Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Исследования по стандартизации сырья и настоек гомеопатических матричных безвременников

ГОУ ВПО ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М. СЕЧЕНОВА МИНЗДРАВА РОССИИ

На правах рукописи

04201365385

КАБАЛОЕВА ДИАНА РУСЛАНОВНА

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ БЕЗВРЕМЕННИКА

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук Н.С. Терёшина

Москва-2013

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ......................................................... 5

ВВЕДЕНИЕ............................................................................ 6

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................. 11

Глава 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ ФАРМАКОГНО СТИЧЕСКОГО, ФОТОХИМИЧЕСКОГО И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ БЕЗВРЕМЕННИКА ОСЕННЕГО, ВЕЛИКОЛЕПНОГО........................................................ 15

1.1. Ботаническая характеристика......................................................................15

1.2. Местообитание............................................................................................................17

1.3. Заготовка, сушка, хранение..........................................................................17

1.4. Химический состав........................................................................................................18

1.5. Фармакологические свойства..............................................................................22

1.6. Применение в аллопатической, гомеопатической и народной медицине...................................................................... 22

1.7. Современные аспекты стандартизации настойки гомеопатической матричной безвременника осеннего............................. 24

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 1..............................................................................................................29

ЧАСТЬ И. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ................................................................30

Глава 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.... 30

2.1. Объекты исследования..................................................................................................30

2.2. Материалы и методы исследования..................................................................31

Глава 3. ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ - КЛУБНЕЛУКОВИЦ БЕЗВРЕМЕННИКА ОСЕННЕГО, ВЕЛИКОЛЕПНОГО............................................................................. 34

3.1. Макроскопический анализ........................................................................................34

3.2. Микроскопический анализ........................................................................................36

3.3. Определение влажности..............................................................................................44

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3............................................................................................................46

Глава 4. ПОЛУЧЕНИЕ НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ НА ОСНОВЕ КЛУБНЕЛУКОВИЦ БЕЗВРЕМЕННИКА ОСЕН-

НЕГО, ВЕЛИКОЛЕПНОГО И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ИХ СТАНДАРТИЗАЦИИ........................................................................ 47

4.1. Технология приготовления НГМ клубнелуковиц безвременника осеннего, великолепного............................................ 47

4.2. Установление показателей качества НГМ........................ 50

4.3. Изучение химического состава НГМ................................ 52

4.3.1. Изучение алкалоидов................................................ 52

4.3.1.1. Изучение алкалоидов качественными реакциями и методом ТСХ....................................................................... 52

4.3.1.2. Изучение алкалоидов методом ВЭЖХ........................... 57

4.3.2. Изучение полифенольных соединений......................................................63

4.3.3. Изучение органических кислот.................................... 70

4.3.4. Изучение аминокислот............................................................................................71

4.3.5. Изучение дубильных веществ............................................................................76

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4............................................................................................................77

Глава 5. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ БЕЗВРЕМЕННИКА ОСЕННЕГО, ВЕЛИКОЛЕПНОГО................................................ 78

5.1. Разработка методов установления подлинности................. 78

5.1.1. Установление подлинности сырья............................... 78

5.1.2. Установление подлинности настоек.............................. 80

5.2. Разработка метода количественного определения НГМ........ 84

5.2.1. Разработка методики определения суммы алкалоидов методом ВЭЖХ.................................................................... 84

5.2.2. Валидация методики определения суммы алкалоидов методом ВЭЖХ..................................................................... 85

5.3. Разработка проектов НД на «Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная безвременника осеннего» и «Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная безвременника великолепного»....................................................... 88

5.3.1. Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная безвременника великолепного............................................. 88

5.3.2. Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная

безвременника осеннего..................................................... 91

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 5....................................................... 93

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НГМ НА ОСНОВЕ КЛУБНЕЛУКОВИЦ БЕЗВРЕМЕННИКА ОСЕННЕГО, ВЕЛИКОЛЕПНОГО И ИХ РАЗВЕДЕНИЙ......................................... 94

6.1. Технология приготовления гомеопатических разведений НГМ безвременника осеннего и великолепного......................

94

6.2. Изучение цитотоксического действия НГМ безвременника осеннего и великолепного на культуре клеток Hela......................

6.3. Изучение цитотоксического действия гомеопатических разведений НГМ двух видов безвременника на культуре клеток Hela 102

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 6..............................................................................................................106

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ......................................................................................................................................107

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................................................................................................109

ПРИЛОЖЕНИЕ

123

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БАВ - биологически активные вещества

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГОСТ - государственный стандарт

ГФ - государственная фармакопея

JIPC - лекарственное растительное сырье

MC - масс-спектрометрия

HTM - настойка гомеопатическая матричная

ОФС - общая фармакопейная статья

ТСХ - тонкослойная хроматография

ТУ - технические условия

УФ - ультрафиолетовый

ФС - фармакопейная статья

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. За последнее время отмечается возросший интерес к гомеопатическому методу лечения, который продолжает раскрывать свои возможности в фармакотерапии. Гомеопатические лекарственные средства, благодаря своей эффективности и безопасности, отвечают всем требованиям современной медицины [7, 16, 37, 48, 59, 60]. Более 70% современных гомеопатических средств получают из лекарственного растительного сырья (J1PC) [6, 7, 38, 39, 52, 53, 66]. Учитывая важную роль лекарственных растений в изготовлении гомеопатических препаратов, исследования по стандартизации сырья и матричных настоек, представляют несомненный интерес [1, 8, 40, 41, 42, 48].

Одним из важных лекарственных растений является безвременник, который широко используется в официнальной медицине, гомеопатии и народной медицине [12, 15, 24, 54]. Наибольшее практическое применение нашли два вида: безвременник осенний (Colchicum autumnale L.) [14] и безвременник великолепный (Colchicum Speciosum Stev.) [5].

Безвременник осенний используется преимущественно в гомеопатической практике [21, 22, 83, 94]. Клубнелуковица безвременника осеннего является исходным сырьем для изготовления гомеопатической матричной настойки, которая может служить субстанцией для разработки лекарственных средств, применяемых для лечения подагры, суставного ревматизма, циститов, мочекаменной болезни, невралгий, нарушений кровообращения, бронхиальной астмы, воспалительных процессов пищеварительной и дыхательной систем [23]. Сырье и настойка гомеопатическая матричная (HTM) безвременника осеннего описаны Гомеопатическими Фармако-пеями Германии, Франции, Великобритании, США, Индии [90, 98, 101, 102, 104, 105, 112].

В России фармакопейным видом является безвременник великолепный [5, 43, 47, 78]. В официнальной медицине препараты безвременника применяются при лечении раковых заболеваний, в том числе крови, молочной железы, кожи [5, 88]. В

основном используются препараты на основе алкалоидов, выделенных из клубнелуковиц и семян: колхамина и колхицина [88, 91].

Важно отметить, что оба вида безвременника входят в перечень гомеопатических препаратов, разрешенных к применению в соответствии с приказом Минзрав-медпрома России от 29.11.95 № 335 [48]. Однако отечественная нормативная документация на сырье и настойку гомеопатическую матричную (HTM) двух видов безвременника в настоящее время отсутствует [76,78].

Исходя из вышесказанного, исследования по стандартизации сырья и матричных настоек безвременника осеннего, а также безвременника великолепного, который ранее не применялся в гомеопатической практике, направленные на разработку фармакопейных статей, представляют несомненный интерес для нашей страны и для фармации в целом [7, 51, 52].

Цель и задачи работы

Стандартизация сырья и настоек гомеопатических матричных безвременников осеннего и великолепного, разработка проектов фармакопейных статей на сырье и настойки гомеопатические матричные двух видов безвременника.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• провести анализ отечественной и зарубежной научной литературы и нормативной документации, регламентирующей качество сырья безвременников осеннего и великолепного и гомеопатических матричных настоек;

• провести сравнительное изучение морфолого-анатомическое строения клубнелуковиц двух видов безвременника и выявить диагностические признаки для идентификации сырья;

• изучить качественный состав биологически активных веществ настоек гомеопатических матричных клубнелуковиц безвременника осеннего и великолепного;

• определить количественное содержание основного класса биологически активных веществ в настойках гомеопатических матричных безвременников осеннего и великолепного;

• разработать методики определения подлинности и оценки содержания суммы алкалоидов в матричных настойках для включения в проекты фармакопейных статей;

• установить показатели качества матричных настоек безвременников осеннего и великолепного и их нормы;

• изучить биологическую активность матричных настоек и гомеопатических разведений двух видов безвременника в сравнительном аспекте на культуре клеток Hela\

• разработать проекты фармакопейных статей на сырье и настойки гомеопатические матричные двух видов безвременника.

Научная новизна работы

Впервые проведена сравнительная оценка макро- и микроскопических признаков сырья клубнелуковиц безвременников осеннего и великолепного, выявлены диагностические признаки сырья для установления подлинности, определены различия в зависимости от вида.

С использованием современных методов исследования (ТСХ, ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС) автором выявлены различия химического состава алкалоидов и аминокислот настоек гомеопатических матричных двух видов безвременника.

Подобраны оптимальные условия качественного и количественного анализа биологически активных веществ и разработаны методики контроля качества матричных настоек на основе современных физико-химических методов. Впервые в сравнительном аспекте изучена биологическая активность матричных настоек и гомеопатических разведений из двух видов безвременника в опытах in vitro на культуре клеток Hela.

Практическая значимость работы

На основе проведенных исследований разработаны проекты ФС для включения в ГФ XII изд.:

- «Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная безвременника осеннего»;

- «Клубнелуковицы и настойка гомеопатическая матричная безвременника великолепного».

Разработанные проекты переданы для утверждения в установленном порядке.

Положения, выносимые на защиту

• Результаты сравнительного морфолого-анатомического изучения клубнелуковиц двух видов безвременника и вариабельность диагностических признаков в зависимости от вида безвременника.

• Данные по качественному составу биологически активных веществ (алкалоидов, флавоноидов, аминокислот, органических кислот) и содержанию суммы алкалоидов матричных настоек двух видов безвременника.

• Результаты стандартизации матричных настоек двух видов безвременника;

• Результаты оценки биологической активности матричных настоек и разведений двух видов безвременника.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XXI Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2011 г.), XXII Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2012 г.), Всероссийской научно-практической интернет-конференции «Современные аспекты разработки и со-

вершенствования состава и технологии лекарственных форм» (Курск, 2011 г.), заседании Научного совета НИИ Фармации Первого МГМУ имени И.М. Сеченова (Москва, декабрь 2012).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 5 - в рекомендуемых ВАК изданиях.

Связь задач исследований с проблемным планом. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом Первого МГМУ имени И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 04.07.093, проблема № 1006 АМН РФ, Государственный регистрационный номер 01200110546).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 32 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 115 источников, в том числе 29 на иностранных языках.

Полученные результаты обработаны статистически, обобщены в таблицах, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в работе.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Латинское название безвременника - Colchicum - происходит от Колхиды, куда из Средиземноморья переселился один из видов этого растения - безвременник великолепный. Согласно древнегреческому мифу, дочь царя Колхиды Медея, с помощью которой Ясон добыл золотое руно, слыла волшебницей, владевшей тайнами ядов. Безвременник сильно ядовит: действие его яда сравнивают с действием мышьяка. Таким образом, название «колхикум» связано не только с местом произрастания, но и с занятиями царевны [94].

Безвременник относится к числу древнейших лекарственных растений. О нем имеются сведения в письменных источниках Древнего Египта, Индии и Греции. В папирусе Эберса безвременник упоминается довольно часто. Очевидно, он занимал важное место в арсенале медицинских средств Древнего Египта. Скорее всего, безвременник уже в те времена применялся при подагре и ревматизме.

Безвременник входил в число лекарственных средств и другой древней цивилизации - индусской, медицина которой развивалась независимо от египетской. В книгах Веды, написанных за 2 тысячи лет до нашей эры, среди лекарственных растений значился и безвременник - именно тот его вид, который произрастает на склонах Гималаев и в настоящее время известен под названием безвременника желтого. Из Индии безвременник попал в арабскую медицину, так как в то время шла оживленная торговля между Индией и Аравией. В списках товаров, поступавших из Индии, часто упоминался кашмирский гермодактиль - семена безвременника.

Гален также считал семена безвременника хорошим средством от подагры. Через Древний Рим сведения о лечебных свойствах безвременника проникли в Европу. В XIII веке вышел трактат греческого врача Дмитрия Папагеноса, посвященный специально подагре, которую он рекомендовал лечить пилюлями, состоящими из алоэ, семян индийского безвременника и корицы.

В лечебных целях использовали почти все части растения, чаще семена, у которых, как показали позднейшие исследования, содержится наибольшее количество

алкалоидов. Им продолжали лечить подагру и ревматизм, также его стали применять при бронхиальной астме, желтухе, водянке, заболеваниях кишечника и почек. Безвременник считался и предохранительным средством от заразных болезней, особенно от чумы. Для этого надо было носить луковицу растения с собой в кармане.

С XIII по XVI века увлечение гермодактилем заметно ослабело, так как врачи, вероятно, были напуганы случаями отравления пациентов. Такие случаи вполне могли иметь место при уровне знаний того времени о лекарственных растениях. Гермодактилем пытались лечить все болезни вплоть до чумы, и, конечно, во многих случаях он приносил только вред. Древнеримский врач Диоскорид, описывая безвременник, к лечебным растениям его не отнес из-за большой токсичности. Пара-цельс также рекомендовал безвременник только для наружного применения из-за частых случаев отравления.

В раннем средневековье растение использовали только как средство от паразитов, но с XVI века интерес к индийскому гермодактилю вновь ожил. Он вошел в первую Британскую Фармакопею (1618) - сборник описаний наиболее важных лекарственных средств, официально признанных медициной. Постепенно с индийским гермадактилем стали конкурировать лекарственные смеси, в которые входили р�