Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Изучение полиморфизма RAGE-гена как фактора предрасположенности к развитию псориаза

На правах рукописи

Шульман Анна Яковлевна

Изучение полиморфизма ИАСЕ-гена фактора предрасположенности к развитию псориаза

14 00 11 — Кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2008

□ОЗ164998

003164998

Работа выполнена в отделении клинической дерматологии и отделе лабораторной диагностики ИППП и кожных болезней ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Всеволод Георгиевич Акимов

Научный консультант:

кандида! медицинских наук Олег Александрович Тсрман

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор

Доктор медицинских наук, доцент

Ксения Николаевна Суворова Андрей Николаевич Львов

Ведущее научное учреждение. Российский Универси1е1 Дружбы Народов, Москва

Защита диссертации состоится «¿3?» 2008 года в 12 часов на

заседании диссертационного совета Д208.115 01 при Федеральном Государс1венном Учреждении «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» по адресу 107076, г Москва, ул Короленко д 3, стр 6

С диссер1ацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Авюрефера! разослан <¿6» с/г^Жрг^, 2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Наталия Константиновна Иванова

Общая характеристика работы. Ак1уалыюс1ь работы

Проблема псориаза является одной из самых актуальных в современной дермаюлогии Это обусловлено высокой популяционнои частотой, которая сеюдня в подавляющем большинстве исследований оценивается в среднем в 35% со значительными колебаниями в зависимости от региона проживания и расовой принадлежности, хроническим, нередко тяжелым течением, неясное 1ыо этиологии и патогенеза, и, как следствие этого, несовершенством современных методов лечения (Суворова КН, 1990, Мордовцев ВН, 1991, Скринкин ЮК, 1997, Asumalahti К, 2003) Также следует отметить, чю в последние десятилетия отмечается неуклонный рост заболеваемости псориазом, в том числе среди детей (Кубанова А А , 2007, Мордовцев В Н , 2002) К настоящему времени удельный вес больных псориазом среди всех больных дермаюзами составляет 12-15% (Соколовский Е В ,1999)

О медико-социальной актуальности проблемы псориаза свиде1ельсгвукп данные, приводимые Национальным фондом псориаза США (NPF - National Psonasis Foundation) расходы на лечение составляют 1,6-3,2 млрд долл в год, ежегодно более 1,5 млн человек обращаются за медицинской помощью по поводу исориаза, 10-15% случаев заболевания регистрируются у деюй до 10 лет Эти данные аналогичны таковым по Российской Федерации В настоящее время число больных псориазом в России составляет приблизительно 3 млн человек, отмечается тенденция к росту заболеваемости среди лиц трудоспособного возраста, увеличению числа тяжелых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания (Беляев Г М, 2005) Сложившаяся сшуация предполагает поиск новых путей профилактики псориаза и создания меюдов прогнозирования его 1ечения Научной основой разрабо1ки системы медицинской профилактики считаются результаты эпидемиологических исследований В связи с широким распространением неинфекционной патологии (сердечно-сосудистые, онкологические, кожные заболевания) с 50-х гг двадцатого столетия термин «эпидемиоло!ия» стал применяться не только

по отношению к инфекционным болезням Для того чтобы программа клинической профилактики была эффективной, она должна быть целенаправленной (Оганов Р Г, Хальфин Р А, 2007), то есть профилактические мероприятия необходимо проводить в первую осчередь в отношении лиц, имеющих генетическую предрасположенность к псориазу

На современном этапе развития медицины разработка новых этиопатогенетических, фармакогенетических методов лечения заболеваний с. генешческой предрасположенностью, в том числе и псориаза, становится возможной в значительной мере благодаря выявлению изменений в организме больного на молекулярно - генетическом уровне (1 очечный пуклсотидный полиморфизм) (Новик А А, 2001) Эти методы требуют внедрения новых высокотехнологичных методов исследования, какими являются методы ДНК-диагностики, в том числе, с использованием иолимсразной цепной реакции Благодаря этим технологиям появилась возможность изучать полиморфизм I енов, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу Кроме того, по данным литературы подобные исследования в Российской Федерации крайне малочисленны

Настоящая работа представляет собой проблемно-ориешированное поисковое исследование, создающее научно-техническии задел для реализации масииабных проектов в области молекулярно-генетических исследований мулыифакюриальных дерматозов и развития персонифицированной медицины

Риск развития псориаза в зависимости от степени родства с больным пробандом соствляет при первой степени родства - 5,6-6,3%, при вюрой степени - 3,1%, при третьей степени - 1,35% (Мутовин Г Р , 2001) Эти данные получепы с использованием популяционно-статисшческого, клинического и генеалогического методов исследования

Меюдологический и технологический прорыв в развитии молекулярной генешки и постгеномных технологий последнего десятилетия позволил проводить исследования на новом - молекулярно-генетическом уровне

К настоящему времени выявлен ряд генов и хромосом, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу (PSORS1- PSORS9, MICA, HLA-B13, IILA-B17, HLA-21 и другие)

Особый интерес представляет изучение RAGE-rena (Receptor of Advanced Glycation End Products), который локализован в коротком плече 6-ой хромосомы (6р21 3) и участвует в регуляции воспалительного процесса, в гом числе, при псориатическом артрите, экспрессии рецепторов апоптоза кератиноцитов, антиоксидангной активности клеток (Kankova К, 2001, I-Iofmann М А , 1999) Цель исследования.

Изучение нуклеогидного полиморфизма RAGF-гена в российской популяции как фактора предрасположенности к псориазу с целью прогнозирования течения заболевания Задачи исследования'

1 Выявление клинически значимых генетических маркеров псориаза в RAGE-

1 ene человека

2 Анализ полиморфизма RAGE-гена и его роли в развитии псориаза

3 Разрабо!ка молекулярного метода диагностики предрасположенноеш к псориазу на основе анализа полиморфизма RAGE-гена

4 Разработка комплекса профилактических мер, направленных на снижение риска манифестации псориаза

Научная новизна.

Впервые в Российской популяции изучался полиморфизм RAGE-гена Предложен и апробирован метод определения генетических маркеров псориаза в соматических клетках (лейкоцитах крови) человека

На основании анализа результатов клинического обследования, i енеало1 ического анализа и молекулярно-генетических методов исследования выявлены закономерности в клинических проявлениях псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена

На основе полученных данных установлена диагностическая ценность определения полиморфизма 11АОЕ-гена как фактора риска развития заболевания

Предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к псориазу

Практическая значимость

Проведенные исследования обосновывают необходимость внедрения в клиническую практику молекулярных методов диагностики предрасположенности к псориазу Была сконструирована тесг-система для ДНК-диагностики мутаций в ИАОЕ-гене и разработан метод генодиагностики мутаций ЛАОЕ-гена как фактора риска развития псориаза

Внедрен в практику комплекс мер первичной профилактики псориаза, что позволяет снизить риск манифестации заболевания у лиц с 1ене1Ической предрасположенностью к этому дерматозу Основные положения, выносимые на защиту:

> Достоверно значимым маркером псориаза в ИАСЕ-геле является сайт 2184АЛл

> Ассоциированным с псориазом в сайте 2184А/0 является аллель в

> 1яжелая форма вульгарного псориаза, более раннее его начало и анамнестически отягощенная наследственность ассоциированы с аллслем О в сайте 2184АЮ ЛАОЕ-гена

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии Самарского государственного медицинского универсшеш, в научно-исследовательской работе и учебном процессе Центрального научно-исследовательского кожно-венерологического института

Апробация работы.

Основные положения и выводы диссертации доложены и обсуждены

• на научно-практической конференции ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» г Москва 20 мая 2005 года,

• на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов, Москва 7-10 июня 2005,

• на научно-практической конференции, посвященной 50-легию кафедры кожных и венерических болезней ГОУ ВПО Тверской ГМА 19 мая 2006 года,

• на II Всероссийском конгрессе дерматовенерологов, Саикт-Пе[ербург 25-28 сентября 2007 года

Но материалам исследования опубликовано 7 печатных работ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы и глав, содержащих материалы и методы исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, содержащего 129 источников, из них 35 отечественных и 94 иностранных Работа изложена на 102 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 21 рисунком Этапы исследования

• Клиническая характеристика и изучение личною и семенною анамнеза больных псориазом, формирование групп обследуемых,

• Выделение геномной ДНК из лейкоцитов человека, создание банка образцов ДНК,

• Синтез праймеров к 3 мишеням в КАОЕ-гене, конструирование тест-системы для проведения ПЦР,

• Постановка ПЦР, получение продуктов амплификации,

• Проведение рестрикционного анализа аллельного полиморфизма сайтов Г1АСЕ2184А/С, С828 и 1704 О/Т с помощью специфических эндонуклеаз рес фикции,

• С гагистическая обработка и анализ полученных данных

Содержание работы Объем и методы исследований

Обследовано 115 человек в возрасте от 6 до 72 лет, из них мужчин было -48 (41,7%), женщин - 67 (58,3%). Все обследуемые были разделены на 4

группы I группа (основная) состояла из больных псориазом (52 человека), II группа (сравнения) - 17 человек, в том числе 9 больных атопическим дермашюм, 5 - красным плоским лишаем, 3 - ихтиозом, III группа состояла из здоровых родственников больных псориазом (39 человек), IV группу (контрольную) составили здоровые добровольцы (7 человек) Родственники пробандов (больных псориазом, через которых осуществлялась регистрация обследуемой семьи), страдающие псориазом, были отнесены в первую группу

Материалом для проведения молекулярно-гснстичсских исследований была венозная кровь

Методы исследования -клиническое обследование, -генеалогический анализ,

-молекулярно-генетические методы полимеразная цепная реакция, рсстрикционный анализ, метод электрофореза в агарозном геле, -статистические методы,

Каждому пациенту был поставлен диагноз с указанием формы псориаза, стадии, сезонности, для аргропатического псориаза - с указанием формы и С1епени акшвносги, рассчитан индекс РА81 на момент осмотра Подробно были изучены и проанализированы данные анамнеза заболевания (первые проявления, развитие заболевания, проведенное лечение)

Сбор генетической информации проводился путем опроса и клинического обследования членов семьи При составлении родословной велась запись данных о каждом члене рода с указанием его родства по отношению к нробанду В рамках метода мы устанавливали следующие сведения фамилия, имя, отчество, дата рождения и смерти, возраст, национальность, место жительства профессия, наличие перенесенных, хронических и наследственно-обусловленных заболеваний, причина смерти

Затем, используя систему условных обозначений, составляли графическое изображение родословной (рис 1)

Условные обозначения:

Мужчина больной

Женщина здоровая

/

Пробанд

Рис. I

Графическое изображение родословной больного К.

Для проведения анализа взаимосвязи между полиморфизмом КАСБ-гепа и предрасположенностью к псориазу на каждого пациента был составлен индивидуальный генетический паспорт, который включал клинико-анампсстические сведения об обследуемом лице и результаты изучения полиморфизма грех сайтов НАОЕ-гена (таблица 1).

Таблица 1.

Генетический паспорт

ж

40

37

Ж 16

(ШЗЕ2184

РАОЕ82

ЯАвЕ1704

Больн I ой | псори азом

Т

Родст венни к

Больн Т ой псори

Отец №3

Мать №3

Дочь №1,2

18 лет

15 лет

Легкая

Среди яя

Н-

Вуль гарн ая

Буль гарн ая

4 азом

M 32 G G G G G T Больн ой псори азом Сын №5 12 лет Тяжел ая Н+ Вуль гарн ая

5 M 53 С G G G G T Больн ой псори азом Отец №4 29 лет Легкая Н- Буль гарн ая

Усчовные обозначения М-мужчина, Ж~женщина, Н+-отягощенная наследственность по псориазу, Н—наследственность по псориазу не отягощена

Для определения полиморфизма RAGE-гена нами была сконструирована т ее I-система, основанная на полимеразной цепной реакции В предложенной 1ес1-систсме профиль амплификации представлял собой 40 циклов, проводимых в следующем режиме

1-й этап - денатурация геномной ДИК, выделенной из лейкоцитарной массы цельной крови после предварительной отмывки лейкоцитов раствором Канкеля при температуре 93° С (длительность шага 10 секунд),

2-й DLdii — отжиг (омелииг) праймеров который осуществлялся при leMriepaiype 64° С (дли1слыюсть шага 10 секунд), При проведении ПЦР были использованы специально подобранные праймеры (1RAGE2184 (GGCCTCAGGACCAGGGAACCTACA), 8551-8574 по, и 2RAGE2184 (ПGGTCAGGCTGGTCTCGAACTCC), 8929-8952 по), которые позволяли фланкировать участок ДНК, содержащий RAGE-ген и провести его амплификацию для последующего изучения методом рестрикции

3-й этап - элонгация происходила при повышении температуры до 72° С (длительность шага 10 секунд)

Определение полиморфизма RAGE-гена на основе последовательности гена представленной в GenBank - D28769 проводилось с помошыо меюда ресфикционного анализа нуклеотидных посчедовательностей согласно методике, описанной V Vasku со соавторами (2002)

С.1Й1 RAGE 2184A/G. рестрикцию продуктов амплификации мы проводили в присутствии эндонуклеазы BsmFl из Bacillus stearothermophilus F (New England Biolabs) с целью получения фрагментов длиной 266 и 136 п о для

аллели А и 174, 136 и 92 п о для аллели G

Продукты амплификации инкубировали при температуре 65°С в течение 4 часов, после чего осуществляли инактивация фермента в течение 20 минут при leMnepaiype 80° С

Caiii RAGE 1704G/T: рестрикцию проводили в присутствии эндонуклеазы Blal из Bacteroides fragilis (New England Biolabs) Продуктами рестрикции для аллеля G явились участки ДНК длиной 240, 143 и 42 п о , для аллеля Т 240 и 185 по

Продукт амплификации инкубировали в течении 5 часов при 37° С Инакшвацию фермента осуществляли в течение 20 минут при температуре 80° С

Cain G82S рестрикцию продуктов амплификации проводили в присутствии эндонуклеазы Alu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs) При диком (îieMyiaiiiHOM) типе (GG) данного аллеля продуктами рестрикции были фрагмешы ДНК длиной 123, 26, 248 п о , при мутантном типе (AG) 123, 26, 67 и 181по

Продукты амплификации инкубировали при температуре 37°С в течение 4 часов, после чего осуществляли инактивацию фермента в течение 20 минут при îeMiicpaiype 65° С

Анализ полиморфизма длины полученных рестрикционных фрагментов осуществляли с помощью i оризонтального электрофореза в 3%-ном агарозном геле в присутствии маркеров молекулярных масс («СибЭнзим», Новосибирск) от 100 до 1000 п о (таблица 2)

Таблица 2

Условия проведения рестрикции и продукты рестрикции RAGE-гепа

Сайт RAGE-гена Эндонуклеаза Продукты рестрикции (длины фрагментов) Изучаемые аллели

2184A/G BsmFl из Bacillus stearothermophilus F (New England 266 п о 136 по А

174 по G

Biolabs) 136 и.о. 92 n.o.

1704 G/T Bfal из Bacteroides fragilis (New England Biolabs) 240 143 42 G

240 n.o. 185 n.o. T

G82S Alu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs) 123 n.o. 26 ri.o. 248 n.o GG

123 n.o. 26 n.o. 67 n.o. 181 n.o. AG

Документирование гелей проводили с помощью оптической системы "BIORAD" (USA) и с использованием программы "Гель-Док" (рис.2,3,4,5).

Рис. 2

Продукты амплификации RAGE 2184

(402 п. о.)

Рис. 3

Результаты рестрикционного анализа RAGE 2184 A/G

Рис. 4

Результаты рестрикционного анализа (аллельный полиморфизм RAGEG82S)

Рис. 5

Результаты рестрикционного анализа (аллельный полиморфизм RAGE 1704G/T

Результаты исследований

Средний возраст в группе больных псориазом составил 33,7 года, в группе сравнения - 36,8 года, в контрольной группе - 33,3 года и в группе здоровых родывенников 35,1 года Среди больных псориазом было 22 мужчины и 30 женщин, в группе сравнения - 10 мужчин и 7 женщин, в контрольной группе -2 мужчины и 5 женщин, в группе здоровых родственников - 14 мужчин и 25 женщин (таблица 3)

Табища 3

Характеристика групп обследуемых

Группы Кол-во Возраст, лет

М Ж Всего Мин. Макс Средний Стандартное отклонение

Iipynna (больные псориазом) 22 30 52 7 75 33,7 15,2

11 I руина (сравнения) 10 7 17 6 61 36,8 16,3

Атонический дерматит 6 3 9 6 35 18,6 8,7

кил 3 2 5 33 61 45,8 11,2

Ихтиоз 1 2 3 11 34 21,7 11,6

III 1 pyrrna (здоровые родывенники) 14 25 39 6 79 35,1 16,2

IV ipynna (кон[рольная) 2 5 7 24 58 33,29 12,27

Псориаз ликой степени (PASI<12) тяжести наблюдался у 12,5% пациентов, средней степени тяжести (PASI от 13 до 45) - у 70,83% и тяжелой степени

тяжести (РА81>46) - у 16,67% пациентов. Отягощенный по псориазу семейный анамнез был установлен у 40,48% пациентов (таблица 4).

Таблица 4

Характеристика группы больных псориазом

Изучаемый признак Значения % Станд. ошибка

Степень тяжести легкая 12,50 4,77

ср/тяжелая 70,83 6,56

тяжелая 16,67 5,38

Форма заболевания вульгарная 82,35 5,34

артролатическая 17,65 5,34

Наследствен ноеть Отягощена 40,48 7,57

Не отягощена 59,52 7,57

В 82,35% случаев была диагностирована вульгарная форма псориаза, в 17,65% -артронатическая форма (рис. 6).

82,35%

□ Вульгарный псориаз 0 Артропатический псориаз

Рис. 6

Частота встречаемости различных форм псориаза

Средний возраст начала заболевания у пациентов составил 19,1 года: у мужчин - 22,8 года, у женщин - 16,08 года (рис.7).

10 -

г<1> • ' . - .

п

■ ■■ :

г "г л

10 30 40 50 60

5, .51 5,

Рис.7

Гистограмма распределения возраста начала заболевания

Из находившихся под наблюдением 52 пациентов 25 больных связывали возникновение псориаза с длительным пребыванием в стрессовом состоянии или с воздействием нервно-психической травмы. Также среди провоцирующих факторов были выявлены: обострение хронических инфекций, прием лекарственных препаратов, вакцииация, травматизация кожи, смена климатических условий (таблица 5)

Таблица 5

Взаимосвязь средовых факторов с началом псориаза

И ров о ц ирую щий фактор Абсолютное число больных %

Ст ресс, нервно-психическая травма 25 48

Обострение хронической инфекции 6 11,5

Прием лекарственных препарат ов 1 2

Вакцинация 1 2

Травматизация кожи 2 4

Смена климатических условий 1 2

Прочие, неизвестны 36 30,5

В результате проведенных генеалогических исследований было установлено, что большинство респондентов (98,3%) относятся к европеоидной расе

При клиническом обследовании и генеалогическом анализе, проведенном у родственников пробандов было установлено

-большая часгь обследованных родственников имеет первую степень родства с нробандом (97, 3%),

-среди обследованных родственников пробандов больные псориазом составили 11,5%,

-у 64 8% из них заболевание началось в возрасте до 40 лет,

-среди родственников пробандов выявлены следующие сопутствующие заболевания, с наследственной предрасположенностью эссенциальная 1ипершническая болезнь (5,1%), ишемическая болезнь сердца (4,2%), сахарный диабет II тина (3,8%), атопический дерматит (3,6%)

С целью установления возможной взаимосвязи полиморфизма RAGB-гена с часюгой возникновения псориаза и особенностями клиническою течения шболевапия проводилось изучение ассоциации между частотой регистрации различных аллелей трех сайтов RAGE-гена (2184A/G, 1704G/T и G82S), клиническими признаками псориаза и анамнестическими данными

Установлено, что среди больных псориазом (основная группа) с наличием аллеля G в сайте RAGE 2184A/G тяжелая форма заболевания встречалась в 50% случаев, в отсутствии аллеля G - в 7,69% Частота возникновения тяжелой формы псориаза в группе с наличием аллеля G выше с достоверностью 96,6% (уровень значимости р=0,034) Вульгарная форма псориаза у больных с аллелем G была диагностирована в 83,33% случаев, без аллеля G - в 79,31% Отягощенная по псориазу наследственность у больных с наличием аллеля G в саше RAGE 2184A/G установлена в 60% случаев, в то время как в отсутс1Вии аллеля G - в 44% Средний возраст начала заболевания в группе с аллелем G

был несколько меньше, чем в группе без аллеля в 16,6 и 19,92 года, соответственно (таблицы 6,7)

Таблица 6

Частота регистрации аллеля G в сайте RAGE 2184A/Gy больных вульгарным псориазом тяжелой степени

Тяжелая степень заболевания Вульгарная форма заболевания

% Станд ошибка % Станд ошибка

аллель G (+) 50,00 20,41 83,33 15,21

аллель G (-) 7,69 5,23 79,31 7,52

Таблица 7

Частота регистрации аллеля G в сайте RAGE 2184A/G V больных псориазом с учетом данными анамнеза (возраст начала заболевания, наследственность)

Отягощенная наследственность Возраст начала заболевания

% Станд ошибка среднее знач Станд огклон

аллель G (+) 60,00 21,91 16,60 4,42

аллель G (-) 44,00 9,93 19,92 11,58

С достоверностью 84,1% (р=0,159) показано, что частота встречаемости аллеля 21840 выше в группе больных псориазом, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания (таблица 8)

Таблица 8

Взаимосвязь между генотипом по сайту RAGE 2184A/G и наличием

псориаза

IСН01ИП Л G

% Станд ошибка % Станд ошибка

Псориаз (+) ! 1сориаз (-) 88,89 5,24 16,67 6,21

95,92 2,83 6,12 3,42

С достоверностью 86,1% (р=0,139) можно утверждать, что аллель 2184G ассоциирован с псориазом и не ассоциирован с дерматозами из группы сравнения (атопический дерматит, красный плоский лишай, ихтиоз) Достоверной разницы между частотой встречаемости аллеля А в came 2184A/G в основной группе и этим же показателем в других группах не выявлено

Анализируя данные по сайту RAGE 1704G/T, мы установили, что наличие или отсутствие псориаза не связано с аллелем G %2=0,109, что соответствует уровню значимости р>0,75, также наличие или отсутствие псориаза у обследованных лиц не связано с аллелем Т в данном сайте %2~0,022, что coo I ветс гвует уровню значимости р>0,9 (таблица 9,10)

Таблица 9

Взаимосвязь между генотипом по сайту RA GE 1704 G /Т и наличием

псориаза

I еношп Т G

% Стандар ошибка % Стандар ошибка

Псориаз (+) 82,98 5,48 85,11 5,19

Псориаз (-) 85,96 4,60 80,70 5,23

Таблица 10

Частота регистрации аллелей сайтов RAGE 2184A/G и RAGE 1704 G/T в

группах обследуемых

Группа 2184A/G 1704G/F

А G Т G

1 руппа(больные псориазом) 88,9±5,2 16,7±6,2* 82,98±5,5 85,1±5,2

11 группа (сравнения) 100,0 0,0 85 7±9 4 64,3±12,8

IV группа (контрольная) 100,0 0,0 100,0 85,7-Ь13,2

* р<0,01

Мугангный генотип сайта RAGE G82S был выявлен у двух обследованных лиц женщины 55 лет с наличием сахарного диабета второго типа, без клинических проявлений псориаза и у ее сына 23 лет, больного кожной формой псориаза, средней степени тяжести и отсутствием нарушения толерантности к глюкозе

Таким образом, в RAGE гене относительно риска развития псориаза интерес представляет сайт 2184A/G. Аллель 2184G ассоциирован с псориазом и не ассоциирован с дерматозами из группы сравнения (атопический дерматит, красный плоский лишай, ихтиоз) Частота встречаемости аллеля 2184G досюверно выше в группе больных псориазом, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания, то есть его можно рассматривать как аллель повышенного риска развития псориаза Установлена взаимосвязь между наличием аллеля G в сайте 2184A/G и развитием тяжелой вульгарной формой псориаза, более ранним возрастом его манифестации и анамнестически отягощенной по псориазу наследственностью Корреляции между различными видами полиморфизмов сайтов 1704 G/T и G82S и псориазом не выявлено Слсдоваюльпо, лиц с наличием аллеля G в сайте 2184A/G необходимо о шести в группу повышенного риска развития псориаза и рекомендовав им комплекс профилакшческих мер

Для обеспечения целенаправленности профилактических мероприятий в группу скриниша на наличие генетических маркеров псориаза прежде всего должны входить родственники больных псориазом При обнаружении у обследуемого генетических маркеров псориаза, в частности, аллеля G в сайте 2184A/G RAGE-гена, его относят в группу повышенного риска развишя псориаза В этом случае обследуемого информируют о возможноеiи снижения риска манифестации псориаза, исходя из особенностей его образа жизни, профессии, данных о сопутствующих заболеваниях С этой целыо составляют индивидуальные рекомендации по мерам первичной профилактики псориаза, которые могут включать профилактику травматизации кожи (физической, химической), санацию очагов хронической инфекции и профилактику

респираторных инфекций в период сезонных эпидемий, своевременную медикаментозную коррекцию неврозов и неврозоподобных состояний, исключение токсического воздействия алкоголя, ограничение приема некоторых лекарственных средств, способных вызвать инициацию процесса (бета-адреноблокаторы, тиазидные диуретики, антагонисты кальция, ингибиюры ангиотензин-превращающего фермента, препараты лития, иммунопрепараты, нестероидные противовоспалительные средства, противомалярийные препараты), рекомендации по рациональному питанию, кон 1 ролю массы тела и уровня глюкозы крови и другие

ВЫВОДЫ

1 Методами клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетического исследования, проведенными у больных псориазом, их клинически здоровых родственников, а также в группе сравнения (всего - 115 человек) установлено, что в 11АОЕ-гепе клинически значимым генетическим маркером псориаза является сайт 2184А/С

2 Выявлены закономерности клинических проявлений псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма ЯАСЕ-гена Установлено, что повышенный риск возникновения псориаза ассоциирован с аллелем С в сайте 2184А/О ИАСЕ-гена Частота возникновения тяжелой формы псориаза у больных с наличием аллеля в в сайте 2184АУО МАСЕ-гепа в 6,5 раза превышает риск развития тяжелой формы дерматоза у больных псориазом с отсутствуем аллеля в 50% и 7,69% соответс1венно Имеется взаимосвязь между ирису1с1вием аллеля в в сайте 2184А/в и вульгарной формой псориаза, а 1акже более ранним началом заболевания

3 На основании полученных данных о корреляции между различными видами полиморфизма 11АСЕ-гена, возникновением и типом течения псориаза

предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к заболеванию этим дерматозом

4 Разработан комплекс профилактических мер, направленных на уменьшение воздействия неблагоприятных средовых факторов, что будет способствовать снижению риска манифестации псориаза

Список работ, опубликованных по теме диссерт ации

1 1 ерман О А Кандидатные маркеры псориаза в RAGE гене человека / Терман О А , Кухарева Е Н , Суколин Г И , Шульман А Я // Тез науч раб IX Всерос съезда дерматовенерологов - М ,2005 - Т 1 - С 39-40

2 Шульман А Я Изучение генетических маркеров псориаза как факторов предрасположенности к развитию заболевания / Шульман А Я , Суколин ГИ, 1ерманОА //Тез докл XII Рос нац конгр "Человек и лекарство" -М,2005 -С 814-815

3 I ерман О А Полиморфизм RAGE-гена у больных псориазом / Терман О А , Шульман А Я , Кухарева Е Н // Вестн дерматол венерол - 2006 -№5 - С 62-65

4 Шульман А Я RAGE-ген как генетический маркер псориаза / Шульман А Я , Герман О А , Суколин Г И , Кухарева Е Н // Сб ст , посвящ 50-лешю кафедры кож и вен болезней ТГМА - Тверь,2006 - С 92-95

5 Шульман А Я Генетические аспекты этиоло1ии псориаза // Рос журн кож вен болезней - 2006 - №5 - С 37-38

6 Шульман А Я Изучение полиморфизма RAGE-гена и его роли в предрасположенности к псориазу / Шульман А Я , Терман О А , Кухарева ЕН, Акимов В Г //Тез науч раб II Всерос конгр дерметовенерологов -СПб ,2007 - С 110

7 1 ерман О А Медико-генетическое консультирование при псориазе / Терман О А , Шульман А Я , Кухарева Е Н // Вестн дерматол венерол -2007 - №4 - С 21-22

Отпечатано в копицентре «СТ ПРИНТ» Москва, Ленинские горы, МГУ, 1 Гуманитарный корпус www stpnnt ru e-mail zakaz@stpnnt ru тел 939-33-38 Тираж 100 экз Подписано в печать 22 02 2008 г

Проблема псориаза является одной из самых актуальных в современной дерматологии. Это обусловлено значительной распространенностью заболевания (от 1 до 5% населения планеты), хроническим, нередко тяжелым течением, неясностью этиологии и патогенеза, и, как следствие этого, несовершенством современных методов лечения /12,16,33/. Также следует отметить, что в последние десятилетия отмечается неуклонный рост заболеваемости псориазом, в том числе среди детей /18/. В настоящее время удельный вес больных псориазом среди всех больных дерматозами составляет 12-15%/25/.

О медико-социальной актуальности проблемы псориаза свидетельствуют данные, приводимые Национальным фондом псориаза США (NPF - National Psoriasis Foundation):

• Количество больных: 1996 г.- 6,4 млн. чел., 2001 г. - более 7 млн. чел.

• Средний возраст начала заболевания - 28 лет.

• Дети моложе 10 лет составляют 10-15%.

• Псориатический артрит выявляется в 10-30% случаев.

• Регистрируется 150-260 тыс. новых случаев заболевания в год.

• Расходы на лечение составляют 1,6-3,2 млрд. долл. в год.

• Ежегодно около 400 чел. умирают от связанных с псориазом причин.

• Ежегодно более 1,5 млн. чел. обращаются за медицинской помощью по поводу псориаза.

Эти данные аналогичны таковым по Российской Федерации /24/. В настоящее время число больных псориазом в России составляет приблизительно 3 млн. человек; отмечается тенденция к росту заболеваемости среди лиц трудоспособного возраста, увеличению числа тяжелых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания. Сложившаяся ситуация предполагает поиск новых путей профилактики псориаза и создания методов прогнозирования его течения. Научной основой разработки системы медицинской профилактики считаются результаты эпидемиологических исследований. В связи с широким распространением неинфекционной патологии (сердечно-сосудистые, онкологические, кожные заболевания) с 50-х гг. двадцатого столетия термин «эпидемиология» стал применяться не только по отношению к инфекционным болезням. Для того чтобы программа клинической профилактики была эффективной, она должна быть целенаправленной /27/. то есть профилактические мероприятия необходимо проводить в первую очередь в отношении лиц, имеющих генетическую предрасположенность к псориазу.

На современном этапе развития медицины разработка новых этиопатогенетических, фармакогенетических методов лечения заболеваний с генетической предрасположенностью, в том числе и псориаза, становится возможной в значительной мере благодаря выявлению изменений в организме больного на молекулярно - генетическом уровне (точечный нуклеотидный полиморфизм) /22/. Эти методы требуют внедрения новых высокотехнологичных методов исследования, какими являются методы ДНК-диагностики, в том числе, с использованием полимеразной цепной реакции. Благодаря этим технологиям появилась возможность изучать полиморфизм генов, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу. Кроме того, по данным литературы подобные исследования в Российской Федерации крайне малочисленны.

Настоящая работа представляет собой проблемно-ориентированное поисковое исследование, создающее научно-технический задел для реализации масштабных проектов в области молекулярно-генетических исследований мультифакториальных дерматозов и развития персонифицированной медицины.

Риск развития псориаза в зависимости от степени родства с больным пробандом составляет при первой степени родства - 5,6-6,3%, при второй степени - 3,1%, при третьей степени - 1,35% /20/. Эти данные получены с использованием популяционно-статистического, клинического и генеалогического методов исследования.

Методологический и технологический прорыв в развитии молекулярной генетики и постгеномных технологий последнего десятилетия позволил проводить исследования на новом - молекулярно-генетическом уровне.

Цель исследования.

Изучение нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена в российской популяции как фактора предрасположенности к псориазу с целью прогнозирования течения заболевания.

Задачи исследования:

1. Выявление клинически значимых генетических маркеров псориаза в RAGE-гене человека.

2. Анализ полиморфизма RAGE-гена и его роли в развитии псориаза.

3. Разработка молекулярного метода диагностики предрасположенности к псориазу на основе анализа полиморфизма RAGE-гена.

4. Разработка комплекса профилактических мер, направленных на снижение риска манифестации псориаза.

Научная новизна.

Впервые в Российской популяции изучался полиморфизм RAGE-гена. Предложен и апробирован метод определения генетических маркеров псориаза в соматических клетках (лейкоцитах крови) человека.

На основании анализа результатов клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетических методов исследования выявлены закономерности в клинических проявлениях псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена.

На основе полученных данных установлена диагностическая ценность определения полиморфизма RAGE-гена как фактора риска развития заболевания.

Предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к псориазу.

Практическая значимость.

Проведенные исследования обосновывают необходимость внедрения в клиническую практику молекулярных методов диагностики предрасположенности к псориазу. Была сконструирована тест-система для ДНК-диагностики мутаций в RAGE-гене и разработан метод генодиагностики мутаций RAGE-гена как фактора риска развития псориаза.

Внедрен в практику комплекс мер первичной профилактики псориаза, что позволяет снизить риск манифестации заболевания у лиц с генетической предрасположенностью к этому дерматозу. Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии Самарского государственного медицинского университета, в научно-исследовательской работе и учебном процессе Центрального научно-исследовательского кожно-венерологического института.

Апробация работы.

Основные положения и выводы диссертации доложены и обсуждены:

• на научно-практической конференции ФГУ «ЦНИКВИ Росздрава» г.Москва 20 мая 2005 года;

• на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов; Москва. 7-10 июня 2005;

• на научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры кожных и венерических болезней ГОУ ВПО Тверской ГМА 19 мая 2006 года;

• на II Всероссийском конгрессе дерматовенерологов; Санкт-Петербург 25-28 сентября 2007 года.

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ. Основные положения, выносимые на защиту:

Достоверно значимым маркером псориаза в RAGE-гене является сайт 2184A/G.

Ассоциированным с псориазом в сайте 2184A/G является аллель G.

Тяжелая форма вульгарного псориаза, более раннее его начало и анамнестически отягощенная наследственность ассоциированы с аллелем G в сайте 2184A/G RAGE-гена.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы и глав, содержащих материалы и методы исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, содержащего 129 источников, из них 35 отечественных и 94 иностранных. Работа изложена на 104 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 14 таблицами и 21 рисунком.

выводы

1. Методами клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетического исследования, проведенными у больных псориазом, их клинически здоровых родственников, а также в группе сравнения (всего - 115 человек) установлено, что в RAGE-гене клинически значимым генетическим маркером псориаза является сайт 2184A/G.

2. Выявлены закономерности клинических проявлений псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена. Установлено, что повышенный риск возникновения псориаза ассоциирован с аллелем G в сайте 2184A/G RAGE-гена. Частота возникновения тяжелой формы< псориаза у больных с наличием аллеля G в сайте 2184A/G RAGE-гена в 6,5 раза превышает риск развития тяжелой формы дерматоза у больных псориазом с отсутствуем аллеля G: 50% и 7,69% соответственно. Имеется взаимосвязь между присутствием аллеля G в сайте 2184A/G и вульгарной формой псориаза, а также более ранним началом заболевания.

3. На основании полученных данных о корреляции между различными видами полиморфизма RAGE-гена, возникновением и типом течения псориаза предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к заболеванию этим дерматозом.

4. Разработан комплекс профилактических мер, направленных на уменьшение воздействия неблагоприятных средовых факторов, что будет способствовать снижению риска манифестации псориаза. I

88

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема псориаза является одной из самых актуальных в современной дерматологии. Это обусловлено высокой популяционной частотой заболевания, которая в подавляющем большинстве исследований оценивается в 3-5% со значительными колебаниями в зависимости от региона проживания и расовой принадлежности; хроническим, нередко тяжелым течением, неясностью этиологии и патогенеза, а также несовершенством современных методов лечения. В последние годы в Российской Федерации наметилась тенденция к увеличению доли тяжелых, торпидно протекающих, резистентных к различным методам и средствам лечения, инвалидизирующих форм псориаза. Все это делает псориаз актуальной не только медицинской, но и социальной проблемой и обуславливает необходимость дальнейших научных исследований в этой области.

При мультифакториальных заболеваниях с полигеннодетерминируемой наследственной предрасположенностью, к которым относится псориаз, суммарный генетический риск зависит от большого числа факторов и определяется с помощью таблиц эмпирического риска.

В зависимости от степени родства с больным пробандом риск развития псориаза составляет при первой степени родства - 5,6-6,3%, при второй степени - 3,1%, при третьей степени - 1,35%. Эти данные получены с использованием популяционно-статистического, клинического и генеалогического методов исследования.

Методологический и технологический прорыв в развитии молекулярной генетики и постгеномных технологий последнего десятилетия позволил проводить исследования на современном молекулярно-генетическом уровне.

К настоящему времени выявлен ряд генов и хромосом, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу (PSORS1- PSORS9, MICA, HLA-B13, HLA-B17, HLA-21 и другие).

Особый интерес представляет исследование по изучению полиморфизма RAGE-гена (Receptor of Advanced Glycation End Products), проведенное в 1999-2002 года Kankova К. и Vasku А., RAGE-ген локализован в коротком плече 6-ой хромосомы (6р21.3) и связан с регуляцией воспалительного процесса, в том числе, при псориатическом артрите, экспрессией рецепторов апоптоза кератиноцитов, антиоксидантной активности клеток. Исследуя полиморфизм гена RAGE среди населения Польши, было установлено, что генотипы G82S, 1704G/T и 2245 A/G не ассоциированы с бляшечным псориазом, в то время как частота аллеля 2184G значительно выше у пациентов с псориазом, чем в контрольной группе. Исследований нуклеотидного полиморфизма гена RAGE в Российской популяции до настоящего времени не проводилось.

Возможность ДНК-диагностики существенно повышает точность определения генетического риска, позволяя перейти от вероятностных моделей к дефинитивному определению генотипов и ожидаемых фенотипов.

Целью исследования явилось изучение нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена в российской популяции как фактора предрасположенности к псориазу и прогнозирования течения заболевания.

Для выполнения поставленной цели были определены следующие задачи исследования: выявление клинически значимых генетических маркеров псориаза в RAGE-гене человека; анализ полиморфизма RAGE-гена и его роли в развитии псориаза; разработка молекулярного метода диагностики предрасположенности к псориазу на основе анализа полиморфизма RAGE-гена; разработка комплекса профилактических мер, направленных на снижение риска манифестации данного дерматоза.

Впервые в Российской популяции изучался полиморфизм RAGE-гена. Предложен и апробирован метод определения генетических маркеров псориаза в соматических клетках (лейкоцитах крови) человека.

На основании анализа результатов клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетических методов исследования выявлены закономерности в клинических проявлениях псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена.

На основе полученных данных установлена диагностическая ценность определения полиморфизма RAGE-гена как фактора риска развития заболевания.

Создание технологии, предусматривающей возможность определения полиморфизмов генов, ассоциированных с псориазом, может послужить основой для дальнейшего изучения фундаментальных патогенетических механизмов при псориазе и для формирования групп риска с целью рекомендации мер первичной профилактики псориаза (рекомендации по образу жизни, питанию, трудовые рекомендации).

Базовым методом генотипического направления профилактики псориаза является медико-генетическое консультирование, которое включает в себя постановку точного диагноза, определение величины риска повторного возникновения заболевания в семье и интерпритацию генетического прогноза лицу, обратившемуся за консультацией.

В доступной литературе имеются отдельные сведения о влиянии средовых факторов на манифестацию псориаза, но отсутствует системный анализ этих данных и не разработан подход к первичной профилактике заболевания. Таким образом, является актуальным разработка и систематизация рекомендации по первичной профилактике псориаза для лиц, имеющих генетическую предрасположенность к данному заболеванию. Этапы исследования:

• Клиническая характеристика и изучение личного и семейного анамнеза больных псориазом, формирование групп обследуемых;

• Выделение геномной ДНК из лейкоцитов человека, создание банка образцов ДНК;

• Синтез праймеров к 3 мишеням в RAGE-гене, конструирование тест-системы для проведения ПЦР;

• Постановка ПЦР, получение продуктов амплификации;

• Проведение рестрикционного анализа аллельного полиморфизма сайтов RAGE2184A/G, G82S и 1704 G/T с помощью специфических эндонуклеаз рестрикции;

• Статистическая обработка и анализ полученных данных Обследовано 115 человек в возрасте от 6 до 72 лет, из них мужчин было

- 48 (41,7%), женщин — 67 (58,3%). Все обследуемые были распределены на 4 группы: I группа (основная) состояла из больных псориазом (52 человека); II группа (сравнения) - 17 человек, в том числе 9 больных атопическим дерматитом, 5 - красным плоским лишаем, 3 - ихтиозом; III группа состояла из здоровых родственников больных псориазом (39 человек); IV группу (контрольную) составили здоровые добровольцы (7 человек). Родственники пробандов (больных псориазом, через которых осуществлялась регистрация обследуемой семьи), страдающие псориазом, были отнесены в первую группу.

Псориаз легкой степени (PASI<12) тяжести наблюдался у 12,5% пациентов, средней степени тяжести (PASI от 13 до 45) - у 70,83% и тяжелой степени тяжести (PASI>46) - у 16,67% пациентов. Отягощенный по псориазу семейный анамнез был установлен у 40,48% пациентов. В 82,35% случаев была диагностирована вульгарная форма псориаза, в 17,65% артропатическая форма. Средний возраст начала заболевания у пациентов составил 19,1 года: у мужчин — 22,8 года, у женщин — 16,1 года.

Из находившихся под наблюдением 52 пациентов 25 больных связывали возникновение псориаза с длительным пребыванием в стрессовом состоянии или с воздействием нервно-психической травмы. Также среди провоцирующих факторов были выявлены: обострение хронических инфекций, прием лекарственных препаратов, вакцинация, травматизация кожи, смена климатических условий.

В результате проведенных генеалогических исследований было установлено, что большинство респондентов (98,3%) относятся к европеоидной расе.

При клиническом обследовании и генеалогическом анализе, проведенном у родственников пробандов было установлено: -большая часть обследованных родственников имеет первую степень родства с пробандом (97, 3%);

-среди обследованных родственников пробандов больные псориазом составили 11,5%;

-у 64,8% из них заболевание началось в возрасте до 40 лет; -среди родственников пробандов выявлены следующие сопутствующие заболевания с наследственной предрасположенностью: эссенциальная гипертоническая болезнь (5,1%), ишемическая болезнь сердца (4,2%), сахарный диабет II типа (3,8%), атопический дерматит (3,6%).

Материалом для проведения молекулярно-генетических исследований была венозная кровь.

Методы исследования: -клиническое обследование; -генеалогический анализ;

-молекулярно-генетические методы: полимеразная цепная реакция, рестрикционный анализ, метод электрофореза в агарозном геле; -статистические методы;

Каждому пациенту был установлен диагноз с указанием формы псориаза, стадии, сезонности; для артропатического псориаза - с указанием формы и степени активности, рассчитан индекс PASI на момент осмотра. Подробно были изучены и проанализированы данные анамнеза заболевания (первые проявления, развитие заболевания, проведенное лечение).

Сбор генетической информации проводился путем опроса и клинического обследования членов семьи. При составлении родословной велась запись данных о каждом члене рода с указанием его родства по отношению к пробанду.

Затем, используя систему условных обозначений, составляли графическое изображение родословной.

В тест-системе, разработанной нами для определения полиморфизма

RAGE-гена, профиль амплификации представляет собой 40 циклов, проводимых в следующем режиме: 1-й этап - денатурация ДНК. В нашем исследовании денатурации подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитарной массы цельной крови после предварительной отмывки лейкоцитов раствором Канкеля при температуре 93° С длительностью шага 10 секунд; 2-й этап - отжиг (омелинг): в разработанной нами тест-системе отжиг праймеров осуществлялся при температуре 64° С длительностью шага 10 секунд; 3-й этап - элонгация: происходит при повышении температуры до 72° С, с длительностью шага 10 секунд.

Определение полиморфизма-RAGE-гена на основе последовательности гена представленной в GenBank - D28769 проводилось с помощью метода рестрикционного анализа нуклеотидных последовательностей согласно методике, описанной V.Vasku со соавторами (2002).

Сайт RAGE 2184A/G: рестрикцию продуктов амплификации мы проводили в присутствии эндонуклеазы BsmFl из Bacillus stearothermophilus F (New England Biolabs) с целью получения фрагментов длиной 266 и 136 п.о. для аллели А и 174, 136 и 92 п.о. для аллели G.

Продукты амплификации инкубировали при температуре 65°С в течение 4 часов, после чего осуществляли инактивация фермента в течение 20 минут при температуре 80° С.

Сайт RAGE 1704G/T: рестрикцию проводили в присутствии эндонуклеазы Bfal из Bacteroides fragilis (New England Biolabs). Продуктами рестрикции для аллеля G явились участки ДНК длиной 240, 143 и 42 п.о.; для аллеля Т: 240 и 185 п.о.

Продукты амплификации инкубировались в течении 5 часов при 37° С. Инактивация фермента осуществлялась в течение 20 минут при температуре 80° С.

Сайт G82S: рестрикцию продуктов амплификации проводили в присутствии эндонуклеазы AIu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs). При диком (немутантном) типе данного аллеля продуктами рестрикции были фрагменты ДНК длиной 123, 26, 248 п.о; при мутантном типе: 123, 26, 67 и 181 п.о. Продукты амплификации инкубировали при температуре 37°С в течение 4 часов, после чего осуществляли, инактивация фермента в течение 20 минут при температуре 65° С.

Анализ полиморфизма длины полученных рестрикционных фрагментов осуществляли с помощью горизонтального электрофореза в 3%-ном агарозном геле в присутствии маркеров молекулярных масс («СибЭнзим», Новосибирск) от 100 до 1000 п.о. Документирование гелей проводили оптической системой "BIORAD" (USA) и с использованием программы "Гель-Док".

Установлено, что среди больных псориазом (основная группа) с наличием аллеля G в сайте RAGE 2184A/G тяжелая форма заболевания встречалась в

50% случаев, в отсутствии аллеля G - в 7,69%. Частота возникновения тяжелой формы псориаза в группе с наличием аллеля G выше с достоверностью 96,6% (уровень значимости р=0,034). Вульгарная форма псориаза у больных с аллелем G была1 диагностирована в 83,33% случаев, без аллеля G - в 79,31%. Отягощенная по псориазу наследственность у больных с наличием аллеля G в сайте RAGE 2184A/G установлена в 60% случаев, в то время как в отсутствии аллеля G — в 44%. Средний возраст начала заболевания в группе с аллелем G был несколько меньше, чем в группе без аллеля G: 16,6 и 19,92 года, соответственно.

Таким образом, в RAGE-гене относительно риска развития псориаза интерес представляет сайт 2184A/G. Аллель 2184G ассоциирован с псориазом и не ассоциирован с дерматозами из группы сравнения (атопический дерматит, красный плоский лишай, ихтиоз). Частота встречаемости аллеля 2184G достоверно выше в группе больных псориазом, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания, то есть его можно рассматривать как аллель повышенного риска развития псориаза. Установлена взаимосвязь между наличием аллеля G в сайте 2184A/G и развитием тяжелой вульгарной формой псориаза, более ранним возрастом его манифестации и анамнестически отягощенной по псориазу наследственностью. Корреляции между различными видами полиморфизмов сайтов 1704 G/T и G82S и псориазом не выявлено.

Следовательно, лиц с наличием аллеля G в сайте 2184A/G необходимо отнести в группу повышенного риска развития псориаза и рекомендовать им комплекс профилактических мер.

Для обеспечения целенаправленности профилактических мероприятий в группу скрининга на наличие генетических маркеров псориаза прежде всего должны входить родственники больных псориазом. При обнаружении у обследуемого генетических маркеров псориаза, в частности, аллеля G в сайте 2184A/G RAGE-гена, его относят в группу повышенного риска развития псориаза. В этом случае обследуемого информируют о возможности снижения риска манифестации псориаза, исходя из особенностей его образа жизни, профессии, данных о сопутствующих заболеваниях. С этой целью составляют индивидуальные рекомендации по мерам первичной профилактики псориаза, которые могут включать: профилактику травматизации кожи (физической, химической); санацию очагов хронической инфекции и профилактику респираторных инфекций в период сезонных эпидемий, своевременную медикаментозную коррекцию неврозов и неврозоподобных состояний, исключение токсического воздействия алкоголя, ограничение приема некоторых лекарственных средств, способных вызвать инициацию процесса (бета-адреноблокаторы, тиазидные диуретики, антагонисты кальция, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, препараты лития, иммунопрепараты, нестероидные противовоспалительные средства, противомалярийные препараты), рекомендации по рациональному питанию, контролю массы тела и уровня глюкозы крови и другие.

Таким образом, предложенный метод молекулярной диагностики предрасположенности к псориазу позволяет определить группу повышенного риска развития псориаза, возможность целенаправленно рекомендовать индивидуально подобранные профилактические мероприятия и прогнозировать течение псориаза в случае его развития.