Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование вклада NO-опосредованных механизмов в реализации системных эффектов небиволола и амлодипина

На правах рукописи

2 9 ЯНВ 2004

ЧЕРНЫХ ЕЛЕНА ГЕННАДИЕВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ ВКЛАДА 1ЧО-ОПОСРЕДОВАННЫХ МЕХАНИЗМОВ В РЕАЛИЗАЦИИ СИСТЕМНЫХ ЭФФЕКТОВ НЕБИВОЛОЛА И АМЛОДИПИНА

14.00.25- ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

КУРСК-2003

Работа выполнена на базе Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет МЗ РФ.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Галенко-Ярошевский Павел Александрович

доктор медицинских наук, профессор Муляр Александр Георгиевич

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится ««// - жЫ 2004 г. в /с^'часов на заседании диссертационного совета К.208.039.017при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет МЗ РФ (г. Курск, 305041, ул. К.Маркса, 3, конференцзал по защите диссертаций).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Курский государственный медицинский университет МЗ РФ (г. Курск, 305041, ул. К.Маркса, 3).

Автореферат разослан " <Ю " фШцЦ2003 г.

'7

Ученый секретарь диссертационного совета / кандидат медицинских наук, доцент

Е.Н. Пашин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний особое место занимает эндотелиальная дисфункция. Ведущим гуморальным эндотелиальным модулятором дилатации является оксид азота -эндотелиальный фактор релаксации. Основные причины развития эндотелиальной дисфункции многообразны и связаны главным образом с длительно существующей гемодинамической перегрузкой приводящих артерий (высоким напряжением сдвига) и гиперактивацией ряда нейрогуморальных систем, что проявляется извращением дилатирующей реакции эндотелия на обычные стимулы, нарушением образования или быстрой инактивацией оксида азота (Ванин А.Ф., 1998; Ивашкин В.Т., 2001).

В настоящее время достаточно большое внимание привлекают средства стимуляции синтеза оксида азота, которые представляются достаточно перспективными. К фармакологическим препаратам, косвенно приводящим к повышению синтеза NO, можно отнести некоторые антагонисты кальция, которые воздействуют на синтез и метаболизм брадикинина, основной медиатор высвобождения оксида азота (Хи В., 2002). Кроме того, первым прямым стимулятором эндогенного синтеза NO в эндотелии сосудов является Р-адреноблокатор небиволол (Bowman A J., 1994).

Цель и основные задачи исследования. Целью работы явилось изучение кардиопротективного действия небиволола' и амлодипина2, их влияния на функционирование эндотелия и барорецепторную регуляцию кровообращения в условиях хронического дефицита оксида азота, вазоренальной гипертензии, а также ишемических повреждениях миокарда в эксперименте.

При проведении исследования были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать кардиопротективное действие небиволола и амлодипина у животных с L-NAME индуцированной гипертензией.

2. Изучить влияние небиволола и амлодипина на функционирование эндотелия, барорецепторную чувствительность, морфологические изменения миокарда и других внутренних органов в условии L-NAME индуцированной гипертензии.

3. Исследовать состояние эндотелий опосредованных реакций, кардиопротективное действие, барорецепторную чувствительность и морфологические изменения при использовании небиволола и амлодипина на фоне вазоренальной гипертензии.

4. Изучить характер влияния небиволола и амлодипина на функционирование эндотелия, показатели сократимости левого желудочка и барорецепторную чувствительность на 3-й и 30-е сутки после моделирования коронароокклюзионного инфаркта миокарда.

'Небиволол - таблетки "Небилет" 5 мг (Берлин-Хеми, Германия) "Амлодипин - таблетки "Амлодипин" 10 мг (ОАО "ICN Лексредства", Россия)

Научная новизна исследования. В работе впервые проведено углубленное изучение кардиопротективного действия небиволола и амлодипина при N0-дефицитной гипертензии, их влияние на барорецепторную регуляцию кровообращения при вазоренальной гипертензии и на разных сроках после коронароокклюзионного инфаркта миокарда:

- обнаружено кардиопротективное действие небиволола и амлодипина при Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии;

- в сравнительном аспекте исследовано действие небиволола и амлодипина на эндотелий зависимую вазорелаксацию при Ь-ЫАМЕ индуцированной и вазоренальной гипертензиях, а также на 3-й и 30-е сутки коронароокклюзионного инфаркта миокарда;

- изучено влияние небиволола и амлодипина на барорефлекторную чувствительность в условиях Ь-ЫАМЕ индуцированной, вазоренальной гипертензии и на 3-й и 30-е сутки после коронароокклюзионного инфаркта миокарда с учетом системной организации нейрогуморальных механизмов регуляции сердечно-сосудистой системы;

- проведено сопоставление результатов состояния эндотелия по данным функциональных проб и индексов чувствительности барорефлексов у животных находящихся в свободном поведении, с результатами исследования сократимости миокарда у наркотизированных животных, а также данными морфологического исследования внутренних органов при использовании небиволола и амлодипина на фоне Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии и других повреждениях миокарда.

Практическая значимость работы. Полученные новые данные позволяют более четко представить механизмы влияния Р-адреноблокатора небиволола и антагониста кальция амлодипина на показатели системной гемодинамики при разной патологии сердечно-сосудистой системы, а также дают возможность дифференцированного подхода к назначению исследуемых препаратов при различных формах артериальной гипертензии в зависимости от ведущих механизмов нарушения регуляции артериального давления.

Внедрение результатов научных исследований. В ходе выполнения работы проведено доклиническое испытание таблеток "Амлодипин", производства ОАО "Ай Си Эн Лексредства" в сравнении с таблетками "Норваск", производства "Пфайзер" (Германия). Результаты исследований представлены в фармакологический комитет Российской Федерации. Материалы диссертации использованы при составлении учебно-методических рекомендаций: "Теоретические предпосылки применения небиволола и амлодипина в эндотелиотропной фармакотерапии" и "Морфофункциональная характеристика ЫО-дефицитных состояний в эксперименте", которые включены в лекционный курс и лабораторные занятия на кафедре фармакологии с курсом ФТЛ ФПО.

Апробация работы проведена на межкафедральном заседании кафедр фармакологического и терапевтического профиля Курского государственного медицинского университета.

Материалы и положения диссертации доложены и обсуждены на X Национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2003), 2-ом Съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003), Всероссийской научно-практической конференции по актуальным вопросам клинической и экспериментальной медицины (Чита, 2003), VI Международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 2002), Всероссийской конференции "Молодые ученые медицине" (Самара, 2003), а также представлены на III Конференцию молодых ученых России "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины" (Москва, 2004).

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), главы 2, содержащей описание материалов и методов исследования, глав 3, 4 и 5 с изложением собственных экспериментальных данных, обсуждения полученных результатов (глава 6), выводов, списка литературы - 181 источника (24 работы отечественных и 157 работы иностранных авторов) и приложения. Таблиц - 27, рисунков - 32.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Эксперименты выполнены на нелинейных крысах, массой 200-300г. Животные были разделены на 22 группы (п=10). Препараты: небиволол и амлодипин вводились внутрижелудочно.

Ингибитор NO-синтазы N-нитро-Ь-аргинин метилэфир (L-NAME, Sigma) вводился посредством желудочного зонда один раз в сутки в дозе 25 мг/кг в объеме 1 мл/кг в течение 14 дней (Deng L.Y., 1993). Моделирование вазоренальной гипертензии у крыс проводили путем наложения серебряного зажима на левую почечную артерию (W.Murphy, 1994). Коронароокклюзионный инфаркт миокарда (ИМ) моделировали наложением лигатуры на переднюю нисходящую ветвь левой коронарной артерии (А.Х.Коган, 1979).

Исследование показателей системной гемодинамики проводили у ненаркотизированных животных в состоянии покоя, а также на фоне функциональных проб:

1. Нагрузка объемом (внутривенное одномоментное введение 0,9% раствора NaCl из расчета 0,3 мл на ЮОг) (Ф.З. Меерсон, 1980).

2. Внутривенное введение мезатона в дозе 0,003 мг/кг из расчета 0,1 мл на ЮОг. (Вальдман A.B., 1998).

3. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 1-Ю"5 ммоль/мл из расчета 0,1 мл на ЮОг) (Ф.З. Меерсон, 1980).

4. Проба на эндотелий независимое расслабление сосудов (внутривенное введение раствора нитропруссида натрия в дозе 30 мкг/кг из расчета 0,1 мл на ЮОг) (Галаган М.Е., 1991)

5. Проба на эндотелий зависимое расслабление сосудов (внутривенное введение раствора ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг из расчета 0,1 мл на ЮОг) (J.B.Laursen, 1997).

Исследование артериального барорецепторного рефлекса основывалось на одновременной непрерывной регистрации АД и ЧСС при условии быстро изменяющегося уровня АД (Smyth и др., 1969). В качестве препарата, повышающего АД применялся мезатон (30 мкг/кг) (Вальдман A.B., 1998), понижающего давление — натрия нитропруссид (40 мкг/кг) (V.M.Farah, 1999). Максимальные изменения ЧСС, которые соответствовали максимальным изменениям среднего артериального давления (СрАД), были использованы для определения индексов свойственных каждому типу барорефлекторно-обусловленного ответа (брадикардитического при введении мезатона и тахикардитического при введении натрия нитропруссида). Уравнение для количественного измерения индекса чувствительности барорефлексов имеет следующий вид: ДЧСС/ДСрАД (V.M.Farah, 1999).

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID "Gould" США, АЦП ACD-12 и компьютерной программы "Bioshell" регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:

1. Нагрузка объемом (внутривенное одномоментное введение 0,9% раствора NaCl, из расчета 0,3 мл на ЮОг) (Ф.З.Меерсон, 1980).

2. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 1-Ю"5 ммоль/л, из расчета 0,1 мл на ЮОг) (Ф.З.Меерсон, 1980).

3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 с.) (Ф.З.Меерсон, 1980).

4. 3-минутная гипоксия (Е.Н.Пашин, 1993).

Морфологически развитие L-NAME индуцированной и реноваскулярной гипертензий подтверждали гистологическими исследованиями и морфометрией сердца, сосудов и почек от животных, выведенных под наркозом из эксперимента.

Достоверность наблюдавшихся при действии исследованных препаратов изменений параметров как абсолютных, так и в приростах от исходного уровня определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней ошибки средней арифметической (±т) и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стьюдента (Е.В.Монцевичуте, 1964). Различия оценивали как достоверные, при р<0,05. Для расчетов использовали программу для статистического анализа Microsoft Excel 2000.

Сопоставительный анализ интегральной характеристики результатов функциональных проб проводился с использованием метода визуализации изображения в 3-мерном пространстве и расчета межклассовых расстояний (Д.Е.Скопин, 1998), а также изучения корреляционных взаимоотношений (А.В.Завьялов, 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Сравнительное изучение системных эффектов небиволола и амлодипина при Ь-НАМЕ индуцированной гипертензии у крыс

1.1. Влияние небиволола и амлодипина на показатели системной гемодинамики и барорефлекторную чувствительность на фоне ¿-МАМЕ индуцированной гипертензии

Введение крысам Ь-ЫАМЕ в дозе 25 мг/кг приводило к выраженному повышению значений показателей АД. Применение небиволола в дозе 0,5 и 2 мг/кг и амлодипина в дозе 0,5 и 2 мг/кг предотвращало развитие АГ. Наиболее выраженный гипотензивный эффект оказывал небиволол в дозе 2 мг/кг, действие небиволола и амлодипина в дозах 0,5 и 2 мг/кг соответственно существенно не различалось, наиболее слабым гипотензивным эффектом обладал амлодипина в дозе 0,5 мг/кг (табл. 1).

Таблица 1

Влияние небиволола и амлодипина на показатели системной гемодинамики на фоне L-NAME индуцированной гипертензии (М±ш; в абсолютных значениях, п=10)____

Серия САД ДАД СрАД ЧСС

Интактные 130,3±7,7Х 80^±6,4х 97,4±3,9Х 361,7±12,6Х

L-NAME 193,1±8,2У 138,9±8,8У 15б,9±7,7у 301,2±17,2У

L-NAME +небиволол 0,5 мг/кг 149,2± 10,8х 102,6±7,4ху 116,9±6,7ху 288,7±7,1у

L-NAME +небиволол 2 мг/кг 130,2±7,5Х 82,6±2,9* 96,6±3,3Х 277,7±8,3У

L-NAME+амлодипин 0,5 мг/кг 159,3±5,2ху 1153±ЗДУ 114,9±2,1ху 338,9±13,0

L-NAME+амлодипин 2 мг/кг 142,0±2,5Х 101,4±2,4Х 129,9±4,3Х 351,2±11,4"

Примечание. * - при р<0,05 в сравнении с Ь-ЫАМЕ гипертензией;у - при р<0,05 в сравнении с данными интактных животных; здесь и везде далее САД -систолическое артериальное давление (мм.рт.ст.), ДАД - диастолическое артериальное давление (мм.рт.сг.), СрАД - среднее артериальное давление (мм.рт.ст.), ЧСС - частота сердечных сокращений (уд/мин)

При проведении функциональных проб у ненаркотизированных животных, получавших небиволол и амлодипин, данные приближались по своим значениям у группе интактных животных, достоверно отличаясь от соответствующих показателей не леченой группы. У животных с Ь-ЫАМЕ гипертензией амплитуда изменения СрАД в ответ на введение мезатона составила 25,0±2 мм.рт.ст. В интактной группе данный показатель составлял 47,3±2,1 мм.рт.ст., под действием небиволола (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипина (0,5 и 2 мг/кг) 37,9±2, 42,5±1, 39,1±4 и 48,2±4 мм.рт.ст. соответственно. Применение небиволола способствовало восстановлению эндотелий зависимого и

независимого расслабления сосудов в ответ на введение ацетилхолина и натрия нитропруссида, которые были существенно угнетены на фоне дефицита оксида азота. Положительное влияние амлодипина в данном аспекте также было достоверно, но менее выражено в сравнении с небивололом (рис. 1).

При исследовании чувствительности барорецепторов на фоне Ь-ЫАМЕ гипертензии было обнаружено, что барорефлекторные индексы для брадикардитического и тахикардитического ответов были снижены -соответственно 30,1% и 51,2% от уровня интактных животных. Использование препаратов способствовало улучшению активности барорецепторов, что проявлялось повышением значений индексов. Так, при терапии небивололом в дозе 0,5 мг/кг индексы составили соответственно 73% и 68%; в дозе 2 мг/кг -98% и 86% от уровня интактных животных. На фоне применения амлодипина (0,5 мг/кг) брадикардитический и тахикардитический индексы составили 42% и 50%; амлодипина (2 мг/кг) -56% и 52% соответственно от уровня интактных животных.

Натрия нитропруссид Ацетилхолин

Рис. 1. Абсолютные значения СрАД при введении натрия нитропруссида и ацетилхолина у крыс, получавших небиволол и амлодипин, на фоне IGNAME гипертензии

□ интактные ■ IGNAME

В ЫЧАМЕ+небиволол (0,5 мг/кг) S L-NAME+небиволол (2мг/кг)

В I^NAME+амлодипнн (0,5мг/кг) 0 L-NAME+амлоднпин (2мг/кг)

*-при р<0,05 в сравнении с L-NAME гипертензией

Интегральная характеристика функционального состояния барорецепторов у интактных и гипертензивных животных, находящихся в свободном поведении, по результатам проведения функциональных проб на фоне применения небиволола и амлодипина с использованием метода визуального отображения в 3-ех — мерном пространстве представлена на рисунке 2. На рисунке отображены абсолютные значения амплитуды колебаний СрАД при введении мезатона (ось Y), ацетилхолина (ось Z) и величина брадикардитического индекса (ось X). Конгломераты облаков, образованные группой животных с L-NAME гипертензией и лечеными группами, не перекрывают друг друга. Группа интактных животных находится несколько в стороне от леченых животных и перекрывает только облако, образованные группой получавшей небиволол в дозе 2 мг/кг. Группы,

получавшие небиволол в дозе 0,5 мг/кг и амлодипин в дозах 0,5 и 2 мг/кг, занимают промежуточное положение между интактными и гипертензивными животными.

Таким образом, расположение групп животных в пространстве наглядно показывает наличие явного положительного эффекта исследуемых препаратов на функциональное состояние эндотелия и барорефлекторную чувствительность, что так же подтверждается значениями межклассовых расстояний (табл. 2).

Таблица 2

Межклассовые расстояния между группами животных в зависимости от величины абсолютных приростов СрАД при проведении нагрузочных проб и барорефлекторного индекса на фоне Ь-ЫАМЕ гипертензии __

№ Группа I II III IV V VI Я

I Интактные 0 35,3 12,9 6,4 18,8 11Д 3,6

II Ь-ЫАМЕ 0 24,5 30,3 17,6 28,5 3,0

III Ь-ЫАМЕ+небиволол 0,5 мг/кг 0 6,7 11,3 11,4 9,4

IV Ь-ЫАМЕ+небиволол 2,0 мг/кг X X 0 14,8 9,9 3,7

V Ь-ЫАМЕ+амлодипин 0,5 мг/кг X 0 11,1 4,5

VI Ь-ИАМЕ+амлодипин 2,0 мг/кг X 0 5,0

Примечание. Я - радиус облаков соответствующих групп; х- облака групп перекрываются

Мезатон

Ь^АМЕ+амлодипин 0,5 мг/кг

Ь^АМЕ+небиволол 0,5 мг/кг

Ь^АМЕ+аилодипнн 2 мг/кг

■а*

Интактные

Ь^АМЕ+небиволол 2 мг/кг

Ацетилхолин

Брадикардитический

индекс

Рис. 2. Пространственное положение групп животных, получавших небиволол и амлодипин, в зависимости от величины приростов СрАД в абсолютных значениях при проведении функциональных проб и барорефлекторного индекса на фоне Ь^АМЕ гипертензии

Примечание: ось ъ градуирована оттенками серого, градация цветов представлена внизу рисунка.

1.2. Влияние небиволола и амлодипина на показатели сократимости миокарда при проведении нагрузочных проб на фоне Ь^АМЕ индуцированной гипертензии

Изучение функционального состояния миокарда при проведении нагрузочных проб закономерно выявило повышение абсолютных значений показателей сократимости миокарда. Однако было обнаружено выраженное снижение приростов показателей сократимости на нагрузку объемом и адренореактивность. Таким образом, несмотря на компенсаторное увеличение сократимости миокарда, отмечается редуцирование миокардиальных резервов.

На фоне применения небиволола (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипина (0,5 и 2 мг/кг) при проведении нагрузки объемом, пробе на адренореактивность и во время постгипоксической реоксигенации гемодинамические и скоростные показатели приближались по своим значениям к группе интактных животных, достоверно отличаясь от соответствующих показателей не леченой группы.

Наиболее показательно кардиопротективное действие исследуемых препаратов характеризовала динамики резерва сократимости к 25-й секунде пережатия аорты, выраженная в % от 5-й секунды. У животных с Ь-ЫАМЕ гипертензей ЛЖД на 25-й секунде составляло 76,4%, а при использовании небиволола (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипина (0,5 и 2 мг/кг) соответственно 81,1%, 88,0% и 78,7%, 84,9% от величины зафиксированной на 5-й сек пережатия аорты (при р<0,05). Значения -Н1р/сй на 25-й секунде в процентах от величины, зафиксированной на 5-й сек пережатия аорты, представлены на рисунке 3.

Рис. 3. +11р/сИ у крыс на 25-й сек. пережатия аорты в % относительно значения на 5-й сек. при использовании небиволола и амлодипина на фоне Ь-ОДМЕ гипертензии

—■— Интактные —*— L-NAME

— -Х- - L-NAME+небнволал (0,5мг/кг) —♦ — L-NAME+небнволол (2мг/кг)

— -Ж — L-NAME+амлодипин (0,5мг/кг) ■ - А * - L-NAME+амлодипин (2мг/кг)

при р<Ю,05 в сравнении с L-NAME гипертензией

Положительное влияние небиволола и амлодипина на миокард также выражалось в снижении падения показателя расслабления миокарда (-dp/dt) к 25-й секунде пережатия аорты и повышении приростов значений -dp/dt на максимуме постгипоксической реоксигинации, что свидетельствует о предотвращении развития диастолической дисфункции на фоне L-NAME гипертонии под действием небиволола и амлодипина.

Таким образом, результаты, полученные на наркотизированных животных, свидетельствуют о наличии кардиопротективного действия у небиволола и амлодипина, проявляющегося в повышении способности миокарда выдерживать длительные максимальные нагрузки.

Влияние небиволола и амлодипина на взаимосвязь СрАД в покое, амплитуды его колебаний при внутривенном введении ацетилхолина, брадикардитическим индексом чувствительности барорефлекса и степенью падения ЛЖД на 25-ой секунде пережатия аорты представлено в виде корреляционных плеяд на рисунке 4. Обращает на себя внимание факт снижения степени выраженности отрицательных корреляций между исходным значением СрАД, степенью снижения СрАД в ответ на введение ацетилхолина и барорефлекторным индексом, а также между ответной реакцией на ацетилхолин и степенью падения ЛЖД на 25-й секунде во всех леченых группах с большим эффектом у животных, получавших небиволол. Интактные Ь-№АМЕ ЫУАМЕ+небиволол 0,5мг/кг

параметрами и барорефлекторной чувствительностью при Ь^АМЕ гипертензии на фоне применения небиволола и амлодипина

Примечание: сплошная линия=0,1; пунктирная линия= -0,1 коэффициента корреляции; АД - исходное среднее артериальное давление; АХ- амплитуда СрАД при введении ацетилхолина; БР- брадикардитический индекс барорефлекса; 25 - амплитуда ЛЖД на 25-й секунде пережатия аорты.

Гистологическое исследование сердца, почек и головного мозга крыс при Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии на фоне применения небиволола показало следующее. Небиволол в дозе 2 мг/кг полностью устранял гипертрофические изменения кардиомиоцитов и стенок сосудов паренхимы сердца, почек и головного мозга. Масса вскрытого сердца у животных этой группы была близка к норме: 752±34 мг против 720±45 мг в контроле (р<0,05).

Небиволол в дозе 0,5 мг/кг также устранял гипертрофические изменения сердца и сосудов, однако у части крыс в почках сохранялась гипертрофия стенок некоторых приносящих артериол до 10 мкм. Амлодипин в дозе 2 мг/кг препятствовал развитие гипертрофии кардиомиоцитов и гипертрофических изменений стенок сосудов, однако у некоторых крыс в почках выявлялась гипертрофия клеток "темного пятна". Амлодипин в дозе 0,5 мг/кг оказывал заметно меньший протективный эффект, так что у многих животных сохранялась некоторая гипертрофия кардиомиоцитов, стенок мелких артерий и артериол и клеток "темного пятна" клубочков почек. Масса вскрытого сердца у крыс последней группы превышала этот показатель у интактных животных (791±68 мг), но различия были недостоверны.

2. Исследование системных эффектов небиволола и амлодипина у крыс с вазоренальной гипертензией

2.1. Изучение влияния небиволола и амлодипина на показатели системной гемодинамики в покое и на фоне проведения функциональных пробу животных с вазоренальной гипертензией

Внутрижелудочное введение р-адреноблокатора небиволола в дозе 0,5 и 2 мг/кг и антагониста кальция амлодипина в дозе 0,5 и 2 мг/кг в течение 30 суток после моделирования вазоренальной гипертензии предотвращало развитие АГ в степени соразмерной дозировке (табл. 3). Таким образом, небиволол и амлодипин обладают дозозависимым гипотензивным действием при вазоренальной гипертензии. Наиболее выраженный эффект оказывал амлодипин в дозе 2 мг/кг.

Таблица 3

Влияние небиволола и амлодипина на показатели системной гемодинамики на фоне вазоренальной гипертензии (М±т; в абсолютных значениях, п=10)_

Серия САД ДАД СрАД ЧСС

Интактные 130,3±7,7Х 80,9*6,4х 97,4±3,9Х 361,7±12,6Х

АГ 173,0±7,1у 120,4±6,3У 137,9±5,7У 400,8±19,1у

АГ +небиволол 0,5 мг/кг 139,1±6,5Х 96,5±4,1ху 110,7±4,4ху 364,9±14,5Х

АГ +небиволол 2 мг/кг 120,б±3,1х 873±4,1х 98,4±3,3* 327,3±15,6Х

АГ +амлодипин 0,5 мг/кг 139,2±4,2Х 103,944, О"" 115,7±3,9ху 410,1±10,1у

АГ +амлодипин 2 мг/кг 119,3±5,5Х 80,1±4,2Х 93,2±3,3Х 416,8±5,9У

Примечание. 1 - при р<0,05 в сравнении с вазоренальной гипертензией; у - при р<0,05 в сравнении с данными интактных животных.

На фоне применения небиволола и амлодипина в обеих дозах при проведении функциональных проб у ненаркотизированных животных с вазоренальной гипертензией абсолютные значения гемодинамических показателей были достоверно ниже в сравнении с гипертензивными животными. В группах леченных животных наблюдалось достоверное и дозозависимое повышение максимальных приростов СрАД в ответ на введение объема и мезатона с приближением значений к интактной группе.

На фоне применения небиволола и амлодипина при вазоренальной гипертензии, отмечалось повышение чувствительности сосудов к действию доноров N0, причем эффект был более выражен для амлодипина (рис. 5).

Натрия нитропруссид Ацетилхолин

Рис. 5. Значения амплитуд СрАД при введении натрия нитропруссида и ацетилхолина у крыс, получавших небиволол и амлодипин на фоне вазоренальной гипертензии (АГ)

□ интактные НАГ

Ш АГ+небиволол (0,5 иг/кг) ЕЗ АГ+небиволол (2мг/кг)

0 АГ+амлодипин (0,5мг/кг) ЕЭ АГ+амлодипин (2мг/кг)

*-ири р<0,05 в сравнении с вазоренальной гипертензией

Применение небиволола и амлодипина также способствовало восстановлению эндотелий зависимого расслабления сосудов в ответ на введение ацетилхолина, которое было угнетено на фоне вазоренальной гипертензии. Положительное влияние амлодипина в данном аспекте было достоверно только в дозе 2 мг/кг (рис. 5).

2.2. Оценка функционального состояния барорецепторов на фоне применения небиволола и амлодипина при вазоренальной гипертензии

Барорефлекторные индексы для брадикардитического и тахикардитического ответов на фоне вазоренальной гипертензии были снижены и составили соответственно 36,4% и 54,3% от уровня интактных животных. Использование препаратов способствовало улучшению активности барорецепторов, что проявлялось повышением значений индексов. Так, при терапии небивололом в дозе 0,5 мг/кг индексы составили 82,5% и 74,6%; в дозе 2 мг/кг-94,8% и 86,4% соответственно. На фоне применения амлодипина (0,5 мг/кг) брадикардитический и тахикардитический индексы составили 93,9% и 68,4%; амлодипина (2 мг/кг) - 92,7% и 92,2% соответственно. Абсолютные значения барорефлекторных индексов при вазоренальной гипертензии на фоне приема небиволола и амлодипина представлены на рисунке 6. Таким образом, очевидно, что небиволол и амлодипин в обеих дозах способствовали повышению чувствительности барорецепторов при вазоренальной гипертензии.

2.3. Влияние небиволола и амлодипина на показатели сократимости миокарда при проведении нагрузочных проб у наркотизированных животных с вазоренальной гипертензией

При проведении нагрузочных проб у наркотизированных животных с вазоренальной гипертензией абсолютные значения показателей сократимости миокарда были достоверно ниже таковых у гипертензивных крыс и приближались к значениям интактной группы на фоне применения амлодипина (2 мг/кг) и небиволола в обеих дозах.

д Уд/мии/мм.рт.ст

3

Брадикардитический Тахикардитнческий

Рис. 6. Величина барорецепторных индексов на фоне применения небиволола н амлодипина у крыс с вазоренальной гипертензией (ЛГ)

■ АГ

□ иитактныс

0 АГ+нсбиволол (0,5 мг/кг) Ш АГ+амлодипин (0,5мг/кг)

*-при р<0,05 в сравнении с вазоренальной гипертензией

0 АГ+небиволол (2мг/кг) й АГ+амлодипин (2мг/кг)

О кардиопротективном эффекте препаратов может свидетельствовать степень снижения показателей сократимости миокарда (ЛЖД и +dp/dt) в период проведения пробы на пережатие аорты. У животных с вазоренальной гипертензей +dp/dt на 25-й секунде составляло 62,4%, а при использовании небиволола (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипина (0,5 и 2 мг/кг) соответственно 83,9%, 81,7% и 84,7%, 85,5% от величины зафиксированной на 5-й сек пережатия аорты. В интактной группе данный показатель составил 91,4%. Значения ЛЖД на 25-й секунде в процентах от величины, зафиксированной на 5-й секунде пережатия аорты, представлены на рисунке 7.

Подтверждением кардиопротективного эффекта препаратов стало положительное влияние небиволола и амлодипина на процессы расслабления в миокарде, что выражалось в повышении абсолютных значений -dp/dt к 25-й секунде пережатия аорты и на максимуме постгипоксической реоксигенации. Это свидетельствует о предотвращении развития диастолической дисфункции под действием небиволола и амлодипина на фоне вазоренальной гипертонии.

Таким образом, результаты, полученные на наркотизированных животных, свидетельствуют о наличии кардиопротективного действия у небиволола и амлодипина, проявляющегося в повышении способности миокарда выдерживать длительные максимальные нагрузки и снижении степени диастолической дисфункции.

Влияние небиволола и амлодипина на взаимосвязь СрАД в покое, амплитуды его колебаний при внутривенном введении ацетилхолина,

эрадикардитическим индексом чувствительности барорефлекса и степенью ладения ЛЖД на 25-ой секунде пережатия аорты представлено в виде корреляционных плеяд на рисунке 8.

100 Шс

95 90 85 80 75 70 65

Рис. 7. ЛЖД у крыс на 25-й сек. пережатия аорты в % относительно значения на 5-й сек. на фоне применения небиволола и амлодипина при вазореналыюй гипертензии

97,1±0,7* - ~ - ~ -Т.Т.^ 96,1±0,6* 94,1±0,9* 92,6±2,6* 87,7±1,6*

66,9±2,3

- Интактные

— -Х- - А Г+небиволол (0,5мг/кг)

— -Ж — АГ+амлодипин (0,5мг/кг)

—•—АГ

--• — А Г+небиволол (2мгЛсг)

- - -А - - АГ+амлодипин (2мг/кг)

- при р<0,05 в сравнении с вазоренальной

Интактные

АГ +небиволол 0,5мг/кг

! ' / 1 / 1 1

• / ^ ■ ст>= \ !

АГ +амлодипин 2мг/кг

Рис. 8. Корреляционные взаимоотношения между гемодинамическими параметрами и барорефлекторной чувствительностью при вазоренальной гипертензии на фоне применения небиволола и амлодипина

Примечание: сплошная линия=0,1; пунктирная линия= -0,1 коэффициента корреляции; АД - исходное среднее артериальное давление; АХ- амплитуда СрАД при введении ацетилхолина; БР- брадикардитический индекс барорефлекса; 25 - амплитуда ЛЖД на 25-й секунде пережатия аорты.

Таким образом, можно сделать вывод, что применение небиволола и амлодипина при вазоренальной гипертензии способствовало снижению абсолютных значений коэффициента корреляции между степенью эндотелий зависимого расслабления сосудов на введение ацетилхолина и другими параметрами. Это, по-видимому, является следствием нормализирующего эффекта в отношении высвобождения оксида азота под действием небиволола и амлодипина при вазоренальной гипертензии.

3. Оценка функциональных резервов миокарда при проведении нагрузочных проб на 3-й сутки коронароокклюзионного инфаркта миокарда у животных, получавших небиволол и амлодипин.

На 3-й сутки после коронароокклюзии (ИМз) у крыс, получавших небиволол (1 и 8 мг/кг) и амлодипин (1 и 4 мг/кг) исходные значения показателей АД были достоверно ниже в сравнении с животными, не получавшими лечения. На фоне приема препаратов отмечалось достоверное урежение ЧСС в сравнении с ИМ3, которое было максимально выражено в группе животных, получавших небиволол в обеих дозах. В ходе анализа данных показателей системной гемодинамики при проведении функциональных проб у бодрствующих животных на 3-й сутки постинфарктного периода, на фоне применения небиволола и амлодипина значения абсолютных приростов показателей АД и ЧСС приближались к данным группы контроля.

В ответ на введение дополнительного объема в группах животных, получавших небиволол (1 и 8 мг/кг) и амлодипин в дозе 4 мг/кг наблюдалось достоверное и дозозависимое повышение максимальных приростов СрАД. Больший эффект оказывал небиволол в дозах 1 и 8 мг/кг. При анализе результатов пробы на адренореактивность небиволол способствовал снижению приростов показателей АД. Ингибирующее действие амлодипина на симпато-адреналовую систему было достоверно только при применении препарата в относительно больших дозировках (4 мг/кг).

При терапии небивололом и в меньшей степени при использовании амлодипина отмечалось приближение абсолютных значений СрАД к таковым контрольной группы животных, предотвращая развитие острых гипотензивных состояний в ранний период ИМ при введении ацетилхолина. Изменения СрАД в ответ на введение натрия нитропруссида также имели место, но не были достоверными (рис. 9).

Исследования состояния барорецепторной регуляции АД под действием препаратов в ранний постинфарктный период показали, что на фоне ИМз барорефлекторные индексы для брадикардитического и тахикардитического ответов составляли — 1,0±0,2 и 1,9±0,1 уд/мин/мм.рт.ст. При терапии небивололом в дозе 1 мг/кг индексы составили 2,1±0,2 и 2,4±0,4 уд/мин/мм.рт.ст; а в дозе 8 мг/кг - 2,3±0,1 и 2,9±0,4 уд/мин/мм.рт.ст соответственно. На фоне амлодипина (1 мг/кг) брадикардитический и тахикардитический индексы составили 1,4±0,2 и 1,90±0,4 уд/мин/мм.рт.ст.; амлодипина (4 мг/кг) - 1,7±0,1 и 2,1±0,2 уд/мин/мм.рт.ст соответственно.

Таким образом, очевидно, что на 3-й сутки постинфарктного периода небиволол в обеих дозах достоверно улучшал показатели, характеризующие активность барорецепторов. На фоне применения амлодипина отмечалось повышение только брадикардитического индекса, тахикардитический индекс оставался на уровне не леченых животных.

46,9* 47* 4Sr

Натрия нитропруссид

Ацетилхолин

Рис. 9. Абсолютные значения СрАД в ответ на введение натрия нитропруссида и ацетилхолина у крыс, получавших небиволол и амлодипин, на 3-й сутки ИМ

□ контроль

И ИМЗ+небиволол (1 мг/кг) ЕИМЗ+амлодипин (1 мг/кг)

ШИМЗ

ES ИМЗ+небиволол (8 мг/кг) И ПМЗ+амлодипин (4 мг/кг)

*-при р<0,05 в сравнении с ИМЗ

При исследовании исходных значений показателей сократимости на 3-й сутки постинфарктного периода у наркотизированных крыс, получавших небиволол (1 и 8 мг/кг) и амлодипин (1 и 4 мг/кг), выявлено, что препараты, проявляя свое гипотензивное действие, вызывали снижение показателей сократимости миокарда, которое в сравнении с не леченой группой не явилось достоверным (табл. 4).

Таблица 4

Влияние небиволола и амлодипина на показатели сократимости левого желудочка сердца крыс на 3-й сутки инфаркта миокарда (М±т; в абсолютных

Серия лжд +dp/dt -dp/dt ЧСС ИФС

Контроль 107,4±3Х 4918±182х -4447±164х 393±16 42165±1846х

ИМз 77,3±6У 3554±102у -3294±89у 404±26 30471±2069у

ИМз+небиволол 1 мг/кг 75,2±5У 3146±324у -2645±239у 366±12 27702±2293у

ИМз+небиволол8мг/кг 70,4±7У 2750±235ху -1978±159ху 308±15ху 22338±2962ху

ИМз+амлодипин 1 мг/кг 74,8±6У 3334±288у -3086±124у 378±14 28304±2248у

ИМз+амлодипин4мг/кг 72,9±7У 3252±284у -2454±264ху 392±12 29032±3729у

Примечание: 1) - при р<0,05 в сравнении с ИМз; 2): группой контроля.

при р<0,05 в сравнении с

96.8±0.6»

95 -

90

92.7±0.7* 90,5±U*

>5 -

86.4*1.8*

>0

82.5*2.8*

75

71.1Ü7

70

Рис. 10. ЛЖД у крыс на 25-й сек. пережатия аорты в % относительно

значення на 5-й сек. при применении небиволола и амлодипина при IIМЗ

—■— контроль —•— ИМЗ

— -Х- - ИМЗ+небиволол (1 иг/кг) —• — ■ ИМЗ+небиволол (8 мг/кг)

— -Ж — ИМЗ+амлодипнн (1 мг/кг) ИМЗ+амлодипин (4 мг/кг)

♦—ИМЗ

при р<0,05 в сравнении с ИМЗ

Несмотря на то, что в период проведения пробы на нагрузку объемом абсолютные значения ЛЖД, +dp/dt и -dp/dt были ниже в группах животных, получавших небиволол и амлодипин, приросты данных показателей оказались выше в сравнении с не леченой группой.

О выраженности кардиопротективных эффектов небиволола и амлодипина в ранний постинфарктный период можно судить по степени снижения ЛЖД (рис. 10) к 25-й секунде относительно их величины на 5-й секунде. Так, в группах, леченных небивололом и амлодипином, динамика изменения ЛЖД при нагрузке сопротивлением приближалась к таковым значениям контрольной серии. А на фоне применения небиволола (1 и 8 мг/кг) отмечалось повышение показателя -dp/dt даже больше, чем у группы контроля, что свидетельствует о значительном улучшении процессов расслабления в миокарде при терапии небивололом.

При комплексной интегральной оценке кардиопротективного действия небиволола и амлодипина с визуализацией пространственного расположения групп животных в зависимости от величины ЛЖД при проведении нагрузочных проб и брадикардитического барорефлекторного индекса, мы можем говорить о выраженном защитном действии на миокард исследуемых препаратов (рис.11).

Рассматривая рисунок 11 и таблицу 5 - межклассовых расстояний -нельзя не отметить близкое расположение групп животных, получавших небиволол в дозе 8 мг/кг и контрольной группы. Промежуточное положение между контрольными животными и патологией занимают группы, леченные небивололом в дозе 1 мг/кг и амлодипином в дозе 4мг/кг. Наиболее близко к не леченым животным с инфарктом миокарда занимает облако, образованное группой, получавшей амлодипин в дозе 1 мг/кг. Следует отметить, что облака групп, леченных небивололом и амлодипином в обеих дозировках не перекрываются с облаком группы, не получавшей лечения, что свидетельствует

5 выраженном положительном эффекте исследуемых препаратов в ранний юстинфарктный период.

25-я сек

ИМ+небнволол 1 мг/кг

ИМ+амлодипин 1 мг/кг

Контроль

\

ИМ+небиволол 8 мг/кг

имз

реокснгенация

ПМ+амлодипин 4 мг/кг

Брадикардитический индекс барорефлекса

Рис. 11. Пространственное положение групп животных леченных небивололом и амлодипином в зависимости от величины приростов ЛЖД в абсолютных значениях при проведении функциональных проб и брадикардитического индекса барорефлекса на фоне ИМ3

Примечание: ось г градуирована оттенками серого, градация цветов представлена внизу рисунка.

Таблица 5

группами животных в зависимости от ЛЖД на фоне ИМ3 при проведении

Межклассовые расстояния между величины абсолютных значений

№ Группа I II III IV V VI И

Контроль 0 95,7 56,0 64,2 52,2 45,5 4,8

II ИМ, 0 39,7 35,4 43,8 50,9 5,4

III ИМч+небиволол 1 мг/кг 0 14,3 54,0 12,0 9,3

IV ИМ+небнволол 8 мг/кг X 0 14,5 19,10 12,2

V ИМ^+амлодипин 1 мг/кг X X 0 7,3 8,0

VI ИМз+амлодипин 4 мг/кг X X X 0 8,6

Примечание: Я- радиус облаков соответствующих групп; х- облака перекрываются.

4. Оценка функциональных резервов миокарда при проведении нагрузочных проб на 3-й сутки коронароокклюзионного инфаркта миокарда у животных, получавших небиволол и амлодипин

При проведении функциональных проб у бодрствующих животных на 30-е сутки инфаркта миокарда (ИМзо), на фоне применения небиволола и амлодипина значения гемодинамических показателей приближались к таковым

интактной группы. В группах леченных животных наблюдалось достоверное и дозозависимое повышение максимальных приростов СрАД в ответ на введение дополнительного объема. Больший эффект оказывали небиволол в дозе 0,1 мг/кг и амлодипин в дозе 4 мг/кг.

Введение натрия нитропруссида вызывало меньшую гипотензивную реакцию на 30-е сутки ИМ по сравнению с интактными животными. Так, амплитуда снижения СрАД в данной группе составила 24,9±3,0%, а у интактных животных - 37,5±2,1%. Применение небиволола (0,1 и 1 мг/кг) улучшало данный показатель до 32,4±2,8% и 37,2±2,1% соответственно, а на фоне применения амлодипина (1 и 4 мг/кг) - до 33,8±1,9% и 43,8±1,2% соответственно.

Эндотелий зависимая вазодилатация также была повреждена на 30-е сутки постинфарктного периода. Так, % амплитуды падения СрАД в ответ на введение ацетилхолина при ИМ30 составил 32,9±2,3%, а у интактных животных

— 50,6±2,5%. Применение препаратов в существенной степени способствовало улучшению функционирования эндотелия, что проявлялось в повышении гипотензивного эффекта ацетилхолина. При терапии небивололом (0,1 и 1 мг/кг) данный показатель составлял 46,4±2,9% и 52,4±2,0%, а на фоне применения амлодипина (1 и 4 мг/кг) 40,6±2,5% и 51,5±3,5% соответственно.

Исследования состояния барорецепторной регуляции АД под действием препаратов в постинфарктный период показали, что на фоне ИМзо барорефлекторные индексы для брадикардитического и тахикардитического ответов составляли - 1,91±0,3 и 2,9±0,6 уд/мин/мм.рт.ст (87% и 83% от уровня интактных животных). При терапии небивололом в дозе 0,1 мг/кг индексы составили 2,3±0,2 (102%) и 2,8±0,4 (79%) уд/мин/мм.рт.ст; в дозе 1 мг/кг-2,0±0,3 (98%) и 2,6±0,3 (75%) уд/мин/мм.рт.ст соответственно. На фоне амлодипина (1 мг/кг) брадикардитический и тахикардитический индексы составили 2,2±0,1 (97%) и 3,0±0,3 (86%) уд/мин/мм.рт.ст.; амлодипина (4 мг/кг)

- 2,2±0,3 (97%) и 3,1±0,4 (90%) уд/мин/мм.рт.ст соответственно.

О выраженности кардиопротективных эффектов небиволола и амлодипина можно также судить по степени снижения ЛЖД к 25-й секунде относительно его величины на 5-й секунде (рис. 12). Так, на фоне ИМзо без лечения отмечалось выраженное снижение сократительной способности миокарда к 25-й секунде пережатия аорты. Все это может свидетельствовать о высокой кардиопротективной активности небиволола и амлодипина, по-видимому, снижающих степень патологических изменений в миокарде развивающихся на 30-е сутки после коронароокклюзионного инфаркта миокарда.

Предотвращение резкого падения -dp/dt в период проведения проб демонстрирует положительное влияние небиволола и амлодипина на процессы расслабления в миокарде, которые могут свидетельствовать о предотвращении развития диастолической дисфункции под действием препаратов на 30-е сутки постинфарктного периода.

100 ж 95 90 85

97.1*0.5* 93.7±0.7*

88.2*1,5*

80 75 70 65

77.6*2.5*

86,5*2.0*

60

55

51

" 53.5*2.8

Рис. 12 ЛЖД у крыс на 25-й сек. пережатия аорты в % относительно значения на 5-й сек. при применении небиволола и амлодипина на фоне

ИМ30

—■— Интактные

--Х-- ИМЗО+небиволол (0,1мг/кг)

- ж---ИМЗО+амлодипин (1 мг/кг)

-«—ИМЗО

--*— ИМЗО+небиволол (1мг/кг) - А- - ИМЗО+амлодипин (4 мг/кг)

*

ВЫВОДЫ

1. Небиволол (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипин (0,5 и 2 мг/кг) оказывают ардиопротективное действие при состоянии хронического дефицита оксида юта на фоне приема Ь-ЫАМЕ, которое проявляется в повышении способности иокарда выдерживать максимальные нагрузки сопротивлением, редотвращении развития диастолической дисфункции и гипертрофии ардиомиоцитов.

2. Небиволол и амлодипин в равной степени способствуют улучшению ункционирования эндотелия при Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии, что одтверждается нормализацией показателей гемодинамики в ответ на введение рессорных и вазодилатирующих агентов, а также снижении выраженности орфологических изменений сосудов сердца, почек и головного мозга.

3. На фоне Ь-ЫАМЕ индуцированной и вазоренальной гипертензий небиволол сравнении с амлодипином оказывает более выраженное влияние на

эсстановление нарушенной барорефлекторной регуляции артериального авления.

При вазоренальной гипертензии небиволол и амлодипин обладают ардиопротективным эффектом, улучшают эндотелий опосредованную реакцию а ацетилхолин, предотвращают развитие гипертрофии миокарда. 5. На фоне ишемических повреждений миокарда на 3-й и 30-е сутки после эронароокклюзии небиволол и амлодипин оказывают модулирующее влияние а функционирование эндотелия, повышают активность барорецепторов, казывают кардиопротективное действие.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Черных,Е.Г. Исследование влияния небиволола на системную гемодинамику в условиях экспериментальной вазоренальной гипертензии у ненаркотизированных крыс / Е.Г. Черных, Е.Б. Артюшкова, М.П. Гладченко // "Биоантиоксидант": Тез. докл. VI Международной конференции.- М.,-2002.-С.122.

2. Кардиопротективные эффекты небиволола на модели Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии / Е.Б.Артюшкова, М.В. Покровский, Е.Г. Черных и др. // Человек и лекарство: Тез. докл. X Российск. национ. конгр.-М, 2003.- С. 691.

3. Исследование влияния амлодипина на системную гемодинамику в условиях Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии / Е.Б. Артюшкова, Е.Г. Черных, М.П. Гладченко и др. // Фундаментальные проблемы фармакологии: Тез. докл. 2-го съезда Российского научного общества фармакологов. - М., 2003. -С. 42.

4. К вопросу об эндотелиальной дисфункции при разных моделях повреждения миокарда / Е.Г. Черных, Е.Б. Артюшкова, В.К. Прусаченко, А.П. Чурсин // Передовые технологии образования и науки: Сб. науч. тр. -Курск, 2003. - С.95.

5. Черных, Е.Г. О барорецепторной регуляции кровообращения на фоне терапии небивололом при остром ишемическом повреждении миокарда / Е.Г. Черных // Молодые ученые медицины: Тез. докл. Всеросс. конф. дипломир. специал. - Самара, 2003. - С.54.

6. Использование амлодипина для достижения кардиопротекторных эффектов при Ь-ЫАМЕ индуцированной гипертензии/ Е.Б.Артюшкова, М.В.Покровский, Е.Г.Черных., В.В.Гуреев// Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины: Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 50-летию ЧГМА.- Чита, 1-2 октября 2003 г.: Мат. конф.- Чита: ИИЦ ЧГМА, 2003,- С. 5-6.

7. Черных, Е.Г. Оценка кардиопротективного действия небиволола и амлодипина при остром ишемическом повреждении миокарда у крыс / Е.Г.Черных, Е.Б.Артюшкова, М.В.Покровский // Человек и его здоровье: Научно-популярный вестник. Курск, 2003. - № 3- С. 50-54.

8. Теоретические предпосылки применения небиволола и амлодипина в эндотелиотропной фармакотерапии: метод, рекомендации для студентов/ Е.Г.Черных, Е.Б.Артюшкова, М.В.Покровский и соавт.- Курск, 2003. - 24 с.

9. Морфофункциональная характеристика МО-дефицитных состояний в эксперименте: метод, рекомендации для студентов/ Е.Г.Черных, Е.Б.Артюшкова, М.В.Покровский и соавт.- Курск, 2003. - 28 с.

Актуальность проблемы

Несмотря на многообразие научных исследований, остается много вопросов о патогенетических механизмах развития и прогрессирования сердечно-сосудистых заболеваний. Поэтому поиск новых и совершенствование традиционных способов является одним из приоритетных направлений современной кардиологии.

В настоящее время среди всех контуров регуляции сосудистого тонуса именно эндотелий является объектом пристального изучения. Эндотелий регулирует вазомоторику, влияет на сосудистую проницаемость и контролирует рост гладкомышечных клеток сосудов. Главным проявлением вазодилатирущей функции эндотелия служит образование эндогенного фактора релаксации - оксида азота (NO). Недостаточная продукция или ускоренный распад NO приводят к развитию тяжелых сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением функции эндотелия, патологическим повышением сосудистого тонуса, активацией процессов ремоделирования сосудов. К их числу относятся артериальная гипертензия (АГ), стенокардия, атеросклероз. Лечение таких патологических состояний требует компенсации дефицита эндотелиального NO.

Таким образом, эндотелий является новой терапевтической "мишенью" и роль современной терапии должна заключаться в восстановлении вазодилатирующей функции эндотелия и предупреждении развития процессов ремоделирования сосудов и миокарда. Основной проблемой является поиск такой коррекции продукции NO, которая сама по себе не будет подавлять нормальной работы эндотелиальной NO-синтазы. Наиболее перспективным является создание среди основных фармакологических групп препаратов, обладающих дополнительными NO-опосредованными свойствами.

Результатами многоцентровых исследований показана эффективность в терапии артериальной гипертензии и ишемическй болезни сердца (ИБС) высокоселективного бета-адреноблокатора небиволола и антагониста кальция дигидропиридинового ряда амлодипина. Таким образом, представляется актуальным проведение комплексного исследования вклада N0-опосредованных компонентов в реализации системных эффектов бета-адреноблокатора небиволола и антагониста кальция амлодипина.

Цель работы: изучение кардиопротективного действия небиволола1 и амлодипина , их влияния на функционирование эндотелия и барорецепторную регуляцию кровообращения в условиях хронического дефицита оксида азота, вазоренальной гипертензии, а также ишемических повреждениях миокарда в эксперименте.

Задачи исследования

Исследовать при экспериментальной патологии сердечно-сосудистой системы:

1. кардиопротективное действие небиволола и амлодипина у животных с L-NAME индуцированной гипертензией;

2. в сравнительном аспекте влияние небиволола и амлодипина на функционирование эндотелия, барорецепторную чувствительность, органопротективное действие препаратов при морфологическом исследовании миокарда и других внутренних органов в условии L-NAME индуцированной гипертензии;

3. состояние эндотелий опосредованных реакций, кардиопротективное действие, барорецепторную чувствительность и морфологические изменения при использовании небиволола и амлодипина на фоне вазоренальной гипертензии;

Небиволол - таблетки "Небилет" 5 мг (Берлин-Хеми, Германия)

2Амлодипин - таблетки "Амлодипин" 10 мг (ОАО "ICN Лексредства", Россия)

4. характер влияния небиволола и амлодипина на функционирование эндотелия, показатели сократимости левого желудочка и барорецепторную чувствительность на 3-й и 30-е сутки после моделирования коронароокклюзионного инфаркта миокарда.

Научная новизна исследования

В работе впервые проведено углубленное изучение кардиопротективного действия небиволола и амлодипина при NO-дефицитной гипертензии, их влияние на барорецепторную регуляцию кровообращения при вазоренальной гипертензии и коронароокклюзионном инфаркте миокарда:

- обнаружено кардиопротективное действие небиволола и амлодипина при L-NAME индуцированной гипертензии;

- в сравнительном аспекте исследовано действие небиволола и амлодипина на эндотелий опосредованную вазорелаксацию при L-NAME индуцированной и вазоренальной гипертензиях, а также на 3-й и 30-е сутки после моделирования коронароокклюзионного инфаркта миокарда;

- изучено влияние небиволола и амлодипина на барорефлекторную чувствительность в условиях L-NAME индуцированной, вазоренальной гипертензий и на 3-й и 30-е сутки после коронароокклюзионного инфаркта миокарда с учетом системной организации нейрогуморальных механизмов регуляции сердечно-сосудистой системы;

- проведена интегральная оценка состояния функциональной активности эндотелия по данным функциональных проб и индексов чувствительности барорефлексов у животных находящихся в свободном поведении, с результатами исследования сократимости миокарда у наркотизированных животных, а также данными морфологического исследования внутренних органов при использовании небиволола и амлодипина на фоне L-NAME индуцированной гипертензии и других повреждениях миокарда.

Практическая значимость работы

Полученные новые данные позволяют более четко представить механизмы влияния бета-адреноблокатора небиволола и антагониста кальция амлодипина на показатели системной гемодинамики при патологии сердечнососудистой системы, а также дают возможность дифференцированного подхода к назначению изучаемых препаратов при различных формах артериальной гипертензии в зависимости от ведущих механизмов нарушения регуляции артериального давления.

Внедрение результатов научных исследований

В ходе выполнения работы проведено доклиническое испытание таблеток "Амлодипин", производства ОАО "Ай Си Эн Лексредства" в сравнении с таблетками "Норваск", производства "Пфайзер" (Германия). Результаты исследований представлены в фармакологический комитет Российской Федерации. Материалы диссертации использованы при составлении учебно-методических рекомендаций: "Теоретические предпосылки применения небиволола и амлодипина в эндотелиотропной фармакотерапии" и "Морфофункциональная характеристика NO-дефицитных состояний в эксперименте", которые включены в лекционный курс и лабораторные занятия на кафедре фармакологии с курсом ФТЛ ФПО.

Связь с планом НИР учреждения, где выполнялась диссертация

Тема включена в договор с МЗ РФ по отраслевой научно-исследовательской программе № 08 "Изучение патологических состояний сердечно-сосудистой системы. Разработка современных медицинких технологий профилактики, диагностики и лечения болезней системы кровообращения" на 2001-2005 гг. Номер государственной регистрации № 01.200.202707.

Положения, выносимые на защиту

1. Применение бета-адреноблокатора небиволола и антагониста кальция амлодипина позволяет в значительной степени предотвратить развитие эндотелиальной дисфункции и нормализовать барорефлекторную регуляцию артериального давления на фоне приема ингибитора синтеза оксида азота (L-NAME).

2. При использовании небиволола и амлодипина у животных с L-NAME индуцированной гипертензией значительно улучшаются функциональные показатели сократимости и расслабления миокарда, а также снижается степень выраженности морфологических изменений внутренних органов.

3. Небиволол и амлодипин существенно улучшают эндотелий зависимую вазодилатацию, повышают барорецепторную чувствительность, препятствуют развитию гипертрофии кардиомиоцитов и сердечной недостаточности при моделировании вазоренальной гипертензии.

4. Оба препарата предотвращают развитие эндотелиальной и диастолической дисфункций, повышают барорефлекторную чувствительность, улучшают функциональные показатели сократимости на 3-й и 30-е сутки после моделирования коронароокклюзионного инфаркта миокарда.

Апробация работы

Проведена на межкафедральном заседании кафедр фармакологического и терапевтического профиля Курского государственного медицинского университета. Материалы и положения диссертации доложены и обсуждены на X Национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2003), 2-ом Съезде Российского Научного Общества фармакологов (Москва, 2003), Всероссийской научно-практической конференции по актуальным вопросам клинической и экспериментальной медицины (Чита, 2003), VI Международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 2002), Всероссийской конференции дипломированных специалистов, работающих над кандидатскими диссертациями в области медико-биологических и химико-фармацевтических наук "Молодые ученые медицине" (Самара, 2003), а также представлены на III Конференцию молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины" (Москва, 2004).

Публикации

По результатам работы опубликовано 9 научных работ.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), главы 2, содержащей описание материалов и методов исследования, глав 3, 4 и 5 с изложением собственных экспериментальных данных, обсуждения полученных результатов (глава 6), выводов, списка литературы - 181 источника (24 работы отечественных и 157 работы иностранных авторов) и приложения. Таблиц - 27, рисунков — 32.

ВЫВОДЫ

1. Небиволол (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипин (0,5 и 2 мг/кг) оказывают кардиопротективное действие при состоянии хронического дефицита оксида азота на фоне приема L-NAME, что проявляется в повышении способности миокарда выдерживать максимальные нагрузки сопротивлением, предотвращении развития диастолической дисфункции и процессов гипертрофии кардиомиоцитов.

2. Небиволол (0,5 и 2 мг/кг) и амлодипин (0,5 и 2 мг/кг) способствуют улучшению функционирования эндотелия при L-NAME индуцированной гипертензии, что подтверждается нормализацией показателей гемодинамики в ответ на введение прессорных и вазодилатирующих агентов, а также снижении выраженности морфологических изменений сосудов сердца, почек и головного мозга.

3. На фоне L-NAME индуцированной и вазоренальной гипертензий небиволол в сравнении с амлодипином оказывает более выраженное влияние на восстановление нарушенной барорефлекторной регуляции артериального давления.

4. Небиволол и амлодипин реализуют кардиопротективное действие, улучшают эндотелий опосредованную реакцию на ацетилхолин, предотвращают развитие гипертрофии миокарда при вазоренальной гипертензии.

5. На фоне ишемических повреждений миокарда небиволол и амлодипин оказывают модулирующее влияние на функционирование эндотелия, улучшают барорефлекторную регуляцию кровообращения, оказывают кардиопротективное действие на 3-й и 30-е сутки после коронароокклюзии.