Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое и фармакологическое изучение некоторых растений флоры Северо-Западного региона, используемых в производстве гомеопатических лекарственных средств

На правах рукописи

«г'

МАСЛОВА НАДЕЖДА МИХАЙЛОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ РАСТЕНИЙ ФЛОРЫ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО РЕГИОНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ПРОИЗВОДСТВЕ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

СРЕДСТВ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

АВТОРЕФЕРАТ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

2004 г.

Диссертационная работа выполнена в лаборатории ГЛС и фитопрепаратов, на кафедре фармакологии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии.

Научные руководители:

- доктор фармацевтических наук, профессор Саканян Елена Ивановна

- доктор медицинских наук, профессор Лесиовская Елена Евгеньевна

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Бурбелло Александра Тимофеевна

- доктор фармацевтических наук, профессор Куклин Владимир Николаевич

Ведущая организация

Ботанический институт РАН им. В.Л. Комарова

Защита состоится « 28 » сентября 2004 г. в -/6** час на заседании дис-сертациопного совета Д 208.088.01 в Санкт-Петербургской государственной академии (197376, Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, 14)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (197376, С-Пб, ул. Проф. Попова, 4/6)

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета докт. фарм. н., доцент

» /¿¿''¿¿/¿'¿гъл

2004г.

Рыжкова М.В.

Актуальность темы. Официальное признание гомеопатии, как одного из перспективных направлений практического здравоохранения Российской Федерации послужило толчком к развитию не только этого метода лечения, но и отечественного гомеопатического производства. При этом номенклатура гомеопатических матричных настоек невелика и не удовлетворяет запросам практики.

В качестве возможных источников сырья для производства отечественных гомеопатических препаратов интерес представляют растения, которые широко представлены во флоре РФ и имеют достаточную сырьевую базу на ее территории. К таким растениям относится черника обыкновенная Vaccinum myrtillus L., семейство вересковые Ericaceae L., прострел раскрытый Pulsatilla patens L. и ветреница дубравная - Anemone nemorose L., семейство лютиковые - Ranunculaceae L.. Очень часто в гомеопатической литературе, особенно в зарубежной, ветреницу дубравную совершенно неправомочно относят к роду Pulsatilla L., и гомеопатическую матричную настойку «Пульсатила» готовят на основе, в том числе, травы ветреницы дубравной, что вызывает сомнения в последующем одинаковом лечебном эффекте.

В этой связи представляется актуальным фармакогностическое и фармакологическое изучение этих лекарственных растений, перспективных к использованию в качестве сырья для производства гомеопатических матричных настоек. При этом целесообразно исследование возможности применения лекарственного растительного сырья как в свежем, так и в высушенном виде. Это обусловлено тем, что в зарубежной гомеопатической практике технология гомеопатических матричных настоек ориентирована, прежде всего, на свежесобранное сырье. Такая технология не всегда прием-лима к воспроизведению в условиях отечественных гомеопатических производств, ввиду территориальной удаленности последних от мест произрастания и заготовки лекарственного растительного сырья.

Цель настоящего исследования: сравнительная фармакогностиче-ская и фармакологическая оценка свежезаготовленного и высушенного растительного сырья травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого, побегов черники обыкновенной, получение, разработка методов стандартизации и изучение некоторых видов фармакологической активности гомеопатических матричных настоек на их основе.

Задачи исследования:

1. Изучение ассортимента гомеопатических лекарственных средств растительного происхождения отечественного производства.

2. Исследование и сравнение показателей качества свежесобранного и высушенного лекарственного растительного сырья: травы ветренни-цы дубравной и прострела раскрытого, побегов черники обыкновенной и разработка методов стандартизации этих видов сырья.

3. Фармакологическая оценка лекарственного растительного сырья.

4. Получение гомеопатических матричных нпгтогк I» изучаемых

снрСяНАЩИЖМЬ^

БИБЛИОТЕКА CntrepC/pr

видов лекарственного растительного стандартизации.

5. Сравнительная оценка фармакологической активности гомеопатических матричных настоек.

6. Разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье и гомеопатические матричные настойки.

Объектами исследования являлись:

• Трава ветреницы дубравной - Herba Anemone nemorose L.,

• Трава прострела раскрытого - Herba Pulsatilla patens L.

• Побеги черники обыкновенной - Cormi Vaccinum myrtillus L.,

• Гомеопатические матричные настойки Миртиллюс — две настойки из побегов черники обыкновенной (свежезаготовленных и высушенных) -Vaccinum myrtillus L. семейство вересковых Ericaceae L..

• Гомеопатические матричные настойки Пульсатилла - две настойки из травы прострела раскрытого (свежезаготовленной и высушенной) Pulsatilla patens L., семейство лютиковые Ranimculaceae L..

• Гомеопатические матричные настойки Анемон - две настойки из травы ветреницы дубравной (свежезаготовлешюй и высушенной) Veronica chamedrys L. семейство лютиковые - Ranunculaceae L..

При этом использовали не только высушенное сырье, но и сырье, подвергнутое предварительному набуханию с учетом коэффициента водопогло-щения.

Научная новизна. Впервые проведен сравнительный анализ химического состава свежезаготовленного и высушенного лекарственного растительного сырья: побегов черники обыкновенной, травы прострела раскрытого и травы ветреницы дубравной. Подтверждено, что основными группами биологически активных веществ (БАВ) травы ветреницы дубравной являются - терпеноиды, сапонины, дубильные вещества, прострела раскрытого -терпеноиды, аминокислоты и дубильные вещества, и побегов черники обыкновенной - дубильные вещества, флавоноиды.

Доказано, что свежезаготовленное и высушенное лекарственное растительное сырья сопоставимо по набору биологически активных веществ и по фармакологической активности.

Впервые разработана технология гомеопатических матричных настоек из свежезаготовленного и высушенного сырья, имеющих одинаковый фитохимический состав.

В экспериментах на животных проведено изучение фармакологической активности гомеопатических матричных настоек прострела раскрытого, ветреницы дубравной и черники обыкновенной, включая оценку их острой токсичности.

Подтверждено, что разработанные настойки из свежезаготовленного и высушенного растительного сырья сопоставимы по набору БАВ и фармакологическим эффектам.

Научно-практическая значимость. На основании результатов фармакогностических исследований определены макро- и микродиагностические признаки и дана полная товароведческая характеристика 3 видов растительного сырья: травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной.

Разработаны проекты фармакопейных статей предприятия на лекарственное растительное сырье (свежее и высушенное): побеги черники обыкновенной Vaccinum myrtillus L. семейство вересковые Ericaceae L..; траву прострела раскрытого Pulsatilla patens L. и ветреницы дубравной Veronica chamedrys L. семейство лютиковые - Ranunculaceae L..

Доказана возможность использования свежезаготовленного и высушенного лекарственного растительного сырья для получения матричных гомеопатических настоек, эквивалентных в химическом и фармакологическом отношении и возможность оценки лечебных свойств гомеопатических препаратов (матричных настоек и их разведений) в условиях экспериментов на животных.

Фармакологическими исследованиями показано, что изучаемые матричные гомеопатические настойки обладают низкой токсичностью. Изученные настойки в экспериментах на животных проявляют антигипоксические свойства.

В результате оценки влияния настоек прострела раскрытого и ветреницы дубравной на различные фазы воспаления у них выявлена антиэксуда-тивная и антипролиферативная активность. Как матричные настойки, так и гомеопатические разведения проявили достаточно выраженное противовоспалительное действие, несколько уступая препаратам сравнения. Для настоек из побегов черники обыкновенной установлено выраженное противоглике-мическое действие, превосходящее эффект препарата сравнения (сбор «Ар-фазетин»).

Разработаны методы качественного и количественного анализа гомеопатических матричных настоек Пульсатилла (настойка прострела раскрытого), Миртиллюс (настойка черники обыкновенной), Анемон (настойки ветреницы дубравной), которые дают возможность объективно оценивать качество настоек, полученных из свежезаготовленного и высушенного сырья по содержанию действующих веществ. Результаты исследования включены в разработанные проекты фармакопейных статей предприятия на гомеопатические матричные настойки Анемон, Пульсатилла, Миртилиюс.

Гомеопатические матричные настойки из свежего и сухого растительного сырья Анемон, Пульсатилла, Миртиллюс могут быть рекомендованы в качестве субстанций для получения гомеопатических лекарственных средств, используемых для профилактики и вспомогательной терапии соответствующих заболеваний, а сами методы получения настоек - в качестве модели для дальнейших разработок в области технологии гомеопатических матричных настоек из других видов растительного сырья.

Результаты исследований внедрены в научно-исследовательскую работу и в учебный процесс кафедр фармацевтической химии, фармакологии, фармакогнозии, лаборатории ГЛС и фитопрепаратов СПХФА.

Материалы исследований включены в отчеты, представленые в Федеральный научный клинико-экспериментальный центр традиционных методов диагностики и лечения МЗ РФ по целевой программе МЗ РФ (1996-2000 гг, 2001-2006 гг.) и по ПИР СПХФА за 2002-2003 гг. по тематике: «Разработка

технологии гомеопатических матричных настоек», а также отражены в соответствующем методическом пособии.

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены на Всероссийской научной конференции « От materia medica к современным медицинским технологиям» (СПб, 1998 г), П (I) Съезде гомеопатов России, г. Новосибирск, 1999 г., Международной научной конференции в Санкт-Петербурге в 1999г, VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (СПб, 2000 г.), Научной юбилейной конференции посвященной 25-летию открытия ЦНИИ рефлексотерапии (Москва, 2002 г)

Положения, выносимые па защиту:

1. Результаты сравнительного фармакогностического и фармакологического изучения свежезаготовленной и высушенной травы прострела раскрытого Pulsatilla patens L., ветреницы дубравной Veronica chamedrys L. и побегов черники обыкновенной Vaccinum myrtillus L.

2. Проекты ФСП на "Ветреницы дубравной траву свежую", "Ветреницы дубравной траву", "Прострела раскрытого траву свежую", "Прострела раскрытого траву", "Черники обыкновенной побеги свежие", "Черники обыкновенной побеги"

3. Результаты фотохимических и фармакологических исследований гомеопатических матричных настоек ветреницы дубравной, прострела раскрытого и черники обыкновенной.

4. Проекты ФСП на "Настойку гомеопатическую матричную ветреницы дубравной", "Настойку гомеопатическую матричную прострела раскрытого", "Настойку гомеопатическую матричную черники обыкновенной"

Публикации:

По теме диссертации опубликовано ? работ, из них: 2 статьи, методическое пособие «Технология и анализ гомеопатических матричных настоек».

Диссертационная работа выполнена в лаборатории готовых лекарственных средств и фитопрепаратов НИУ, а также на кафедрах фармакогнозии, фармакологии и фармацевтической химии, Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии. Микробиологические исследования растительного сырья и настоек проводились на кафедре микробиологии СПХФА под руководством доцента, к.ф.н. Т.С. Потехиной.

Работа выполнена в рамках «Целевой программы МЗ РФ развития гомеопатии на период 1996-2000 гг. и 2001-2006 гг.» (Договор № 206/211/001).

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на страницах машинописного текста. Работа содержит таблиц, 2d рисунков и состоит из введения,

_С глав, содержащих обзор литературы, результаты эксперимент -

ных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего fáS. источников, из них ¿Л на иностранных языках, а также приложепий.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Трава ветреницы дубравной и побеги черники обыкновенной были заготовлены в окрестностях п. Поляны Ленинградской области, трава прострела раскрытого - в Лужском районе Ленинградской области. Заготовку сырья проводили во время цветения, использовали как свежее, так и высушенное сырье. Сушку растительного сырья проводили воздушно-теневым способом при температуре 20-24°С. Воздушно-сухое сырье измельчали на электротраворезке ТУ 37-53 тип 622-1-М.

Обзор литературы (Глава I).

В этой главе представлен обзор литературных источников, содержащих сведения о современном состоянии и перспективах развития отечественного гомеопатического производства, а также освещены вопросы стандартизации и сертификации гомеопатических лекарственных средств в РФ. Обсуждено современное состояние регистрации и внедрения в медицинскую практику новых гомеопатических препаратов. Даны характеристики растительного сырья, используемого в гомеопатической практике, включая ассортимент и классификацию лекарственных форм. Проведен анализ основных положений гомеопатического метода лечения: Обсуждены вопросы гомеопатической терапии воспалительных процессов верхних дыхательных путей и сахарного диабета; обобщены сведения о применении травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной в гомеопатической практике, их химическом составе и фармакологической активности.

Материалы и методы (Глава II).

Во второй главе охарактеризованы материалы и методы исследований, описаны объекты и условия проведения экспериментов, приведены различные методы, используемые для выполнения исследовательской работы.

Измельченное сырье просеивали через сито по ГОСТ 214-83 с размером отверстий, соответствующим требованиям нормативной документации, и использовали для проведения товароведческого и фитохимического анализа, а также для определения технологических показателей сырья в соответствии с требованиями ГОСТ 13727-68. Определение числовых показателей сырья проводили по методикам общих статей ГФ XI. Определение технологических параметров проводили по общепринятым методикам (Пономарев, 1996 г).

Для проведения исследований, связанных с оптимизацией настоек использовали не только высушенное сырье, но и сырье, подвергнутое предварительному набуханию с учетом коэффициента водопоглощепия.

Фотохимические исследования проводили с помощью химических качественных реакций, методов одномерной и двумерной бумажной хроматографии на бумаге <^Шгак» № 11, 13, 14 и тонкослойной хроматографии на пластинках <^ЫЫ» ЦУ 254 и <^огЬШ» ПТСХ-П-А-УФ. При этом использовали соответствующие для каждого класса соединений системы растворителей и способы детекции.

Микробиологические исследования проводили по методикам и в соответствии с требованиями статьи ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» и Изменении №3 от 19.03.2003.

Получение гомеопатических матричных настоек осуществляли с использованием стеклянных экстракторов вместимостью 2 л. Качество настоек оценивали в соответствии с требованиями ОСТа 91500.05.001.00 по следующим показателям: внешний вид, подлинность, содержание биологически активных веществ (БАВ), плотность, сухой остаток, содержание этилового спирта, микробиологическая чистота.

Острую токсичность определяли по методу Миллера-Тейнтера (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств, 2000г.). Противовоспалительное действие настоек ветреницы дубравной и прострела раскрытого изучали на белых нелинейных мышах массой 18-20 г в соответствии с общепринятыми методами. Противодиабетическое действие настоек черники обыкновенной проводили на крысах самцах массой тела 180-210 г на модели аллоксанового диабета.

Разработка показателей качества растительного сырья - травы ветреницы дубравной,, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной (Глава III).

Для определения подлинности сырья были установлены его макро- и микродиагностические признаки. Результаты представлены в табл. 1.

Результаты ориентировочного фитохимического анализа травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной были использованы при определении подлинности растительного сырья по основным группам БАВ. Было установлено, что для травы ветреницы дубравной следует определить наличие терпеноидов, сапонинов, дубильных веществ; травы прострела раскрытого - терпеноидов, аминокислот и дубильных веществ; побегов черники обыкновенной - дубильных веществ, флавоноидов. При этом предложено использовать как химические, так и физико-химические методы анализа, включая бумажную и тонкослойную хроматографию.

Для контроля качества каждого вида сырья по разделу «содержание действующих веществ» были предложении методы количественного определения в нем основных групп БАВ.

Так как терпеноиды являются одной из основных групп БАВ травы ветреницы дубравной и прострела раскрытого, использовали спектрофото-метрический метод их количественного определения в растительном сырье с применением методики, приведенной в изменениях №5 к ст.77, ГФ XI, вып.2. Количественное содержание терпеноидов в анализируемом сырье расчитывали с использованием калибровочного графика по 2,6-дихлорфенолиндофеноляту натрия, так как максимумы поглощения УФ-спектров раствора 2,6- дихлорфенолиндофенолята натрия, в фосфатном буферном растворе и хлороформного извлечения из травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого совпадают, рис 1 (Приложение 1).

Таблица 1

Характеристика основных макро- и микродиагностических признаков сырья

Объект исследования Макродиагностические признаки Микродиагностические признаки

Трава ветреницы дубравной Цельные или частично измельченные олиственные стебли длиной до 20 см, голые или рассеянно-волосистые. Листья двух типов - длинночерешковые трехраздельные с долями, сидящими на коротких черешочках, рассеченными или глубоко надрезанными на неравно-зубчатые лопасти, рассеянно-волосистые или голые. Листья второго типа имеют аналогичное строение, однако, их черешки в два раза короче пластинок. Цветки обычно одиночные, с венчиковидным околоцветником белого, реже розово-фиолетового цвета, располагаются на длинном, прижато-волосистом цветоносе. Цвет зеленовато-серый с элементами цветков белого, реже розового цвета. Запах слабый. Вкус водного извлечения терпкий. Измельченное сырье : смесь листьев, цветков и стеблей, проходящих сквозь сито с отверстием диаметром 3 мм. Цвет зеленовато-серый с элементами цветков белого, реже розового цвета Запах слабый клетки эпидермиса крупные, нзвилисгостенные, палисадная ткань в виде удлиненных, плотно расположенных клеток, губчатая паренхима рыхлая, устьица - только на нижней стороне листовой пластинки, механическая ткань развита слабо. Нижняя и верхняя поверхности листовой пластинки опушены одноклеточными волосками Волоски двух типов - длинные толстостенные и тонкостенные баллоновидные. Опушенность нижнего эпидермиса более выражена

Трава прострела раскрытого Цельные или частично измельченные цветоносные стебли длиной до 10 см, покрытые густыми прилегающими волосками. Листья клиновидно-раздельные, островатые, густо шелковисто волосистые. Цветки небольшие или средних размеров, полураскрытые, колокольчатого типа фиолетового цвета, снаружи густо волосистые. Цвет зеленовато-серый с элементами цветков синего цвета. Запах слабый. Вкус водного извлечения терпкий. Измельченное растительное сырье' смесь частей стеблей, ветвей, листьев, цветков и черешков, проходящих сквозь cirro с отверстием диаметром 3 мм клетки эпидермиса обеих сторон листовой пластинки вытянутые. Устьица аномоцитного типа расположены преимущественно на нижней стороне листовой пластинки. Волоски простые, одноклеточные, длинные, иногда с крючкообразным очень загнутым концом, располагаются с обеих сторон листа Характерно наличие железистых вместилищ и клеток с кристаллическим песком оксалата кальция

Продолжение таблицы 1

Побеги черники обыкновенной

Цельные или измельченные верхушки побегов 1-2 года жизни, отдельные листья и стебли, изредка бутоны и цветки Листья 1-25 мм длиной, 3-20 мм шириной на очень коротких черешках, слегка кожистые, гладкие, яйцевидные, эллиптические или почти округлые с тупой или слегка заостренной верхушкой, по краю мелкогородчатопильчатые, на концах зубцов и по жилкам стсбельчато-железистые Цветки поникающие, расположенные по одному на коротких 2,5-3,5 мм длиной цветоножках при основании молодых веточек в пазухах листьев Чашечка в виде узкой, около 1 мм длиной, почти цельной, широковолнистой окраины Венчик кувшинчато-шаровидный, зеленовато-розовый, 4-5 зубчатый Зубчики треугольные, отворочены наружу

Цвет ярко светло-зеленый, запах слабый Вкус горьковатый, вяжущий

Измельченное сырье Смесь частей стеблей, ветвей, листьев, цветков и черешков, проходящих сквозь сито с отверстием диаметром 7 мм Цвет зеленовато-серый с элементами цветков синего цвета Запах слабый Вкус терпкий

клетки верхнего и нижнего эпидермиса извилистостенныс. Устьица мелкие, аномоцитного типа, располагаются преимущественно на нижней стороне листа На обеих сторонах листовой пластинки вдоль жилок и на краевых зубцах встречаются булавовидные железки с многоклеточной двухрядной ножкой и овальной многоклеточной головкой с коричневым содержимым По жилкам с верхней стороны листовой пластинки встречаются одноклеточные прямые волоски с грубой бородавчатой поверхностью Вдоль жилок нижней стороны листовой пластинки встречается кристаллоносная обкладка

Количественное содержание терпеноидов в траве ветреницы дубравной и прострела раскрытого вычисляли по формуле:

М х ( 100-\\0~х 10ОО м Г( 100ЛУ)

Где: С- содержание суммы терпеноидов в 1 мл испытуемого раствора, найденое по калибровочному графику, мг;

V- объем испытуемого раствора, мл

М- масса сырья, г

W- потеря в массе при высушивании сырья , % (для высушенного сырья)

- содержание сока, % (для свежесобранного сырья).

Были изучены метрологические характеристики метода, результаты представлены в табл. 2. С использованием данной методики было проанализировано 5 серий каждого вида сырья, (табл. 1,2, Приложение 2).

Таблица 2

Метрологическая характеристика метода количественного определения

№ п/п Содержание, % Метрологические характеристики метода Содержание, % Метрологические характеристики метода

свежая трава прострела раскрытого свежая трава ветреницы дубравной

1 2,34 Хс-2,67 3,22 Хо=3,72

2 2,52 8=0,0133 3,82 8=0,0129

3 2,06 $,=0,0051 3,61 Б,=0,0049

4 2,33 Р=0,95 3,42 Р=0,95

5 2,57 Т=2,45 3,14 Т=2,45

6 2,60 ДХ=0,031 2,91 ДХ=0,032

7 3,10 Е=1,5% 3,00 Е=2,6%

высушенная трава прострела раскрытого высушенная трава ветреницы дубравной

1 2,14 Хсо=2,68 3,20 Хсо=3,48

2 2,52 5=0,0149 3,80 8=0,0134

3 2,43 $1=0,0057 3,48 $,=0,0056

4 2,38 Р=0,95 3,56 Р=0,95

5 2,76 Т=2,45 3,80 Т=2,45

6 2,40 ДХ=0,029 2,43 ДХ=0,027

7 3,13 Е=1,7% 2,04 Е=2,8%

Содержание терпеноидов в траве ветреницы дубравной составило от 3,00% до 4,12%. Предложена норма по этому показателю - не менее 3,0 %.

Содержание терпеноидов в траве прострела раскрытого составило от 2,11 % до 3,13%. Предложена норма по этому показателю не менее 2,0%.

Одной из основных групп БАВ побегов черники обыкновенной являются дубильные вещества. Для определения количественного содержания дубильных веществ в сырье использовали титримстрический метод (ГФ XI). Содержание дубильных веществ в побегах составило от 10% до 13%. В таблице 3 (Приложение 2) приведены данные определения количественного содержания основных групп БАВ в побегах черники обыкновенной.

Таким образом, на основании проведенных исследований нами были обобщены данные товароведческого анализа и разработаны проекты ФСП на ветреницы дубравной траву свежую, ветреницы дубравной траву высушенную, прострела раскрытого траву свежую, прострела раскрытого траву высушенную, черники обыкновенной побеги свежие и черники обыкновенной побеги высушенные.

Получение гомеопатических матричных настоек и определение параметров их стандартизации (Глава IV).

Для получения . гомеопатических матричных настоек из свежезаготовленного и высушенного растительного сырья предварительно были определены с использованием общепринятых методик, технологические показатели сырья: объемпая и насыпная масса, коэффициент вытеснения, коэффициент набухания, для свежего сырья -содержание сока.

При проведении технологического процесса руководствовались требованиями ВФС 42-2800-96 "Настойки гомеопатические матричные".

Схема используемого технологического процесса представлена на рис.1, (Приложение 3). Для проведения дальнейших исследований нами были получены гомеопатические настойки из исследуемого растительного сырья с использованием 86% этилового спирта для свежесобранного и 43% этилового спирта - для высушенного сырья.

Приведены данные исследований микробиологической чистоты и антимикробной активности гомеопатических матричных настоек.

Сравнительное фитохимическое и фармакологическое изучение гомеопатических настоек из растительного сырья (Глава V).

В данной главе приведены результаты исследований сравнительной фармакологической оценки травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого, побегов черники обыкновенной, а так же данные по фитохимическому и фармакологическому изучению гомеопатических матричных настоек и их разведений.

Для проведения дальнейших фитохмических и фармакологических исследований, по разработанной ранее схеме были получены 5 партий гомеопатических матричных настоек из каждого вида растительного сырья. Качество полученных настоек оценивали по следующим показателям: подлинность, содержание действующих веществ, тяжелые металлы, плотность, содержание спирта, микробиологическая чистота (в соответствии с ОСТ 91500.05.001.00).

При определении подлинности использовали качественные химические реакции и хроматографические методы анализа для каждого класса веществ.

Для оценки количественного содержания терпеноидов в настойках ветреницы дубравной и прострела раскрытого и дубильных веществ для настоек черники обыкновенной использовали методы, разработанные ранее для определения этих групп БАВ в лекарственном растительном сырье, в несколько модифицированном виде. Данные количественного содержания основных групп БАВ в настойках приведены в табл. 1,2,3 (Приложение 4) .

В результате было установлено, что настойки, полученные, из свежезаготовленного и высушенного растительного сырья идентичны по качественному составу и количественному содержанию БАВ.

Микробиологическая чистота исследуемых объектов.

Для определения микробиологической чистоты травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной использовали образцы, отобранные от 5 партий ЛРС в соответствии с требованиями ГФ XI. Анализ проводили методом смыва стерильным физиологическим раствором. Исследуемые образцы растительного сырья полностью удовлетворяли требованиям, предъявляемым к лекарственному растительному сырью ГФ XI, Изменениям № 3 от 19.03.2003г., категории 4.2. Исследовали также настойки, полученные из свежесобранной, высушенной и набухшей травы ветреницы дубравной, свежесобранной, высушенной и набухшей травы прострела раскрытого, свежесобранных, высушенных и набухших побегов черники обыкновенной. Все проанализированные настойки удовлетворяют требованиям ГФ XI, Изменений №3 от 19.03.2003 г по микробиологической чистоте и соответствуют по этому показателю категории 36.

Изучение фармакологических свойств гомеопатических матричных настоек.

Острую токсичность гомеопатических матричных настоек оценивали по методу Миллера-'Тейнтера. Эксперименты выполнены на 270 белых мышах самцах массой тела 15-20 г. Матричные гомеопатические настойки предварительно дсалкоголизировали, сухой остаток растворяли в воде очищенной и вводили внутрибрюшинно в диапазоне доз от 10 мл/кг до 560 мл/кг в пересчете на объем матричных настоек. Наблюдение за животными осуществляли в течение 2 недель. В результате исследований было установлено, что средняя смертельная доза (ЛД50) для настоек из всех видов сырья прострела раскрытого составила 180 мл/кг, для настоек из ветреницы дубравной -185 мл/кг, для настоек из побегов черники обыкновенной - 430 мл/кг.

Таким образом, результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о низкой токсичности изучаемых матричных гомеопатических настоек. Установлено также, что уровень ЛД50 не зависит от способа обработки сырья.

Изучение противогипоксического действия проводили на модели острой гипобарической гипоксии, позволяющей выявить препараты с широким спектром фармакологической активности (Пастушенков, 1984 г, Лесиовская, 1998 г). Опыты поставлены на 540 мышах самцах, массой тела 18-20 г. Гомеопатические настойки и препарат сравнения гутимин вводили внутрибрюшинно. Регистрировали длительность жизни и выживаемость животных на предельной «высоте» в течение 20 минут.

До антигипоксической активности настойка из сухого сырья ветреницы дубравной не уступала, а иногда (в дозах 1/10, 1/50 от ЛД50) превосходила настойку из свежезаготовленного сырья. Наиболее эффективными оказались настойки ветреницы дубравной в дозах 1/10 и 1/200 от ЛД50 (выживаемость составила 30-50%). По выраженности антигипоксической активности они несколько уступали препарату сравнения гутимину. Аналогичные закономерности были выявлены для настоек прострела раскрытого. Гомеопатическая матричная настойка из высушенных побегов черники обыкновенной была сопоставима по активности с настойкой из свежего сырья во всех изученных дозах, за исключением дозы 1/50 от ЛД50.

Таким образом, на модели острой гипобарической гипоксии установлено, что настойки из высушешюго и свежего сырья ветреницы дубравной, прострела раскрытого и черники обыкновенной проявляют антигипоксиче-скую активность. Практически во всех сериях опытов гомеопатические настойки из набухшего сырья уступали им.

Особый интерес представляют исследования антигипоксической активности гомеопатических разведений матричных настоек (6D), наиболее часто используемых при острых воспалительных процессах. Высокую активность, сопоставимую с гутимином, проявили настойки прострела раскрытого. Гомеопатические разведения ветреницы дубравной и черники обыкновенной способствовали увеличению продолжительности жизни экспериментальных животных на предельной высоте.

Для исследования противовоспалительной активности были выбраны настойки ветреницы дубравной и прострела раскрытого. Выбор был обусловлен тем, что в гомеопатии эти препараты традиционно применяют при различных заболеваниях, в патогенезе которых воспаление запимает существенное место.

Антиэкссудативную активность настоек оценивали на модели формалинового отека лапы крысы. Эксперименты выполнены на 170 белых нелинейных крысах самцах массой тела 180-210 г. Настойки ветреницы дубравной и прострела раскрытого вводили перорально в разведении 6D в дозе 1 мл/кг. Препараты сравнения вводили перорально - бутадион в дозе 10 мг/кг и ортофен - 2,5 мг/кг.

Установлено, что гомеопатические матричные настойки и их разведения уменьшали отечность конечности крысы. Все изученные настойки из высушенного и набухшего растительного сырья не уступали по

активности настойкам из свежезаготовленного сырья. Максимальный агггиэкссудативный эффект, сравнимый с эффектом бутадиона, проявили настойки прострела раскрытого в разведении 6Б (рис. 1, Приложение 5).

В качестве дополнительного теста оценки антиэкссудативных свойств настоек была использована модель адреналинового отека легких.

Исследуемые препараты вводили внутрибрюшишю в дозах 1/200 от ЛД50, разведение 6Б (1 мл/кг). Препараты сравнения вводили внутрибрюшинно - бутадион (10 мг/кг) и ортофен (2,5 мг/кг).

Наиболее выраженный эффект, превосходящий ортофен, проявляли настойки из свежезаготовленного и набухшего сырья ветреницы дубравной и прострела раскрытого в дозе, составляювшей 1/200 от ЛД50. Они обеспечивали угнетение выраженности отека легких на 55-63 %. Эффект, сопоставимый с бутадионом, проявила настойка из сухого сырья ветреницы дубравной в дозе 1/200 от ЛД50. В разведениях 6Б настойки из обоих видов сырья проявляли одинаковую активность, которая была сравнима с активностью ортофена. Эффективность изученных настоек не зависши от характера исходного сырья.

На модели «ватной гранулемы» оценивали влияние исследуемых препаратов на пролиферативный компонент воспалительной реакции. Эксперименты поставлены на 180 белых крысах самцах массой тела 200-220 г.

Гомеопатические настойки ветреницы дубравной и прострела раскрытого вводили перорально в дозах: 1/200 от ЛД50, разведение 6Б (1 мл/кг). Препараты сравнения вводили перорально - бутадион (10 мг/кг) и ортофен (2,5 мг/кг). Антипролиферативная активность гомеопатических настоек существенно превосходила активность препаратов сравнения бутадио-на и ортофена. Максимальный эффект проявили гомеопатические разведения (6Б) исследуемых настоек.

Комплексное влияние матричных настоек на реакцию воспалительного процесса оценивали на модели острого катарального ринита. Выбор модели связан с тем, что риниты входят в перечень показаний к применению ряда гомеопатических препаратов, в том числе ветреницы дубравной и прострела раскрытого.

Оценку противовоспалительной активности проводили на 90 крысах самцах массой тела 180-220 г. Гомеопатические матричные настойки прострела раскрытого и ветреницы дубравной изучали в разведении 6Б. Настойка из свежезаготовленного сырья прострела раскрытого обладала умеренной, а настойка из свежезаготовленного сырья ветреницы дубравной выраженной противовоспалительной активностью на модели острого катарального ринита.

Противодиабетическую активность настоек черники обыкновенной в разведениях, наиболее часто применяемых в гомеопатии - ЗС, 3Б и 6Б оценивали на ПО крысах самцах массой тела 190-210 г на модели аллокса-нового диабета. В качестве препарата сравнения применяли гипогликеми-

ческий сбор "Арфазетин" в виде отвара (1:10). Анализ данных показал, что при введении изучаемых настоек и препарата сравнения в течение 7 дней они не вызывали существенных изменений биохимических показателей -концентрации глюкозы, холестерина в сыворотке крови по сравнению с исходным уровнем . На 7-е сутки животным всех групп ввели аллоксан, после чего продолжали введение изученных настоек и препарата сравнения. На рис. 2 (Приложение 5) показано изменение уровня глюкозы в крови для настоек черники и препарата сравнения в отношении к контролю.

На 7-е сутки после инъекции аллоксана у животных контрольной группы уровень глюкозы вырос на 418,8 %, холестерина на 116,6 % и 60% животных погибло. На фоне введения сбора «Арфазетин» отмечено, что уровень глюкозы возрос в меньшей степени - на 130,7 %, холестерина на 6,6 % и погибло только 20% животных. Изученные настойки черники обыкновенной оказались более эффективны, чем отвар сбора «Арфазетин» на модели сахарного диабета. На фоне настоек уровень глюкозы в крови возрос на 72-104%. Снижение холестерина в крови было сопоставимо с уровнем его в крови жи-вотпых группы сравнения. Все 100% животных выжили. Существенных различий между эффектами настоек из свежезаготолвенного, высушенного и набухшего сырья черники обыкновенной не обнаружено.

На 21-е сутки после инъекции аллоксана у животных контрольной группы уровень глюкозы оставался выше исходного на 46,2 %. При введении сбора «Арфазетин» отмечено, что уровень глюкозы и холестерина пришел в норму. На фоне настойки черники в разведениях 3D, ЗС и 6D наблюдали полную нормализацию уровня глюкозы в крови. Уровень холестерина также соответствовал исходным значениям.

Определение антимикробной, активности гомеопатических матричных настоек проверяли в отношении штаммов тест-микроорганизмов, рекомендованных для этих целей ГФ XI, а именно Staphylococcus aureus, Candida albicaus, Pseudomonas aeruginosa. Оценку антимикробного действия проводили методом серийных разведений. Установлено, что изучаемые водно-спиртовые вытяжки проявляли антимикробную активность по отношению к клеткам Staphylococcus aureus в концентрации 10б/мл.

Выявлено, что наиболее эффективно подавляют рост Pseudomonas aeruginosa настойки из травы прострела раскрытого (не зависимо от используемого сырья). Наибольшей активностью в отношение клеток Candida albicaus также обладают все настойки травы прострела раскрытого. Клетки Candida albicaus оказались чувствительными к действию настойки из свежей травы ветреницы дубравной ( табл. 1, Приложение 6).

Таким образом, на основании выполненной работы можно сделать выводы о том, что из 3-х изученных видов растений наиболее выраженными антимикробными свойствами в отношении клеток тест-микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa и Candida albicaus обладают извлечения из травы прострела раскрытого.

Выводы

1. Сравнительный анализ фотохимического состава свежезаготов-ленного и высушенного лекарственного сырья показал, что в траве ветреницы дубравной, содержатся такие группы БАВ, как терпеноиды, сапонины, в простреле раскрытом - терпеноиды, аминокислоты и в побьегах черники - дубильные вещества, флавоноиды.

2. Определены товароведческие показатели качества сырья ветреницы дуброавной, прострела раскрытого и черники обыкновенной и методы установления его подлинности.

3. Доказаноно, что изученное сырье, не зависимо от способа заготовки, идентично по составу основных групп БАВ и может быть использовано для приготовления матричных гомеопатических настоек.

4. Изучены и определены показатели качества гомеопатических матричных настоек и разработаны методы их стандартизации по основным группам действующих веществ - терпеноидам, сапонинам, дубильным веществам, аминокислотам. Определены сроки и условия хранения настоек.

5. Доказана возможность оценки лечебных свойств гомеопатических препаратов (матричных настоек и их разведений) в условиях экспериментов на животных.

6. У всех изученных настоек были выявлены антигипоксические свойства. При этом наиболее выраженный антигипоксический эффект проявили матричные настойки ветреницы дубравной и прострела раскрытого в дозах 1/10 и 1/200 отЛД»

7. В результате оценки влияния настоек прострела раскрытого и ветреницы дубравной на различные фазы воспаления у них выявлена антиэкссу-дативная и антипролиферативная активность. По убыванию противовоспалительного эффекта настойки можно расположить в ряд: гомеопатические разведения 6Б > настойки из сухого сырья = настойки из свежего сырья > настойки из набухшего сырья.

8. У настоек из побегов черники обыкновенной выявлено выраженное гипогликемическое действие, превосходящее эффект препарата сравнения - сбора «Арфазетин».

Приложение 1

0,6 0,4 -0,2 -

■' ■ * ♦ N

* N ¥$-/.......*

2

У

\\

> ,

\ч\

Ч*

500

540

595

650 нм

Рис. 4 УФ-спекгры раствора 2,6- дихлорфенолиндофенолята натрия в фосфатном буферном растворе (1) ; хлороформного извлечения из травы ветреницы дубравной (2) и хлороформного извлечения из травы прострела раскрытого (3). По оси обцисс - длина волны, нм; по оси ординат - оптическая плотность

Приложение 2. Таблица 1 Количественное содержание основных групп БЛВ в траве ветреницы дубравной (количество проб в каждой серии пять, отличий между сериями

одного вида сырья нет: р>95)

№ серии Свежесобранная трава ветреницы дубравной Высушенная трава ветреницы дубравной

Количественное содержание, среднее значение Регламента руемый показатель Количественное содержание, среднее значение Регламент ируемый показатель

те зпеноидные соединения

280997 3,2±0,2 Не менее 3,0% 3,0±0,1 Не менее 3,0%

220997 3,0±0,2 3,4±0,2

240997 3,7±0,1 3,6±0,2

260997 4,0+0,2 3,7±0,1

280997 3,5+0,2 3,8±0,2

сапонины

280997 11,4±0,4 Не менее 11,0% 11,2±0,9 Не менее 11,0%

220997 12,2+0,3 11,7+0,5

240997 11,7±0,5 12,7±0,8

260997 11,9+0,7 11,6+0,2

280997 11,1±0,5 12,2±0,5

экстрактивные вещества, извлекаемые 40% этанолом

280997 40,2±1,0 Не менее 34,0% 41,3±0,5 Не менее 34,0%

220997 41,9±1,5 42,7±0,7

240997 42,6+0,7 42,0±0,5

260997 39,7±0,4 38,2±0,4

280997 44,8+0,8 39,7±0,7

дубильные вещества

280997 2,4±1,09 Не менее 2,0% 2,6±0,5 Не менее 1,0%

220997 2,9±1,55 2,7±0,7

240997 2,6±0,77 3,0±0,5

260997 3,3±0,41 2,2±0,4

280997 3,0±0,80 2,9±0,7

Приложение 2. Таблица 2 Количественное содержание основных групп БАВ в траве прострела раскрытого (количе-сгво проб в каждой серии пять, отличий между сериями одного вида сырья нет р>95)

№ серии Свежесобранная трава пострела раскрытого Высушенная трава прострела раскрытого

Количественное содержание, среднее значение Регламентируе мый показатель Количественное содержание, среднее значение Регламентиру емый показатель

терпеноидяые соединения

280997 3,2+0,2 Не менее 2,0% 3,0±0,1 Не менее 2,0%

220997 3,0±0,2 3,4±0,2

240997 2,7+0,1 2,6±0,2

260997 2,6±0,2 2,7±0,1

280997 2,4±0,2 3,0±0,2

сапонины

280997 3,4±0,4 Не менее 3,0% 3,1 ±0,9 Не менее 3,0%

220997 3,2±0,3 3,7±0,5

240997 4,0±0,5 4,1 ±0,8

260997 3,9+0,7 3,6±0,2

280997 4,1 ±0,5 3,9±0,5

дубильные вещества

280997 2,4+1,09 Не менее 2,0% 1,6±0,5 Не менее 1,0%

220997 2,9±1,55 2,7±0,7

240997 2,6±0,77 2,0+0,5

260997 3,7±0,41 2,2±0,4

280997 3,8±0,80 2,9±0,7

Таблица 3

Результаты количественного определения основных групп БАВ в побегах черники обыкновенной (количество проб в каждой серии пять, отличий между сериями одного вида сы-

рья нет р>95)

№ серии свежесобранные побеги черники обыкновенной Высушенные побеги черники обыкновенной

Результаты определений Регламентируем ый показатель Результаты определений Регламентируемый показатель

дубшгьныг веществА

280997 10,8+0,1 Не менее 10% 10,3+0,2 Не менее 10%

220997 11,3±0,2 11,7±0,3

240997 12,0±0,2 11,ОМ,2

260997 11,4+0,2 12,4±0,2

280997 11,5±0,1 12,8+0,4

Флавоноиды

280997 2,8±0,1 Не менее 2,0% 2,3±0,2 Не менее 2,0%

220997 2,3+0,2 2,6±0,1

240997 2,5±0,1 2,4±0,1

260997 2,8±0,3 2,8±0,3

280997 2,6+0.1 3,0±0,1

экстрактивные вещества, извлекаемые 40% этанолом

280997 27,2+0,2 Не менее 20% 26,910,4 Не менее 20%

220997 36,2+0,3 30,2±0,5

240997 29,2±0,8 29,2±0,4

260997 23,2+0,4 23,0±0,2

280997 23,2+0,5 26,9+0,4

Приложение 3

ВР.2.1. Подготовка воз-

духа

ВР.2.2.

Приготовление дезрастворов

ВР.2.3. Подготовка обо-

рудования и по-

мещений

ВР.2.4. Подготовка пер-

сонала

ВР.1. Получение воды очищенной

- ВР.2. Санитарная обработка помещений

ВР.3.1. Измельчение сырья <— ВР.З. Подготовка исходных компонентов

ВР.3.2. Приготовление экстрагента

ТП.4.1.

Смешение компонентов

ТП.4.2.

Настаивание и фильтрация

ТП.4.

Приготовление гомеопатической мат-ричн

эи настоики

УМО.5.1 Фасовка и

маркировка

Регенерация сгофта из шрота

Шрот на выброс

УМО.5.2 Упаковка УМО.5. Фасовка, маркиров-

^- ка, упаковка

На склад

Рис. 1. Технологическая схема производства гомеопатической матричной настойки из высушенного растительного сырья

Приложение4 Таблица!. Количественное содержание основных групп БАВ в настойке ветреницы дубравной (ко-

№ серии Настойка ветреницы дубравной (свежесобранная трава) Настойка ветреницы дубравной (высушенная трава)

Количественное содержание, среднее значение Регламентируе мый показатель Количественное содержание, среднее значение Регламентиру емый показатель

терпеноидные соединения

280997 3,0±0,1 Не менее 3,0% 3,810,1 Не менее 3,0%

220997 3.110.2 3,1±0,2

240997 3,1+0,1 3,5±0,1

260997 3,2±0,1 3.4±0,1

280997 3,8±0,1 4,0±0,1

Сапонины

280997 11,6+0,2 Не менее 10,0% 11,7+0,2 Не менее 10,0%

220997 12,5±0,1 11,4±0,1

240997 11,8±0,2 11,3+0,1

260997 11,2±0,2 12,1+0,1

280997 11,5±0,1 12,1±0,1

дубильные вещества

280997 6,3+0,1 Не менее 6,0% 6,4±0,2 Не менее 6,0%

220997 6,0±0,2 6,5±0,1

240997 7,1±0,1 7,1+0,1

260997 6.1+0.1 6,710,1

280997 6,3±0,1 6,5±0,2

Таблица 2.

Количественное содержание основных групп БАВ в настойках прострела раскрытого (ко-личество проб в каждой серии пять, отличий между сериями одного вида сырья нет: р>95)

Настойка пропрела раскрытого (свежесобранная трава) Настойка прострела (высушенная трава) раскрытого

№ серии Количественное Рсгламентируе Количественное содер- Регламентиру

содержание, мыи жание, среднее зна- емыи

среднее значе- показатель чение показате

ние ль

терпеноидные соединения

280997 2,2±0,1 Не менее 2,ЗАО,2 Не менее

220997 2,2±0,1 2,0% 2,610,2 2,0%

240997 2,3+0,2 2,4±0,1

260997 2,6±0,2 2,6+0,1

280997 2,7+0,1 2,7±0,2

сапонины

280997 4,3±0,2 Не менее 4,0+0,1 Не менее

220997 5,1+0,1 4,0% 4,7+0,1 4,0%

240997 4,1±0,1 4,2±0,2

260997 4,4+0,1 4,4±0,2

280997 4,7±0,2 5,0+0,1

дубильные вещества

280997 2,8+0,1 Не менее 2,210,1 Не менее

220997 2,4±0,1 2,0% 2,5±0,1 2,0%

240997 2,310,1 2,9+0,1

260997 3,1 ±0,1 2,7±0,2

Приложение 4. Таблица 3

Результаты количественного определения основных групп БАВ в настойках черники обыкновенной (количество проб в каждой серии пять, отличий между сериями одного вида сырья нет. р>95)

№ серии Настойка черники обыкновенной (свежесобранные побеги) Настойка черники обыкновенной (высушенные побеги)

Результаты определений Регламентиру емый показатель Результаты определений Регламентируемый показатель

дубильные, веществ*

280997 10,4±0,2 Не менее 10% 10,5±0,2 Не менее 10%

220997 10,9±0,1 11,4+0,2

240997 10,8+0,1 10,7+0,1

260997 11,1+0,1 10,0±0,1

280997 11,2+0,1 11,8±0,1

Флавоноиды

280997 2,1 ±0,2 Не менее 2,9±0,1 Не менее 2,0%

220997 2,3+0,2 2,0% 2,6±0,1

240997 2,5±0,2 2,1±0,1

260997 2,6±0,1 2,8±0,2

280997 2,1 ±0,1 2,5+0,1

Результаты сравнения влияния гомеопатических настоек на экссудативный компонент воспаления

л с го с го

Щ

Ф О о:

X

а> н-а>

х £

л

X

ш ю о

а.

>

1 00 80 60 40 20 0

-I г

2 3 4 5 6 7 8 9 10111213 14 15 № препарата

Рис I Обозначения 1- контроль (вода очищенная), 2-лрепарат сравнения - бутадион, 3- препарат сравнения - ортофен, 4-настойка из свежезаготолвенного сырья везреницы дубравной, 1/200 от ЛДя», 5- настойка набухшего сырья ветреницы дубравной, 1/200 от Л До , 6-настойна нз сухого сырья ветреннцы дубравной,, 1/200 от ЛД50 , 7- настойка из свежезаготолвенного сырья прострела раскрытого, 1/200 ог ДДм, Я- настойка набухшего сырья прострела раскрытого, 1/200 от ЛД*>, 9- настойка из сухого сырья прострела раскрытого, 1/200 от ЛД^ 10- настойка нз свежезаготолвенного сырья ветреницы дубравной, 60, 11- настойка набухшего сырья ветреницы дубравной, 60, 12- настойка из сухого сырья ветреницы дубравной, 60,13- настойка из свежезаготолвенного сырья прострела раскрытого, 6Э, 14- настойка набухшего сырья простре™ раскрытого, 60, 15- настойка из сухого сырья прострела раскрытого, 60

Влияние настоек черники обыкновенной на уровень глюкозы в крови на модели

аллоксанового диабета

*

ш 80

2

3 60

20

1

г\> • «л

□ Уровень глюкозы в крови на 7 день после введения аллоксана а Уровень глюкозы в крови на 21 день после введения аллоксана I

Рис. 2. Обозначения: I. Контроль - вода очищенная; 2- сбор «Арфазетин», 3-настойка из свежезаготолвенных побеговчерники обыкновенной , 30, 4- настойка из высушенных побегов черники обыкновенной, 30, 5- настойка и? набухших побегов черники обыкновенной, 30, 6-настойка из свежезаготолвенных побеговчерники обыкновенной , ЗС; 7- настойка из высушенных побегов черники обыкновенной, ЗС; 8- настойка из набухших побегов черники обыкновенной, ЗС; 9-настойка из свежезаготолвенных побеговчерники обыкновенной , 60; Ю- настойка из высушенных побегов черники обыкновенной, 60, 11- настойка из набухших побегов черники обыкновенной, 60.

Приложение 6. Таблица 1

Результаты оценки антимикробной активности лекарственного растительного сырья и гомеопатических настоек в отношении клеток Pseudomonas aeruginosa, Candida albicaus и Staphylococcus aureus (n=5, p>95)

Кл Pseudomonas aeruginosa Кп Candida albicaus Кл Staphylococcus aureus

Анализируемый образец Исходная Разбавление Исходная Разбавление Исходная Разбавление

настойка 1/2 1/4 1/8 настойка 1/2 1/4 1/8 настойка 1/2 1/4 1/8

Настойка из свежей травы прострела - - - - - - - - - - - ±

раскрытого

Настойка из сухой травы прострела - - - - - - - - - - - ±

раскрытого

Настойка из набухшей травы прострела - - - - - - - - - - - +

раскрытого

Сок из травы прострела раскрытого - - - - - - - - - - - ±

Настойка из свежей травы ветреницы - - - - - - - - - - - +

дубравной

Настойка из сухой травы ветреницы - - - + - - - + - ± + +

дубравной

Настойка из набухшей травы ветреницы - - - + - - - ± - - ± +

дубравной

Сок из травы ветреницы дубравной - - - - - - - - - - - ±

Настойка из свежих побегов черники _ _ — — — — — _ — - — +

обыкновенной

Настойка из высушенных побегов - - ± ± - - - - - - - +

черники обыкновенной

Настойка из набухших побегов черники - - ± + - - - - - - ± +

обыкновенной

Сок из побегов черники обыкновенной - - - + - - + + - • - -

Активность экстрагента - этанола - - - + - - - + - - - +

Условные обозначения: "+" - препарат проявляет антимикробный эффект

- препарат проявляет антимикробный эффект " ±" - препарат проявляет слабовыражешшй антимикробный эффект

Список публикаций по теме диссертации.

1. Саканян Е.И., Лесиовская Е.Е., Маслова Н.М.

«Разработка технологии матричных гомеопатических настоек из

лекарственного растительного сырья» Фармация в XX веке: иновации и традиции: тезисы докладов Международной научной конференции. Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999г, СПб.: СПХФА, 1999. - С. 72-73

2. Саканян Е.И., Лесиовская Е.Е., Бахтина СМ., Маслова Н.М. «О разработке нормативно-технической документации на гомеопатические лекарственные средства», Материалы Всероссийской научной конференции « От materia medica к современным медицинским технологиям», 1998., СПб, ВМА, - С.147-148.

3. Саканян Е.И., Гаккель ТА, Маслова Н.М. " Анализ современного состояния и перспективы развития "Гомеопатической фармации" Санкт-Петербурга". Материалы Всероссийской научной конференции «От materia medica к современным медицинским технологиям", 1998, СПб, ВМА,-С. 157-158.

4. Маслова Н.М., Саканян Е.И., Лесиовская Е.Е., Гаккель Т.А. «О разработке состава и технологии гомеопатических матричных настоек Ветреницы дубравной и прострела раскрытого»// Всб.: Итоги и перспективы развития традиционной медицины в России. Материалы научной юбилейной конференции посвященной 25-летию открытия ЦНИИ рефлексотерапии. М.: 2002. - С. 201-204.

5. Саканян Е.И., Гаккель Т.А., Маслова Н.М. "Современное состояние и перспективы развития "Гомеопатической фармации" Санкт-Петербурга" // В сб.: Материалы съезда гомеопатов России, г. Новосибирск, «Наука», 1999.-С. 78-82

6. Саканян. Е.И., Лесиовская Е.Е., Маслова Н.М., Теслов Л.С., Сте-паненко О.Г., Фролова Н.Ю. «О перспективе разработки матричных гомеопатических настоек на основе высушенного лекарственного растительного сырья». «Человек и лекарство», СПб, 2000. - С. 601-602

7. Саканян Е.И., Лесиовская Е.Е., Кабишев К.Э., Маслова Н.М., Бахтина СМ.. Методическое пособие «Технология и анализ матричных гомеопатических настоек», С-Пб., 2004, 20 с. .

Отпечатано а ООО «АкадемПринт». С-Пб. ул. Миллионная, 19 Тел.: 315-11-41. Подписано в печать 20.07.04. Тираж 100 экз.

Р15520

Официальное признание гомеопатии, как одного из перспективных направлений практического здравоохранения Российской Федерации послужило толчком к .развитию не только этого метода лечения, но и отечественного гомеопатического производства. При этом номенклатура гомеопатических матричных настоек невелика и не-.удовлетворяет запросам практики [65].

В качестве возможных источников сырья для производства отечественных гомеопатических препаратов интересны растения, которые широко представлены во флоре РФ и имеют достаточную сырьевую базу на ее территории [1]. К таким растениям относится черника обыкновенная Vaccinium myrtillus L., семейство вересковые Ericaceae L., прострел раскрытый Pulsatilla patens L. и ветреница дубравная - Anemone nemorose L., семейство лютиковые - Ranunculaceae L. Очень часто в гомеопатической литературе, особенно в зарубежной, ветреницу дубравную совершенно неправомочно относят к роду Pulsatilla L., и гомеопатическую матричную настойку «Пульсатилла» готовят на основе, в том числе, травы ветреницы дубравной, что вызывает сомнения в воспроизводимости лечебного эффекта.

В этой связи представляется актуальным фармакогностическое и фармакологическое изучение этих лекарственных растений, перспективных к использованию в качестве сырья для производства гомеопатических матричных настоек. При этом целесообразно исследование возможности применения лекарственного растительного сырья, как в свежем, так и в высушенном виде. Это обусловлено тем, что в зарубежной гомеопатической практике технология гомеопатических матричных настоек ориентирована, прежде всего, на свежесобранное сырье. Такая технология не всегда приемлема к воспроизведению в условиях отечественных гомеопатических производств, ввиду территориальной удаленности последних от мест произрастания и заготовки лекарственного растительного сырья.

Цель настоящего исследования: сравнительная фармакогностиче-ская и фармакологическая оценка свежезаготовленного и высушенного растительного сырья травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого, побегов черники обыкновенной, получение, разработка методов стандартизации и изучение некоторых видов фармакологической активности гомеопатических матричных настоек на их основе.

Задачи исследования:

1. Изучение ассортимента гомеопатических лекарственных средств растительного происхождения отечественного производства.

2. Исследование и сравнение показателей качества свежесобранного и высушенного лекарственного растительного сырья: травы ветреницы дубравной и прострела раскрытого, побегов черники обыкновенной и разработка методов стандартизации этих видов сырья.

3. Фармакологическая оценка лекарственного растительного сырья.

4. Получение гомеопатических матричных настоек из изучаемых видов лекарственного растительного сырья и разработка методов их стандартизации.

5. Сравнительная оценка фармакологической активности гомеопатических матричных настоек.

6. Разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье и гомеопатические матричные настойки.

Объектами исследования являлись:

• Трава ветреницы дубравной - Herba Anemone nemorose L.,

• Трава прострела раскрытого - Herba Pulsatilla patens L.

• Побеги черники обыкновенной - Cormi Vaccinium myrtillus L.,

• Гомеопатические матричные настойки Миртшшюс - две настойки из побегов черники обыкновенной (свежезаготовленных и высушенных) -Vaccinium myrtillus L., семейство вересковых Ericaceae L.

• Гомеопатические матричные настойки Пульсатилла - две настойки из травы прострела раскрытого (свежезаготовленной и высушенной) Pulsatilla patens L., семейство лютиковые Ranunciilaceae L.

• Гомеопатические матричные настойки Анемон - две настойки из травы ветреницы дубравной (свежезаготовленной и высушенной) Anemone nemorose L., семейство, лютиковые — Ranunculaceae L.

При этом использовали не только высушенное сырье, но и сырье, подвергнутое предварительному набуханию с учетом коэффициента водопогло-щения.

Научная новизна. Впервые проведен сравнительный анализ химического состава свежезаготовленного и высушенного лекарственного растительного сырья: побегов черники обыкновенной, травы прострела раскрытого и травы ветреницы дубравной. Подтверждено, что основными группами биологически активных веществ (БАВ) травы ветреницы дубравной являются - терпеноиды, сапонины, дубильные вещества, прострела раскрытого -терпеноиды, сапонины, аминокислоты и дубильные вещества, и побегов черники обыкновенной - дубильные вещества, флавоноиды.

Доказано, что извлечение из свежезаготовленного и высушенного лекарственного растительного сырья сопоставимы по составу биологически активных веществ и по фармакологической активности.

Предложена технология гомеопатических матричных настоек из свежезаготовленного и высушенного сырья, имеющих одинаковый фитохими-ческий состав.

В экспериментах на животных проведено изучение фармакологической активности гомеопатических матричных настоек прострела раскрытого, ветреницы дубравной и черники обыкновенной, включая оценку их острой токсичности.

Научно-практическая значимость. На основании результатов фарма-когностических исследований определены макро- и микродиагностические признаки и дана полная товароведческая характеристика 3 видов растительного сырья: травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной.

Разработаны проекты фармакопейных статей предприятия-на лекарственное растительное сырье (свежее и высушенное): траву прострела раскрытого Pulsatilla patens L. и ветреницы дубравной Anemone nemorose L., семейство лютиковые - Ranunculaceae L.; побеги черники обыкновенной Vaccinium myrtillus L., семейство вересковые Ericaceae L.

Доказана возможность использования свежезаготовленного и высушенного лекарственного растительного сырья для получения матричных гомеопатических настоек, эквивалентных в химическом и фармакологическом отношении, и оценки лечебных свойств гомеопатических препаратов (матричных настоек и их разведений) в условиях экспериментов на животных.

Фармакологическими исследованиями показано, что изучаемые матричные гомеопатические настойки обладают низкой токсичностью. Изученные настойки в экспериментах на животных проявляют антигипоксические свойства.

В результате оценки влияния настоек прострела раскрытого и ветреницы дубравной на различные фазы воспаления у них выявлена антиэкссуда-тивная и антипролиферативная активность. Как матричные настойки, так и гомеопатические разведения проявили достаточно выраженное противовоспалительное действие, несколько уступая препаратам сравнения. Для настоек из побегов черники обыкновенной установлено выраженное противоглике-мическое действие, превосходящее эффект препарата сравнения (сбор «Ар-фазетин»).

Разработаны методы качественного и количественного анализа гомеопатических матричных настоек «Прострел раскрытый настойка» (Пульсатил-ла), «Черника обыкновенная настойка» (Миртиллюс), «Ветреница дубравная настойка (Анемон), которые дают возможность объективно оценивать качество настоек, полученных из свежезаготовленного и высушенного сырья по содержанию действующих веществ. Результаты исследования включены в проекты фармакопейных статей предприятия на гомеопатические матричные настойки Анемон, Пульсатилла, Миртиллюс.

Гомеопатические матричные настойки из свежего и сухого растительного сырья Анемон, Пульсатилла, Миртиллюс могут быть рекомендованы в качестве субстанций для получения гомеопатических лекарственных средств, используемых для профилактики и вспомогательной терапии соответствующих заболеваний, а сами методы получения настоек - в качестве модели для дальнейших разработок в области технологии гомеопатических матричных настоек из других видов растительного сырья.

Результаты исследований внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедр фармацевтической химии, фармакологии, фармакогнозии, лаборатории ГЛС и фитопрепаратов СПХФА.

Материалы исследований включены в отчеты, представленные в Федеральный научный клинико-экспериментальный центр традиционных методов диагностики и лечения МЗ РФ по целевой программе МЗ РФ (19962000 гг., 2001-2006 гг.) и по НИР СПХФА за 2002-2003 гг. по тематике: «Разработка технологии гомеопатических матричных настоек», а также отражены в соответствующем методическом пособии.

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены на Всероссийской научной конференции « От materia medica к современным медицинским технологиям» (СПб., 1998 г.), II (I) Съезде гомеопатов России, г. Новосибирск, 1999 г., Международной научной конференции в Санкт-Петербурге в 1999 г., VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000 г.), Научной юбилейной конференции посвященной 25-летию открытия ЦНИИ рефлексотерапии (Москва, 2002 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительного фармакогностического и фармакологического изучения свежезаготовленной и высушенной травы прострела раскрытого Pulsatilla patens L., ветреницы дубравной Anemone nemorose L. и побегов черники обыкновенной Vaccinium myrtillus L.

2. Проекты ФСП на растительное сырье: "Ветреница дубравная трава свежая", "Ветреница дубравная трава", "Прострел раскрытый трава свежая", "Прострела раскрытого трава", "Черники обыкновенной побеги свежие", "Черника обыкновенная побеги".

3. Результаты фотохимических и фармакологических исследований гомеопатических матричных настоек ветреницы дубравной, прострела раскрытого и черники обыкновенной.

4. Проекты ФСП на гомеопатические матричные настойки: " Ветреницы дубравной настойка", "Прострела раскрытого настойка", "Черники обыкновенной настойка".

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них: 2 статьи, методическое пособие «Технология и анализ гомеопатических матричных настоек».

Диссертационная работа выполнена в лаборатории готовых лекарственных средств и фитопрепаратов НИУ, а также на кафедрах фармакогнозии, фармакологии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии. Микробиологические исследования растительного сырья и настоек проводили на кафедре микробиологии СПХФА под руководством доцента, к.ф.н. Т.С. Потехиной.

Работа выполнена в рамках «Целевой программы МЗ РФ развития гомеопатии на период 1996-2000 гг. и 2001-2006 гг.» (Договор № 206/211/001 ).

Выводы

1. Сравнительный анализ фитохимического состава свежезаготовленного и высушенного лекарственного сырья показал, что в траве ветреницы дубравной, содержатся такие группы БАВ, как терпеноиды, сапонины, в простреле раскрытом — терпеноиды, аминокислоты, и в побегах черники - дубильные вещества, флавоноиды.

2. Определены товароведческие показатели качества сырья ветреницы дубравной, прострела раскрытого и черники обыкновенной и методы установления его подлинности.

3. Доказано, что изученное сырье, независимо от способа заготовки, идентично по составу основных групп БАВ и может быть использовано для приготовления матричных гомеопатических настоек.

4. Изучены и определены показатели качества гомеопатических матричных настоек и разработаны методы их стандартизации по основным группам действующих веществ - терпеноидам, сапонинам, дубильным веществам, аминокислотам. Определены сроки и условия хранения настоек.

5. Доказана возможность оценки лечебных свойств гомеопатических препаратов (матричных настоек и их разведений) в условиях экспериментов на животных.

6. У всех изученных настоек были выявлены антигипоксические свойства. При этом наиболее выраженный антигипоксический эффект проявили матричные настойки ветреницы дубравной и прострела раскрытого в дозах 1/10 и 1/200 от ЛД50 .

7. В результате оценки влияния настоек прострела раскрытого и ветреницы дубравной на различные фазы воспаления у них выявлена антиэкссудативная и антипролиферативная активность. По убыванию противовоспалительного эффекта настойки можно расположить в ряд: гомеопатические разведения D6 > настойки из сухого сырья = настойки из свежего сырья > настойки из набухшего сырья.

8. У настоек из побегов черники обыкновенной выявлено выраженное гипогликемическое действие, превосходящее эффект препарата сравнения -сбор «Арфазетин».

Заключение

В процессе работы были определены товароведческие показатели качества растительного свежезаготовленного и высушенного сырья: травы ветреницы дубравной, прострела раскрытого и побегов черники обыкновенной. Разработаны методы установления подлинности данного растительного сырья, определено количественное содержание основных действующих веществ в каждом из видов сырья. Предложены методы стандартизации данного сырья. На основе полученных данных составлены проекты нормативных документов (ФСП) на растительное сырье «Ветреница дубравная трава», «Ветреница дубравная трава высушенная», «Прострел раскрытый трава», «Прострел раскрытый трава высушенная», «Черника обыкновенная побеги», «Черника обыкновенная побеги высушенные» .

Согласно требованиям ВФС 42-2800-96 были получены гомеопатические матричные настойки из свежезаготовленного и высушенного растительного сырья. В результате исследований была оптимизирована технология гомеопатических матричных настоек из свежезаготовленного и высушенного сырья.

Следующим этапом исследований явилось изучение и определение показателей качества гомеопатических матричных настоек и разработка методов их стандартизации по основным группам действующих веществ -терпеноидам, сапонинам, дубильным веществам, аминокислотам. Определены сроки и условия хранения этих настоек. На основе полученных данных составлены проекты нормативных документов (ФСП) на гомеопатические матричные настойки «Ветреницы дубравной настойка», «Черники обыкновенной настойка», «Прострела раскрытого настойка».

Проведены фармакологические исследования настоек, полученных как из свежезаготовленного, так и из высушенного сырья. В результате исследований было установлено, что ЛД50 для настоек из всех видов сырья прострела раскрытого составляет « 180 мл/кг и для настоек из ветреницы дубравной «185 мл/кг. Для настоек из побегов черники обыкновенной составило « 430 мл/кг.

Установлено, что наиболее характерен для настоек ветреницы дубравной и настоек прострела раскрытого противовоспалительный эффект, для настоек черники - противодиабетический эффект.

На основе фармакологических исследований подтверждено достижение аналогичного терапевтического эффекта настоек, полученных из свежесобранного и высушенного сырья. Это, в свою очередь, доказывает перспективность получения гомеопатических матричных настоек, не только из свежезаготовленного, но и из высушенного растительного сырья для создания на их основе гомеопатических лекарственных средств.