Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

Аксенов, Илья Владимирович

Диссертации по медицине → Гигиена

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Аксенов, Илья Владимирович Москва 2006 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.07

Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

На правах рукописи

АКСЁНОВ ИЛЬЯ ВЛАДИМИРОВИЧ

ОЦЕНКА РИСКА ЗАГРЯЗНЕНИЯ ОХРАТОКСИНОМ А ПРОДОВОЛЬСТВЕННОГО СЫРЬЯ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

14.00.07 — гигиена

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

Москва — 2006

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательский институт питания Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН

Тутельян Виктор Александрович

Доктор химических, наук

Эллер Константин Исаакович

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН

Капцов Валерий Александрович

Доктор медицинских наук, профессор

Истомин Александр Викторович

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН

Зашита состоится «23» октября 2006 г. в 14е2 на заседании Диссертационного совета Д 001.002.01 в ГУ НИИ питания РАМН по адресу: 109240, г. Москва, Устьинский проезд, д. 2/14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ питания РАМН Автореферат разослан «20» сентября 2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор " ' 1 В.М. Кодеицова

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Обеспечение безопасности пищевых продуктов относится к важнейшим приоритетам здорового питания. Среди контаминантов пиши одними из наиболее опасных дня здоровья признаны вторичные метаболиты микроскопических (плесневых) грибов - мккотоксины, обладакадче широким спектром токсического действия. Наибольший риск для здоровья связан с хроническим поступлением малых количеств МНК0ГОКСИКОВ с пищевыми продуктами [Саркисов А.Х., 1954; Еилай В.И., 1977; Покровский А.А. и Др., 1977; Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985; Kuiper-Goodman, Т., 19981-

Одним из наиболее распространенных микотокеннов является охратоксин А, продуцируемый плесневыми грибами родов PetuciU'mm и Aspergillus. Доказанным считается нефротокснческое, канцерогенное, а также тератогененное, здбркотокеи ческое, иммунотоксическое и нейротсксическое действие охратоксина A [Krogh P., 1978; Воогтпая G.A., 1989; Beimandi A. et aJ., 1998, 1999; Wangikar Р.В. et aj., 2005; AUAnati L„ Pelzinger E^ 20061. Токсин рассматривается в качестве одного из этиологических факторов Балканской эндемической нефропатии - тяжелого почечного заболевания, регистрируемого в некоторых восточноевропейских странах. Сходные по клиническим проявлениям заболевания описаны также в Егитге н Тунисе [Krogh Р., 1974; Maaroufi К. et al., W5; Sieyn P.S., 1995; Wafe E.W. et at., 1998; Abid S. et at., 2003]. Международным агентством по изучению рака (IARC) охратокенн А отнесен к веществам, возможно канцерогенным для человека (труппа 2В) {IARC, 1993]. Исходя из токсических свойств охратоксина А было установлено условно переносимое суточное поступление токсина, равное Инг/кг массы тела [JECFA, 2001].

I имен» К.А. Тимирязева t | ЦН& имени Н-И. Желеаном | 3

Фонд ^^

были введены нормативы на содержание охратоксина А в пищевых продуктах: в продовольственном зерне - не более 5 мкг/кг [Codex AÜmeniarius Commission, 2004; Commission Regulation (EC), 2005], в продуктах детского питания - 0,5 мкг/кг [Commission Regulation (ЕС), 2005]. Поступление охратоксина А с рашюном подтверждается прямым определением мнкотокснна в плазме кров« fZimmer!i В., Dick R., 1995; Scott P.M. et al„ I99S; Thuvander A. ei al, 2001; Task 3.2.7,2002; Skaug M.A., 2003J.

Необходимым элементом системы контроля контаминации охратоксином А пищевых продуктов является эффективная методическая база. Основными методами анализа микотоксина являются подходы, использующие высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). Несмотря на явные преимущества ВЭЖХ перед другими методами (тонкослойная хроматография, имму кофермеигн ый аналнз) предложенные варианты ВЭЖХ анализа охратоксина А требуют дальнейшего совершенствования (повышение чувствительности, селективности, степени извлечения, уменьшение расхода растворителей и др.) {MPÄ3245-85, Минздрав СССР, 1985; Эллер К.И. и др., 2006; Kuhn I. et al., 1995; Hurst W.J., Martin R.A. Jr., 1998; Visconti A. et al., 1999, 2000; Pascale M„ Visconti A., 2001; LeStoer et at, 2002; Shephard G,S. et a[., 2003; Monaci L. et al., 2004], Исходя из этого были определены следующие иель И задачи настоящей работы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель исследования: оценить риск для здоровья населения РФ загрязнения охрагокенном А продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Задач» исследования:

1. Оптимизировать основанные на ВЭЖХ методы обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови.

2. Изучить содержание охратоксина А в продовольственном зерне, а также в продуктах детского питания и плазме крови.

3. Рассчитать нагрузку охратоксином А на население РФ и оценить риск для здоровья, связанный с загрязнением данным млютоксином продовольственного зерна н продуктов детского питания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Предложены новые методы обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови, особенностью которых является прменение ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием и селективной

мм му ноаффин ной очистки экстракта. Методы характеризуются надежностью и высокими параметрами - предел обнаружения 0,20 мкг/кг для пищевых продуктов и 0,05 мкг/л для плазмы крови; относительное стандартное отклонение 9-14%; степень извлечения 88 -96%.

Впервые в РФ с использованием ВЭЖХ проведен анализ контаминации охратохсином А отечественного продовольственного зерна из основных регионов его производства. Охратоксин Л был обнаружен в 13,8% проб продовольственного зерна урожая 2003 и 2004 гг. в диапазоне концентраций от 0,2 до 33,3 мкг/кг (медиана - 1,3 мкг/кг; 90%-ый процентиль - 10,6 мкг/кг). При этом наиболее часто охратоксин А выявляли в зерне ржи (19 из 56 образцов) и ячменя (8 из 50 образцов). Наиболее высокий средний уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

Установлена высокая частота контаминации охратоксином А специализированных продуктов детского питания на зерновой основе как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охратоксин А в диапазоне концентраций от 0,2 до 1,2 мкг/кг (медиана • 0,5 мкг/кг; 90-ый процентнль — 1,2 мкг/кг). Наиболее часто охратоксином А (4 из 12 образцов) были контаминированы продукты детского питания, содержащие в качестве компонента овсяну ю муку. Самая высокая средняя концентрация охратоксина А (0,840,5 мкг/кг) была обнаружена в продуктах прикорма на мультизерновой основе.

Впервые изучено содержание охратоксина А в крови случайной выборки населения РФ. Охратоксин А был обнаружен во всех изученных образцах плазмы крови в диапазоне концентраций от 0,4 до 7,4 мкг/л (медиана 1,4 мкг/л; 90-ый проиентиль - 2,4 мкг/л), что свидетельствует о постоянном поступлении микотоксина с рационом.

На основании полученных данных о частоте и уровнях контаминации охратоксином А зерновых продуктов и с учетом структуры питания населения РФ рассчитано вероятное суточное поступление токсина, которое составило 2,7 нг/кг массы тела. Для детей первого года жизни расчетное суточное поступление охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе составило 1,5 нг/кг массы тела. При расчете суточной нагрузки охратоксином А, проведенной на основе данных его прямого определения в плазме крови, величина суточного поступления составила 3,0 нг/кг массы тела.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

1. Разработаны методические указания «Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в зерне и зернопродукгах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии». М: Роспотребнаазор, 2006 (в печати).

2. Разработан допустимый уровень содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеннцы, ржи, ячменя и овса - 5 мкг/кг. Дополнение к СанПиН 2.3,2,1078-01 - М: Роспотребнадзор, 2006 (в печати).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на Третьем (Москва, 2005) и Четвертом (Москва, 2006) всероссийских конгрессах по медицинской микологии, на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда н здоровье» (Суздаль, 2005) а также на Восьмом всероссийском конгрессе «Оптимальное питание-здоровье нации» (Москва, 2005).

ПУБЛИКАЦИИ

По результатам работы опубликованы 3 статьи в научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ, и 7 публикаций в сборниках научных трудов.

ОБЪЕМ Н СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, трех глав Экспериментальной части, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 7 рисунков. Список литературы включает 250 источников, из которых 238 - иностранных авторов,

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Образцы продовольственного зерна были предоставлены для исследования республиканскими, областными и краевыми центрами Госсанэпиднадзора. Отбор средних проб зерна проводился согласно ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб» от однородных партий, хранящихся на хлебоприемных предприятиях. Всего было исследовано 282 средние пробы наиболее потребляемых видов зерна урожая 2003 и 2004 гг. из районов РФ, являющихся по данным Государственной хлебной инспекции при Правительстве РФ основными их производителями: 126 проб пшеницы, 56 - ржи, 50 -ячменя и 50 — овса.

Образцы детского питания были предоставлены для анализа Отделом детского питания ГУ НИИ питания РАМН. Всего было исследовано 54 образца продуктов прикорма на зерновой основе (каши): 20 проб — на мультизерковой (два и более злака) основе, 12 —на основе овса, 10 —кукурузы, 6 —рисаи 6 —пшеницы,

50 образцов плазмы крови были отобраны в 2005 и 2006 гг. у пациентов отделений сердечно-сосудистой патологии (30 образцов) и гастроэнтерологии (20 образцов) Клиники 6

лечебного питания ГУ НИИ питания РАМН, постоянно проживающих в Москве и Московской области: 11 образцов - у мужчин, 39-у женщин.

В ходе работы были воспроизведены три метода ВЭЖХ анализа охратоксина А в пищевых продуктах [Levi С.Р., 1975; ICC №165, 1996; Ochiaprep, 2003] и два метода - в плазме крови [Zimmerli В., Dick R,, 1993; Miraglia М. et al., 1998]. При подтверждении содержания охратоксина А в образце были использованы литературные данные по масспектрометрическому анализу микогоксина [Shephard G.S. et al,, 2003; Lindenmeier M, et al,, 2004], а также по образованию и идентификации метилового эфира охратоксина А [Nesheim S, et al., 19925.

В ходе анализа охратоксина А применяли б идиетиллиро ванную воду и реагенты марки чЧДА», «ОСЧ» и «ХЧ», Для твердофазной экстракции использовали иммуноаффинные колонки OCHRAPREP и фосфатный буферный раствор (рН=7,3) фирмы R-BIOFARM (Великобритания).

С учетом того, что распределение полученных результатов не являлось нормальным (гауссовским) статистически обработанные данные по содержанию охратоксина А в контаминированных образцах представляли в виде среднего арифметического (М), медианы (Me), стандартного отклонения (Sd) и 90%-го процентиля (90%).

При расчете поступления охратоксина А с рационом средний уровень контаминации микотоксином зерновых продуктов рассчитывали как среднее арифметическое среди всех изученных образцов. При этом, учитывая рекомендации ВОЗ, содержание охратоксина А в пробах с концентрацией токсина ниже предела обнаружения (ПО) метода принимали равным половине ПО, если количество данных проб было < 60% от общего числа проб, или считали равным ПО, если количество этих проб было > 60% [GEMS/FOOD, 2003].

Расчет нагрузки охратоксином А с зерновыми продуктами проводили по следующей формуле: Н = (ОТАс • ПУМТ, где Н - величина суточной нагрузки (нг/кг массы тела); OTAj — средний уровень контаминации охратоксином А зернопродуктов (нг/г); П - потребление зернопродуктов на душу населения в сутки (г); МТ - принятое в РФ значение средней массы тела человека (кг). Потери охратоксина А в процессе производства готовых к употреблению зерновых продуктов были условно приняты равными кулю.

При расчете вероятного суточного поступления охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе (каши) было использовано рассчитанное с учетом указаний

ВОЗ максимальное значение среднего уровня контаминации токсином каш, рекомендованных для данного возраста [МУ № 225, 1999; СанПиН 2.3.2.1940-05,2005].

Расчет нагрузки охратоксином А по его содержанию в плазме крови проводили согласно формуле [Miraglia М. et al., 1996J: Н «= 1,97 ■ ОТАс, где Н - величина суточной нагрузки (нг/кг массы тела); 1,97 — коэффициент, рассчитанный с учетом биодоступности охратоксина А и величины почечного клиренса; ОТАс - среднее содержание охратоксина А в плазме крови (мкг/л).

Расчет коэффициента опасности проводили по формуле [Руководство, 2004J: HQ = AD/RfD, где HQ — коэффициент опасности; AD - средняя доза; RfD - референтная (безопасная) доза,

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Разработка методов обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови

В предварительной серии экспериментов были проведены сравнительные исследования трех схем ВЭЖХ определения охратоксина А в пищевых продуктах (Levi С.Р., 1975; ICC №165, 1996; Ochraprep, 2003J. При этом на этапе экстракции наибольшее извлечение токсина из образца отмечали при использовании смеси аиетонитрнл-вода (6:4) (табл. 1). Уменьшение вдвое массы навески и объема экстракционной смеси позволило сократить расход растворителей при неизменной степени извлечения.

Таблица I.

Степень извлечения охратоксина А из искусственно контаминированного образца пшеницы, содержащего токсин в концентрации 5 мкг/кг, в различных системах растворителей (средние данные нз 6 опытов)._

Литературный источник Состав экстракционной смеси Обнаруженная концентрация охратоксина А, мкг/кг Степень экстракции, %

[Levi С, Р., 19751 СНСЬ + HiO 3,15±0,50 63±10

ЦСС №165,19961 Толуол + НС1 + МяСЬ 4.55*0.60 91±12

[Ochraprep, 20031 CHiCN + Н,0 5.00±0,50 100±10

При твердофазной очистке экстракта использование иммуноаффинной очистки [Ochraprep, 2003], по сравнению С колоночной хроматографией на диатомовой земле [Levi С.Р., 1975] и на ^модифицированном силикагеле (ICC №165, 1996], сопровождалось наибольшей элиминацией посторонних соединений (рис. 1). Дня повышения чувствительности метода в предложенную схему имму ноаффин ной хроматографии был внесен ряд изменений: увеличен объем экстракта, используемого в дальнейшем анализе, изменен состав элюирующей смеси.

i } ] I И i

AJL li

b J 1 * I j Id I __*__

11М41|?ГГ»4*а»н HtllllTMIIllt i II IHUHIIIIH ■

Рис. I. Хроматограммы образца пшеницы, искусственно контаминированного охратоксином А на уровне 5 мкг/кг, при различных способах очистки: А) вариант Levi С.Р.; Б) вариант ICC №165; В) вариант Ochraprep; Г) оптимизированная методика.

Использование на этапе ВЭЖХ подобранных оптимальных длин волн экстинкции (Хжя=333 им) и эмиссии (Х,И1Л=466 нм) сопровождалось максимальным отношением сигнал/шум,

В результате проведенных исследований оптимальной для анализа охратоксина А в пищевых продуктах была признана схема, представленная на рисунке 2.

ВЭЖХ С ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ

Рис, 2, Схема анализа охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови.

В целях адаптации метода для определения охратоксина А в плазме крови был модифицирован этап экстракции. В результате проведенных сравнительных исследований двух вариантов экстракционной смеси был разработан оптимальный способ извлечения охратоксина А из образца плазмы крови: использование этилацетата в присутствии 2М №С1 (рН=0,8 Н3Р04) (табл. 2). Последующие этапы анализа не отличались от подходов, использованных для определения охратоксина А в пищевых продуктах (рис. 2).

Таблица 2.

Степень извлечения охратоксина А нз искусственно контаминированного образца плазмы крови, содержащего токсин в концентрации 5 мкг/л, в различных системах

растворителей {средние данные из б опытов).

Литературный источник Состав экстракционной смеси Обнаруженная концентрация охратоксина А, мкг/л Степень экстракции, %

|Z immer Ii В., Dick R„ 1995] СНСЬ + Н1РО4 + ЫаС1 4,25±0,75 85±15

rMiraglia M. et al., 19981 Этилацетат + НС1 + МкС12 4,50*0,50 90±10

Оптимизированный метод Этиланетат + Н3РО4 + ИаС1 4.90*0,50 98±10

В ходе апробации методов были получены следующие метрологические характеристики: ПО - 0,03 мкг/л (плазма крови) и 0,20 мкг/кг (пищевые продукты), относительное стандартное отклонение — 9 и 14%, средняя степень извлечения — 88 и 96% (табл. 3).

Таблица 3.

Степень извлечения охратоксина А при анализе 10 искусственно контаминированных образцов пшеницы и плазмы крови, содержащих токсин в количестве 5 мкг/кг (л).___

№ образца Обнаруженная концентрация охратоксина А, мкг/кг (л) Степень извлечения, %.

Пшеница Плазма крови Пшеница Плазма крови

1 5,50 3,50 МО 70

2 5,35 4.25 107 85

3 5.40 4,45 108 89

4 4,95 4.60 99 92

5 5,35 4,75 107 95

6 3,65 4,25 73 85

7 4,55 4,55 91 91

8 4,25 4,70 85 94

9 4,00 4,15 80 83

10 5,00 4,80 100 96

Содержание охратоксина А в образце подтверждалось обнаружением метилового эфира микотоксина, а также масспектрометрической идентификацией характерных ионов.

2, Изучение частоты и уровня контаминации охратоксином А продовольственного зерна

Содержание охратоксина А в продовольственном зерне варьировало в зависимости от в ада зерна и года урожая.

В результате изучения зерна урожая 2003 года охратоксин А был обнаружен в 17,6% проб в диапазоне концентраций от 0,22 до 12,06 мкг/кг (медиана - 1,72 мкг/кг; 90-

ый процент иль - 8,94 мкг/кг) (табл. 4). При этом с наибольшей частотой (12 из 25 образцов) охратоксин Л выявляли в зерне ржи. Наиболее высокий средний уровень контаминации (5,64±4,81 мкг/кг) был обнаружен в зерне ячменя. В наименьшей степени было загрязнено микотоксином зерно пшеницы (0,99±0,74 мкг/кг) и овса (2,39±0,69 мкг/кг).

Таблица 4,

Содержание охратоксина А в продовольственном зерне урожая 2003 г._

Вид зерна Количество образцов Содерж) контаминн шие охратоксина А в рованньгх пробах, мкг/кг

Диапазон М Ме 90%

Всего Содержащих охратоксин А

Пшеница 50 3 (6,0%) 0.24-1,72 0,99 0,74 1,02 1,72

Рожь 25 12(48,0%) 0.22-12,06 3,00 3,50 1,08 5,69

Ячмень 25 4(16,0%) 1,27-10,57 5,64 4,81 5,36 8,94

Овес 25 3 (12,0%) 1,72-3,10 2,39 0,69 2,34 3.10

ВСЕГО 125 22(17,6%) 0,22-12,06 3,12 3,43 1,72 8,94

С меньшей частотой (10,8% проб) охратоксин А выявляли в зерне урожая 2004 года (медиана - 0,50 мкг/кг; 90-ый процектиль - 12,64 мкг/кг) (табл. 5). Наиболее часто, при этом, охратоксин А был обнаружен в зерне ржи (7 из 31 образца) и ячменя (4 из 25 образцов). Максимальное среди всего исследованного зерна содержание микотоксина (33,32 мкг/кг) было отмечено в овсе.

Таблица 5.

Содержание охратоксина А в продовольственном зерне урожая 2004 г._

Вид зерна Количество образцов Содержание охратоксина А в контаминированных пробах, мкг/кг

Диапазон м 5<1 Ме 90%

Всего Содержащих охратоксин А

Пшеница 76 5 (6,6%) 0,29-14,40 3,66 6,10 0,50 2,83

Рожь 31 7 (22,6%) 0,20-12,64 2,71 4,48 1,01 2,48

Ячмень 25 4(16,0%) 0,20-1,64 0,59 0.70 0,25 0,28

Овес 25 1 (4,0%) 33,32 - - - -

ВСЕГО 157 17(10,8%) 0,20-33,32 4,29 8,62 0,50 12,64

В целом по всему изученному зерну урожая 2003 н 2004 гг. охратоксин А был обнаружен ь 13,8е/« проб в концентрации от 0,20 до 33,32 мкг/кг (медиана - 1,27 мкг/кг; 90-ый процентиль — 10,57 мкг/кг) (табл. 6). При этом С наибольшей частотой охратоксин А

выявлялся в зерне ржи (33,9% образцов) и ячменя (16,0% образцов). Самый высокий

средний уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

Таблица 6.

Вид зерна Количество образцов Содержание охратоксина А в контаминированных пробах, мкг/кг

Диапазон М 8(1 Ме 90%

Всего Содержащих охратокснн А

Пшеница 126 8 (6,4%) 0,24-14,40 2,66 4,83 0,76 2,83

Рожь 56 19(33,9%) 0,20-12,64 2,89 3,77 1,08 5,69

Ячмень 50 8(16,0%) 0,20-10,57 3,11 4,17 1,46 8,94

Овес 50 4 (8,0%) 1,72-33,32 10,12 15,48 2,72 3,10

ВСЕГО 282 39(13,8%) 0,20-33,32 3,63 6,17 1,27 10,57

В большинстве исследованных проб зерна охратоксин Л был обнаружен в количестве ниже установленного Комиссией Кодекс Алиментариус и ЕС предельно допустимого содержания данного мнкотоксина в продовольственном зерне (5 мкг/кг) (рис. 3), Этот норматив был превышен в 4,0% всех изученных проб зерна урожая 2003 г. и в 1,9% проб—урожая 2004 г. В целом по всему исследованному зерну 2,8% проб содержали охратоксина Л выше 5 мкг/кг, при этом данный уровень был превышен среди зерна ржи в 7,1%образ«ов, ячменя - в 4,0%, овса-в 2,0% и пшеницы - в 0,8% проб.

0.20-1.од 1.01-2.00 2,01-3,00 3.01-4.00 4.01-5.00 больше 5.00 Коиивщрацил охратоксми А. шгМ

[ЛПоозг дм<мг.ягосодоо4п-.|

Рис. 3. Диапазон содержания охратоксина А в продовольственном зерне урожая 2003 и 2004 гг.

В результате проведенных исследований не было установлено взаимосвязи между содержанием охратоксина Л в зерне и районом его производства: частота и уровень

контаминации значительно варьировали в зависимости от года урожая. В целом, среди зерна пшеницы наиболее кон таминиро ванными бьглн образцы из Западно-Сибирского района (3 из 24 проб при среднем содержании 5,84±7,52 мкг/кг); среди ржи — из Поволжского (5 из 24 проб; 4,90±4,48 мкг/кг) и Центрального (11 из 26 проб; 2,63*3,69 мкг/кг) районов; ячменя —из Центрального района (4 из 18 проб; 3,41 ±3,70 мкг/кг); овса -из Уральского района РФ (I из 9 проб; 33,32 мкг/кг) (табл. 7).

Таблица 7,

Содержание охратоксина Л в отечественном продовольственном зерне урожая 2003 и 2004 гг. из основных районов его производства._

а 5 8 6 Количество образцов Содержание охратоксина А в контаминированнмх пробах, мкг/кг

Район РФ Диапазон М Ме 90%

Всего Содержащих охратоксин А

П> X X Северно-Кавказский 76 4 (5,3%) 0,24-1,72 0,87 0,65 0,76 1,02

ЗападноСибирский 24 3(12,5%) 0,29-14,40 5,84 7,52 2,83 14,4

ь Центральночерноземный 24 1 (4,2%) 0,30 0,30 - - -

Поволжский 24 5 (20,8%) 0,22-12,06 4,90 4,48 4,07 5,69

ё Центральный 26 11(42,3%) 0,31-12,64 2,63 3,69 1,08 5,59

** _с ЦентральноЧерноземный 32 4(12,5%) 0.20-10,57 2,82 5,17 0,25 0,28

л X V Центральный 18 4 (22,2%) 1,27-8,94 3,41 3,70 1.71 1,77

Г) Уральский 9 1(11,1%) 33,32 33,32 - - -

1 Центральный 20 1 (5,0%) 2,34 2,34 - - -

3. Изучение частоты и уровня контаминации охратоксниом Л продуктов детского питания

В результате проведенных исследований была установлена высокая частота контаминации охратоксином А продуктов прикорма на зерновой основе (каши) как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охраггоксин А в диапазоне концентраций от 0,20 до 1,20 мкг/кг (медиана - 0,51 мкг/кг; 90-ый процентиль - 1,16 мкг/кг). Наиболее часто (4 из 12 образцов) охратоксином Л были контаминированы каши, содержащие в качестве компонента овсяную муку. Самый высокий средний уровень контаминации охратоксином А (0.8040,45 мкг/кг) был обнаружен в кашах на мультизерновой (два и более злака) основе (табл. 8).

Содержание охратоксина А в продукта* прикорма на зерновой основе (каши).

Зерновая основа Количество образцов Содержание охратоксина А в контаминированных пробах, мкг/кг

Всего Содержащих охратоксин А Диапазон М за Ме 90%

Овес 12 4 (333%) 0,20-0,95 0,54 0,33 0,50 0,65

Мульти-зерновая 20 5 (25,0%) 0,28-1,20 0,80 0,45 1,01 1,16

Кукуруза 10 1 (10,0%) 0.23 - - - •

Рис 6 0 • - -

Пшеница 6 0 - • - - -

ВСЕГО 54 10(18,5%) 0,20-1,20 0.64 0,40 0.51 1,16

9,3% всех изученных проб каш были загрязнены охратоксином А выше 0,5 мкг/кг -предельно допустимого содержания токсина в продуктах детского питания, установленного в странах ЕС (рис. 4). Среди каш на основе овса данных проб было 16,7%, на мультизерновой основе - 15,0%,

0.20-0.50 0Д1-С.40 0,41-0,50 вопы1я0.50 Концентрация охраткеим А, мягУнг

Рис. 4. Диапазон содержания охратоксина А в продуктах прикорма на зерновой основе (кашах).

В результате проведенного анализа каш зарубежного и отечественного производства при сходном уровне контаминации охратоксин А с большей частотой (б из

27 образцов) был выявлен в последних (табл. 9),

Таблица 9.

Содержание охратоксина А в кашах отечественного и зарубежного производства.

Производство Количество образцов Содержание охратоксина А в контаминированных пробах, мкг/кг

Всего Содержащих охратоксин А Диапазон М за Ме 90%

Россия 27 6(22,2%) 0,23-1,20 0.62 0,41 0,50 1,01

Импорт 27 4(14,8%) 0,20-1,16 0.67 0,46 0,66 0,95

-I. Изучение содержания охратоксина Л в плазме кроен

Охратокеин А был обнаружен во всех 50 исследованных образцах плазмы крови в диапазоне концентраций от 0,36 до 7,44 мкг/л (медиана - 1,36 мкг/л; 90-ыЙ проиентнль -2,37 мкг/л), при этом содержание микотоксина было несколько выше в образцах,

отобранных у мужчин (1,73±1,99 мкг/л) (табл. 10),

Таблица 10.

__Содержание охратокеин а А в плазме крови._

Пол Количество образцов Содержание охратоксина А в контамннированных пробах, мкг/л

Всего Содержащих охратокеин А Диапазон М Sd Me 90%

Мужчины И 11 0,40-7,44 1,73 1,99 1.25 2,40

Женщины 39 39 0,36-3,84 1,49 0.78 1,40 2,19

ВСЕГО 50 50 0.36-7,44 1,54 1.14 1.36 2,37

5. Оценка нагрузки охратоксином А

На основании полученных данных о частоте и уровнях контаминации охратоксином А продовольственного зерна урожая 2003 и 2004 гг. и с учетом структуры питания населения РФ [FAO Statistical Databases, 2003] было рассчитано вероятное суточное поступление токсина, которое составило 2,72 нг/кг массы тела (табл. 9). При этом основным источником охратоксина А являлись пищевые продукты, изготовленные из пшеницы (2,17 нг/кг массы тела) и ржи (0,46 нг/кг массы тела).

Таблица 9,

Расчетное суточное поступление охратоксина А с пищевыми продуктами, изготовленными нз продовольственного зерна урожая 2003 и 2004 гг.

Вид зерна Средний уровень контаминации охратоксином А зерна, нг/г Потребление зерна на душу населения в сутки, г Суточное поступление охратоксина А, нг/кг массы тела

Пшеница 0,36 361,64 2.17

Рожь 1,11 24,93 0,46

Овес 0.99 3,01 0.05

Ячмень 0,67 3,84 0.04

ИТОГО 2.72

Для детей первого года жизни расчетное суточное поступление охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе составило 1,51 нг/кг массы тела (табл. 10),

Расчетное суточное поступление охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе (каши)._

Возраст, месяцы Средний уровень контаминации охратоксином А каш, рекомен дованн ых для данного возраста, нг/г Суточное потребление детского питания, г Средняя масса тела ребенка, кг Суточное поступление охратоксина А, нг/кг массы тела

5 0,31 20 7,4 0,84

6 0,35 30 8,0 1,31

7 8,3 1,27

8 36 8,4 1,50

9 40 9,3 1,51

10 9,5 1,47

11 9,8 1,43

12 10,0 1,40

При расчете суточной нагрузки охратоксином А, проведенном на основе данных его прямого определения а плазме крови, величина суточного поступления составила 3,03 нг/кг массы тела.

Таким образом, рассчитанные в настоящей работе уровни поступления охратоксина А (2,7-3,0 нг/кг массы тела) были значительно ниже уровня условно переносимого суточного поступления, установленного Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам (14 нг/кг массы тела). Коэффициент опасности при этом был меньше единицы, что свидетельствует о малом риске для здоровья населения РФ, связанном с контаминацией охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Наличие у охратоксина А токсических (ЬБу, для крыс - 20 мг/кг массы тела) и канцерогенных свойств (группа 2В - МАИР), достаточно высокая частота контаминации этим микогоксином зерновых продуктов, в т.ч. специализированных продуктов детского питания, и установленные в настоящей работе реальные уровни экспозиции на население являются объективным обоснованием необходимости введения допустимого уровня содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса. При Этом в целях гармонизации нормативной базы России с рекомендациями международных организаций (ФАО/ВОЗ, Комиссия Кодекс Алиментариус) и действующим законодательством других стран (ЕС, Болгария, Венгрия, Куба, Иран, Турция и др.) целесообразно его введение на уровне 5 мет/кг (0,005 мг/кг). Проведенные расчеты показывают, что данный допустимый уровень содержания охратоксина А надежно обеспечивает безопасность для здоровья населения РФ эернопродуктов,

выводы

1. Разработан метод обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах, особенностью которого является применение селективной иммуноаффинной очистки экстрактов и высокоэффективной жидкостной хроматофафни с флуориметрическим детектированием. Метод отличается высокими метрологическими характеристиками (предел обнаружения -0.2 мкг/кг; относительное стандартное отклонение - 14%; степень извлечения - 96%) и пригоден для проведения серийных анализов пищевых продуктов при проведении производственного контроля и в лабораториях, осуществляющих надзор за качеством и безопасностью пищевых продуктов.

2. Впервые проведен анализ контаминации охратоксином А продовольственного зерна из основных регионов его производства в Российской Федерации. Охратоксин А обнаружен в 13,8% исследованных проб в концентрации от ОД до 33,3 мкг/кг (медиана - 1,3 мкг/кг; 90-ый процентиль - 10,6 мкг/кг). При этом наиболее часто (19 из 56 образцов) охратоксин А выявляли в зерне ржи (среднее содержание среди контаминированных образцов 2,9±3,8 мкг/кг) и ячменя (3 из 50 образцов, при среднем содержании 3,1±4,2 мкг/кг). Наиболее высокий средний уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

3. Впервые установлена высокая частота контаминации охратоксином А специализированных продуктов детского питания на зерновой основе как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охратоксин А в концентрации от 0,2 до 1,2 мкг/кг с медианой, равной 0,5 мкг/кг, и 90-м процентилем - 1,2 мкг/кг. Наиболее часто охратоксином А (4 из 12 образцов) были коктаминированы продукты детского питания, содержащие в качестве компонента овсяную муку (среднее содержание 0.5±0,3 мкг/кг). Самая высокая средняя концентрация охратоксина А (0,8±0,5 мкг/кг) была обнаружена в продуктах прикорма на мультизерновой основе,

4. Путем модификации этапа экстракции повышена чувствительность ВЭЖХ метода количественного определения охратоксина А в плазме крови (предел обнаружения — 0,05 мкг/л). С помошью данного метода проведены скрининговые исследования содержания охратоксина А в плазме крови 50 пациентов Клиники лечебного питания ГУ НИИ питания РАМН, постоянно проживающих в Москве и Московской области, которые выявили

наличие охратоксина Л у всех обследованных в концентрации от 0,4 до 7,4 мкг/л, что является прямым доказательством поступления охратоксина А с рационом.

5. На основании полученных данных о частоте и уровнях контаминации охратоксином А зерновых продуктов и с учетом структуры питания населения Российской Федерации рассчитано вероятное суточное поступление токсина, которое составило 2,7 нг/кг массы тела. Для детей первого года жизни расчетное суточное поступление охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе составило 1,5 нг/кг массы тела. При расчете суточной нагрузки охратоксином А, проведенной на основе данных его прямого определения в плазме крови, величина суточного поступления составила 3,0 нг/кг массы тела,

6. Установленные в настоящей работе уровни поступления охратоксина А (2,7-3,0 нг/кг массы тела в сутки) значительно ниже уровня условно переносимого суточного поступления, установленного Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам (14 нг/кг массы тела),

7. Учитывая наличие у охратоксина А токсических (1_Оя, для крыс - 20 мг/кг массы тела) и канцерогенных свойств (группа 2В - МАНР), а также достаточно высокую частоту контаминации этим микотоксином зерновых продуктов, в т.ч. специализированных продуктов детского питания, и установленные в настоящей работе реальные уровни экспозиции на население, рекомендовать введение в Российской Федерации допустимого уровня содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса • 5 м кг/кг,

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанные методические указания «Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в зерне и зернопродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» рекомендуются для использования в системе Роспотребнадзора, а также при проведении производственного контроля.

2. Рекомендован допустимый уровень содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса • 5 мкг/кг. Дополнение к СанПиН 2.3.2.1078-01 - М: Роспотребнадзор, 2006 (в печати).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Аксенов i f. В., Эядер К.И. Метод определения охратоксина А в пищевых продуктах. // Материалы пленума Научного совета по экологии человека и гигиены окружающей среды РАМН и Минздрава к соцразвития Российской Федерации «Современные проблемы медицины окружающей среды»,- М,, 2004, - С. 258-259.

2. Аксёнов И.В., Эялер К.И. Изучение загрязнения зерновых охратоксином А. // Материалы Ш-й Межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - Санкт-Петербург, 2005, - С. 3-4,

3. Аксёнов И.В., Эллер К.И., Тутельян В.А. Актуальность проблемы контаминации охратоксином А пищевых продуктов. // Материалы III -го всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии»,- М.,2005.-Т. V. - С. 122-123.

4. Пименова ВВ., Аксёнов //.ß., Аристархоеа Т.В., Эллер К.П. Методические подходы к одновременному определению охратоксина А и цнтринина в пищевых продуктах. И Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии», - М,, 2005, —Т. V. — C.152-I53,

5. Аксёнов И,В. Гигиенические аспекты контаминации охратоксином А продовольственного зерна. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье». -Суздаль, 2005.-С. 260-261.

6. Аксёнов Н.В., Эллер КИ. Использование иммуноферментного анализа при исследовании содержания охратоксина А в пищевых продуктах. // Материалы VII 1-го Всероссийского конгресса «Оптимальное питание - здоровье нации». - М., 2005 г, - С. 7-8,

7. Аксёнов И.В., Эллер К.И., Тутельян В.А. Содержание охратоксина А в продовольственном зерне урожая 2003 и 2004 г. //Вопросы питания. -2006. *№1. - С. 43-47.

8. Седова И,Б., Аксёнов HB., Захарова Л.П. Микотоксины охратоксин А и фумонизины В| и B¡> в продуктах детского питания. // Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии»,- М., 2006, - Т. VII.-С. 124-125,

9. Эллер {СЛ., Пименова В.В., Киселева М.Г., Передеряев О.И., Аксёнов И.Б., Медведев Ю.В. Метод одновременного определения содержания цитринина и охратоксина А взернеизернопродуктах,//Вопросы питания. - 2006. -№4. - С. 53-57,

10. Аксёнов ¡¡.В., Эллер K.ÍÍ., Тутельян В ¿4. Оптимизация аналитических методов количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах. // Гигиена и санитария. - 2006. - №4. - С, 50-53.

Заказ № 122/09/06 Подписано в печать 15,09.2006 Тираж 130 экз. Усл. пл, 1,25

ООО "Цифровичок", -тел. (495) 797-75-76; (495) 778-22-20 www.cfr.ru; е-таИ:т/о@р/г.ги

Оглавление диссертации Аксенов, Илья Владимирович :: 2006 :: Москва

1. Введение

2. Обзор литературы *

2.1. Продуценты и физико-химические свойства охратоксина А

2.2. Биологическое действие охратоксина А

2.3. Загрязнение охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

2.4. Методы определения охратоксина А

3. Экспериментальная часть

3.1. Обоснование цели и выбор методов исследования

3.2. Материалы и методы исследования

3.2.1. Отбор проб '

3.2.2. Методы обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А

3.2.3. Расчет и оценка нагрузки охратоксином А

3.2.3.1. Расчет нагрузки охратоксином А с зерновыми продуктами

3.2.3.2. Расчет нагрузки охратоксином А по его содержанию в плазме крови

3.2.3.3. Расчет коэффициента опасности

3.2.4. Приготовление и хранение стандартных растворов

3.2.5. Материалы, используемые в работе

3.2.6. Статистическая обработка результатов

3.3. Результаты собственных исследований 49 3.3.1. Оптимизация методов обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в зерновых 49 продуктах и плазме крови

3.3.1.1. Оптимизация метода обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в зерновых 49 продуктах

3.3.1.1.1. Экстракция охратоксина А из образца

3.3.1.1.2. Очистка экстракта

3.3.1.1.3. Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в очищенном экстракте

3.3.1.3.4. Методы подтверждения содержания охратоксина А в образце

3.3.1.2. Оптимизация метода обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в плазме 60 крови

3.3.2. Изучение частоты и уровня контаминации охратоксином А продовольственного зерна

3.3.3. Изучение частоты и уровня контаминации охратоксином А продуктов детского питания

3.3.4. Изучение содержания охратоксина А в плазме крови

3.3.5. Оценка нагрузки охратоксином А

3.3.5.1. Оценка нагрузки охратоксином А с зерновыми продуктами

3.3.5.2. Оценка нагрузки охратоксином А с зерновыми продуктами детского питания на детей раннего возраста

3.3.5.3. Оценка нагрузки охратоксином А по его содержанию в плазме крови

Введение диссертации по теме "Гигиена", Аксенов, Илья Владимирович, автореферат

Обеспечение безопасности пищевых продуктов относится к важнейшим приоритетам здорового питания. Среди контаминантов пищи одними из наиболее опасных для здоровья признаны вторичные метаболиты микроскопических (плесневых) грибов - микотоксины, обладающие широким спектром токсического действия. Наибольший риск для здоровья связан с хроническим поступлением малых количеств микотоксинов с пищевыми продуктами [Саркисов А.Х., 1954; Билай В.И., 1977; Покровский А.А. и др., 1977; Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985; Kuiper-Goodman, Т., 1998].

Одним из наиболее распространенных микотоксинов является охратоксин А, продуцируемый плесневыми грибами родов Penicillium и Aspergillus. Доказанным считается нефротоксическое, канцерогенное, а также тератогененное, эмбриотоксическое, иммунотоксическое и нейротоксическое действие охратоксина A [Krogh Р., 1978; Boorman G.A., 1989; Belmandi A. et al., 1998, 1999; Wangikar P.B. et al., 2005; Al-Anati L., Petzinger E., 2006]. Токсин рассматривается в качестве одного из этиологических факторов Балканской эндемической нефропатии - тяжелого почечного заболевания, регистрируемого в некоторых восточноевропейских странах. Сходные по клиническим проявлениям заболевания описаны также в Египте и Тунисе [Krogh Р., 1974; Maaroufi К. et al., 1995; Steyn P.S., 1995; Wafa E.W. et al., 1998; Abid S. et al., 2003]. Международным агентством по изучению рака (МАИР) охратоксин А отнесен к веществам, возможно канцерогенным для человека (группа 2В) [IARC, 1993]. Исходя из токсических свойств охратоксина А было установлено условно переносимое суточное поступление токсина, равное 14 нг/кг массы тела [JECFA, 2001].

Охратоксин А выявляется повсеместно в качестве природного загрязнителя продовольственного и кормового зерна, кофе- и какао-бобов, винограда и специй. Контаминация микотоксином кормов является причиной загрязнения продуктов животного происхождения (почек, печени, мяса) [Кравченко Л.В., Тутельян В.А., 2005; Dragacci S. et al., 1999; Otteneder H., Majerus P., 2000, 2001; Curtui V.G. et al., 2001; Jorgensen K., Petersen A., 2002; Serra B. J., 2004; Jorgensen K., 2005]. Наибольшее значение для здоровья человека имеет загрязнение токсином зерновых продуктов, что обусловлено их значительным потреблением и выявленным высоким уровнем содержания охратоксина A [Walker R., 2002]. Особое внимание, вследствие высокой чувствительности детей, привлекают данные об обнаружении токсина в продуктах детского питания [Wolff J., 2000; Beretta В. et al., 2002; Lombaert G.A. et al., 2003; Araguas C. et al., 2005]. В целях профилактики неблагоприятных последствий для здоровья во многих странах мира были введены гигиенические нормативы на содержание охратоксина А в пищевых продуктах: в продовольственном зерне - не более 5 мкг/кг [Codex Alimentarius Commission, 2004; Commission Regulation (EC), 2005], в продуктах детского питания - 0,5 мкг/кг [Commission Regulation (ЕС), 2005]. Поступление охратоксина А с рационом подтверждается прямым определением микотоксина в плазме крови [Zimmerli В., Dick R., 1995; Scott P.M. et al., 1998; Thuvander A. et al., 2001; Task 3.2.7, 2002; Skaug M.A., 2003].

Необходимым элементом системы контроля контаминации охратоксином А пищевых продуктов является эффективная методическая база. Основными методами анализа микотоксина являются подходы, использующие высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). Несмотря на явные преимущества ВЭЖХ перед другими методами (тонкослойная хроматография, иммуноферментный анализ) предложенные варианты ВЭЖХ анализа охратоксина А требуют дальнейшего совершенствования (повышение чувствительности, селективности, степени извлечения, уменьшение расхода растворителей и др.) [MP №3245-85, Минздрав СССР, 1985; Эллер К.И. и др., 2006; Kuhn I. et al., 1995; Hurst W.J., Martin R.A. Jr., 1998; Visconti A. et al., 1999,

2000; Pascale M., Visconti A., 2001; Leitner et al., 2002; Shephard G.S. et al., 2003; Monaci L. et al., 2004].

Исходя из вышеизложенного была определена основная цель настоящей работы: оценить риск для здоровья населения Российской Федерации (РФ) загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

3. Рассчитать нагрузку охратоксином А на население РФ и оценить риск для здоровья, связанный с загрязнением данным микотоксином продовольственного зерна и продуктов детского питания.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Предложены новые методы обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови, особенностью которых является применение ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием и селективной иммуноаффинной очистки экстракта. Методы характеризуются надежностью и высокими параметрами -предел обнаружения 0,20 мкг/кг для пищевых продуктов и 0,05 мкг/л для плазмы крови; относительное стандартное отклонение 9-14%; степень извлечения 88 -96%.

Впервые в РФ с использованием ВЭЖХ проведен анализ контаминации охратоксином А отечественного продовольственного зерна из основных регионов его производства. Охратоксин А был обнаружен в 13,8% проб продовольственного зерна урожая 2003 и 2004 гг. в диапазоне концентраций от 0,2 до 33,3 мкг/кг (медиана - 1,3 мкг/кг; 90%-ый процентиль - 10,6 мкг/кг). При этом наиболее часто охратоксин А выявляли в зерне ржи (19 из 56 образцов) и ячменя (8 из 50 образцов). Наиболее высокий средний уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

Установлена высокая частота контаминации охратоксином А специализированных продуктов детского питания на зерновой основе как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охратоксин А в диапазоне концентраций от 0,2 до 1,2 мкг/кг (медиана - 0,5 мкг/кг; 90-ый процентиль - 1,2 мкг/кг). Наиболее часто охратоксином А (4 из 12 образцов) были контаминированы продукты детского питания, содержащие в качестве компонента овсяную муку. Самая высокая средняя концентрация охратоксина А (0,8±0,5 мкг/кг) была обнаружена в продуктах прикорма на мультизерновой основе.

Впервые изучено содержание охратоксина А в крови случайной выборки населения РФ. Охратоксин А был обнаружен во всех изученных образцах плазмы крови в диапазоне концентраций от 0,4 до 7,4 мкг/л (медиана 1,4 мкг/л; 90-ый процентиль - 2,4 мкг/л), что свидетельствует о постоянном поступлении микотоксина с рационом.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

1. Разработаны методические указания «Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в зерне и зернопродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии». М: Роспотребнадзор, 2006 (в печати).

2. Разработан гигиенический норматив содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса - 5 мкг/кг. Дополнение к СанПиН 2.3.2.1078-01 -М: Роспотребнадзор, 2006 (в печати).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на Третьем (Москва, 2005) и Четвертом (Москва, 2006) всероссийских конгрессах по медицинской микологии, на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Суздаль, 2005) а также на Восьмом всероссийском конгрессе «Оптимальное питание - здоровье нации» (Москва, 2005).

ПУБЛИКАЦИИ

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальной части, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 7 рисунков. Список литературы включает 250 источников, из которых 238 - иностранных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов"

5. ВЫВОДЫ

1. Разработан метод обнаружения, идентификации и количественного определения охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах, особенностью которого является применение селективной иммуноаффинной очистки экстрактов и высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием. Метод отличается высокими метрологическими характеристиками (предел обнаружения - 0,2 мкг/кг; относительное стандартное отклонение - 14%; степень извлечения - 96%) и пригоден для проведения серийных анализов пищевых продуктов при проведении производственного контроля и в лабораториях, осуществляющих надзор за качеством и безопасностью пищевых продуктов.

2. Впервые проведен анализ контаминации охратоксином А продовольственного зерна из основных регионов его производства в Российской Федерации. Охратоксин А обнаружен в 13,8% исследованных проб в концентрации от 0,2 до 33,3 мкг/кг (медиана - 1,3 мкг/кг; 90-ый процентиль - 10,6 мкг/кг). При этом наиболее часто (19 из 56 образцов) охратоксин А выявляли в зерне ржи (среднее содержание среди контаминированных образцов 2,9±3,8 мкг/кг) и ячменя (8 из 50 образцов, при среднем содержании 3,1±4,2 мкг/кг). Наиболее высокий средний уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

3. Впервые установлена высокая частота контаминации охратоксином А специализированных продуктов детского питания на зерновой основе как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охратоксин А в концентрации от 0,2 до 1,2 мкг/кг с медианой, равной 0,5 мкг/кг, и 90-м процентилем - 1,2 мкг/кг. Наиболее часто охратоксином А (4 из 12 образцов) были контаминированы продукты детского питания, содержащие в качестве компонента овсяную муку (среднее содержание 0,5±0,3 мкг/кг). Самая высокая средняя концентрация охратоксина А (0,8±0,5 мкг/кг) была обнаружена в продуктах прикорма на мультизерновой основе.

4. Путем модификации этапа экстракции повышена чувствительность ВЭЖХ метода количественного определения охратоксина А в плазме крови (предел обнаружения - 0,05 мкг/л). С помощью данного метода проведены скрининговые исследования содержания охратоксина А в плазме крови 50 пациентов Клиники лечебного питания ГУ НИИ питания РАМН, постоянно проживающих в Москве и Московской области, которые выявили наличие охратоксина А у всех обследованных в концентрации от 0,4 до 7,4 мкг/л, что является прямым доказательством поступления охратоксина А с рационом.

6. Установленные в настоящей работе уровни поступления охратоксина А (2,7-3,0 нг/кг массы тела) значительно ниже уровня условно переносимого суточного поступления, установленного Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам (14 нг/кг массы тела).

7. Учитывая наличие у охратоксина А токсических (LD50 для крыс - 20 мг/кг массы тела) и канцерогенных свойств (группа 2В - МАИР), а также достаточно высокую частоту контаминации этим микотоксином зерновых продуктов, в т.ч. специализированных продуктов детского питания, и установленные в настоящей работе реальные уровни экспозиции на население, рекомендовать введение в Российской Федерации допустимого уровня содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса - 5 мкг/кг.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В связи с широким распространением в пищевых продуктах и выраженными токсическими свойствами микотоксины - вторичные метаболиты плесневых грибов относятся к приоритетным контаминантам пищи [Саркисов А.Х., 1954; Билай В.И, 1977; Покровский А.А. и др., 1977; Тутельян В.А, Кравченко Л.В, 1985; Kuiper-Goodman, Т., 1998].

Одним из наиболее опасных микотоксинов является охратоксин А, продуцируемый плесневыми грибами родов Penicillium и Aspergillus [Kuiper-Goodman, Т, 1998; JECFA, 2001]. В экспериментах in vivo показано нефротоксическое, канцерогенное, тератогенное, эмбриотоксическое, иммунотоксическое и нейротоксическое действие данного микотоксина [Krogh Р, 1978; Boorman G.A, 1989; Belmandi A. et al, 1998, 1999; Wangikar P.B. et al, 2005; Al-Anati L, Petzinger E, 2006]. В 1993 г. охратоксин А был отнесен МАИР к веществам, возможно канцерогенным для человека (группа 2В) [IARC, 1993]. Экспертами JECFA было установлено условно переносимое суточное поступление данного микотоксина, равное 14 нг/кг массы тела [JECFA, 2001].

Охратоксин А повсеместно встречается в качестве природного контаминанта зерна, кофе- и какао-бобов, винограда и специй. Наибольший риск для здоровья человека связан с загрязнением микотоксином продовольственного зерна, что обусловлено выявленным в нем высоким содержанием охратоксина А, а также значительным потреблением в пищу зернопродуктов [Kuiper-Goodman, Т, 1998; JECFA, 2001; Walker R, 2002]. Обнаружение токсина в продуктах детского питания привлекает особое внимание, что связано с высокой чувствительностью детей, особенно первого года жизни [Wolff J, 2000; Lombaert G.A. et al, 2003; Araguas C. et al, 2005].

Постоянное поступление охратоксина А с рационом подтверждается прямым определением микотоксина в плазме крови [Scott P.M. et al., 1998; Thuvander A. et al., 2001; Skaug M.A., 2003].

Для обнаружения, идентификации, а также количественного определения охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови используются, как правило, методы ВЭЖХ. Несмотря на явные преимущества ВЭЖХ перед другими методами (тонкослойная хроматография, иммуноферментный анализ) предложенные варианты ВЭЖХ анализа охратоксина А требуют дальнейшего совершенствования (повышение чувствительности, селективности, степени извлечения, уменьшение расхода растворителей и др.) [MP №3245-85, Минздрав СССР, 1985; Эллер К.И. и др., 2006; Kuhn I. et al., 1995; Hurst W.J., Martin R.A. Jr., 1998; Visconti A. et al., 1999, 2000; Pascale M., Visconti A., 2001; Leitner et al., 2002; Shephard G.S. et al., 2003; Monaci L. et al., 2004].

Обнаружение охратоксина А в пищевых продуктах и плазме крови практически здоровых людей послужило основанием для установления гигиенических нормативов на содержание микотоксина в пище в более чем 30 странах мира [FAO, 2004].

В то же время содержание охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах в Российской Федерации до настоящего времени не было оценено и не регламентировалось санитарными правилами.

В ходе настоящей работы с использованных модифицированных методов ВЭЖХ анализа было изучено содержание охратоксина А в отечественном продовольственном зерне, продуктах детского питания, а также в плазме крови случайной выборки населения РФ и на основании рассчитанной величины вероятного суточного поступления микотоксина с рационом дана оценка степени риска для здоровья, связанного с загрязнением охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов.

В предварительной серии экспериментов были проведены сравнительные исследования трех схем ВЭЖХ определения охратоксина А в пищевых продуктах [Levi С.Р., 1975; ICC №165, 1996; Ochraprep, 2003]. При этом на этапе экстракции наибольшее извлечение токсина из образца отмечали при использовании смеси ацетонитрил-вода (6:4). Уменьшение вдвое массы навески и объема экстракционной смеси позволило сократить расход растворителей при неизменной степени извлечения. При твердофазной очистке экстракта использование иммуноаффинной очистки [Ochraprep, 2003], по сравнению с колоночной хроматографией на диатомовой земле [Levi С.Р., 1975] и на немодифицированном силикагеле [ICC №165, 1996], сопровождалось наибольшей элиминацией посторонних соединений. Для повышения чувствительности метода в предложенную схему иммуноаффинной хроматографии был внесен ряд изменений: увеличен объем экстракта, используемого в дальнейшем анализе, изменен состав элюирующей смеси. Использование на этапе ВЭЖХ подобранных оптимальных длин волн экстинкции (Х)КСХ=333 нм) и эмиссии (Xjmhc=466 нм) сопровождалось максимальным отношением сигнал/шум. В результате проведенных исследований оптимальной для анализа охратоксина А в пищевых продуктах была признана схема с экстракцией токсина смесью ацетонитрил - вода (6:4), иммуноаффинной очисткой экстракта и использованием ОФ ВЭЖХ с-флуориметрическим детектированием на этапе обнаружения, идентификации и количественного определения.

В целях адаптации метода для определения охратоксина А в плазме крови был модифицирован этап экстракции. В результате проведенных сравнительных исследований двух вариантов экстракционной смеси был разработан оптимальный способ извлечения охратоксина А из образца плазмы крови: использование этилацетата в присутствии 2М NaCl (рН=0,8 Н3Р04). Последующие этапы анализа не отличались от подходов, использованных для определения охратоксина А в пищевых продуктах.

В ходе апробации методов были получены следующие метрологические характеристики: ПО - 0,05 мкг/л (плазма крови) и 0,20 мкг/кг (пищевые продукты), относительное стандартное отклонение - 9 и 14%, средняя степень извлечения - 88 и 96%.

Первостепенным объектом исследования, исходя из литературных данных об основном вкладе зернопродуктов в нагрузку охратоксином А, было выбрано продовольственное зерно наиболее потребляемых злаковых культур (пшеница, рожь, ячмень, овес) урожая 2003 и 2004 гг. из районов РФ, являющихся по данным Государственной хлебной инспекции основными их производителями.

Содержание охратоксина А в продовольственном сырье варьировало в зависимости от вида зерна и года урожая.

В результате изучения зерна урожая 2003 года охратоксин А был обнаружен в 17,6% проб в диапазоне концентраций от 0,22 до 12,06 мкг/кг (медиана - 1,72 мкг/кг; 90-ый процентиль - 8,94 мкг/кг). При этом с наибольшей частотой (12 из 25 образцов) охратоксин А выявляли в зерне ржи. Наиболее высокий средний уровень контаминации (5,64±4,81 мкг/кг) был обнаружен в зерне ячменя. В наименьшей степени было загрязнено микотоксином зерно пшеницы (0,99±0,74 мкг/кг) и овса (2,39±0,69 мкг/кг).

В зерне урожая 2004 г. охратоксин А выявляли с меньшей частотой (10,8% проб; медиана - 0,50 мкг/кг; 90-ый процентиль - 12,64 мкг/кг). Наиболее часто, при этом, охратоксин А был обнаружен в зерне ржи (7 из 31 образца) и ячменя (4 из 25 образцов). Максимальное среди всего исследованного зерна содержание микотоксина (33,32 мкг/кг) было отмечено в овсе.

В целом по всему изученному зерну урожая 2003 и 2004 гг. охратоксин А был обнаружен в 13,8% проб в концентрации от 0,20 до 33,32 мкг/кг (медиана -1,27 мкг/кг; 90-ый процентиль - 10,57 мкг/кг). При этом с наибольшей частотой охратоксин А выявлялся в зерне ржи (33,9% образцов) и ячменя (16,0% образцов). Самый высокий уровень контаминации (10,1±15,5 мкг/кг) был обнаружен в зерне овса. Пшеница была загрязнена охратоксином А в наименьшей степени (2,7±4,8 мкг/кг).

В результате проведенных исследований не было установлено взаимосвязи между содержанием охратоксина А в зерне и районом его производства: частота и уровень контаминации значительно варьировали в зависимости от года урожая. В целом, среди зерна пшеницы наиболее контаминированными были образцы из Западно-Сибирского района (3 из 24 проб при среднем содержании 5,84±7,52 мкг/кг); среди ржи - из Поволжского (5 из 24 проб; 4,90±4,48 мкг/кг) и Центрального (11 из 26 проб; 2,63±3,69 мкг/кг) районов; ячменя - из Центрального района (4 из 18 проб; 3,41±3,70 мкг/кг); овса - из Уральского района РФ (1 из 9 проб; 33,32 мкг/кг).

Учитывая высокую чувствительность детей первого года жизни в ходе работы было изучено содержание охратоксина А в специализированных продуктах прикорма на зерновой основе (каши).

В результате проведенных исследований была установлена высокая частота контаминации охратоксином А каш как отечественного, так и зарубежного производства. 18,5% изученных проб содержали охратоксин А в диапазоне концентраций от 0,20 до 1,20 мкг/кг (медиана - 0,51 мкг/кг; 90-ый процентиль - 1,16 мкг/кг). Наиболее часто (4 из 12 образцов) охратоксином А были контаминированы каши, содержащие в качестве компонента овсяную муку. Самый высокий уровень контаминации охратоксином А (0,80±0,45 мкг/кг) был обнаружен в кашах на мультизерновой (два и более злака) основе.

В результате проведенного анализа каш зарубежного и отечественного производства при сходном уровне контаминации охратоксин А с большей частотой (6 из 27 образцов) был выявлен в последних.

Для оценки совокупного поступления охратоксина А с рационом было изучено содержание микотоксина в плазме крови случайной выборки населения РФ.

Охратоксин А был обнаружен во всех 50 исследованных пробах плазмы крови, что свидетельствует о постоянном поступлении токсина с пищей. В целом, максимальная концентрация равнялась 7,44 мкг/л, средняя - 1,54 мкг/л, величина медианы и 90% уровня - 1,33 и 2,37 мкг/л, соответственно. Содержание охратоксина А в плазме крови у мужчин было по большинству показателей несколько выше, чем у женщин.

На основании полученных данных о частоте и уровнях контаминации охратоксином А продовольственного зерна урожая 2003 и 2004 гг. и с учетом структуры питания населения Российской Федерации было рассчитано вероятное суточное поступление токсина, которое составило 2,72 нг/кг массы тела. При этом основным источником охратоксина А являлись пищевые продукты, изготовленные из пшеницы (2,17 нг/кг массы тела) и ржи (0,46 нг/кг массы тела).

Для детей первого года жизни расчетное суточное поступление охратоксина А с продуктами прикорма на зерновой основе составило 1,51 нг/кг массы тела.

При расчете суточной нагрузки охратоксином А, проведенном на основе данных его прямого определения в плазме крови, величина суточного поступления составила 3,03 нг/кг массы тела.

Таким образом, рассчитанные в настоящей работе уровни поступления охратоксина А (2,7-3,0 нг/кг массы тела) были значительно ниже уровня условно переносимого суточного поступления, установленного Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам (14 нг/кг массы тела). Коэффициент опасности, при этом, был меньше единицы, что свидетельствует о малом риске для здоровья населения РФ, связанном с контаминацией охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Наличие у охратоксина А токсических (LD50 для крыс - 20 мг/кг массы тела) и канцерогенных свойств (группа 2В - МАИР), достаточно высокая частота контаминации этим микотоксином зерновых продуктов, в т.ч. специализированных продуктов детского питания, и установленные в настоящей работе реальные уровни экспозиции на население являются объективным обоснованием необходимости введения гигиенического регламента содержания охратоксина А в продовольственном зерне пшеницы, ржи, ячменя и овса. При этом в целях гармонизации нормативной базы России с рекомендациями международных организаций (ФАО/ВОЗ, Комиссия Кодекс Алиментариус) и действующим законодательством других стран (ЕС, Болгария, Венгрия, Куба, Иран, Турция и др.) целесообразно его введение на уровне 5 мкг/кг. Проведенные расчеты показывают, что данный предельно допустимый уровень надежно обеспечивает безопасность для здоровья населения РФ зернопродуктов.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Аксенов, Илья Владимирович

1. Билай В.И. Фузарии. Киев: Наукова думка, 1977. - 442 с.

2. ГОСТ 13586.3-83. Зерно. Правила приемки и методы отбора проб. — Москва, 1983.-23 с.

3. Захарова Л.П., Обольский О.Л., Седова И.Б. Фузариотоксины в продовольственном зерне и продуктах его переработки. // Гигиена и санитария. 2003. - №6. - С. 51-52.

4. Кравченко Л.В., Тутельян В.А. Биобезопасность. Микотоксины — природные контаминанты пищи. // Вопросы питания. 2005. - № 3. - С. 3-13.

5. MP №3245-85. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания охратоксина А в пищевых продуктах. Москва, 1985. - 12 с.

6. МУ № 225. Современные принципы и методы вскармливания детей первого года жизни. — Москва, 1999. — 50 с.

7. Покровский А.А., Кравченко Л.В., Тутельян В.А. Афлатоксины. М.: ВИНИТИ АН СССР. Токсикология, т.8, 1997. - 107 с.

8. Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 143 с.

9. СанПиН 2.3.2.1940-05. Организация детского питания: Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005. - 24 с.

10. Саркисов А.Х. Микотоксикозы. М.: Сельхозиздат. - 1954. - 216 с.

11. Тутельян В. А, Кравченко J1.B. Микотоксины (Медицинские и биологические аспекты). М.: Медицина, 1985. - 319 с.

12. Эллер К.И, Пименова В.В, Киселева М.Г, Передеряев О.И, Аксёнов И.В, Медведев Ю.В. Метод одновременного определения содержания цитринина и охратоксина А в зерне и зернопродуктах. // Вопросы питания. 2006. - №4. - С. 53-57.

13. Abarca M.L, Accensi F, Bragulat M.R, Cabanes F.J. Current importance of ochratoxin A-producing Aspergillus spp. // J. Food Prot. 2001. - Vol. 64. - P. 903-906.

14. Abid S, Hassen W, Achour A, Skhiri H, Maaroufi K, Ellouz F, Creppy E, Bacha H. Ochratoxin A and human chronic nephropathy in Tunisia: is the situation endemic? // Hum. Exp. Toxicol. 2003. - Vol. 22. - P. 77-84.

15. Al-Anati L, Petzinger E. Immunotoxic activity of ochratoxin A. // J. Vet. Pharmacol. Ther. 2006. - Vol. 29. - P. 79-90.

16. Alldrick A. J. The effect of processing on the occurrence of ochratoxin A in cereals. // Food Addit. Contam. 1996. - Vol. 13 (suppl.). - P. 27-28.

17. Araguas С., Gonzalez-Penas E., Cerain A.L. Study on ochratoxin A in cereal-derived products from Spain. // Food Chemistry. 2005. - Vol. 92. - P. 459464.

18. Assaf H., Betbeder A.M., Creppy E.E., Pallardy M., Azouri H. Ochratoxin A levels in human plasma and foods in Lebanon. // Hum. Exp. Toxicol. 2004. -Vol. 23.-P. 495-501.

19. Aydin G., Ozcelik N., Cicek E., Soyoz M. Histopathologic changes in liver and renal tissues induced by Ochratoxin A and melatonin in rats. // Hum. Exp. Toxicol. 2003. - Vol. 22. - P. 383-391.

20. Bakker M., Pieters M.N. Risk Assessment of Ochratoxin A in the Netherlands. RIVM report 388802025/2002. RIVM, 2002. - 24 p.

21. Baliukoniene V., Bakutis В., Stankevicius H. Mycological and mycotoxicological evaluation of grain. // Ann. Agric. Environ. Med. 2003. -Vol. 10.-P. 223-227.

22. Battilani P., Pietri A. Ochratoxin A in grapes and wine. // Europ. J. Plant Path. -2002.-Vol. 108.-P. 639-643.

23. Bauer J., Gareis M., Gedek B. Determination and occurrence of ochratoxin A in slaughtered swine. // Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. 1984. - Vol. 97. -P. 279-283.

24. Bayman P., Baker J.L., Doster M.A., Michailides T.J., Mahoney N.E. Ochratoxin production by the Aspergillus ochraceus group and Aspergillus alliaceus. // Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol. 68. - P. 2326-2329.

25. Becker M., Degelmann P., Herderich M., Schreier P., Humpf H-U. Column liquid chromatography-electrospray ionisation-tandem mass spectrometry for analysis of ochratoxin. // J. Chromatogr. A. 1998. - Vol. 818. - P. 260-264.

26. Beker D., Radic B. Fast determination of ochratoxin A in serum by liquid chromatography: comparison with enzymic spectrofluorimetric method. // J. Chromatogr. 1991. - Vol. 570. - P. 441-445.

27. Belmadani A., Tramu G., Betbeder A.M., Steyn P.S., Creppy E.E. Regional selectivity to ochratoxin A, distribution and cytotoxicity in rat brain. // Arch. Toxicol. 1998. - Vol. 72. - P. 656-662.

28. Belmadani A., Steyn P.S., Tramu G., Betbeder A.M., Baudrimont I., Creppy E.E. Selective toxicity of ochratoxin A in primary cultures from different brain regions. // Arch. Toxicol. 1999. - Vol. 73. - P. 108-114.

29. Bendele A.M., Carlton W.W., Krogh P., Lillehoj E.B. Ochratoxin A carcinogenesis in the (C57BL/6J X C3H)F1 mouse. // J. Natl. Cancer Inst. -1985.-Vol. 75.-P. 733-742.

30. Beretta В., De Domenico R., Gaiaschi A., Ballabio C., Galli C.L., Gigliotti C., Restani P. Ochratoxin A in cereal-based baby foods: occurrence and safety evaluation. // Food Addit. Contam. 2002. - Vol. 19. - P. 70-75.

31. Blank R., Rolfs J.P., Sudekum K.H., Frohlich A.A., Marquardt R.R., Wolffram S. Effects of chronic ingestion of ochratoxin a on blood levels and excretion ofthe mycotoxin in sheep. // J. Agric. Food Chem. 2003. - Vol. 51. - P. 68996905.

32. Boorman G.A. Toxicology and carcinogenesis studies of ochratoxin A in F344/N rats. NTP Technical Report NTP TR 358. 1989. - 142 p.

33. Boudra H., Bars P., Bars J. Thermostability of ochratoxin A in wheat under two moisture conditions. // Appl. Environ. Microbiol. 1995. - Vol. 61. - P. 1156-1158.

34. Bow D.A., Perry J.L., Simon J.D., Pritchard J.B. The impact of plasma protein binding on the renal transport of organic anions. // J. Pharmacol. Exp. Ther. -2006. Vol. 316. - P. 349-355.

35. Breitholtz A., Olsen M., Dahlback A., Hult K. Plasma ochratoxin A levels in three Swedish populations surveyed using an ion-pair HPLC technique. // Food Addit. Contam. 1991. - Vol. 8. - P. 183-192.

36. Breitholtz-Emanuelsson A., Olsen M., Oskarsson A., Palminger I., Hult K. Ochratoxin A in cow's milk and in human milk with corresponding human blood samples. // J. AOAC Int. 1993. - Vol. 76. - P. 842-846.

37. Burdaspal P., Legarda T.M., Gilbert J. // Determination of ochratoxin A in baby food by immunoaffinity column cleanup with liquid chromatography: interlaboratory study. // J. AOAC Int. 2001. - Vol. 84. - P. 1445-1452.

38. Cabanes F J., Accensi F., Bragulat M.R., Abarca M.L., Castella G., Minguez S., Pons A. What is the source of ochratoxin A in wine? // Int. J. Food Microbiol. 2002. - Vol. 79. - P. 213-215.

39. Carratu M.R., Belmadani A., Cuomo V., Creppy E.E. Potassium channel modulation by the pseudopeptide ochratoxin A in rat nerve fibers. // J. Neurosci. Res. 1998.-Vol. 53.-P. 312-317.

40. Castellari M., Fabbri S., Fabiani A., Amati A., Galassi S. Comparison of different immunoaffinity clean-up procedures for high-performance liquid chromatographic analysis of ochratoxin A in wines. // J. Chromatogr. A. -2000.-Vol. 888.-P. 129-136.

41. Castells M., Marin S., Sanchis V., Ramos A.J. Fate of mycotoxins in cereals during extrusion cooking: a review. Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22. -P. 150-157.

42. Chang F.C., Chu F.S. The fate of ochratoxin A in rats. // Food Cosmet. Toxicol. 1977. - Vol. 15. - P. 199-204.

43. Codex Alimentarius Commission. Report of the 36th Session of the Codex Committee on Food Additives and Contaminants. Rotterdam, 2004. - 210 p.

44. Coker D.B. Design of sampling plans for determination of mycotoxins in foods and feeds. In: Mycotoxins in Agriculture and Food Safety, Sinha K.K. and BhatnagarD. (ed.). New York, 1998. - P. 109-133.

45. Commission Directive 2002/26/EC. // Official Journal of the European Union. 2002. — L. 75.-P. 38-43.

46. Commission Directive 2005/5/EC. // Official Journal of the European Union. -2005.-L. 27. -P. 38-40.

47. Commission Regulation (EC) № 123/2005 of 26 January 2005 // Official Journal of the European Union. 2005. - L. 25. - P. 3-5.

48. Corneli S., Maragos C.M. Capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence: method for the mycotoxin ochratoxin A. // J. Agric. Food Chem. 1998.-Vol. 46.-P. 3162-3165.

49. Creppy E.E., Baudrimont I., Betbeder A.M. Prevention of nephrotoxicity of ochratoxin A, a food contaminant. // Toxicol Lett. 1995. - Vol. 82-83. - P. 869-877.

50. Curtui V.G., Gareis M., Usleber E., Martlbauer E. Survey of Romanian-slaughtered pigs for the occurrence of mycotoxins ochratoxins A and B, and zearalenone. // Food Addit. Contam. 2001. - Vol. 18. - P. 730-738.

51. Dall'Asta C., Galaverna G., Dossena A., Marchelli R. Reversed-phase liquid chromatographic method for the determination of ochratoxin A in wine. // J. Chromatogr. A. 2004. - Vol. 1024. - P. 275-279.

52. Danks С., Ostoja-Starzewska S., Flint J., Banks J.N. The development of a lateral flow device for the discrimination of OTA producing and non-producing fungi. // Aspects of Applied Biology. 2003. - Vol. 68. - P. 21-28.

53. De Saeger S., Sibanda L., Desmet A., Van Peteghem C. A collaborative study to validate novel field immunoassay kits for rapid mycotoxin detection. // Int. J. Food Microbiol. 2002. - Vol. 75. - P. 135-142.

54. De Saeger S., Dumoulin F., Van Peteghem C. Quantitative determination of ochratoxin A in kidneys by liquid chromatography/mass spectrometry. // Rapid Commun. Mass. Spectrom. 2004. - Vol. 18. - P. 2661-2668.

55. Dietrich D.R., Heussner A.H., O'Brien E. Ochratoxin A: comparative pharmacokinetics and toxicological implications (experimental and domestic animals and humans). // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 45-52.

56. Domijan A.M., Peraica M., Fuchs R., Lucic A., Radic В., Balija M., Bosanac I., Grgicevic D. Ochratoxin A in blood of healthy population in Zagreb. // Arh. Hig. Rada Toksikol. 1999. - Vol. 50. - P. 263-271.

57. Domijan A.M., Peraica M., Miletic-Medved M., Lucic A., Fuchs R. Two different clean-up procedures for liquid chromatographic determination of ochratoxin A in urine. // J. Chromatogr. В Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. -2003.-Vol. 798.-P. 317-321.

58. Domijan A.M., Peraica M., Jurjevic Z., Ivic D., Cvjetkovic B. Fumonisin Bb fumonisin B2, zearalenone and ochratoxin A contamination of maize in Croatia. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22. - P. 677-680.

59. Dragacci S, Grosso F, Bire R, Fremy J.M, Coulon S. A French monitoring programme for determining ochratoxin A occurrence in pig kidneys. // Nat. Toxins. 1999. - Vol. 7. - P. 167-173.

60. Driffield M, Hird S.J, MacDonald S.J. The occurrence of a range of mycotoxins in animal offal food products by HPLS-MS/MS. // Asp. Appl. Biol. 2003. - Vol. 68. - P. 205-210.

61. EFSA. Opinion of the Scientific Panel on Contaminants in Food Chain on a request from the Commission related to ochratoxin A (OTA) as undesirable substance in animal feed. Request № EFSA-Q-2003-039. // The EFSA Journal. -2004.- Vol. 101.-P. 1-36.

62. El-Banna A. A, Scott P. M. Fate of mycotoxins during processing. III. Ochratoxin A during cooking of faba beans (Vicia faba) and polished wheat. // J. FoodProt. 1984. - Vol. 47. - P. 189-192.

63. EN 15141-2. Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products Part 1: High performance liquid chromatographic method with bicarbonate clean up. - 1998.

64. Entwisle A.C, Williams A.C, Mann P.J, Slack P.T, Gilbert J. Liquid chromatographic method with immunoafflnity column cleanup for determination of ochratoxin A in barley: collaborative study. // J. AOAC Int. -2000.- Vol. 83.-P. 1377-1383.

65. FAO Food and Nutrition Paper 81. Worldwide regulations for mycotoxins in food and feed in 2003. Rome, 2004. - 180 p.

66. FAO Statistical Databases. Food Balance Sheet. Russian Federation, 2003. (http://faostat.fao.org/faostat/collections).

67. FAPAS. Ochratoxin analisis. Report № 1738. York, 2005. - 20 p.

68. FAPAS. Protocol for the Organisation and Analysis of Data, 6th Edition. -York, 2002. 40 p.

69. Fazekas В., Tar A.K., Zomborszky-Kovacs M. Ochratoxin A contamination of cereal grains and coffee in Hungary in the year 2001. // Acta Vet. Hung. -2002. Vol. 50. - P. 177-188.

70. Fink-Gremmels J. Ochratoxin A in food: recent developments and significance. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 1-5.

71. Food Standards Agency. Food Survey Information Sheet 68/04: Survey of baby foods for mycotoxins. 2004. - 45 p.

72. Freese L., Friedrich R., Kendall D., Tanner S. Variability of deoxynivalenol measurements in barley. // J. AOAC Int. 2000. - Vol. 83. - P. 1259-1263.

73. Fuchs R., Peraica M. Ochratoxin A in human kidney diseases. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 53-57.

74. Furlong E.B., Soares L.M.V., Lasca C.C., Kohara E.Y. Mycotoxins and fungi in wheat stored in elevators in the state of Rio Grande do Sul, Brasil. // Food Addit. Contam. 1995. - Vol. 12. - P. 683-688.

75. Galtier P., Alvinerie M., Charpenteau J.L. The pharmacokinetic profiles of ochratoxin A in pigs, rabbits and chickens. // Food Cosmet. Toxicol. 1981. -Vol. 19.-P. 735-738.

76. Galtier P., Charpenteau J.L., Alvinerie M., Labouche C. The pharmacokinetic profile of ochratoxin A in the rat after oral and intravenous administration. // Drug Metab. Dispos. 1979. - Vol. 7. - P. 429-434.

77. Gautier J., Richoz J., Welti D.H., Markovic J., Gremaud E., Guengerich F.P., Turesky R.J. Metabolism of ochratoxin A: absence of formation of genotoxic derivatives by human and rat enzymes. // Chem. Res. Toxicol. 2001. - Vol. 14.-P. 34-45.

78. GEMS/FOOD. Instructions for electronic submission of data on chemical contaminants in food and the diet. Geneva: WHO, 2003. - 60 p.

79. Gilbert J. Sampling and analysis for ochratoxin A in foods. // Food Addit. Contam. 1996. - Vol. 13 (suppl.). - P. 17-18.

80. Gilbert J., Brereton P., MacDonald S. Assessment of dietary exposure to ochratoxin A in the UK using a duplicate diet approach and analysis of urine and plasma samples. // Food Addit. Contam. 2001. - Vol. 18. - P. 10881093.

81. Golinski P., Grabarkiewicz-Szczesna J., Chelkowski J., Hult K., Kostecki M. Possible sources of ochratoxin A in human blood in Poland. // IARC Scientific Publications.-1991.-Vol. 115.-P. 153-158.

82. Gumus Т., Arici M., Demirci M. A survey of burley, malt and beer contamination with ochratoxin A in Turkey. // J. Inst. Brew. 2004. - Vol. 110. -P. 146-149.

83. Hagelberg S., Halt K., Fuchs R. Toxicokinetics of ochratoxin A in several species and its plasma-binding properties. // J. Appl. Toxicol. 1989. - Vol. 9. -P. 91-96.

84. Harris J.P., Mantle P.G. Biosynthesis of ochratoxins by Aspergillus ochraceus. // Phytochemistry. 2001. - Vol. 58. - P. 709-716.

85. Harwig J., Kuiper-Goodman Т., Scott P.M., Microbial food toxicants: ochratoxins, in Handbook of Foodborne Diseases of Biological Origin (Rechcigl M ed) CRC Press, Boca Raton, FL, 1983. P. 193-238.

86. Heussner A.H., O'Brien E., Dietrich D.R. Species- and sex-specific variations in binding of ochratoxin A by renal proteins in vitro. // Exp. Toxicol. Pathol. -2002.-Vol. 54.-P. 151-159.

87. Hohler D. Ochratoxin A in food and feed: occurrence, legislation and mode of action. // Z. Ernahrungswiss. 1998. - Vol. 37. - P. 2-12.

88. Hohler D., Sudekum K.H., Wolffram S., Frohlich A.A., Marquardt R.R. Metabolism and excretion of ochratoxin A fed to sheep. // J. Anim. Sci. -1999. Vol. 77. - P. 1217-1223.

89. Hood R.D., Kuczuk M.H., Szczech G.M. Effects in mice of simultaneous prenatal exposure to ochratoxin A and T-2 toxin. // Teratology. 1978. - Vol. 17.-P. 25-29.

90. Howell M.V., Taylor P.W. Determination of aflatoxins, ochratoxin a, and zearalenone in mixed feeds, with detection by thin layer chromatography orhigh performance liquid chromatography. // J. Assoc. Off Anal. Chem. 1981. -Vol. 64.-P. 1356-1363.

91. Hult K., Hokby E., Hagglund U., Gatenbeck S., Rutqvist L., Sellyey G. Ochratoxin A in pig blood: method of analysis and use as a tool for feed studies. // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - Vol. 38. - P. 772-776.

92. Hurst W.J., Martin R.A. Jr. High-performance liquid chromatographic determination of ochratoxin A in artificially contaminated cocoa beans using automated sample clean-up. // J. Chromatogr. A. 1998. - Vol. 810. - P. 89-94.

93. IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Vol. 56. Some Naturally Occurring Substances: Food Items and Constituents, Heterocyclic Aromatic Amines and Mycotoxins. Lion, 1993. - 599 p.

94. ICC №165. Determination of ochratoxin A in wheat and wheat products. -1996.- 10 c.

95. JECFA. Safety evaluation of certain mycotoxins in food. (WHO Food Additives Series 47 FAO Food and Nutrition Paper 74). Geneva: WHO, 2001.-691 p.

96. Jiao Y., Blaas W., Ruhl C., Weber R. Identification of ochratoxin A in food samples by chemical derivatization and gas chromatography-mass spectrometry. // J. Chromatogr. 1992. - Vol. 595. - P. 364-367.

97. Johansson A.S., Whitaker T.B., Giesbrecht F.G., Hagler W.M., Young J.H. Testing shelled corn for aflatoxin, Part II: modeling the observed distribution of aflatoxin test results. // J. AOAC Int. 2000. - Vol. 83. - P. 1270-1278.

98. Jorgensen К. Occurrence of ochratoxin A in commodities and processed food -A review of EU occurrence data. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 26-30.

99. Jorgensen K., Petersen A. Content of ochratoxin A in paired kidney and meat samples from healthy Danish slaughter pigs. // Food Addit. Contam. 2002. -Vol. 19.-P. 562-567.

100. Jorgensen K., Rusmussen G., Thorup I. Ochratoxin A in Danish cereals 19861992 and daily intake by the Danish population. // Food Addit. Contam. -1996.-Vol. 13.-P. 95-104.

101. Jorgensen K., Vahl M. Analysis of ochratoxin A in pig kidney and rye flour using liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS/MS). // Food Addit. Contam. 1999. - Vol. 16. - P. 451-456.

102. Jornet D., Busto O., Guasch J. Solid-phase extraction applied to the determination of ochratoxin A in wines by reversed-phase high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. - Vol. 882. - P. 29-35.

103. Jurcevic Z., Solfrizzo M., Cvjetkovic В., Avantaggiato G., Visconti A. Ochratoxin A and fumonisins (Bi and B2) in maize from Balkan nephropathy endemic and non endemic areas of Croatia. // Mycotoxin Res. 1999. - Vol. 15.-P. 67-80.

104. Kawamura O., Sato S., Kajii H., Nagayama S., Ohtani K., Chiba J., Ueno Y. A sensitive enzyme-linked immunosorbent assay of ochratoxin A based on monoclonal antibodies. // Toxicon. 1989. - Vol. 27. - P. 887-897.

105. Klaassen C.D. Distribution, excretion and absorption of toxicants. In Casarett and Doull's Toxicology. The basic science of poisons. Edited by Klaassen C.D., Amdur M.O, Doull J. New York, 1986. - P. 33-66.

106. Krogh P. Mycotoxic porcine nephropathy: a possible model for Balkan endemic nephropathy. // Endemic nephropathy, Proceedings of the Second International Symposium on Endemic nephropathy 9-12 November 1972. -Sofia, 1974.-P. 266-270.

107. Krogh P. Casual associations of mycotoxic nephropathy. // Acta Pathol. Microbiol. Scand. Suppl. 1978. - Vol. 269. - P. 1-28.

108. Kuhn I., Valenta H, Rohr K. Determination of ochratoxin A in bile of swine by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. В Biomed. Appl. 1995. - Vol. 668. - P. 333-337.

109. Kuiper-Goodman T. Approaches to the risk analysis of mycotoxin in the food supply. // Food Nutr. Agric. 1999. - Vol. 23. - P. 10-16.

110. Kuiper-Goodman T. Food safety: Micotoxins and Phycotoxins in Perspective. In: Miraglia M, van Egmond H. P, Brera C, Gilbert J. (eds.). Mycotoxin and Phycotoxins: Developments in Chemistry, Toxicology and Food Safety. Fort Collins, 1998.-P. 25-48.

111. Kuiper-Goodman T, Scott P.M. Risk assessment of the mycotoxin ochratoxin A. // Biomedical and Environmental Sciences. 1989. - Vol. 2. - P. 179-248.

112. Kumagai S, Aibara K. Intestinal absorption and secretion of ochratoxin A in the rat. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1982. - Vol. 64. - P. 94-102.

113. Langseth W., Ellingsen Y., Nymoen U., Okland E.M. High performance liquid chromatographic determination of zearalenone and ochratoxin A in cereals and feed. // J. Chromatogr. 1989. - Vol. 478. - P. 269-274.

114. Langseth W., Nymoen U., Bergsjo B. Ochratoxin A in plasma of Norwegian swine determined by an HPLC column-switching method. // Nat. Toxins. -1993.-Vol. 1.-P. 216-221.

115. Larsen Т.О., Svendsen A., Smedsgaard J. Biochemical characterization of ochratoxin A-producing strains of the genus Penicillium. // Appl Environ Microbiol. 2001. - Vol. 67. - P. 3630-3635.

116. Larsson K., Moeller T. Liquid chromatographic determination of ochratoxin A in barley, wheat bran and rye by the AOAC/IUPAC/NMKL method: NMKL collaborative study. // J. AOAC Int. 1996. - Vol. 79. - P. 1102-1105.

117. Lau B.P., Scott P.M., Lewis D.A., Kanhere S.R. Quantitative determination of ochratoxin A by liquid chromatography/electrospray tandem mass spectrometry. // J. Mass. Spectrom. 2000. - Vol. 35. - P. 23-32.

118. Lee S.C., Chu F.S. Enzyme-linked immunosorbent assay of ochratoxin A in wheat. // J. Assoc. Off Anal. Chem. 1984. - Vol. 67. - P. 45-49.

119. Leitner A., Zollner P., Paolillo A., Stroka J., Papadopoulou-Bouraoui A., Jaborek S., Anklam E., Lindner W. Comparison of methods for the determination of ochratoxin A in wine. // Analitica Chimica Acta. 2002. -Vol. 453.-P. 33-41.

120. Levi C.P. Collaborative study of a method for the determination of ochratoxin A in green coffee. // J. Assoc. Off Anal. Chem. 1975. - Vol. 58. - P. 258-262.

121. Li S., Marquardt R.R., Frohlich A.A. Identification of ochratoxins and some of their metabolites in bile and urine of rats. // Food Chem. Toxicol. 2000. -Vol. 38.-P. 141-52.

122. Lin L., Zhang J., Wang P., Wang Y., Chen J. Thin-layer chromatography of mycotoxins and comparison with other chromatographic methods. // J. Chromatogr. A. 1998. - Vol. 815. - P. 3-20.

123. Lindenmeier M., Schieberle P., Rychlik M. Quantification of ochratoxin A in foods by a stable isotope dilution assay using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. // J. Chromatogr. A. 2004. -Vol. 1023.-P. 57-66.

124. Lombaert G. A., Pellaers P., Roscoe V., Mankotia M., Neil R.3 Scott P. M. Mycotoxins in infant cereal foods from the Canadian retail market. // Food Addit. Contam. 2003. - Vol. 20. - P. 494-504.

125. Lund F., Frisvad J.C. Penicillium verrucosum in wheat and barley indicates presence of ochratoxin A. // J. Appl. Microbiol. 2003. - Vol. 95. - P. 11171123.

126. Luster M.I., Germolec D.R., Burleson G.R., Jameson C.W., Ackermann M.F., Lamm K.R., Hayes H.T. Selective immunosuppression in mice of natural killer cell activity by ochratoxin A. // Cancer Res. 1987. - Vol. 47. - P. 2259-2263.

127. Magan N., Aldred D. Conditions of formation of ochratoxin A in drying, transport and in different commodities. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.).-P. 10-16.

128. Majerus P., Weber R., Wolff J. Detection and determination of ochratoxin A in cereals and cereal products. // J. Fed. Health Office. 1994. - Vol. 37. - P. 454-458.

129. Malir F., Jergeova Z., Severa J., Cerna M., Smid J., Betbeder A.M., Baudrimont I., Creppy E.E. The level of ochratoxin A in blood serum of adults in the Czech Republic. // Rev. Med. Vet. 1998. - Vol. 149. - P. 710.

130. Mally A., Dekant W. DNA adduct formation by ochratoxin A: review of the available evidence. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P.65-74.

131. Mantle P., Kulinskaya E., Nestler S. Renal tumourigenesis in male rats in response to chronic dietary ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 2005. -Vol. 22 (suppl.).-P. 58-64.

132. Miraglia M., Brera C., Colatosti M. Application of biomarkers to assessment of risk to human health from exposure to mycotoxins. // Microchemical Journal. -1996. Vol. 54. - P. 472-477.

133. Miraglia M., De Santis В., Minardi V., Debegnach F., Brera C. The role of sampling in mycotoxin contamination: An holistic view. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl 1). - P. 31-36.

134. Monaci L., Palmisano F. Determination of ochratoxin A in foods: state-of-the-art and analytical challenges. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. - Vol. 378. - P. 96-103.

135. Monaci L., Tantillo G., Palmisano F. Determination of ochratoxin A in pig tissues by liquid-liquid extraction and clean-up and high-performance liquid' chromatography. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. - Vol. 378. - P. 1777-1782.

136. Morgan M.R., McNerney R., Chan H.W. Enzyme-linked immunosorbent assay of ochratoxin A in barley. // J. Assoc. Off Anal. Chem. 1983. - Vol. 66. - P. 1481-1484.

137. Muller G., Kielstein P., Rosner H., Berndt A., Heller M., Kohler H. Studies of the influence of ochratoxin A on immune and defence reactions in weaners. // Mycoses. 1999. - Vol. 42. - P. 495-505.

138. Muller H.M., Muller K., Steingass H. Effect of feeding regime on the metabolism of ochratoxin A during the in vitro incubation in buffered rumen fluid from cows. // Arch. Tierernahr. 2001. - Vol. 54. - P. 265-279.

139. Nesheim S., Hardin N.F., Trucksess M.W., Eppley J. Analysis of ochratoxins A and В and their esters in barley, using partition and thin-layer chromatography. II collaborative study. // J. AO AC Int. 1973. - Vol. 56. - P. 817-821.

140. Nesheim S., Stack M.E., Trucksess R.M., Eppley J. Rapid solvent-efficient method for liquid chromatographic determination of ochratoxin A in corn,s barley and kidney: collaborative study. // J. AOAC Int. 1992. - Vol. 75. - P. 481-488.

141. Ngundi M.M., Shriver-Lake L.C., Moore M.H., Lassman M.E., Ligler F.S., Taitt C.R. Array biosensor for detection of ochratoxin A in cereals and beverages. // Anal. Chem. 2005. - Vol. 77. - P. 148-154.

142. O'Brien E., Dietrich D.R. Ochratoxin A: the continuing enigma. // Crit. Rev. Toxicol. 2005. - Vol. 35. - P. 33-60.

143. O'Brien E., Prietz A., Dietrich D.R. Investigation of the teratogenic potential of ochratoxin A and В using the FETAX system. // Birth Defects Res. B. Dev. Reprod. Toxicol. 2005. - Vol. 74. - P. 417-423.

144. Ochraprep. Quantitative detection of ochratoxin A. 2003. - 5 p.

145. Olsen M., Jonsson N., Magan N., Banks J., Fanelli C., Rizzo A., Haikara A., Dobson A., Frisvad J., Holmes S., Olkku J., Persson S.J., Borjesson T. Prevention of ochratoxin A in cereals in Europe. // Adv. Exp. Med. Biol. -2006. Vol. 571. - P. 317-342.

146. Olsson J., Borjesson Т., Lundstedt Т., Schnurer J. Detection and quantification of ochratoxin A and deoxynivalenol in barley grains by GC-MS and electronic nose. // Int. J. Food Microbiol. 2002. - Vol. 72. - P. 203-214.

147. Ominski K.H, Frohlich A.A, Marquardt R.R, Crow G.H, Abramson D. The incidence and distribution of ochratoxin A in western Canadian swine. // Food Addit. Contain. 1996. - Vol. 13. - P. 185-198.

148. Osborne B. G, Ibe F. I, Brown G. L, Patagine F, Scudamore K. A, Banks J. N, Hetmanski M. T. The effects of milling and processing on wheat contaminated with ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 1996. - Vol. 13. - P. 141-153.

149. Otteneder H, Majerus P. Occurrence of ochratoxin A (OTA) in wines: influence of the type of wine and its geographical origin. // Food Addit. Contam. 2000. - Vol. 17. - P. 793-798.

150. Otteneder H, Majerus P. Ochratoxin A (OTA) in coffee: nation-wide evaluation of data collected by German Food Control 1995-1999. // Food Addit. Contam. 2001. - Vol. 18. - P. 431-435.

151. Park J.W, Chung S.H, Lee C, Kim Y.B. Fate of ochratoxin a during cooking of naturally contaminated polished rice. // J. Food Prot. 2005. - Vol. 68. - P. 2107-2111.

152. Park J.W, Kim E.K, Shon D.H, Kim Y.B. Natural co-occurrence of aflatoxin Bl, fumonisin B1 and ochratoxin A in barley and corn foods from Korea. // Food Addit. Contam. 2002. - Vol. 19. - P. 1073-1080.

153. Pascale M., Visconti A. Rapid method for the determination of ochratoxin A in urine by immunoaffinity column clean-up and high-performance liquid chromatography. // Mycopathologia. 2000. - Vol. 152. - P. 91-95.

154. Patel S., Hazel C.M., Winterton A.G., Mortby E. Survey of ethnic foods for mycotoxins. // Food Addit. Contam. 1996. - Vol. 13. - P. 833-841.

155. Pelegri J.M., Velazquez C., Sanchis V., Canela R. Solid phase extraction on sax columns as an alternative for ochratoxin A analysis in maize. // Rev. Iberoam. Micol. 1997. - Vol. 14. - P. 194-196.

156. Peraica M., Domijan A.M., Fuchs R., Lucic A., Radic B. The occurrence of ochratoxin A in blood in general population of Croatia. // Toxicol. Lett. — 1999.-Vol. 110.-P. 105-112.

157. Perez de Obanos A., Lopez de Cerain A., Jimenez A.M., Gonzalez-Penas E., Bello J. Ochratoxin A in human plasma: new data of exposition in Spain. // Rev. Toxicol. 2001. - Vol. 18. - P. 19-23.

158. Petrik J., Zanic-Grubisic Т., Barisic K., Pepeljnjak S., Radic В., Ferencic Z., Cepelak I. Apoptosis and oxidative stress induced by ochratoxin A in rat kidney. // Arch. Toxicol. 2003. - Vol. 77. - P. 685-693.

159. Pfohl-Leszkowicz A., Castegnaro M. Further arguments in favour of direct covalent binding of Ochratoxin A (OTA) after metabolic biotransformation. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 75-87.

160. Phillips T.D., Stein A.F., Ivie G.W., Kubena L.F., Hayes A.W., Heidelbaugh N.D. High pressure liquid chromatographic determination of an O-methyl,methyl ester derivative of ochratoxin A. // J. Assoc. Off Anal. Chem. — 1983.-Vol. 66.-P. 570-576.

161. Pitt J.I. Toxigenic fungi: which are important? // Med. Mycol. 2000. - Vol. 38.-P. 17-22.

162. Pittet A. Natural occurrence of mycotoxins in food and feeds an updated review. // Revue de MedecineVeterinaire. - 1998. - Vol. 149. - P. 479-492.

163. Plestina R. Nephrotoxicity of ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 1996. -Vol. 13 (suppl.).-P. 49-50.

164. Puntaric D., Bosnir J., Smit Z., Skes I., Baklaic Z. Ochratoxin A in Corn and Wheat: Geographical Association with Endemic Nephropathy. // Croat. Med. J. -2001.-Vol. 42.-P. 175-180.

165. Rahimtula A.D., Bereziat J.C., Bussacchini G.V., Bartsch H. Lipid peroxidation as a possible cause of ochratoxin A toxicity. // Biochemical Pharmacology. 1988. - Vol. 37. - P. 4469-4477.

166. Ringot D., Chango A., Schneider Y.J., Larondelle Y. Toxicokinetics and toxicodynamics of ochratoxin A, an update. // Chem. Biol. Interact. 2006. -Vol. 159.-P. 18-46.

167. Ruprich J., Ostry V. Study of human exposure to ochratoxin A and assessment of possible sources. // Cent. Eur. J. Public Health. 1993a. - Vol. 1. - P. 46-48.

168. Ruprich J., Ostry V. Health risk assessment of the mycotoxin ochratoxin A to humans: Czech Republic Brno - 1991/92. // Cent. Eur. J. Public Health. -1993b.-Vol. l.-P. 86-93.

169. Sauvant C., Holzinger H., Mildenberger S., Gekle M. Exposure to nephrotoxic ochratoxin A enhances collagen secretion in human renal proximal tubular., cells. // Mol. Nutr. Food Res. 2005. - Vol. 49. - P. 31-37.

170. Sava V., Reunova O., Velasquez A., Harbison R., Sanchez-Ramos J. Acute neurotoxic effects of the fungal metabolite ochratoxin-A. // Neurotoxicology. -2006.-Vol. 27.-P. 82-92.

171. Schuster E., Dunn-Coleman N., Frisvad J.C., Van Dijck P.W. On the safety of Aspergillus niger a review. // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2002. - Vol. 59. -P. 426-435.

172. Schwartz G.G. Hypothesis: does ochratoxin A cause testicular cancer? // Cancer Causes Control. 2002. - Vol. 13. - P. 91-100.

173. Scientific Committee on Food. Opinion on ochratoxin A. Bruxelles, 1998. -8 p.

174. Scott P.M. Mycotoxins transmitted into beer from contaminated grains during brewing. // J. AOAC Int. 1996. - Vol. 79. - P. 875-882.

175. Scott P.M. Biomarkers of human exposure to ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl. 1). - P. 99-107.

176. Scott P.M., Kanhere S.R., Lau B.P., Lewis D.A., Hayward S., Ryan J.J., Kuiper-Goodman T. Survey of Canadian human blood plasma for ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 1998. - Vol. 15. - P. 555-562.

177. Scudamore K.A. Prevention of ochratoxin A in commodities and likely effects of processing fractionation and animal feeds. // Food Addit. Contam. 2005. -Vol. 22 (suppl. 1).-P. 17-25.

178. Scudamore K.A., MacDonald S.J. A collaborative study of an HPLC method for determination of ochratoxin A in wheat using immunoaffinity column clean-up. // Food Addit. Contam. 1998. - Vol. 15. - P. 401-410.

179. Scudamore K.A., Patel S., Breeze V. Surveillance of stored grain from the 1997 harvest in the United Kingdom for ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 1999. - Vol. 16. - P. 281-290.

180. Scudamore K.A., Banks J., MacDonald S.J. Fate of ochratoxin A in the processing of whole wheat grains during milling and bread production. // Food Addit. Contam. 2003. - Vol. 20. - P. 1153-1163.

181. Scudamore K.A., Banks J.N., Guy R.C. Fate of ochratoxin A in the processing of whole wheat grain during extrusion. // Food Addit. Contam. 2004. - Vol. 21.-P. 488-497.

182. Serra B. J. Occurrence of ochratoxin A in cocoa products and chocolate. // J. Agric. Food Chem. 2004. - Vol. 52. - P. 6347-6352.

183. Serra R., Abrunhosa L., Kozakiewicz Z., Venancio A. Black Aspergillus species as ochratoxin A producers in Portuguese wine grapes. // Int. J. Food Microbiol. 2003. - Vol. 88. - P. 63-68.

184. Sharman M., MacDonald S., Gilbert J. Automated liquid chromatographic determination of ochratoxin A in cereals and animal products using immunoaffinity column clean-up. // J. Chromatogr. 1992. - Vol. 603. - P. 285-289.

185. Sharman M., Macdonald S., Sharkey A.J., Gilbert J. Sampling bulk consignments of dried figs for aflatoxin analysis. // Food Addit. Contam. -1994.-Vol. 11.-P. 17-23.

186. Shephard G.S., Fabiani A., Stockenstrom S., Mshicileli N., Sewram V. Quantitation of ochratoxin A in South African wines. // J. Agric. Food Chem. -2003.-Vol. 51.-P. 1102-1106.

187. Shephard G.S., van der Westhuizen L., Gatyeni P.M., Katerere D.R., Marasas W.F. Do fumonisin mycotoxins occur in wheat? // J. Agric. Food Chem. -2005. Vol. 53. - P. 9293-9296.

188. Shotwell O.L., Hesseltine C.W. Five-year study of mycotoxins in Virginia wheat and dent corn. // J. Assoc. Off Anal. Chem. 1983. - Vol. 66. - P. 14661469.

189. Sibanda L, De Saeger S, Barna-Vetro I, Van Peteghem C. Development of a solid-phase cleanup and portable rapid flow-through enzyme immunoassay for the detection of ochratoxin a in roasted coffee. // J. Agric. Food Chem. 2002. -Vol. 50.-P. 6964-6967.

190. Skaug M.A. Levels of ochratoxin A and IgG against conidia of Penicillium verrucosum in blood samples from healthy farm workers. // Ann. Agric. Environ. Med. 2003. - Vol. 10. - P. 73-77.

191. Soares L.M, Rodriguez-Amaya D.B. Screening and quantitation of ochratoxin A in corn, peanuts, beans, rice, and cassava. // J. Assoc. Off Anal. Chem. -1985. Vol. 68. - P. 1128-1130.

192. Solfrizzo M, Avantaggiato G, Visconti A. Use of various clean-up procedures for the analysis of ochratoxin A in cereals. // J. Cromatogr. A. 1998. - Vol. 815.-P. 67-73.

193. Solti L, Salamon F, Barna-Vetro I, Gyongyosi A, Szabo E, Wolfling A. Ochratoxin A content of human sera determined by a sensitive ELISA. // J. Anal. Toxicol. 1997. - Vol. 21. - P. 44-48.

194. Steyn P.S. Mycotoxins, general view, chemistry and structure. // Toxicol. Lett. 1995.-Vol. 82.-P. 843-851.

195. Studer-Rohr I., Schlatter J, Dietrich D.R. Kinetic parameters and intraindividual fluctuations of ochratoxin A plasma levels in humans. // Arch. Toxicol. 2000. - Vol. 74. - P. 499-510.

196. Subirade I. Fate of ochratoxin A during breadmaking. // Food Addit. Contam. -1996. Vol. 13 (suppl.). - P. 25-26.

197. Takeda N., Akiyama Y., Shibasaki S. Solid-phase extraction and cleanup for liquid chromatographic analysis of ochratoxin A in pig serum. // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1991. - Vol. 47. - P. 198-203.

198. Taniwaki M.H., Pitt J.I., Teixeira A.A., Iamanaka B.T. The source of ochratoxin A in Brazilian coffee and its formation in relation to processing methods. // Int. J. Food Microbiol. 2003. - Vol. 82. - P. 173-179.

199. Tapai K., Teren J., Mesterhazy A. Ochratoxin A in the sera of blood donors and ill persons. // Cereal Res. Commun. 1997. - Vol. 25. - P. 307-308.

200. Task 3.2.7. "Assessment of dietary intake of Ochratoxin A by the population of EU Member States". Co-ordinators: Miraglia M., Brera C. Rome, 2002. -153 p.

201. Thompson M. Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing. // Analyst. 2000. - Vol. 125. - P. 385-386.

202. Thompson M., Wood R. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of (Chemical) Analytical Laboratories. // J. AOAC Int. -1993.-Vol. 76.-P. 926-940.

203. Trucksess M.W., Giler J., Young K., White K.D., Page S.W. Determination and survey of ochratoxin A in wheat, barley and coffee 1997. // J. AOAC Int. - 1999.-Vol. 82.-P. 85-89.

204. Ueno Y., Maki S., Lin J., Furuya M., Sugiura Y., Kawamura O. A 4-year study of plasma ochratoxin A in a selected population in Tokyo by immunoassay and immunoaffinity column-linked HPLC. // Food Chem. Toxicol. 1998. - Vol. 36.-P. 445-449.

205. Valenta H. Chromatographic methods for determination of ochratoxin A in animal and human tissues and fluids. // Journal of Chromatography A. 1998. -Vol. 815.-P. 75-92.

206. Van der Gaag В., Spath S., Dietrich H., Stigter E., Boonzaaijer G., van Osenbruggen Т., Kopal K. Biosensors and multiple mycotoxin analysis. // Food Control. 2003. - Vol. 14. - P. 251-254.

207. Van der Merwe K.J., Steyn P.S., Fourie L. Mycotoxins. II. The constitution of ochratoxins A, B, and C, metabolites of Aspergillus ochraceus Wilh. // J. Chem. Soc. 1965. - Vol. 87. - P. 7083-7088.

208. Van Egmond H.P. Analytical methodology and regulations for ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 1996. - Vol. 13 (suppl.). - P. 11-13.

209. Varga J., Kevei E., Rinyu E., Teren J., Kozakiewicz Z. Ochratoxin production by Aspergillus species. // Appl. Environ. Microbiol. 1996. - Vol. 62. - P. 4461-4464.

210. Verger P., Counil E., Tressou J., Leblanc J.C. Some recent advances in modelling dietary exposure to ochratoxin A. // Food Addit. Contam. 2005. -Vol. 22 (suppl.).-P. 94-98.

211. Visconti A., De Girolamo A. Fitness for purpose ochratoxin A analytical developments. // Food Addit. Contam. - 2005. - Vol. 22 (suppl.). - P. 37-44.

212. Visconti A., Pascale M., Centonze G. Determination of ochratoxin A in wine by means of immunoaffinity column clean-up and high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1999. - Vol. 864. - P. 89-101.

213. Visconti A., Pascale M., Centonze G. Determination of ochratoxin A in domestic and imported beers in italy by immunoaffinity clean-up and liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. - Vol. 888. - P. 321-326.

214. Visconti A., Pascale M., Centonze G. Determination of ochratoxin A in wine and beer by immunoaffinity column cleanup and liquid chromatographic analysis with fluorometric detection: collaborative study. // J. AOAC Int. -2001.-Vol. 84.-P. 1818-1827.

215. Vrabcheva Т., Usleber E., Dietrich R., Martlbauer E. Co-occurrence of ochratoxin A and citrinin in cereals from Bulgarian villages with a history of Balkan endemic nephropathy. // J. Agric. Food Chem. 2000. - Vol. 48. - P. 2483-2488.

216. Wafa E.W., Yahya R.S., Sobh M.A., Eraky I., el-Baz M., el-Gayar H.A., Betbeder A.M., Creppy E.E. Human ochratoxicosis and nephropathy in Egypt: a preliminary study. // Hum. Exp. Toxicol. 1998. - Vol. 17. - P. 124-129.

217. Walker R. Risk assessment of ochratoxin: current views of the European Scientific Committee on Food, the JECFA and the Codex Committee on Food Additives and Contaminants. // Adv. Exp. Med. Biol. 2002. - Vol. 504. - P. 249-55.

218. Walker R., Larsen J.C. Ochratoxin A: Previous risk assessments and issues arising. // Food Addit. Contam. 2005. - Vol. 22 (suppl. 1). - P. 6-9.

219. Wangikar P.B., Dwivedi P., Sinha N., Sharma A.K., Telang A.G. Teratogenic effects in rabbits of simultaneous exposure to ochratoxin A and aflatoxin B1 with special reference to microscopic effects. // Toxicology. 2005. - Vol. 215.-P. 37-47.

220. Wei Y.-H., Lu C.-Y., Lin T.-N., Wei R.-D. Effect of ochratoxin A on rat liver mitochondrial respiration and oxidative phosphorylation. // Toxicology 1985. -Vol. 36.-P. 119-130.

221. Weigert P., Gilbert J., Patey A.L., Key P., Wood R., Barylko-Pikielna N. Analytical quality assurance for the WHO GEMS/Food-EURO programme -results of 1993/94 laboratory proficiency testing. // Food Addit. Contam. -1997.-Vol. 14.-P. 399-410.

222. Whitaker T.B. Sampling foods for mycotoxins. // Food Addit. Contam. 2006. -Vol. 23.-P. 50-61.

223. Whitaker T.B., Springer J., Defize P.R., de Кое W.J., Coker R. Evaluation of sampling plans used in the United States, United Kingdom, and the

224. Netherlands to test raw shelled peanuts for aflatoxin. // J. AO AC Int. 1995. -Vol. 78.-P. 1010-1018.

225. Wilkes J.G, Sutherland J.B. Sample preparation and high-resolution separation of mycotoxins possessing carboxyl groups. // J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl.- 1998.-Vol. 717.-P. 135-156.

226. Wolff J. Ochratoxin A in cereals and cereal products. // Archiv fur Lebensmittelhygiene. 2000. - Vol. 51. - P. 85-88.

227. Wood G.M, Patel S, Entwisle A.C, Boenke A. Ochratoxin A in wheat: a second intercomparison of procedures. // Food Addit. Contam. 1996. -Vol.13.-P. 519-539.

228. Xiao H, Marquardt R.R, Abramson D, Frohlich A.A. Metabolites of ochratoxins in rat urine and in a culture of Aspergillus ochraceus. Appl Environ Microbiol. 1996. - Vol. 62. - P. 648-655.

229. Zepnik H, Pahler A, Schauer U, Dekant W. Ochratoxin A-induced tumor formation: is there a role of reactive ochratoxin A metabolites? // Toxicol. Sci. -2001.-Vol. 59.-P. 59-67.

230. Zepnik H, Volkel W, Dekant W. Toxicokinetics of the mycotoxin ochratoxin A in F 344 rats after oral administration. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2003. -Vol. 192.-P. 36-44.

231. Zheng Z, Hanneken J, Houchins D, King R.S, Lee P, Richard J.L. Validation of an ELISA test kit for the detection of ochratoxin A in several food commodities by comparison with HPLC. // Mycopathologia. 2005. -Vol. 159.-P. 265-272.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов

Оглавление диссертации Аксенов, Илья Владимирович :: 2006 :: Москва

Введение диссертации по теме "Гигиена", Аксенов, Илья Владимирович, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка риска загрязнения охратоксином А продовольственного сырья и пищевых продуктов"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Аксенов, Илья Владимирович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций