Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение механизмов психотропного действия ладастена в зависимости от фенотипа реакции на эмоциональный стресс

На правах рукописи

ВОРОНИН МИХАИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ПСИХОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ ЛАДАСТЕНА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ФЕНОТИПА РЕАКЦИИ НА ЭМОЦИОНАЛЬНЫЙ СТРЕСС

14.00.25. - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва 2004

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: академик РАМН

СБ. Середенин

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Г.И. Ковалев А.А. Зозуля

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова

Защита диссертации состоится « »_2004 года в_часов

на заседании диссертационного совета Д.001.024.01 ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН (125315, Москва, ул. Балтийская, д.8)

С диссертацией можно ознакомиться в ученой части Института Автореферат разослан « »_2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета:

доктор медицинских наук Е.А. Вальдман

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Необходимость фармакологической коррекции эмоционально-стрессовых расстройств обоснована в трудах отечественных специалистов (Вальдман, А.В. и соавт. 1979; Судаков, К.В. 1981).

В арсенале средств фармакотерапии на сегодняшний день преобладают транквилизаторы бензодиазепинового ряда, селективные ингибиторы обратного захвата серотонина и агонисты серотониновых рецепторов, психостимуляторы и ноотропные средства. Лекарства перечисленных групп имеют свои достоинства и недостатки, однако ведущей проблемой при их назначении является индивидуальная чувствительность (Seredenin, S.B. 2003). Различия в реакциях пациентов обусловлены комплексом наследственных и приобретенных свойств, в числе которых индивидуальная оценка аверсивного фактора, типологические особенности личности, мотивационные, тревожные и астенические проявления, при которых возникают разные ответы на психотропные средства (Вальдман, А.В. и соавт. 1979).

Однако имеются веские доказательства, что в их основе лежат генетические факторы, прежде всего наследственно контролируемые механизмы эмоционально-стрессовых реакций (Seredenin, S.B. 2003). Хорошо известно, что в классе млекопитающих при воздействии стрессирующих факторов выделяются, в качестве основных, стратегии поведения, характеризуемые как активная и пассивно-оборонительная, крайним выражением последней рассматривается реакция замирания. Близкие типы поведения описаны и для человека (Вальдман, А.В. и соавт. 1982; Наенко, Н.И 1990; Судаков, К.В. и соавт. 1997).

Многолетними исследованиями отдела фармакогенетики ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН доказана зависимость эффектов психотропных средств от фенотипа ответа на эмоциональный стресс (Середенин, СБ. и соавт. 1979; Машковский, М.Д. и соавт. 1980; Середенин, СБ. и соавт. 1998; 2001).

Таким образом, была определена стратегия поиска принципиально новых средств коррекции- эмоционально-стрессовых реакций; влияние которых должно быть адресовано к определенному фенотипу ответа. Так, в качестве

альтернативы бензодиазепинам, вызывающи ' ' !СС-

активируемом поведении, разработан препарат Афобазол, обладающий ан-ксиолитическими свойствами при выраженной реакции страха, но свободный от седативного действия (Середенин, СБ. и соавт. 1998). В эксперименте было показано, что эффекты психостимуляторов амфетамина и сиднокарба проявляются при активном ответе на стресс и значительно менее выражены при пассивно-оборонительном (Машковский, М.Д. и соавт. 1980). Возможно, что именно этими различиями обусловлены хорошо известные факты неэффективности психостимуляторов у отдельных индивидуумов (Александровский, Ю.А. 1976). Поэтому актуальной является разработка нового психотропного средства, способного вызывать активацию при разных формах ЭСР и лишенного недостатков типичных психостимуляторов, таких как эффекты истощения, возникновение зависимости др.

В ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН под руководством А.В. Вальдмана, Б.М. Пятина, И.С. Морозова было найдено соединение N-(2-адамантил)-^(парабромфенил)амин, у которого на первом этапе фармакологического изучения описаны психостимулирующий (Морозов, И.С. и соавт. 1995) и иммуностимулирующий эффекты (Галушина, Т.С. и соавт. 1996). Дальнейшая разработка препарата на основе фармакогенетической методологии позволила установить наличие у него анксиолитических свойств (Середенин, СБ. и соавт. 2001). Таким образом, новое соединение, получившее название Ладастен, является уникальным фармакологическим препаратом, имеющим спектр эффектов впервые описанный в научной литературе.

Целью настоящей работы явилось изучение механизмов психотропного действия Ладастена у животных с разным фенотипом ответа на эмоционально-стрессовое воздействие.

Для ее достижения необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить психофармакологические свойства Ладастена на экспериментальных моделях с генетически детерминированной реакцией на эмоциональный стресс.

2. Изучить параметры бензодиазепиновой рецепции у крыс MR и MNRA при эмоционально-стрессовом воздействии в сравнении с мышами BALB/c и С57В1/6.

3. Исследовать влияние Ладастена на рецепцию в бензодиазепиновом участке ГАМКд рецепторного комплекса у крыс MR и MNRA.

4. Изучить содержание моноаминов в головном мозге крыс MR и MNRA в норме, при эмоционально-стрессовом воздействии и при введении Ладастена.

Научная новизна исследования. Установлено снижение связывающей способности в бензодиазепиновом участке ГАМКа рецепторного комплекса при эмоционально-стрессовом воздействии у крыс MR при отсутствии такового у MNRA: Показана гомология стресс-индуцированных изменений бензодиа-зепиновой рецепции у крыс MR и мышей BALB/c. Выявлена способность Ладастена в дозах, вызывающих анксиолитический эффект, частично предотвращать стресс-индуцированные нарушения бензодиазепиновой рецепции. Продемонстрированы межлинейные различия в содержании моноаминов в головном мозге крыс MR и MNRA. Доказано, что эмоционально-стрессовое воздействие вызывает специфичные для изученных генотипов сдвиги в их уровне. Установлено, что Ладастен по-разному влияет на содержание дофамина и серотонина в структурах головного мозга крыс MR и MNRA. На основе полученных экспериментальных данных сформулировано научное положение о различных механизмах активации поведения Ладасте-ном у животных с «активной» и «пассивной» реакциями на эмоциональный» стресс за счет регуляции моноаминергических и ГАМКергических процессов.

Научно-практическая ценность. Результаты исследования включены в материалы заявки на патент РФ (Ладастен - N-(2-aдамантил)-N-(парабромфенил)амин) № 2175229 от 27 октября 2001 г, в комплект документов, представленных в Минздрав РФ для получения разрешения на клинические испытания (положительное решение ФК МЗ РФ № 26 от 23 января 2003 г). На основе экспериментально-фармакогенетических данных исследования определены показания для применения Ладастена при астенических расстройствах у больных и в целях профилактики и коррекции эмоционально-стрессовых расстройств при деятельности в экстремальных условиях.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003), на 2-ом Съезде Российского Научного Общества фармакологов (Москва, 2003).

Объем и структура диссертации. Материал диссертации изложен на 111 страницах машинописного текста и содержит 18 рисунков и 6 таблиц. Диссертация состоит из введения, экспериментальной части (материалы и методы исследования, результаты исследования в шести главах), обсуждения результатов и выводов. Список цитируемой литературы включает 411 источников, из которых 47 отечественных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Животные. В работе использовали крыс-самцов инбредных линий Maud-sley Reactive (MR) и Maudsley Non-reactive (MNRA), полученных из питомника Winston-Salem (США), разведение которых продолжено в Клинике лабораторных животных ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН. Животных массой 200-ЗООг содержали в условиях вивария лаборатории фармакологической генетики по 6 особей в клетке в течение 2-х недель до начала эксперимента на стандартной диете при 12-ти часовом световом режиме. Эксперименты проводили в осенне-зимний период, в первой половине дня.

Метод «открытое поле». Эмоционально-стрессовое воздействие моделировали в тесте «открытое поле» в модификации П.М. Бородина с соавторами (Бородин, П.М. и соавт. 1976).

Животных перед экспериментом в ОП выдерживали в темноте в течение 1 мин, после чего помещали в один из периферических квадратов. Наблюдение за животным производили в течение 3 мин раздельно фиксируя число пересеченных квадратов на периферии, в центральных областях, число стоек без опоры на стенки установки и количество дефекаций. Суммарное число пересеченных квадратов вместе с числом стоек обозначали как общую двигательную активность.

Радиолигандный метод. Сразу после извлечения из ОП крыс декапитиро-вали, извлекали головной мозг и отделяли ствол и мозжечок. Оставшуюся часть гомогенизировали в 16 мл ледяного (0-4°С) Tris-HCI буфера (рН 7,4) используя гомогенизатор Ultra-turrax T25 (IKA-labortechnik). Полученную суспен-

зию центрифугировали при 42 000 g в течение 25 мин в ультрацентрифуге Optima L-70K (Beckman Coulter). После центрифугирования супернатант сливали, осадок ресуспендировали повторной гомогенизацией в том же объеме буфера, затем вновь центрифугировали. Процедуру отмывки проводили трижды, полученный осадок ресуспендировали в 20 мл Tris-HCI буфера и использовали по 250 мкл в процедуре связывания [3Н]-диазепама.

Мембранную фракцию головного мозга инкубировали с Ы-метил-3Н-диазепамом (удельная активность 67,4 Ки/ммоль) в конечной концентрации 1 нМ в течение 30 мин при температуре 0-4°С. Неспецифическое связывание определяли в присутствии избытка немеченого диазепама (20 мкМ). Специфическое связывание рассчитывали как разницу между общим и неспецифическим связыванием. Влияние ГАМ К на связывание [3Н]-диазепама изучалось при добавлении в инкубационную среду ГАМК в конечной концентрации 200 мкМ. Объем инкубационной смеси составлял 500 мкл. Процесс связывания останавливали путем добавления ледяного буфера и быстрой фильтрации через стекловолоконные фильтры типа GF/B (Whatman) с последующей двукратной промывкой ледяным буфером общим объемом 8 мл.

Фильтры высушивались в течение 12 часов при комнатной температуре, затем помещались в сцинтилляционную жидкость (реактив Брея) объемом 5 мл и использовались для сцинтилляционного счета. Радиоактивность каждой пробы измеряли в течение 2 мин на сцинтилляционном счетчике Wallac 1411. Эффективность счета составляла 45%. Неспецифическое связывание составляло не более 10% от общего.

Определение содержания белка в пробах проводили по методу Лоури (Lowry, O.H. et al. 1951; Peterson, G.L. 1979). Оптическую плотность (л=700 нм) измеряли на спектрофотометре СФ-46 (ЛОМО).

Ладастен вводился внутрибрюшинно в виде водной суспензии после предварительного растирания субстанции с несколькими каплями Твин-80 крысам обеих линий за 1,5 часа до помещения в ОП. После извлечения животных из ОП все процедуры проводились как изложено выше. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. После извлечения из ОП крыс немедленно декапитировали, извлекали головной мозг и отделяли

ствол и мозжечок. Из оставшейся части выделяли фронтальную кору, гипоталамус, стриатум, nucleus accumbens и гиппокамл, помещали в жидкий азот и взвешивали. Полученный материал хранили при температуре жидкого азота (-197°С)до хромотографирования.

Выделенные структуры мозга крыс размельчали в гомогенизаторе "стекло-стекло" № 7725 (Ругех). Гомогенизацию осуществляли в 0,1 М HCIO4 с добавлением в качестве внутреннего стандарта диоксибензиламина (ДОБА) в концентрации 0,5 нМ. Пробы центрифугировали при 10 000 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость в объеме 20 мкл наносили на аналитическую колонку ZORBAX Eclipse XDB-C8 4,6mm ID x 15cm (Agilent Technologies) методом прямой инъекции. Моноамины (НА, ДА, 5-ОТ) и их метаболиты (ДОФУК, ГВК, 5-ОИУК) разделяли на колонке с использованием в качестве подвижной фазы 0,1 М цитратно-фосфатного буфера, содержащего 0,3 мМ октансульфо-ната натрия, 0,1 мМ ЭДТА и 8% ацетонитрила (рН 3,6). Определение моноаминов и их метаболитов осуществляли на хромотографической станции LC 1100 (Agilent Technologies) с использованием стеклоуглеродного электрода (потенциал + 0,75В против Ag/AgCI электрода сравнения) и электрохимического детектора ДЭ-104. Скорость потока подвижной фазы составляла 1 мл/мин. Аналоговый сигнал с детектора поступал на анапогово-цифровой преобразователь (Ampersand) и обрабатывался на ЭВМ с использованием программного продукта «Мультихром 1.5» (Ampersand). Статистическая обработка результатов. Оценку достоверности полученных результатов проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher LSD test) и Т-теста для независимых переменных. Статистический анализ данных проводился с применением интегрированного пакета статистических программ Statistica 6.0 (StatSoft, Inc).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Фармакологическое действие Ладастена в тесте «открытое поле».

В условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте ОП Ладастен в дозе 30 мг/кг, введенный внутрибрюшинно за 1,5 часа до эксперимента, статистически значимо на 77% повышал периферическую и на 146% общую двигательную активность крыс MR, что подтверждает наличие анксиолитического

действия в спектре фармакологической активности препарата. Ладастен вызывал тенденцию к увеличению двигательной активности линии MNRA, однако достоверных различий выявить не удалось, что свидетельствует о недостаточной выраженности психостимулирующего действия: в исследованной дозе (таблица 3.1). В совокупности с аналогичными результатами, полученными ранее на инбредных мышах линий БЛЬБ/е и C57BI/6 (Середенин, СБ. и соавт. 1999) можно заключить, что при сходных различиях в ответах на эмоциональный стресс мышей и крыс исследуемых линий выявляется гомология эффектов Ладастена, направленных на пассивный фенотип эмоционально-стрессовой реакции и состоящих в анксиолитическом действии с активацией поведения.

Таблица 3.1 Влияние Ладастена на параметры поведения в ОП инбредных крыс MR и MNRA.

Линия Ладастен > Виды двигательной активности ■ Кол-во • дефекаций

периферическая вертикальная - центральная ■ центр общая

MNRA Контроль п=6 15,813,3 1,810,9: 2,011,3 0,210,2 19,815,1 2,710,6.

30 мг/кг П=8 27,714,4 3,5±1,7 3,011,1 0,310,2 34,515,7 1,8Ю,7

MR Контроль п=6 * 6,211,4 0,210,2 — ■ — * 6,311,6 1,811,0

30 мг/кг п=6 11,011,2 2,811,9 1,310,9 0,310,2 15,513,6 2,710,8

Данные представлены в виде М ± Б.Е.М.

* - Р<0,05; межлинейные различия по параметру поведения в группе. *» - Р<0,01; межлинейные различия по параметру поведения в группе.

# - Р<0,05; различия по параметру поведения при введении Ладастена.

3.2 Влияние эмоционально-стрессового воздействия в ОП на связывание [3Н]-диазепама мембранными препаратами крыс MNRA и MR.

При исследовании влияния эмоционально-стрессового воздействия в ОП на бензодиазепиновую рецепцию были обнаружены межлинейные различия в

связывании [3Н]-диазепама с нейрональными мембранами, полученными из мозга крыс инбредных линий MR и MNRA. Эксперимент в ОП приводил к достоверному снижению как базального, так и ГАМКстимулированного бензодиа-зепинового связывания у линии MR (рисунок 3.1). У крыс MNRA, напротив, снижения бензодиазепиновой рецепции после эксперимента в ОП обнаружено не было (рисунок 3.2). Отсутствие достоверного шифта ГАМК у стрессиро-ванных животных линии MNRA, может быть объяснено некоторым повышением уровня базального связывания в сравнении с контрольными особями, а также широкой дисперсией значений данного параметра. Результаты исследования бензодиазепиновой рецепции линий MR и MNRA в условиях эмоционально-стрессового воздействия схожи с ранее установленными для инбредных мышей BALB/c и C57BI/6, обладающих гомологичными различиями по фенотипу ЭСР, что свидетельствует о причинной связи особенностей регуляции функциональной активности ГАМКергической системы и ответами животных на эмоциональный стресс.

На основании литературных данных, установленное в выполненных экспериментах почти мгновенное падение бензодиазепиновой рецепции у крыс MR после эмоционально-стрессового воздействия в ОП, можно объяснить нарушениями взаимодействия между нейрональной мембраной и рецепторными белками, ведущими к конформационным перестройкам связывающих структур (Havoundjian, H. et al. 1986; Schwartz, R.D. et al. 1987; Середенин, СБ. и соавт. 1998). Не исключено, что имеет место генетически детерминированная недостаточность целого комплекса молекулярных механизмов, вовлеченных в стрессовый ответ, и обуславливающих анксиогенез. Несмотря на отсутствие прямой информации об этих механизмах, предотвращение стрессиндуциро-ванного падения бензодиазепиновой рецепции, вызывающее анксиолитиче-ское действие доказывает их наличие (Seredenin, S.B. 2003).

MNRA Контроль MNRA Стресс ; MR Контроль MR Стресс

Рисувок 3.1 Влияние эмоционально-стрессового воздействия в ОП на связывание

[3Н]-диазепама мембранными препаратами крыс MNRA и MR. Данные представлены в виде М + S.E.M.

* - Р<0,05 (T-test); достоверный ГАМК шифт. **♦* -Р<0,001 (T-test); достоверный ГАМК шифт.

# - Р<0,05 (ANOVA); различия в сравнении с контролем.

3.3 Влияние Ладастена на бензодиазепиновую рецепцию.

С целью выяснения возможных механизмов анксиолитического действия Ладастена на крыс MR изучено влияние препарата на связывание [3Н]-диазепама при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП. Ладастен вводился внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг за 1,5 часа до помещения в ОП.

В результате анализа абсолютных значений базального и ГАМК-стимулированного связывания межлинейных различий выявить не удалось (рисунок 3.3), что, по-видимому, объясняется дополнительным стрессирую-щим компонентом хэндлинга при выполнении контрольной инъекции. Тем не менее, необходимо отметить большую чувствительность ГАМКа рецепторного комплекса крыс MR к действию Ладастена, которая выражается в увеличении значений базального и ГАМК-стимулированного связывания [3Н]-диазепама как контрольных, так и стрессированных особей в сравнении с крысами линии MNRA. Данные факты свидетельствуют о протекторном действии Ладастена по отношению к стрессиндуцированным изменениям в регуляции бензодиазе-пиновой рецепции у крыс MR. Таким образом, можно предположить, что в формировании активирующего поведения крыс MR действия Ладастена включен ГАМКд рецепторный комплекс по механизму, сходному с ранее установленным для низких доз гидазепама (Seredenin, S.B. et al. 1994) и Афобазола (Середенин, СБ. и соавт. 1998).

3.4 Изучение содержания моноаминов в головном мозге инбредных крыс MR MNRA при эмоционально-стрессовом воздействии в тесте «открытое поле».

Учитывая важность моноаминергических систем в контроле поведения, было изучено содержание моноаминов в структурах головного мозга инбредных крыс MNRA и MR после эмоционально-стрессового воздействия в ОП. В результате проведенных экспериментов наиболее заметные изменения были зафиксированы в гипоталамусе и гиппокампе (таблица 3.2, 3.3).

Таблица 3.2 Влияние эмоционально-стрессового воздействия в ОП на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс MNRA и MR.

Линия Группа ■ Стр. НА ДОФУК 5-ОИУК ДА ГВК^ 5-ОТ

MNRA Контроль- Фр к 2,07±0,12 - 1,67±0,10 0,4110,05 - 3,2210,28

Гс 1в,44±1.07 0,60±0,10 4,0510,52 1,97±0,17 - 5,7610,83

NAc 6,41 ±1,81 6,16± 1,04 4,0310,29 44,60±6,86 2,44±0,63 5,17±0.47

Стр 1,М±0,0в 6,66*1,93 3,09±0.35 69,1118,93 2,94±0,35 2,5810,28

Гп 2,83±0,50 -. 2,51±0,1в 0,81 ±0.23 - ■ 2,14±0,27

MNRA Стресс' Фр к 2,16±0,26 — 1,74±0,10 - ■ - 3,66±0,58

Гс 16,80±1,88 0,52±0,08 3,5510.33 2,14±0,27 — 5,72±0,77

NAc 4,25±1,72 6,6310,77 3,62±0,22 47,7 ±3,44 * 2,32±0.33 5,13±0,33

Стр 3,4012,17 4,72±0,27 3,19±0,13 58,7±5,17 2,42±0,17 3,16±0,31

Гп 2,94±0,20 - - 2,8110,28 4,34±3,42 - 2,46±0.25

MR1 Контроль V Фр к 2,26t0,25 - . 1,73±0,39 0,55±0,17 - ■ 3,98±0,55

Гс- 11,70±1,34 * - 1,10±0,45 3,60±0.31 3,В7±1,51 - 4,61±0,28

NAc 2,4610,34 7,2810,26 3,24±0,2В 45,14+3,50 2,17±0,28 4,4410,15

Стр 1,24±0,23 5,72±0,46 Э,20±0,08 60,72±3,22 2,57±0,38 3,11±0,21

Гп 2,60±0,28 2,2810,12 0,21 ±0,07 - 1,88±0,17

MR- Стресс: Фр к 2,09±0,16 — 1,74±0,0в 0,22±0,01 - 3,79±0,15

Гс 16,53±2,09 0,71 ±0,10 3,6610,16 2,44±0,54 - 5,61±0,45

NAC 4,04±1.00 7,18±0,57 4,07±0,34 48,69±1,30 1,83±0,25 5,48±0.50

Стр 1,4610,20 6,4910,63 * - 3,6110,28 64,0217,52 3,00±0.33 3,5010,41

Гп 2,50±0.25 2,59±0,18 - 2,5910,28

Данные представлены в виде М ± S.E.M. (пмоль/г ткани)

»- - Р<0,05; межлинейные различия в содержании нейромедиатора или метаболита в группе.

Фр к - фронтальная кора; Гс - гипоталамус; NAc - nucleus accumbens; Стр -стриатум; Гп - гиппокамп.

Здесь и далее по тексту НА - норадреналин, ДОФУК - диоксифенолуксусная кислота, 5-ОИУК - 5-оксииндолуксусная кислота, ДА - дофамин, ГВК - гомо-ванилиновая кислота, 5-ОТ — 5-окситриптамин (серотонин).

Таблица 33 Влияние эмоционально-стрессового воздействия в ОП на оборот моноаминов в структурах головного мозга крыс МЫЛА и МЫ.

Линия Группа Стр. ДОФУК/ДА ГВК/ДА (ДОФУК+ГВК)/ ДА М)ИУЮ5-ОТ

MNRA Контроль Фрк 0,3110.014- - 0,5510.08

Гс 0,1410,021 - - 0,7110,02

NAc 0,1110,015 0,0610,013 0,2010,034 0,6110,12

Стр ■ - 0,0510,008 0,1610,019 1,2210,11

Гп - - - 1,2210,14

MNRA Стресс Фрк 0,24±0,025 — — 0,5110,06

Гс 0,1410.019 - - 0,6410,05

NAc 0,0t±0,011 0,0510,007 0,1 »±0,020 0,7110,03

Стр - 0,0410,005 0,1310,015 1,0610,13

Гп - - - 1,1610.08

MR Контроль Фр к - - - - 0,4210,03

Гс 0,2910,068 - - - 0,7910,07

NAC 0,1610,012 0,0510,005 0,2110,015 0,7310,05

Стр 0,1110,006 0,0510,005 0,1610,006 1,0410,05

Гп - - - 1,2310,02

MR Стресс Фр к - - - 0,4610,05

Гс 0,4010,105 - - 0,6710,05

NAc 0,1510,015 0,0410,005 0,1*10,017 0,7510,05

Стр 0,1010.008 0,0510,002 0,1510.008 1,0610,09

Гп - - - 1,0310,09

Данные представлены в виде М ± S.E.M.

Фр к - фронтальная кора; Гс - гипоталамус; NAc - nucleus accumbens; Стр стриатум; Гп - гиппокамп.

Обнаружено, что изучаемые животные характеризуются различным ба-зальным уровнем НА в гипоталамусе (рисунок 3.5). MR крысы отличались значительно сниженным содержанием НА, что полностью согласуется с ранее полученными данными (Slater, J. et al. 1977; Liang, B. et al. 1978).

В ответ на эмоционально-стрессовое воздействие в ОП достоверных межлинейных различий в содержании НА выявить не удалось, что само по себе не противоречит данным литературы о соответствующих реакциях грызунов на некоторые стрессоры (Belzung, С. et al. 2001). В условиях ОП у крыс MR зафиксирована тенденция к увеличению содержания НА и 5-ОТ, в тоже время экспозиция в ОП крыс MNRA не влияла на их содержание (рисунок 3.4). Кроме того, эмоционально-стрессовое воздействие в ОП вызывало незначительное уменьшение оборота 5-ОТ у животных обеих линий (таблица 3.3), что, скорее всего, обусловлено увеличением высвобождения данного медиатора. Тенденция к увеличению содержания НА у крыс с пассивным фенотипом ЭСР (MR) в сравнении с MNRA животными согласуется с установленной зави-

симостью между эмоционально-стрессовым воздействием и повышением концентрации НА в гипоталамусе (Yokoo, H. et al. 1990; Terrazzino, S. et al. 1994; Tanaka, M. 1999; Palkovits, M. et al. 1999). Подобная нейромедиаторная реакция рассматривается как основной нейрохимический механизм формирования тревоги и реакции страха у крыс (Tanaka, М. et al. 2000). Исходя из этого можно рассматривать норадренергическую систему гипоталамуса крыс MR как более лабильную и реактивную, что может определять их высокую эмоциональность. Данное предположение соответствует недавним исследованиям по изучению центральных норадренергических механизмов крыс Maudsley, где также были установлены межлинейные различия в динамике высвобождения норадреналина в гипоталамусе (McQuade, R. et al. 2001).

Таким образом, у крыс с пассивным фенотипом эмоционально-стрессовой реакции происходит активация норадренергической и серотони-нергической систем, участвующих в формировании стрессорного ответа, что согласуется с ранее установленными корреляциями между содержанием НА и 5-ОТ с одной стороны, и развитием реакции страха - с другой (Rosecrans, J.A. et al. 1972; Вальдман, А.В. и соавт. 1979; Ferris, C.F. et al. 1999; Tanaka, M. et al. 2000).

При изучении содержания моноаминов в гиппокампе при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП обнаружена тенденция к повышению содержания 5-ОТ у крыс MR {рисунок3.4). Кроме того, после эксперимента в ОП отмечается незначительное увеличение содержания 5-ОИУК, что вероятнее всего является следствием компенсаторной активации метаболизма 5-ОТ в результате увеличения высвобождения данного нейромедиатора.

Гипоталамус

Гиппокамп

Рисунок 3.4 Влияние эмоционально-стрессового воздействия в ОП на содержание моноаминов и их метаболитов в гипоталамусе и гиппокампе крыс MNRA и MR. Данные представлены в виде М + S.E.M.

Исследование содержания моноаминов в стриатуме крыс при эмоционально-стрессовом» воздействии в ОП не выявило межлинейных различий в их уровне у интактных животных. Однако стрессированные животные исследуемых инбредных линий характеризовались различиями •>в содержании • ДОФУК, что может свидетельствовать о различной интенсивности метаболизма НА и ДА (рисунок 3.5).

Рисунок 3.5 Динамика изменения содержания НА и ДОФУК при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП в гипоталамусе и стриа-туме крыс MNRA и MR. Данные представлены в виде М + S.E.M. * - Р<0,05; межлинейные различия в содержании моноаминов.

3.3 Влияние Ладастена на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс инбредных линий MNRA и MR при эмоционально-стрессовом воздействии в тесте «открытое поле».

Ранее на беспородных крысах установлено активирующее действие Ладастена на дофаминергическую и серотонинергическую системы (Кудрин, B.C. и соавт. 1995). С этих позиций было целесообразно исследовать роль данных механизмов в психотропных эффектах Ладастена на модели инбредных крыс MNRA И MR.

Исследование нейрохимических ответов инбредных крыс на Ладастен обнаружило высокодостоверные межлинейные различия в содержании моноаминов и их метаболитов (таблица 3.4,3.5).

Таблица 3.4 Влияние Ладастена на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс MR и MNRA при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП.

Линия Группа Ст. НА ДОФУК 5-ОИУК ДА гвк 6-ОТ

Фр к 4,1211,23 - 2,3110,44 7,7514,42 - 5,5710,77

Гс 14,7±1.32 0,4310,06 5,410,68 2,57±0,43 - 8,6210,61

Стресс ЫАс 3,5111,22 6,5110.59 4,4710,64 48,2814,98 1,6110.17 6,2310,97

Стр 2,1 «±0.61 3,9710,16 4,410,71 58,812,30 1,6310,19 4,4810,50

Гп 4,9011,67 - 3,8010,64 2,9712,63 - 3,6710.42

Фр к 3,4811,39 - 2,9710,27 0,6110.17 - 6,7610,38

Стресс Гс 17,3512.28 0,8510,41 6,310,29 2,6910.46 - 9,6310,45

ММЗД + Лада- МАс 3,0110,69 7,2910,47 7,0410,33 # 73,5316,72 ## 1,7410,23 11,4510,99 ###

стен Стр 1,5510,26 5,3110,68 # 5,5710,56 82,4219,76 # 2,3810,58 5,2810,40

Гп 2,4510,28 - 4,5010,42 - - 4,2810.24

Фрк 3,3210.84 - 2,0310.25 0,5710,05 - 6,8110,64

Гс 12,66±0,70 0,4110,05 5,7910,54 1,8110,19 - 9,7510.68

Мй Стресс ЫАс 4,3112,12 6,9410.52 4,8910,48 61,1816,16 1,5110,13 7,6611.25

Стр 1,6210,38 4,8510,58 4,8910,41 78,02110.25 1,7610,23 5,3710,58

Гп 2,8210.53 - 3,3910,46 0,3310.08 - 3,5910,53

мя Стресс Фрк 2,6110,39 - 2,0710,17 * 0,5610,07 - 5,9010,58

Ладастен Гс 13,4511,20 0,4910,06 5,3810,59 2,6410,58 - 9,3211,04

Мс 4,7011,65 5,3710,38 4,6010,51 53,8014,74 1,1810,18 8,0411,03

«# »** * *

Стр 1,7210,22 3,5410,26 * 4,4710,47 64,6316,10 1,8110,18 4,8210,46

Гп 2,3310,19 - 2,8910.47 * - - 2,8810,42 *

Данные представлены в виде М ± Б.Е.М. (пмоль/г ткани)

* - Р<0,05; межлинейные различия в содержании нейромедиатора или метаболита в группе.

*** _ р<0,005; межлинейные различия в содержании нейромедиатора или метаболита в группе.

# - Р<0,05; различия в содержании нейромедиатора или метаболита при введении Ладастена в сравнении с контрольной группой.

# # - Р<0,01; различия в содержании нейромедиатора или метаболита при введении Ладастена в сравнении с контрольной группой.

# # # - Р<0,005; различия в содержании нейромедиатора или метаболита при введении Ладастена в сравнении с контрольной группой.

Фр к - фронтальная кора; Гс - гипоталамус; NAc - nucleus accumbens; Стр - стриа-тум; Гп - гиппокамп.

Таблица 3.5 Влияние Ладастена на оборот моноаминов в структурах головного мозга крыс MR и MNRA при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП.

Линия Группа Стр. ДОФУЮДА ГВК/ДА (ДОФУК+ГВК)/ ДА 5-ОИУК/5-ОТ

MNRA Стресс Фрк — - - 0,4210,05

Гс 0,17±0,017 - - 0,6210,04

NAc 0,1410,014 0,0310,002 0,1710,013 0,8010,16

Стр 0,0710,002 0,0310.003 0,1010,003 0,9710,09

Гп - - - 1,0010.06

MNRA Стресс ♦ Ладастен Фрк - - - 0,4410,03

Гс 0,2710.085 - - 0,6710.05

NAC 0,1010,004 0,0210,003 0,1210,006 0,6410,05

Стр 0,0610,003 0,0310,005 0,0910,006 1,0810,10

Гп — _ _ 1,0610,10

MR Стресс Фрк — - — 0,3010,02

Гс 0,1810,039 - - 0,5310,03

NAc 0,1210,011 0,0310.003 0,1410,013 0,7010,07

Стр 0,0610,003 0,0210,003 0,0910,005 0,9310,06

Гп — - - 0,9710.04

MR Стресс + Ладастен Фрк - - - 0,3610,02 *

Гс 0,2410,051 - — 0,5810,03

NAc 0,1010,005 0,0210,004 0,1210,009 0,5910,04

Стр 0,0610,003 0,0310,003 0,0910,006 0,9310,03

Гп - - - 1,0410,07

Данные представлены в виде М ± S.E.M.

* - Р<0,05; межлинейные различия в обороте нейромедиатора в группе. Фр к - фронтальная кора; Гс - гипоталамус; NAc - nucleus accumbens; Стр -стриатум; Гп - гиппокамп.

Выраженные реакции нейромедиаторных систем на Ладастен были обнаружены в NAc крыс MNRA, обладающих активным фенотипом ЭСР, но не у MR. Так, на фоне его введения эксперимент в ОП у крыс MNRA сопровождался значительным повышением содержания ДА, 5-ОТ и 5-ОИУК (рисунок 3.6, таблица 3.4,3.5). Отсутствие изменений уровня ДОФУК при росте ДА, а также тенденция к снижению значения (ДОФУК+ГВК)/ДА может свидетельствовать

о некотором замедлении Ладастеном катаболизма ДА у животных линии MNRA.

Напротив, крысы MR характеризовались отсутствием дофамин- и серото-нинпозитивных реакций на Ладастен в NAc (рисунок3.6, таблица 3.4,3.5). Наблюдалась тенденция к понижению содержания ДА, которая в сочетании с падением уровня ДОФУК свидетельствует о противоположной по отношению к линии MNRA реакции на Ладастен дофаминергической системы в NAc у крыс MR.

100

to

S .

X

в 60

§ 40

3

с

20

0

MNRA - сша MNRA СтрвеС **'

MNRA Стресс Инъекция Ехх MNRA Стресс Ладастен

*** iiin ISIS шЯ .— isiS

2 во и

§ «О

■MMR

ии MR Стресс

шш MR Стресс Инъекция

tEZ) MR Стресс Ладастен |---------

* I 1----.gig

.IIS 1В1Я afilS 1

НА ДОФУК ЮИУК ДА ГВК ЮТ

НА ДОФУК S-ОИУК ДА ГВК S-OT

Рисунок 3.6 Влияние Ладастена на содержание моноаминов и их метаболитов в nucleus accumbens крыс MNRA и MR при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП. Данные представлены в виде М + S.E.M.

* - Р<0,05; различия в содержании моноаминов при введении Ладастена в сравнении с контрольной инъекцией.

** - Р<0,01; различия в содержании моноаминов при введении Ладастена в сравнении с контрольной инъекцией.

*** - Р<0,005; различия в содержании моноаминов при введении Ладастена в сравнении с контрольной инъекцией.

В стриатуме крыс линии MNRA также как и в nucleus accumbens выявлено повышение уровня ДА в ответ на препарат с параллельным увеличением содержания ДОФУК (рисунок3.7, таблица 3.4). Различий в уровне оборота ней-ромедиаторов не наблюдалось (таблица 3.5).

В тоже время в результате изучения влияния Ладастена на содержание моноаминов и их метаболитов в стриатуме крыс линии MR значимых эффектов выявить не удалось. Необходимо отметить тенденцию к уменьшению содержания ДА, что соответствует реакции на Ладастен дофаминергической

системы в nucleus accumbens (рисунок3.7, таблица 3.4). Таким образом, ней-ромедиаторные профили в стриатуме и nucleus accumbens крыс MR в ответ на Ладастен оказались идентичными и свидетельствуют об отсутствии стимулирующего воздействия Ладастена на дофаминергическую и серотонинерги-ческую системы (рисунок3.6, 3.7).

шш MNRA en MNRA Стресс -■■■ MNRA СтрессИнъекция, кхэ MNRA Стресс Ладастен - *

it Л.. hiS itlR ■ ■.Я BfflB

«о

s . i -2 : 60 Н -

1.. § ">

2 •

с

20

MB MR

Ezsa MR Стресс т

И MR Стресс Инъекция

sza MR Стресс Ладастен *

———

---- |В|Я "— «яШ

НА ДОвУК ЮИУХ ДА ГВК ЯГГ

НА ДО« УК 5-ОИУК ДА ГВК 5-ОТ

Рисунок 3.7 Влияние Ладастена на содержание моноаминов и их метаболитов в стриатуме крыс МГ«П1А при эмоционально-стрессовом воздействии в ОП.

Данные представлены в виде М + 8.Е.М.

* - Р<0,05; различия в содержании моноаминов при введении Ладастена в сравнении с контрольной инъекцией.

Крайне противоположное влияние на моноаминергические нейромедиа-торные системы инбредных крыс Maudsley с одной стороны, и установленная способность Ладастена регулировать ГАМКергическую модуляцию бензодиа-зепинового связывания у крыс MR создают основу для объяснения формирования различного действия препарата на поведение крыс с разными фенотипами ЭСР {рисунок 3.8). В данном случае нейронапьные эффекты Ладастена, детерминированные его химической структурой, интерферируют с генетически контролируемыми особенностями функционирования нейрохимических систем головного мозга, вовлеченных в стрессорный ответ.

Вопрос о том, что определяет преимущественное влияние Ладастена на работу нейромедиаторных систем у животных MNRA и MR предполагает дальнейшие глубокие исследования, которые смогут помочь понять цепь генетически контролируемых событий, ведущих при стрессовых воздействиях к активации поведения, либо к реакции замирания (Seredenin, S.B. 2003).

Имеющиеся на сегодняшний день литературные данные дают основание для продолжения поиска межлинейных различий в ЭСР не только на уровне мутационных изменений в рецепторных белках (McKernan, R.M. et a!. 2000; Davies, М. et al. 2001), но и процессов, обусловленных конформационными перестройками рецепторов в результате мембрано-рецепторного взаимодействия (Середенин, СБ. и соавт. 1998). Так, известны факты влияния свободно-радикальных молекул на высвобождение дофамина в стриатуме (Chen, B.T. et al. 2001; Avshalumov, M.V. et al. 2003), активации ГАМКа рецепторов (Avshalu-mov, M.V. et al. 2003). Возбудимые мембраны клеток мышей с разными реакциями на эмоциональный стресс характеризуются различным хемилюминес-центным ответом на равнозначное изменение заряда мембраны (Seredenin, S.B. et al. 1994). Зарегистрированные параметры про- и антиоксидантных систем этих животных также демонстрируют значительные межлинейные различия (Середенин, СБ. и соавт. 1989; Сазонтова, Т.Г. и соавт. 1995; Clothier, В. et al. 2000). Более того, эффективность терапии феназепамом больных с неврозами коррелирует с изменениями показателей ПОЛ (Незнамов, ГГ. и соавт. 1986; 1987), а антиоксидант мексидол проявляет анксиолитические свойства (Середенин, СБ. и соавт. 1987). Поэтому не исключено, что действие Лада-стена, мембранотропные свойства которого хорошо документированы (Золо-тов, Н.Н. и соавт. 1993; Мышкин, В.А. и соавт. 1997), аплицируется у крыс MNRA и MR на различные фенотипы взаимодействия эндогенных нейроме-диаторных систем, обусловленных в том числе и отличиями по мембраноза-висимым процессам.

Реакция дофаминергических структур крыс MNRA и MR на введение Ла-дастена может быть следствием различий в модулирующих воздействиях со стороны 5-НТ2А/2С рецепторов (Yan, Q.S. 2000). Антагонистическая модуляция ГАМКа рецепторного комплекса и D5 рецептора в гиппокампе сопряжена с непосредственным взаимодействием расположенных в мембране рецепторных белков (Liu, F. et al. 2000). В регуляции высвобождения ДА может играть определенную роль способность ряда адамантановых производных блокировать АМРА и NMDA ионные каналы (Magazanik, LG. et al. 1997; Sobolevsky, A.I. et al. 1998). В тоже время известно ингибирующее влияние антагонистов NMDA

рецепторов на высвобождение ДА в стриатуме в ответ на стрессовое воздействие (Castro, S.L. et al. 2001). Анксиолитическое влияние Ладастена на крыс MR может быть обусловлено и специфичной для каждой линии интенсивностью активации других нейромедиаторных систем, участвующих в формировании анксиолитического эффекта. Например, в предполагаемый механизм может быть вовлечена система холецистокинина, находящаяся под противоположными модулирующими воздействиями со стороны катехоламинов (се-ротонин, дофамин) (Brog, J.S. et al. 1992; Paudice, P. et al. 1991) и ГАМ К (Raiteri, M. et al. 1996).

Таким образом, в свете характерных для животных с разными генотипами особенностей организации взаимодействия нейромедиаторных систем различные ответы, как на эмоциональный стресс, так и на психотропные препараты, влияющие на стрессовые реакции, являются закономерными.

Совокупный анализ результатов настоящего исследования и данных литературы позволяет сделать заключение, что при введении Ладастена стимуляция поведения животных с активной реакцией на эмоциональный стресс достигается за счет моноаминергических процессов, в то время как у особей с выраженной реакцией страха - за счет предотвращения ведущих к анксиоге-незу нарушений в функции ГАМКа рецепторного комплекса.

На основании полученных результатов можно сделать следующие выводы:

4. ВЫВОДЫ

1. Эмоционально-стрессовое воздействие в тесте «открытое поле» вызывает падение связывающей способности бензодиазепинового участка ГАМКА рецепторного комплекса у крыс линии MR, не влияя на рецепцию у крыс линии MNRA.

2. Выявлены и охарактеризованы межлинейные различия в спектре мо-ноаминергических нейромедиаторов в структурах головного мозга крыс MR и MNRA. Установлены разнонаправленные сдвиги в содержании нейромедиаторов и их метаболитов, специфичных для фенотипа ответа на эмоционально-стрессовое воздействие.

3. Установлено, что препарат Ладастен в дозе 30 мг/кг при однократном внутрибрюшинном введении вызывает анксиолитический эффект у крыс MR при эмоционально-стрессовом воздействии в тесте «открытое поле».

4. Доказана способность Ладастена в дозе, вызывающей анксиолитиче-ское действие, уменьшать индуцированные эмоциональным стрессом в тесте «открытое поле» нарушения связывания в бензодиазе-пиновом участке ГАМКа рецепторного комплекса у крыс линии MR.

5. Установлено, что Ладастен в дозе 30 мг/кг увеличивает содержание моноаминов в структурах головного мозга крыс MNRA, не вызывая аналогичных изменений у MR.

6. Сформулировано научное положение о различных механизмах стимуляции Ладастеном поведения при эмоционально-стрессовом воздействии, за счет усиления моноаминергических процессов у животных с активным фенотипом ответа на стресс: и путем предотвращения нарушений ГАМК трансмиссии при выраженной реакции страха.

Список публикаций по теме диссертации.

1. Яркова М.А. и Воронин М.В. Рецепция 3Н-диазепама в мозге ин-бредных животных с различной реакцией на эмоциональный стресс. В: Сборник тезисов III Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» 15-18 мая 2001, с. 168.

2. Яркова М.А., Воронин М.В. и Морозов И.С. Ладастен - новый фармакологический препарат, сочетающий анксиолитические и активирующие свойства. В: Сборник тезисов III Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» 15-18 мая 2001, с. 169.

3. Середенин СБ., Яркова МА и Воронин М.В. Рецепция 3Н-диазепама в мозге инбредных животных с различной реакцией на эмоциональный стресс. Экспериментальная и Клиническая Фармакология 64(1): 63-5,2001.

4. Середенин СБ., Яркова М.А. и Воронин М.В. Генетические различия бензодиазепиновой рецепции - молекулярной мишени анксио-селективности. В: Сборик международной научной конференции «Новыелекарственные средства - синтез, технология, фармакология, клиника», 14-16 ноября 2001, Минск, с. 132.

5. Яркова М.А., Воронин М.В. и Морозов И.С Ладастен - средство нового поколения сочетающее анксиолитическое и психостимулирующее действие. В: Сборник международной научной конференции «Новые лекарственные средства - синтез, технология, фармакология, клиника», 14-16 ноября 2001, Минск, с. 174.

6. Середенин СБ., Яркова М.А. и Воронин М.В. Нейрохимические мишени анксиоселективного эффекта. В: Сборник «Современные технологии оценки и коррекции боеспособности военнослужащих в экстремальных условиях деятельности», 2002,сс. 154-155.

7. Seredenin S.B., Yarkova MA, Voronin M.V. and Bykov A.T. 3H-diazepam binding in inbred animals with different open field behavior.

The International Journal of Neuropsychopharmacology, vol.5, suppl.1, pp. 150,2002.

8. Воронин M.B., Яркова М.А. и Середенин СБ. Гомология рецепции бензодиазепинов в условиях эмоционально-стрессового воздействия у инбредных крыс и мышей. В: «Фундаментальные проблемы фармакологию Сборник тезисов 2-го съезда Российского Научного Общества фармакологов; ч. /., Москва, 2003, с. 105.

9. Яркова М.А., Воронин М.В. и Середенин СБ. Ладастен- новый психотропный препарат, обладающий психостимулирующими и анксиолитическими свойствами. В: Материалы Научно-практической конференции «Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины», посвященной 40ле-тию МБФ, 2003, с. 109.

Подписано в печать 16.02.04г.

Формат 60x84/16 Объем 1.5 п.л. Тираж 110 экз. Заказ № 74/67

Отпечатано в ИПК МГУП

127550, Москва, ул. Прянишникова, 2а

H-272Í

1.1 Актуальность.

Необходимость фармакологической коррекции эмоционально-стрессовых расстройств обоснована в трудах отечественных специалистов [1,2].

В арсенале средств фармакотерапии на сегодняшний день преобладают транквилизаторы бензодиазепинового ряда, селективные ингибиторы обратного захвата серотонина и агонисты серотониновых рецепторов, психостимуляторы и ноотропные средства. Лекарства перечисленных групп имеют свои достоинства и недостатки, однако ведущей проблемой при их назначении является индивидуальная чувствительность [3]. Различия в реакциях пациентов обусловлены комплексом наследственных и приобретенных свойств, в числе которых индивидуальная оценка аверсивного фактора, типологические особенности личности, мотивационные, тревожные и астенические проявления, при которых возникают разные ответы на психотропные средства [1].

Однако имеются веские доказательства, что в их основе лежат генетические факторы, прежде всего наследственно контролируемые механизмы эмоционально-стрессовых реакций [3]. Хорошо известно, что в классе млекопитающих при воздействии стрессирующих факторов выделяются в качестве основных стратегии поведения, характеризуемые как активная и пассивно-оборонительная, крайним выражением последней следует рассматривать реакцию замирания. Близкие типы поведения описаны и для человека [4, 5].

Многолетними исследованиями исследованиями отдела фармакогене-тики ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН доказана зависимость эффектов психотропных средств от фенотипа ответа на эмоциональный стресс [6-10].

Таким образом, была определена стратегия поиска принципиально новых средств коррекции эмоционально-стрессовых реакций, влияние которых следует адресовать к определенному фенотипу ответа. Так, в качестве альтернативы бензодиазепинам, вызывающим седацию при стресс-активируемом поведении, разработан препарат афобазол, обладающий ан-ксиолитическими свойствами при выраженной реакции страха при отсутствии седативного действия [9]. В отношении психостимуляторов амфетамина и сиднокарба в эксперименте было показано, что их эффект проявляется при активном ответе на стресс и значительно менее выражен при пассивно-оборонительном [7]. Возможно, что именно этими различиями обусловлены факты неэффективности психостимуляторов у отдельных индивидуумов [11]. Поэтому актуальной является разработка психотропного средства, обладающего с одной стороны психоактивирующими свойствами при разных формах ЭСР, а с другой - лишенного недостатков типичных психостимуляторов, таких как эффекты истощения, возникновение зависимости и др. В ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН под руководством А.В. Вальдмана, Б.М. Пятина, И.С. Морозова было найдено соединение Ы-(2-адамантил)-Ы-(парабромфенил)амин, фармакологическое изучение которого на первом этапе выявило психостимулирующий [12, 13] и иммуностимулирующий эффекты [14, 15]. Дальнейшее изучение препарата, получившего название ладастен, позволило установить наличие у него анксиолитических свойств [16]. Таким образом, новое соединение является уникальным фармакологическим препаратом, имеющим спектр эффектов, впервые описанный в научной литературе.

Целью настоящей работы явилось изучение механизмов психотропного действия ладастена у животных с разным фенотипом ответа на эмоционально-стрессовое воздействие.

Для ее достижения необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить психофармакологические свойства ладастена на экспериментальных моделях с генетически детерминированной реакцией на эмоциональный стресс.

2. Изучить параметры бензодиазепиновой рецепции у крыс MR и MNRA при эмоционально-стрессовом воздействии в сравнении с мышами BALB/c и С57В1/6.

3. Исследовать влияние ладастена на рецепцию в бензодиазепиновом участке ГАМКа рецепторного комплекса у крыс MR и MNRA.

4. Изучить содержание моноаминов в головном мозге крыс MR и MNRA в норме, при эмоционально-стрессовом воздействии и при введении ладастена.

6. ВЫВОДЫ

1. Эмоционально-стрессовое воздействие в тесте «открытое поле» вызывает падение связывающей способности бензодиазепиново-го участка ГАМКд рецепторного комплекса у крыс линии MR, не влияя на рецепцию у крыс линии MNRA.

2. Выявлены и охарактеризованы межлинейные различия в спектре моноаминергических нейромедиаторов в структурах головного мозга крыс MR и MNRA. Установлены разнонаправленные сдвиги в содержании нейромедиаторов и их метаболитов, специфичных для фенотипа ответа на эмоционально-стрессовое воздействие.

3. Установлено, что препарат ладастен в дозе 30 мг/кг при однократном внутрибрюшинном введении вызывает анксиолитиче-ский эффект у крыс MR при эмоционально-стрессовом воздействии в тесте «открытое поле».

4. Доказана способность ладастена в дозе, вызывающей анксиолитическое действие, уменьшать индуцированные эмоциональным стрессом в тесте «открытое поле» нарушения связывания в бен-зодиазепиновом участке ГАМКд рецепторного комплекса у крыс линии MR.

5. Установлено, что ладастен в дозе 30 мг/кг увеличивает содержание моноаминов в структурах головного мозга крыс MNRA, не вызывая аналогичных изменений у MR.

6. Сформулировано научное положение о различных механизмах стимуляции ладастеном поведения при эмоционально-стрессовом воздействии, за счет усиления моноаминергических процессов у животных с активным фенотипом ответа на стресс и путем предотвращения нарушений ГАМК трансмиссии при выраженной реакции страха.