Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:ИЗУЧЕНИЕ ЧАСТОТЫ И УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ ПРОДОВОЛЬСТВЕННОГО ЗЕРНА КУКУРУЗЫ И ПРОДУКТОВ ЕЕ ПЕРЕРАБОТКИ НЕКОТОРЫМИ ФУЗАРИОТОКСИНАМИ



На правах рукописи

СЕДОВА ИРИНА БОРИСОВНА

ИЗУЧЕНИЕ ЧАСТОТЫ И УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ ПРОДОВОЛЬСТВЕННОГО ЗЕРНА КУКУРУЗЫ И ПРОДУКТОВ ЕЕ ПЕРЕРАБОТКИ НЕКОТОРЫМИ ФУЗАРИОТОКСИНАМИ

14.00.07 —Гигиена

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва — 2005

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте питания Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Кандидат биологических наук

Официальные оппоненты;

Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Доктор биологических наук, профессор

Тутельян Виктор Александрович Львова Лилия Степановна

Капцов Валерий Александрович Малышева Алла Георгиевна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московская медицинская академия имени И.М.Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится «16» июня 2005 г, в 11е5 на заседании Диссертационного Совета Д 001.009.01 в ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А-Н.Сысина Российской академии медицинских наук по адресу: 119992, г. Москва, Погодинская ул., 10/15, строение 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина РАМН

Автореферат разослан «15» мая 2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор биологических наук

Н .Н. Беляева

Актуальность темы

Проблема биобезопасности на современном этапе непосредственно связана с предотвращением попадания в пищевую цепь природных контамннантов биологического происхождения, воздействующих на здоровье человека. Среди наиболее опасных природных загрязнителей пищевых продуктов особое место занимают микотоксины, которые являются продуктами жизнедеятельности повсеместно распространенных микроскопических плесневых грибов, способных поражать пищевые продукты на всех этапах производства, переработки и хранения.

Микотоксины - это высо котокс рпные, высокостабильные соединения, некоторые из которых являются сильными канцерогенами (афлатоксины, охратоксин), большинство из них - иммукодепрессанты. По данным ФАО, более 25% всего производимого в мире зерна контаминировано мнко токсинами [Mannon J., Johnson Е., 1985]. Невозможность полного предотвращения образования токсинов в растительном сырье и попадания их в организм приводит к необходимости организации контроля за уровнем их содержания в продовольственном сырье и пищевых продуктах, а в ряде случаев, введения гигиенических регламентов.

Проведенные исследования показали, что наиболее часто зерно загрязняется микотоксинамн, продуцируемыми грибами рода Fusarium, среди которых наибольшим распространением отличаются дезоксиниваленол (ДОН, вомитоксин) и зеараленон (3JI) [Билай В.II, 1977; Тутельян В,А., Кравченко Л.В., 1985; BhalR. 1999; Miller J.D., 1995; Schuh М, 2001]. В отличие от других микотоксннов, фузариотокснны накапливаются в зерне колосовых культур, пораженных фузариозом колоса в период созревания, и интенсивность их синтеза зависит в значительной степени от климатических и погодных условий. Основным возбудителем фузариоза колоса и продуцентом ДОН и 3JI является Fusarium graminaamm Schwabe [Scott P.M. 1990; Львова JI.C. и др., 1992, 1993, 1994; Parry D.W., et al., 1995]. Исследования, проводимые в ГУ НИИ питания РАМН в течение 16 лет, показали высокую частоту обнаружения микотоксина ДОН, главным образом в зерне пшеницы из СевероКавказского региона, причем в отдельные годы частота выявления ДОН в пшенице в ареалах фузариоза варьировала от 60 до 100% обследованных партий. Помимо ДОН, в фузариозиой пшенице был обнаружен также ЗЛ [Соболев B.C., и др., 1990; Львова Л, С, и др., 1992, 1994; Захарова Л.П. и др., 1994, Кравченко Л.В. и др.. 1998; Tutel у an V.A, etat, 1990;TutelyanV.A., 1998,2004],

Количество идентифицированных фузарнотоксинов постоянно увеличивается. В последнее время особое внимание уделяется фумонизинам. Фумонизины - новый класс микотоксннов, образуемых грибами рода Fusarium. Наиболее часто в природных условиях встречается фумонизин В[ (ФВ|), значительно реже и в меньших

ЦНБ МСХА фонд научной nurenaivruj

количествах * фумоннзины В2 (ФВ2) и ВЛ (ФВД Основными продуцентами этих токсинов являются F. momiijorme Sheldon (сии. F. verticil/hides (Sacc. Nirenberg) (Nelson P.E., et at, 1993, Marasas W.F.O,, 1994], Установлена высокая частота обнаружения фумонизинов в зерне кукурузы и продуктах ее переработки в США, Австралии, в раде стран Европы [Miller J.D., et а],, 1993, Nelson P.E., etal., 5993, Norred W.P, et al., 1999, Thiel P.G., et al., 1993, Turner P.C., et al., 1999].

Фумоннзины обладают выраженными токсическими свойствами. D экспериментах показано, что фумоннзины поражают печень и почки, легкие, поджелудочную железу к центральную нервную систему у разных видов животных. Доказано, что оии также обладают канцерогенным действием на крыс и мышей. Кроме того, эти токсины являются причиной лейкоэкцефаломаляцин у лошадей и отека легких у свиней [Marasas W.F.O., et al., 1984, 1992]. Международное агентство по изучению рака относит фумонизинм к соединениям, вероятно канцерогенным для человека (группа 2В) [IARC 1993, 2002],

Учитывая выраженное токсическое действие фумонизинов и отсутствие каких-либо сведений о возможности загрязнения этими токсинами зерна и продуктов его переработки в Российской Федерации, была сформулирована основная цель этой работы.

Цель и задачи исследования

Цель исследования; изучение возможности загрязнения продовольственного зерна кукурузы и продуктов ее переработки фумонизинами, а также возможности одновременного загрязнения этих продуктов другими фузариотоксинами.

Задачи исследования:

1. Изучить поражен*ость зерна кукурузы и продуктов его переработки F. monitiforme и токсигенный потенциал штаммов, выделенных с отечественного и импортного зерна;

2, Исследовать частоту загрязнения фумонизинамн продовольственного зерна кукурузы и продуктов ее переработки с помощью адаптированного скринннгового нммуноферментного метода;

3, Разработать на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии метод количественного определения содержания ФВ| и ФВг в зерне кукурузы и продуктах ее переработки.

4. Установить частоту и уровни загрязнения продовольственного зерна кукурузы и продуктов ее переработки другими фузариотоксинами - ДОН и ЭЛ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые в России проведен скрининг продовольственного зерна кукурузы на содержание мнкотоксннов фумоннзннов и обнаружена высокая частота загрязнения этими микстоксннами кукурузы продовольственного назначения.

Результаты количественного анализа содержания миштоксинов ФВ, и ФВ2 в отечественном продовольственном зерне кукурузы и основных продуктах его переработки впервые выявили высокую частоту и широкую вариабельность уровней их загрязнения фумонизииами.

На основе системного анализа исследована распространенность Fusarium monitiforme в отечественном зерне кукурузы и установлена высокая токсинообразукицая способность этого вида.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Разработан новый высокочувствительный, селективный, количественный метод определения ФВ1 и ФВг, основанный на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии, позволяющий проводить серийные анализы. На основании результатов работы разработаны «Методические указания но определению фумонизинов В[ и В^ в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» (МУК 4.1,1962-05, М.: Роспотребнадзор России, 2005).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертационной работы доложены на Третьем Симпозиуме «100-летне хроматографии» (Москва, 2003), Первом (Москва, 2003), Втором (Москва, 2004) и Третьем (Москва, 2005) Всероссийских Конгрессах по медицинской микологии.

ПУБЛИКАЦИИ

По результатам работы опубликовано 3 статьи в рецензируемых научных журналах и 17 публикаций в сборниках научных трудов; 1 Методические указания (Роспотребнадзор России, МУК 4,1,1962-05).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования (глава), результаты собственных исследований (3 глав), заключение, выводы, список внедрений в практику и приложения.

Указатель литературы содержит 23 отечественных н 279 зарубежных источников.

Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста, включает 33 таблиц и 10 рисунков.

ПОЛОЖЕНИИ, ВЫНОСИМЫЕ IIA ЗАЩИТУ

• Грибы вида Fusarium momhforine являются основными представителями полевой микофлоры зерна кукурузы, о чем свидетельствует анализ внутренней и поверхностной микофлоры. Все 111 выделенных штаммов F. tnoniiiforme являлись продуцентами фумонизинов.

• Выявлено высокое содержание фумонизинов в зерне кукурузы и основных продуктах ее переработки как скрининге в ым нммуноферментным методом, так и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

» Фумоннзины - приоритетные природные загрязнители зерна кукурузы и продуктов ее переработки по сравнению с другими фузарнотоксннами - ДОН н 3J1,

• Расчет поступления фумонизинов с кукурузой и основными продуктами переработки кукурузы позволяет отнести население, регулярно потребляющее продукты переработки кукурузы, и детей раннего и дошкольного возраста к группе риска.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При исследовании распространенности и токсигекного потенциала F. monitiforme - продуцента фумонизинов, были использованы общепринятые микологические методы.

Поверхностную микофлору определяли в 10 пробах зерна кукурузы и 39 пробах продуктов переработки кукурузы методом посева смывов с измельченных продуктов на агар Чапека и сусло-агар. Идентификацию грибов проводили по Пидоплнченко, Нелсону и др. и Бусу [Пндоплнченко Н.М., 1953; Booth С,, 1971; Nelson P.E., et al., 1983].

Внутренняя микофлора была изучена в 138 пробах зерна ^курузы, в том числе в 138 - отечественного происхождения и в 20 - импортированных из разных стран. Из каждой пробы был произведен посев 100 стерильных зерен кукурузы на поверхность агара Чапека. Посевы культивировали при 25°С в темноте в течение 7-10 сут, после чего проводили количественный учет и определение рода и вида выросших колоний грибов.

Для изучения токснгенного потенциала штаммов грибов F. montUforme из зерна кукурузы урожаев 1999-2002 гг. были выделены 111 нзолятов грибов рода Fusarium и была установлена их видовая принадлежность к виду Fusarium monitiforme Sheldon,. Идентифицированные штаммы культивировали на смеси рисовой и кукурузной крупы (3:1 по весу) в темноте при 25°С в течение 25 сут.

Для определения содержания суммы фумонизинов (ФВ^ФВ^+ФВО в культурах F. mvmti/orme, а также при скрининге за содержанием этих токсинов в зерне кукурузы применяли тест-систему для иммуноферментного анализа (ИФА) Ршшскрин Фаст фумонизнн ("R-Biopharm», Германия) с пределом обнаружения суммы фумонизинов 0,1 - 0,222 мг/кг. При скрининге за содержанием ФВ1+ФВ)+ФВ} 6

в продуктах переработки кукурузы была использована более чувствительная тест-система Ридаскрин Фумонизин Фаст той же фирмы (предел обнаружения - 0,009 мг/кг). Перекрестная чувствительность обеих тест-систем для ФВ|:ФВ2:ФВз составляет 100:40:100%.

При изучении содержания фуэарнотоксннов (фумонизины, ДОН и ЗЛ) объектами исследования являлись пробы продовольственного зерна кукурузы урожаев 2000 - 2003 гг, из Северо-Кавказского региона (Краснодарский край, Ростовская область, Ставропольский край) и поступившие по импорту (Украина, США, КНР, Франция, Венгрия). Пробы для анализа были предоставлены республиканскими, областными и краевыми центрами Госсанэпиднадзора (ЦГСЭН), Российской ассоциацией производителей крахи алопаточной продукции и Государственной хлебной инспекцией при Правительстве РФ. Часть проб поступила нз ГНУ ВНИИЗ РАСХН и его Краснодарского филиала.

Отбор и формирование средней пробы зерна кукурузы, массой не менее 2 кг, проводили по ГОСТ 13586,3—83 от однородных партий, хранящихся на хлебоприемных и перерабатывающих предприятиях.

Объектами исследования являлись также основные продукты переработки кукурузы (крупа, мука), продукты питания на кукурузной основе (консервированная кукуруза, попкорн, кукурузные палочки и колечки), продукты детского питания, содержащие кукурузу, в том числе хлопья, детские каши и леченье. Полученные пробы продуктов переработки кукурузы (отечественного и импортного происхождения) были отобраны согласно ГОСТ 26312,1—84 и ГОСТ 27663—88 на перерабатывающих предприятиях, а также приобретены в сети розничной торговли города Москвы и Московской области.

Количественное определение содержания ФВ| и ФВ2 проводили согласно разработанным нами «Методическим указаниям по определению фумокизинов Bi и Bj в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом ВЭЖХ»*. Система ВЭЖХ, состояла из насоса высокого давления, инжектора типа Rheodyne-7125 (США) с объемом петли-дозатора 20 мкл, спектрофлуори метрического детектора, обеспечивающего возбуждение флуоресценции в спектральной области 330 - 340 им и регистрацию эмиссии флуоресценции при длине волны 440 им и системы для сбора и обработки данных типа Мультнхром (Амперсенд, Россия) или аналогичной, хроматографической колонки (250x4,6 мм), заполненной сорбентом Kromasil CIS (MetaChem Texnologies, СШАХ размер частиц 5 мкм или подобным сорбентом.

* Методические указания разработаны совместно с д.х.н, К.И. Эллером, к.х.н. М.Г, Киселевой, к.б.н. Л,П, Захаровой, академиком РАМН, д.м.н. В.А. Тутельяном,

Определение содержания ДОН и 3JI проводили согласно "Методическим указаниям по обнаружению, идентификации и определению содержания ДОН (вомитоксииа) н зеараленона в зерне и зерно продуктах" [МУК № 5177-90, М.: Минздрав СССР, 1990].

Статистическую обработку полученных данных проводили методами, принятыми в биологии [Лакин Г.Ф., 1980], с использованием компьютерных программ "Excel" ("Microsoft", США) к SPSS 8.0 (Statistical Package for Social Sciences, США),

Статистически обработанные данные представляли в виде медианы и 90% уровня. Средний уровень микотоксинов в исследуемых пробах выражали как М -среднее арифметическое и Sd - среднеквадратичное отклонение (М ± Sd),

Всего в работе проведено 410 анализов содержания ДОН, 410 анализов содержания 3JI и 998 анализов содержания ФВ| и ФВг.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛ ЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Изучение распространенности н токснгенной активности штаммов грибов

Fusarium топШ/огте Изучение распространенности грибов Fusariunt monilifortne

Микробиологический анализ 158 проб зерна урожаев 1999-2002 г.г, показал, что самым распространенным видом во внутренней микофлоре кукурузы является полевой гриб F. muniliforme, который поражал 98% проб отечественного зерна (табл. I), Прочие виды фузариев встречались в единичных случаях. Из грибов хранения значительное распространение получили представители вида Aspergillus flavus -потенциальные продуценты афлатокеннов (86% проб) и мукоровые грибы (84%). В импортированной кукурузе !•'. momliforme и A. flavus встречались реже, чем в отечественной: они поражали S5 и 65% исследованных проб, большее распространение имел ксерофитный вид - Aspergillus glaums. Полученные результаты подтвердили существующее мнение о преимущественной взаимосвязи F. moniliforme с кукурузой [Trigo-Stockli D.M., et al., 1996].

Анализ поверхностной микофлоры был проведен в 10 пробах зерна и 39 пробах проектов переработки кукурузы. Согласно данным, представленным в табл. 2, средняя пораженность грибами отечественного зерна была 56 тыс. КОЕ/г, полевая микофлора кукурузы состояла в основном из F. moniliforme (18,8 тыс, КОЕ/г). Анализ поверхностной микофлоры зерна кукурузы и продуктов ее переработки не выявил отличий по видовому составу от внутренней микофлоры, тем не менее, были установлены различия в соотношении разных групп грибов.

Распространенность основных видов грнбоя во внутренней микофлоре кукурузы урожаев 1999-2002 гг.

Происховдение Количество исследованных проб Количество проб, пораженных грибами, %

Fusarium moniiiforme Aspergillus glaucus Aspergillus flavus Penicillium spp. Mucoraceae spp.

Россия 98 28 $6 64 84

Импорт 20 85 70 65 75 60

Таблица 2.

Поверхностное поражение отечественного зерна кукурузы и проектов его переработки Fusarium moniiiforme и грибами хранения ____ (тыс. КОЕ/г)__

Общее количество Грибы хранения Среднее

Продукт Показатели* Fusarium moniiiforme Aspergillus glaucus Aspergillus flavus Penicillium spp. Mucoraceae spp. содержа! шс ФВ1+ФВ2, мг/кг

М 18,3 53,6 2,1 9,2 20,4 1,9 1,98

Зерно S4 32,7 66,7 3,5 13,1 44,4 2,2

%нроб 100 100 33 100 100 78

М 4,7 6,1 0 0,29 0,92 0,05 0,80

Крупа Sd 8,4 8,4 - 0,38 1,53 0,06

%проб 100 100 0 85 89 70

М 4Д 10,4 0,07 1,0 4,9 0,12 1,09

Мука sd 4,0 7,0 0,09 U 3,1 0,08

%проб 100 100 50 83 100 83

Зародыш кукурузный М Sd %проб 16,2 13,3 100 55,8 25,8 100 0,17 0,29 33 22,2 24,1 100 8,2 4,8 100 1,8 2,4 67 14,7

* М - среднее содержание, Sd - среднеквадратичное отклонение; % лроб-лораженность проб грибами.

F. moniiiforme присутствовал во всех пробах зерна, крупы, муки и зародыша, на его долю приходилось 35,1% от общего числа грибов в зерне, 77,0%- в крупе, 40,4%-в муке и 29,0% - в зародыше (табл. 2), Доминирующей группой грибов в зерне и муке были пенициллы (38,1 и 47,1% от суммы грибов), в крупе преобладал F. moniiiforme и только в зародыше - A. flavtis (39,8%).

В крупе и муке в процессе переработки количество F. moniiiforme сокращалась примерно в 4 раза, в зародыше оставалась на уровне, определяемом в зерне. Крупа являлась наиболее «чистым» продуктом: численность грибов хранения в ней составляла всего 1,4 тыс. КОЕ/г (4,1% от микофлоры зерна). Зародыш по степени зараженности грибами хранение н A. flavin; превышал зерно (116,1 н 241,3%, соответственно), поскольку', ввиду своей высокой питательной ценности и доступности поражался сапрофитными грибами в первую очередь (табл. 2).

Аналогично количеству грибов, в продуктах переработки кукурузы снижалось и суммарное содержание фумонизинов (ФВ,+ФВг) (табл. 2).

Импортированная кукуруза и зернопродукты были значительно слабее обсеменены F moniiiforme и грибами хранения (как и в случае внутренней микофлоры). Если в отечественной кукурузе численность F. moniiiforme составляла в среднем 18,8 тыс. КОЕ/г, то в импортированном зерне - всего 1,4 тыс. КОЕ/г. В крупе и муке разница была еще более заметной (4,2 - 4,7 и 0,03 тыс. КОЕ/г). Таким образом, полученные результаты позволяют сделать следующие выводы:

Гриб F. moniiiforme^ являющийся основным продуцентом фумонизинов, был одним из доминирующих грибов в микофлоре как зерна кукурузы, так и продуктов его переработки. На долю F. moniiiforme в зерне приходилось до 53,6% от общего числа грибов во внутренней микофлоре и до 35,1% • в поверхностной микофлоре. Высокие уровни загрязнения отмечены и в продуктах переработки кукурузы - крупе, муке и зародыше (4,2 - 16,2 тыс, КОЕ/г), что, наряду с накоплением фумонизинов, является дополнительным фактором инвазивной микотнческой инфекции, поскольку F. moniiiforme относится кусловно патогенным грибам.

Изучение токсигеиного потенциала Fusarium moniiiforme При изучении микофлоры зерна кукурузы урожаев 1999-2002 г.г. были выделены в чистые культуры 111 типичных штаммов секции Liseola, которые были идентифицированы по макро- и микроморфологическим признакам как F, moniiiforme Sheldon (табл. 3). Прочие виды секции, упоминаемые зарубежными исследователями как продуценты фумонизинов (/■', proliferatum н др.) нами не были обнаружены.

Токсигенная активность штаммов Fusarium moni!¡forme разного географического происхождения

(данные скрининг-метода)

Географическое Количество Количество % штаммов. Содержанке фумонизинов в

происхождение нее л. токсигениых продуцирующих культуральном субстрате, мг/кг

штаммов штаммов штаммов более 10000 мг/кг Предельные Среднее* Медиана

фумопизмша значения

Северо-Кавказский решен, 103 103 21*4 0,93 - 33000 5320±74S0 178»

в том числе

Краснодарский край 84 84 25,0 1,00 - ЗЗООО 5860+8020 1830

Ставропольский край 11 И 9,1 0,93 -12100 3680±4190 2040

Ростовская область Е 8 0 1,73-6020 2120±2250 1220

Зерно, поступившее по импорту S 8 25,0 14,4-18100 S36Öt7800 2340

ИТОГО 111 111 21,6 0,93 - 33000 532047380 1730

* М - среднее содержание, Sd - среднеквадратичное отклонение

И

Анализ гоксигенной активности F. moniliforme показал, что все исследованные штаммы обладали способностью синтезировать фумонизкны, причем интенсивность их образования варьировала в широких пределах от 0,93 до 33000 мг/кг, а 21,4% штаммов грибов синтезировали более 10000 мг/кг фумонизинов (табл. 3). Большинство исследованных штаммов были выделены из кукурузы, выращенной в Северо-Кавказском регионе; для этих штаммов среднее содержание фумонизинов составило 5360 мг/кг, а величина среднеквадратичного отклонения - 7800 мг/кг.

Следует отметить, что как отечественные штаммы, так и штаммы, выделенные из зерна, полученного по импорту, были токсигашыми в одинаковой степени.

Все исследованные 111 штаммов, отнесенные к виду F. moniliformis были неоднородны ло ряду морфологических признаков: величине и виду колоний, характеру воздушного и субстратного мицелия, способу образования мнкроконидий в цепочках или ложных головках, наличию спороло*ий. Различие культуральных признаков позволило в дальнейшем разделить 86 исследованных по этим показателям штаммов на три типа: мнцелиальный (I), спородохиальный (II) и лионнотальный (III), существенно различающиеся но интенсивности токсинообразования. Наибольшая токе иге иная активность была отмечена у штаммов типа Г, наименьшая - у типа Ш, тип И занимал промежуточное положение. Так, штаммы типов I, 11 и III в среднем накапливали 7460, 1550 и 227 мг/кг фумонизинов соответственно. Более четко различия в токсигеиной активности штаммов заметны при сравнении показателей медиан, которые составили - 5390, 105 и 9 мг/кг.

Таким образом, из полученных результатов можно заключить, что

- во-первых, все изученные штаммы F. moniliforme обладали способностью синтезировать фумоннзины, интенсивность которой варьировала от 0,93 до 33000 мг/кг,

- во-вторых, штаммы из районов с более засушливым прохладным климатом (Ростовская область и Ставропольский край) были менее токсигенными, чем из Краснодарского края. Штаммы, выделенные из кукурузы, полученной по импорту, по уровню токсигенности совпадали со штаммами из Краснодарской популяции.

- в-третьих, ло морфологическим признакам были выделены три типа штаммов F. moniliforme, достоверно различающиеся по токсигенности. Наиболее токсигенным был мнцелиальный тип I, наименее токсигенным - лионнотальный тип III, тип II (спородохиальный) занимал промежуточное положение,

2. Изучение контаминации зерна кукурузы и продуктов ее переработки фумонизинами метолом мммуноферментногф анализа

Скрининг за загрязнением фумонизинами кукурузы и зернолродуктов выявил высокую частоту загрязнения как зерна кукурузы, так и основных продуктов ее

переработки. Более 90% (157 нз 172) исследованных партий зерна кукурузы содержали фумоннзины (ФВ(+ФВг+ФВз) от 0,1 до 63,6 мг/кг (табл. 4). Частота обнаружения фумоннзинов в пробах кукурузной крупы и муки была также очень высока, практически все пробы были загрязнены токсинами, однако уровни загрязнения фумоннзинами были ниже, чем в пробах зерна, н максимальное их содержание не превышало 5,12 мг/кг,

Результаты анализа пищевых продуктов из кукурузы (попкорн, сладкие палочки) показали, что эти продукты реже содержали токсины, в 74% проб были обнаружены фумоннзины. Уровень загрязнения этих проб варьировал от 0,02 до 3,66 мг/кг, среднее содержание фумоннзинов в этих пробах было на уровне загрязнения кукурузных круп (0,78 мг/кг).

Обращает на себя внимание факт обнаружения фумоннзинов в 95% пробах кукурузных хлопьев, часто используемых в питании детей, и в 50% специализированных продуктов детского питания.

Таблица 4.

Скрининг загрязнения зерна кукурузы и продуктов ее переработки фумонизинамн

(ФВ,+ФВ1+ФВ3).

Пробы Количество проб Содержание фумоннзинов в контаминнрованных пробах, мг/кг Среднее содержание фумоннзинов* в пробах, мг/кг

исследовано содержащие фумоннзины

Зерно кукурузы 172 157(91%) 0.10-63,60 2,80±5,73

Крупа 150 148 (99%) 0,02- 5,12 0,77 ±0,97

Мука 12 12(100%) 0,05-4,84 1,01 ±1,36

Кукурузные хлопья 98 93 (95%) 0,01-1,12 0,19±0,24

Продукты, содержащие кукурузу 34 25 (74%) 0,02-3,66 0,78±1,13

Продукты детского питания 22 11 (50%) 0,01-0,78 0,13±0,21

* М - среднее содержание, Б<1 - среднеквадратичное отклонение

Результаты определения содержания фумоннзинов в зерне кукурузы методом ИФА выявили чрезвычайно высокую частоту обнаружения фумоннзинов (ФВ[+ФВ2+ФВ3), как в зерне кукурузы (91%), так и основных продуктах переработки кукурузы - крупе и муке (99-100%). 50% изученных продуктов детского питания содержали эти токсины.

Сухой помол кукурузы обеспечивал заметное снижение средних уровней загрязнения крупы и муки, которые составляли 27,5 и 36,1% по отношению к зерну.

Технологическая обработка при производстве кукурузных хлопьев приводила к дальнейшему существенному снижению концентрации фу монгол нов,

3. Разработка метода количественного определения фумонизиноа В| и Bi в кукурузе и продуктах ее переработки с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии Данные скрининга, показавшие высокую частоту обнаружения фумонизннов, явились основанием для разработки высокоточного, надежного количественного метода определения фумонизннов с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

При разработке метода определения ФВ] и ФВ3 были решены такие задачи, как подбор смеси растворителей, позволяющей селективно извлекать ФВ| и ФВ2 с высоким выходом; подбор условий для проведения очистки экстракта с помощью колоночной хроматографии (иммунио-афинные и С18 - патроны), а также системы растворителей, позволяющей эффективно отделить фумонизины от фоновых примесей; подбор дериватизационных агентов для получения флуоресцирующих производных; разработка условий проведения обрашенмо-фазовую (ОФ) ВЭЖХ для обеспечения достаточного отделения фумонизннов от фоновых компонентов, содержащихся в экстракте зерна кукурузы.

На основании полученных результатов был разработан метод определения фумонизннов, включающий в себя следующие этапы (табл. 5).

Таблица 5.

Основные этапы определения ФВх и ФВ? методом ВЭЖХ.

[ (однокомпонентные смеси)

11 (многокомпонентные смеси)

Экстракция

Лцетонитрил : вода (1:1), 90 мни

Ацетонитрил : метанол : веща (1:1:2),120 мин.

Твердофазная очистка

С-18 патроны Rida CIS, R-Biopharm (Германия),

m=100 мг, d=58 ni, содержание _углерода - 18,5%_

Иммуно-афинные колонки Fumonipiep, R-Biopharm (Германия)

Ппедколо ночная дернватнза Обработка О-фталевым альдегидом + 2-меркаптоэтанолом

ВЭЖХ пппеделение Колонка: Кромаснл С18 или Луна С18 (2) (250*4,6 мм), 5 мкм Подвижная фаза:

Ацетонитрил:метанол:0,08М фосфатный буферный раствор (50:10:40), рН=4,5 Детектирование: Флуориметрическое: >.„, = 335 нм, ^.».^.=440 нм_

В табл. 6 приведены метрологические характеристики разработанного метода ВЭЖХ определения ФВ[ и ФВ3,

Таблица б.

Метрологические характеристики ВЭЖХ метода определения ФВ| и ФВ2.

1 (однокомпоненткые смеси) II (многокомпонентные смеси)

Предел определения

для ФВ| -0,01 мг/кг, для ФВ3 - 0,04 мг/кг для ФВ) -0,01 мг/кг, для ФВ* - 0,04 мг/кг

Средняя степень извлечения

для ФВ, - 89,8% для ФВ1 - 89,5% для ФВ, -84,8%, для ФВ2 - 81.3%

Относительная погрешность измерений

дляФВ] - 7- 13%, для ФВг - 3 - 18% для ФВ, - 8 - 31%, для ФВ2 - 13 - 29%

Сравнение результатов, полученных IIФА и ВЭЖХ методами, выявило, что при использовании ИФА-метода в 6,4% проб были выявлены ложноотриадтсльныс результаты; наблюдались заниженные результаты, особен 1Ю в отношении ФВг (более чем в два раза); показаны завышенные результаты, особенно в отношении ФВ] (до двух раз) и в 57,2% проб данные ИФА превышали данные ВЭЖХ в 1,2-3 раза.

4. Изучение содержания фумонизимов В| и В3 в кукурузе и продуктах ее переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии Изучение содержания ФВ] и ФВ2 в зерне кукурузы и продуктах ее переработки методом ОФ ВЭЖХ подтвердило высокую частоту загрязнения зерна кукурузы и продуктов ее переработки фумонизкнами (табл. 7), Согласно полученным результатам частота загрязнения ФВ| и ФВ2 как зерна (93 и 59%), так и основных продуктов переработки кукурузы - муки (100 и 50%) и крупы (96 и 44%) были самыми высокими по сравнению с прочими продуктами из кукурузы. Среднее содержание и медиана в партиях продовольственного зерна кукурузы составили 1,55 и 0,74 мг/кг для ФВ|, и 0,40 и 0,12 мг/кг для ФВг. Значительные различия в значениях медианы н среднего содержания объясняются тем, что полученные результаты не подчинялись закону нормального распределения, наибольшее количество проб находилось в области низких концентраций. Уровни загрязнения ФВ| и ФВ2 зерна кукурузы в несколько раз превышали уровни загрязнения основных продуктов ее переработки, о чем свидетельствуют величины медианы, 90% уровня, среднее содержание и максимальные уровни загрязнения. Для всех партий зерна и основных продуктов переработки кукурузы наблюдалось превышение содержания ФВ| над ФВз в соотношении 3:1.

Содержание фумоннзинов В1 и Бз продовольственном зерне кукурузы и продуктах ее переработки

Проба Количество проб Фу мо-ннзин Кол-во проб, содержащих фумонизин Содержание фумонизина в коитаминнро-ванных пробах, мг/кг Содержание фумонизина в пробах всего ряда, мг/кг

среднее среднеквадратичное отклонение медиана 90% ур.

Зерно 147 В, 137 (93 %) 0,01 -17,91 1,55 2,35 0,74 4,09

В2 87(59%) 0,04-8,50 0,40 0,85 0,12 1,01

Крупа ПЗ В) 109(96%) 0,03 - 3,99 0,49 0,59 0,25 1,25

в2 50 (44%) 0,04-0,76 0,09 0,17 0 0,33

Мука 10 в, 10(100%) 0,07-1,77 0,61 0,54 0,45 1,16

вг 5 (50%) 0,04-0,23 0,10 0,14 0,02 0,22

Прочие* 10 В] 6 (60%) 0,01-0,05 0,013 0,018 0,010 0,04

В: 0 (0%) 0 0 0 0 0

Хлопья 64 В[ 39(61%) 0,01-0,40 0,049 0,083 0,010 0,170

В2 6(9%) 0,04-0,06 0,004 0,013 0 0

Детское питание 55 В] 25 (45%) 0,01-0,16 0,025 0,040 0 0,085

Вг 0 0 0 0 0

* - Консервированные кукурузные продукты, палочки, тортилы 16

Обращает на себя внимание факт высокой частоты загрязнения фумонизинами продуктов детского литания, но уровни загрязнения этих продуктов были значительно ниже, чем в кукурузной крупе и муке, ФВ[ был обнаружен в 45% продуктов детского питания для детей до 3 лет в количестве от 0,01 до 0,16 мг/кг при средней концентрации ФВ| - 0,025 мг/кг; ФВ2 в этих пробах обнаружен не был. 61% проб кукурузных хлопьев были загрязнены ФВ| в концентрациях от 0,01 до 0,40 мг/кг; в 11% случаев они содержали ФВг- от 0,04 до 0,06 мг/кг.

Уровни загрязнения консервированных продуктов из кукурузы (от 0,01 до 0,05 мг/кг) и продуктов детского питания были значительно ниже уровней загрязнения основных продуктов переработки кукурузы (табл. 7).

Заслуживает внимания факт установления более низкого уровня загрязнения фумонизинами генетически модифицированного зерна кукурузы (устойчивого к вредителям (кукурузному мотыльку) и/нди к глмфосату, н к глюфосииату аммония) по сравнению с кукурузой, выращенной с применением традиционных технологий. Это связано с тем, что в большинстве случаев, благодаря приобретенной устойчивости кукурузы к вредителям и гербицидам ослабляется поражение зерна микроскопическими грибами рода УихагШт и, следовательно, загрязнение продуцируемыми ими фумонизинами.

5, Изучение содержания ДОН м XI в кукурузе н продуктах ее переработки.

Изучение содержания фузариотоксинов дезоксинивалекола (ДОН) и зеараленона (ЗЛ) в зерне кукурузы и продуктах сс переработки показало, что эти токсины присутствовали лишь в единичных партиях зерна кукурузы в низких концентрациях: ДОН в 2,3% исследованных партий от 0,05 до 0,40 мг/кг, ЗЛ - в 3,2% партий - от 0,05 до 0,11 мг/кг. 1Ги одна из исследованных проб продуктов переработки кукурузы не содержала ДОН и ЗЛ, В 2,7% партий зерна кукурузы наряду с фумонизинами был обнаружен ДОН, еще 2,7% наряду с фумонизинами содержали ЗЛ; 0,7% исследованных партий содержали все четыре фузариотоксина (ФВ,, ФВг, ДОН и ЗЛ).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что как природные контамиианты фумоннзины имеют первостепенное значение по сравнению с другими фузариотоксинами.

6. Расчет суточной нагрузки фуьшнизмнамн И] к (¡¿из население России

С целью оценки риска, связанного с употреблением загрязненных фумонизинами пищевых продуктов из кукурузы проведен расчет возможной нагрузки фумонизинами на человека в среднем по России, для регулярных потребителей продуктов переработки кукурузы, а также для детей (табл. 8).

Таблица 8

Расчетные уровни потребления ФВ1+ФВ1 разными возрастными группами населения

Расчетное Среднее Расчетный

Группа риска потребление продуктов из содержание ФВ,+ФВг уровень потребления % от ПСП*

кукурузы, г/сут в продуктах, мг/кг ФВ]+ФВ2 в сутки, мкг/кг массы тела

Взрослые

В среднем по Крупа - 0,46 0,58 0,0045 0,225

России Мука - 0,02 0,71 0,0002 0,010

Прочие - 0,48 0,013 0,0001 сумма 0,0048 0,005 0,240

Регулярные Крупа - 47,8 0,58 0,46 23,0

потребители Мука - 95,7 0,71 1,13 56,5

(0,03 - 1,45% Прочие - 44,5 0,013 0,01 0,5

обследованного

населения)

Дети раннего

возраста (до 3 лет)

5 - 12 мес. Продукты

прикорма - 40 0,025 0,13-0,10 6,5-5,0

1,5 - 3 года Крупа - 25 0,58 1,29- 1,01 64,5 - 50,5

Дети

дошкольного

возраста

3 - 6 лет Крупа - 40 0,58 1,62-1,15 81,0-57,5

* - ПСП фумонизинов - 2 мкг/кг массы тела

На основании данных по потреблению кукурузы и продуктов ее переработки в среднем по России и собственных результатов анализов фумонизинов была рассчитана суточная нагрузка ФВ^ФВ^ на человека*.

* Данные по среднесуточному потреблению продуктов переработки кукурузы предоставлены Лабораторией по изучению и планированию структуры питания населения Г*У НИИ питания РАМН (руководитель лаборатории д.м.н. Батурин А.К.).

Учитывая, что за период с 2000 по 2003 г,г, среднее потребление кукурузной крупы - 0,46 г/сут., муки - 0,02 г/рут. н прочих продуктов из кукурузы - 0,48 г/сут., расчетное суточное потребление фумонизинов населением России с этими продуктами составляет 0,0048 мкг/кг массы тела в сучки, что соответствует 0,24% от рекомендованного комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам ОЕСРА) переносимого суточного потребления (ПСП) фумонизинов - 2 мкг/кг.

Согласно эпидемиологическим исследованиям только 0,79% обследованного населения России в среднем за суткн потребляют 47,8 г кукурузной крупы; 0,03% -95,7 г кукурузной муки и 1,4% - 44,5 г прочих кукурузных продуктов. Исходя из данных по загрязнению этих продуктов фумонизинами, была рассчитана суточная нагрузка ФВ|+ФВ2 на человека. Для лиц, регулярно потребляющих кукурузную крупу, она составила 0,46 мкг/кг массы тела в сутки, кукурузную муку - 1,13 мкг/кг массы тела и другие кукурузные продукты - 0,01 мкг/кг массы тела, что соответствует 23,56,5 и 0,5% от ГГСГТ ФВ[+ФВ2 (табл. 8). Следует отметить, что не было установлено превышения величины ПСП фумонизинов ни для одной из рассмотренных групп взрослого населения.

Расчет нагрузки ФЕ^+ФВз на детей был произведен, основываясь на допущении, что дети раннего возраста (от 5 до 12 месяцев), могут потреблять в качестве прикорма ежедневно по 40 г специализированного детского питания. В этом случае нагрузка фумонизинами может составить от 0,10 до 0,13 мкг/кг массы тела в сутки, или 5 * 6,5% от ПСП фумонизинов (2 мкг/кг массы тела).

Исходя из того, что дети раннего (от 1,5 до 3 лет), н дошкольного возраста могут потреблять ежедневно по 25 и 40 г кукурузной крупы соответственно, был произведен расчет суточной нагрузки ФВ|+ФВг на детей этих возрастных групп. Эта величина высока для детей в возрасте от 1,5 до 3 лет, - 1,01 - 1,29 мкг/кг массы тела в сутки, что соответствует 50,5 - 64,5% от величины ПСП фумонизинов. Наибольшая суточная нагрузка фумонизинами приходится на детей дошкольного возраста - от 1,15 до 1,6 мкг/кг массы тела в сутки, т.е. от 57,5 до 81,0% от величины ПСП фумонизинов.

Получен ные величины суточной нагрузки фумонизинами на детей значительно выше суточной нагрузки фумонизинами на взрослое население России в целом. Это позволяет отнести детей и группу населения, ре1улярно потребляющую продукты переработки кукурузы (0,03 - 1,45% от обследованного населения), к группе риска.

выводы

1. Впервые в Российской Федерации проведен анализ загрязнения фумонизинамн зерна кукурузы и продуктов ее переработки с использованием методов иммуноферменггного анализа и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Установлено, что более 90% исследованных партий зерна кукурузы и основных продуктов ее переработки загрязнено фумонизинами.

2. Показано, что Fusarium moniliforme является основным доминирующим грибом зерна кукурузы и продуктов ее переработки. Анализ внутренней микофлоры зерна кукурузы выявил загрязнение F. montUforme в 97 - 100% проб отечественного зерна. В поверхностной микофлоре зерна кукурузы и основных продуктах ее переработки микроскопические грибы F. moniliforme составили 35,1% от общего числа грибов в зерне кукурузы,

3. Установлено, что все 111 исследованных штаммов F. moniliforme являются продуцентами фумонизинов, причем 21,6 • 25% из них относятся к высокотоксигенным, Показано, что токсигенная активность F. moniliforme находится в четкой зависимости от морфотипов: она максимальна у высоком ииелиалькых и минимальна у безмицелиальньга морфотипов.

4. Разработан высокочувствительный, селективный метод количественного определения фумонизинов В] и Bj с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в зерне кукурузы и продуктах ее переработки с пределом обнаружения * 0,01 иг/кг для ФВ, и 0,04 мг/кг для ФВг; относительным стандартным отклонением - 0,06 и 0,08; и степенью извлечения - 89,8 и 89,5 % соответственно.

5. Методом ВЭЖХ выявлены чрезвычайно высокие уровни загрязнения зерна кукурузы ФВ] (до 17,91 мг/кг, средняя концентрация - 1,55 ыг/кг); ФВг - (до 8,5 мг/кг, средняя концентрация - 0,40 мг/кг). Установлено, что уровни загрязнения основных продуктов переработки кукурузы - муки и крупы, в 3 - 5 раз ниже уровней загрязнения зерна (от 0,03 до 3,99 мг/кг) ФВ1 и (от 0,04 до 0,76 мг/кг) ФВг.45% продуктов детского питания с включением кукурузы содержали ФВ] в концентрациях от 0,01 до0,16мг/кг(среднеесодержание-0,025 мг/кг).

6. Установлено, что в качестве природных контаминантов кукурузы и продуктов ее

переработки фумонизины имеют первостепенное значение по сравнению с другими фузариотоксинами - ДОН и ЗЛ, которые обнаружены в единичных партиях зерна кукурузы в низких концентрациях, В 2,3% партий зерна кукурузы наряду с ДОН обнаружены ФВ( и ФВ3; еще 2,3% партий зерна одновременно содержали ЗЛ, ФВ( и ФВ2. Только 0,7% партий кукурузы содержали одновременно все анализируемые фузариотоксины (ДОН, ЗЛ, ФВ( и ФВг).

7. Расчет нагрузки фумо низинам и В] и В2 на население России показал, что в среднем по России суточное потребление ФВ,+ФВ2 (по данным потребления продуктов переработки кукурузы за 2000-2003 г.г.) составило 0,0048 мкг/кг массы тела (0,24% от величины ПСП); для постоянных потребителей (от 0,03 до 1,45 % обследованного населения) - от 0,01 до 1,13 мкг/кг массы тела (0,5 - 56,5 % от величины ПСП); для детей до года - от 0,10 до 0,13 мкг/кг массы тела (5 -6,5% от величины ПСП); для детей старше года - от 1,01 до 1,60 мкг/кг массы тела (50,5 - 81,0% от величины ПСП фумонизинов), что позволяет отнести постоянных потребителей кукурузы н детей к группе риска.

Внедрение о практику

1. «Методические указания по определению фумонизинов В| и B¡ в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» (МУК 4.1.1962-05). М,: Роспотребнадзор, 2005, 17 с. / Академик РАМН, профессор В.А. Тутельян, д.х.н. К.И. Эллер, к.х.н. М.Г Киселева., к.б.н. Л.П. Захарова, И Б. Седова /.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Oóo.ibCKtiii О.Л., Захарова Л. П.. Седова /ЛЯ Фузариотоксины -контаминанты продовольственного сырья и пищевых продуктов. Н Материалы IV Всероссийской конференции «Здоровое питание; воспитание, образование, реклама». - Москва, 2001. - С. 143- 144.

2. Седова ПЛ., Львова Л.С. Фузариотоксины как контаминанты продовольственного зерна кукурузы, // Сборник докладов IV научно-практической конференции «Реализация федерального закона «О качестве и безопасности пищевых продуктов» от 02.01.2000 г. № 29-ФЗ». - Омск, 2001. - С. 129- 132.

3. Львова Л.С., Седова ИМ., Ремем В. tí., Килленко ОЛ. фумоннзины -новые мнкотокенны грибов рода Fusarium и связанные с ними вопросы гигиенической безопасности зерна кукурузы. // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 10-летию Независимости Республики Казахстан». - г, Астана, 2001 г. - С. 83 - 85,

4. Тупшьян ¡i.A., Захарова Л.П., Огюльскчй О.Л. Седова U.R. Результаты мониторинга за загрязнением продовольственного сырья фузариотоксинами. // Научные труды Федерального цешра гигиены им. Ф.Ф.Эри с мана «Вопросы обеспечения санэпидблагополучия населения в центральных регионах России». -Воронеж; Минздрав России, 2002. - Вып. 6, - С. 668-670,

5. Захорони Л.П., Седова //,/>., Обольскии О.Л. фузариотоксины в продовольственном зерне и продуктах его переработки. // Материалы пленума Межведомственного научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды Российской Федерации. - Москва, 2002, - С, 94 - 96,

6, Львова Jl.CСедова И,Б., Кизленко 0-И., Тутельян В.А. Образование фумонизинов штаммами Fusarium moniltforme, выделенными из зерна кукурузы. // Прикладная биохимия и микробиология. - 2003, - Т, 39, № 2. - С. 222 - 227.

7, Sedova I.B., Kiseteva M.G. HPLC determination of fumonisins in maize, // Int. Symposium on Separation in BioSciencies «100 years of chromatography». -Moscow, 2003. - P, 338.

S. Седова U.K. Захарова JIM., Львова Jl.C., Кизяеико О.И., Киселева М.Г, Фумонизины - природные загрязнители продовольственного зерна кукурузы и продуктов ее переработки, // Материалы VII Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». - Москва, 2003. - С, 467 - 468,

9. Седова И.Б. Изучение частоты и уровня загрязнения пищевых продуктов микотоксинами Fusarium moniliforme - фумоиизинами. И Материалы научной

• конференции «Теоретические основы н практические решения проблем санитарной охраны атмосферного воздуха» и конференция молодых ученых «Развитие научного творчества молодежи - объект постоянного внимания В.А. Рязанова». -Москва, 2003. - С, 319 -351.

10. ЛьвоваЛ.С., Седова И.Б., Кизленко О.И. Безопасность зерна и продуктов его переработки. Основные микробиологические показатели и факторы, их регулирующие, // Сборник трудов «Развитие научных идей академика Петра Ивановича Лисицына». • Москва, 2003, - С. 233-243.

11. Захарова Л.П,, Обальский О.Л., Седова И.Б. Фузарнотоксины в продовольственном зерне и продуктах его переработки. // «Гигиена и санитария» -2003.-С. 51-52.

12. Львова Л.С., Кизленко О.И., Седова И.Б., Захарова Л.П. Деконтаминация и обеззараживание зернопродуктов в процессе переработки зерна, загрязненного микотоксинами. // Материалы Второго Всероссийского конгресса по медицинской микологии. - Москва, 2004. - Т. 3. - С. 276 - 278,

13. Седова ИМ., Захарова Л.П., Львова Л.С., Кизленко О.И. Синтез фумонизинов грибами Fusarium moniíiforme при хранении сырой кукурузы. // Материалы Второго Всероссийского конгресса по медицинской микологии -Москва, 2004. - Т. 3. - С. 291 - 292.

14. Седова И.Б, Киселева М.Г., Сафронова AM. Оценка риска, связанного с фумоиизинами в lyjtyj^ae и проектах ее переработки. // Материалы Второго Всероссийского конгресса по медицинской микологии-Москва, 2004.-Т. 3,—С. 293 - 295,

15. Захарова Л.П., Седова И.В., Тутельян В-А. Дезоксиниваленол — контаминант продовольственного зерна. // Материалы Второго Всероссийского конгресса по медицинской микологии, - Москва, 2004. - Т, 3. - С. 298 - 300.

16. Седова И.Б., Киселева M.F., Захарова Л.П., Эялер К.И., Тутельян В.А. Оптимизация условий определения фумонизинов Bt и Bj в кукурузе и продуктах ее

переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журнал аналитической химии,- 2004, -Т, 59,№8, - С. 819-825.

17. Львова Л.С., Кизленко О.И., Захарова Л,П., Седова И,Б. Микотоксины и проблема безопасности зерна и зерно продукте в !! Материалы Второй Международной конференции Зерновая индустрия в XX! веке, - Москва, 2004, - С, 151 - 153.

18. Седова U.U., Львова Л.С., Захарова Л,П., Кизленко ОН., Киселева И. F., Тутелиян В. А. Загрязнение зерна кукурузы и продуктов ее переработки фумонизинами - микотокеннами гриба Fusarium momlifurme. // Материалы Международной научно-практической конференции «Национальная политика здорового питания Республики Казахстан». - г, Алматы, 2004 г. - С, 197 — 201.

19. Львова Л.С., Кириенко О.П., Седова U.U., Захарова Л.П., Киселева М.Г., Тутельян ßj4. Загрязнение зерна и продуктов переработки кукурузы фумонизинами - микотоксинами Fusarium moniliformc. // Материалы Научно-практической конференции «Качество н безопасность сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов», - г. Углич, 2004 г - Часть 1. - С. 236-239.

20. Седова И.В., Захарма Л.П., Киселева AÍ Л, Львова ЛС. Изучение загрязненности зерна кукурузы и продуктов ее переработки фузариотоксинами. // Материалы Третьего Всероссийского конгресса по Медицинской Микологии, -Москва, 2005 г, - Т. 5. — С, 153- 156,

21. Львова Л.С., Кизленко О.Н., Cctí/мш U.U., Захарова Л. П. Изучение микофлоры зерна кукурузы и продуктов ее переработки. И Материалы Третьего Всероссийского конгресса по Медицинской Микологии, - Москва. 2005 г. - Т. 5. - С. 141 -143.

22. «Методические указания по определению фумонизннов В| и Di i кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» (МУК 4.1.1962-05). М.: Роспотребнадзор, 2005, 17 с. / Академик РАМН, профессор В.А. Тутельян, д.х.н. К.И. Эллср, к.х.н. М.Г Киселева., к.б.н. Л.П. Захарова, И.Б. Седова/.

Заказ №793 Подписано я печать 13.05.05 Тираж 130 экз. Усл. п.л, 1

ООО "Цифровичок", тел. (095) 797-75-76 www.cfr.ru