Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Изучение некоторых свойств антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий и их роли в норме и при патологии
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Автореферат диссертации по медицине на тему Изучение некоторых свойств антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий и их роли в норме и при патологии
На правах рукописи
ТельнюкЯна Ивановна
ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ СВОЙСТВ АНТИТЕЛ К ОБЩЕЙ АНТИГЕННОЙ ДЕТЕРМИНАНТЕ ВСЕХ БАКТЕРИЙ И ИХ РОЛИ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ
14.00.36-Аллергология и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва 2003
Работа выполнена в Институте иммунологии Федерального управлен) «Медбиоэкстрем» при Минздраве России
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Б.В. Пинегин доктор медицинских наук Г.А. Игнатьева
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Л.И. Винницкий доктор биологических наук A.B. Филатов
Ведущая организация:
Московский государственный медико-стоматологический универсик Минздрава России
Защита диссертации состоится 2003 г. в 14 часов
заседании диссертационного совета Д 208.017.01 при Институте иммунологу Федерального управления «Медбиоэкстрем» при Минздраве России' г адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, дом 24, корпус 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологи Федерального управления «Медбиоэкстрем» при Минздраве России.
Автореферат разослан
. . . { Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук Л.С. Сеславина ^
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Одним из основных методов оценки гуморального иммунитета является количественное определение основных классов иммуноглобулинов - IgG, IgA и IgM. Иммуноглобулины выполняют важные функции по защите организма от чужеродных веществ антигенной природы [Boyden S.V. et al., 1966, Jeffries R. et al., 1990]. Однако выполнение этих функций зависит не только от количественных, но и от качественных характеристик антител, важнейшей из которых является аффинность.
Уровень и аффинность антител к бактериальным антигенам являются важными показателями резистентности организма к развитию и течению инфекционных заболеваний [Peterson R.K. et al., 1978, Verbrugh H.A. et al., 1980, Janeway Ch., 2001]. Нами был выбран показатель, отражающий состояние гуморального иммунитета к антигенам, свойственным большинству бактерий, выступающих в качестве этиологического фактора. Известно, что в крови человека имеются антитела к огромному числу антигенов микробного происхождения, в том числе и к компоненту клеточной стенки бактерий -глюкозаминилмурамилдипептиду (ГМДП), который является составной частью пептидогликана и, таким образом, общей антигенной детерминантной (ОАД) всех бактерий. Анти-ОАД антитела играют важную роль в развитии естественного антибактериального иммунитета, обладая способностью активировать комплемент и осуществлять опсонизацию микробов [Пинегин Б.В. и соавт., 1995, Кулаков А.В. и соавт., 2001].
Одной из существенных проблем современной медицины является диагностика, лечение и профилактика вторичных иммунодефицитных состояний, проявляющихся в развитии хронических инфекционно-воспалительных процессов. Лабораторная диагностика вторичных иммунодефицитов с помощью комплекса стандартных методов оценки иммунного статуса часто не позволяет установить нарушенное звено и, следовательно, правильно подобрать иммунокоррегирующую терапию. Поэтому разработка новых подходов к оценке иммунного статуса и, в частности, гуморального иммунитета является важной задачей теоретической и практической иммунологии.
Цель работы: изучение количественных и качественных характеристик антител к общей антигенной детерминанте (ОАД) всех бактерий в норме и при некоторых иммунопатологических состояниях. Задачи исследования:
1. Определение уровня основных классов иммуноглобулинов и 1дв-антител к Ы-ацетилглюкзаминилмурамил дипептиду, являющимся общей антигенной детерминантой всех бактерий (ОАД) в сыворотке периферической крови у следующих групп больных по сравнению со здоровыми донорами:
- у пожилых людей с проявлениями иммунологической недостаточности и без таковых;
- у кардиохирургических больных с неосложненным послеоперационным периодом и с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями.
- у больных рецидивирующим хроническим фурункулезом;
- у больных активным туберкулезом легких.
2. Отработка методики определения относительной аффинности анти-ОАД антител и оценка достоверности метода в сравнении с классической оценкой аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело.
3. Определение относительной аффинности анти-ОАД антител перечисленных групп больных в сравнении с группой здоровых доноров.
4. Определение связи изучаемых показателей с клиническими проявлениями вторичной иммунной недостаточности, а также оценка их диагностической и прогностической значимости.
Научная новизна. В работе впервые продемонстрировано, что уровень и особенно аффинность анти-ОАД антител являются объективными лабораторными критериями, характеризующими состояние антибактериального гуморального иммунитета при вторичных иммунодефицитных состояниях.
Показано, что у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител снижена, уровень анти-ОАД антител имеет тенденцию к снижению, однако «созревание» аффинности антител не нарушено, что обуславливает
вероятность физиологического снижения исследуемых параметров с возрастом.
Показано, что аффинность анти-ОАД антител является прогностически значимым критерием развития гнойно-септических послеоперационных осложнений у кардиохирургических больных.
Обнаружено снижение относительной аффинности анти-ОАД антител у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом, что может являться одной из основных причин развития этого заболевания.
Анализ гуморального антибактериального иммунитета больных активным туберкулезом легких выявил снижение как уровня, так и аффинности анти-ОАД антител, сопровождающееся выраженным нарушением процесса «созревания» аффинности антител.
Практическая значимость работы. Метод оценки относительной аффинности анти-ОАД антител разработан в варианте, пригодном для использования в рутинных исследованиях, набраны нормативные показатели. Высокая степень корреляции с классическим способом определения аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело свидетельствует о высокой информативности данной методики.
У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом и активным туберкулезом легких, а также у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител значительно снижена по сравнению со здоровыми донорами. Снижение аффинности анти-ОАД антител при наличии клинических проявлений хронического инфекционного процесса может являться показанием к иммунокоррегирующей терапии.
Предлагаемый метод оценки уровня и аффинности анти-ОАД антител можно использовать для оценки гуморального иммунитета у кардиохирургических больных с целью прогнозирования риска развития послеоперационных гнойно-септических осложнений.
Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 6 работ. Материалы исследований были представлены на конкурсе работ молодых ученых Института иммунологии Минздрава РФ (Москва, 2001).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 99 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения собственных исследований, выводов и списка литературы, включающего 119 источников. Работа содержит 12 таблиц и 29 рисунков.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Материалы и методы исследования 1.1. Характеристика обследованных групп населения
В процессе работы обследовано 239 человек. 62 человека относятся к группе доноров, 52 пациента преклонного возраста, 71 больных, идущих на кардиохирургическое оперативное вмешательство, 36 больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом, 19 больных активным туберкулезом легких.
Контрольную группу составили 62 практически здоровых донора, в возрасте от 20 до 45 лет, в среднем 30 лет.
Клиническое обследование пожилых людей проводились на базе НКО ГНЦ Института иммунологии МЗ РФ, заведующая отделение - д.м.н., профессор Л.В. Лусс. Было выделено две группы: пожилые люди, имеющие проявления иммунной недостаточности (хронический бронхит, бронхиальная астма, частые ОРВИ, герпетическая инфекция, хронический синусит, хронический простатит) и пожилые люди без признаков иммунодефицита (контрольная группа). Возраст больных от 60 до 76 лет.
71 кардиохирургических больных, поступивших для протезирования клапанов сердца, наблюдались в отделении реконструктивной хирургии пороков сердца НИИ трансплантологии и искусственных органов МЗ РФ. Заведующий отделением - д.м.н., профессор М.Л. Семеновский. Среди обследованных пациентов 23% (16 чел.) - больные с инфекционым эндокардитом (ИЭ), больные с ревматоидным пороком сердца (РП) - 44% (31 чел.), больные с сочетанным протеканием РП+ИЭ -18% (13 чел.), другие пороки сердца наблюдались у - 15% (11 чел). У 41% больных (29 чел.) послеоперационный период протекал без осложнений, у 59% пациентов (42 чел.) возникли послеоперационные инфекционные осложнения. Средний
возраст пациентов - 42 года (от 16 до 67 лет).
36 больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом, 47% (17 чел.)
- в фазе ремиссии и 53% (19 чел.) в фазе обострения, обследовались и находились на лечении в отделении иммунопатологии ГНЦ - Института иммунологии МЗ РФ, заведующая отделением - д.м.н. Т.В. Латышева. Возраст больных от 19 до 56 лет, в среднем 37 лет.
Больные туберкулезом легких находились на лечении в 4-ом противотуберкулезном диспансере г. Москвы, кафедра фтизиопульмонологии
- клиническая база РГМУ. Заведующий кафедрой - д.м.н. В.А. Стаханов. Всего обследовано 19 больных. В структуре клинических форм преобладала инфильтративная форма - 16 чел. (84,3 %), больные диссеменированной формой составили 2 чел. (10,5%), фиброзно-кавернозной - 1 чел. (5,2%). Средний возраст больных был 38 лет (от 18 до 63 лет).
1.2. Методы исследования
Основным материалом для определения показателей гуморального шмунитета служила сыворотка периферической крови, полученная из субитальной вены.
1.2.1. Определение основных классов иммуноглобулинов. Содержание иммуноглобулинов классов А, G, М проводили методом
>адиальной иммунодиффузии в агаровом геле по G. Mancini [Mancini G. et al., 1964].
1.2.2. Определение титров lgG-антител к ОАД.
В работе использовали конъюгат Ы-ацетилглкжозаминил-N-щетилмурамил дипептида (ГМДП) с бычьим сывороточным альбумином БСА), приготовленные по методу B.A.Pap (ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.А. Эвчинникова). ГМДП является общей антигенной детерминантой (ОАД) всех ¡актерий, входящей в состав пептидогликана бактериальной клеточной стенки 1инегин Б.В. и соавт., 1995].
Для определения содержания антител к общей антигенной детерминанте сех бактерий (ОАД) использовали твердофазный иммуноферментный метод /1ФА) [Фримель Г., 1987].
1.2.3. Определение относительной аффинности lgG-антител к ОАД.
Определение относительной аффинности (OA) антител основано на использовании различных молярных концентраций тиоционата натрия, разрушающего связи комплекса антиген-антитело в твердофазном иммуноферментном анализе [Luxton R.W., Thompson E.J., 1990]. Аффинность антител оценивали по разнице оптической плотности до и после обработки комплекса тиоционатом натрия. Сыворотку больных брали в разведении, дающем при длине волны 492 нм оптическую плотность 1.000-1.500 единиц. После связывания специфических антител с антигеном, иммобилизованным на твердой фазе и удалении несвязавшиихся антител, в контрольную лунку вносили 0,15М фосфатно-солевой буфер («Sigma»), в опытные лунки - 3,5М, 4М, 4,5М, 5М раствор тиоционата натрия («Sigma») и инкубировали 20 мин. при комнатной температуре. Затем с помощью конъюгата антител против IgG человека, меченного пероксидазой хрена («Sigma») и внесения субстратной смеси проявляли реакцию.
Относительную аффинность антител рассчитывали по формуле:
ОА=9*А3.5 +10*А4 +11 *А4.5 +12*А5,
где A3 5, А4 и т. д. - процент оптической плотности образцов после воздействия указанной концентрации тиоцианата натрия от ОП исходного уровня Ат, за вычетом среднего нулевого контроля.
1.2.4. Определение константы диссоциации lgG-антител к ОАД.
Константу диссоциации сывороточных анти-ОАД-антител определяли
путем конкурентного (ингибиторного) анализа по Friquet [Friguet В. et al., 1985, Kim B.B. et al., 1990].
Готовили разведения ОАД от Ю"10 до 10"12М на разводящем растворе. Добавляли равный объем исследуемой сыворотки и инкубировали 20 мин при +37°С. Сыворотку использовали в разведении, попадающем на прямолинейный участок кривой титрования. В контроле к сыворотке добавляли равный объем разводящего раствора. Затем смесь вносили в лунки планшета, сенсибилизированного ОАД-БСА в постоянной
концентрации. В результате иммуноферментной реакции определяли количество анти-ОАД-антител, не связавшихся со свободным лигандом.
При построении кривой в координатах Скэтчарда (по оси абсцисс - 1/[Аг], по оси ординат - ОПо/рПо-ОПх]) значения Kd определяли по тангенсу угла наклона прямой, описывающей линейную регрессионную зависимость показателей.
1.2.5. Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью программы «Statistica 5.0». Достоверность уровня различия сравниваемых величин оценивали с помощью t-критерия Стьюдента и двустороннего точного критерия Фишера. Взаимосвязь изучаемых параметров оценивали с помощью коэффициента корреляции г при уровне значимости р < 0,05.
2. Результаты и обсуждение
2.1. Определение функциональной активности антител.
Общепринятым методом определения аффинности антител является определение константы диссоциации комплекса Аг-Ат по Скэтчарду в различных модификациях. Однако определение констант равновесия представляет достаточно трудоемкий процесс, часто связанный с необходимостью получения очищенных антител и точном определении их «энцентрации. При этом для клинических исследований достаточно получить некий условный параметр, позволяющий оценить аффинность антител 1ациентов в сыворотке крови по сравнению со здоровыми людьми, при различных патологиях, на разных стадиях развития заболевания или в 1роцессе лечения. Предлагаемый метод определения относительной аффинности антител по R.W. Luxton и E.J. Thompson, являясь простым и достаточно недорогим, ориентирован на решение этой задачи.
Было установлено, что Kd анти-ОАД антител нативной сыворотки 10 Диоров в среднем составила (3,4 ± 2,8)*10"6. Для определения относительной |ффинности антител нами была адаптирована методика R.W. Luxton и E.J. "hompson. В наш вариант входило определение OA с использованием диапазона олько высоких концентраций тиоцианата натрия (3,5, 4, 4,5 и 5 М).
Колебания значений ОА оказались достаточно высокими - от 341 до 3240. Среднее значение ОА анти-ОАД антител составило 1408 ± 964 (М ± а). Было обнаружено, что ОА высоко коррелирует с константой диссоциации комплекса АгАт по Скэтчарду (модификация В. Friquet и соавт.), то есть величина ОА достоверно отражает средний уровень аффинности антител (рис.1).
г =0,73 (р<0.05)
11Kd
Рис. 1. Корреляция относительной аффинности (R.W. Luxton и E.J. Thompson] анти-ОАД антител и Kd анти-ОАД антител 10 доноров (по Скэтчарду е модификации В. Friquet).
2.2. Количественная характеристика исследованных показателей гуморального иммунитета у обследованных групп населения.
2.2.1. Практически здоровые лица.
С помощью иммуноферментного анализа 62 сывороток здоровых донороЕ было установлено наличие во всех образцах lgG-антител к ОАД.
По уровню анти-ОАД антител все сыворотки были разделены на тр|< группы: слабо-, средне- и высокореагирующие и они составляют 21%, 60% t 19% соответственно (табл.1).
По значениям аффинности анти-ОДД антитела также разделили на три группы: слабо-, средне- и высокоаффинные, и они составили соответственно 19%, 62% и 19% (табл.1).
Табл. 1. Изменение уровня и относительной аффинности анти-ОАД антител в группе практически здоровых людей.
показатель № % М±ст
Уровень Ат к ОАД <300 13 21 546±210
300-800 37 60
>800 12 19
ОА <1000 12 19 1740±762
1000-2000 38 62
>2000 12 19
Известно, что аффинность антител нарастает в ходе иммунного ответа, т.е. высокореагируюицие сыворотки по сравнению со слабореагирующими содержат более аффинные антитела ^апе\л/ау СИ., 2001]. Эта зависимость характеризуется понятием «созревание» аффинности. У обследованной группы здоровых доноров обнаружена прямая корреляционная зависимость между концентрацией и аффинностью анти-ОАД антител (рис.2).
г = 0,6 (р<0,01)
концентрация
Рис. 2. «Созревание» аффинности анти-ОАД-антител у доноров (N=62).
2.2.2. Престарелые.
Было выделено две группы: пожилые люди, имеющие проявления иммунной недостаточности (хронический бронхит, бронхиальная астма, частые ОРВИ, герпетическая инфекция, хронический синусит, хронический простатит) (N=36) и пожилые люди без признаков иммунодефицита (контрольная группа) (N=16).
Уровень анти-ОАД антител в среднем находился в пределах нормы с выраженной тенденцией к его снижению у пожилых с признаками иммунодефицита. При этом у 62% пациентов (N=20, р<0,05) в группе с проявлениями иммунологической недостаточности и у 44% (N=7) в контрольной группе выявлен низкий уровень анти-ОАД антител по сравнению со здоровыми донорами (табл.2).
Анализ относительной аффинности анти-ОАД антител пожилых людей показал, что как у пациентов с признаками иммунодефицита, так и в контрольной группе аффинность в среднем достоверно снижена по сравнению с донорами. Эти данные согласуются с характерными возрастными изменениями, упоминаемыми ранее в литературе [Song Н. et al., 1997, Janeway Ch., 2001]. Низкую OA имели 62% обследованных как в группе с признаками иммунологической недостаточности, так и в контрольной группе (табл.2).
Обнаружена прямая корреляционная зависимость между концентрацией и OA анти-ОАД антител у пожилых людей: в группе с признаками иммунологической недостаточности г=0,61 (р<0,01), в контрольной группе -г=0,7 (р<0,01) (рис.3). Данный факт показывает, что процесс «созревания» аффинности анти-ОАД антител не нарушен, т.к. с увеличением концентрации антител повышается и их аффинность. Возможно, это связано с физиологическим снижением уровня и аффинности антител с возрастом, тогда как сам процесс «созревания» не изменен.
Содержание иммуноглобулинов классов A, G, М в среднем находилось в пределах нормы.
Табл. 2. Изменение уровня и относительной аффинности анти-ОАД антител у пожилых людей в сравнении с группой практически здоровых людей.
Пожилые люди с
ПОКАЗАТЕЛЬ признаками иммунологической Контрольная группа Доноры
недостаточности
N % М±ст N % М±ст N % М±ст
<300 20 62" 7 44 13 21
Уровень Ат к О АД 300800 6 19 401±350 6 37,5 498±268 37 60 546±210
>800 6 19 3 18,5 12 19
<1000 20 62" 10 62" 12 19
ОА 10002000 10 31,5 880±602* 3 19 1054±780* 38 62 1740±762
>2000 2 6,5 3 19 12 19
* - р<0,05 (7-критерий Стьюдента), ** - р<0,05 (двусторонний точный критерий Фишера) при сравнении с
соответствующими показателями в группе доноров.
г= 0,7 (р<0,01)
Контрольная группа (N=16)
800 1200 концентрация
Г = 0,61 (р<0,01)
2000
2800 |2400
0 2000
1
Пожилые люди о
проявлениями
иммунологическо
недостаточности
(N=36\.
1000 1400 1800 2200 2600 3000 концентрация
Рис. 3. «Созревание» аффинности анти-ОАД антител у пожилых людей. 2.2.3. Кардиохирургические больные.
Было установлено [Кулаков A.B. и соавт., 2001], что относительна аффинность к ОАД исходно снижена у больных, оперированных по пово,п различных заболеваний брюшной полости и имеющих инфекционны осложнения в послеоперационном периоде. Предполагается, что это може быть связано с накоплением антител с низким сродством к антигену, t.i «некачественных» антител, не способных эффективно осуществлят
иммунную защиту от бактерий [Decker D. et al., 1996, Muriel С. et al., 1996]. У кардиохирургических больных исследование аффинности анти-ОАД антител и связи этого показателя с вероятностью развития послеоперационных инфекционных осложнений ранее не проводилось.
Среди обследованных пациентов больные с ИЭ составили 23% (16 чел.), больные с РП - 44% (31 чел.), больные с сочетанным протеканием РП+ИЭ -18% (13 чел.), остальные пороки сердца наблюдались у - 15% (11 чел.) (табл.3).
Табл. 3. Показатели уровня и аффинности анти-ОАД антител у больных с различными сердечными патологиями.
Группы больных N Уровень анти-ОАД антител М ± а (ед. ОП) OA анти-ОАД антител М ± ст (у .е.)
Доноры 62 546±210 1740+762
Инфекционный эндокардит 16 585±301 1568+531
Ревматический порок сердца 31 498±202 1375 ±723
Инфекционный эндокардит + Ревматический порок сердца 13 511±298 895 ± 385*
Другие пороки сердца 11 532+231 782 + 312*
* - р<0,05 (достоверное отличие, критерий Стьюдента) при сравнении с группой доноров.
Установлено, что наиболее всего снижена аффинность анти-ОАД антител 1ри различных врожденных пороках и ревматическом пороке в сочетании с 1Нфекционным эндокардитом. По уровню анти-ОАД антител существенных >тклонений не выявлено (табл.3).
При ретроспективном анализе данных больные были разделены на 2 руппы: 1 группа - с неосложненным послеоперационным периодом (29
больных- 41%), 2 группа - с гнойно-септическими послеоперационными осложнениями (42 пациента - 59%). У больных с осложненным послеоперационным периодом исходно была снижена аффинность анти-ОАД антител (793±351 у.е.), а у большинства больных без осложнений показатель аффинности изменялся в пределах нормы (1464± 764 у.е). Существенного отличия от доноров по уровню анти-ОАД антител не было обнаружено ни в одной из исследуемых групп (табл.4.).
Табл. 4. Изменение уровня и относительной аффинности анти-ОАД антител у кардиохирургических больных в зависимости от течения послеоперационного периода.
Группы больных N Уровень анти-ОАД антител М ± от (ед. ОП) ОА анти-ОАД антител М ± ст (у.е.)
Доноры 62 546±210 1740±762
Больные без осложнений (1 группа) 29 565+265 1464+ 764
Больные с гнойно-септическими осложнениями (2 группа) 42 531±229 793±351*
* - р<0,01 (достоверное отличие, критерий Стьюдента) при сравнении с группой доноров.
Интересно, что уровень и аффинность анти-ОАД антител имели прямую корреляционную взаимосвязь в группе с неосложненным послеоперационным периодом. У больных с гнойно-септическими осложнениями такой зависимости не обнаружено, т.е. при нормальном количестве анти-ОАД антител наблюдается выраженная депрессия их аффинности, что, вероятно, обуславливает малую эффективность гуморального ответа (рис.4.).
3000
г =0,62 (р<0,05)
• • • •
Кардиохирургические больные без
послеоперационных
400 800 1200 1600 концентрация
2000
г = 0,2 (р=0,13)
Кардиохирургические больные с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями (п=41).
-200
100 200 300 400 500 600 700 800 900 концентрация
•ис. 4. «Созревание» аффинности анти-ОАД антител у кардиохирургических вольных в зависимости от течения послеоперационного периода.
При анализе показателей в зависимости от степени недостаточности ровообращения (НК) и функционального класса сердечной деятельности РК) были получены следующие данные. У больных первой группы (с еосложненным послеоперационным периодом) были более легкие арушения кровообращения (рис.5) и более высокие значения аффинности,
чем у больных второй группы (с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями) (рис.6).
о сл.
неосл.
о сл.
Рис. 6. Значение аффинности анти-ОАД антител в зависимости тяжести порока сердца.
от
Рис. 5. Распределение обследованных больных в группах в зависимости от тяжести порока сердца. I - НК2А ФКЗ (более легкие нарушения) [Ц - НК2Б ФК4 (более тяжелые нарушения) ФК- Функциональный класс (по классификации ЫУНА), НК- степень недостаточности кровообращения (по классификации И.Д. Стражеско), являются показателями тяжести состояния больного. 2А, 2Б и цифры (3, 4) это степень нарушения - чем больше цифра, тем тяжелее нарушение. * - р<0,01 (достоверное отличие, критерий Стьюдента) при сравнении с группой доноров.
неосл.
2.2.4. Больные хроническим рецидивирующим фурункулезом.
Было обследовано 36 больных с длительно текущим и рецидивирующим фурункулезом.
Гуморальный антибактериальный иммунитет у больных рецидивирующим фурункулезом в среднем характеризовался снижением аффинности сывороточных анти-ОАД антител по сравнению с группой практически здоровых лиц (1165+683), при этом концентрация антител у больных и доноров существенно не отличалась (табл.5.).
По уровню анти-ОАД антител слабореагирующие сыворотки составили 30%, среднереагирующие - 55%, высокореагирующие - 15%. По значениям аффинности анти-ОАД антитела также разделили на три группы: слабо-, средне- и высокоаффинные, и они составляют 50%, 39% и 11% соответственно (табл.5).
Габл. 5. Изменение уровня и относительной аффинности анти-ОАД антител у Зольных хроническим рецидивирующим фурункулезом.
показатель доноры больные ХРФ
№ % М±ст № % М±сг
Уровень \т к ОАД <300 13 21 545±193 11 30 566±215
300-800 37 60 20 55
>800 12 19 5 15
ОА <1000 12 19 1740±762 18 50" 1165±683*
10002000 38 62 14 39
>2000 12 19 4 11
- р<0,01 (и критерий Стьюдента), ** - р<0,05 (двусторонний точный оитерий Фишера) - достоверное отличие при сравнении с донорами.
Таким образом, у половины больных рецидивирующим фурункулезом ыявлена низкая относительная аффинность анти-ОАД антител по сравнению группой практически здоровых людей.
нтересно, что у 5 пациентов высокореагирующие сыворотки содержали чзкоаффинные анти-ОАД антитела, т.е. нормального «созревания» ^финности у этих больных не происходит, что может быть основной )ичиной заболевания (рис.7).
Обнаруженные изменения наблюдались на фоне нормального количества лмуноглобулинов сыворотки крови.
г = 0,89 (р<0,01)
3200
2800
п 2400
Л
| 2000
о
I 1600
\
■& 1200 « 800
/
400
/
о...........■.....
-200 200 600 1000 1400 1800 2200 2600
концентрация
Рис. 7. «Созревание» аффинности анти-ОАД-антител у больны: рецидивирующим фурункулезом (N=36).
2.2.5. Больные туберкулезом легких.
Было обследовано 19 больных активным туберкулезом легких. В структур! клинических форм преобладала инфильтративная форма - 16 чел. (84,3 %) больные диссеменированной формой составили 2 чел. (10,5%), фиброзно кавернозной - 1 чел. (5,2%). Бактериовыделение сочетанием различны: методов обнаружено у 9 (47%) больных.
Гуморальный иммунитет обследованных больных характеризовало достоверным снижением средних значений уровня анти-ОАД aнтитeJ (315+181) в сравнении со здоровыми донорами. Распределение больных т уровню анти-ОАД антител было следующим: слабореагирующие - 58% среднереагирующие - 37% и высокореагирующие - 5%.
Аффинность анти-ОАД антител больных активным туберкулезом легки также существенно снижена (748±532) по сравнению с группой практичесю здоровых людей. По значениям аффинности анти-ОАД-антител также был! выделено три группы: слабо-, средне- и высокоаффинные, и они составляю 74%, 21% и 5% соответственно (табл.6).
Таким образом, обнаружено значительное снижение уровня и аффинност анти-ОАД антител у больных активным туберкулезом легких.
Табл. 6. Изменение уровня и относительной аффинности анти-ОАД-антител у больных активным туберкулезом легких.
показатель доноры больные туберкулезом легких
№ % М±(т № % М±ст
Уровень АткОАД <300 13 21 11 57,9**
300-800 37 60 545+193 7 36,8 3151181*
>800 12 19 1 5,3
<1000 12 19 14 73,7**
ОА 10002000 38 62 1740+762 4 21 748±532*
>2000 12 19 1 5,3
* - р<0,01 ((- критерий Стьюдента), ** - р<0,05 (двусторонний точный критерий Фишера) - достоверное отличие при сравнении с донорами.
В то же время, корреляционной связи между уровнем и аффинностью анти-ОАД антител обнаружено не было, что свидетельствует о дисбалансе в процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител при чанной патологии (рис.8).
2800
2400
| 2000
о 1600 х
а 1200 ■& 800 400 О
0 400 800 1200 1600 2000 2400 2800 концентрация
'ис. 8. «Созревание» аффинности анти-ОАД-антител больных активным /беркулезом легких (N=19).
г =-0,1215 (р=0,1)
'В отношении уровней основных классов иммуноглобулинов отмечен повышенное содержание сывороточного 1дА. Содержание других классо иммуноглобулинов находилось в пределах нормы.
ВЫВОДЫ
1. Предложенный метод определения относительной аффинности антите высоко коррелирует с классическим определением аффинности антител п константе диссоциации комплекса антиген-антитело (г=0,73), что позволяе использовать его для оценки функциональной активности антител.
2. У пожилых людей с признаками иммунологической недостаточност уровень и аффинность анти-ОАД антител существенно снижен по сравнена с донорами, а у пожилых людей без признаков вторичного иммунодефицит наблюдается тенденция к снижению этих показателей. При этом процес «созревания» аффинности не нарушен.
3. У кардиохирургических больных с развившимися гнойно-септическим послеоперационными осложнениями наблюдается исходное снижена аффинности анти-ОАД антител, сопровождающееся нарушение «созревания» аффинности.
4. У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом наблюдаете выраженное снижение аффинности анти-ОАД антител, обнаружен нарушение в «созревании» аффинности. Эти изменения могут являться одне из причин рецидивирования гнойно-воспалительного процесса и показанием иммунокоррекции.
5. Гуморальный иммунитет больных активным туберкулезом легю характеризуется значительным снижением средних значений уровня аффинности анти-ОАД антител. Обнаружен ярко выраженный дисбаланс процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител.
6. Предлагаемый метод может являться объективным критерием д| прогнозиро-вания риска развития послеоперационных инфекционнь осложнений у кардиохирургических больных и назначен! иммунокоррегирующей терапии при иммунодефицитных состояни? обусловленных хроническим инфекционным процессом.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Тельнюк Я.И., Кулаков A.B., Климова C.B. Изменение аффинности естественных антител сыворотки крови человека к компоненту клеточной стенки бактерий - глюкозаминилмурамил дипептиду - при некоторых патйлогиях. Материалы 4-го Конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (29-31 мая 2001 г., Москва), М„ ВИНИТИ, т.2., с. 224.
2. Тельнюк Я.И., Дамбаева C.B., Кулаков A.B. Некоторые особенности функционирования иммунной системы у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2001, №7, с. 66.
3. Семеновский М.Л., Сускова B.C., Хитрик Н.М., Саитгареев Р.Ш., Пец И.Д., Емец В.И., Пинегин Б.В., Тельнюк Я.И. Прогнозирование септических осложнений и показания к иммунокоррекции у больных с инфекционным эндокардитом при подготовке к протезированию митрального клапана. Бюллетень НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, 2001, т. 2, №6, с. 30.
4. Тельнюк Я.И., Сетдикова Н.Х., Пинегин Б.В. Изучение особенностей функционирования иммунной системы у больных рецидивирующим фурункулезом. Иммунология, 2002, №4, с. 218-220.
5. Сускова B.C., Хитрик Н.М., Тельнюк Я.И., Саитгареев Р.Ш., Пец И.Д. Критерий прогнозирования инфекционно-септических осложнений у кардиохирургических больных. Медицинская иммунология, 2002, т.4, №2, с. 164-165.
6. Тельнюк Я.И., Сетдикова Н.Х., Карсонова М.Н. Особенности функционирования иммунной системы больных хроническим рецидивирующим фурункулезом и влияние на нее некоторых иммунотропных препаратов. Иммунология, 2003, №1, с. 20-23.
' Служба множительной техникн ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН
Заказ J g2 Тираж 100 за.
Оглавление диссертации Тельнюк, Яна Ивановна :: 2003 :: Москва
Введение.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Роль антител в гуморальном иммунном ответе.
1.1.1. Образование антител В-лимфоцитами.
1.1.2. Эффекторные функции антител.
1.2. Иммуноглобулины: структура и функция.
1.2.1. Общий план строения иммуноглобулинов.
1.2.2. Гетерогенность и вариабельность антител.
1.2.3. Специфичность и аффинность антител.
1.3. Характеристика антигенов.
1.3.1. Специфичность и иммуногенность антигена.
1.3.2. Бактериальные антигены и их роль в развитии антибактериального иммунитета.
1.4. Свойства антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий в норме и при патологии.
1.5. Некоторые методы оценки функциональной активности антител.
1.5.1. Определение константы ассоциации по Скэтчарду.
1.5.2. Определение динамических констант.
1.5.3. Определение относительной аффинности антител.
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Характеристика обследованных групп населения.
2.2. Реактивы и расходные материалы.
2.3. Оборудование.
2.4. Методы исследования.
2.4.1. Определение основных классов иммуноглобулинов сыворотки крови.
2.4.2. Определение титров IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий.
2.4.3. Определение относительной аффинности IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий.
2.4.4. Определение константы диссоциации IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий.
2.5. Статистическая обработка результатов.
Глава 3. Результаты и обсуждение.
3.1. Определение функциональной активности антител.
3.1.1. Определение относительной аффинности антител.
3.1.2. Определение константы диссоциации антител.
3.1.3. Сравнение показателей аффинности антител, полученных разными методами.
Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Тельнюк, Яна Ивановна, автореферат
Актуальность темы диссертации
Одной из важнейших задач клинической иммунологии является всесторонняя оценка иммунного статуса. Она включает в себя следующий комплекс основных тестов: оценка фагоцитоза, гуморального иммунитета и системы комплемента, иммунофенотипирование лимфоцитов, функциональная активность лимфоцитов и оценка интерферонового статуса [Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., 1992]. Одним из основных методов оценки гуморального иммунитета является количественное определение основных классов иммуноглобулинов - IgG, IgA и IgM. Иммуноглобулины выполняют важные функции по защите организма от чужеродных веществ антигенной природы [Boyden S.V., 1966, Jeffries R. et al., 1990]. Однако выполнение этих функций зависит не только от количественных, но и от качественных характеристик антител, важнейшей из которых является аффинность.
Изменение аффинности (и авидности) антител может быть причиной ряда патологических процессов, проявляющихся как развитием иммунокомплексной патологии, так и снижением резистентности к инфекционным агентам [Kasp Е. et al., 1992, Layward L., Soothill I.F., 1971]. Важную роль играет аффинность антител при аутоиммунных нарушениях [Fazekas G. et al., 1996, Czarnocka В. et al., 1997, Narula J., 1996]. Уровень аффинности антител свидетельствует о давности инфицирования: при первичном иммунном ответе вырабатываются антитела низкой аффинности, при повторном инфицировании и при длительном стаже заболевания - высокоаффинные антитела [Hashido М. et al., 1997, Lazzarotto Т. et al., 1997, Narita M. et al., 1996]. В эксперименте отмечено снижение аффинности IgG-антител с возрастом [Song Н. et al., 1997].
Уровень и аффинность антител к бактериальным антигенам являются важными показателями резистентности организма к развитию и течению инфекционных заболеваний [Peterson R.K. et al., 1978, Verbrugh H.A. et al., 1980]. Нами был выбран показатель, отражающий состояние гуморального иммунитета к антигенам, свойственным большинству бактерий, выступающих в качестве этиологического фактора. Известно, что в крови человека имеются антитела к огромному числу антигенов микробного происхождения, в том числе и к компоненту клеточной стенки бактерий - глюкозаминилмурамилдипептиду (ГМДП), который является составной частью пептидогликана и, таким образом, общей антигенной детерминантной (ОАД) всех бактерий. Анти-ОАД антитела играют исключительно важную роль в развитии естественного антибактериального иммунитета, обладая способностью активировать комплемент и осуществлять опсонизацию микробов [Пинегин Б.В. и соавт., 1995, Кулаков А.В. и соавт., 2001].
В настоящее время эффективность антибактериальной терапии находится на пределе возможного: подробно разработаны методы индивидуального подбора антибиотиков, способы их применения и контроль за эффективностью лечения. Тем не менее многие проблемы лечения инфекции не решены. Это связано не только с тем, что одновременно с совершенствованием антибиотиков возникают резистентные к ним штаммы микроорганизмов, но и главным образом с тем, что в подавлении жизнедеятельности микроорганизмов эти препараты играют вспомогательную роль [Giamarellou Н., 1999]. Сегодня важнейшим звеном в защите организма от инфекции считают его собственные иммунные механизмы, поэтому изучение антибактериального иммунитета необходимо для выяснения степени его нарушения и причинно-следственной роли в развитии иммунодефицита [Abbas et al., 1994].
Одной из существенных проблем современной хирургии является развитие послеоперационных гнойно-септических осложнений. Лабораторная диагностика (прогнозирование) осложнений обычно не проводится из-за отсутствия информативных диагностических критериев и методик, позволяющих определить вероятность развития инфекционных осложнений в период подготовки к операции. С этой точки зрения представляется перспективной возможность прогнозирования инфекционных осложнений в хирургии с помощью исследования уровня и аффинности анти-ОАД антител.
В связи с этим, целью работы явилось изучение количественных и качественных характеристик антител к общей антигенной детерминанте (ОАД) всех бактерий в норме и при некоторых иммунопатологических состояниях.
Задачи исследования
1. Определение уровня основных классов иммуноглобулинов и IgG-антител к N-ацетилглюкзаминилмурамил дипептиду, являющимся общей антигенной детерминантой всех бактерий (ОАД) в сыворотке периферической крови у следующих групп больных по сравнению со здоровыми донорами:
- у пожилых людей с проявлениями иммунологической недостаточности и без таковых;
- у кардиохирургических больных с неосложненным послеоперационным периодом и с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями.
- у больных рецидивирующим хроническим фурункулезом;
- у больных активным туберкулезом легких.
2. Отработка методики определения относительной аффинности анти-ОАД антител и оценка достоверности метода в сравнении с классической оценкой аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело.
3. Определение относительной аффинности анти-ОАД антител перечисленных групп больных в сравнении с группой здоровых доноров.
4. Определение связи изучаемых показателей с клиническими проявлениями вторичной иммунной недостаточности, а также оценка их диагностической и прогностической значимости.
Научная новизна
В работе впервые продемонстрировано, что уровень и особенно аффинность анти-ОАД антител являются объективными лабораторными критериями, характеризующими состояние антибактериального гуморального иммунитета при вторичных иммунодефицитных состояниях.
Показано, что у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител снижена, уровень анти-ОАД антител имеет тенденцию к снижению, однако «созревание» аффинности антител не нарушено, что обуславливает вероятность физиологического снижения исследуемых параметров с возрастом.
Показано, что аффинность анти-ОАД антител является прогностически значимым критерием развития гнойно-септических послеоперационных осложнений у кардиохирургических больных.
Обнаружено снижение относительной аффинности анти-ОАД антител у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом, что может являться одной из основных причин развития этого заболевания.
Анализ гуморального антибактериального иммунитета больных активным туберкулезом легких выявил снижение как уровня, так и аффинности анти-ОАД антител, сопровождающееся выраженным нарушением процесса «созревания» аффинности антител.
Практическая значимость работы
Метод оценки относительной аффинности анти-ОАД антител разработан в варианте, пригодном для использования в рутинных исследованиях, набраны нормативные показатели. Высокая степень корреляции с классическим способом определения аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело свидетельствует о высокой информативности предложенной методики.
На примере некоторых вторичных иммунодефицитных состояний показана возможность углубленного исследования гуморального антибактериального иммунитета и диагностики нарушенного звена иммунитета.
У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом и активным туберкулезом легких, а также у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител значительно снижена по сравнению со здоровыми донорами. Снижение аффинности анти-ОАД антител при наличии клинических проявлений хронического инфекционного процесса может являться показанием к иммунокоррегирующей терапии.
Предлагаемый метод оценки уровня и аффинности анти-АОД антител можно использовать для оценки гуморального иммунитета у кардиохирургических больных с целью прогнозирования риска развития послеоперационных гнойно-септических осложнений.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Модифицированный метод оценки относительной аффинности после элюции антител тиоционатом натрия в иммуноферментном анализе достоверно отражает средний уровень аффинности в сравнении с классическим методом, основанным на определении константы диссоциации комплекса антиген-антитело.
2. Эффективность антибактериального гуморального иммунитета зависит не только от уровня антител, но и от их аффинности.
3. У пожилых людей уровень и аффинность анти-ОАД антител снижены, но процесс «созревания» аффинности не нарушен, что может свидетельствовать о физиологическом снижении этих параметров с возрастом.
4. Относительная аффинность антител к общей антигенной детерминанте (ОАД) всех бактерий является объективными прогностическими критерием при оценке вероятности развития послеоперационных инфекционных осложнений у кардиохирургических больных.
5. Изменения в иммунном статусе больных хроническим рецидивирующим фурункулезом, заключающиеся в снижении аффинности анти-ОАД антител, может быть одной из причин рецидивирования гнойно-воспалительного процесса.
6. У больных активным туберкулезом легких уровень и аффинность анти-ОАД антител значительно снижены, ярко выражен дисбаланс в процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител.
Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение некоторых свойств антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий и их роли в норме и при патологии"
выводы
1. Предложенный метод определения относительной аффинности антител высоко коррелирует с классическим определением аффинности антител по константе диссоциации комплекса антиген-антитело (г=0,73), что позволяет использовать его для оценки функциональной активности антител.
2. У пожилых людей с признаками иммунологической недостаточности уровень и аффинность анти-ОАД антител существенно снижен по сравнению с донорами, а у пожилых людей без признаков вторичного иммунодефицита наблюдается тенденция к снижению этих показателей. При этом процесс «созревания» аффинности не нарушен.
3. У кардиохирургических больных с развившимися гнойно-септическими послеоперационными осложнениями наблюдается исходное снижение аффинности анти-ОАД антител, сопровождающееся нарушением «созревания» аффинности. При этом при снижении аффинности наблюдаются более тяжелые нарушения кровообращения.
4. У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом наблюдается выраженное снижение аффинности анти-ОАД антител, обнаружено нарушение в «созревании» аффинности. Эти изменения могут являться одной из основных причин рецидивирования гнойно-воспалительного процесса и показанием к им-мунокоррекции.
5. Гуморальный иммунитет больных активным туберкулезом легких характеризуется значительным снижением средних значений уровня и аффинности анти-ОАД антител. Обнаружен ярко выраженный дисбаланс в процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител.
6. Предлагаемый метод является объективным критерием для прогнозирования риска развития послеоперационных инфекционных осложнений у кардиохирургических больных и назначения иммунокоррегирующей терапии при иммуно-дефицитных состояниях, обусловленных хроническим инфекционным процессом.
3.2.7. Заключение.
Исследование параметров гуморального антибактериального иммунитета было проведено здоровым донорам, пожилым людям с признаками иммунологической недостаточности и без таковых, больным хроническим рецидивирующим фурункулезом и активным туберкулезом легких, а также кардиохирургиче-ским больным, идущим на оперативное вмешательство, связанное с замещением клапана механическими или биологическими протезами.
Полученные данные свидетельствуют об отсутствии существенных нарушений синтеза основных классов иммуноглобулинов у обследованных групп больных.
У пожилых людей с признаками иммунологической недостаточности уровень анти-ОАД антител существенно снижен по сравнению с донорами, а у пожилых людей в контрольной группе (без признаков вторичного иммунодефицита) наблюдается тенденция к его снижению. Такая же закономерность характерна для аффинности анти-ОАД антител. Однако, для этих показателей установлена прямая корреляционная зависимость, т.е. процесс «созревания» аффинности не нарушен.
У кардиохирургических больных с осложненным послеоперационным периодом снижена аффинность анти-ОАД антител, а у большинства больных без осложнений показатель аффинности изменяется в пределах нормы. Существенного отличия от доноров по уровню анти-ОАД антител не обнаружено ни в одной из исследуемых групп. Наиболее всего снижена аффинность анти-ОАД антител при различных врожденных пороках и ревматическом пороке в сочетании с инфекционным эндокардитом. Анализ данных в зависимости от степени недостаточности кровообращения (НК) и функционального класса сердечной деятельности (ФК) показал, что у больных с неосложненным послеоперационным периодом были более легкие нарушения кровообращения и более высокие значения аффинности. Уровень и аффинность анти-ОАД антител имели прямую корреляционную взаимосвязь в группе с неосложненным послеоперационным периодом. У больных с гнойно-септическими осложнениями такой зависимости не обнаружено, т.е. при нормальном количестве анти-ОАД антител наблюдается выраженная депрессия их аффинности, что, вероятно, обуславливает малую эффективность гуморального ответа.
У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом наблюдается выраженное снижение аффинности анти-ОАД антител, у части больных обнаружено значительное нарушение в «созревании» аффинности антител. Снижение аффинности анти-ОАД антител может быть одной из основных причин рециди-вирования гнойно-воспалительного процесса и показанием к иммунокоррекции.
Гуморальный иммунитет больных активным туберкулезом легких характеризуется значительным снижением средних значений уровня и аффинности ан-ти-ОАД антител по сравнению с группой практически здоровых людей. Корреляционной взаимосвязи между этими показателями не обнаружено, что свидетельствует о дисбалансе в процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител при данной патологии. Специфические антитела если и вырабатываются в необходимом количестве, то являются низкоаффинными, неэффективными.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Тельнюк, Яна Ивановна
1. Андронова Т.М., Ростовцева Л.И., Добрушкина Е.П., Гаврилов Ю.Д., Дешко Т.Н., Иванов В.Т. Структура антиопухолевого гликопептида клеточной стенки Lactobacillus bulgaricus. Биоорганическая химия, 1980, №6, с. 18301841.
2. Белобородова Н.В., Бачинская Е.Н. Иммунологические аспекты послеоперационного сепсиса. Анестезиология и реаниматология, 2000, №1, с. 59-66.
3. Белокриницкий Д.В., Белокриницкая О.А. и др. О некотрых механизмах иммунологической адаптации при развитии подострого ифекционного эндокардита. Вестник РАМН, 1995, №5, с. 22.
4. Берзофски Дж.А., Берковер А.Дж. Взаимодействие антиген-антитело. В книге «Иммунология» под редакцией У.Пола в 3-х т. М., Мир, 1989, т.З, с. 8588.
5. Визель А.А., Гурылев М.Э. Туберкулез. М., ГЭОТАР Медицина, 1999,208 с.
6. Галактионов В.Г. Иммунология. М., МГУ, 1998, 480 с.
7. Дамбаева С.В. Новые подходы к оценке фагоцитоза при различных видах иммунологической недостаточности. Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, М., 2001.
8. Иванов В.Т., Хаитов P.M., Андронова Т.М., Пинегин Б.В.: Ликопид новый отечественный высокоэффективный иммуномодулятор для лечения и профилактики заболеваний, связанных со вторичной иммунологической недостаточностью. Иммунология, 1996, № 2, с. 4-6.
9. Иммунология и старение. Под редакцией Т. Макиндава и Э. Юниса. М., Мир, 1980.
10. Калина М.Г., Елкина С.И., Мошиашвили И.Я., Сергеев В.В. Адъювантный эффект синтетических гликопептидов на гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимые антигены. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1997, № 6, с. 97-100.
11. Климова С.В., Пинегин Б.В., Кулаков А.В., Комарова И.А. Особенности гуморального антибактериального иммунитета у часто и длительно болеющих людей. Иммунология, 1997, №3, с. 50-52.
12. Климова С.В., Пинегин Б.В., Тотолян Н.А. Антитела к компоненту клеточной стенки бактерий глюкозаминилмурамилдипептиду (ГМДП) у неврологических больных. Медицинская иммунология, 1999, т.1, №3, с. 65.
13. Ковальсон В.М. Гуморальная регуляция. Итоги науки и техники, серия "Физиология человека и животных". М., ВИНИТИ Пресс, 1986, №31, с.11-13.
14. Колесникова Н.И. Септический эндокардит в кардиохирургии. М., Медицина, 2001, с. 21-38.
15. Кочемасова 3. Н., Ефремова С. А., Набоков Ю. С. Микробиология. М., Медицина, 1984, с. 22-24.
16. Кулаков А.В., Карсонова М.И., Пинегин Б.В. Прогнозирование гнойных осложнений в хирургии с помощью определения аффинности антител. Хирургия, 2001, №11, с. 55-58.
17. Кулаков А.В., Пинегин Б.В., Симонова А.В. Иммунный статус и антитела к некоторым условно-патаогенным бактериям у ВИЧ-инфицированных больных. Иммунология, 1997, № 4, с. 15-18.
18. Кулаков А.В., Черноусое А.Д., Ещанов О.Т. и др. Антитела к различным компонентам клеточной стенки бактерий в сыворотке крови человека. Иммунология, 1995, № 5, с. 26-28.
19. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. М., Высш. шк., 1985, 278 с.
20. Лесницкий А.И. Стафилококковые заболевания кожи (состояние различных звеньев иммунитета и комплексная дифференцированная терапия). Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук, 1986, 22 с.
21. Носков Ф.С., Никитина JI.E., Масленникова JI.K., Фридман Е.А. Иммуностимулирующая и противоинфекционная активность синтетических аналогов гликопептидов клеточной стенки бактерий. Иммунология, 1989, № 4, с. 53-55.
22. Першин Б.Б. Стресс, вторичные иммунодефициты и заболеваемость. М., РАЕН, 1994, с. 55-57.
23. Пинегин Б.В., Кулаков А.В., Макаров Е.А. Определение естественных антител к N-ацетилглюкозаминил-М-ацетилмурамил дипептиду в сыворотке крови здоровых людей. Иммунология, 1995, №1, с.42-45.
24. Покровский В.И. Иммунология инфекционного процесса. М., Медицина, 1994,230 с.
25. Pap В.А., Макаров Е.А., Юровский В.Ю. Синтетические иммуногенные комплексы на основе пептида поверхностного белка вируса ящура. Биоорганическая химия, 1990, т. 16, №7, с. 904-915.
26. Рахмилевич А.Л., Рахимова В.К., Андронова Т.М., Бовин Н.В. Иммуностимулирующий эффект мурамилдипептида, глюкозаминилмурамилдипептида и их синтетических производных в системе in vitro. Антибиотики и химиотерапия, 1989, № 8, с. 586-588.
27. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. М.: Мир, 2000, 328 с.
28. Ростовцева Л.И., Андронова Т.М., Малькова В.П., Сорокина И.П., Иванов В.Т. Синтез и противоопухолевая активность гликопептидов, содержаащих N-ацетилмурамил-дисахаридную связь. Биоорганическая химия, 1981, №7, с.1843-1858.
29. Скворцов В.Ю., Галактионов Б.Г., Мастернак Т.Б., Кирилина Е.А., Забанова Е.В., Молодцов Н.В. Стимулирующий эффекат хитозана на иммунный ответмышей различных линий против эритроцитов барана. Иммунология, 1984, № 4, с. 22-25.
30. Соловьев Г.М., Петрова И.В., Ковалев С.В. Иммунокоррекция, профилактика и лечение гнойно-септических заболеваний. М., Медицина, 1987, с.23-26.
31. Фримель Г. Иммунологические методы. М., Медицина, 1987, с. 54-59.
32. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД. М., Народная академия культуры и общечеловеческих ценностей, 1992,352 с.
33. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. М., ВИНИТИ РАН, 2001, 224 с.
34. Хоменко А.Г. Туберкулез. М., Медицина, 1996,496 с.
35. Хоменко А.Г., Инсанов А.Б. Иммунохимиотерапия с применением левами-зола и диуцифона больным хроническим деструктивным туберкулезом легких. Проблемы туберкулеза, 1984, №9, с.23-28.
36. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М., Медицина, 1999, 608 с.
37. Abbas, Lichtman, Pober. Cellular and Molecular Immunology, 1994, c. 165-169.
38. Adam A., Lederer E. Muramyl peptides: immunomodulators, sleep factors, and vitamins. Medicinal research reviews, 1984, v. 4, p. 111-152.
39. Adam A., Petit J-F., Lefrancier P., Lederer E. Muramyl peptides. Chemical structure, biological activity and mechanism of action. Molecular and Cellular Biochemistry, 1981, v. 41, p. 27-47.
40. Adarzua P., Losardo J.E., Gubler M.L. et al. Microinjection of monoclonal antibody Pab421 into human SW480 colorectal carcinoma cells restores the transcription activation function to mutant p53. Cancer Res., 1995, v. 55, p. 3490-3494.
41. Alzari P.M., Lascombe M., Poljak RJ. Three dimentional structure of antibodies. Ann. Rev. Immunol., 1988, v. 6, p. 555-580.
42. Amzel L.M., Poljak R.J. Three dimentional structure of immunoglobulins. Ann. Rev. Biochem., 1979, v. 48, p. 961.
43. Andronova Т. M., Ivanov V. T. The structure and immunomodulating function of glucosaminylmuramyl peptides. Sov. Medical Review D. Immunology, 1991, v. 4, p. 1-63.
44. Andronova T.M., Titov V.M., Makarov E.A., Mescheryakova E.A., Ivanov V.T., Podgornova N.N., Bistrichenko A.S. Bacterial cell wall glycopeptides as adjuvants. Proceedings of the Second Forum on Peptides, 1980, v. 174, p.561-564.
45. Armitage R.J., Alderson M.R.: B-cell stimulation. Curr. Op. Immunol., 1995, v. 7, p. 243-247.
46. Asano Т., McWaters A., An T. Et al. Liposomal muramyl tripeptid upregulates IL-la, IL-lb, TNF-a, IL-6 and IL-8 gene expression in human monocytes. J. Pharmacol. Exp. Ther., 1994, v. 268, p.1032-1039.
47. Bogdanov L. G. Observations of the therapeutic effect of the anti-cancer preparation isolated from Lactobacillus bulgaricus LB-51 tested on 100 oncological patients. Sofia, Bulgaria, 1982, p. 85-59.
48. Boyden S.V. Natural antibodies and the immune response. Adv.Immunol., 1966, №5, p. 1-28.
49. Butch A.W., Chung G-H., Hoffman J. W., Nahm M,H.: Cytokine expression by germinal center cells. J. Immunol., 1993, v. 154, p. 39-47.
50. Davies D.R., Metzger H. Structural basis of antibody function. Ann. Rev. Immunol., 1983, v. l,p. 87-117.
51. Davies D.R., Padian E.A., Sheriff S. Antigen:antibody complexes. Ann. Rev. Biochem., 1990, v. 59, p. 439-473.
52. Decker D., Schondorf M., Bidlingmaier F et al.: Surgical stress induces a shift in type-l/type2 T-helper balance, suggesting down regulation of cell-mediated immunity commensurate to the trauma. Surgery, 1996, v. 119, p. 316-325.
53. Dinarello C.A., Krueger J.M. Induction of interleukin-1 by synthetic and naturally occuring muramyl peptides. Federation Proceedings, 1986, v. 45, p. 2545-2548.
54. Edelman G.M., Cunningham B.A., Gall W.E. et al. The covalent structure of an entire gamma G immunoglobulin molecule. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 1969, v. 63, p. 78-85.
55. Ellouz F., Adam., Ciorbaru R., Lederer E. Minimal structure requirements for adjuvant activity of bacterial peptidoglycan derivatives. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1974, v. 59, p. 1317-1325.
56. Fagerstam L.G., Frostell A., Karlsson R. et al. Detection of antigen-antibody interactions by surface plasmon resonance. Application to epitope mapping. J. Mol. Recognit., 1990, v. 3, p. 208-214.
57. Fagerstam L.G., Frostell-Karlsson A., Karlsson R. et al. Biospecific interaction analysis using surface plasmon resonance detection applied to kinetic, binding site and concentration analysis. J. Chromatogr., 1992, v. 1-2, p. 397-410.
58. Fazekas G., Rosenwirth В., Dukor P. et al. Kinetics and isotype profile of rheumatoid factor production during viral infection: organ distribution of antibody secreting cells. Scand. J. Immunol., 1996, v. 44(3), p. 273-284.
59. Forte W.C., Noyoya A.M., de Carvalho Junior F.F., Bruno S. Repeated fiirunculo-sis in adult nale with abnormal neutrophil activity. Allergol. Immunopathol., 2000, v. 28 (6), p. 328-331.
60. Friguet В., Chaffotte A.F., Djavadi-Ohaniance L. et al. Measurements of the true affinity constant in solution of antigen-antibody complexes by enzyme-linked immunosorbent assay. J. Immunol. Meth., 1985, v. 77, p.305-319.
61. Giamarellou H. Fourth generation cephalosporins in the antimicrobial chemotherapy of surgical infections. J. Chemother., 1999, v. 11(6), p. 486-493.
62. Goldblatt D., Scadding G.K., Lund VJ. et al. Association of Gm-allotypes with the antibody response to outer membrane proteins of common upper respiratory tract organism, Moraxella catarrhalis. J. Immunol., 1994, v. 153, p. 5316-5320.
63. Grewal I.S., Flavell R.A.: A central role of CD40 ligand in the regulation of CD4+ T-cell responses. Immunlol. Today, 1996, v. 17 (9), p. 410-414.
64. Czarnocka В., Janota-Bzowski M., Mcintosh R.S.et al. Immunoglobulin G kappa antithyroid peroxidase antibodies in Hashimoto's thyroiditis: epitope-mapping analysis. J. Clin. Endocrinol. Metab., 1997, v. 82 (8), p. 2639-2644.
65. Hashido M., Inouye S., Kawana T. Differentiation of primary from nonprimaiy genital herpes infections by a herpes simplex virus-specific immunoglobulin G avidity assay. J. Clin. Microbiol., 1997, v. 35(7), p. 1766-1768.
66. Heigeland S.M., Grov A. Immunochemical characterization of staphylococcal and micrococcal mucopeptides. Acta Path. Microbiol. Scand. Sect., 1971, v. 79, p. 819-826.
67. Heymer В., Bernstein D., Schleifer K.H., Krause R.M.: Measurement of pepti-doglycan antibodies to a radioimmunoassay. Z. Immunol. — Forsch., 1975, v.149. p.168-178.
68. Heymer В., Shleifer K.H., Read S. et al. Detection of antibodies to bacterial cell wall peptidoglycan in human sera. J.bnmunol., 1976, v. 117(1), p. 23-26.
69. Holland G.P., Holland N., Steward M.W. Interferon-gamma potentiates antibody affinity in mice with a genetically controlled defect in affinity maturation. Clin. Exp. Immunol., 1990, v. 82 (2), p. 221-226.
70. Janeway Ch. A., Travers P., Walport M., Shlomchik M. J. hnmunobiology. Garland Publishing Inc., 2001, 5th ed., pp. 732 .
71. Jeffries R., Kumaratne D.S. Selective IgG subclass deficiency: quantification and clinical revalence. Clin. Exp. Immunol., 1990, №81, p. 357-367.
72. Karlsson R., Michaelsson A., Mattsson L. Kinetic analysis of monoclonal antibody-antigen interactions with a new biosensor based analytical system. J. Immunol. Methods, 1991, v.145, №1-2, p. 229-240.
73. Kasp E., Whiston R., Dumonde D. Et al. Antibody-affinity to retinal s-antigen in patients with retinal vasculitis. Amer. J. Ophthal., 1992, v. 113, p. 697-701.
74. Katz J.R., Krown S.E., Satae B. Antigen-specific and polyclonal B-cell responses in patients with acquired immunodeficiency disease syndrome. Clin. Immunol. Immunopathol., 1986, v. 39 (3), p. 359-367.
75. Kim B.B., Dikova E.B., Sheller U. et al.: Evaluation of dissociation constants of antigen-antibody complexes by ELISA. J. Immunol. Meth., 1990, v. 131, p. 213222.
76. Korting H.C., Lukacs A., Braun-Falco 0. Skin microflora and odor of healthy human skin. Hautarzt., 1988, v.39(9), p. 564-568.
77. Krueger J.M., Pappenheimer J.R., Karnovsky M.L. Sleep promoting effects of muramyl peptides. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 1982, v. 79, p. 6102-6106.
78. Laube S., Farrel A.M. Bacterial skin infections in the elderly: diagnosis and treatment. Drugs Aging, 2002, v. 19(5), p. 331-342.
79. Layward L., Allen A., Hattersley I. Et al. Low antibody-affinity restricted to the IgA isotype in IgA nephropathy. Clin. Exp. Immunol., 1994, v. 95, p. 35-41.
80. Leclerc C., Chedid L. Macrophage activation by synthetic muramyl peptides. Limphokines (Pick E., ed.), New York, Academic Press, 1982, v. 7, p. 1-21.
81. Lenschow D.J., Walunas T.L., Bluestone J.A.: CD28/B7 system of T cell costimu-lation. Ann. Rev. Immunol., 1996, v. 14, p. 233-258.
82. Luxton R.W., Thompson EJ. Affinity distributions of antigen-specific IgG in patients with multiple sclerosis and in patients with viral encephalitis. J. Immun. Meth., 1990, v. 131, p. 277-282.
83. Macdonald R.A., Hosking C.S., Jones C.L. The measurement of relative antibody affinity by ELISA using thiocyanate elution. J. Imm. Meth., 1988, v. 106, p. 191194.
84. Mancini G., Vaerman J.-P., Carbonara A.O., Heremans J.F. A single radialdiffu-sion method for the Immunological quntitation of protein. Procidees of the biological fluids / Ed. N. Peters. Amsterdam, L.N.Y., Elsevier, 1964, p. 370-379.
85. Muriel C., Garcia-Sanchez A., Sanchez F. et2a al. Changes in the immunologic status related to the duration of the anaesthesia/surgery procedure. Rev. Esp. An-aesthesiol. Reanim., 1996, v. 43, p.160-163.
86. Narita M., Yamada S., Matsuzono Y.et al. Immunoglobulin G avidity testing in serum and cerebrospinal fluid for analysis of measles virus infection. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 1996, v. 3(2), p. 211-215.
87. Narula J., Petrov A., O'Donnell S.M. et al. Gamma imaging of atherosclerotic lesions: the role of antibody affinity in in vivo target localization. J. Nucl. Cardiol., 1996, v. 3(3), p. 231-241.
88. Pabst M .J., Jo hnston R .B. Increased p roduction о f s uperoxyde anion by macrophages exposed in vitro to muramyl peptide. Journal of Experimental Medicine, 1980, v. 151, p. 101-114.
89. Peterson R.K., Wilkinson B.J., Kim G., Schmeling D. The key role of peptidogly-can in the opsonisation of Staphilococcus aureus. J. Clin. Invest., 1978, v. 61, p. 597-609.
90. Pinegin B.V., Kulakov A.V., Makarov E.A. et al. The occurence of natural antibodies to minimal component of bacterial cell wall (N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl dipeptide) in sera from healthy humans. Immunol. Lett., 1995, v. 47, p. 33-37.
91. Poljak R.J. X-ray diffraction studies of immunoglobulins. Adv. Immunol., 1975, v. 21, p.1-33.
92. Pullen G.R., Fitzgerald M.G., Hosking C.S. Antibody avidity determination by ELISA using thiocyanate elution. J. hnm. Meth., 1986, v. 86, p. 83-87.
93. Pumphrey R.S. Computer models of the human immunoglobulins. Immunol. Today, 1986, v. 7,p.206-211.
94. Schachenmayer W., Heymer В., Hafekamp O. Antibodies to peptidoglycan in the sera from population serves. Z. hnmuno.l Forsch., 1975, v. 149, p.179-186.
95. Sene S., Mitsuura S., Ogawara M., Tsubura E. Potentiating effect ofmuramyl dipeptide and its lipophilic analog encapsulated in liposomes on tumor cell killing by human monocytes. Journal of Immunology, 1984, v. 132, p. 2105-2110.
96. Sharer D.H., Day M.J. Aspects of the humoral immune response to Staphylococcus i ntermedius i n d ogs w ith s uperflsial pyoderma, deep pyoderma and anal furunculosis. Vet-Immunol-Immunopathol., 1997, №2, p. 107-200.
97. Sidwell R.U., Buncer C.B. A case of common variable immunodeficiency presenting with furunculosis. Br. J. Dermatol., 2002, v. 147 (2), p. 364-367.
98. Song H., Price P.W., Cerny J. Age-related changes in antibody repertoire: contribution from T cells. Immunol. Rev., 1997, №160, p. 55-62.
99. Soothill I.F., Steward M.W. The immunopathological significance of the heterogeneity of antibody affinity. Clin. Exp. Immunol., 1971, v. 9, p. 193-196.
100. Suzanne F., Bradley M D ,University of Michigan Medical School. Effectiveness of Mupirocin in the Control of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Infect. Med., 1993, v. 10(7), p. 23-31.
101. Tarlinton D.M., Kennet S. Dissecting affinity maturation: a model explaining selection of antibody-forming cells and memory B-cells in the germinal centre. Immunology Today, 2000, v. 21 (9), p. 436-441.
102. Tenu J.P., Lederer E., Petit J.F. Stimulation of thymocyte mitogenic protein secretion and of cytostatic activity of mouse peritoneal macrophages by trehalose dimicolate and muramyl dipeptide. European Journal of Immunology, 1980, v. 10, p. 647-653.
103. Vacheron F., Guenounou M., Zinbi H., Nauciel C. J. Natl. Cancer Inst., 1986, v. 77 (2), p. 549-553
104. Valentine R.C., Green N.M. Electron microscopy of an antibody-hap ten complex. J. Mol. Biol., 1967, v. 27, p. 615-617.
105. Verbrugh H.A., Peters R., Rozenberg-Arska M., Peterson P.K., Verhoef J. Antibodies to cell wall peptidoglycan of staphylococcus aureus in patients with serious staphylococcus infection. J. Inf. Dis., 1981, v. 144(1), p. 1-9.
106. Wu. T.T., Kabat E. A. An analysis of the sequences of the variable regions of Bence Jones proteins and myeloma light chains and their implications for antibody complementarity. J. Exp. Med., 1970, v. 132, p.211-250.1. Благодарности