,2432,5 411,2447,4 4,440.7

*р<0,05; **р<0,01 - по сравнению с контролем.

Таблица 7 Биохимические параметры кропи животных с введением производных урсанового ряда в условиях ССЬ -гепатита___________________

Группа > А Л Г. Ед/л АСТ. Ед/л ЩФ, Ед/л ГИДмкмоль/л

Контроль ! 159.3±20.4 121.5*11.1 530,3*47,4 4,9*0,5

Дигидрокверцитин 54.3*10,9*" 80,9*11.1* 735,9*66,7* 3.7*0.3*

УК ; 57,1*10,2*** 71,1*13,5* 442,6*55,8 3,8*0,3

14 : 186,6*9,2 150,0*10,9 589,5*53,1 3.7*0,4

15 1 95.3*16,8* 126,2120,1 501.8*27,4 2,0*0,2***1««

16 : 75.9*16.1** 58.3*9.2" 507,0*35,5 2,5*0,3**Д

33 ! 42,9*2,2*** 101,2*13.1 3,1*0,4*

34 50,6*5,5*** ! 94.0*14,3 2,6±0.2*"<(

35 81,3*17,9* 56.0*8,6"* 639,1*88,2 3,1*0,3**

36 46,2*3,7*** 96,4*13.1 2,9*0.3 **

37 : 47,7*5.9** * 70,2*11.9* 4.4*0.8

38 49,6*8,8*** 62,1*13,6" 388.7*102.8 4.0*0,3

39 ; 50.0*10,0*** 92,3*24.1 ,373.4*40.0* 3,5*0.3*

40 : 54.7±5,9*** 62.4*5.9*** | 3.8*0.4

41 60,5*6.6"* 75.0*13,1* 1 3.2*0,1*

42 ; 43,8*11,1*** ! 51.3*11.3" 326,8*25,7** | 3,6*0.2*

*р<0,05, "р-0.01. ***р''0.001 - по сравнению с контролем, 'р<0,05, "р-'О/!1. - - по сравнению с фуппой сравнения

Достоверную антицитолитическую активность на модели острого токсического норзженмя печени проявляют оксим бетулоновой кислоты ОГ 2, метиловый эфир 2-фурфурилиден-бетулоновой кислоты ОГ 8, диоксиминовое производное ОГ 15 и амид бетулоновой кислоты ОГ 19 Антицитолитический эффект этих соединений не уступает препарату сравнения дигидроквериитнну. Интересно, что простая модификация 2-фурфурилиден-бетулоновой кислоты (ОГ 10) до её метилового эфира (ОГ 8) приводит к выраженному усилению антицитолитической активности, что выражается в достоверном понижении активности трансамнназ в сыворотке экспериментальных животных. Необходимо отметить, что новое производное метиловый эфир 2-бензилиден-бетулоновой кислоты (ОГ 9) достоверно снижает активность аспартатаминотрансферазы (АСТ) до 74,8 % от уровня контрольной группы.

В наших исследованиях были установлены соединения, обладающие достоверным антихолестазным действием. Это метиловый эфир 2-фурфурилиден-бетулоиовой кислоты (ОГ 8) и метиловый эфир 3,20-диоксимино-29-норлуп-28-овой кислоты (ОГ 15), которые достоверно понижают активность ЩФ в сыворотке экспериментальных животных.

Среди новых производных лупанового ряда были выявлены соединения, достоверно снижающие концентрацию ТВАКЭ в сыворотке экспериментальных животных. Это оксимы бетулоновой кислоты ОГ 2 и ОГ 18, а также 3|3,28-ди-(?-никотинат бетулина ОГ 3 и Зр,28-ди-О-метоксициннамат бетулина ОГ 4, которые превосходят по антиоксидантной активности препарат сравнения дигидрокверцитин.

По результатам экспериментального исследования гепатопротскторной и антиоксидантной активности новых производных лупанового ряда установлено, что достоверное повышение гепатопротекторного действия происходит при модификации окси-группы при СЗ до оксимной (ОГ 2), при введении в структуру метилового эфира бетулоновой кислоты фурфурклиденовой группы во 2 положение (ОГ 8). при введении в структуру бетулоновой кислоты двух диоксиминовых групп в 3 и 28 положение (ОГ 15), а также в результате образования амида бетулоновой кислоты с остатком изолейцина (ОГ 19).

Антиоксидантная активность достоверно повышается при наличии в молекуле бетулоновой кислоты оксимных групп в 3 (ОГ 2) и 20 положении (ОГ 18). Введение в молекулу бетулина остатков никотиновой и метоксикорнчной кислот в 3 и 28 положение (ОГ. 3, ОГ 4) не вызывает существенного изменения антиоксидантной активности новых производных по сравнению с базовой структурой, сохраняя их достоверный антиоксидантный эффект. Полученные результаты согласуются с данными о гепатопротекторной и антиоксидантной активности производных бетулоновой кислоты, полученными ранее в ЛФИ НИОХ СО РАН (Толстнкова и соавт., 2006).

и

В результате исследований у большинства из производных урсоловой кислоты обнаружены выраженные гепатопротекторные свойства и умеренная антиоксидантная активность. Все агенты (за исключением агента № 14) оказывали достоверный антицитолитический эффект. Максимальное снижение активности обеих трансаминаз отмечено у агентов № 16, 35, 37, 38, 40, 41, 42 и урсоловой кислоты, не уступавших дигидрокверцетину. Несколько менее выраженный антицитолитический эффект продемонстрировали соединения № 33, 34, 36 и 39. Следует отметить достоверное антихолестазное действие у агентов № 39 и 42, а также подобную тенденцию у соединения № 38. Достоверное антиоксидантное действие было обнаружено у агентов № 15, 16, 33, 34, 35,36,39,41, 42.

Таким образом, в результате проведённого компьютерного анализа и исследования противовоспалительного, гепатопротекторного и антиоксидантного действия новых производных бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты выявлены высокоактивные соединения. Среди соединений ряда лупана это агенты Of 2, Of 3, Of 15, Of 40, Of 41. Среди них, комплексным противовоспалительным и гепатопротекторным действием обладает агент Of 15, а агент Of 3 проявляет как противовоспалительное, так и антиоксидантное действие. Перспективными противовоспалительными агентами являются соединения Of 3, Of 15 и Of 40. Агент Of 2 обладает выраженным гепатопротекторным и антиоксидантным действием, что может стать основой для создания перспективного гепатопротектора. В ряду производных урсанового ряда были найдены соединения с выраженным противовоспалительным действием - агенты 35, 38 и 41. Большинство новых производных урсанового ряда обладают антицитолитическим и антиоксидантным действием, сравнимым с базовым соединением - урсоловой кислотой и референсным соединением дигидрокверцитином. Эти данные согласуются с результатами виртуального скрининга новых производных урсоловой кислоты. Следует отметить производные урсоловой кислоты с комплексным действием - это агенты 35 (обладает противовоспалительной, антицитолитической и антиоксидантной активностью), 38 (противовоспалительная и антицитолитическая активность) и агент 41 (противовоспалительное, антицитолитическое и антиоксидантное действие). Эти агенты являются перспективными соединениями для разработки новых лекарственных агентов, которые могут быть использованы в терапии различных заболеваний, в том числе и как корректоры побочного действия препаратов полихимиотерапии.

Противоопухолевую актнвнссть тритериеноидов лупанового ряда изучали выборочно для соединений разных структурных типов с использованием нескольких видов перевиваемых опухолей при разных режимах и способах введения.

Результаты изучения противоопухолевого действия наиболее перспективных производных тритерпеноидов лупанового ряда на моделях лимфомы RLS и карциномы лёгких Льюис представлены в таблице 8. Агенты вводились в дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно ежедневно в течение 8 дней.

Таблица 8. Противоопухолевая активность производных лупанового ряда.

Группа Химическое название агента Вид опухоли TPO, %

ЦФ Референс (циклофосфан) LLC RLS 36 40

БК Бегулоковая кислота LLC RLS 0 22

Of3 зр,28-ди-0-никотинат бетулина LLC RLS 18 31

Of 15 Метиловый эфир 3,20-диокси,чино-29-норлуо—28-овой кислоты LLC RLS 24 28

Of 40 3-оксо-28-(4,4'-диаминодифенил-су льфон)-карбонкл-луп-20(29)-ен LLC RLS 11 0

Of 41 З-оксо-28-fN-м етилпипер ази н)-карбонил-луп-20(29)-ен LLC RLS 23 0

Примечание: референс-препарат циклофосфан вводился внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг 2 дня.

Оценивая выраженность противоопухолевого эффекта лупановых агентов, можно сделать вывод об их относительно невысокой противоопухолевой активности, которая не превышала 50 % по критерию ТРО (индекс торможения роста опухоли рассчитывается как отношение разности массы опухоли в контрольной и опытной группах к массе опухоли в контроле) и существенно уступала эффекту циклофосфана. Вместе с тем, необходимо отметить положительное свойство изучаемых соединений, которые не оказывают стимулирующего действия на рост трансплантатов. Значимая противоопухолевая активность обнаружена у Зр,28-ди-0-иикотината бетулина (ОГ 3), 3-оксо-28-(Н-меггилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ена (ОГ 15), 3-оксо-28-(4,4'-диа.чинодифенилсульфон)-карбонил-луп-20(29>ена (ОГ 41) и 3-оксо-28-(К-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ена (ОГ 41) (Баев и соавт., 2007).

Исследование корректорного действия тритерпеноидов лупанового ряда.

Основными требованиями к потенциальному корректору побочных эффектов цитостатиков являются низкая токсичность, отсутствие стимулирующего влияния на опухоль и ее метастазы, цитопротективное воздействие на ткани и клетки, подвергающиеся воздействию токсических эффектов полнхи.чиотерапин, антиоксидантная активность. Корректорное действие было найдено у амидов бетулоновой кислоты (Сорокина и соавт., 2004; Позднякова и соавт., 2005).

На основании результатов скрининга тритерпеноидов ряда лупана для дальнейшего исследования в качестве потенциатьных корректоров цитостатиков были выбраны соединения, проявившие достоверные результаты на нескольких фармакологических эффектах и обладающие высокой вероятностью наличия противоопухолевого действия по результатам виртуального скрининга ОГ 3, ОГ 15, ОГ 40 и ОГ 41.

В связи с возможностью использования выбранных агентов в роли корректоров токсических эффектов цитостатиков необходимо было установить степень влияния выбранных агентов на действие экспериментальной модели ПХТ в условиях опухолевой модели.

Влияние лупановых тритерпеноидов на противоопухолевый эффект полихимиотерапии. Наблюдения за динамикой роста трансплантатов 1.1Х во время введения лупановых производных показало, что они не стимулируют опухолевый рост на фоне химиотерапии (табл. 9). У протестированных соединений -диаминодифенилсульфонового (ОГ 40), пиперазинового (ОГ 41) производного бетулоновой кислоты, диоксииминового производного метилового эфира (ОГ 15) и диникотината бетулина (ОГ 3) - не зафиксировано случаев достоверного увеличения объема опухолевых узлов в период введения агентов вслед за ПХТ.

Таблица 9, Влияние лупановых тритерпеноидов на противоопухолевый эффект полихимиотерапии мышей с карциномой легких Льюис. _______________

Группа Индексы ТРО 1Д.С, %

2 сутки 4 сутки 6 сутки 8 сутки

ПХТ 15*** 37*** 34*** 22***

Г1ХТ+ БК 7,3 29.8* 22 2 17,8

ПХТ+ОТЗ 31** 28» 28* 33***

ПХТ+(К 15 25** 28* 23* 21*

ПХТ+ОГ40 14 23**« 22**# 12*

ПХТ+ОГ 41 18** 36*** 30*** 18***

*р<0,05, *"р<0.0!. ***р<0,001 - по сравнению с контролем; ' р<0,05 - по сравнению с группой ПХТ.

Бетулоновая кислота не оказала значимого влияния на эффективность ПХТ. Достоверное повышение эффективности ПХТ, сравнимое с действием агентов ОГ 3 и ОМ 5, наблюдалось только ка 4 сутки после введения бетулоновой кислоты.

Диникотинат бетулина Of 3 уже через двое суток достоверно повышал противоопухолевую эффективность ПХТ и сохранял ее до конца введения. Диоксииминовое производное метилового эфира БК ОГ 15 в первые двое суток потенцировато эффект ПХТ, а в более поздние сроки эксперимента его вклад уменьшав. Метилпиперазиновое производное бетулоновой кислоты ОГ 41 также не оказывало влияние на активность

16

противоопухолевой терапии, а диаминодифенилсульфоновое производное бетулоновой кислоты ОГ 40 достоверно уменьшало противоопухолевое действие ПХТ.

Влияние трнтерпеноидов на антиметастатический эффект ПХТ. Анализ показателей метастазирования карциномы легких Льюис выявил высокую антиметастатическую активность самой цитостатической химиотерапии. Во всех группах с введением цитостатических препаратов наблюдалось существенное (в 3,8 - 7,5 раз) снижение объемной и поверхностной плотностей ■ метастазов в легких относительно контроля (табл. 10). Однако показатели метастазирования не имели достоверных различий с контролем ввиду значительных колебаний.

Таблица 10. Влияние лупановых трнтерпеноидов на показатели метастазирования карциномы легких Льюис в легкие мышей._______

Группа Объемная плотность метастазов,% Частота метастазирования, %

Контроль 3,38±1,92 83

ПХТ 0,48±0,29 55

ПХТ+ Of 3 1,23±0,45 89

ПХТ+ Of 15 1,45±0,62 91

ПХТ+ Of 40 1,64±0,65 92

ПХТ+ Of 41 0,59±0,37 90

Гепатопротскторпос и антиоксидантное действие соединений на фоне ПХТ.

Применение препаратов химиотерапии злокачественных опухолей вызывает развитие целого спектра нежелательных побочных эффектов. Это подавление органов кроветворения, угнетение функций сердечно-сосудистой системы, печени, почек, мозга, иммунной системы (Волкова, 2001). В сочетании с паранеопластическим токсическим синдромом эти побочные эффекты приводят к тотальному подавлению функций всех органов и систем организма, что значительно снижает положительный противоопухолевый эффект ПХТ и требует дополнительных медикаментозных мер поддержки организма в период лечения и реабилитации (Гольдберг и соавт., 2000, Трещалина и соавт., 2005; Pucheault, 2008) Такими препаратами поддержки в том числе являются антиоксиданты с гепатопротекторными свойствами, позволяющие снизить токсическое действие препаратов ПХТ на печень и кроветворные органы путём замедления процессов перекисного окисления липидов мембран клеток печеночной паренхимы и крови (Зенков и соавт., 2001).

В этой связи для соединений Of 3, Of 15, Of 40 и Of 41 было изучено гепатопротекторное и антиоксидантное действие на модели саркомы лёгких Лыоис в условиях экспериментальной полихимиотерапии (СНОР). Для корректности эксперимента были взяты следующие группы контроля: группа «Контроль» с перевитой карциномой лёгких Льюис, получавшая водно-твиновую эмульсию, группа «ПХТ», животные с перевитой карциномой лёгких Льюис на фоне введения препаратов ПХТ, группа «ПХТ+БК», животные с перевитой карциномой лёгких Льюис, которым вводили препараты ПХТ и бетулоновую кислоту. Также была введена группа интактного контроля («Интактные»), Данные исследования представлены в таблице 11.

Таблица 11. Влияние трнтерпеноидов на биохимические показатели сыворотки крови мышей с карциномой

легких Льюис в конце периода введения агентов в °/о относительно контрольной группы

Группа АЛТ, Ед/л ACT, Ед/л МДА, мкмоль/л

Интактные 78,6**»S 38,6*«*» 43,5**»»

Контроль 100 100 100

ПХТ 97 из 211»*

ПХТ+ БК 109,1 102 33,7**#

ПХТ+ Of 3 84 109 79

ПХТ+ Of 15 86 89 83

ПХТ+ Of 40 112 126* ИШ

ПХТ+ Of 41 108 118 85«*

*р<0,05, **р<0,01 - по сравнению с контролем; р<0,05, "р<0,01 - по сравнению с группой ПХТ.

Доказательством развития паранеопластического токсического эффекта является достоверное повышение активности ACT в группе «Контроль» на 60 %, активности АЛТ на 20 % и концентрации МДА на 45 % по сравнению с аналогичными показателями интактной группы.

В результате применения экспериментальной схемы НХТ по сравнению с группой «Контроль» активность маркеров цитолиза АЛТ и АСТ не изменялась. Однако концентрация МДА возросла более чем на 100 %, что свидетельствует о развитии выраженного окислительного стресса в ответ на введение цитосгатиков. Тем самым в условиях экспериментальной модели было показано токсическое воздействие препаратов ПХТ.

Введение бетулоновой кислоты в условиях опухоли на фоне применения экспериментальной схемы ПХТ («ПХТ+БК») не оказывало воздействия на активность показателей цитолиза, но концентрация МДА была значительно снижена (на 160 %) как по сравнению с контрольной группой, так и по сравнению с группой «ПХТ». Эти данные свидетельствуют о выраженном антиоксидантном эффекте бетулоновой кислоты в условиях экспериментальной модели ПХТ.

При изучении антииитолитического и антиоксидантного эффекта производных ОГ 3 и ОГ 15 в условиях перевитой опухоли на фоне введения препаратов ПХТ не было выявлено достоверных различий показателей соответствующих маркёров по сравнению с контролями.

В группе животных, которым вводили соединение ОГ 40 на фоне применения ПХТ («ПХТ+ОГ 40»), наблюдалось достоверное незначительное увеличение только активности АСТ по сравнению с контролем. Однако наблюдался выраженный антиоксидантный эффект, проявлявшийся достоверным снижением на 80 % концентрации МДА по сравнению с группой «ПХТ». В группе, где вводилось только соединение ОГ 40, наблюдалось аналогичное изменение показателей маркёров цитолиза и окислительного стресса.

Обнаружено, что введение соединения ОГ 41 на фоне ПХТ («ПХТ+ОГ 41») не вызывает изменения значений активности трансаминаз по сравнению с группой «ПХТ». Следует отметить достоверный выраженный антиоксидантный эффект, проявлявшийся снижением концентрации МДА на 110 % по сравнению с группой «ПХТ». В группе с введением только агента ОГ 41 наблюдалось достоверное увеличение активности трансаминаз и снижение концентрации МДА относительно группы «ПХТ».

На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что соединения ОГ 3 и ОГ 15 не оказывают достоверного гепатопротекторного и антиоксидантного действия как при изолированном введении животным с перевитой карциномой лёгких Льюис, так и при комбинированном применении совместно с препаратами ПХТ по схеме СНОР. Агент ОГ 40 оказывает цитолигическое действие в условиях опухолевой модели и при комбинированном применении с препаратами ПХТ, а также достоверно снижает уровень перекисного окисления, как при изолированном применении, так и в комбинации с препаратами ПХТ относительно группы «ПХТ». Агент ОГ 41 оказывает выраженное антиоксвдантное действие в условиях экспериментальной модели ПХТ (СНОР) на животных с перевитой карциномой лёгких Льюис. При изолированном применении агента ОГ 41 на животных с перевитой карциномой лёгких Льюис наблюдался цитолитический эффект.

Таким образом, в результате проведённых исследований среди производных тритерпеноидов лупанового ряда были выявлены перспективные корректоры токсических эффектов цитосгатиков - агенты ОГ 40 и ОГ 41. В частности, как в условиях экспериментальной ПХТ, так и при изолированном введении животным с перевитой карциномой лёгких Льюис оба агента показали выраженный достоверный антиоксидантный эффект. Важно отметить, что эти соединения не увеличивали объема опухолевых узлов в период их введения вслед за ПХТ и не повышали объёмную плотность метастазов в тканях экспериментальных животных. Кроме того, для агента ОГ 40 найдена сравнимая с индометацином достоверная противовоспалительная активность, а для агента ОГ 41 -противоопухолевая активность. Такое различие в фармакологической активности этих соединений, вероятно, определяется их химической модификацией.

Гистологическое исследование. Как известно, саркома лёгких Льюис характеризуется множественным метастазированием в ткань печени (2ир|' й а1., 1980), Наличие метастазов в печени приводит к сдавливанию внутрнпечёночных сосудов и желчных протоков, некрозам гепатоинтов и выраженной дистрофии, вызванной паранеопластическим токсическим эффектом (Волкова, 2001). Введение высокотоксичных препаратов ПХТ вызывает прямое

поражение гепагоцигон, связанное с подавлением их регенеративной и синтетической функции и проявляющееся дегенерацией и некрозами клеток печени со снижением концентрации гликогена в их цитоплазме (Позднякова и соавт., 2005). Таким образом, применение препаратов ПХ'Г на фоне опухолевого процесса приводит к тяжелому поражению печени и требует использования агентов - корректоров побочною действия нитостатиков. обладающих гепатопротекторным действием (Zhukova et al., 2005). С целью подтверждения наличия корректорного действия у перспективных агентов Of 40 и Of 41 было проведено гистологическое исследование тканей печени экспериментальных животных, а также изучалась морфология первичного опухолевого узла

Результаты патоморфологического анализа но каждой группе животных представлены

ниже.

Контрольная группа.

У животных контрольной группы наблюдались патологические изменения, связанные с влиянием паранеоиластических процессов, характерных для стадии прогрессии опухоли. В легких у всех животных на фоне умеренного венозного полнокровия выявлялись крупно - и ,мелкоочаговые метастазы, расположенные периваскулярно и субплеврально. Просветы терминальных бронхов и альвеол были эмфизематозно расширены. В паренхиме печени у всех животных выявлялись единичные мелкие клеточные метастазы и диффузные моноцеллюлярные некрозы гепатоштов. 11 печеночных клетках центролобулярных отделов долек развилась очаговая гидропическая дистрофия и мелковезикулярная липидная инфильтрация. Синусоиды были незначительно расширены, в просвете их выявлялись инфильтраты, состоящие из нейтрофилов В селезенке у всех животных выявлялась незначительная гиперплазия белой пульпы; в мозговом веществе - единичные мегакариоциты и незначительная инфильтрация полинуклеарами (нейтрофилы, эозииофилы). В эпителиоцитах дистальных и проксим&тьных канальцев почек экспериментальных животных выявлялась умеренно выраженная гидропическая дистрофия Данные гистологического исследования органов животных контрольной группы полностью согласуются с картиной метастатического поражения клетками саркомы легких Льюис, которая метасгазирует прежде всего в легкие и печень. Патоморфологическая картина даёт четкое представление о проявлениях паранеопластического процесса - это некрозы и дистрофия гепагоцигон, а также гиперплазия селезёнки. Гистологические данные подтверждают токсическое поражение печени, выявленное при исследовании активности биохимических маркеров цитолиза - AJIT и АСТ, а также маркера перекисного окисления липндов - продуктов TBARS.

Группа сравнения (ИХТ).

У мышей группы сравнения через 8 дней после проведения полихимиотерапии наряду с уменьшением метастатических очагов отмечалось усиление патологических сдвигов в органах, вызванных токсическим воздействием цитостатических препаратов. В легких на фоне венозного полнокровия, наблюдалось эмфизематозное расширение просветов терминальных бронхов и альвеол; у отдельных животных выявлялись лишь единичные периваскулярные клеточные метастазы. В паренхиме печени на фоне венозного полнокровия появились более грубые некродистрофические изменения, чем у животных контрольной группы: гидропическая и очаговая баллонная дистрофия, моноцеллюлярные и крупноочаговые некрозы гепатоцитов, выраженная инфильтрация синусоидов полинуклеарами, единичные метастатические клетки. В почках были отмечены тонкие базальные мембраны клубочков, расширение мезангиального матрикса. В эпителиоцитах дистальных и проксимальных канальцев выявлялась умеренно выраженная гидропическая дистрофия. В интерстициапьной ткани у всех животных были отмечены отек и венозное полнокровие. В селезенке наблюдалась гиперплазия белой пульпы, выраженная инфильтрация красной пульпы полинуклеарами, очаги вне-костномозгового кроветворения в стадии некроза. Таким образом, в результате гистологического исследования было получено подтверждение выраженного токсического действия препаратов ПХТ на клетки лёгких, печени, почек и селезёнки. Этот факт согласуется с литературными данными (Позднякова и

соавт., 2005), достоверным цитолизом и повышенным окислением липидов клеточных мембран по результатам биохимического исследования сыворотки животных группы «ПХТ» Отмечается снижение количества метастазов в легких и печени, что является проявлением антиметастатического действия препаратов ПХТ.

Группа «ПХТ + ОГ 40».

При введении агента ОГ 40 на фоне полихимиотерапии в легких объем метастатического поражения не уменьшается. Выявляются периваскулярно и субплеврально крупно и мелкоочаговые метастазы. Просветы бронхов и альвеол эмфизематозио расширены, сохраняется выраженное венозное полнокровие. В печени выявляется очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов центролобулярных отделов долек, диффузные моноиеллюлярные некрозы, ацидофильные клетки с пнкнотичными ядрами. Сохраняется выраженная инфильтрация синусоидов, портальных трактов полинуклеарами, единичные метастазы. В почках умеренно выражены явления тубулоинтерстициального нефрита. В селезенке выражена гиперплазия белой пульпы и инфильтрация синусов красной пульпы полинуклеарами, очаги внекостномозгового кроветворения находятся в стадии дегенерации. Гистологическая картина свидетельствует об отсутствии выраженного цитопротекторного эффекта у агента ОГ 40 в условиях опухолевой модели на фоне введения препаратов ПХТ. Патологические изменения в органах опытных животных сравнимы по тяжести с изменениями у животных группы сравнения (ПХТ)

Группа «ПХТ+ ОГ41».

При введении агента Of 41 на фойе подихимиотерапии в исследуемых органах отмечались следующие положительные изменения. В легких уменьшилась площадь метастазов, по сравнению с контролем В печени выявлено уменьшение степени некродистрофического поражения; уменьшение количества некрозов гепатоцитов (сохранились лишь моноцеллюлярные), преимущественно мелковезикулярная липидная инфильтрация, большое количество увеличенных в размерах купферовских клеток в просвете синусоидов. У всех животных этой группы по-прежнему сохранялась выраженная инфильтрация полинуклеарами синусоидов и портальных трактов. В почках также отмечено уменьшение степени тяжести дистрофического поражения эпителиоцитов (гидропическая дистрофия встречалась лишь в отдельных клетках), уменьшение явления отека интерстициальной ткани. В селезенке наблюдалась гиперплазия белой пульпы и увеличение количества очагов внекостномозгового кроветворения по сравнению с животными группы сравнения без признаков распада и дегенерации.

Таким образом, под действием соединения ОГ 41, вводимого на фоне ПХТ, уменьшилась степень дистрофических и некротических поражений экскреторных органов (печень и почки). Эти данные хорошо согласуются с результатами биохимического исследования сыворотки экспериментальных животных, где было выявлено выраженное антиоксидантное действие агента ОГ 41 в условиях опухолевой модели на фоне введения препаратов ПХТ (Сорокина и соавт., патент №2385324 от 27.03.2010).

ВЫВОДЫ

1. Впервые для пентациклических тритерпеноидов в программе РАЭБ проведен анализ спектра фармакологической активности и показана их высокая перспективность в качестве лекарственных агентов. На основании анализа данных компьютерного прогнозирования и экспериментальных исследований установлено существенное влияние химической модификации бетулина, бетулоновой и урсоловой кислоты по 3 и 28 положениям тритерпенового остова на их фармакологическую активность.

2. Компьютерный анализ спектра биологической активности производных урсоловой кислоты показал высокую вероятность наличия для всех изученных соединений гепатопротекторной активности и низкую вероятность наличия противоопухолевой активности. Потенциальная противовоспалительная активность возрастает в результате введения в СЗ окси-группы и остатка уксусной кислоты и при

образовании сложных эфиров по 28 положению, а также в результате введения в это положение имидазольного фрагмента.

3. На основании фармакологических исследований для всех изученных производных урсоловой кислоты обнаружена высокая противовоспалительная активность на модели гистаминового отёка, а также выраженная антицитолитическая и антиоксидантная активность. Для дальнейших исследований выбраны перспективные агенты 35, 38 и 41, проявляющие выраженное противовоспалительное, антицитолитическое и антиоксидантное действие.

4. Компьютерный анализ спектра биологической активности производных бетулина и бетулоновой кислоты показал, что введение в структуру бетулина остатков различных органических кислот в 3 и 28 положение с образованием сложных эфиров бетулина, а также введение в 28 положение структуры бетулоновой кислоты N-метилпиперазина приводит к повышению потенциальной противовоспалительной активности. Все рассматриваемые модификации бетулина и бетулоновой кислоты не приводят к существенному снижению гепатопротекторной и противоопухолевой активности.

5. На основании фармакологических исследований среди новых производных бетулина и бетулоновой кислоты выявлены наиболее перспективные агенты Of 2, Of 3, Of 15, Of 40 и Of 41, проявляющие противовоспалительное, гепатопротекторное и антиоксидантное действие, а также высокую противоопухолевую активность (Of 3, Of 15, Of 40 и Of 41).

6. Показано, что агенты Of 40 и Of 41 в условиях опухолевой модели на фоне введения экспериментальной полихимиотерапии не усиливают рост и диссеминацшо солидной опухоли и обладают корректорным действием, обусловленным их способностью снижать интенсивность окисления липидов.

7. Производное бетулоновой кислоты 3-оксо-28-(М-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (Of 41) является перспективным корректором побочных эффектов экспериментальной полихимиотерапии и может быть предложено для расширенного доклинического исследования в качестве полифункционального препарата терапии онкологических заболеваний.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Баев Д.С., Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Жукова H.A., Вееров ДС-, Флехтер ОБ. Новые производные бетулоновой кислоты с антиоксидантной и протиовопухолевой активностью // Мат. Ш всерос. научной конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». - Барнаул, 2007. - С. 78 - 82.

2. Сорокина ИВ , Толстикова Т.Г., Жукова H.A., Баев Д.С., Петренко Н.И., Шульц Э.Э. Аланинамвдные производные бетулоновой кислоты - перспективные корректоры цитостатической полихимиотерапии опухолей // Мат. И междунар. конф. «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений». - Ал маты, Казахстан, 2007. - С. 92.

3. Баев ДС., Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Жукова H.A., Казакова О.Б. Аятиоксидантная и гепатопротекторная активность новых производных бетулоновой кислоты // Бюл. Волгоград, научного центра РАМН. - 2003. - № 3. - С. 66 - 67.

4. Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Жукова H.A., Баев Д.С., Толстиков Г.А. Новые политаргетные агенты для полихимиотерапии опухолей И Сборник тезисов ежегод. науч. конф. «фундаментальные науки -медицине». - Новосибирск, 2008. - С. 14.

5. Sorokma LV., Tolstikova TG, Zhukova N.A., Baev D.S., Schultz E.E. Betulonic acid and its alanineamide derivatives - a new multy-target agents for tumor chemotherapy // Abstract book of EHRUCH 2-nd Wold Conference on Magic Bullets. - Nürnberg, Germany, 2008. - P. 305.

6. Баев Д.С, Сорокина ИВ, Толстикова Т.Г. Скрининг биологической активности производных бетулоновой кислоты с целью поиска потенциальных политаргетных препаратов-корректоров цитостатиков // Сборник тезисов конф. «Медицинская геномика и протеомика». - Новосибирск, 2009. -С. 75.

7. Vasilevsky S. F., Govdi A. I, Shults, E. E., Shakirov M. M., Sorokina I V., Tolstikova T. G., Baev D. S., Tolstikov G. A., Alabugin I. V. Efficient Synthesis of the First Betulonic Acid -Acetylene Hybrids and their Hepaioprotective and Anti-Inflarnmatory Activity И Bioorg. Med Cham. -2009. - V. ! 7. - Xs 14. - P. 5164 -

5169.

8. Baev D.S., Sorokina I.V., Tolstikova T.G., Kazakova O.B. 3-oxo-28-(K-methylpiperasine)-carbonyl-lup-20(29)-en: promising corrector of polychemotherapy's side effects U Abstract book of BIT'S Tth Annual Congress of International Drug Discovery Sciences and Technology. - Shanghai, China, 2009. - p. 127.

9. Харитонов Ю.В., Сорокина И.В., Шульц Э.Э., Толстикова Т.Г., Баев Д.С., Жукова НА., Толстикоъ ГА. 16-{2-Бензоиламин1>2-[3,5-Д0-трет-6утнл-4-гидроксифенил) алкилкарбзмоил]винил}-лабдатрнены с антиоксидантнымн, гепатопротекторными и гемостимулируюшими свойствами для коррекции побочных эффектов цитостатических препаратов // Патент РФ Хе 2346940, 20.02.2009.

10. Харитонов Ю.В., Сорокина И.В, Шульц Э.Э, Толстикова Т.Г., Баев Д.С, Жукова Н А., Толсгиков ГА (£)-Метил-1 &-(5-охсо-2-феннлоксазол-4-илнденметил}-15,16-эпокси-8(17),13(16),М-лабдатриен-] 8-оат, обладающий антиоксидантной, гепатопротекторной и гемостимулирующей активностью // Патент РФ № 2353620, 27.04.2009.

И.Харитонов Ю.В., Сорокина И.В., Шульц Э.Э., Толстикова Т.Г., Жукова НА, Толстиков ГА. Антиоксидант, обладающий гепатопротекторной и гемостимулирующей активностью // Патент РФ Нз 2364599, 20.08.2009.

12. Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Жукова Н.А., Баев ДС., Толстиков ГА., Козакова ОБ. Корректор паранеоплэстических повреждений и токсических эффектов цитотоксических полихимиотерапии (Оф 41) И Патент РФ Mi 2385324, 27.03.2010. - Бюл. № 9.

13. Баев Д.С., Сорокина И.В., Толстикова Т.Г. Компьютерный анализ спектра биологической активности новых производных бетулоновой кислоты // Химия в интересах устойчивого развития. - 2010. - Na 18. -С. 469 - 475.

14. Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Баев Д.С., Жукова Н.А, Харитонов Ю.В. Производные метнлл амб ертиан ата - перспективные корректоры цвтосгатяков с гепатопротекторной и гемостимулирующей активностью D Химия в интересах устойчивого развития. - 2010. - № 18. - С. 499 -504.

15. Sorokina I.V., Tolstikova T.G., Baev D.S., Tolstikov G.A. A new multifunctional agents synthesized on natural tiiterpenoid platforms // 2nd Animal Russian-Korean Conference «Current issue of natural products chemistry and biotechnology». - Novosibirsk, 2010. - P. 34.

16. Сорокина И.В., Баев Д.С., Толстикова Т.Г., Жукова Н А., Казакова ОБ., Гиниятуллина Г.В. N-метилпиперазкиамид бетулоновой кислоты - корректор противоопухолевой химиотерапии К 2-й Международный Конгрссс-Партнерикг по биотехнологии и биоэнергетике: Сборник тезисов. - Москва, 2010. -С. 172- 173.

17. Sorokina I.V., Tolstikova T.G., Baev DS., Zhukova N A, Tolstikov G.A Development of Cancer Chemopreventive Agents on Berulonic Acid Platform // Abstract book of ВГГ5 8th Annual Congress of international Drug Discovery Sciences and Technology. - Beijing, China, 2010. - P. 33.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - вланинаминотраисфераза

ACT - аспартатаминотрансфераза

БК - бетулоновоая кислота

ИО - индекс отека

ПХТ - полихимиотерапия

ТРО - индекс торможения роста опухоли

УК - урсоловая кислота

ЩФ - щелочная фосфотаза

CHOP - cyclophosphamide, hydroxydaunorobicin (doxorubicin), oncovin (vincristine), and prednisolone (англ.) - схема химиотерааевтического лечения неходжхинской лимфомы, состоящая из шшюфосфамида, доксорубицнна, винкристина и преднизолона

LLC - саркома лёгких Льюис

RLS - субштамм лимфомы LS, возникший у мышеи CBA/Lac в результате многочисленных пассажей на фоне введения повышающихся доз цикдофосфана

TBARS - thiobarbituric acid reactive substances (англ.) - реакционные соединения тиобарбитуровой кислоты, цветные комплексы продуктов окисления липидов и тиобарбитуровой кислоты

Формат бумаги 60x84 1/16. Объем печати 1]теч. лист. Тираж 100 экз.

Отпечатано на ротапринте Новосибирского института органической химии

им. Н.Н. Ворожцрва СО РАН 630090, г. Новосибирск, 90, пр. ак. Лаврентьева, 9.