Автореферат и диссертация по медицине (14.00.46) на тему:Изменения параметров иммунитета у больных рассеянным склерозом в зависимости от вариантов течения и активности заболевания
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.46
Автореферат диссертации по медицине на тему Изменения параметров иммунитета у больных рассеянным склерозом в зависимости от вариантов течения и активности заболевания
На правах рукописи
КАЛАШНИКОВА ГТ5 ОД
Анастасия Андреевна
22ггл
ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВАРИАНТОВ ТЕЧЕНИЯ И АКТИВНОСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ
14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Санкт-Петербург - 2002 г.
Работа выполнена в отделе клинической иммунологии сектора клинического лабораторно-диагностического Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербург.
Научный руководитель:
Доктор медицинских наук профессор Н.М. Калинина. Научный консультант:
Доктор медицинских наук профессор В.И. Головкин. Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук профессор A.C. Снмбирцев Доктор биологических наук ст.н.с. H.H. Зыбина
Ведущая организация:
Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии
Защита диссертации состоится "_"__2002 г. в_
часов на заседании Диссертационного совета Д 205.001.01 во Всероссийском центре экстренной и радиационной медицины МЧС России по адресу: 194044, г Санкт-Петербург, ул. Лебедева, д. 4/2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского центре экстренной и радиационной медицины МЧС России.
Автореферат разослан "_"_2002 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета,
кандидат медицинских наук С.С. Адексанин
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
актуальность исследования. Рассеянный склероз (PC) является хроническим регрессирующим заболеванием центральной нервной системы аутоиммунной рироды и характеризуется образованием очагов демиелинизации в белом еществе головного мозга и в спинном мозге (Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко i.H., 1997). Чаще развивается ремиттирующая форма рассеянного склероза эколо 90% больных) с чередованием периодов обострений и ремиссий, со ременем приобретающая вторичнопрогрессирующее течение. Реже заболевание осит первичнопрогрессиругащий характер (10-15%).
При PC ключевым моментом в развитии патологического процесса вляется миграция активированных аутореактивных лимфоцитов через ематоэнцефалпческий барьер с последующим развитием иммунного ответа на нтигены миелиновой оболочки нервных волокон, включающим синтез иецифическнх антител, продукцию провоспалительных цитокинов как нтигенпрезентирующими клетками, так и Т-лимфоцитами, активацию 1акрофагов, результатом чего является разрушение миелиновой оболочки ейрона с последующим фагоцитозом его фрагментов. Процессы емиелинизацни приводят к нарушению проведения нервного импульса Lassman Н., 1995).
Предшествующая обострению рассеянного склероза активация Т-имфоцитов периферической крови проявляется в экспрессии на поверхности леток активационных маркеров, дальнейшей пролиферации Т-клеток, активной родукции ими провоспалительных цитокинов, которые, в свою очередь, тимулируют экспрессию молекул антигенпредставления (HLA DR, остимуляторных молекул) на В-клетках и Т-хелперах (Ярилин А.А., 1999).
Решающее значение в иммунопатогенезе рассеянного склероза имеют ровоспалителъные цитокины, стимулирующие развитие иммунного ответа. В х синтезе участвуют моноциты, NK-клетки, В- и Т-лимфоциты. Повышение родукции провоспалительных цитокинов (IL-1, TNFa, IFNy) предваряет азвитие клинической симптоматики (Perez-Vicente et al., 1996, J.Hillert et al., 001, J. Losy et al, 2001; и др.), что позволяет использовать их для мониторинга остояния пациентов.
В качестве естественных антагонистов Т-хелперов 1 и ровоспалительных цитокинов часто выступают Т-хелперы 2 и, синтезируемые ми, противовоспалительные цитокины (IL-4, IL-I0), способные подавлять оспалительный процесс. Увеличение продукции противовоспалительных итокинов во время обострения, особенно IL-10, носит протективный характер, оскольку восстанавливает баланс активационных и супрессорных иммунных еакций. Вместе с тем, данные об изменении продукции других цитокинов, в ом числе IL-4, противоречивы и нуждаются в уточнении (Sellebjerg F. et al., 996; van Boxel-Dezaire A. et all, 1997).
Действие провоспалительных цитокинов в очагах демиелинизации проявляется в активации глиальных клеток, моноцитов, и стимуляции экрпрессии клетками молекул, опосредующих апоптотические процессы (Fas-антигена, FasL, TNF-R1). В экспрессии этих молекул участвуют все клетки, вовлеченные в демиелинизирующий процесс, что обуславливает дуализм апоптотических процессов в патогенезе РС. С одной стороны, апоптотическими механизмами могут элиминироваться клоны аутореактивных клеток, с другой стороны, процессы аиоптоза могут приводить к гибели олигодендроцитов (Segal. В.М., Cross А.Н., 2000). Значительная роль апоптоза в развитии РС определяет интерес к изучению баланса экспрессии Fas-антигена и FasL клетками, участвующими в иммунном воспалении, прежде всего, CD4+ и CD8+ лимфоцитами. В этой же связи представляет интерес активность экспрессии TNF-R1 иммунокомпетентпыми клетками периферической крови, в частности, моноцитами.
Несмотря на активное изучение иммунопатогенеза РС многие ключевые моменты до настоящего времени остаются не ясными. В связи с тем, что в последние годы отмечается тенденция к «омоложению» возраста больных РС, приводящая к их ранней инвалидизации, увеличению частоты заболеваемости, расширению территории распространения рассеянного склероза, особую актуальность приобретает уточнение механизмов развития иммунопатологического процесса, характерных для различных стадий заболевания и периодов клинических проявлений.
В связи с вышеизложенным была сформулирована цель исследования:
Выявить наиболее значимые показатели иммунитета, отражающие характер течения и активность иммунопатологического процесса при рассеянном склерозе.
Для достижения цели были сформулированы следующие задачи исследования:
1.. Изучить субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных РС с прогредиентным и ремиттирующим течением заболевания во время обострения и ремиссии, оценить экспрессию иммунокомпетентпыми клетками активационных маркеров и костимуляторных молекул.
2. Охарактеризовать активность процессов апоптотической гибели клеток иммунной системы путем определения экспрессии Fas-антигена и FasL на CD4+ и CD8+ лмфоцитах, TNF-R1 на моноцитах больных РС.
3,. Выявить особенности продукции цитокинов и их рецепторов клетками периферической крови в зависимости от варианта течения заболевания.
4. Изучить пролиферативиую активность лимфоцитов больных РС на разных этапах болезни в ответ на стимуляцию митогенами и специфическим антигеном. Научная новизна исследования.
Получены результаты, выявляющие особенности развития иммунопатологического процесса при ремиттирующем и прогредиентном течении РС.
Впервые изучены особенности экспрессии НЬЛОЯ и костимуляторных молекул (СЭ40 и С040Ь) лимфоцитами периферической крови больных РС с различными вариантами течения болезни, а так же характер экспрессии молекул (Раз-антиген, РавЬ, ТОТ-Щ), опосредующих элиминацию активированных клонов клеток.
Впервые проведено комплексное исследование изменений продукции цитокинов и экспрессии их рецепторов клетками периферической крови больных рассеянным склерозом с прогредиентным и ремиттирующим течением заболевания, как во время обострения, так и в ремиссию.
Сравнительный анализ показателей клеточного и гуморального иммунитета и активности заболевания позволил разделить наблюдаемые изменения на способствующие развитию патологического процесса, так и протективные для пациентов. Практическая значимость.
Полученные сведения об изменениях субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных РС, активности экспрессии ими активационных маркеров, продукции цитокинов и их рецепторов в зависимости от формы заболевания могут быть использованы как дополнительные дифференцнально-диагностические критерии при уточнении варианта течения РС.
Оценка изменений субпопуляционного состава лимфоцитов, спонтанной продукции провоспалительных цитокинов (ТОРа, 1РЫу), спонтанной пролиферативной активности клеток позволяет прогнозировать развитие клинических симптомов обострения и может быть использована для мониторирования состояния пациентов с ремиттирующим РС. Основные положения, выносимые на защиту.
1. В периферической крови пациентов с рассеянным склерозом независимо от варианта течения заболевания сохраняется постоянная напряженность иммунитета, которая проявляется в высокой продукции провоспалительных цитокинов и активной экспрессии молекул, участвующих в представлении антигена Т- и В-лимфоцитами.
2. У больных с прогредиентным течением рассеянного склероза в периферической крови преобладают признаки развития иммунного ответа по Т-хелперному 1 пути, в то время, как у больных с ремиттирующим РС отмечаются признаки развития иммунного ответа по Т-хелперному 2 пути.
3. При выходе пациентов в ремиссию возрастает экспрессия 1Ь-10 Т-хелперами, отмечается активация процессов, направленных на элиминацию аутореактивных клопов (увеличения количества С08+С095+ и С014+Т7\ГР-Ю + клеток),
Апробация работы. Результаты исследования были доложены на конференциях "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (2000, 2001, 2002), на "Десятой конференции по Нейроиммунологии" (Санкт-Петербург, 2001), на IV Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2001), на конференции "Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2002" (Санкт-Петербург).
По диссертации опубликовано 5 научных работ. Структура и объем диссертации.
Диссертационная работа изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Текст диссертации проиллюстрирован 5 таблицами и 15 рисунками. Библиографический список включает 187 источников.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.
Материал и методы исследований.
Было проведено иммунологическое обследование 63 пациентов (24 мужчин и 39 женщин) с достоверно установленным диагнозом PC. Средний возраст больных составил 35,1 ±2,8 лет, средний возраст начала заболевания 24,9±2,3 года, средняя продолжительность заболевания 11 ±2,4 года. Среди них 29 человек с прогредиентным течением PC (как первично-, так и вторичнопрогрессирующим) составили 1-ю группу - ПРС обследованных лиц (19 женщин, 10 мужчин), 14 больных с ремиттирующим течением на стадии обострения составили 2-ю группу - ОРС (9 женщин, 5 мужчин) и 20 больных с ремиттирующим PC на стадии ремиссии составили 3-ю группу - PPC (11 женщин, 9 мужчин) обследованных лиц. Все пациенты, в том числе больные из групп с ПРС и ОРС, не проходили курса иммунокорригирующей или гормональной терапии как минимум в течение месяца до взятия крови на исследования. Больные ремиттирующим рассеянным склерозом во время обострения обследовались не позднее 7 дней после появления первых клинических симптомов обострения. В качестве контрольной группы (п=50) были обследованы здоровые лица. Контрольная группа была идентична по полу и возрасту группам больных PC.
Материалом исследования явилась периферическая кровь пациентов.
Фенотипирование мононуклеаров периферической крови осуществляли с применением проточной цитометрии с использованием моноклональных антител производства Immunotech, BioErgonomics, CALTAG. Для одновременного выявления двух поверхностных маркеров на клеточных мембранах были использованы две флюоресцентные метки (F1TC и РЕ). Применялись следующие сочетания антител: anti-CD3-FITC/anti-HLADR-PE, anti-CD4-FlTC/anti-IL-10-РЕ, anti-CD4FITC/anti-CD40L-PE, anti-CD4-FlTC/anti-
Ю95-РЕ, anti-CD4-FITC/anti-CD95L-R-PE, anti-CD8-FITC/anti-CD95-PE, anti-Ю8- FlTC/anti-CD95L-R-PE, anti-CD20-FITC/anti-CD40PE, anti-CD20-FITC/anti-Ю124-РЕ, anti-CD 14-FlTC/anti-CD 120a-R-PE. Цитометрический анализ имфоцитов и моноцитов проводился на проточном цитофлюориметре EPICS CL (Coulter Corporation, USA). Накопление производилось до 5000 событий в имфоцитарной или моноцитарной области, которые определялись с ^пользованием антител anti-CD45-FITC/anti-CD14-PE (Coulter Corporation, JSA). Данные анализировались с помощью программы Coulter System 11. Оценка [ролнферативной активности лимфоцитов в 72-часовой культуре цельной крови юсле стимуляции митогенами (PHA, PWM) проводилась методом ДНК-щтометрии (Manual of flow cytometry, 1999). Цитометрический анализ ДНК-[роб проводился с использованием FL3 фильтра в ДНК-протоколе программы lystem II. Для анализа полученных результатов была привлечена программа /JuItäCycJe AV (Phoenix Flow System). Процент пролиферирующих клеток пределялся как сумма процента клеточных ядер в S-фазе и в фазе G2m. Для цепки пролиферации клеток в ответ на митогены использовался индекс тимуляции - соотношение индуцированной пролиферации к спонтанной Фримель Г., 1987).
В качестве индукторов синтеза цитокинов использовали РНА-Р (Sigma) дозе 10мкт/мл (для IL-4), пирогенал в дозе 50мкг/мл (для TNFa, ,IL-10, IL-6), ирус болезни Ныокастл (получен в ГИСК им. J1.A. Тарасевича, С.-Петербург) с шфекционным титром 8 Ig ЭИД/0,2 мл в объеме Юмкл на лунку (для IFNy). Содержание цитокинов в сыворотке и в надосадочной жидкости 24-часовой ультуры цельной крови определяли с помощью твердофазного 1ммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем производства )00 "Протеиновый контур" (TNFa, IL-6, IL-4), "Цитокин" (IFNy), CytImmune iciences Inc (IL-10).
Всего проведено 3137 исследований, изучено 42 параметра иммунитета.
Для статистической обработки полученных данных использовали [еиараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни для сравнения средних, орреляционный анализ по Спирману. Обработка материала выполнялась на 'entium-ЗОО с использованием стандартного пакета программ прикладного татистического анализа (Statistica for Windows v.5.0). Критический уровень ;остоверности нулевой гипотезы (об отсутствии значимых различий) принимали явным 0,05.
ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ.
Субпопуляппонный состав лимфоцитов периферической крови больных PC. (анные субпопуляциошюго состава лимфоцитов периферической крови [ациен гов с разными вариантами течения PC представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1.
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных РС (абсолютные значения, в мм3).
лимфоциты CD3+ CD4+ CD8+ CD16+ CD20+
ПРС 1729* 1004,5* 593,7* 376,6* 211,2 153,0
ОРС 1985 1341,5 852,6 342,2* 158,4 242,6*
РРС 2017 1424,4 865,3 548,6 274,3* 227,9*
контроль 2322 1722,9 1012,6 606,0 135,4 168,3
*-достоверность различий с контролем (р<0,05).
Таблица 2.
Субпопуляционный состав периферической крови больных РС (относительные значения, %).
CD3+ CD4+ CD8+ CD4\CD8 CD 16+ CD20+
ПРС 58,10 34,34 21,78 1,6 12,22 8,857
ОРС 67,58 42,94 17,24 2,5 7,98 12,22
РРС 70,62 42,95 27,2 1,7 13,6 11,3
контроль 74,2 43,61 26,1 1,7 5,83 7,25
Сравнение групп
ПРС/конгроль р<0,05
ПРС/РРС р<0,01 р<0,05
ПРС/ОРС
ОРС/контроль р<0,05 р<0,01
ОРС/РРС р<0,05
РРС/контроль р<0,05 р<0,01
В группе пациентов с прогредиентным течением (ПРС) выявлялась абсолютная лимфопения, отмечалось снижение абсолютного и относительного количества зрелых Т- лимфоцитов (CD3) (р<0,05, ПРС vs. PPC, контроль), Th (CD4+) и абсолютного числа специфических цитотоксических лимфоцитов (CD8+). У больных прогредиентным PC значительная часть лимфоцитов (до 20%) не экспрессировала маркеры основных клеточных субпопуляций, что может быть связано с нарушением ресинтеза маркеров на клеточных мембранах лимфоцитов этой группы больных.
Во время обострения ремиттирующего течения PC (ОРС) в 1ериферической' крови пациентов снижалось как абсолютное, так и пгносителыюе количество специфических цитотоксических лимфоцитов р<0,05; ОРС vs РРС, контроль), что приводило к возрастанию |ммунорегуляторного индекса (CD4/CD8) до 2,5.
Независимо от активности иммунопатологического процесса, у всех ольных с ремиттирующим течением отмечалось повышение содержания бсолютного и относительного количества В-лимфоцитов.
У пациентов с ремиттирующим рассеянным склерозом на стадии «миссии отмечалось повышение количества NK-клеток (CD 16+). Экспресси я акт ива щ ю нпыхмар керов клетками периферической крови больных 'С.
Во всех группах пациентов наблюдалась высокая экспрессия Т-клетками голекул HLADR (CD3+HLAbRi),'что может свидетельствовать о постоянном рпсутствип в периферической крови больных активированных Т-лимфоцитов. )то изменение было особенно выражено в группе больных прогредиентным PC, де на (¡юне снижения общего числа 'Г-клеток, возрастала доля CD3+HLADR+ нмфоцитов (рис. I ).
Л
контроль РРС ОРС ПРС
—
V / / / / / / 7 / /
0,0 0.5 1,0
1,5 2.0 %
2,5
3,0 3,5 4,0 4,5
-достоверность различий с контролем (р<0,05).
Рис. !. Процент CD3+HLADR+ лимфоцитов от общего числа Т-клеток.
Поскольку костнмуляторные молекулы СЭ40 и С040Ь играют начительную роль в девиации иммунного ответа по Т-хелперному 2 пути, тимулируя пролиферацию В-лнмфоцитов (Роит А., и др., 2000), были изучены собенностп экспрессии молекул СБ40Ь и С040 Т- и В-лимфоцитами ериферической крови больных РС.
Во всех группах больных отмечалась тенденция к увеличению доли ;04+клеток, экспрессирующнх С040Ь, от общего количества Т-хелперов
*
(рис.2.). Та же тенденция была выявлена и для костимуляторной молекулы С040 па В-клетках (рис.3.). Повышение процента СЭ20+С040+ клеток по сравнению с контролем было статистически достоверно в обеих группах больных ремиггнрующим РС, однако максимальное повышение экспрессии С04О отмечалось во время обострения.
*-достоверность различий с контролем, р<0,05. ■"♦-достоверность различий со всеми группами, р<0,05.
Рис. 2. Процент С04+СЭ40Ь+ клеток от общего числа Т-хелперов
Данные о повышении экспрессии молекул CD40 и CD40L клетками периферической крови больных PC во время обострения согласуются с результатами исследований ряда других авторов (Svenningsson A., et al., 1996; Widha gen A., et al., 1996; Shapiro S., et al., 1999) и, наряду с повышением абсолютного и относительного количества В-клеток, могут свидетельствовать об активации гуморального звена иммунитета у больных с ремиттирующпм течением заболевания.
95,3'
*-достоверность различий с контролем, р<0,05. **-достоверпость различий со всеми группами, р<0,05.
Рис. 3 Процент СЭ20+С040+ клеток от общего числа В-лимфоцитов
Процессы апоптоза в периферической крови больных PC.
С целыо оценки активности процессов элиминации активированных клонов специфических цитотоксических лимфоцитов была изучена экспрессия Fas-антигена субпопуляциямп CD8+ лимфоцитов пациентов различных групп и здоровых лиц (рис. 4).
Во всех обследованных группах больных отмечалось снижение процента CD8' CD95+ лимфоцитов от общего количества цитотоксических лимфоцитов. Эти изменения были наименее выражены в группе больных ремиттирующим PC во время ремиссии, максимально - при обострений. Полученные результаты позволяют предположить снижение ■ Fas-опосредованного апоптоза CD8+ клеток при активном протекании заболевания, в частности, при прогредиентном течении и при обострении ремиттирующего.
^-достоверность различии с контролем, р<0,05.
Рис. 4. Процент CD8+CD95+ клеток от общего числа цитотокснческих
лимфоцитов
Экспрессия молекул FasL CD4+ и CD8+ лимфоцитами не отличалась от таковой в группе контроля. Изменение в соотношении Т-клеток, несущих Fas-аптнген и FasL у больных PC, может свидетельствовать о нарушении процессов элиминации аутореактивных клоновТ-лимфоцитов.
Fas-опосредованный запуск апопготической гибели клеток является наиболее изученным, но не единственным механизмом инициации апоптоза (Segal В.М., Cross A.M., 2000). TNF-Rl-опосредованный апоптоз также может играть существенную роль в элиминации активированных клеток, •репрессирующих этот рецептор, в частности - моноцитов (Gehr G„ et a! 1992). Исследования активности экспрессии TNF-R1 на моноцитах периферической крови больных PC выявили общую тенденцию к увеличению процента CD14+TNF-RI+ клеток от общего числа моноцитов, особенно выраженную во время ремиссии (р<0,01, СРС vs контроль). Полученные результаты могут свидетельствовать об элиминации активированных моноцитов в периферической крови этой группы больных путем запуска TNF-R1-опосредованного апоптоза в условиях повышенной продукции TNFcx. Увеличение экспрессии TNF-R1 на моноцитах периферической крови больных PC может иметь протективное значение и способствовать выходу пациентов в ремиссию.
Тродукния цитокинов клетками периферической крови больных PC.
В патогенезе рассеянного склероза большое значение имеет баланс про! противовоспалительных цитокинов. Изучение особенностей синтеза фовоспалптельных цитокинов клетками периферической крови в группах 5ольных с различным течением PC подтвердило данные литературы о юложительпой взаимосвязи между активностью заболевания и уровнем фодукиии TNFu, IFNy и IL-6 (Perez-Vicente et al., 1996; Hillert J. et al., 2001; .osy J. et al, 2001; и др.). У пациентов с прогредиентным течением PC отмечалось достоверное повышение в сыворотке содержания IFNy по сравнению : контролем, повышение его спонтанной и снижение индуцированной фодукции (р<0,05; ПРС vs РРС, контроль). Сходным образом изменялась люнтанная и индуцированная продукция 1L-6 (рис. 5 А). У пациентов с эемиттирующим течением во время обострения (ОРС) отмечалось повышение :ионтанной продукции IFNy и его содержания в сыворотке (рис. 5 Б). В этой руппе больных достигала максимальных значений спонтанная продукция TNFa I 1L-6. Во время ремиссии у больных с ремиттирующим течением сохранялась шсокая спонтанная продукция 1L-6, вместе с тем, индуцированная продукция FNy спускалась ниже значений контрольной группы (рис. 5 В).
Таким образом, продукция провоспалительных цитокинов IFNy, TNFa L-6 увеличивалась с повышением активности заболевания, однако если рост сонцентрацнп IFNy был заметен и в сыворотке больных, и в культуральной :реде нестпмулиропанкых MHI1K, то концентрации TNFa и IL-6 изменялись только в последних. Из этого следует, что для получения наиболее полной шформации об активности патологического процесса при PC, необходимо определение концентрации провоспалительных цитокинов в сыворотке кщиентов и их спонтанной продукции клетками крови в условиях in vitro.
Изучение особенностей продукции противовоспалительных цитокинов IL-10 и 1L-4), подавляющих развитие клеточного воспаления, позволило шявить ряд изменений во всех группах больных.
А
1РЫд ТЫР-а 11.-6
Ш
-содержание и сыворотке
-спонтанная продукция
-индуцированная продукция.
*- достоверное
отличие от доноров
(р<0,05)
**- достоверное
отличие от СРС
(р<0,05).
Г 2500
2000
1500
-1000
500
1РМд ТЫР-а И-6
В
ТЫР-а
Рис. 5. Продукция провоспалительных цитокинов клетками периферической крови больных РС (пг\мл.): А) прогредиентное течение РС; Б) обострение ремиттпрующего течения РС; В) ремиссия ремитгирующего течения РС.
У обследованных пациентов была отмечена тенденция к повышению ксирессни И.-Ю Т-хелперами, наиболее ярко выраженная у больных емиттнрующим РС во время ремиссии (рис. 6). По данным литературы, 1Ь-10 редуцируется различными субпопуляциями клеток периферической крови, днако его основными продуцентами являются Т-хелперы 2 тина (РоеЫаиО., [¡е!« М„ А1ЬегП Т.,1997).
контроль
РРС
ОРС
ПРС
-достоверность различий с контролем, р<0,05.
Рис. 6. Процент CD4+IL-10+ клеток от общего числа С04+лимфоцитов
Выявленные нами изменения подтверждают результаты ранее роведенных исследований о повышении экспрессии 1L-10 Т-клетками больных С во время ремиссии (van Boxel-Dezaire Л. et all, 1997; Poehlan D. et a!., 1997), с ем может быть связана и отмеченная нами тенденция к повышению онцентрашш IL-10 в сыворотке пациентов ремнттиругашим PC во время емиссни (рис.7). Так как IL-10 оказывает мощное иммуносупрессорное ействие, увеличение среди Т-хелнеров больных PC процента CD4+1L-10+ леток может иметь компенсаторное значение и способствовать развитию емнсспп. Индуцированная пирогепалом (преимущественно моноцитарная) родукция 11,-10 была значительно ниже нормы у всех больных, особенно 1метно было снижение индуцированной продукции в группах с активным гчением заболевания.
*-достоверные отличия от контрольных значений (р<0,001) **-достоверные отличия от больных СРС(р<0,01)
Рис. 7. Продукция 1Ь-10 клетками периферической крови больных РС (пг\мл)
Проведенные исследования не позволили выявить изменения продукции 1Ь-4 у больных РС по сравнению со здоровыми людьми. Однако, при изучении особенностей экспрессии !Ь-411 (С0124) В-лимфоцитами больных РС и контрольной группы было выявлено значительное увеличение процента С020+1Ь-4К+ среди В-клеток (р<0,001 ПРС, контроль) у больных с реми пирующим характером заболевания (рис.8), что может свидетельствовать о значительной роли Т-хелперного 2 иммунного ответа при развитии ремиттирующего варианта течения болезни.
О контроль
ОРРС
аорс
□ ПРС
Рис. 8. Процент CD20+IL-4R+ клеток от общего числа В-лимфоцитов
Пролиферативная активность лимфоцитов больных PC.
С целью выявления активированных пролиферирующих кло! i лимфоцитов, в том числе аутореактивных, в периферической крови больных ' была оценена спонтанная и индуцированная in vitro пролиферация лимфоците i реакции бластной трансформации (таблица 3). Отмечено достовер!! повышение уровня спонтанной пролиферации в группе больных с ОРС > сравнению с остальными обследованными лицами, и ее снижение во вре| ремиссии. Была выявлена достоверная обратная корреляционная зависимое между спонтанной пролиферацией лимфоцитов больных PC и количеством N-клеток в периферической крови, т. е. повышение количества NK-^etic сопровождалось снижением спонтанной продукции лимфоцитов. Принимая э внимание данные литературы, в которых отмечается повышение экспресса mRNA молекул FasL мононуклеарами периферической крови больных PC о время ремиссии (Huang W-X., et al, 2000), можно предположить, что NK-кле?«, активно экспресснрующие молекулы FasL, но не встречающиеся в оч;гах демиелинизаиии (Hayashi Т, et al., 1988; Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко АН., 1997), играют решающую роль в элиминации аутоагрессивных клонов Т-клток в периферической крови пациентов.
Таблица 3:
Пролиферация лимфоцитов периферической крови in vitro.
.V Спонтанная пролифераци > я (%) РБТЛ на РИА (их.) 14,ТЛ на PWM (их.) ОБМ 1 (2,5 мкг./мл., %) ОБМ 2 (7,5 мкг./мл., - %} QBM 3(15 мкг./мл., 0/ ч /о)
ПРС средние 1,5 34,3 7,8 2,6 1,3 2,0
ср. откл. 0,5 16,9 4,5 3,0 0,9 2,1
ОРС средние • 4,46 ' 23,7 . 7,1 0,9 1,3 1,2
ср. откл. 2,2 16,7 5,1 0,2 0,9 0,6
РРС средние 0,9 42,6 8,3 0,8 1,1 0,8
ср. откл. 0,3 21,4 4,8 0,2 0,3 0,2
контроль средние 1,1 39,4 6,98 0,9 0,9 0,9
ср. откл. 0,1 8,9 3,2 0,1 0,3 0,3
; Сравнение групп
ПРС/РР С' ■ р<0,05 i
ПРС/РР Ci р<0,05
ОРС/кои троль р<0,05
ОРС/РР С р<0,05 •
PPC/son троль р<0,05
Исследование пролиферативного ответа лимфоцитов периферической кров|( на введение специфического антигена - основного белка миелина - в трех различных концентрациях (2,5 мг/мл, 7,5 мг/мл, 15 мг/мл) не выявило достоверных отличий индекса пролиферации у всех обследованных групп лиц. Только при прогредиентном течении PC отмечается тенденция к увеличению пролиферативного ответа на специфический антиген. Принимая во внимание, что на стимуляцию ОБМ в условиях in vitro отвечают, в первую очередь, специфические С08+клетки (Badovinac V., et а!., 1995), можно предположить увеличение числа специфических аутореактивных цитотоксических лимфоцитов
больных прогредиентным РС по сравнению с другими обследованными шцалш.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Настоящее исследование было предпринято с целыо определения 1аиболее значимых показателей иммунитета, отражающих характер течения и ктивность иммунопатологического процесса при рассеянном склерозе. Троведенная работа позволила выявить сохранение постоянной напряженности (ммунитета у пациентов с РС не зависимо от развития заболевания, которая фоявляется в активной экспрессии молекул НЬАПк зрелыми Т-клетками, :остимуляторных молекул С04() и С134ОЬ В- и Т-лимфоцитами, в высокой фодукции провоспалительных цитокинов (№N7, ТЫ Ра, 1Ь-6). Однако, при >емнттирующим течении заболевания наряду с признаками активации ;леточного звена иммунитета, были отмечены признаки значительной активации уморального звена иммунитета (экспрессия 1Ь-4Я, синтез 1Ь-10, увеличение тела В-лимфоцитов). При выходе в ремиссию пациентов с ремиттирующим РС ! периферической крови этой группы больных выявлено развитие процессов шиминации активированных цитотоксических лимфоцитов (С1Э8+СП95 0 и [ктивнровапных моноцитов (С014+Т№-Ш+).
Результаты проведенной работы позволили оценить протективное шйствие натуральных киллерных клеток в процессах элиминации |ктивированных мононуклеаров периферической крови.
На основании детального анализа полученных данных выделены шмуиологические показатели, позволяющие дифференцировать >емиттирующее и прогредиентное течение, а так же показатели, позволяющие )существлять мониторирование состояния пациентов.
Результаты работы свидетельствуют о необходимости дальнейшего «учения механизмов элиминации аутореактивных клонов лимфоцитов у юльпых РС, поскольку открывают перспективы для разработки новых ;пецифических методов лечения заболевания.
ВЫВОДЫ.
!. В периферической крови пациентов с рассеянным склерозом независимо >т варианта течения заболевания сохраняется постоянная напряженность шмунитета, которая проявляется в активной экспрессии молекул НЬАОЛ :релыми Т-клегками, костимуляторных молекул СЭ40 и С040Е В- и Т-шмфоцитами, в высокой продукции провоспалительных цитокинов (1Р№/, ГЫРос, 1Ь-6).
!. У больных с прогредиентным течением рассеянного склероза )тмечается снижение количества зрелых Т-лимфоцитов (СШ+), достоверное /величение количества клеток не экспрессирующих кластеры дифференцировки
основных субпонуляций лимфоцитов, что связано с нарушением ресиитеза поверхностных маркеров. В этой группе больных отмечается наиболее активная экспрессия HLADR Т-клетками.
3. У пациентов с ремиттирующим PC отмечается значительное повышение экспрессии 1L-4R B-клетками и увеличение субпопуляции B-лимфоцитов. Во время обострения отмечается максимальное количество CD40+ B-клеток, а также снижение количества цитотоксических (CD8+) лимфоцитов, повышение иммунорегуляторного индекса; повышение спонтанной пролиферации лимфоцитов и нестимулированной продукции провоспалительных цитокииов (TNFa, IFNy, IL-6) in vitro.
4. При выходе пациентов с ремиттирующим течением PC в ремиссию возрастает экспрессия IL-10 Т-хелперами, отмечается активация процессов, направленных на элиминацию аутореактивных клонов специфических цитотоксических лимфоцитов и активированных моноцитов (увеличения количества CD8+CD95+ и CD14+TNF-R1+ клеток).
5. Увеличение количества N К-клеток у пациентов с ремиттирующим течением заболевания во время ремиссии имеет протективное значение, поскольку эти клетки активно экспрессируют FasL, участвуя в элиминации активированных клеток периферической крови, но не проникают в очаги демиелинизацни.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
1. Калашникова A.A., Калинина Н.М., Давыдова Н.И., Солнцева О.С. Продукция провоспалительных и противовоспалительных цитокииов у больных рассеянным склерозом // Мед. иммунология. - 2000. - Т.2, №2. -С.166.
2. Калашникова A.A., Калинина Н.М., Бисага Г.Н., Солнцева О.С., Давыдова Н.И. Изменение параметров иммунитета у пациентов с PC в зависимости от активности патологического процесса // Мед. иммунология. - 2001. - Т.З, №2. - С. 181.
3. Калашникова A.A., Калинина Н.М., Бисага Г.Н., Давыдова Н.И. Особенности субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных PC // Десятая конф. "Нейроиммунология": Сб.
' , /".. материалов.-СПб.,2001. - С. 123.
4. Калашникова A.A., Калинина Н.М., Бисага Г.Н. Изменение параметров иммунитета у больных рассеянным склерозом в зависимости от активности и формы заболевания // Аллергология и иммунология. - М., 2001.-Т.2, №2-3.-С. 274.
5. "Калашникова A.A., Калинина Н.М., Бисага Г.Н., Давыдова Н.И.
Изменение параметров иммунитета у больных рассеянным склерозом в зависимости от активности и формы заболевания // Актуальные вопросы
клинической и экспериментальной медицины: Тез. докл. конф.: Сб. материалов - СПб, 2002. - С.59.
Оглавление диссертации Калашникова, Анастасия Андреевна :: 2002 :: Санкт-Петербург
СОДЕРЖАНИЕ.2.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.4.
ВВЕДЕНИЕ.6.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ
1.1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови.11.
1.2. Особенности продукции цитокинов и рецепторов к ним.16.
1.2.1. Продукция цитокинов в ЦНС. 16.
1.2.2. Продукция цитокинов клетками периферической крови.36.
1.3. Процессы апоптоза клеток ЦНС и периферической крови.42.
1.4. Пролиферативная активность лимфоцитов периферической крови.46.
1.5. Аутоантитела в ликворе и в периферической крови больных РС.48.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.53.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ ИММУНИТЕТА В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РС С ПРОГРЕДИЕНТНЫМ И РЕМИТТИРУЮЩИМ ТЕЧЕНИЕМ ЗАБОЛЕВАНИЯ.
3.1. Параметры клеточного иммунитета.62.
3.2. Активность апоптотических процессов.68.
3.3. Изменения цитокинового звена иммунитета.70.
3.4. Изменения пролиферативной активности лимфоцитов.75.
3.5. Аутоантитела к основному белку миелина в сыворотке больных РС.76.
Введение диссертации по теме "Клиническая лабораторная диагностика", Калашникова, Анастасия Андреевна, автореферат
Актуальность темы.
Рассеянный склероз (РС) является хроническим прогрессирующим заболеванием центральной нервной системы аутоиммунной природы и характеризуется образованием очагов демиелинизации в белом веществе головного мозга и в спинном мозге (Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н., 1997). Чаще развивается ремиттирующая форма рассеянного склероза (около 90% больных) с чередованием периодов обострений и ремиссий, со временем приобретающая вторичнопрогрессирующее течение. Реже заболевание носит первичнопрогрессирующий характер (в 10-15% случаев).
При РС ключевым моментом в развитии патологического процесса является миграция активированных аутореактивных лимфоцитов через гематоэнцефалический барьер с последующим развитием иммунного ответа на антигены миелиновой оболочки нервных волокон, включающим синтез специфических антител, продукцию провоспалительных цитокинов как антигенпрезентирующими клетками, так и Т-лимфоцитами, активацию макрофагов, результатом чего является разрушение миелиновой оболочки нейрона с последующим фагоцитозом его фрагментов. Процессы демиелинизации приводят к нарушению проведения нервного импульса (ЬавБшап Н., 1995).
Предшествующая обострению рассеянного склероза активация Т-лимфоцитов периферической крови проявляется в экспрессии на поверхности клеток активационных маркеров, дальнейшей пролиферации Т-клеток, активной продукции ими провоспалительных цитокинов, которые, в свою очередь, стимулируют экспрессию молекул антигенпредставления
HLA DR, костимуляторных молекул) на В-клетках и Т-хелперах (Ярилин А.А., 1999).
Решающее значение в иммунопатогенезе рассеянного склероза имеют провоспалительные цитокины, стимулирующие развитие иммунного ответа. В их синтезе участвуют моноциты, NK-клетки, В- и Т-лимфоциты. Повышение продукции провоспалительных цитокинов (IL-1, TNFa, IFNy) предваряет развитие клинической симптоматики (Perez-Vicente et al., 1996, Hillert J. et al., 2001, Losy J. et al, 2001; и др.), что позволяет использовать их для мониторинга состояния пациентов.
В качестве естественных антагонистов Т-хелперов 1 и провоспалительных цитокинов часто выступают Т-хелперы 2 и, синтезируемые ими, противовоспалительные цитокины (IL-4, IL-10), способные подавлять воспалительный процесс. Увеличение продукции противовоспалительных цитокинов во время обострения, особенно IL-10, носит протективный характер, поскольку восстанавливает баланс активационных и супрессорных иммунных реакций. Вместе с тем, данные об изменении продукции некоторых других цитокинов, в том числе IL-4, противоречивы и нуждаются в уточнении (Sellebjerg F. et al., 1996; van Boxel-Dezaire A. et all, 1997).
Действие провоспалительных цитокинов в очагах демиелинизации проявляется в активации глиальных клеток, моноцитов, и стимуляции экспрессии клетками молекул, опосредующих апоптотические процессы (Fas-антигена, FasL, TNF-R1). В экспрессии этих молекул участвуют все клетки, вовлеченные в демиелинизирующий процесс, что обуславливает дуализм апоптотических процессов в патогенезе PC. С одной стороны, апоптотическими механизмами могут элиминироваться клоны аутореактивных клеток, с другой стороны, процессы апоптоза могут приводить к гибели олигодендроцитов (Segal. В.М., Cross А.Н., 2000).
Значительная роль апоптоза в развитии РС определяет интерес к изучению баланса экспрессии Рав-антигена и РаэЬ клетками, участвующими в воспалении, прежде всего, СБ4+ и СБ8+ лимфоцитами. В этой же связи представляет интерес активность экспрессии ПМР-Ш иммунокомпетентными клетками периферической крови, в частности, моноцитами.
Несмотря на активное изучение иммунопатогенеза РС многие ключевые моменты до настоящего времени остаются неясными. В связи с тем, что в последние годы отмечается тенденция к «омоложению» возраста больных РС, приводящая к их ранней инвалидизации, увеличению частоты заболеваемости, расширению территории распространения рассеянного склероза, особую актуальность приобретает уточнение механизмов развития иммунопатологического процесса, характерных для различных стадий заболевания и периодов клинических проявлений.
В связи с вышеизложенным была сформулирована цель исследования:
Выявить наиболее значимые показатели иммунитета, отражающие характер течения и активность иммунопатологического процесса при рассеянном склерозе.
Для достижения цели были сформулированы следующие задачи исследования:
1. Изучить субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных РС с прогредиентным и ремиттирующим течением заболевания во время обострения и ремиссии, оценить экспрессию иммунокомпетентными клетками активационных маркеров и костимуляторных молекул.
2. Охарактеризовать активность процессов апоптотической гибели клеток иммунной системы путем определения экспрессии Раз-антигена и БавЬ на СБ4+ и СБ8+ лимфоцитах, ТИР-Ш на моноцитах больных РС.
3. Выявить особенности продукции цитокинов и их рецепторов клетками периферической крови в зависимости от варианта течения заболевания.
4. Изучить пролиферативную активность лимфоцитов больных РС на разных этапах болезни в ответ на стимуляцию митогенами и специфическим антигеном.
Научная новизна.
Впервые получены результаты, выявляющие особенности развития иммунопатологического процесса при ремиттирующем и прогредиентном течение РС.
Изучены особенности экспрессии НЬАОЯ и костимуляторных молекул (С040 и С040Ь) лимфоцитами периферической крови больных РС с различными вариантами течения болезни, а так же характер экспрессии молекул (Раз-антиген, РавЬ, ТЫР-Ш), опосредующих элиминацию активированных клонов клеток.
Впервые проведено комплексное исследование изменений продукции цитокинов и экспрессии их рецепторов клетками периферической крови больных рассеянным склерозом с прогредиентным и ремиттирующим течением заболевания, как во время обострения, так и в ремиссию.
Сравнительный анализ показателей клеточного и гуморального иммунитета и активности заболевания позволил оценить наблюдаемые изменения как способствующие развитию патологического процесса, так и протективные для пациентов.
Практическая значимость
Полученные сведения об изменениях субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных PC, активности экспрессии ими активационных маркеров, продукции цитокинов и их рецепторов в зависимости от формы заболевания могут быть использованы как дополнительные дифференциально-диагностические критерии при уточнении типа течения PC.
Оценка изменений субпопуляционного состава лимфоцитов, спонтанной продукции провоспалительных цитокинов (TNFa, IFNy), спонтанной пролиферативной активности клеток позволяет прогнозировать развитие клинических симптомов обострения и может быть использована для мониторирования состояния пациентов с ремиттирующим PC.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. В периферической крови пациентов с рассеянным склерозом независимо от варианта течения заболевания сохраняется постоянная напряженность иммунитета, которая проявляется в высокой продукции провоспалительных цитокинов и активной экспрессии молекул, участвующих в представлении антигена Т- и В-лимфоцитами.
2. У больных с прогредиентным течением рассеянного склероза в периферической крови преобладают признаки развития иммунного ответа по Т-хелперному 1 пути, в то время, как у больных с ремиттирующим PC отмечаются признаки разаития иммунного ответа по Т-хелперному 2 пути.
3. При выходе пациентов в ремиссию возрастает экспрессия ILIO Т-хелперами, отмечается активация процессов, направленных на элиминацию аутореактивных клонов (увеличение количества CD8+CD95+ и CD14+TNF-R1+ клеток).
Заключение диссертационного исследования на тему "Изменения параметров иммунитета у больных рассеянным склерозом в зависимости от вариантов течения и активности заболевания"
ВЫВОДЫ.
1. В периферической крови пациентов с рассеянным склерозом независимо от варианта течения заболевания сохраняется постоянная напряженность иммунитета, которая проявляется в активной экспрессии молекул HLADR зрелыми Т-клетками, костимуляторных молекул CD40 и CD40L В- и Т-лимфоцитами, в высокой продукции провоспалительных цитокинов (IFNy, TNFcc, IL-6).
2. У больных с лрогредиентным течением рассеянного склероза отмечается снижение количества зрелых Т-лимфоцитов (CD3+), достоверное увеличение количества клеток не экспрессирующих кластеры дифференцировки основных субпопуляций лимфоцитов, что связано с нарушением ресинтеза поверхностных маркеров. В этой группе больных отмечается наиболее активная экспрессия HLADR Т-клетками.
3. У пациентов с ремиттирующим PC отмечается значительное повышение экспрессии IL-4R В-клетками и увеличение субпопуляции В-лимфоцитов. Во время обострения отмечается максимальное количество CD40+ В-клеток, а также снижение количества цитотоксических (CD8+) лимфоцитов, повышение иммунорегуляторного индекса; повышение спонтанной пролиферации лимфоцитов и нестимулированной продукции провоспалительных цитокинов (TNFa, IFNy, IL-6) in vitro.
4. При выходе пациентов с ремиттирующим течением РС в ремиссию возрастает экспрессия 1Ь-10 Т-хелперами, отмечается активация процессов, направленных на элиминацию аутореактивных клонов специфических цитотоксических лимфоцитов и активированных моноцитов (увеличения количества СБ8+С095+ и СВ14+Т№Ч11+ клеток).
5. Увеличение количества №С-клеток в периферической крови пациентов с ремиттирующим РС во время ремиссии имеет протективное значение, поскольку эти клетки активно экспрессируют БазЬ, участвуя в элиминации активированных клеток периферической крови, но не проникают в очаги демиелинизации.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
1. Иммунологические обследования пациентов с рассеянным склерозом должны проводиться в динамике. При оценке иммунограмм больных РС необходимо учитывать результаты предыдущих исследований, сопоставляя полученные данные, в первую очередь, с иммунологическими показателями пациента во время стойкой ремиссии.
2. Клинико-лабораторными маркерами развития обострения рассеянного склероза являются: повышение иммунорегуляторного индекса; увеличение содержания в сыворотке и спонтанной продукции №N7, ТЫБа, 1Ь-6; повышение экспрессии НЬАОЯ Т-клетками (СБЗ+НЬАОК+), увеличение спонтанной пролиферации лимфоцитов.
3. Снижение иммунорегуляторного индекса до нормальных значений, повышение количества В-лимфоцитов и №С-клеток в периферической крови, снижение спонтанной пролиферации лимфоцитов свидетельствуют о выходе пациента с РС в ремиссию.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Калашникова, Анастасия Андреевна
1. Аутеншлюс А.Н., Панкратов Е.В. Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом // Пат. 2116651.- 1998.-бюл. №21.
2. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Акимов С.Б., Давыдова Н.И. Иммунопатогенетические различия ремиттирующего и прогредиентного рассеянного склероза. // Иммунология. 2000. - №3. -С.41-43.
3. Гусев Е.И., Беляева И.А., Чехонин В.П., Демина Т.Л. Клинико-иммунохимическая характеристика ремиттирующего течения PC // Вестн. РАМН. 1999. - № 7. - С. 40-45.
4. Гусев Е.И. Неврология и нейрохирургия. М., 2000. - 418 с.
5. Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н. Рассеянный склероз. М., 1997. -463 с.
6. Демина Т.Л. Бойко А.Н. Особенности клиники и иммунопатогенеза рассеянного склероза и неврологических проявленй СПИДа. // В: Актуальные проблемы неврологии. 1989. - С. 214-217.
7. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. С-Пб., -1998.-С. 117.
8. Крыжановский Г.Н., Магаева C.B. Нейроиммунопатология. М., 1997. - 68 с.
9. Кучиескене Д.И. Клиническое значение определения антител к ОБМ у больных PC, ретробульбарным невритом и их здоровых родственников: Автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.13. М., 1992. -24 с.
10. Ю.Ланг Н.Р. Стимуляция лимфоцитов. М.: Медицина, 1976. - 288 с.11 .Ройт А., Бростофф Д., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ. М. - 2000. -С. 118.
11. Фримель Г. Иммунологические методы. М., 1987. - 303 с.
12. Чекнев С.Б. Патогенез рассеянного склероза: иммуностимуляция илииммунодефицит. // Иммунология. 1994. - 2, 9-17.
13. Чехонин В.П., Турина О.И., Дмитриева Т.Б. и др. Основной белок миелина: Строение, свойства, функции, роль в диагностике демиелинизирующих заболеваний // Вопросы мед. химии. 2000. - № 6.-С. 13.
14. Ярилин А.А. Основы иммунологии. 1999. - 607 с.
15. Achiron A., Miron S., Zeitun I. et al. Cytokine production is increased in multiple sclerosis patients // Eur. Cytokine Netw. 1998. - Vol.9, N 3. - P. 501.
16. Aderka D., Le J., Vilcek J. IL-6 inhibits lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor production in cultured human monocytes, U937 cells, and in mice // J. Immunol. 1989. - Vol.143. - P. 3517-3523.
17. Akdis C.A., Blaser K. IL-10-induced anergy in peripheral T-cell and reactivation by microenviromental cytokines: two key steps ion specific immunotherapy // FASEB J. 1999. - Vol. 13. - P. 603-609.
18. Alderson M.R., Tough T.W., Davis-Smith T. et al. Fas ligand mediates activation-induced cell death in human T cell lymphocytes // J. ExP. Med. -1995.- Vol.181.-P.71.
19. Amano Y., Lee S., Allison A. Inhibition of glucocorticoids of the formation of interleukin-lb and interleukin-6: mediation by decreased mRNA stability // Mol. Pharmacol. 1992. - Vol.43. - P.176-182.
20. Arnason B. 1995. The role of cytokines in multiple sclerosis // Neurology. -Vol.45, suppl.6. P. 54.
21. Assoian R.K., Fleuurdelys B.E., Stevenson H.C. et al. Expression and secretion of type P transforming growth factor by activated human macrophages // Prac. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84. - P. 60206024.
22. Bacrwald K.D., Popko B. Effects of interferon-gamma in cultured human glial cells // J. Neurochem. 1997. - Vol. 69. - P.37
23. Badovinac V., Mostrarica S.M., Stosic-Grujicic S. et al. The effects of recombinant interleukin-lR antagonist (rlL-lra) on the adoptive transfer of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in rats // Neuroimmunology. 1995. - Vol. 1. - P. 13.
24. Balashov K., Smith D., Khonry S. Increased IL-12 production in progressive multiple sclerosis: induction activated CD4+ T-cells via CD40L // Proc. Nat. Acad. Sci. 1997. - Vol. 83. - P. 2462-2468.
25. Balashov K.E., Comabella M., Ohashi T. et al. Defective regulation of IFNy and IL-12 by endogenous IL-10 in progressive multiple sclerosis // Neurology. 2000. - Vol.55, N2. - P. 192-198.
26. Balashov K.E., Rottman J.B., Weiner H.L., Hancock W.W. CCR5+ and CXCR3+ T cells are increased in multiple sclerosis and their ligands MIP-la and IP-10 are expressed in demyelinating brain lesions // Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. - Vol.96. - P.6873-6878.
27. Barkhof F., Frequin S.T., Hommes O.R. A correlative traid of gadolinium-DTPA MRI, EDSS and high-dose intravenous methylprednisolone // Neurology. 1992. - Vol.42. - №1. - P.63-67.
28. Barna B.P., Estes M.L. Human astrocyte growth regulation: IL-4 sensitivity and receptor expression // J. Neuroimmun. 1995. - Vol. 60. - P.75-81.
29. Baron W., Metz B., Hoekstra D., de Vries H. PDGF and FGF-2 signaling in oligodendrocyte progenitor cells: regulation of proliferation anddifferentiation by multiple intracellular signaling pathways // Mol. Cell Neurosis. 2000. - Vol. 15. - P. 314-329.
30. Beck J., Rondot P., Catinot L. et al. Increased production tumor necrosis factor precedes clinical manifestation in multiple sclerosis: do cytokines trigger off exacerbations? // Acta Neurol. Scand. 1988. - Vol.78. - P.318.
31. Becker S., Riecks M., Epplen C., Kabelitz D., h #p. yS-T-cells and activation patterns in relapsing-remitting multiple sclerosis. // Multiple sclerosis: clinical and ladoratory rsearch. 1997. - Vol.3 - №5. - P.l 16.
32. Beniac D.R., Wood D.D., Palaniyar N. Interaction between levels of proinflammatory cytokines production and serum concentration of neurospecific proteins as a marker of BBB damage in MS. // J. Struct. Biol.- 2000 Vol.129, N 1. - P.80-95.
33. Bertolotto A., Iudicello M., Manzardo E. et al. TNFa mRNA in peripheral blood mononuclear cells of relapsing-remitting MS patients correlates with clinical activity // Europ. J. of Neurol. 1996. - Vol.3, suppl. 4. - P.36-38.
34. Bonetti B., Raine C.S. Multiple sclerosis: oligodendrocytes display cell death-related molecules in situ but do not undergo apoptosis // Ann. Nevrol.- 1997.-Vol.42.-P. 74-84.
35. Bongioanni P., Lombardo F., Moscato G. et al. T-cell interleukin-6 receptor binding in interferon-beta-lb-treated multiple sclerosis patients // Eur. J. Neurol. 2000. - Vol. 7, N 6. - P. 647-653.
36. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone morrow // Scand. S. Clin. Lab. Investig. 1968. - Vol.76. -P.1092-1097.
37. Brokstad K.A., Page M., Nyland H. Cytokine profile of maltiple sclerosis patientis // Acta Neurol. Scand. 1994. - Vol. 89, N 6. - P. 407-411.
38. Campbell L.L., Stalder A.K., Pagenstecher Y.A.A., Asensio V.C. Transgenic models to study the actions of cytokines in the CNS. // Neuroimmunomodulation. 1998. - Vol.5, N 3-4. - P. 126-135.
39. Cannella B., Raine C.S. The adhesion molecule and cytokine profile of maltiple sclerosis lesions // Ann. Neurol. 1995. - Vol. 37. - P. 424-435.
40. Chabot S., Yong V.W. Interferon beta-lb increases interleukin-10 in a model of T cell microglia interaction // Neurology. - 2000. - Vol.55, N10. -P. 1497-1505.
41. Chabot S., Williams G., Yong V.W. Microglia production of TNF-a is induced by activated T-lymphocytes involvement of VLA-4 and inhibition by interferonp-lb // J. Clin. Invest. 1997. -Vol. 100. - P. 604-608.
42. Chalon M.P., Sindic C.J.M., Laterre E.C. Serum and CSF levels of soluble interleukin-2 receptors in MS and other neurological diseases: a reappraisal // Acta Neurol. Scand. 1993. - Vol. 87. - P.77-82.
43. Chechonin V.P, Deomina T.L., Beliaeva I.A. et al. Interaction between levels of pro-inflammatory cytokines production and serum concentration of neurospecific proteins as a marker of BBB damage in MS // Multiple sclerosis. 1997. - Vol. 2. - P.133.
44. Chofflon, Roth S., Juillard C. Tumor necrosis factor production capacity in multiple sclerosis // Europ. Cytokine Network. 1997. - Vol.8, N3. - P.253-257.
45. Chung I.Y., Benveniste E.N. Tumor necrosis factor-a production by astrocytes. Induction by lypopolysaccharide, IFNy and IL-1 (3 // J. Immunol. 1990. -Vol. 144. - P. 2999-3007.
46. Comi, M., Leone M., Bonissoni S., et al. Defective T cell Fas function in patients with multiple sclerosis // Neurology. 2000. - Vol.55, N 7. - P. 921-927.
47. Czlonkowska A., Paz A., Fiszer U., Zaborski J., Czlonkowski A. Phenotyping analysis of leukocytes in patients with multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol. 3, N 5. -P.110.
48. D'Souza S.D., Bonetti B., Balasingam V. et al. Multiple sclerosis: Fas signaling in oligodendrocyte cell death // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 184. -P. 2361-2370.
49. Dayer J.M., Burger D. Interleukin-1, tumor necrosis factor and their specific inhibitors // Eur. Cytokine Netw. 1994 - Vol.5, N6. - P.563-571.
50. Dinarello C.A. The role of interleukin-1 in disease // New Advances on Cytokines.-NewYork, 1992.-P. 303-313.
51. Dinarello C.A. The biological properties of interleukin-1 // Eur. Cytokine Netw. Vol.5, N6. - 1994. - P.517-531.
52. Djordjevic D., Jovicic A., Kataranovski M. et al. Interleukin-10- possible immunomodulatory role in multiple sclerosis patients // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol. 3, N 5. - P.314.
53. Dowling P., Shang G., Raval S. et al. Involvement of the CD95 (APO-l\Fas) receptorMigand system in multiple sclerosis brain. // J. Exp.Med. -1996. Vol.184.-P. 1513-1518.
54. Femstein G.Z., X. Wang, F.C. Barone. IL-Ira production in central nervous system in multiple sclerosis // Multiple sclerosis. 1998. - Vol.4, N.6. -P.313.
55. Fishman S., Hobbs K. IL-lra stimulates production of IL-4 // Cytokines / Ed by A. Mire-Sluis, R. Thorpe. 1998. - Chapter 7. - P.103-115.
56. Fleisher B., Marquardt P., Poser S., Kreth H.W. Phenotypic markers and functional characteristics of T-lymphocyte clones from cerebrospinal fluid in multiple sclerosis. // J. Neuroimmunol. 1984. - Vol. 7. - P. 151-162.
57. Fluckiger G. Interleukin-10 // Cytokines / Ed by A. Mire-Sluis, R. Thorpe. 1998. - Chapter 18. - P.234-237.
58. Gata J.M., Dinca L. Dinamics of CD4, CD8 and CD4 subpopulations during relaps versus remitting in MS patients // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research 1999. - Vol. 7, N 4. - P.514.
59. Gehr G., Gentz R., Brockhaus M. et al. Both tumor necrosis factor receptor types mediate proliferative signals in human mononuclear cells activation // J. immunol. 1992. - Vol.149. - P.911-917.
60. Gerosa F., Paganin C., Peritt D. et al. Interleukin-12 primes human CD4 and CD8 T-cell clones for high production of both interferon-y and interleukin-10 // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 183. - P. 2559-2569.
61. Goldman M., Stordeur P. Interleukin-10 as an anti-stress cytokine // Eur. Cytokine Netw. 1997. - Vol. 8, N.3. - P. 301-302.
62. Hafler D.A., Hemler M.E. Christenson L. et.al. Investigation of in vivo activated T cells in multiple sclerosis and inflammatory central nervous system diseases. // Clin. Immunol. Immunopatol. 1985. - Vol. 37. - P. 163-171.
63. Haggiag S., Chebat J., Revel M. Induction of myeline gene expression in cell culture by IL-6rReceptor-IL-6 chimera // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P. 53.
64. Haviv R., Stein R. Neuronal expression of TNF-R. 11 J. Neurosci. Res . -1998.-Vol. 52.-P. 380-389.
65. Hayashi T., Morimoto C., Burks J.S. et al. Dual label immunocytochemistry of the active multiple sclerosis lesions: major histocompatibility complex and activation antigens. // Ann. Neurol. - 1988. -Vol. 24.-P. 523-531.
66. Hillert J., W.-X. Huang Y.-P. Jin.Cytokine network analysis in multiple sclerosis. Journal of neurological sciences // Abstract of the XVII world congress of neurology. London, 2001. - Vol.187, suppl.l. - P. 269.
67. Hohlfeld R., Lucas K. Cytokine networks in multiple sclerosis //Neurology.- 1994. Vol.45, suppl.6. — P. 1.
68. Inoges S., Merino J., Bandres E. et al. Cytokin flow cytometry differentiates the clinical status of multiple sclerosis patients // Clin, and Exper. Immunol.- 1999. -Vol.115, №3.-P.521-535.
69. Jander S., Stoll G. Differential induction of IL-12 IL-18 and IL-lbeta converting enzyme mRNA in experimental autoimmune encephalomyelitis of the Lewis rat // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.91. - P. 93.
70. Jeannin P., Delneste Y., Seveso M. et al. IL-12 synergizes with IL-2 and other stimuli in inducing IL-10 production by human T cells // J. Immunol. -1996.-Vol. 156.-P. 3159-3165.
71. Johnson D., Sato S., Quarles R.H. et al. Quantitation of myelin-associated glycoprotein in human nervous tissue from controls and multiple sclerosis patients. // Neurochem. 1986. - Vol. 46. - P. 1086-1093.
72. Joyce D.A., Steer J.H. Tumor necrosis factor a and interleukin-la stimulate late shedding of p75 TNF receptor but not p55 TNF receptor from human monocytes // J. of interferon and cytokine research. 1995. - Vol.15. - P. 947-954.
73. Ju S.-T., Panka D.J., Cui H. Fas (CD95)Fas-L interactions required for programmed cell death after T cell activation // Nature. 1995. - Vol. 373. - P. 444.
74. Jurewicz A., Matysiak M., Walczak A. et all. Signal transduction pathways in glial cells after TNF stimulation // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P.24.
75. Jurewicz A.M., Walczak A.K., Selmaj K.W. Glial cells in multiple sclerosis: phenotype and cytokine profile // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P.28.
76. Kishimoto T. The biology of interleukin-6 // Blood. 1989. - Vol.74. - P.l.
77. Kohno K., Kataoka J., Ontsuki T. et al. IFN-gamma-inducing factor (IGIF) is a costimulatory factor on the activation of Thl but not Th2 cells and exerts its effects independently of IL-1 // J. Immunol. 1997. - Vol.158. - P. 1541.
78. Kouwenhoven M, Teleshova N., Ozenci V. et al. Monocytes in multiple sclerosis: phenotype and cytokine profile // J. Neuroimmun. 2001. - Vol. 112, N1-2.-P. 197-205.
79. Kraus J., Fischer O., Kuehne B.S. et al. Diurnal changes of common immunological markers in the serum of MS patients and healthy donors -preliminary results // Abstract of the XVII world congress of neurology. -London, 2001. Vol.187, suppl.l. - P. 273.
80. Lamers K.J., van Engelen B.G., Gabreels F.J. Variants of immune disorders in various forms of multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. 1995. - Vol. 92, N3.-P. 247-251.
81. Lassman H. Blood-brain barrier and cell adhesion molecules // J. Neuroimmunology. 1995. - Vol. 34, suppl. 1. - P. 312-318.
82. Lassman H. Mechanisms of demyelination in multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P.2.
83. Lily O., Vincent A., Lourence N., Palace J. Serum autoantibodies against a neuronal cell line correlate with disability in MS. // J. neurol. scien. 2001. -Vol.187, suppl.l.-P. 265.
84. Lindberg R, De Groot C J.A., Montagne L. et al. Matrix Metalloproteinases, but not their endogenous ingibitors TIMPs and CSF cells of MS patients // J. neurol. scien. 2001. - Vol.187, suppl.l. - P. 263.
85. Lindberg R. Matrix Metalloproteinases in the brain tissue and CSF of MS // J. neurol. scien. 2001. - Vol.187, suppl.l. -P.262.
86. Lindsay R.M. Role of neurotrophins and trk receptor in the development and mainte-nance of sensory neurons: an overview // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1996. - Vol. 351. - P.60.
87. Link J., Sodderstorm, T. Olsson B. Hojeberg. Increased TGFJ3, IL-4 and IFNy in multiple sclerosis // Ann. Neurol. 1994. - Vol.36. - P.379.
88. Lissyani N.I. Variants of immune disorders in various forms of multiple sclerosis. // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. -Vol.3, N5.-P. 64.
89. Loddick S.A., Wong M., Bongiorno P.B. et al. Endogenous interleukin-1 receptor antagonist is neuroprotective // J. Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1997. - Vol. 234, N 1. - P.211-215.
90. Losy J., Niezgoda A. Increase of IL-18 in patients with multiple sclerosis and its relation to brain MRI activity // J. neurol. scien. 2001. - Vol.187, suppl. 1. — P. 273.
91. Malyark M., Smith M.F., Abel A.A. et all. The differential production of three forms of IL-IRa by human neutrophils and monocytes // J. Immunol. -1998. Vol. 4. - P.2004-2010.
92. Manual of flow cytometry // Abstract of the X world congress of laboratory reseurch. 1999. - Mainz. - P.72.
93. Marin V., Bensa P., Kaplanski G. Augmented expression of TNFa and lymphotoxin in mononuclear cells in MS and optic neuritis. // Eur. Cytok. Netw. 1998. - Vol.9, N.3. - P. 501.
94. Marz P., Cheng J.-G., Gadient R.A. et al. Sympathetic neurons can produce and respond to interleukin 6 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. -Vol.95.-P. 3251-3256.
95. Massaro A.R., Soranzo C., Carvenale A. et al. The ciliary neurothrophic factor (CNTF) in CSF from multiple sclerosis patients // Neuroimmunology. 1995. - Vol.1. - P. 12.
96. Matsuda M., Tsukada N, Miyagi K., Yanagisawa N. Increased levels of soluble tumor necrosis factor receptor in patients with multiple sclerosis and HTLV-1-associated myelopathy // J. Neuroinnunol. 1994. - Vol. 52. -P. 33.
97. Micallef M.J., Ontsuki T., Kohno K. et al. IFN-gamma-inducing factor enhances Thl cytokine production by stimulated human T cells: synergism with IL-12 for IFN-gamma production // Eur. J. Immunol. -1996.-Vol.26.-P. 1647.
98. Miron S., Noy S., Rotestein Z., Achiron A. Concomitant analysis of TNF-a and IL-6 increase the sensitivity and improve the defection of ralapses in multiple sclerosis // Multiple sclerosis. 1997. - Vol. 2. - P. 314.
99. Miron S., Zeitun I., Barak Y. et al. TNF-a and IL-6 serum levels as markers of relapse detection in multiple sclerosis patients // Eur. Cytokine Netw. 1998. - Vol.9, N3. - P. 337.
100. Moller P., Koretz K., Leithauser F. et al. Expression APO-1 (CD95), a member of the NGF\TNF receptor superfamily, in normal and neoplastic colon epithelium // Int. J. Cancer. 1994. - Vol. 57. - P. 371-377.
101. Multiple sclerosis / Ed by W. Donald Paty, C.George. Philadelphia, 1998. - 648 p.
102. Navicas V., He B., Link J. et al. Angmented expression of TNFa and lymphotoxin in mononuclear cells in MS and optic neuritis // Braine. -1996.-Vol.119.-P. 213.
103. Norton W.T., Cammer WIsolation and characterization of myelin // Myelin / Ed by P. Morell. New York, 1984. - P. 147-195.
104. Ohta M., Ohta K., Ma J. Clinical and analytical evalution of enzyme immunoassay for myelin basic protein in cerebrospinal fluid. // Clin Chem, 2000. Vol. 46, N 9. - P. 1326-1330.
105. Olsson I., Gatanaga T., Guluberg U. et al. Tumor necrosis factor (TNF) binding proteins (soluble TNF-receptor forms) with possible roles in inflammation and malignancyEur // Cytok. Netw. 1993. - Vol.4. - P. 169.
106. Olsson T., Wang W.Z., Hojeberg B. et al. Lymphocytes in MS determined by antigen-induced secretion of interferon gamma // J. Clin. Invest. 1990. - Vol.86. - P.981.
107. Ortiz-Arduan A., Danoff T.M., Kalluri R. et al. Regulation of Fas and Fas-L expression in cultured murine renal cells and in the kidney during endotoxemia // Am. J. Physiol. 1996. - Vol. 271. - P.l 193-1201.
108. Perez-Vicente J.A., Minguela A., Alvares-Lopez M.R. et al. Th2 cytokine patterns in multiple sclerosis // Europ. J. of immunol. 1996. -Vol.3, suppl. - P.4-47.
109. Poehlau D., Rieks M., Alberti T. et al. Th-1 and Th-2 type cytokine producting peripheral blood mononuclear cells of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis // Multiple sclerosis. 1997. - Vol. 2. - P. 313.
110. Pouly S., Becher B., Blain M., Antel J.P. Interferon-g modulates human oligodendroglial susceptibility to Fas-mediated apoptosis // J. Neuropatol. Exp. Neurol. 2000. - Vol. 59. - P. 280-286.
111. Raine C.S., Bonetti B., Cannella B. Multiple sclerosis: expression of molecules of the tumor necrosis factor ligand and receptor families in relationship to demyelinated plaque // Rev. neurol. (Paris). 1998. - Vol. 154,N8-9.-P. 577-585.
112. Reunanen M.I. Lymphocyte stimulation and viral antibodies synthesis in cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis // Acta Univ. Oui. -Neurologica. 1982. - Vol. 8. - P. 1-56.
113. Rieckmann P., Albrecht M., Kitze B. Cytokine mRNA levels in mononuclear blood cells from patients with multiple sclerosis // Neurology. 1994.-Vol.44.-P.1523.
114. Rieckmann P., Albrecht M., Kitze B. et al. Tumor necrosis factor-a messenger RNA expression in patients with MS is associated with disease activity // Ann. Neurol. 1995. - Vol.32. - P.82.
115. Rieckmann P., Martin S., Weichselbraun I. et al. Serial analysis of circulating adhesion molecules and TNF receptor in serum from patients with multiple sclerosis: cICAM is an indicator for relapse // Neurology. -1994.-Vol.44.-P. 2367.
116. Rieks M., Bode A., Schilling P. et al. Intracellular Thl- and Th2-type cytokines in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis a longitudinal study // Euro P. J. of Neurol. - 1996. - Vol.3, suppl.4. - P.42-90.
117. Robinson D. Shibuya K., Mui A. et al. IGIF does not drive Thl development but synergizes with IL-12 for IFNgamma production and activates IRAK and NfkappaB // Immunity. 1997. - Vol.7. - P. 571.
118. Rodriguez C.F., Lucchinetti C.F. Is apoptotic death of the oligodendrocyte a creitical event in the pathogenesis of multiple sclerosis? //Neurology. 1999.-Vol. 53, N 6. - P.1409-1414.
119. Rose-John S., Marz P., Ficher M. et al. IL-6 and soluble IL-6 receptor are potent stimulators of hematopoietic and neuronal cells in vitro and in vivo // Eur. Cytok. Netw. 1998. - Vol.9, N.3. - P. 328.
120. Sabelko-Downes K.A., Cross A.H., Russell J.H. J Dual role for Fas Ligand in the initiation of and recovery from experimental allergic encephalomyeliti // Exp. Med. 1999. - Vol.18. - P. 1195-1205.
121. Sasaki H., Pollard R.B., Schmitt D., Suzuli F. Transforming growth factor pin the regulation of immune response // Clin. Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol. 65. - P. 1-9.
122. Sawada M., Sazumura A., Hosoya H. et al. Interleukin-10 inhibits both the production of cytokines and expression of cytokines receptors in microglia // J. Neurochem. 1999. - Vol. 72. - P. 1466-1471.
123. Schneider H., Prossi F., Balschun D. et al. A neuromodulatory role of interleukin-ip in hippocampus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. -Vol.95. - P.7778-7783.
124. Scholz C., Kurt T., David E. Anderson, Gordon J. Freeman and David A. Hafler. Expansion of autoreactive T cells in multiple sclerosis is independent of exogenous B7 costimulation // J. Immunol. 1998. - Vol. 160.-P. 1532-1538.
125. Schonrock L.M., Galowski G., Rruck W. IL-6 expression in early multiple sclerosis lesions. // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P.4.
126. Segal. B.M., Cross A.H. Fas(l) track to apoptosis in multiple sclerosis: TNF receptor may suppress or potentiate CNS demyelination // Neurology. 2000. - Vol. 55, N 7. - P. 906-907.
127. Sellebjerg F., Bendtzen K., Christiansen M., Frederiksen J. Cytokines and soluble IL-4 receptor in patients with acute optic neuritis and multiple sclerosis // Europ. J. Neurol. 1996. - Vol.3, suppl. 4. - P.31.
128. Sellebjerg F., Christiansen M., Nielsen P.M. Cytokines and apoptosis in patients with multiple sclerosis // Multiple Sclerosis: clinical and laboratory research. 1998. - Vol. 4, N 6. - P. 475-479.
129. Selmaj K., Raine C. Tumor necrosis factor mediates myelin and oligodendrocyte demage in vitro // Ann Neurol. 1988. - Vol. 23. - P. 33946.
130. Sharief M.K., Semra Y.K., Seidi O.A. The FLIP side of multiple sclerosis // J. neurol. scien. 2001. - Vol.187, suppl.l. - P. 252.
131. Shrikant P., Benveniste E.N. The central nervous system as an immunocompetent organ: role of glial cells in antigen presentation // J. Immunol.- 1996.-Vol. 157.-P. 1819-1822.
132. Sindic CJ., Van Laere V., Monteyne P. Cytokine mRNA expression in CSF and peripheral blood mononuclear cells in multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol.3, N.5. -P. 32.
133. Sipe K.J., Srisawasdi D, Dantzer R, Kelley K.W. Weyhenmeyer J.A. An endogenous 55 kDa TNF receptor mediates cell death in neural cell line. // Brain Res. Mol. Brain. Res. 1998. - Vol. 38. - 222-232.
134. Sommer N. Heterogeneus cellular composition of cerebrospinal fluid in MS // Hemmer. 2001. - Vol.187, suppl.l. - P.268.
135. Spuler S., Yousry T., Scheller A. et al. Multiple sclerosis: prospective analysis of TNF-a and 55kDa TNF receptor in CSF and serum in correlation with clinical and MRI activity // Neuroimmunol. 1996. - Vol. 66.-P. 57.
136. Steinman L. Multiple sclerosis: a coordinated imunological attack against myelin in the central nervous system // Cell. 1996. - Vol.85. - P. 299-302.
137. Taga T., Kishimoto T., Akira S. Cytokine signal transduction // Cell. 1994. - Vol. 76. - P. 241-251.
138. Tanaka M., Suda T., Haze K. et al. Fas ligand in human serum // Nat. Med. 1996.-Vol. 2.-P. 317.
139. Thompson A.J., Brazil J., Feighery C. Multiple sclerosis: analysis of cellular composition of cerebrospinal fluid // Acta Neurol. Scand. 1985. -Vol. 72,N6.-P. 577-583.
140. Thomson A. The handbook of cytokines. London: Academic Press, 1994. 465 p.
141. Tjuvajev J. Gansbacher B., Beattie B. et al. RG-2 glioma growth attenuation and severe braine edema caused by local production of interleukin 2 and interferon-y // Cancer Res. 1995. - Vol. 55. - P. 19021910.
142. Traugott U., Lebon P. Multiple sclerosis: Involvement of interferons in lesion patogenesis // Ann. Neurol. 1988. - Vol. 24. - P. 243-251,
143. Traugott U. Multiple sclerosis: relevance of class I and class II MNC-expressing cells to lesion development // J. Neuroimmunol. 1987. -Vol.16.-P. 283-302.
144. Trinchieri G. Biological properties and therapeutic applications of interleukin-12 // Eur. Cytok. Netw. 1997. - Vol.8, N.3. - P. 305.
145. Van der Veen, Stohlman 11-10 expression in EAE // Cytokines / Ed by Mire-Sluis A., Thorpe R. 1998. - Chapterl8. - P.234-237.
146. Van Oosten B.W., Barkhof F., Von Blomberg B.M.E. Correlating cytokine production and MRI disease activity in MS patients // Europ. J. Neurol. 1996. - Vol.3, suppl.4. - P. 6.
147. Van Snick J. Interleukin-6 an overview // Annu Rev. Immunol. -1990. Vol.8. - P.253-278.
148. Walczak A., Mycko M., Selmaj L. Spontaneous apoptosis of lymphocytes in multiple sclerosis // Abstract of the XVII world congress of neurology. London, 2001. - Vol.187, suppl.l. - P. 272.
149. Wang X., Chen M., Wandinger K.P. et al. IL-12 production in peripheral blood mononuclear cells in an IL-10-dependent mechanism: relevance to IFN-beta-lb therapeutic effectc in multiple sclerosis patients // JJmmunol. -2000.-Vol.165, N 1.-P. 548-57.
150. Warren K.G. Catz I. Autoantibody in peritheral blood multiple sclerosis patients // J.Neuroimmunol. 1993. - Vol. 43, N 1. - P. 87-96.
151. Warren K.G. Catz I., Jobuson E., Mielke B. Anti-myelin basic protein and anti-proteolipid protein specific forms of multiple sclerosis // J.Neuroimmunol. 1994. - Vol.35, N 3. - P. 280-290.
152. Warren S. and Warren K.G. Epidemiological features of two immunologicaly distinct forms of multiple sclerosis: anti-myelin basic
153. MBP) associated MS vs anti-proteolipid (PLP) associated MS // Neuroimmunology. 1995, Vol. 43, suppl.l. - P.9.
154. Wildbaum G., Youssef S., Grabie N., Karin N. Neutralizing antibodies to IFN-gamma-inducing factor prevent experimental autoimmune encephalomyelitis // J. Immunol. 1998. - Vol.161. - P. 6368.
155. Windhagen A., Anderson D., Carrizosa A. et al IL-12 induces human T-cells secreting IL-10 with IFNy. // J. Immunol. 1996. - Vol. 157. -P. 1127-1131.
156. Windhagen A., Newcombe J., Dangond F. et al. Expression of costimulatory molecules B7-1 (CD80), B7-2 (CD86) and interleukin 12 cytokine in multiple sclerosis lesions // J. ExP. Med. 1995. - Vol. 19. - P. 783-1996.
157. Wood D.D., Bilbao J.M., O'Connors P. Acute multiple sclerosis (Marburg type) is associated with developmentally immatyre myelin basic protein // Ann Neurol. 1996. - Vol.40, N 1. - P. 18-24.
158. Xu X., Fu X.Y., Plate J., Chong A.S. IFN-gamma induced cell growth inhibition by Fas-mediated apoptosis: requirement of STAT1 protein for up-regulation of Fas and Fas-L expression // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P. 2832-2837.
159. Zhang L., Wang C., Radvanyi L.G., Miller R.G. Early detection of apoptosis in defined lymphocytes popylation in vivo // Blood. 1993. -Vol.81.-P.3091-3096.
160. Zipp F., Weller M., Calabresi P. et al. Differential expression of soluble CD95 in subgroups of patients with multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol. 2. - P.312.