Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение антиоксидантного и гепатопротекторного действия новых синтетических производных коричной кислоты

РГ8 УД

"1 1 0;и ьэЗ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ

РОСТОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

ОГУРЦОВ ЮРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

изучение антиоксидантного и гепатопротекторного действия новых синтетических производных

коричной кислоты

14.00.25 — Фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Пятигорском фармацевтическом институте.

Научный руководитель — доктор фармацевтических

наук,

профессор Макаров В. А.

Официальные

Доктор медицинских наук, профессор —

Доктор медицинских наук, профессор —

Ведущая организация —

оппоненты: Гаевый М. Д.

Тюренков И. Н.

Московская медицинская академия им.И.М. Сеченова.

Защита диссертации состоится .....1993 г.

в.........../.л............час. на заседании специализированного совета

К 084.53.03 при Ростовском ордена Дружбы народов медицинском институте (344700, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахиче-ванскпй, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского ордена Дружбы народов медицинского института.

/А

Автореферат разослан «../.:.<...».......ггг:....'....................1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

П. М. БОРЩЕВ.

ОНЦАЯ ХАМШгаС'ШКА РАБОТЫ

Актуальность работц. Заболеваемость гепатитами как в нашей страна, так и за рубежом имеет тенденцию к росту. В материалах ВОЗ (1989), борьба с гепатитами рассматривается как одна из основных проблем здравоохранения. В отдельных регионах нашей страны только по вирусному гепатиту индекс заболеваемости составляет 400 на 100 ООО населения. Резко возрос удолышй вес заболеваний печени, связанных с её токсическим поражением.

Вместе с тем арсенал лекарственных препаратов, используемых е клинической практике для специфического лечения гепатитов весьма ограничен, при этом эффективность одних, например, витаминных препаратов признается, других, например, кортикостероидов - оспаривается. Большинство применяемых препаратов не отвечает требованиям, которые предъявляет к ним современная медицина, т.к. имеют узгай механизм специфического фармакологического действия, влияют лишь на один из этапов развития гепатита и оказывают ряд побочных эффектов на организм (М.Д. Матковский, 1987).

В последние года, в русле исследований в области свободно-радикальных процессов сформировалась стройная теория патогенеза гепатитов, связанного с активацией перокионого окисления липидсв клеточных мембран гепатоцитов. Поэтому изучение и выявление химических веществ способных угнетать процессы лерекисного окисления липидов при патологии печени является весьма актуальной проблемой. Перспективными в этом плане являются фенольные соединения, к которым, в частности, относятся изучаемые в данной работе синтетичес* кие производные коричной кислоты.

Цели и задачи исследования^, Цель» наших исследований явились поиск и изучение веществ с наиболее выраженным антиоксидантным и гепатопротектор!шм действием в новых рядах синтетических про-

взводных коричной кислоты, её амидов и альфа-ацсташдов, а также установление некоторых механизмов их специфического фармакологического действия. Для достижения поставленной цела необходимо было решить следуодие задачи:

- пронести фармакологический скрининг для выявления веществ с еы-рагенным антаоксаданишш действием в радах новых синтетических производных коричной кислоты;

- провести Еторичаый фармакологический скрининг для определения среди выявленных антиоксвдантон веществ, обладающих выраженной гепатозащитной активностью;

- всследсЕать в раду изучен!шх веществ взаимосвязь "структура-активность" ;

- определить острою токсичность отобранных е результате скрининга ьещестЕ А-ДЭ и К-57;

- определить оптимальные дозы и время введения веществ A-I9, К-57 а препаратов сравнения дабунала(структурнкй аналог) и силибора (аналог по дейстшо);

- изучить Елияние веществ A-I9, К-57, дибунола и силибора на динамику активности ашшотрансфераз сыеоротки крови киеотных с экспериментальным токсическим геаататоы;

- изучить' Елаяниэ Ееществ А-19, К-57, дибунола и силибора на изменение уровня общего баша и белковых фракций е сыворотке крови киеотных с токсическим гепатитом;

- изучить влияние веществ A-I9, К-Ь7, дибунола и на содержание ка-лоноеого даальдегида е гоыогенате печени крыс с экспериментальным токсический гепатитом;

- изучить слияние веществ A-I9, К-57, дибунола и силибора на антитоксическую функцию печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом;

- изучить влияние ЕощестЕ A-IS, К-57, дибунола и силибора на зкскре-

горную функцию печени кроликов с экспериментальным токси-

ческим гепатитом;

- изучить влияние веществ А-19, К-57, дибунола и силибора на степень морфологических изменений в печени крыс, вызванных поражением тетрахлорметаном.

Диссертационная работа выдолнена в соответствии с планом НИР по проблеме "Фармация" Научного Совета Л 10 по фармакологии и фармации АМН СССР. Номер государственной регистрации 01.9.10 008621.

Научнзд новизну, работа. Осуществлен фармакологический скрининг трех новых рядов синтетических производных коричной кислоты, её амидов и алъфа-ацетамадов (79 веществ), в результате которого впервые выявлены вещества А - 19 и К - 57 с Еыраженмым антиокси-дантным и гепатопротекторным действием, превосходящим по активности силибор и дибунол и имеющие низкую токсичность. В результате проведенных исследований внерене экспериментально изучены с применением логико-структурного подхода а установлены качественные закономерности взаимосвязи "структура - активность" в новых рядах соединений.

Впервые установлено, что вещества А - 19 и К - 57 у животных с экспериментальным токсическим гепатитом, вызнанным тетрахлорметаном, приводят к следующим эффектам:

- значительно ослабляют повышение активности аминотрансфераз сыворотки крови;

- нормализуют изменение белкового спектра сыворотки крови;

- уменьшают процессы перекисного окисления ли пи дог- мембран ге-патоцитов;

- снижают продолжительность наркотического действия гексенала.

- нормализуют измененную тетрахлорметаном скорость выведения

бромсульфалзлна печенью; - уменьшает степень морфологических изменений печени при действии тетрахлорметана.

Вноеь синтезированные на хандре органической химии Пятигорского фармацевтического института соединения зарегистрированы е НИИ технологии и безопасности лекарственных средств.

Практическая значимость работы в внедрение результатов исследования. Полученные экспериментальные данные показывают целесообразность дальнейших более углубленных исследований пак потенциальных гепатопротекторон соединений, относящихся к синтетическим лроизеодшм коричной кислоты, её амидам и альфа-ацетамидам. Для клинической практики ценным свойством является установленная в данной работе способность исследованных невеста нормализовать биохимические, функциональные, морфологические показатели печени при гепатитах. Это мо^ет послужить предпосылкой к применению ЕещестЕ А - 19 и К - ь! е качестве средств для профилактики и лечения заболеваний печени.

Дашше фармакологических исследований, аолучешые при выполнении данной работы, использовались и используются на кафедре органическое химии Пятигорского ¿фармацевтического института для Еыянленая закономерности "структура - активность" и целенаправленного синтеза высокоактивных вещссте с прогнозируемой ак-тиеностью. Выявленные качественные закономерности "структура -активность" е новых рядах производных коричное, кислоты используются е лекционном курсе на кдфедре органической химии, а данные о влиянии дибунола и силибора, веществ А - 19 и К - 57 на развитие гепатита - на кафедрах оармакологии, физиологии и патологии Пятигорского ((армацевткчоского института.

Разработанный нами метод определения антиоксидантных свойств химических соединений внедрен на кафедре фармакологии фарыацев-

тического факультета Московской медицинской академии. 1км же в курсе лещи" по фармаколога/ используются новые сведения о зависимости антиоксидантнпй активности от химического строения феноль-ных соединений.

Разработанный нами индуктивный датчик и камера для регистрации физиологических параметров лабораторных животных внедрены на кафедре физиологии, анатомии и патологии Пятигорского фариинститу-та.

Положения, выдвигаемые на защиту.

1. В результате фармакологического скрининга новых рядов синтетических производных коричной кислоты, ее амидов и альфа-ацета-мидов, выявлено дга соединения: 3-фенил (4-гидрокси-3,5-дитретбу-тил)пропеновая кислота (лабораторный шифр К - 57) и 2-(4-гидрок-си-3-метоксициннамоилашдо) пропановая кислота (лабораторный шифр А - 19) с выраженным антиоксидантным я гепатопрстекторным действием; изучены закономерности взаимосвязи "структура - активность" в данных рядах.

2. В сравнении с действием силибора и дибунола показано влияние соединений 1С - Ь7 и А - 19 на степень развития токсического гепатита, вызванного введением гепатотропного яда у различных видов животных на оргапизмеином, органном, тканевом и клеточном уровнях. Показано положительное влияние от:« еокосте на ч.(апологические, биохимические и морфологические показатели иечони -;г.]-еотных с экспериментальным токсическим гепатитом.

3. Установлены некоторые механизмы гепатопротекторного дег.ст-еия веществ А - 19 а К - 57, показано преимущество данных веществ по сравнению с силибором и дибуполом.

Апробццид работы. Основные материалы диссертации долояоны :: обсуадены на Всероссийской иаучно-практическог. конференции холодах ученых, цосшщснпок 70-летию Декрета о паздонаг.^ац::;'. аптек

(Куйбышев 1988); ХП тучной конференции молодых ученых и специалистов Пятигорского фармацевтического института (Пятигорск 1989); Всесоюзной научной конференции по актуальным проблемам лекарственной токсикологии (Москва 1990); ХШ краевой научной конференции молодых ученых и специалистов (Пятигорск 1990); 46-й регионально/» конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано Ю печатных работ, в которых отражено ее основное содержание. На Еещество А - 19 получено авторское свидетельство. Получено 3 удостоверения на рационализаторские предложения.

Объем и структура,диссертации,. Диссертационная работа изложена на 139 странидах машинописного текста, состоит из введения, обзора .литературы (I глава), материалов и методов исследования (2 глава), экспериментальной часта (3, 4, и 5 главы), обсувдения результатов, еыеодое, научно-практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 14 рисунками. Указатель литературы содержит 162 источника*, из них 96 отечественных и 66 зарубежных.

СОДЕЙШШ РАБОШ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для изучения антиоксндантного и гепаголротекторного действия лекарственных веществ использонали модель токсического гепатита, вызванного введением тетрахлормстаиа. Данну'о модель можно рассматривать как адекватную для решения поставленных задач по следующим соображениям. Воспаление паренхимы печени и реакция поврежденного органа при СС14- токсм^оском гепатите очень сходны с картиной .клинической штологии. (И.М. С ...юдаева, 19ЬО); ультраструктура генатоцитов у крыс при введении не имеет принци-

пиалышх различий по сравнению с данными биопсии печени больных вирусным гепатитом и циррозом печени (В.В.Королев и др.', 1980); патогенез развития СС14- токсического гепатита связан с интенсификацией процессов липопероксидации в геватоцитах. Модель токсического гепатита создавалась путем введения внутрь (через зонд) тетрахлорметана (СС14) в дозе 2,5 мл/кг массы в виде 50 % раст-Еора е оливковом масле ежедневно в течения 4 дней подряд. В работа мы использовали комплекс методик, позволяющих вскрыть некоторые механизмы фармакологического действия новых веществ на организмепном, органном, клеточном и субклеточном уровнях. Доя выявления глубины патологических изменений в печени при СС14-токсическои гепатите использованы функциональные, биохимические, и патоморфологические тесты, которые, по мнению ведущих гепато-логов, являются наиболее надежными и позволяют однозначно судить о гепатопротекторной активности изучаемых Ееществ. Наряду с опытами и? , использовали модели ¿п. п^с , воспроизводящие определенные звенья патогенеза гепатита. В качестве препаратов сравнения были выбрани дибупол (аналог по структуре) и сили-бор (аналог по действию).

В качестве объектов исследования использовали белых крыс линии Ьистар обоего пола, кроликов-самцов рода Шиншилла и белых беспородных мышей.

В настоящей работе использовали следующие методики:

1. Воспроизведение модели экспериментального токсического гепатита (Б.И.Левшин, 1973)

2. Метод определения антиоксидантноп активности химических соединений. (С.Г.Благороден, 19ь?).

3. Метод определения активности ампиотрансфераз в сыворотке крови (С.1'о;;тман, С.Франкель, 1975).

4. Определение оои,его бедка и ешоуотле крови рефрактомот-

рическиы методом.

5. Определение уровня белковых фракций е сыеорогкв крови методом электрофореза е агаровом геле.

6. Метод определения продуктов перекисного окисления липи-дон в гоыогенате печени животных (И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвшш, 1977).

7. Метод определения антитоксической функции печени с помощью гексеналовой пробы.

8. Метод определения экскреторной функции печени с помощью пробы с бромсулъфалеином {Р.В. Надошавина, 1965).

9. Метод морфологического изучения гистологических срезов печени.

10. Метод Кербера определения острой токсичности лекарственных веществ (М.Д. МашкоЕский, 1971).

В предварительных экспериментах для вшгеления вещестЕ с выраженными антноксидантными свойствами был дронеден первичный фармакологический скрининг 79 синтетических производных коричной кислоты, е ток числе 57 полученных впервые. Общие формулы изучаемых веществ следующие:

РЕЗУЛЬТАТЫ ОПЫТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

:н=сн-соон

Производные коричной кислоты

Амида производных коричной кислоты

я1 -/фУСЕвС-ООСН

Алъфа-ацетамида производных корично? кислоты.

В результате первичного фармакологического скрининга, проведенного по методу С.Г.Благородова, IX? г., еняелоко 17 веществ с наиболее выраленныыи антиоксидактнымн свойствами. На осноЕе логико - структурного анализа данных первичного скрининга сделаны выводы о взаимозависимости "структура - активность". Основные положения этих выводов сеодятсп к следующим закономерностям

1. Антиоксидантная активность производных коричног кислоты зависит от характера, местоположения и взаимного влияния заместителей в ароматическом ядре коричной кислоты.

2. Амадироганке производных коричной кислоты по карбоксильной группе не влияет на анг..оксидантнне свойства соединений, а в отдельных случаях снижает их.

3. Закещеше недорода в аль4н-поло:.-:ении алифатической цепи на ацетамидаые радикалы не улучшает антиокепдантиых сеопств производных коричной кислоты.

4. Наличие гццроксилъных групп в бензольном кольце альфа-ацетамидного радикала (в отлично от бензольного кольца фрагмента коричной кислоты) не придает молекула соединений алтиокевдант-ных свойств.

5. Сравнительное изучение производных коричной кислоты и соответствующих им производных бензойной кислоты показало, что значительно увеличивает антиоксадантную активность Еиниленовнй фрагмент в структуре производных коричной кислоты.

Вторичный скрининг отобранных антиоксидантоЕ проводили с целью отбора среди них веществ с наиболее выражешшыа гепатопро-

текторными свойствами. В качестве критерия оценки бил выбран метод определения активности аминотрансфераз сыворотки крови как наиболее чувствительный биохимический показатель при заболеваниях печени. Кроме того, определяли процент выживаемости нивотных (крыс) при их отравлении тетрахлорметаном. Этот процесс служил интегральным показателем активности веществ.

В результате гторичного скрининга выявлено 2 вещества с наиболее ныранешшма антиоксидангныки и гепатопрогекторными свойствами:

1. 3-фенил (4-гадрокси-3,5-дитретбутил) пропаиоЕая кислота (лаб.икфр К - 57).

2. 2-(4-гидрокси~3-ыетоксициннамоиламидр) пропановая кислота (лаб.шифр А - 19).

Острая токсичность ( Ь Дзд) данных соединений составила для вещества К - 57 - 850 мг/:т, для вещества А-19 - 1930 кг/кг).

Представлялось целесообразным всесторонне исЗшдоЕать влияние этих г-еи;еств на биохимические, функциональные и морфологические показатели состояния печени. Для этого ыы использовали методы изучения активности аминотрансфераз в динамике, исследовали белковообразущую функцию печени, а такке характер изменений белковых фракций сыворотки крови. Кроме того, изучали состояние процессов аереуисного окисления лйпвдое в тканях печен:!её антитоксическую фушецию, а гакко карги.,у морфологических изменений.

Активность акинотрансфераз определяли в динамике развития и инеолщии токсического гч^атита, а имои:ю па 7, 14, 21 день от начала отравления .пшеотних тетрахлорметаноц. В контрольной группе крыс максимальная акишюс^ь Гсркентон наблюдалась на 7 день от начала отравления и достигла высоких цифр, причем ак~ тивность аланинакинотраисферлзы (АлТ) возрастала более иптен-• сивно. чей аслартатаминотр.1нсферази (АсТ). В последующем в

13.

контрольной группе кррс активность АлТ и АсТ снижалась на 14 день и еще более выражено на 21 день, но на достигало исходных значений.

В группах животных получавших А-19, К-57, дибунол и силибор наблюдали прогрессирующее уменьшение активности АлТ и АсТ к 14 и 21 дна эксперимента. Болео выраженное снижение активности АлТ к 14 дню и особенно к 21 дно наблюдалось в группе жиеотных, получавших вещества А-19 и К-57. Значения активности ферментов к 21 дню в этих группах приближались к исходным.

Таким образом, вещества А-19 и К-57 при введении в дозе 30 иг/кс ежедневно в течение 4 дней нормализуют активность АлТ и АсТ в крови крыс с экспериментальным токсическим гепатитом и достоверно превосходят аналогичное действие сшшбора а дибунола. (см. табл. I и 2).

Дня оценки функционального состояния печени использовали методы определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови. Результаты исследований показали, что уровень общего белка в сыворотке крови контрольных животных, отравленных тетрахлорыета-ном,имел тенденцию к снижению на 7 день а достоверно уменьшался на 14 день. К 21 дню от начала отравления яивотных содержание общего белка несколько увеличивалось по сравнению с данными на 14 день, однако исходных значэний не достигало.

В группах животных, отравленных гетрахлормэтаном. и получавших вещества А-19, К-57, дибунол а силибор во все дни исследования, существенных отклонений по сравнению с ингактныаи крысами в уровне общего белка не наблюдалось. В этих группах по отношению к контролю появлялась тенденция к нормализации содержания общего белка в сыворотка крови.

Более глубокие отклонения от исходного уровня при пораженка печени наблюдается е составе белковых фракций сыворотки крова.

Таблица I,

Влляние гепаств А-13, К-57, дибунола и оилабора на активность ал.анинаышотрансферазы ( МТ ) сыворотки крови крыс с экспериментальным токсическим гепатитом.

группы

Активность МТ в сыворотке крови крыс

____1 в мкщольУ_Ш1 £ зао 1 _ _ ____

7 день : 14 день |

21 дань

I. Интактные

2. СС14 (контроль)

3. СС14+ дибунол

4. СС14+ сшшбор

5. СС14+ А-19

6. СС14+ К-57

0.5±0,05 6,00±0,52 3,96^0,27 3,80±0,29

№%21

4,19*0,47

2,78*0,19

2,61+0,20

2,6010,19 Г >0,-5

к®»17

2,65^0,31 1,76±0,21 1,2620,11

№

Р по отношению к силибору Ы - 12

Влияние веществ А-19, К-57, дибунола и силибора на активность Таблица 2

аспартатаминотрансферазы С АсТ ) сыворотки крова крыс с экспериментальным токсическим гепатитом.

№ Группы Вводимое соединение, доза Число животных в группе Активность АсТ в сыЕоротке крови (е мкмоль / мл / час ) крыс

7 день 14 день 21 день

I. Интактные 10 0,80 ± 0,06 _

(физ. раствор)

2. (контроль) 12 5,61 ± 0,35 4,21 ± 0,26 3,16 ± 0,17

3. СС14 + дибунол 12 3,74 £ 0,29 3,00 ± 0,24 2,61 4 0,19

( 30 мг / кг)

4. + силибор 12 3,57 ± 0,21 3,12 ± 0,29 2,38 ± 0,20

( 30 мг / кг )

5. СС14 + А-19 12 2,32 ± 0,11 2.08 ♦ 0,21 1,90 ± 0,11

( 30 мг / кг ) Р < 0,001 Р < 0,01 Р < 0,05

6. СС14 + К-57 12 3,01 £ 0,15 2,24 ± 0,16 2,08 ± 0,18

( 30 мг / кг ) Р< 0,05 Р < 0,02 V > 0,25

Р по отношении к силибору

В нашах экспериментах в группе контрольных животных уже на 7 день от начала отравления наблюдалось значительное достоверное уменьшение количества альбуминов. На 14 день уровень альбуминов так&е оставался достоверно ниже исходного, хотя и появлялась некоторая тенденция к нормализации. К 21 дню гипоальбуминемня была ' уке значительно менее Еыражена, однако исходных значений уровень альбуминов не достиг.

Фракция глобулинов также претерпевала изменения, как правило в сторону их увеличения. Наиболее значительные отклонения от нормы в группе контрольных киеотных наблюдались в фракциях бета-д гамма-глобулинов. Уровень бета-глобулинов значительно возрастал е начальном периоде развития гепатита т.е. на 7 день с последующим снижением на 14 день и нормализацией на 21 день. Уровень гамма-глобулинов возрастал в более поздние сроки. К 14 дню количество гамма-глобулинов было наивысшим. К 21 дав гаммаглобулинемия была менее выраженной.

В опытных группах животных, получавших А-19, К-57, салабор и дибунол,динамика отклонений в белковых фракциях была аналогичной контролю, однако эти изменения были гораздо менее выражены. Наибольший нормализующий эффект на уровень белковых фракций у крыс, отравленных тетрахлорыетаном,проявило вещестЕО А-19. Уровень альбуминов, альфаальфа2-, бета-и гамма-глобулинов в этой группа животных был максимально приближен к исходному во Есе срока исследования. По показателю нормализации уровней белковых фракций вещество А-19 достоверно превосходило действие силибора. Вещество К-57 достоверно улучшало показатели по сравнению с контролем. Активность вещества К-57 по показателю нормализации белковых фракций е целом соответствовала силибору. Активность дабунола бшга наименьшей.

Сшшжие содораания альбумииог у погиаюнве содвпыы" ло?а~ и гамма-глобулиновых фракций сыворотки кропи под глиялиег« тотра-хлораетана отмечается большинством исследователей.

Вещества А-19, К-57, силябор в дибунол способствовали нормализации белкового спектра, причем А-19, К-57 и силмбор - г значительной мере. Дибунол проявил менее выраженную активность. Наиболее активное Еещество А-19 достоверно превосходило по действию ск-либор. Вещество К-57 по активности соответствовало действию силлбо-ра (рис. 1,2).

1&ким образом, на основании экспериментов по оценке ферментативной (определение аминотрансфераз) и протевнообразующей {определение белковых фракций) функций печени можно судить о наличии у исследуемых соединений гелатопротекторяых свойств. Процессы лерекисно-го окисления липидов усиливаются при гепатитах различной этиологии. Учитывая, что изучаемые вещества обладают выраженным антиоксидант-ным действием, мы а следующей серии экспериментов изучили их влияние на процессы перекисного окисления ли ладов в опытах /лу// 7 ¿«Количество продуктов перекисного окисления липэдое е печена крыс значительно возрастает при отравлении теграхлорметаном от 4,840^,190 (у интактных) до 8,5664-30,213 Су контрольных крыс) кмоль на пробу. Это подтверждает формирующуюся в последнее ьремя точку зрения о том, что в основе патогенеза токсического гепатита, вызванного тетрахлор-метаном,лежат процессы активации перекисного окисления липадов(ПОЛ).

Таким образом, изучив влияние дабунола, силибора,вещесте А-19 и К-57, обнаружили однонаправленное снижение накопления с печени • продуктов ПОЛ соответственно на 7,6 %, 8,6 %, 18,2 % и 15,4 %. По данным наших исследований просматривается корреляция у изученных вещестЕ между способностью сникать активность аминотрансфераз и способностью подавлять ПОЛ. Исходя из полученных данных модно сделать вывод, что изучаемые вещества, являясь ангпоксидантами, замедляют

Члияние дийунола, с ил и бора, А-19 и К-57 яа уровень ¿т-глобули-нов сыворотки крови крыс

Г7

Г6

15 .

1.

2.

3.

4.

5.

е.

чТнт актине СС14

СС14+дибунол СС14+силибор ССГ4+ А-19 сст4+ К-57

Г4 .

13 -

12 ■ II -

го -

9 . 8 .

£

7 день 14 день 21 день различия достоверны по отношению к контроля

Рис.2

50 49

48

47

43

45

44

43 42 41

40 4

зэ

*

1

Влияние дибунсла, силябора, веществ А-19 и К-57 на уровень альбуминов сыворотки крови крыс.

1. Интактные

2. СС14 контроль

3. СС14+дибунол

4. СС14+силибор

5. СС14+А-19

6. СС14+К-57

*

(ТГГГТУГПП пгп~з~ттт~?ггт1 {ТГГТТТз-г^

7 день

14 день

21 день

различая достоверны по атнаиешш к контролю

¿ктяааца» процессов ПОЛ н тканях при действии CCI4 а,таким образом, препятствуют развитию патологических изменений в печени.

С целью оценки антитоксической функции печени крыс с токсическим гепатитом нами были проявлены опыты с введением еиеотным гексеыала, который вызывает у интактных животных непродолжительный сон. Введенный животным гексенал инактивируется преимуществег ло (на 90 %) печенью. Поэтому при поражении печени продолжительность гексеналового сна увеличивается в тем большей степени, чем интенсивнее поражена печень. По степени уменьшения гексеналовогс сна у животных отравленных и леченных можно судить о степени геш топротекторяого действия веществ.

Продолжительность гексеналового сна у животных, отравленных ЗСХд увеличивалась по сравнении с интактными (29,4 ¿0,9 мин) ео see дни исследования; на 7 день она составляла 61,4 - 2,8 мин;на 14 день - 58,2 - 1,8 мин; на 21 - 50,7 - 1,3 мин, что свидетельствует о значительном снижении антитоксической функции печени. По данному гесту восстановление антитоксической функции печени протекало медленно, и к 21 дню продолжительность сна у животных не достигала исходных значений. В группах животных, получавших сшшбор, ЕещестЕа A-I9 и К~57} отклонения в продолжительности сна от нормы были менее значительны во нее сроки исследования,чем у нелаченных животных. Наиболее короткий гексеналовый сон отмечала в группах отравленных животных, получавших вещества A-I9 и К—57, и составлял к 21 дно соответственно 35,8 ± 1,1 мин и 39,2 ± 2,1 мин. Следовательно, при лечении жиеотных этими веществами антйто: сическая функция печени снижалась значительно меньше (табл. 3)

Для определения состояния экскреторной функции печени мы ис пользовали такке пробу о бромсульфалеином (БСФ). БСФ после его

Таблица 3.

Влияние сллибора, веществ А-1Э и л-о7 ( 30 мг/кг ) на продолжительность вызванного гексоналом (10 мг/кг ) сна крыс с экспериментальным токсическим гепатитом ( в минутах )

! Вводимые вещества : Дна исслэдования

группы : : 7 день : 14 день : 21 день

I. йнтактннз-

с 2. СС14 ( контроль ) 61,4±2,а об, <¿±1,6 50,7-1,3

3. СС14+силибор 56,7^2,I 54,0±1,6 42,1-2,4

4. СС14+ А-19 44,4±0,а 41,6+1,2 35,и±1,1

- Р<0,'001 Р< 0;001 Р<0,'05

5. СС14+ К-57 4а,6±1,9 45,8±2,4 39,2±2,1

* ?<с;о2 ?<0',02 - ?>о;г

'£ - по отношению к силибору Н = Й

внутривенного введения практически полностью выводится из организма печенью. Время выведения БСФ при поражении печени тетра-хлорметаном значительно увеличивается, поэтому процент задержки БСФ е крови в единицу времени.может служить критерием для оценки состояния деятельности печени. Опыты проведены на кроликах.

У интактшх животных процент задержки БСФ в крови составлял 4,3 ~ 0,3 %. В контрольной группе, отраЕленпсй CCI^ и нелечешю£ процент задержки возрастал в 4,4 раза и составлял 19,1 £ 2,2 %. Это свидетельствует о значительном снижении экскреторной функции печени при поражениь её, CCI^. Введение животным Ееществ A-I9, К-57 и адлибора достоверно ускоряло выведение БСФ es крови. Процент .задержки БСФ соответственно составлял 7,6 - 1,1; 12,3 £ 1,( и 13,1 - 1,2 %, что свидетельствует о наличии у данных веществ протекторных сеойсте. Наиболее активными из них оказалось вещем во A.-I9, которое снижало процент задержки БСФ в 2,5 раза и дшстс верно превышало действие еилибора (табл. 4).

Морфологическое исследование гистологических срезов печени животных, отравлению: СС14, доказало, что функциональные и биохз мические нарушения деятельности печени больного животного сопровождаются значительными структурными изменениями гр^ятоцитое. У отравленных зиеотных разЕигаются крупно- и мелкокапельная жаров; и вакуольная дистрофия, появляются обширные очаги субтотального некроза, декомпенсации печеночных балок и другие изменения.

Силибор, вещества A-I9 и К-57 уменьшали степень патологиче< ких изменений в печени, пораженной тетрахлорметаном. Наименее bi раненные морфологические изменения наблюдались в группах зюизотн (крыс), получавших вещества A-I9 и К-57. Лечение животных силиб! ром также снижало степень морфологических изменений, но в меныи степени, чем вещества A-I9 и К-57. Морфометрический подсчет покг

йблица 4

Влияние вещества А-19, К-57, дибунола и силибора на экскреторную функцию печени кроликов с экспериментальным токсическим гепатитом.

группы Вводимые вещества Количество животных Процент задержки броксульйалеина

I Интактныв 6 4,3 ± 0.3

2. СС14 (контроль) п о 19,1 ± 2,2

3 СС14 + дибунол 6 17,6 ± 2,035 р > 0,005*

4 СС14 + силибор 6 13,1 ± 1,2 р < 0,005*

5 СС14 + А-19 6 7,6 ± 1,1 р < 0,05хх

6 СС14 + К-57 6 12,3 ± 1.6 р > 0,05*к

- различия по отношению к контролю

КХр - различия по отношения к еллибору.

зал, что е группе контрольных крыс, получавших только GGI^, про: некротизиротшшх гепатоцитов составлял 37,6 - 3,2 %, в грудпш жиеотных, леченных силибором 16,8 £ 2.9 %, веществом A-I9 -8,3ii К-57 - 13,А± 2,6%.

Таким образом мы провели комплексное изучение функциональна состояния печени при поражении животных тетрахлорметаном и при л чении их веществами A-I9 и К-57. Эти Еещества мы выяеили при исс дованяи 79 соединений производных коричной кислоты по данным сщ гоеого исследования. Они проявили наиболее Еыраженное антиоксидг ное и гепатозащитное действие. В своих дальнейших исследованиях оценивали влияние изучаемых веществ га различные биохимические, макологическиэ и морфологические показатели, позволяющие Есестс не оценить функциональное состояние печени. Определение активное аминотрансфераз давало еозможность судить о структурных погрежде ях гепатоцитов, связанных с действием гепатотропного яда тетрахя метана. Определение количества альбуминов и глобулинов позволяло лать вывод о протеинообразующей функции печени. Оценка содержали малопового диальдегида дала еозможность, с одной стороны, подтЕв дить антиоксидангное действие исследованных веществ в опытах на вом организме, а с другой стороны помогла получить данные о меха ме геяатопротокторного дсйстеия веществ. Методом определения дл ности сна, вызнанного гоксспалом, мы смогли оценить антитоксичес функцию печени« Проба с элиминацией печенью броксульфалеина помо получить дашше о елияшш исследуемых веществ на экскреторную фу цию печени. И, наконец, морфологические дашше наглядно продемон роняли изменения е гелатоцитах у отраплетшх животных и животных чешшх исследуемыми веществами.

Результаты всех этих исследований коррелируют и однозначно детельстг-уют о том, что производные коричной кислоты, з-4епил(4-

гидрокси-3,5-дитретбутил) пропеновая кислота (вещество К-57) и 2-(4-гидрокси-3-метоксициннамоиламидо)дропаноЕая кислота (вещество А-19) обладает выраженной гепатопротекторной активностью, которая связана с их способностью угнетать ПОЛ,

ВЫВОДИ*

1. На основании логико-структурного анализа изучена зависимость антиоксидантной активности от химической структуры е рядах синтетических производных коричной кислоты; её амидов и альфа-ацетамидов. Выявлено, что ангиоксидантная активность изучаемых соединений зависит от характера, местоположения и взаимного влияния заместителей в ароматическом кольце коричной кислоты, а такие от наличия е её алифатической цепи еиншюноеого фрагмента.

2, При скришнгоЕОМ исследовании 79 синтетических производных коричной кислоты выявлено 2 вещества: 3-фюнил(4-гидрокси-3,5-дн-третбутил)пропеноЕая кислота (вещество К-57) и 2-4-гидрокси-З-метоксициннамоиламидо) аропаяовая кислота (вещество А-19), которые проявили наиболее Еыраженноо антиоксидантное и гепатопро-текторное действие.

5. При изучении влияния веществ А-19, К-57, дабунола-аналога по структуре и силабора-аналога по действию на течение ССЗ^-ток-сического гепатита установлено, что изучаемые вещества нормализуют показатели активности аминотрансфераз (аспартаташшотранс-фаразы и аланинаминотрансферазы), уровень общего белка и белко*-вых фракций сыворотки крови. Наиболее активными в этом отношении являются вещества А-19 и К-57. I. Вещества А-19 и К-57 в условиях СС14-токсического гепатита нормализуют антитоксическую функцию печени у крыо. 5, ВещостЕа А-19 и К-57 в условиях СС^-токсического гепатита нормализуют экскреторную функцию печена у кроликов.

6. Вещества А-19 и К-57 б значительной ко во снижают степень морф логических изменений е печени, Еызваншх введением тетрахлорм тана.

7. Установлена корреляционная зависимость между антиоксидантной гепатоаротекторной активностью в ряду изученных веществ - про изв0дных коричной кислоты,

СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО 'ШК ДИССЕРТАЦИИ

1. 2-(4-гидрохси-3-метоксицивнамоиламидо) пропаноЕая кислота, oß ладащая антиоксидантным и гепатозащитным действием./Симонян A.B., Макаров В.А., Карпеня Л.И. / A.C. 1744944 СССР.'ШШ3 С 07 С 235/34, А 61 К 31/16. (СССР).-2с.

2. Антиоксиданткая активность некоторых произеодных коричной кис лоты // Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых, посвященная 70-летию декрета о национализации аптек: Тез. докл.-Куйбышев, I9b8.-C.208.

3. Сравнительная количественная оценка антиоксидантной и мембран стабилизирующей активности некоторых производных коричной кис лоты // XII науч. конф. молодых ученых и специалистов IlHvaroi кого фармацевтического института: Тоз. дом.-Пятигорск, 1989, С.64.

4. Влияние некоторых синтетических производных коричной кислоты на функциональные показатели печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом //Актуальные проблему фармации и медищ ш: Тез. докл. ХШ Краевой науч.конф. 5-9 февраля I990.-C.32,-Пятигорск.

5. Гепатозащитная активность амидов коричной кислоты /Симонян A.B., Мокин Ю.Н. // Актуальные проблемы лекарственной токсикологии: Тез. докл. Вседовз. науч. конф. 12-16 ноября I99Q г. Москва, 1990.- С.258.

6. Влияние производных коричной кислоты на активность гидролаз у крыс, отравленных тетрахлорметаном / Макаров В.А..Степанова А.Т., Реккандт С.А. и др. //46 Регионарная конф. по фармации и фармакологии: Ifeз.докл.-Пятигорек, I99I.-C.I2I.

7. Модификация метода получения лелча у куыс в остром опыте /Кульбе-ков Е.Ф. // 46 Регионарная конф. по фармации и фармакологии. Тез. докл.-Пятигорск, I99I.-C.I29.

8. Влияние дибунола, силибора, Ееществ A-I9 и К-57 на изменения уровня белка общего и белковых фракций сыворотки крови крыс с экспериментальным токсическим гепатитом // 46 Регионарная конф. по фармации и фармакологии: Тез.докл.-Пятигорск, I99I.-C.I23.

Э. Скрининг-метод для определения антиоксидантных свойств химических соединений /Гадаиибрагимов Б.М. // М.,1992.- 4с.- Деп. в ШИПЯ 05.06.92. № IB00-B92.

У, Влияние гепатопротектороЕ на активность пищеварительных ферментов у крыс с экспериментальным гепатитом / Макаров В.А., Степанова А.Т., Реккандт С.А. // Проблемы стандартизации и контроля лекарственных средстЕ: Тез.докл. Всесоюзн. конф. - М., I99I.-C.63-64»