Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Изучение химического состава и разработка способов идентификации перца опьяняющего в БАДах, фитопрепаратах и сырье для их изготовления
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 14.04.02
Автореферат диссертации по медицине на тему Изучение химического состава и разработка способов идентификации перца опьяняющего в БАДах, фитопрепаратах и сырье для их изготовления
На правах рукописи
Чукарин Андрей Валерьевич
ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПЕРЦА ОПЬЯНЯЮЩЕГО В БАДАХ, ФИТОПРЕПАРАТАХ И СЫРЬЕ ДЛЯ ИХ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
-ЗНОЯ 2011
Пермь-2011
4858494
Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук, доцент
Малкова Тамара Леонидовна
Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор,
Фурса Николай Сергеевич
ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
доктор фармацевтических наук, профессор Лазарян Джон Седракович ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита состоится 22 ноября 2011 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития России по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46.
Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства образования и науки Российской Федерации http://www.mon.gov.ru
«_» октября 2011 г. и на сайте ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития
России http://www.pfa.ru «_» октября 2011 г.
Автореферат разослан « (lf » 2011 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета, *
кандидат фармацевтических наук, доцент ^pft c^L-t И.А. Липатникова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
В последние два десятилетия большое распространение во всем мире получили фитопрепараты и биологически активные добавки к пище (БАД), содержащие измельченные части или экстракты наземных и подземных органов растения перец опьяняющий (кава-кава, Piper methysticum).
Ежегодно на островах Тихого океана заготавливается до 8000 т корневищ кава-кавы, не менее 50% из которых идет на экспорт. До 2002 года рынок в странах Европейского Союза, США, Канаде, Японии, Китае неуклонно рос: только в Германии за 2002 г. было выпущено более миллиона капсул и таблеток фитопрепаратов и БАД к пище с субстанцией П. опьяняющего (Duopharm, Ratiopharm и др.), которые предназначались, в основном, для борьбы с бессонницей.
С 2002 года в США, Канаде, Австралии, Германии, Франции было зафиксировано и подтверждено несколько десятков случаев серьезных повреждений функции печени в результате приема добавок с кава-кава (в нескольких случаях с летальным исходом). В ходе последующих клинических и научных исследований выяснилось, что основные действующие вещества П. опьяняющего, кавалактоны, помимо положительной роли при лечении целого ряда нозологий, гепатотоксичны, обладают тератогенным действием, их применение вызывает привыкание, а злоупотребление приводит к зависимости. Кроме того, они необратимо связываются с глутатионом, одним из важнейших компонентов системы антиоксидантной защиты организма, экстракты из-за высокого содержания в них кавалактонов ингибируют при этом до 30 раз больше глутатиона, чем тоже количество растительного сырья кава-кава.
В течение 2002-2003 гг. в странах Европейского Союза, в Австралии, Канаде и США было принято решение о запрете использования любых частей растения и его экстрактов в БАД к пище, безрецептурных лекарственных препаратах и фитофармацевтических средствах. Это переориентировало фирмы-производители на страны, в которых еще не существовало законодательного запрета на использование кава-кава. Именно на этот период приходится всплеск активности фирм-производителей в РФ - только официально было зарегистрировано и выпускалось 14 пищевых добавок, в составе которых содержались субстанции кава-кава.
Постоянным комитетом по контролю наркотиков с 2003 г. перец опьяняющий был внесен в Список №1 сильнодействующих веществ. Однако практика показала, что в обороте на территории РФ оставались БАД к пище, содержащие кава-кава, зарегистрированные до 2003 г., а также БАД, содержащие вещества из этого растения, реализуемые по фальсифицированным регистрационным удостоверениям. Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 06.10.2004 г. растение
было запрещено к использованию в составе БАД к пище, а оборот существовавших добавок на территории РФ приостановлен.
Постановлением Правительства РФ от 29 декабря 2007 г. перец опьяняющий и вещества, входящие в него, отнесены к сильнодействующим веществам, крупный размер (граммов свыше) для целей статьи 234 Уголовного Кодекса РФ (незаконный оборот сильнодействующих или ядовитых веществ в целях сбыта) определен в размере ] 0 г.
В ноябре 2008 г. с некоторыми ограничениями был отменен запрет на торговлю растением кава-кава, действовавшем с 2002 года на территории стран Европейского Союза, субстанции растения снова стали попадать на российский рынок, хотя в нашей стране запрет на использование в БАД к пище П. опьяняющего сохраняется, а вещества из него находятся в списке сильнодействующих.
Поэтому актуальным явилось изучение основных групп биологически активных веществ, содержащихся в кава-кава, разработка надежных способов идентификации этого растения и его субстанций в анализируемых объектах.
Цель и задачи исследования
Цель настоящей работы - изучить химический состав, установить количественные характеристики основных биологически активных веществ, разработать достоверные способы идентификации П. опьяняющего (кава-кава, Piper methysticum) в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье.
Для достижения этой цели поставлены следующие задачи.
• Разработать скрининговые экспрессные методики (предварительные способы) идентификации сырья перца опьяняющего в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье с помощью проведения цветных химических тестов и метода хроматографии в тонком слое.
• Разработать методики (подтверждающие способы) идентификации сырья перца опьяняющего в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье с помощью метода хромато-масс-спектрометрии.
• Установить количественное содержание и соотношение основных биологически активных веществ в корневищах перца опьяняющего (сортов Isa, Киша Киа) и БАД к пище, содержащей экстракт корневищ Piper methysticum, методом хромато-масс-спектрометрии.
• Установить макро-, микроэлементный состав корневищ Piper methysticum (сортов Isa, Kuma Kua) методами атомно-эмиссионной и масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой для получения данных о содержании тяжелых металлов в сырье П. опьяняющего и изучения влияния минерального состава растения на общую токсичность.
Личный вклад автора
Автором самостоятельно проведены исследования в качестве оператора аналитического оборудования, используемого в работе, осуществлен анализ полученных экспериментальных данных. Вклад автора в изучение химического состава и разработку способов идентификации перца опьяняющего в БАДах, фитопрепаратах и сырье для их изготовления, осуществление расчетов и анализ результатов является определяющим.
Научная новизна результатов исследования
Разработан алгоритм проведения цветных химических тестов и методика хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), которые могут быть использованы в качестве скрининговых экспрессных методик (предварительных способов) идентификации сырья П. опьяняющего в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье.
Разработана методика хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) с проведением пробоподготовки (твердофазная экстракция) для исследования образцов, применимая в качестве подтверждающего способа идентификации П. опьяняющего в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье. С помощью методики выявлены маркерные вещества для этого растения, а также впервые получены хроматографические портреты сырья на основе 2 сортов корневищ П. опьяняющего (сорта Kurna Киа, Isa) и БАД к пище, содержащей сухой экстракт корневищ Piper methysticum, которые позволяют достоверно идентифицировать сырье, экстракты и препараты на основе кава-кава.
Разработана методика ГХ-МС без проведения пробоподготовки (с использованием приставки динамического парофазного анализатора), применимая в качестве подтверждающего способа идентификации П. опьяняющего в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье. Впервые получены данные о летучих веществах, содержащихся в корневищах кава-кава.
Впервые установлено количественное содержание 30 химических элементов в корневищах кава-кава 2 сортов (Киша Киа, Isa). С помощью методов атомно-эмиссионной и масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой (ИСП-АЭС, ИСП-МС) в исходном сырье кава-кава выявлено превышение адекватных и верхних допустимых пределов потребления для ряда элементов, в том числе тяжелых металлов.
Практическое значение результатов исследования
Разработанные методики идентификации кава-кава в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье внедрены в процедуру производства судебно-химических экспертиз и химико-токсикологических исследований и успешно применяются в экспертной работе центров судебно-медицинских и криминалистических экспертиз Министерства обороны РФ при проведении исследований материалов, изъятых в качестве вещественных доказательств в ходе оперативно-
розыскных мероприятий и переданных следственными органами в отделы химико-токсикологической экспертизы (акт внедрения 111 Главного государственного центра судебно-медицинских и криминалистических экспертиз МО РФ от 05.05.2011 г.). Методики также внедрены в работу Городской наркологической больницы №17 г. Москвы (акт внедрения от 04.05.2011 г.), ГУЗ Бюро судебно-медицинской экспертизы Комитета по здравоохранению Правительства Ленинградской области (акт внедрения от 16.05.2011 г.)
Полученные результаты внедрены в учебный процесс дисциплин «Токсикологическая химия», «Экспертиза в допинг- и наркоконтроле» в виде главы (7.3.6. Другие контролируемые вещества) в учебном пособии «Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов» под ред. Н.И. Калетиной, М.: 2008, электронного приложения к нему и в электронном приложении к учебнику «Токсикологическая химия (аналитическая токсикология)» под ред. Н.И. Калетиной и Р.У. Хабриева, М.: 2010. Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедры токсикологической химии и Регионального центра аналитической диагностики наркотических средств и психотропных веществ ГОУ ВПО ПГФА Росздрава (акт внедрения от 28.04.2011 г.).
По материалам исследования подготовлено, утверждено Ученым советом ГОУ ВПО ПГФА Росздрава и разослано в ЭКЦ органов УВД и территориальные управления ФСКН Информационное письмо «Способы идентификации перца опьяняющего в БАД, фитопрепаратах и сырье для их изготовления». Получены акты внедрения из ЭКЦ УВД по Тульской области (акт внедрения от 13.05.2011 г.) и ЭКЦ ГУВД по Пермскому краю (акт внедрения от 19.05.2011 г.).
На защиту выносятся
- скрининговые экспрессные методики (предварительные способы) идентификации сырья П. опьяняющего на основе алгоритма проведения цветных химических тестов и методики ТСХ, позволяющие достоверно обнаружить его в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье;
- методики хромато-масс-спектрометрии с проведением и без проведения пробоподготовки образцов, применимые в качестве подтверждающего способа идентификации П. опьяняющего в растительных препаратах, БАД, экстрактах и исходном сырье;
- результаты количественного определения основных биологически активных веществ, содержащихся в корневищах П. опьяняющего (сортов Isa, Kuma Kua) и БАД, содержащей сухой экстракт корневищ P. methysticum, а также их сравнительная характеристика;
- результаты количественного определения 30 химических элементов в корневищах перца опьяняющего (сорта Isa, Киша Киа), впервые установленные методами ИСП-МС и ИСП-АЭС, которые позволили выявить в исходном сырье кава-кава превышение адекватных и верхних
допустимых пределов потребления для ряда элементов, в том числе тяжелых металлов.
Апробация работы
Основные результаты работы были доложены на международной специализированной выставке «Аптека 2005» (Москва, 2005), на Всероссийской научной конференции с международным участием «Социально-медицинские аспекты экологического состояния Центрального экономического района России» (Тверь, 2007), на 2-ом Съезде Российского общества медицинской элементологии (Тверь, 2008), научно-практической конференции студентов и молодых ученых (Пермь, 2011), научно-практической конференции с международным участием «Морфология критических и терминальных состояний» (Москва, 2011).
Апробация работы проведена на межкафедральной научной конференции кафедр токсикологической химии, фармакогнозии, фармацевтической химии очного факультета, фармацевтической химии ФДПО и ФЗО, промышленной технологии ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Публикации
По теме исследования опубликовано 11 научных работ, в том числе
3 статьи в изданиях Перечня ВАК РФ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (№ государственной регистрации 01.9.50 007417).
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, литературного обзора,
4 экспериментальных глав с описанием проведенных экспериментов и полученных результатов, общих выводов, списка литературы, Приложения.
Материал диссертации изложен на 149 страницах, содержит 19 рисунков и 44 таблицы. Список использованной литературы содержит 191 источник, из них 172 на иностранных языках.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Во введении обоснована актуальность темы, сформулирована цель и задачи исследований, охарактеризована научная новизна полученных результатов и их практическая значимость.
В первой главе (обзор литературы) обобщены данные литературы о растении Л. опьяняющий, его химическом составе, фармакологических
свойствах. Описаны физико-химические методы анализа, применяемые для основных групп биологически активных веществ (БАВ), в том числе способы выделения, хроматографического разделения и детектирования.
Во второй главе описано используемое в работе оборудование, реактивы, стандартные растворы и образцы, а также объекты исследования. Представлены методики приготовления рабочих реактивов.
В третьей главе представлены предварительные способы идентификации П. опьяняющего (качественные реакции и ТСХ) в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье.
В четвертой главе описаны методики хромато-масс-спектрометрии с проведением и без проведения пробоподготовки образцов, применимые в качестве подтверждающего способа идентификации П. опьяняющего в растительных препаратах, БАД, экстрактах и исходном сырье. Представлены результаты количественного определения основных БАВ в объектах исследования, а также их сравнительная характеристика.
В пятой главе описана разработка методики выполнения измерений содержания макро- и микроэлементов методами ИСП-АЭС и ИСП-МС в корневищах перца опьяняющего (сортов Isa, Kuma Kua). Получены данные о количественном содержании 30 химических элементов, обнаружено превышение адекватного и верхнего допустимого уровня потребления (АУП и ВДУП) по ряду элементов, содержащихся в корневищах перца опьяняющего.
Объекты исследования
• Измельченные корневища перца опьяняющего 2 сортов (Isa, Kuma Kua).
• БАД к пище «Экстракт кава-кава. Безмятежное спокойствие» (ЗАО «Эвалар», Россия), содержащая экстракт корневищ кава-кава.
• Материалы, изъятые в качестве вещественных доказательств и переданные на исследование в отдел экспертизы (химико-токсикологической) 111 Главного государственного центра судебно-медицинских и криминалистических экспертиз Министерства обороны Российской Федерации (111 ГГЦСМиКЭ МО РФ).
Оборудование и средства измерений
Для проведения твердофазной экстракции (ТФЭ) использовали картриджи AccuBond II EVIDEX 200 mg, 3 ml (Agilent Technologies, США) и камеру для ТФЭ (Agilent Technologies, США) с вакуумным насосом N811 KN.18 (KNF Neuberger, Германия).
Для разработки ТСХ-методики идентификации перца опьяняющего использовали пластины HPTLC Kieselgel 60F254 (Merck KGaA, Германия), a также пластины ПТСХ-АФ-А-УФ Sorbfil, (ЗАО «Сорбполимер», Россия), столик для нанесения образцов на пластины (с подогревом) У СП 1М № 007-04 и стеклянные хроматографические камеры (Merck KGaA,
Германия), размером 18x6x18 см. Для УФ-детектирования результатов -облучатель хроматографический УФС-254/365 (ЗАО «Сорбиолимер», Россия).
ГХ-МС исследования выполняли на газовом хроматографе с масс-селективным детектором 6890N-5973N (Agilent Technologies, США), для изучения состава летучих компонентов использовали модификацию хроматографа 6890N-5973N с приставкой анализатора парогазовой фазы Gerstel MPS 2 (Gerstel, Германия).
Данные по макро- микроэлементному составу получены на последовательном атомно-эмиссионном спектрометре Optima 2000 DV (PerkinElmer, США) и квадрупольном масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой Elan 9000 (PerkinElmer Sciex, США) после разложения образцов с помощью системы микроволновой пробоподготовки образцов с контролем температуры и давления Multiwave-3000 (Anton Paar, Австрия).
Предварительные способы идентификации перца опьяняющего (качественные реакции и ТСХ)
Подобраны оптимальные условия выделения основных групп БАВ из субстанций, содержащих Piper methysticum: растворитель - 95 % этанол; соотношение сырья и растворителя - 1:10; однократная твердофазная экстракция образца. Разработанная методика получения извлечения анализируемых объектов, пригодна в дальнейшем как для проведения качественных реакций на основные группы БАВ, так и для ТСХ.
Методика приготовления извлечения. В картридж для ТФЭ, вместимостью 3 мл, помещали точную навеску анализируемого объекта массой около 0,3 г и заливали 3 мл (троекратно по 1 мл) 95 % спиртом. После прохождения растворителя через сорбент, извлечение подвергали исследованию с помощью качественных реакций и хроматографирования.
Схема проведения качественных реакций приведена в таблице 1.
Таблица 1 - Сводная таблица результатов качественных реакций
Качественная реакция Полученные результаты
Спиртовое извлечение Ацетоновое извлечение Водное извлечение
1 2 3 4
1. Цианидиновая проба помутнение помутнение, с выпадением аморфного осадка желтого цвета извлечение приобрело розовато-бурый оттенок
__Продолжение таблицы 1
1 2 3 4
2. Добавление 1 %-ного раствора (СН3СОО)2РЬ желтоватая муть без изменений со временем светло-серый осадок
3. Борно-лимонная реакция с реактивом Вильсона извлечение стало ярко-желтым извлечение стало ярко-желтым извлечение обесцветилось, слабо желтое
4. Добавление 10 %-ного раствора ИаОН и нагрев извлечение стало более ярко-желтым извлечение стало более ярко-желтым извлечение стало более ярко-желтым
5. Добавление реактивов: Майера, Вагнера, Марме извлечение принимало цвет реактива извлечение принимало цвет реактива извлечение принимало цвет реактива
6. Добавление реактива Драгендорфа оранжево-красное окрашивание выпадение красного осадка, надосадочная жидкость оранжевого цвета мутный оранжевый раствор
7. Добавление реактива Фреде светло-зеленое окрашивание извлечения, через 10 минут зеленое изумрудное окрашивание извлечения, через 10 минут темно-зеленое обесцвечивание извлечения, через 10 минут серо-зеленое с серым осадком
8. Реакция Либермана- Бурхарда слабо-розовое окрашивание, через 10 минут серое слабо-розовое окрашивание, через 10 минут серое розовое окрашивание, через 10 минут серо-зеленое
9. Реакция Сальковского без изменений без изменений красновато-бурое окрашивание слоя
В результате проведенных химических тестов установлено наличие в П. опьяняющем флавоноидов (1-3 реакции), лактонов (4 реакция), алкалоидов (5-7 реакции) и стеринов (8-9 реакции). Совпадение результатов химических тестов, проведенных по описанной схеме с неизвестным анализируемым образцом, может подтвердить наличие в нем Piper methysticum на предварительном этапе исследования растительных препаратов, БАД к пище, экстрактов и исходного сырья. Полный алгоритм проведения химических тестов представлен в тексте диссертации.
В качестве еще одного предварительного способа идентификации перца опьяняющего на фоне сложного матрикса анализируемых объектов проведен выбор оптимальных условий ТСХ-анализа: выбор системы растворителей, проявляющих агентов и т.д.
Методика хроматографии в тонком слое сорбента: на линию старта пластины Kieselgel 6OF254 (Merck KGaA, Германия) размером 10x10 см при помощи микрошприца наносили 5 мкл извлечения в точку. Далее пластину помещали в хроматографическую камеру с системой растворителей этилацетат : гексан (2:3) и хроматографировали восходящим способом. Время предварительного насыщения камеры 30 минут. После прохождения фронта растворителей пластину вынимали из камеры и просушивали. Просматривали в видимом и УФ-свете при длинах волн 254 и 365 нм. На пластинах обнаруживали 8 зон абсорбции с четкими границами. Обрабатывали реактивом Эрлиха модифицированным. Просматривали в видимом и УФ-спеюре. Полученные результаты описаны в таблице 2.
Таблица 2 - Значение Rf и окраска зон поглощения компонентов смеси, разделенных в системе растворителей этилацетат: гексан (2:3)
Условия детектирования Значение Rf и цвет зоны поглощения компонентов
0,180,20 0,290,31 0,360,38 0,590,61 0,640,66 0,730,75 0,780,80 0,850,87
>я До обработки зоны поглощения светло-желтого цвета
Видимь спектр после обработки - ТЗ - Б - К -
через сутки ТЖ Ж Р О - Ж Р Р
--V S № ДО обработки С ф С ТБ - ЖЗ С ТС
-з- CS после обработки тс Б СЗ ТБ - ТС - -
© >> через сутки тс Б СЗ ТБ - ТС Г ж
до обработки Г ТЗ ф ТБ Г ТБ Г -
VI ю со *—' после обработки Б 3 СЗ К О ТС Г -
е >> через сутки Б 3 Г К О ТС г ж
Примечание: Б-бурый, Г-голубой, Ж-желтый, ЖЗ - желто-зеленый, 3 - зеленый, К - красный, О - оранжевый, Р - розовый, С - синий, СЗ - светло-зеленый, ТБ - темно-бурый, ТЖ - темно-желтый, ТЗ-темно-зеленый, ТС - темно-синий, ТФ - темно-фиолетовый, Ф - фиолетовый.
Воспроизводимость методики подтверждена на пластинах БогЬШ, достигнуто четкое разделение, как и при использовании пластин ЮеБе^е] 60Р254- Сделан вывод, что подобранная система растворителей и проявляющие агенты являются оптимальными для дифференцирования
сырья, содержащего кава-каву, от других растительных субстанций и могут служить как способ предварительной идентификации сырья П. опьяняющего и его субстанций в анализируемых объектах.
Подтверждающие способы идентификации перца опьяняющего (ГХ-МС, ГХ-МС с динамическим анализатором парогазовой смеси)
Исследования проводили на хроматографе Agilent 6890N-5973N, работавшем в режиме ионизации электронным ударом при 70 эВ и оборудованном капиллярной колонкой HP-5MS длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм. В качестве газа-носителя использовали гелий, скорость потока составляла 1,2 мл/мин. Температура инжектора и интерфейса составляли 280°С. Температура колонки программировалась от 90°С до 310°С со скоростью повышения 35°С/мин. Ввод образцов объемом 1 мкл осуществляли методом без деления потока газа-носителя. Масс-спектрометр работал в режиме снятия масс-спектров в диапазоне от 31 до 550 m/z. Все исследования на хроматографе проводились при этих настройках и параметрах, если не указано обратного.
После проведения хроматографирования масс-спектры, соответствующие вершинам хроматографических пиков, сравнивали по стандартной методике с масс-спектрами библиотек «PMWTOX3», «NIST08» и «Wiley 7N».
Масс-спектр исследуемого вещества считали идентифицированным при совпадении с библиотечным масс-спектром при коэффициенте подобия, превышающим 90 %.
В результате проведенного ГХ-МС исследования БАД к пище (рис. 1), был установлен качественный состав и количественное содержание основных групп БАВ. Концентрация кавалактонов составила 77,15% ± 6,53 % от суммы БАВ, обнаруженных в добавке. Методом внутренней нормализации по площадям хроматографических пиков рассчитано количественное содержание кавалактонов и процентное соотношение от общей суммы кавалактонов (ОСК) в анализируемом объекте (таблица 3).
Таблица 3 - Содержание кавалактонов в БАД к пище (N=8)
№ п/п RT, мин Наименование кавалактона Содержание, % Отношение к ОСК, %
1 2 3 4 5
1 4,337 дигидрокаваин-С02 7,46±0,48 9,67
2 4,858 каваин-М-(0-десметил)-С02 4,92±0,10 6,37
3 4,970 каваин-С02 6,50±0,27 8,42 -
4 5,526 дигидрометистицин-СОг 4,41 ±0,31 5,72
5 6,308 6,680 каваин 12,38±0,87 16,04
6 6,408 7,8-дигидрокаваин 17,75±2,24 23,01
7 6,787 7,8-дигидрокаваин-5-ол 0,63±0,09 0,82
____Продолжение таблицы 3
1 2 3 4 5
8 6,893 5,6-дегидрокаваин 6,50±0,42 8,42
9 7,083 7,710 янгонин 5,91 ±0,33 7,66
10 7,414 7,8-дигидрометистицин 8,17±1,02 ' 10,59
11 7,509 5,6,7,8-тетрагидро-11 -метистицин 0,52±0,11 0,67
12 7,763 метистицин 2,01±0,29 2,61
Помимо кавалактонов обнаружены: высшие спирты и углеводороды 7,42% ± 1,21 %, эфиры жирных кислот 5,82% ± 0,67%, 7-метокси-7-(п-метоксифенил)-2-норборнен 2,69% ± 0,71%, флавокаваины 1,63% ± 0,31 %, 6-фенил-3-гексен-2-он 0,94 % ± 0,19 % (некоторые авторы связывают это вещество с инициированием механизмов апоптоза и непосредственно гепатотоксичностью растения кава-кава), 1-циннамоил-пирролидин 0,91 % ±0,13 %, пиностробин халкон 0,51 % ± 0,22 %.
Безмятежное спокойствие»: хроматограф Agilent 6890N-5973N, режим ионизации электронным ударом при 70 эВ, капиллярная колонка HP-5MS (номера 1-12 на рисунке соответствуют кавалактонам 1-12 в таблице 3).
Для проведения более подробного газохроматографического исследования и получения данных для нахождения соответствия веществам Rf зон поглощения на пластинах ТСХ были получены и исследованы с помощью ГХ-МС отдельные фракции, элюированные с пластин ТСХ.
Накапливали достаточное количество сконцентрированных фракций этанольного извлечения: на пластины ТСХ наносили точку объемом 10 мкл в двух сантиметрах от края и далее «полосой» по 10 мкл в точку с 3-его по 8-ой сантиметр на линию старта (на каждую пластину около 200 мкл извлечения, всего подготовлено 5 пластин).
Хроматографировали пластин),I раздельно в системе растворителей этилацетат : гексан (2:3) и элюировали с каждой пластины фракции. Схема разбивки хроматографической пластины на фракции представлена на рисунке 2. Таким образом, с каждой из 5 пластин было снято 6 фракций (с О по V). Каждую фракцию аккуратно снимали с пластин и переносили в смоченные этанолом патроны для ТФЭ АссиВопс! II ЕУГОЕХ, в каждый патрон помещалось 5 соответствующих фракций с разных пластин. Троекратно заливали 1 мл этанола 95 %. На выходе получали 6 этанольных объединенных фракций, очищенных от силикагеля. Полученные объединенные фракции подвергали исследованию с помощью ГХ-МС.
ы 1 0,16 2 0,78 3 0,74 4 0,65 5 0.59 « 0,57 7 0,29 8 0,18
. 0
; 1
5»
• ш
$ IV
• V
Рис. 2 - Схема ТСХ-пластины (сорбент - силикагель, система растворителей этилацетат : гексан (2:3) с разбивкой на хроматографические зоны элюирования фракций
Проанализировав полученные в ходе ГХ-МС исследования данные по фракциям, была составлена сводная таблица соответствий (таблица 4).
Таблица 4 - Сводная таблица по идентифицированным веществам из
ИТ (ТСХ) ЯТ,мин (ГХ-МС) Наименование вещества с максимальным количественным содержанием в пробе
0,85-0,87 6,19 Транс-борнил циннамат
6,55 Цис-борнил циннамат
0,78-0,80 7,02 Пиностробин халкон
0,73-0,75 7,41; 7,60 Флавокаваин В и его изомеры
0,64-0,66 7,77 Флавокаваин С
0,59-0,61 8,24; 8,65 Флавокаваин А и его изомеры
0,36-0,38* 6,31; 6,42; 6,91 Каваин, 7,8-дигидрокаваин, 5,6-дегидрокаваин
0,29-0,31* 7,12; 7,46; 7,76 Янгонин, 7,8-дигидрометистицин
0,18-0,20* 7,51; 7,80 5,6,7,8-тетрагидро-11-метоксиянгонин, метистицин
Примечания: * - неоднородные зоны поглощения при просматривании в УФ-свете (254 и 365 нм).
Помимо БАД к пище, содержащей экстракт корневищ перца опьяняющего, и сконцентрированных фракций, полученных на ее основе, ГХ-МС исследованию подвергалось сырье перца опьяняющего - корневища 2 сортов Киша Киа и Isa. Методика приготовления извлечений не отличалась от предложенной выше, так как корневища были измельчены. Таким образом, были получены две хромато-масс-снектрограммы для сорта Кита Киа (рис. ЗА) и сорта Isa (рис. ЗБ).
Интенсивность TIC: KAWA_Q9 KUMA DVciata.rns
1e-t-07 9000000
eoooooo
7000000 6000000-
4 .00
Интенсивность
1.de+07 1.3e+07 1 .2®+07 1.1e+07 1e+07 900D000 80Q000Q 70000006000000 5000000 ЛОООООО ЭОООООО 2000000; 1000000-
7.00 e.OO Э.ОО Ю.ОО
TIC: KAW/\_09 ISA.D\data.ms
11.OO 12.OO
Время, мин
.OD Ю.ОО 11.OO 12.OO
Время, мин
Рис. 3 - Хроматограмма этанольного извлечения корневищ перца опьяняющего сорта Кита Киа (А) и сорта Isa (Б): хроматограф Agilent
6890N-5973N, режим ионизации электронным ударом при 70 эВ, капиллярная колонка HP-5MS (номера l-ll на рисунке соответствуют кавалактонам l-l I в таблице 5)
В результате проведенных Г'Х-МС исследований этанольных извлечеиий из корневищ перца опьяняющего сортов Кита Киа и Isa, были установлены качественные составы и количественные содержания основных групп БЛВ. В сорте Кита Киа содержится 62,78% ± 5,70% кавалактонов 22,83 % ± 3,54% составляют норборнены, 0,74% ± 0,18 % N-циннамоилпирролидин. В сорте Isa содержится 70,00% ± 6,41% кавалактонов от суммы БАВ, борненов 16,43% ± 2,76%, N-циннамоилпирролидин 0,44% ± 0,12%, 3,4-метилендиокси-циннамилиденацетон 2,38 % ± 0,39 %.
Таблица 5 - Содержание кавалактонов в сортах Кита Киа и Isa
№ п/п Наименование вещества Содержание в Кита Киа (N=6), % Содержание в Isa (N=6), %
1 дигидрокаваин-С02 1,01±0,12 0,75±0,14
2 каваин-СОг 2,31±0,08 2,38±0,35
3 каваин-М-(0-десметил)-С02 2,17±0,31 не обнаружен
4 дигидрометистицин-С02 3,76±0,24 2,88±0,40
5 7,8-дигидрокаваин 7,56±1,05 13,82±1,21
6 каваин 3,18±0,41 7,93±0,25
7 5,6-деги дрокаваин 9,41±0,53 5,18±0,43
8 7,8-дигидрометистицин 9,85±0,64 17,46±0,94
9 5,6,7,8-тетрагидро-11 -метоксиянгонин «следы» 0,60±0,23
10 янгонин 22,57±2,10 18Д5±2,22
11 метистицин 0,96±0,22 0,85±0,23
Помимо обычной модификации метода хромато-масс-спектрометрии, была использована вариация ГХ-МС с методом равновесной парогазовой фазы, как оптимальный способ изучения летучих компонентов.
Исследование проводили на хроматографе 6890N-5973N (Agilent Technologies, США) с приставкой анализатора парогазовой фазы Gerstel MPS 2 (Gerstel, Германия), оборудованном капиллярной колонкой HP FFAP длиной 60 м и внутренним диаметром 0,32 мм. В качестве газа-носителя использовали гелий. Напряжение электронного умножителя устанавливали по результатам работы программы ATUNE из стандартного пакета математического обеспечения фирмы-производителя при автоматической настройке по перфторбутиламину. Температура колонки устанавливалась равной 180°С. Температуры инжектора и интерфейса были равны и составляли 200°С. Ввод парогазовой фазы образцов объемом 25 мкл осуществляли методом с делением потока газа-носителя (1:10).
После проведения хроматографирования масс-спектры, соответствующие вершинам хроматографических пиков, сравнивали по стандартной методике с масс-спектрами библиотек «PMW_TOX3», «NIST08» и «Wiley7N». Масс-спектры считали идентифицированными при
совпадении масс-спектров исследуемого вещества с библиотечным, с коэффициентом подобия, рассчитанным но стандартной методике, превышающим 90%.
Специальной пробоподготовки образца не требовалось, гак как эффективность выделения летучих веществ этим методом составляет до 97%, более того, масс-спектрографическое детектирование позволяет идентифицировать вещества на уровне фоновых концентраций в твердых образцах.
Точную навеску (около 3,0 г) анализируемого объекта помещали во флакон Gerstel объемом 20 мл, закрывали завинчивающейся крышкой и ставили на подставку. Термостат-инкубатор и отсек шприца выставляли на температурный режим 70°С, орбитальное встряхивание с паузами выставляли на скорость 450 оборотов/мин.
Была получена хромато-масс-спектрограмма, представленная на рисунке 4.
Интенсивность аоооооо-
7500000 7000000-650QC00 6000000 55000005000000 asoocoo ■3000000-35ÖOOOO 30000002500000 20СОООО-1SOOOOO-1000000 soooao-
TIQ KAVW -D
5.00
vJ-j^J
9 50 10.00 Время, мин
Рис. 4 - Хромагограмма равновесной парогазовой фазы БАД к пище, содержащей сухой экстракт перца опьяняющего: хроматограф Agilent 6890N-5973N с приставкой анализатора парогазовой фазы Gerstel MPS 2, капиллярная колонка HP FFAP (номера 1-8 на рисунке соответствуют кавалактонам I -8 в таблице 6)
В результате проведенного ГХ-МС исследования был установлен качественный состав и количественное содержание основных групп БАВ в равновесной парогазовой фазе: кавалактонов содержится 64,07 % ± 5,61 % от суммы БАВ, также обнаружены компоненты эфирного масла, которые раньше в этом растении не обнаруживались, кариофиллен, кариофиллена оксид, элемол и кадинол.
Таблица 6 - Содержание кавалактонов в парогазовой фазе БАД (N=5)
№ П /п КТ, мин Наименование кавалактона Содержание, % Отношение к ОСК, %
1 6,393 7,8-дигидрокаваин 22,76±1,77 35,52
2 6,677 каваин 13,18±1,41 20,57
3 6,808 дигидрокаваин-5-ол «следы» -
4 6,914 5,6-дегидрокаваин 5,99±0,32 9,35
5 7,157 8,021 янгонин 13,83±1,44 21,59
6 7,589 7,8-дигидрометистицин «следы» -
7 7,737 5,6,7,8-тетрагидро-! 1 -метистицин «следы» -
8 8,104 метистицин 8,31±0,67 12,97
В таблице 7 собраны характеристики кавалактонов - формула и масс-спектр.
Изучение макро-, микроэлементного состава корневищ перца опьяняющего сортов Isa и Кита Киа
Международная гармонизация требований к качеству фитопрепаратов и сырья для его изготовления предусматривает нормирование содержания тяжелых металлов. В странах-заготовителях, контроль за минеральным составом получаемых экстрактов и исходного сырья П. опьяняющего не осуществляется или осуществляется недостаточно и на устаревшем оборудовании. Однако подверженность населения, регулярно употребляющего исходное сырье, различного рода дерматитам позволяет предположить о возможной роли минерального состава растения в развитии данных нозологии. По данным L.A. Dyer, A.N. Palmer и N.J. Pollock, островные жители для приготовления своих напитков используют от 240 до 700 г корневищ перца опьяняющего в неделю.
Таким образом, было решено установить количественное содержание макро- и микроэлементов, входящих в состав измельченных корневищ. Перерасчет на минимальное (34,3 г / в день) и максимальное (100 г / в день) количество потребления по сравнению с уровнями адекватного и верхнего допустимого уровня потребления химических элементов с пищей проводили согласно MP 2.3.1.1915-04 от 2 июля 2004 года «Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ».
Всего в ходе исследования были установлены количественные характеристики 30 макро- и микроэлемен тов для корневищ 2 сортов перца опьяняющего Кита Киа и Isa. Сводная таблица по элементам, превышающим АУП и ВДУП, представлена ниже.
Таблица 8 - Макро-, микроэлементный состав корневищ П. опьяняющего и перерасчет минимального и максимального потребления согласно адекватным и верхним допустимым уровням потребления элементов*
Элемент Содержание, мкг/г Максимальное потребление (100 г/ в день) Минимальное потребление (34,3 г / в день) Метод анализа
% АУП % ВДУП % АУП % ВДУП
Сорт Кита Киа
As 0,3463 346,33 115,44 118,74 39,58 ИСП-МС
Cd 1,28 - 638,50 - 218,91 ИСП-МС
Со 0,2485 248,52 82,84 85,21 28,40 ИСП-МС
Сг 1,02 204,35 40,87 70,06 14,01 ИСП-МС
Fe 260,3 208,27 57,85 71,41 19,83 ИСП-АЭС
Ni 2,49 248,61 41,43 85,24 14,21 ИСП-МС
Si 721 1441,93 720,97 494,38 247,19 ИСП-АЭС
Sr 22,20 - 222,04 - 76,13 ИСП-МС
V 0,6015 150,37 60,15 51,56 20,62 ИСП-МС
Zn 164 136,67 41,00 46,86 14,06 ИСП-АЭС
Сорт Isa
As 0,6554 655,38 218,46 224,70 74,90 ИСП-МС
Cd 0,3068 - 153,38 - 52,59 ИСП-МС
Со 0,1839 183,89 61,30 63,05 21,02 ИСП-МС
Cr 1,20 239,97 47,99 82,28 16,45 ИСП-МС
Fe 453 362,40 100,67 124,25 34,52 ИСП-АЭС
Ni 1,93 192,62 32,10 66,04 11,01 ИСП-МС
Si 885 1770,67 885,33 607,09 303,54 ИСП-АЭС
Sr 25,69 - 256,90 - 88,08 ИСП-МС
V 0,5527 138,19 55,27 47,38 18,95 ИСП-МС
* согласно МР 2.3.1.1915-04 от 2 июля 2004 года «Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ» «-»- нет данных АУП для элемента
Высокие концентрации мышьяка, кадмия, железа и кремния, найденные в корневищах кава-кавы, могут угнетать антиоксидантную систему организма человека. А мышьяк и кадмий, являясь тиоловыми ядами, инактивируют сульфгидридные группы глутатиона и таким образом кумулируют эффект кавалактонов.
ВЫВОДЫ
1. Подобранные условия выделения основных биологически активных веществ перца опьяняющего (растворитель - 95 % этанол; соотношение сырья и экстрагента — 1:10; ТФЭ) позволили разработать экспрессные предварительные способы идентификации кава-кава в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном сырье. На основе химических тестов разработан алгоритм выбора реагентов для обнаружения в Piper methysticum флавоноидов (водное извлечение), алкалоидов, лактонов, стеринов. Разработана методика ТСХ, система растворителей этилацетат : гексан (2:3), проявляющий агент - реактив Эрлиха модифицированный, при детектировании обнаруживается 8 хроматографических зон, изменяющих окраску в видимом и УФ-диапазоне в течение времени. Методики внедрены в практику проведения судебно-химических экспертиз и химико-токсикологических исследований.
2. Разработаны методики хромато-масс-спектрометрии и вариации метода ГХ-МС с приставкой динамического парофазного анализатора, которые рекомендованы в качестве подтверждающих способов идентификации перца опьяняющего при проведении исследований, в том числе судебно-химических и химико-токсикологических. Методики отличаются экспрессностыо, специфичностью и высокой степенью чувствительности.
3. Изучен химический состав БАД, содержащей сухой экстракт корневищ перца опьяняющего, и измельченных корневищ Piper methysticum 2 сортов (Kuma Kua и Isa) методом ГХ-МС, в изученных объектах обнаружены стерины, флавоноиды, халконы, сексвитерпены, кавалактоны. Методом внутренней нормализации по площадям хроматографических пиков установлено содержание кавалактонов: в БАД - 77,15% ± 6,53 %, в сорте Kuma Kua - 62,78 % ± 5,70 %, в сорте Isa - 70,00 % ± 6,41 %, в парогазовой фазе БАД - 64,07 % ± 5,61 %. Использование приставки динамической равновесной парогазовой фазы в методе ГХ-МС позволило впервые получить данные о компонентах эфирного масла П. опьяняющего (кариофиллене, кариофиллена оксиде, элемоле, кадиноле).
4. Методами атомно-эмиссионной и масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой впервые установлен минеральный состав измельченных корневищ перца опьяняющего 2 сортов (Kuma Kua, Isa). Получены данные о количественном содержании 30 химических элементов, которые позволили выявить превышение адекватных и верхних допустимых уровней потребления макро- и микроэлементов. Установлено, что при регулярном потреблении корневищ перца опьяняющего в организм в токсических дозах поступают тиоловые токсиканты мышьяк и кадмий. Это обуславливает проявление токсичности исходного сырья кава-кава наряду с действием кавалактонов, а также совместное негативное влияние на металло-лигандный гомеостаз организма.
Резюме
Установлен химический состав корневищ перца опьяняющего и экстракта из него. Органические компоненты определяли методами хроматографии в тонком слое сорбента и газовой хроматографии - масс-спектрометрии после пробоподготовки с использованием твердофазной экстракции; минеральный состав - методами атомно-эмиссионной и масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой после кислотного разложения с использованием систем микроволновой пробоподготовки. Разработаны экспрессные предварительные и подтверждающие способы идентификации основных действующих веществ кава-кава (кавалактонов, флавокаваинов и др.). Установлено содержание 30 макро- и микроэлементов двух сортов корневищ перца опьяняющего -Киша Киа, Isa.
Summary
For the purpose of research liable consequences of usage Piper methysticum chemical composition were investigated. Organic components determined by thin layer chromatography and gas chromatography mass-spectrometry after solid phase extraction, inorganic components - by atomic emission spectrometry and mass-spectrometry with inductively coupled plasma after acid digestion using a microwave sample preparation systems. Express preliminary and confirmation methods for identification major substances (kavalactones, flavokavains and etc.) from Piper methysticum were made. 30 Macro- and trace elements composition dried rhizomes of Kava from 2 species (Kuma Kua, Isa) was observed.
Основные положения диссертации опубликованы в работах:
1. Чукарин, А.В. Фитохимическое изучение сухого экстракта корневищ Piper methysticum и препаратов из него. / А.В. Чукарин // Тезисы работ участников Открытого российского конкурса на лучшую работу студентов 2005 года по разделу «Медицинские науки», Школы молодых исследователей «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» и итоговой научной студенческой конференции «Татьянин день». - 2006. - с. 16-17.
2. Чукарин, А.В. Анализ сухого экстракта корневищ перца опьяняющего методами хроматографии в тонком слое сорбента и газовой хроматографии масс-спектрометрии. / А.В. Чукарин, Е.А. Симонов, А.В. Киричек, В.Е. Саломатин // Микроэлементы в медицине. - 2005. - Т.6. .-Вып.З.-с. 62-67.
3. Чукарин, А.В. Использование гибридных методов исследования в контроле качества растительного сырья. Исследование химического состава кавы (перца опьяняющего, Piper methysticum) и препаратов на её основе. / А.В. Чукарин, Е.А. Симонов, T.J1. Киселева, Н.И. Калетина // Тезисы Международной конференции Академии медико-технических наук РФ «Современные аспекты медицины». - Ереван. - 2006. - с. 263-264.
4. Chukarin, A.V. Détermination of microelements composition from rhizomes of Piper methysticum Forst. by ICP-MS and 1CP-AES. /
A.V. Chukarin, V.A. Demidov, E.P. Serebiyansky // Quimica Clinica. - 2007. -26 (S 1 ). Spécial supplément. - p. 46.
5. Калетина, H.И. Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов: учеб. пособие / Е.Я. Борисова, Г.Ф. Иванова, Н.И. Калетина,
B.А. Мищихин, Е.А. Симонов, А.В. Скальный, А.В. Смирнов, А.В. Чукарин и др. под ред. Н.И. Калетиной. // Москва: ГЭОТАР-Медиа. -2008.-с. 1016: ил.
6. Скальный, А.В. Технологии исследования элементного состава организма: теоретические и прикладные аспекты / А.В. Скальный, М.Г. Скальная, Е.В. Лакарова, Ю.В. Ломакин, А.В. Чукарин // Технологии живых систем. - 2008. - Т.5. - № 4. - с. 54-59.
7. Чукарин, А.В. Изучение возможных последствий употребления перца опьяняющего (Piper methysticum) для человека. / А.В. Чукарин // Вестник восстановительной медицины. - 2008. - № 5(28). - с. 70-72.
8. Чукарин, А.В. Элементный и а-пиронный состав корневища перца опьяняющего (кава-кава, Piper methysticum) / А.В. Чукарин, Т.Л. Малкова // Естественные технические науки. - 2011. - № 2(25). - с. 228-234.
9. Чукарин, А.В. Правовой статус перца опьяняющего. / А.В. Чукарин // Научно-практический журнал «Вестник Пермской государственной фармацевтической академии». - 2011. - № 8. - с. 56-57.
10. Чукарин, А.В. Способы идентификации перца опьяняющего. /
A.В. Чукарин // Научно-практический журнал «Вестник Пермской государственной фармацевтической академии». - 2011. - № 8. - с. 134-136.
11. Чукарин, А.В. Проблема анализа биологически активных добавок к пище с целью поиска психоактивных, сильнодействующих и наркотических компонентов / А.В. Чукарин, А.В. Киричек, Т.Л. Малкова // Морфология критических и терминальных состояний. Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 85-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РФ, профессора
B.И. Алисиевича. - 2011. - с. 193-200.
Подписано в печать 13.10.2011 Формат 60*84/16. Набор компьютерный. Бумага ВХИ. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,5 Заказ № 211/2011.
Отпечатано на ризографе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46, тел./факс. 8-901-266-59-37, (342) 282-57-92
Оглавление диссертации Чукарин, Андрей Валерьевич :: 2011 :: Пермь
Предисловие.
Введение.
ЧАСТЬ I
Глава 1. Классификация токсичных агентов и виды токсического действия.
1.1. Некоторые понятия, определения и термины, используемые в токсикологии.
1.2. Что понимать под зависимостью структура — токсичность.
1.3. Классификация токсичных агентов.
1.4. Виды токсического действия.
Глава 2. От генома к метаболому.
2.1. Реиепторные комплексы как молекулярные мишени.
2.2. Механизмы токсического действия и межклеточной коммуникации.
2.3. Генный полиморфизм и индивидуальная химическая чувствительность. Метаболомика и метабономика.
Глава 3. Метаболизм токсикантов (хемобиокинетика).
3.1. Резорбция токсикантов.
3.2. Распределение токсикантов.
3.3. Биотрансформация токсикантов.
3.4. Выведение токсикантов.
3.5. Вторичный метаболизм.
Глава 4. Методология химико-токсикологнческого анализа.
4.1. Основные направления, цели и задачи химико-токсикологического анализа.
4.2. Основные этапы химико-токсикологического анализа
4.3. Взаимосвязь между содержанием токсиканта в анализируемом биообъекте и интерпретацией результатов исследования.
4.4. Особенности методологии клинико-токсикологического анализа.
4.5. Особенности методологии химико-токсикологического анализа при определении наркотиков у живых лиц.
4.6. Особенности интерпретации результатов химико-токсикологического анализа.
4.7. Обеспечение качества и надлежащая лабораторная практика.
Оглавление
7.5.2. Химико-токсикологические характеристики элементов.
7.5.3. Выбор биообъектов для элементного анализа.
7.6. Кислоты, основания, анионы солей.
7.7. Фтор и его соединения.
Глава 8. Допинговые средства.
Глава 9. Экотоксиканты.
Глава 10. Биологическая опасность и биологический терроризм
10.1. Основные понятия.
10.2. Природные токсины: источники, классификация, токсические и фармакологические эффекты, методы определения.
Ситуационные задачи для самостоятельной работы.
Список основных сокращений.
Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение химического состава и разработка способов идентификации перца опьяняющего в БАДах, фитопрепаратах и сырье для их изготовления"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Подобранные условия : выделения' основных биологически активных веществ перца опьяняющего (растворитель, — 95 % этанол; соотношение сырья?, и экстрагента. — 1:10;. ТФЭ) позволили разработать экспрессные предварительные: способы идентификации* растения в растительных препаратах, БАД к пище, экстрактах и исходном? сырье. На основе химических тестов разработан алгоритм выбора реагентов для обнаружения в перце: опьяняющем флавоноидов (водное извлечение); алкалоидов; лактонов, стеринов. Разработана методика ТСХ, система растворителей этилацетат — гексан (2:3), проявляющий агент — реактив Эрлиха модифицированный, при детектировании обнаруживается 8 хроматографических зон, изменяющих окраску в видимом и УФ-диапазоне в течение времени. Методики могут быть предложены для внедрения в практику проведения судебно-химических экспертиз и химико-токсикологических исследований.
2. Разработаны методики хромато-масс-спектрометрии и вариации метода ГХ-МС с приставкой динамического парофазного анализатора, которые использовались в качестве подтверждающих способов идентификации перца опьяняющего при проведении исследований, и могут применяться, в том числе, при выполнении судебно-химических и химико-токсикологических экспертиз. Мётодики отличаются экспрессностью, специфичностью и высокой степенью чувствительности.
3: Изучен химический? состав» ЬАД', содержащей сухой экстракт корневищ перца:-опьяняющего, и измельченных корневищ Piper; metliysticum:. 2 сортов (Kuma Киа и Isa), методом: ГХ-МС, обнаружены стерины, флавоноиды, халконы, сексвитерпены, кавалактоны. Методом внутренней нормализации по* площадям- хроматографических пиков; установлено содержание кавалактоиов: в ЬАД — 77,15% ± 6,53 %, в сорте Kuma Киа — 62,78 % ± 5,70 %, в сорте Isa - 70,00 % ± 6,41 %, в парогазовой фазе БАД -64,07 % ± 5,61 %. Использование приставки динамической равновесной-парогазовой фазы в методе ГХ-МС позволило впервые получить данные о компонентах эфирного масла П. опьяняющего (кариофиллене, кариофиллена оксиде, элсмоле, кадиноле).
4; Методами атомно-эмиссионной- и масс-спектрометрии с индуктивно связанной, аргоновой плазмош впервые; определен минеральный состав 2 сортов (Kuma Kua, Isa) измельченных корневищ перца опьяняющего; Получены данные о количественном содержании 30 химических элементов, которые позволили выявить превышение адекватных и верхних допустимых уровней потребления ряда макро- и микроэлементов. Подсчитано, что при регулярном потреблении корневищ перца опьяняющего, в' организм в токсических дозах поступают тиоловые токсиканты мышьяк и кадмий. Поэтому токсичность исходного сырья кава-кава обусловлена не только наличием кавалактонов, но и проявлением токсичности указанных элементов, а также их совместным влиянием на металло-лигандный гомеостаз организма:
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Чукарин, Андрей Валерьевич
1. Бобырев, В.Н. Свободнорадикальное окисление в патогенезе заболеваний, сопряженных со старением / В.Н. Бобырев // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1989. - № 5. - С. 90-94.
2. Еремин, G.K. Анализ наркотических средств. Руководство по химико-токсикологическому анализу наркотических и других одурманивающих средств / С.К. Еремии, Б.Н. Изотов, Н.В. Веселовская // Москва: .Мысль. -1993.- 272 с.
3. Заикин, В .Г. Основы масс-спектрометрии органических соединений1 / В.Г. Заикин, A.B. Варламов, А.И. Микая, Н.С. Простаков // Москва: МАИК «Наука / Интерпериодика». 2001. - 286 с.
4. Калетина, Н.И. Токсикологическая: химия; Метаболизм? и- анализ; токсикантов: учебное пособие / Коллектив авторов под ред. Н.И. Калетиной // Москва: ГЭОТАР-Медиа. 2008. - 1016 е.: ил.
5. Калетина, Н.И. Токсикологическая химия. Аналитическая токсикология: учебник / Коллектив авторов под ред. Н.И. Калетиной и Р.У. Хабриева //" Москва: ГЭОТАР-Медиа. 2010. - 752 с:: ил. ISBN 978-5-9704-1537-5.
6. Кулинский, В.И. Биологическая роль глутатиона / В-И.Кулинский,, Л;С. Колесниченко // Успехи современной биологии. 1990. - Т. 110. -№1(4). — С. 20-32.
7. Лебедев; А.Т. Масс-спектрометрия в органической химии / А.Т. Лебедев // Москва: БИ1 ЮМ. Лаборатория знаний. 2003. — 493 е.: ил.
8. Мазо, В.К. Глутатион как компонент антиоксидантной системы желудочно-кишечного! тракта / BJC. Мазо // Российский журнал гастроэнтерологии^ гепатологии, колопроктологии. 1998. - №1. - С. 4753.
9. Протокол от 25.12.2002 № 3/86-2002 (в редакции Дополнения № I; утверждённого Постоянным комитетом по контролю наркотиков; приказом* от 22.10.2003 №2/88-2003).
10. Чукарищ А.В. Изучение возможных последствий употребления перца опьяняющего (Piper methysticum) для человека / А.В. Чукарин // Вестник восстановительной медицины. 2008. — № 5(28) . - С. 70-72.
11. Чукарин, А.В. Способы идентификации перца опьяняющего / А.В. Чукарин // Научно-практический журнал «Вестник Пермской государственной фармацевтической академии». 2011. - № 8. — С. 134136.
12. Чукарин, А.В. Элементный и а-пиронный состав корневища перца» опьяняющего (кава-кава, Piper methysticum) / А.В. Чукарин, Т.Л. Малкова// Естественные и технические науки. 2011. - № 2(25). -С. 228-234.
13. Abebe, W. Herbal medication: potential for adverse interactions with analgesic drugs / W. Abebe //Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics. — 2002. -Volume 27.-№6.-P. 391-401.
14. Abourashed, E.A. Microbial Transformation of Kawain and Methysticin / E.A. Abourashed, I.A. Khan // Chemical & pharmaceutical bulletin. 2000. -Volume 48.-№12.-P. 1996-1998.
15. Abraham, K.C. Explanatory attributions of anxiety and recovery in a study of kava / K.C. Abraham, K.M. Connor, J.R. Davidson // Journal of alternative and complementary medicine. 2004. - Volume 10. - №3. — P. 556-559.
16. Achenbach, H. Über die Isolierung von zwei neuen Pyrrolididen aus Rauschpfeffer (Piper methysticum Forst) / H. Achenbach, W. Karl // Chemische Berichte. 1970. - Volume 103. - S. 2535-2540.
17. Achenbach, H. Kernresonanzspectroskopische Untersuchungen an Kawa-Lactonen / H. Achenbach, W. Regel // Chemische Berichte. — 1973. — Volume 106. S. 2648-2653.
18. Anke, J. Pharmacokinetic and pharmacodynamic drug interactions with Kava (Piper methysticum Forst, f.) / J. Anke; I. Ramzan. // Journal of Ethnopharmacology. 2004. - Volume 93. - №2-3. - P. 153-160.
19. Backhauß, C. Extract of kava (Piper methysticum) and its methysticin' constituents protect brain tissue against ischemic damage in rodents / C. Backhauß, J. Krieglstein // European Journal of Pharmacology. — 1992. -Volume 215. -№2-3. P. 265-269.
20. Bäsch, E. Kava monograph: A clinical decision support tool / E. Bäsch, P. Hammerness, D. Sollars, S. Bäsch, H. Boon, C. Ulbricht, C. Tsouronis, A. Rogers, S. Bent and E. Ernst // Journal- of Herbal Pharmacotherapy. — 2002. Volume 2. - №4. - P. 65-91.
21. Baselt, R.C. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 8th edition / R.C. Baselt // Biomedical Publications: Foster City. CA. 2008. - 1720 p. ISBN 978-0-9626523-7-0.
22. Bauer, R. Relevant hepatotoxic effects of kava still need to be proven. A statement of the Society for Medicinal Plant Research / R. Bauer, B. Kopp,
23. A. Nahrstedt // Planta Medica. 2003. - Volume 69. - №11. - P. 971-972.
24. Bilia, A.R. Kava-kava and anxiety: Growing knowledge about the efficacy and safety / A.R. Bilia, S. Gallori and F.F. Vincieri // Life Sciences. 2002. -Volume 70. -№22. - P. 2581-2597.
25. Blaschek, W. Handbuch der pharmazeutischen Praxis. Folgeband 2: Drogen A-K eds. Hagers, 5th ed. / W. Blaschek, R. Hänsel, K.Keller, J. Reichling, H. Rimpler, G. Schneider // Berlin: Springer-Verlag. — 1998. — 858 s. ISBN: 978-3540616191.
26. Blaszcyk, T. Kawa-kawa als antimykotikum / T. Blaszcyk, Hamm, J. Krzyzanovska, E. Lamer-Zarawska // Pharmazie. — 1997. — Volume 142. -№21.-S. 32-34.
27. Boonen, G. Influence of genuine kavapyrone enantiomers on the GABA(A) binding site / G. Boonen, H. Haberlein // Planta Medica. 1998. -Volume 64. - №6. - P. 504-506.
28. Brown, J.F. Kava and kava diseases in the South Pacific (Working paper №24) / J.F. Brown // Australian Centre for International Agricultural Research, Canberra, ACT, Australia. — 1989. — 70 p.
29. Brunton, R. The abandoned narcotic: kava and cultural instability in Melanesia / R. Brunton // Cambridge University Press: Cambridge, U.K. — 1989. — 219 p.
30. Buckley, J.P. Pharmacology of kava / J.P. Buckley, A.R. Furgiuele, M.J. O'Hara // Ethnopharmacoligical Search for Psychoactive Drugs, DH Efron, B Holmstedt, NS Kline, eds. New York: Raven Press. 1979. - P. 141-151.
31. Cagnacci, A. Kava-Kava administration reduces anxiety in perimenopausal women / A. Cagnacci, S. Arangino, A. Renzi, A.L. Zanni, S. Malmusi, A. Volpe // Maturitas. 2003. - Volume 44. - №2. - P. 103-109.
32. Cawte, J. Parameters of kava used as a challenge to alcohol / J. Cawte // Australian and New Zealand Journal of Psychiatry. — 1986. — Volume 20. — №1. P. 70-76.
33. Center for Food Safety and Applied Nutrition. Kava-containing dietary supplements may be associated with severe liver injury (document issued March 25, 2002) / US Food and Drug Administration // USA. 2002. - 4 p.
34. Chanwai, L.G. Kava toxicity / L.G. Chanwai // Emergency Medicine. — 2000. — Volume 12.-P. 142-145.
35. Cheng, D. Identification by methane chemical ionization gas chromatography/mass spectrometry of the products obtained by steam distillation and aqueous acid extraction of commercial Piper methysticum /
36. D.Cheng, R.O. Lidgard, P.H. Duffield, A.M. Duffield, J J. Brophy // Biomedical & Environmental Mass Spectrometry. 1988. - Volume 17. — №5.-P. 371-376.
37. Chikara, J. Study on the allelopathy of Kava (Piper methysticum L.) / J. Chikara // MSc Thesis. Miyazaki University: Japan. 2003. — 70 p.
38. Clouatre, D.L. Kava kava: examining new reports of toxicity / D.L. Clouatre // Toxicology Letters. 2004. - Volume 150. - №1. - P. 85-96.
39. Clough, A.R. Liver function test abnormalities in users of aqueous kava extracts / A.R. Clough, R.S. Bailie, B. Currie // Journal of Toxicology-Clinical Toxicology. 2003. - Volume'41. — №6. - P. 821-829.
40. Cox, P.A. Kava (Piper methysticum, Piperaceae). Notes on Economic Plants / P.A. Cox, L. O'Rourke // Economic Botany. 1987. - Volume 41. - P.* 452454.
41. Currie, B.J. Kava hepatotoxicity with Western herbal products: does it occur with traditional kava use? / B.J. Currie, A.R. Clough //Medical Journal of Australia. 2003. - Volume 178. -№9. - P. 421-422.
42. Davies, L.P. Kava pyrones and resin: studies on GABAA, GABAB» and benzodiazepine binding sites in rodent brain / L.P. Davies, C.A. Drew, P. Duffield, G.A.R. Johnston, D.D. Jamieson // Pharmacology and Toxicology. 1992. - Volume 71. - №2. - P: 120-126.
43. Denery, J.R. Pressurized fluid extraction« of carotenoids from Haematococcus pluvialis and Dunaliella salina and kavalactones from Piper methysticum /
44. J.R. Denery, K. Dragull, C.S. Tang, Q.X. Li // Analytica Chimica Acta. -2004. Volume 501. - №2. - P. 175-181.
45. Dharmaratne, H:R.W. Kavalactones from Piper methysticum, and their 13C NMR spectroscopic analyses / H.R.W. Dharmaratne, N.P.D; Nanayakkaraj I.A. Khan // Phytochemistry. 2002. -Volume 59.- №4. - P. 429-433.
46. Dietlein, G. Doctors' prescription behaviour regarding dosage recommendations for/ preparations- of kava extracts- / G. Dietlein and B.D.-Schroeder // Pharmacoepidemiology Drug Safety. 2003^ - Volume 12. — №5. — P. 417421,. ■■■ ;
47. Duve, R.N. Gas-liquid chromatographic determination of major constituents of Piper methysticum / R.N. Duve // The Analyst. 1981. - Volume 106. -Issue 1259.-P. 160-165.
48. Fackelmann, K. Pacific cocktail: the history, chemistry and botany of the mind-altering kava plant / K. Fackelmann // Science News (US). 1992. -Volume 141. -№ 26i - P. 424-425.
49. Foo, H. Acute effects of kava, alone or in combination with alcohol, on subjective measures of impairment and intoxication and on cognitive performance / H. Foo, J. Lemon // Drug and Alcohol Review. — 1997. — Volume 16.-№2.-P. 147-155.
50. Fu, P.P. Toxicity of kava kava / P.P. Fu, Q. Xia, L. Guo, H. Yu, P.C. Chan // Journal of Environmental Science and Health, Part C: Environmental
51. Carcinogenesis & Ecotoxicology Reviews. 2008. - Volume 26. - №1. -P. 89-112.
52. Fu, S. Influence of kavain on hepatic ultrastructure / S. Fu, E. Korkmaz, F. Braet, Q. Ngo, I. Ramzan // World Journal of Gastroenterology. — 2008. -Volume 14 №4. - P. 541-546. ISSN 1007-9327.
53. Garner, L.F. Some visual effects caused by the beverage kava / L.F. Garner, J.D. Klinger // Journal of Ethnopharmacology. — 1985. Volume 13. - №3. — P. 307-311. ,
54. Gleitz, J. Antithrombotic action of the kava pyrone (+)-kavain prepared from
55. Piper methysticum on human platelets / J. Gleitz, A. Beile, P. Wilkens, A. Ameri, T. Peters // Planta Medica. 1997. - Volume 63. - №1. - P. 27-30.
56. Glover, D.D. Herbal products: toxicology and clinical pharmacology / edited by T.S. Tracy, R.L. Kingston 2nd ed. Library of Congress Cataloging in Publication Data. Humana Press Inc. 2007. - 300 p. ISBN 978-1-58829-313-8.
57. Hansel, R. Kava-kava rhizome. In Hagers Handbuchder Pharmazeutischen Praxis, Vol. 9, Drogen P Z, 5-th ed. / R. Hansel, K. Keller, H. Rimpler, G. Schneider// Springer-Verlag: Berlin, Germany. — 1992. — S. 201-221.
58. Hashimoto, T. Isolation and synthesis of TNF-a release inhibitors from Fijian kawa (Piper methysticum) / T. Hashimoto, M. Suganuma, H. Fujiki, M. Yamada, T. Kohno, Y. Asakawa // Phytomedicine. — 2003. — Volume 10. — №4.-P. 309-317.
59. Hiller, K-O. Aktualisiertes Wissenschaftliches Erkenntnismaterial zu "Piperis methystici rhizoma" (Kava-Kava-Wurzelstock)ab 1995-unter Berücksichtigung relevanter früherer Studien- / K-O: Hiller // Kooperation Phytopharmaka. -1999.-S. 1-31.
60. Hoc, S. Kava-Kava-Präparate — objektive Nutzen / Risiko-Abwägung ist nötig / S. Hoc // PraxisErfolg. 2003. - №02/03. - S. 43.
61. Holland, J.G. Plasma source mass spectrometry: New developments and applications /Eds.: J.G. Holland, S.D. Tanner // London Royal Society of Chemistry: UK. 1999. - 310 p. ISBN: 978-0854047499.
62. Holm, E. The action profile of D,L-kavain. Cerebral sites and sleep-wakefulness-rhythm in animals / E. Holm, U. Staedt, J. Heep, C. Kortsik, F. Behne, A. Kaske, I. Mennicke // Arzneimittelforschung. 1991.
63. Volume 41.-№7. -P. 673-683.
64. Hsu, S.Y. Toxicologic studies of dihydro-5,6-dehydrokawain and 5,6-dehydrokawain / S.Y. Hsu, M.H. Lin, L.C. Lin, C J. Chou // Planta Medica. -1994. Volume 60. - № 1. - P. 88-90.
65. Interview mit Prof. V. Faust. Kava-Kava: Eine Liicke, die keiner wollte // NaturaMed. 2002. - Volume 17. - Issue 9. - 14 s.
66. Jaggy, H. Cepharadione A from Piper methysticum / H. Jaggy, H. Achenbach // Planta Medica. 1992. - Volume 58. -№1. - P. 111'.
67. Jaramillo, M.A. A Phylogeny of the Tropical Genus Piper Using ITS and thei
68. Chloroplast Intron psbJ-petA / M;A. Jaramillo, R. Callejas, C. Davidson, LF. Smith, A.C. Stevens, E.J. Tepe // Systematic Botany. 2008. -Volume 33. - №4: - P. 647-660.
69. Keller, F. A review of the chemistry^ and pharmacology of the constituents of Piper methysticum / F. Keller, M: Klohs // Lloydia. 1963. - Volume. 26. -P. 1-15.
70. Kenyatta, K.S. Anxiolytic effects of kava extract and kavalactones in the chick social separation-stress paradigm / K.S. Kenyatta // Psychopharmacology. -2001.-Volume 155.-P. 86-90.
71. Kishi, Y. The best way to measure the performance of an ICP-MS / Y. Kishi, K. Kawabata // Semiconductor News: Perkin-Elmer Sciex. 2001. -Volume 2. — Issue 1. — P. 4-5.
72. Klepser, T.B. Unsafe and potentially safe herbal therapies / T.B. Klepser, M.E. Klepser // American Journal of Health-System Pharmacy. 1999.
73. Volume 56.-№2.-P. 125-138.
74. Klohs, M.W.F. A chemical and pharmacological investigation of Piper methysticum Forst. / M.W.F. Klohs, F. Keller, R.E. Williams, M.I. Toekes and G.E. Cronheim // Journal of Medicinal and Pharmaceutical Chemistry. -1959.-Volume 1.-№1.-P. 95-103.
75. Kubatova, A. Comparison of subcritical water and organic solvents for extracting^ kava lactones from kava root / A. Kubatova, D.J. Miller, S.B.Hawthorne // Journal of Chromatography A. 2001. - Volume 923. -Issue 2001.-P. 187-194.
76. Kunisaki, J. Micropropagation of (awa (kava, Piper methysticum) / J. Kunisaki, A. Araki and Y. Sagawa // University of Hawai'i at Manoa: Honolulu, HI. — 2003. li p.
77. Lapornik, B. Comparison of extracts prepared from plant by-products by using solvents and extraction time / B. Lapornik, M'. Prosek, A.G. Wondra // Journal' of Food Engineering. 2005. - Volume 71. - P.e 214-222.
78. Lebot, V. Kava, the Pacific elixir / V. Lebot, M. Merlin, L. Lindstrom // New Haven: Yale University Press, New-Haven. CT. 1992. - 255 p.
79. Lebot, V. Morphological, phytochemical, and genetic variation in Hawaiian cultivars of 'awa (kava, Piper methysticum, Piperaceae) / V. Lebot, E. Johnston, Q.Y. Zheng, D. McKern and D.J. McKenna // Economic Botany. 1999. -Volume 53. - №4. - P. 407-418.
80. Lebot, V. The origin and distribution of Kava (Piper methysticum Forst. f., Piperaceae): a phytochemical approach / V. Lebot, J. Ler vesque // Allertonia. -1989. Volume 5. - №2. - P. 223-281.
81. Lembert, E.M. Secular use of kava in Tonga / E.M. Lembert // Quarterly
82. Journal of Studies on Alcohol. 1967. - Volume 28. - №2. - P. 328-341.1121 Leung, N. Acute urinary retention secondary to kava ingestion / N.Leung // Emergency Medicine Australasia. 20041 — Volume 16. — №1. - P. 94.
83. Lewin, L. Über Piper methysticum (Kawa-Kawa) / L. Lewin // Berlin Klinische Wochenschrift. 1886. - Volume 1. - S. 7-10.
84. Loew, D. Quality aspects of traditional? and! industrial kava extracts / D. Loew and G: Franz // Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy &' Phytopharmacology (Jena). 2003. - Volume 10. - P.! 610-612.
85. Lopez-Avila, V. Identification.of Compounds in Commercial Kava Extracts by. Gas Chromatography with Electron Ionization High-Resolution Mass Spectrometry / V. Lopez-Avila, Gi Yefchak // The Open: Analytical- Chemistry Journal. -2009. -№3. P. 22-31.
86. Martin, H.B. Kavain inhibits murine airway smooth muscle contraction / H.B. Martin, W. Stofer, M. Eichinger II Planta Medica. 2000. - Volume 66.1. P. 601-606.
87. Mathews, J.M. Inhibition of human cytochrome P450 activities by kava extract and kavalactones / J.M. Mathews, A.S. Etheridge, S.R. Black // Drug Metabolism and Disposition. 2002. - Volume 30. - Issue 11. - P. 1153-1157.
88. Meseguer, E. Life-threatening parkinsonism induced by kava-kava / E. Meseguer, R. Taboara, V. Sánchez, M.A. Mena, V. Campos, J. Garcia De Yébenes // Movement Disorders. 2002. - Volume 17. - №1. - P. 195-196.
89. Mills, E. Sale of kava-extract in some health food stores / E. Mills, R. Singh, C. Ross, E. Ernst, K. Wilson // Canadian Médical Association Journal. — 2003. -Volume 169.-Issue 11.-P. 1158-1159.
90. Müller, B. Mit Kava behandeln die Wurzel gegen den Streß / B.Müller, R. Komorek // Wiener Medical Wochenschrift. - 1999. - Volume 149. - №8-10.-S. 197-201.
91. Murphy, JM: Preoperative considerations with herbal medicines / J.M. Murphy // American Organization of Registered Nurses Journal; — 1999. — Volume 69. -№1. P. 173-178.
92. Neto, J.T. Eficácia e tolerabilidade do extrato de kava-kava WS 1490 em estados de ansiedade. Estudo multicêntrico brasileiro / J.T. Neto // Revista Brasileira de Medicina. 1999. - Volume 56. - P. 280-284.
93. Norton, S.A. Kava dermopathy / S.A.Norton, P. Ruze // Journal of the American Academy of Dermatology. 1994. - Volume 31.- №1. - P. 89-97.
94. Parkman, C.A. Another FDA warning: Kava supplements / C.A. Parkman // Case Manager. 2002. - Volume 13. - №4. - P. 26-28.
95. Parmar, V.S. Phytochemistry of the genus Piper / V.S. Parmar, S.C.Jain,
96. K.S. Bisht, R. Jain, R. Taneja, A. Jha, O.D. Tuagi, A.K.Prasad, J. Wengel,
97. C.E. Olesen and P.M. Boll // Phytochemistry. 1997. - Volume 46. - №4. -P. 597-673.
98. PDR (The Physicians' Desk Reference) for Herbal Medicines. Herbal monographs. 2004. - 1100 p. ISBN: 978-1-56363-455-4.
99. Perez, J. Altered mental status and ataxia secondary to acute Kava ingestion / J. Perez, J.F. Holmes // Journal of Emergency Medicine. 2005. -Volume 28. -№1. - P. 49-51.
100. Perkin-Elmer SCIEX Instruments ELAN IGP-MS system. The user's guide: Engineering specifications // Perkin-Elmer™ Instruments. 2002'. - 68 p.
101. Prasad, N. The Perils of Unmanaged,Export Growth: The Case of Kava in Fiji /• N. Prasad // 11-12 Dec 2006 UNCTAD Expert Meeting. 2006. - P. 381-394.
102. Prescott, J. Acute effects of kava on measures of cognitive performance,, physiological function and mood / J. Prescott, D. Jamieson, N. Emdur, P. Duffield // Drug and;Alcohol Review. 1993. - Volume 12. - №1. - P. 4958.
103. Rechnitz, G.A. Sensing neuroactive agents in Hawaiian plants / G.A. Rechnitz,
104. D. Coon, C. Babb, A. Ogunseitan, A. Lee // Analytica Chimica Acta. 1997. -Volume 37.-P. 297-303.
105. Scherer, J. Kava-kava extract in anxiety disorders: an outpatient observational study / J. Scherer//Advances in Therapy. 1998. - Volume 15. - №4.- P. 261269:
106. Schulz, H. The quantitative EEG as a screening instrument to identify sedative effects of single doses of plant extracts in comparison with diazepam /
107. H. Schulz, M. Jobert, W.D. Huebner // Phytomedicine. 1998. - Volume 5. -№6.-P. 449-458.
108. Schulze, J. Toxicity of kava pyrones, drug safety and precautions a case study/ J. Schulze, W. Raasch, C.P. Siegers // Phytomedicine. — 2003. -Volume 10. - Supplement 4. - P. 68-73.
109. Seitz, U. Relaxation of evoked contractile activity of isolated guinea-pig ileum by (+/-)-kavain / U. Seitz, A. Ameri, H. Pelzer, J. Gleitz, T. Peters // Planta Medica. 1997. - Volume 63. - №4. - P. 303-306.
110. Seitz, U. 3H.-monoamine uptake inhibition properties of kava. pyrones. / U. Seitz, A. Schule, J. Gleitz // Planta Medica. 1997. - Volume 63. - №6. -P. 548-549.
111. Shad; J.A. Acute hepatitis after ingestion of herbs/ J;A. Shad, C.G. Chinn, O.S. Brann // Southern Medical Journal. 1999. - Volume 92. - Issue 11. -P. 1095-1097.
112. Shao; Y. Reversed-phase High performance Liquid Chromatographic Method for Qualitative Analysis of the Six Major Kavalactones in Piper methysticum / Y. Shao, H. Kan, B. Zheng, Q. Zheng // Journal of Chromatography A. -1998. Volume 825. - P. 1-8.
113. Shulgin, A.T. The narcotic pepper the chemistry and pharmacology of Piper methysticum and related species / A.T. Shulgin // Bulletin on Narcotics. -1973. - Volume 25. - №2. - P. 58-72.
114. Simeoni, P. Identification of factors determining kava lactone content and chemotype in kava (Piper methysticum Forst.) / P. Simeoni; V. Lebot // Biochemical Systematics and Ecology. 2002. - Volume 30. - P. 413-424.
115. Singh, Y.N. Kava: an overview. Distribution, mythology, botany, culture, chemistry and pharmacology of the South Pacific's most revered herb / Y.N. Singh, M. Blumenthal // HerbalGram. 1997. - Volume 39 (Special Review).-P. 33-56.
116. Singh, Y.N. Aqueous kava extracts do not affect liver function tests in rats / Y.N. Singh, A.K. Devkota // Planta Medica. 2003. - Volume 69. - №6.1. P. 496-499.
117. Singh, Y.N. Kava: the genus kava / Y.N. Singh // Taylor & Francis: New York.-2003.-192 p.
118. Singh, Y.N. Kava: from ethnology to pharmacology / Y.N. Singh // CRC Press, Boca Raton: FL. 2004. - 167 p.
119. Singh,Y.N. Therapeutic potential of kavain the treatment of anxiety disorders / Y.N. Singh, N.N. Singh // CNS Drugs. 2002. - Volume 16. - P. 731-743.
120. Smith, R.Mt Kava lactones in Piper methysticum. from Fiji / R.M. Smith // Phytochemistry. 1983. - Volume 22. - P. 1055-1056.
121. Smith, R.M: High-performance liquid chromatography of kava lactones from Piper methysticum / R.M. Smith, H. Thakrar, T.A. Arowolo, A.A. Shafi // Journal of Chromatography. 1984. - Volume 283. - P. 303-308.
122. Spillane, P.K. Neurological manifestations of kava intoxication / P.K. Spillane, D.A. Fisher, B.J. Currie // The Medical journal of Australia. 1997. -Volume 167. -№3. -P. 172-173.
123. Steiner, G.G. The correlation between cancer incidence and kava consumption /
124. G.G. Steiner //Hawaii Medical Journal. 2000. - Volume 59. - Issue 11. -P. 420-422.
125. Stevinson, C. A Systematic Review of the Safety of Kava Extract in the Treatment of Anxiety / C. Stevinson, A. Huntley, E. Ernst // Drug safety. -2002. Volume 25. -№4. - P. 251-261.
126. Stickel, F. Hepatitis induced by Kava (Piper methysticum rhizoma) / F. Stickel,
127. H.M. Baumuller, K. Seitz, D. Vasilakis, G. Seitz, H.K. Seitz, D. Schuppan // Journal of Hepatology. 2003. - Volume 39. - №1. - P. 62-67.
128. Stickel, F. Hepatotoxicity of botanicals / F. Stickel, G. Egerer, H.K. Seitz // Public Health Nutrition. 2000. - Volume 3. - №2. - P. 113-124.
129. Tabudravu, J.N. Anticancer activities of constituents of kava (Piper methysticum) / J.N. Tabudravu, M. Jaspars // The South Pacific Journal of Natural Science. 2005. - Volume 23. - P. 26-29.
130. Tarbah, F. Kinetics of kavain and its metabolites after oral application /
131. F. Tarbah, H. Mahler, B. Kardel, W. Weinmann, D. Hafner and T. Daldrup // Journal of Chromatography B. 2003. - Volume 789. -№1. -P. 115-130.
132. Teschke, R. Kava extracts: safety and risks including rare hepatotoxicity / R. Teschke, W. Gaus, D. Loew // Phytomedicine. 2003. - Volume 10. -Issue 5.-P. 440-446.
133. The Dispensatory of the United States of America Twentieth Edition / Edited by JiP. Remington, H.C. Woods // USA. 1918. - P. 740-743.
134. Thompson, R. Enhanced cognitive performance and cheerful mood by standardized1 extracts of Piper methysticum (Kava-kava), / R. Thompson, W. Ruch; R'.U. Hasenohrl // Human psychopharmacology. — 2004. -Volume 19. -№4i P. 243-250.
135. Thomsen, M. Fatal fulminant hepatic failure induced by a natural therapy containing kava / M. Thomsen, L. Vitetta, M'. Schmidt, A. Sali // The Medical journalof Australia. 2004(. - Volume 180. - №4. - P. 198-199.
136. Uebelhack, R. Inhibition of platelet MAO-B by kava pyrone-enriched extract from Piper methysticum Forster (kava-kava) / R. Uebelhack, L. Franke, H.J. Schewe // Pharmacopsychiatry. 1998. - Volume 31. - №5. - P. 187-192.
137. Unger, M: Inhibition of cytochrome P450 3A4 by extracts and kavalactones of Piper methysticum (Kava-Kava) / M. Unger, U. Holzgrabe, W. Jacobsen, C. Cummins, L.Zi Bennet // Planta Medica. 2002. - Volume 68. - Issue 12. -P. 1055-1058.
138. Waller, D.P. Report on Kava and liver damage / D:P. Waller // Toxicologicalexpertise for the American Herbal Products Association. 2002.
139. Wheatley, D. Kava and valerian in the treatment of stress-induced insomnia / D. Wheatley // Phytotherapy research. 2001. - Volume 15. - №6.< - P: 549551'.
140. Whitton, P.A. Kava lactones and the kava-kava controversy / P.A. Whitton, A. Lau, A. Salisbury, J. Whitehouse and C.S. Evans // Phytochemistry. -2003-. Volume 64. - P. 673-679.
141. Witte, S. Meta-analysis of the efficacy of the acetonic kava-kava extract WS1490 in patients with non-psychotic anxiety disorders / S. Witte, D. Loew, W. Gaus // Phytotherapy research. 2005. - Volume 19. - №3. - P. 183-188'.
142. WHO. Monographs on Selected Medicinal Plants / World Health Organization // WHO: Geneva. 1999. - Volume 2.-358 p.
143. WHO. Trace elements in human nutrition and health / World Health Organization // WHO: Geneva. 1996. - 361 p.
144. Wu, D. Novel compounds from Piper methysticum Forst (Kava Kava) roots and their effect on cyclooxygenase enzyme / D. Wu, M.G. Nair and D.L. DeWitt // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002. - №50. - P. 701-705.
145. Wu, D. Cyclooxygenase enzyme inhibitory compounds with antioxidant activities from Piper methysticum (kava kava) roots / D. Wu, L. Yu, M.G. Nair, D:L. DeWitt, R.S. Ramsewak // Phytomedicine. 2002. - Volume 9. - P. 4147.
146. Xian-guo, H. Electrospray high performance liquid chromatography mass spectrometry in phytochemic alanalysis of kava (Piper methysticum) extract / H. Xian-guo, L. Long-ze, L. Li-zhi // Planta Medica. — 1997. — Volume 63. -P. 70-74.
147. Xuan, T.D. Herbicidal and Fungicidal Activities of Lactones In Kava (Pipermethysticum) / T.D. Xuan, A.A. Elzaawely, M. Fukuta and S. Tawata // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2006. - Volume 54. - №3. - P. 720-725.
148. Xuan, T.D. Identification of potential allelochemicals from Kava (Piper methysticum) root / T.D. Xuan, E. Tsuzuki, H. Terao, M. Matsuo, T.D. Khanh // Allelopathy Journal. 2003. - Volume 12. - №2. - P. 197-204.
149. Young, R.L. Analysis for kawa pyrones in extracts of piper methysticum / R.L. Young, J.W. Hylin, D.L. Plunknett, Y. Kawano and R.T. Nakayama // Phytochemistry. 1966. - Volume 5. - Issue 4. - P. 795-798.
150. N. Prasad / The Perils of Unmanaged Export Growth: The Case of Kava in Fiji // N. Prasad. UNCTAD Expert Meeting, 11-12 Dec 2006, p.381.394.
151. BfArM (Bundesanstalt fur Arzneimittel und Medizinprodukte). Abwehr von Arzneimittelrisiken, Stufe II: Kava-kava (Piper methysticum). Bonn, Germany, 2002, p.22.
152. Протокол от 25.12.2002 № 3/86-2002 (в редакции Дополнения № I, утверждённого Постоянным комитетом по контролю наркотиков, приказом от 22.10.2003 №2/88-2003).с
153. Подписано в печать 07.04.2011 Формат 60*84/16. Набор компьютерный. Бумага ВХИ. Тираж 150 экз. Усл. печ. л 1,3 Заказ № 46/2011.
154. Отпечатано на ризографе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46, тел./факс. 8-901-266-59-37, (342)282-57-92