Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты

На правах рукописи

БАЛАШОВА Галина Васильевна

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО ФЕНИЛФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

14.00.25 -фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003460712

Саранск 2009

003460712

Работа выполнена на кафедре общей хирургии и анестезиологии и кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева»

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Чистяков Сергей Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

профессор Балыкова Лариса Александровна

кандидат медицинских наук Шумкин Валерий Николаевич

Ведущая организация: Всероссийский научный центр безопасности биологически активных веществ Ст. Купавна (Московская обл.)

Защита состоится «_ »__2009 года в_на заседании

диссертационного совета Д 212.117.08 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430000 г. Саранск, ул. Ульянова, 26 а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430000 г. Саранск, ул. Большевистская, д.68).

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте ГОУВПО "Мордовский государственный университет" WWW.mrsu.ru

E-mail :dscvet@mrsu.ru

Автореферат разослан «_»_2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук доцент

А.Г. Голубев

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. В современных условиях человек находится в постоянном контакте со стрессовыми факторами различной природы, что сопровождается значительным ростом патологии, в этиопатогснезе которой основная роль принадлежит стрессу (Бобровицкий И.П., Ушаков И.Б., 1998; Гурович И.Я. и соавт., 2000; Гурович И.Я., 2001; Акарачкова Е.С., 2006; Mausch К., 1994).

Негативное действие стресса проявляется на функциях практических всех органов и систем организма. В кардиологии стресс - этиопатогенетиче-ский фактор гипертонической болезни и ишемической болезни сердца, в психиатрии - триггерный и поддерживающий фактор ряда эндогенных и экзогенных психозов, а также невротических расстройств, в хирургии стресс влияет на течение анестезии, на функции организма в периоперационном периоде на фоне компенсаторного напряжения симпатоадреналовых механизмов ауторегуляции. Основное негативное действие стресса реализуется через нарушения микроцикуляции и тканевой перфузии, приводящей к гипоксии (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988,1989; Гельфанд Б.Р. и соавт., 2007).

Причина любого расстройства стрессорного генеза носит сложный многозвеньевый характер и напряжение ЦНС находит своё выражение на различных уровнях, изменения которых свидетельствуют об активации, мобилизации организма, переходе его на иной уровень гомеостатической регуляции (Бадыштов Б.А., 1998; Александровский Ю.А., 1999; Маслова М.Н. 2005). Это ярко проявляется как в изменении поведенческих реакций, так и в структурных изменениях многих областей головного мозга (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007; Me Ewen B.S.et al., 2000; Panerai A.E.et al., 2000).

Одной из мишеней реализации стресса в организме являются верхний и средний отделы желудочно-кишечного тракта, реагирующие возникновением острых эрозивно-язвенных поражений. Указанная патология является одной из важнейших проблем современной гастроэнтерологии и хирургии (Верткин АЛ. и соавт., 2005; Amnon S., 2007). Серьезные нарушения вызывает стресс и в иммунной системе (Селье Г., 1982; Shader R.I.,1988; Jasnow A.M. et al., 2001). Кроме того, показана тесная взаимосвязь клеточных факторов неспецифического иммунитета с процессами язвообразования в ЖКТ (Шаляпина В.Г. и соавт., 2002). Поэтому изучение закономерностей реализации стресс-индуцированной патологии и действия веществ со стресс-протекторными свойствами на организм является актуальной задачей современной науки и представляет серьезный интерес для практической медицины.

В настоящее время в лечении стресс-индуцированной патологии разрабатываются и успешно используются разнообразные подходы. Одним из таких является использование гипербарической оксигенации (Сапов И.А. и соавт., 1991; Яковлев В.А. и соавт., 1993; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2006; 2007). В эксперименте была показана ее высокая эффективность в лечении стресс-опосредованных нарушений метаболизма, параметров иммунитета, органных нарушений (Кирюхина C.B. и соавт., 2000; Глебочкина В.И., 2003;

Заказ № 5464

Подсеваткин В.Г., 2006; 2007). В клинике показана эффективность метода в лечении невротических расстройств и реактивных психозов (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2008). К сожалению, широкое использование метода ГБО невозможно из-за отсутствия дорогостоящего оборудования в лечебных учреждениях.

Другим перспективным методом фармакотерапии стресс-опосредованных патологических состояний является использование синтетических антиоксидантов, в том числе, - из группы фосфорорганических неан-тихолинэстеразных средств. Ранее в исследованиях Хафизьяновой Р.Х. (1991), Цыбулькиной В.Н. (1997), Зорькина В.И. (2003), Кульковой Г.П. (2006) был продемонстрирован антиульцерогенный эффект димефосфона.

Перспективными в плане исследования стресспротекторных свойств являются также производные фенилфосфорилуксусной кислоты. Кардиопро-текторные свойства соединения этой химической группы (лабораторный шифр 3635) при хроническом стрессе были продемонстрированы Кульковой Н.П. (2007). Другие производные фенилфосфорилуксусной кислоты (лабораторные шифры 3587 и 3567) по данным ряда авторов (Тарасова Р.И. и соавт., 2002; Курмышева Т.В. и соавт., 2004; Балашов В.П. и соавт., 2007а; б) также проявляют антистрессорные свойства.

Учитывая современные взгляды на этиопатогенез стрссс-индуцированной патологии и комплекс фармакодипамических свойств соединения 3635, можно предположить, что это вещество может быть перспективным источником для создания эффективного средства терапии стресс-индуцированных состояний, что и определило цель и задачи исследования.

Целью исследования явилось изучение протекторной активности триф-торуксуснокислой соли 4 — диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорил-ацетилгидразида (соединение 3635) в условиях хронического иммобилизаци-онного стресса.

В соответствии с поставленной целью в условиях хронического стресса решались задачи исследования влияния производного фенилфосфорилуксусной кислоты:

1. на летальность мышей;

2. на поведенческие реакции животных;

3. на некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета;

4. на состояние слизистой оболочки желудка и 12-ти перстной кишки.

Работа выполнена по плану НИР Мордовского государственного университета в рамках научной проблемы «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии». Номер государственной регистрации 01.2.007 04781.

Научная новизна. На модели иммобилизационного стресса показан комплекс протекторных эффектов производного фенилфосфорилуксусной кислоты. Стресспротекторные свойства соединения выявлены на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации живой материи. Соединение 3635 корригирует ряд показателей неспецифической им-мунорезистентности организма, оказывает выраженный гастро- и дуодено-

протекторный эффекты. Выявлена способность вещества 3635 регулировать поведенческие реакции животных. Показана способность изучаемого соединения повышать жизнеспособность животных.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для продолжения работ по созданию лекарственных средств на основе производных фенилфосфорилук-сусной кислоты для лечения и профилактики заболеваний, в этиологии и патогенезе которых важная роль принадлежит стрессу. Материалы диссертации используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедр фармакологии, цитологии, гистологии и эмбриологии и общей хирургии и анестезиологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Производное фенилфосфорилуксусной кислоты уменьшает летальность белых мышей при иммобилизационном стрессе.

2. Соединение 3635 корригирует стресс-опосредованные нарушения поведенческих реакций мышей.

3. Соединение 3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов крови мышей, угнетенную хроническим иммобилизаци-онным стрессом.

4. Введение соединения 3635 уменьшает выраженность эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки при стресс-индуцированных гастродуоденопатиях у мышей.

Основные сведения об апробации работы.

Материалы, представленные в диссертации, докладывались и обсуждались на XXXIII Юбилейной сессии, посвященной 40-летию ЦНИИ гастроэнтерологии (Москва, 2007); Объединенном съезде Научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2007); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); II Беломорском симпозиуме (Архангельск, 2007); Всероссийском конгрессе анестезиологов и реаниматологов (Москва, 2007); III съезде анестезиологов и реаниматологов Приволжского федерального округа (Н. Новгород, 2007); научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д.А. Жданова (Москва, 2008); Всероссийской конференции «Боевой стресс. Медико-психологическая реабилитация лиц опасных профессий» (Москва, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 3 работы в изданиях рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного набора, документирована 16 таблицами и иллюстрирована 17 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), заключения и библиографического указателя, включающего 247 источников, в том числе 105 зарубежных.

Заказ № 5464

Материалы и методы исследования

Предметом нашего исследования явилось фосфорорганическое соединение: трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэток-сифосфорилацетилгидразида, синтезированное на кафедре органической химии Казанского государственного технологического университета под руководством ведущего научного сотрудника к.х.н. Р.И. Тарасовой. Психотропная активность некоторых представителей этого класса была изучена на кафедре фармакологии Казанского государственного технологического университета (Тарасова Р.И., 1998; Семина И.И. и соавт., 1996, 1999, 2000, 2002; Файзуллин Д.А. и соавт., 2001). Структура исследуемого соединения представлена на рисунке 1.

Рис. 1. Структурная формула трифторуксуснокислой соли 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС 3635).

Соединение 3635 - белый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворим в воде, метаноле и этаноле, ацетоне, хлороформе, бензоле. В работе использовали водные растворы вещества. Во всех опытах соединение вводили в дозе 4,3 мг/кг, что составляет 10"5 моль/кг.

Эксперименты выполнены на 469 лабораторных белых мышах обоего пола весом 18-23 г. Иммобилизационный стресс у животных моделировали методами: 1) Коломейцева И.А., 1988; Hecht et. al., 1971 и 2) Desiderato О., et al., 1974. Различные методы иммобилизации выбраны с учетом литературных данных об их адекватности для изучения каждой группы параметров гомео-стаза. В промежутках между иммобилизацией мыши находились в стандартных условиях вивария. Все подопытные животные были разбиты на группы, данные о которых приведены в таблице 1.

Двигательную активность белых мышей оценивали в тесте «открытое поле» (Калуев A.B., 1998), условнорефлекторную деятельность изучали в тесте «Т-образный лабиринт» при положительном питьевом подкреплении (Воронина Т.А., Островская Р.У., 1998).

Для оценки иммунного статуса определяли клеточные факторы неспецифической резистентности: активность фагоцитоза нейтрофилов (АФН) (Нестерова И.В. с соавт., 1997; Сидельникова В.И., Лифшиц В.М., 1997); тест с нитросиним тетразолием (HCT - тест) и индекс активации нейтрофилов (ИАН). Кровь забирали путем декапитации мышей. Подсчитывали общее число лейкоцитов крови и их популяций в лейкоформуле (Меньшиков В.В. с соавт., 1987).

Макроморфометрическую оценку слизистой ЖКТ проводили с помощью стереоскопического микроскопа МБС-9 (Автандилов Г.Г., 1990). Для характеристики макроскопической картины слизистой желудка и 12-

о

перстной кишки и расчета показателей язвообразования использовали метод Виноградова В.А. (1983).

Таблица 1.

Объем и структура исследования

№ п/п Условия эксперимента Фармакологическое средство Кол-во мышей Показатель

Без иммобилизации - 10

1 Иммобилизация 1 месяц по 6 ч ежедневно 6 раз в неделю №С1 0,9 % Пирацетам соединение 3635 40 10 10 Летальность

Без иммобилизации - 17 Поведенческие реакции

2 Иммобилизация 5 суток по 10 ч №С1 0,9 % пирацетам соединение 3635 17 17 17

Без иммобилизации - 8 Морфология

3 Иммобилизация 3 суток по 3 ч №С1 0,9 % Фамотидин соединение 3635 8 8 8 слизистой органов ЖКТ

Без иммобилизации - 62

4 Иммобилизация 5 суток по 5 ч №С1 0,9 % диазепам соединение 3635 36 29 36 Клеточный иммунитет

Итого 469

Тяжесть поражения (ТП) характеризовали средним баллом. Частоту поражения (ЧП) вычисляли как отношение числа мышей с язвами к их общему числу в группе. Множественные поражения (МП) рассчитывали как отношение числа язв у всех мышей к их числу в группе. Язвенный индекс (ЯИ), вычисляли по формуле ТП+ЧП+МП. Оценку противоязвенной активности препаратов проводили по методу Шаталова В.Н. и Полонского В.М. (1981). Индекс язвообразования (ИЯ) вычисляли по формуле:

ИЯ = СБ +КМЯ/(КМ*2) - КЯ/КМ, где: СБ - средний балл; КМЯ -количество мышей с язвами; КМ - количество мышей в группе; КЯ - общее количество язв в группе.

Состояние слизистой желудка и 12-перстной кишки оценивали, также методом световой микроскопии после окраски гематоксилином и эозином. Приготовленные микропрепараты изучали под микроскопом Jenaval (Karl Zeiss, Jena). Микроморфологическую картину регистрировали цифровой видеокамерой САМ V-200 (Австрия), с последующей обработкой изображения в Adobe Photoshop 8,0.

Статистическую обработку результатов исследования проводили методами "х2" и ^критерия Стыодеита при 5% уровне значимости (Беленький М.Л., 1963; ЗаксЛ, 1976).

Результаты исследований и их обсуждение

Для решения поставленной цели была проведена оценка антистрессор-ной эффективности химического соединения 3635 на различных уровнях организации жизни: организменпом, органном, тканевом и клеточном. В опытах использовали две модели хронического иммобилизационного стресса у мышей, а исследуемое соединение вводили в дозе 4,3 мг/кг.

Действие вещества на организменпом уровне оценивали по его влиянию на летальность мышей (рис. 1) и на поведенческие реакции в тестах «открытое поле» (рис. 2) и «Т-образный лабиринт» (рис. 3).

В контрольной группе стресс вызывал летальность у 30% животных, что согласуется сданными других авторов (Балашов В.П. и соавт., 2002).

В тесте «открытое поле» нарушения поведения мышей проявлялись снижением горизонтальной и вертикальной двигательной активности до 17% и 56% от исходного. Отмечали значительный рост уровня тревожности животных, (по увеличениию груминга в 15 и 18 раз на 1-е и 5-е сутки опыта соответственно). В последний день наблюдения отмечалось угнетение и норкового показателя.

*ХС-3635 *Пирацетам •ЦитохромС Димефосфон Мексидол Пропранолол Стресс Интактные

Рис.1. Влияние соединения 3635 и препаратов сравнения на летальность мышей в условиях иммобилизационного стресса

Примечание * - р<0,05 относительно соответствующих показателей в группе стресс-контроля; цитохром с, димефосфон, мексидол и пропранолол приведены для сравнения по материалам публикации Балашов В.П. и соавт., 2002.

Тестирование в «Т-образном лабиринте» показало, что на фоне стресса у животных исчезал выработанный условный рефлекс и мыши совершали большое количество ошибок. Это еще раз подтверждает, что стресс вызывает нарушения процессов в ЦНС, отвечающих за формирование памяти.

Наиболее заметным действием пирацетама явилось предупреждение летальности мышей при хроническом стрессе (рис. 1).

100

80

60

40 20

А 0

горизонтальная вертикальная норковый рефлакс

активность активность

100 80 60

40

20

0

Б

Рис. 2. Влияние ХС - 3635 и пирацетама на поведение мышей в «открытом поле» при 10 часовом стрессе. Данные отнормированы в % по отношению к соответствующим показателям у интактных животных. А - первые сутки, Б - пятые сутки наблюдения.

..........................................................................................................................................................................................................................1

■ * я 1 * I — --1

горизонтальная а ктивность

вертикальная активность

норковый рефлекс

1Стресс

ИХС 3635

■ П ирацетам

сек зо

25 20 15 10 5 0

исход тренировка стресс ХС-3635 пирацетам

абс. 2,5 число

2

1,5

0,5 О

Рис. 3. Влияние ХС - 3635 и пирацетама на поведение мышей в «Т-образном лабиринте».

Примечания: а - отличия от исходных значений ("исход") достоверны при р<0,05; * - отличия от значений при контрольном стрессировании мышей ("стресс") достоверны при р<0,05.

Оценивая влияние пирацетама на поведение мышей в "открытом поле", следует отметить его благоприятное действие на горизонтальную активность в 1-е и 5-е сутки опыта, а также положительное влияние на исследовательскую активность животных в заключительный день эксперимента.

Груминг на фоне терапии пирацетамом не подвергался статистически значимым изменениям. Причина этому, на наш взгляд, состоит: во-первых, в том, что пирацетам не обладает анксиолитическими свойствами, во-вторых, в том, что модель стресса, использованная в работе, нарушает условие информативности теста (в тесных пеналах мышам не имеют возможность поддерживать должное гигиеническое состояние).

В опытах в Т-образном лабиринте, использование пирацетама позволило сохранить животным выработанный условный рефлекс (рис. 3). В отличие от контрольных экспериментов, время рефлекса статистически отличалось как от показателя на 1-й день тренировки (исход), так и от соответствующего показателя в контроле (стресс). Животные не совершали ошибок после 5 суток действия стресса, что подтверждает его свойства ноотропного препарата, поддерживающего мнестические свойства ЦНС.

Использование химического соединения 3635 существенно повышало жизнеспособность мышей при хронической иммобилизации (рис. 1) и сни-

ВРЕМЯ РЕФЛЕКСА

/

/

*

а / А *

/ •

/ / г Р

ЧИСЛО ОШИБОК

жало степень стресс-опосредованного угнетения поведения мышей в тесте «открытое поле» (рис. 2). Последний эффект в наибольшей степени проявлялся в 1-е сутки опыта, поскольку горизонтальная активность на фоне терапии ХС-3635 снижалась лишь до 56% от исходной (в контроле до 24%). На 5-е сутки наблюдения динамика данного показателя сохраняла лишь уровень тенденции. Другим благоприятным эффектом изучаемого соединения являлось поддержание исследовательской активности животных на 5-е сутки опыта (подобно эффекту пирацетама). Статистически значимого влияния на груминг соединение 3635 не оказывало. Причины этого, видимо аналогичны причинам, рассмотренным при описании эффекта пирацетама.

ХС - 3635 оказывало заметный стресс-протекторный эффект и при тестировании животных в Т-образном лабиринте. Однако, исследуемое соединение, в отличие от пирацетама, способствовало только сохранению времени рефлекса. Следует отметить, что время рефлекса после 5 суток стресса на фоне ХС - 3635 было даже несколько меньшим, чем у тех же животных на заключительном этапе тренировки. Аналогичным свойством обладает и пир-ацетам. Учитывая однотипность эффектов пирацетама и ХС - 3635, можно предположить наличие у ХС - 3635 свойств, присущих ноотропным препаратам.

Таким образом, опираясь на полученные результаты можно предположить, что ХС - 3635 оказывает ряд эффектов, позволяющих сделать заключение о наличии у него стресс-протекторных свойств.

Для уточнения некоторых аспектов стресс-протекторного действия ХС 3635 мы оценивали его способность препятствовать стресс-опосредованному изъязвлению слизистой оболочки органов желудочно-кишечного тракта.

Учитывая вышеизложенное, нами предпринята попытка оценить активность ХС - 3635 в профилактике стрессовых повреждений слизистой желудка и 12-перстной кишки, т.е. его антистрессовое действие на органном уровне организации живого. В качестве препарата сравнения выбран фамо-тидин - один из наиболее эффективных препаратов, понижающих продукцию соляной кислоты и активность пепсина (Белоусова Е.А., Логинов А.Ф., 2003; Яковенко A.B. и соавт., 2006). Кроме того, фамотидин является активным ан-тиоксидантом (Хомерики С.Г., Хомерики Н.М., 2002) и имеет инъекционную форму, что позволило соблюсти одинаковый способ введения исследуемых веществ (внутрибрюшинно).

Результаты макроморфологического исследования показали (табл. 2.), что стресс вызывал повреждение слизистой оболочки желудка у всех животных: в виде гиперемии, точечных кровоизлияний, эрозивных дефектов слизистой, которые нередко имели тотальный характер. У одной мыши наблюдали развитие множественного язвенного поражения.

При изучении гистологических микропрепаратов выявлено, что в области эрозий наблюдалось повреждение слизистой желудка, что проявлялось разрушением клеток призматического секреторного эпителия. Строение желез в собственной пластинке слизистой было близко к норме, однако, имела

место гиперплазия и некоторая гипертрофия париетальных клеток. Отмеченная картина гипертрофии, на наш взгляд, является следствием усиленного функционирования париетальных клеток желудка. В большинстве микропрепаратов наблюдали перикапиллярный отек слизистой и ее инфильтрацию лейкоцитами различной степени выраженности. Отек собственной пластинки слизистой, возможно, происходит вследствие воспалительной реакции.

Таблица 2.

Влияние фамотидина и ХС - 3635 на развитие стресс-опосредованных _гастропатий у мышей__

Исследуемые показатели Стресс- Фамотидин, ХС - 3635,

контроль 5,0 мг/кг 4,3 мг/кг

(п=8) (п=8) (п=8)

Тяжесть поражения 1,25±0,25а 0,625±0,18 0*

Частота поражения 0,125 0 0

Множественные поражения 0,625 0 0

Язвенный индекс 2,0 0,625 0

Среднее число язв 0,625±0,625 0 0

Среднее число эрозий 2,625±0,532а 1,13±0,40* 0*

Летальность 2 (25%) 0 (0%) 0 (0%)

Примечание: а-отличия от соответствующих показателей у интактных животных достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей у животных группы стресс-контроля достоверны при р<0,05.

Анализ полученных нами результатов свидетельствует, что фамотидин оказывал заметное положительное действие в условиях стресс-опосредованной гастропатии. В частности, тяжесть поражения была снижена вдвое, язвенный индекс был также существенно меньшим, чем в контрольной группе. Значительному снижению подверглись показатели среднего числа эрозий, а язвенные дефекты не обнаружены совсем. Следует подчеркнуть, что в группе животных, получавших фамотидин, летальность составила 0%. Показатели "множественные поражения" и "частота поражения" также были равны нулю.

Микроморфологические изменения слизистой желудка соответствовали картине макроморфометрии. Слизистая оболочка животных, получавших фамотидин, выглядела менее поврежденной, чем у мышей контрольной группы. Клетки покровного эпителия на значительном протяжении не были повреждены. Отек был незначительным, однако часть капилляров собственной пластинки слизистой имела расширенный просвет. Инфильтрация лейкоцитов в слизистой встречалась значительно реже и была менее выражена. Строение желез не отличалось от нормальной картины. Гипертрофия париетальных клеток, имевшая место у животных контрольной группы, практически отсутствовала.

ХС-3635 превосходило по своим протекторным свойствам фамотидин и препятствовало развитию эрозивно-язвенпых поражений желудка (расчетные показатели поражения слизистой желудка были равны 0). Летальность в группе также составила 0%.

При использовании ХС - 3635 микроскопическая картина слизистой желудка была близка к нормальной, а покровный эпителий характеризовался высокой степенью сохранности. Выраженность отека слизистой и лейкоцитарной инфильтрации заметно варьировала от картины близкой к норме до состояния, наблюдаемого при стрессе. Строение желез было близким к норме.

На следующем этапе исследования мы провели анализ влияния стресса и исследуемых препаратов на строение слизистой оболочки тонкого отдела кишечника. Учитывая, что из всех отделов топкой кишки, по данным литературы (Gracham D.Y.,2002; Lewis J.H., 1998), наиболее часто поражается 12-перстная кишка, следующим объектом исследования явился именно данный отдел тонкой кишки.

У мышей группы интактного контроля при макро- и микроскопическом исследовании строение слизистой 12-перстной кишки соответствовало норме. У животных, подвергшихся стрессу, в слизистой оболочке 12-перстной кишки наблюдали повреждения только эрозивного характера (табл. 3.). В связи с этим показатели интенсивности язвообразования были равны 0, а язвенный индекс (1,375) количественно был равен средней величине "тяжести поражения" (1,375±0,25). Следует отметить, что интенсивность эрозивного поражения слизистой 12-перстной кишки была значительно выше аналогичного показателя повреждения в желудке, соответственно 5,875±1,32 против 2,625±0,532.

Таблица 3.

Влияние фамотидина и соединения 3635 на развитие стресс-опосредованных _дуоденопатий у мышей__

Исследуемые показатели Стресс- Фамотидин ХС- 3635

контроль 5,0 мг/кг 4,3 мг/кг

(п=8) (п=8) (п=8)

Тяжесть поражения 1,375±0,25а 0,625±0,18* 0*

Частота поражения 0 0 0

Множественные поражения 0 0 0

Язвенный индекс 1,375 0,625 0

Среднее число язв 0 0 0

Среднее число эрозий 5,875±1,32а 1,0±0,38* 0*

Примечание: а - отличия от соответствующих показателей у интактных животных достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей у животных группы стресс-контроля достоверны при р<0,05.

При микроскопии в области эрозий отмечали множественные повреждения ворсинок, выраженный отек, нарушающий их целостность. Отдельные

ворсинки были существенно редуцированы. Однако клетки покровного эпителия в основном выглядели не поврежденными. В собственной пластинке слизистой на значительных участках отмечены множественные скопления лейкоцитов. Таким образом, слизистая 12-перстной кишки реагировала, в основном, образованием эрозий, особенностью которых являлся выраженный отек.

У мышей, получавших фамотидин, в слизистой 12-перстной кишки значительно снижались степень и размер эрозивных повреждений. Тенденции эрозивно-язвенного процесса в 12-перстной кишке на фоне терапии фа-мотидином в принципе однонаправлены с аналогичными изменениями в слизистой желудка. Показатель тяжести поражения был статистически ниже, чем в контроле (0,625±0,18 против 1,375±0,25), а значения показателей "частота поражения" и "множественные поражения" равны 0. Наиболее значимым эффектом фамотидина было снижение эрозий с 5,875±1,32 до 1,0±0,38 (р<0,05).

По данным микроскопии фамотидин способствовал сохранности покровного эпителия ворсинок, снижал отек собственной пластинки слизистой и степень ее инфильтрации лейкоцитами. Следует отметить, что число лейкоцитов на разных участках слизистой сильно варьировало. Также в поле зрения можно наблюдать ворсинки почти не измененные и с умеренной степенью отека.

На фоне введения ХС- 3635 в слизистой 12-перстной кишки не выявлено ни язв, ни эрозий, а все интегральные показатели были равны "О". Изучение микропрепаратов показало, что участки слизистой по своему строению напоминали картину в группе интактного контроля. Эпителий ворсинок не претерпевал существенных изменений, отдельные ворсинки были умеренно отечны. Отек собственной пластинки слизистой был выражен слабо, инфильтрация лейкоцитами встречалась редко. Собственная и мышечная пластинка слизистой также были без признаков повреждения.

Данная картина подтверждает высокую протекторную активность соединения 3635 при стресс-индуцированных дуоденопатиях. Исследуемое вещество в большей степени, чем фамотидин, уменьшало степень поражения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки в условиях стресс-индуцированной патологии. При этом его эффект в 12-перстной кишке был более значимым.

Резюмируя полученные результаты можно предположить, что соединение 3635, может быть эффективным потенциальным дополнением к современному лекарственному комплексу, применяемому для коррекции гастро-дуоденопатий стрессового генеза. Большую эффективность препарата следует ожидать при эрозивно-язвенных поражениях стенки 12-перстной кишки. Механизм воздействия ХС - 3635 на слизистую желудка, скорее всего, опосредован через антистрессорное влияние, хотя может существовать другой, не изученный механизм его воздействия на слизистую.

Известно, что при стрессе наряду с другими реакциями организма происходят значительные изменения иммунитета (Tan Z., Nagata S., 2002). В

нашей работе мы исследовали изменения со стороны его неспецифичсского фагоцитарного звена. Изменения его параметров мы рассматриваем как реакцию организма на стресс на клеточном уровне организации жизни. Протекторные свойства ХС-3635 в этом разделе работы мы сравнивали с активностью диазепама - препарата, используемого в стандартах лечения постстрес-сорных невротических расстройств.

"Оптимальные" характеристики стресса, вызывающие наибольшие изменения неспецифичсского клеточного иммунитета были выявлены в предварительных экспериментах совместно с к.м.н. Кирюхиной C.B. (табл. 4).

Таблица 4.

Некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета у мышей при иммобилизационном стрессе

№ п/п Исследуемые показатели Без иммобилизации (п=62) Стресс + NaCl контр (п=36) Стресс + ХС - 3635 (п=36) Стресс + диазепам (п=29)

1 Лейкоциты,х 10% 3,75±0,21 3,6±0,25 4,5±0,99 3,7 ± 0,19

2 ПЯ нейтрофилы, % 0,45±0,09 1,2±0,4а 2,3±0,96 0,5б± 0,15

3 СЯ нейтрофилы, % 23,6±1,32 34,9±3,7а 21,6±7,2* 42,2 ±2,1

4 лимфоциты, % 73,1±1,41 58,4±3,7а 70,6±7,8* 52,0 ±2,1

5 моноциты, % 1,82±0,26 4,8±0,7а 4,8±2,1 3,4 ±0,54

6 эозинофилы, % 0,36±0,07 0,7±0,4 1,5±0,7 1,57 ±0,37

7 АФН, % 45,6±2,1 24,3±1,87а 34,1 ±3,3* 32,1 ±2,0

8 НСТ-тест, % 17,5±1,23 10,б±1,11" 5,0±1,9* 19,0 ± 1,4*

9 ИАН, у.е. 0,24±0,02 0,12±0,02а 0,05±0,02* 0,23 ± 0,02*

Примечания: а - достоверность отличия от животных без иммобилизации р <0,05;

* - достоверность отличия от животных при стрессе; ПЯ - палокоядер-ные; СЯ - сегментоядерпые; АФН — активность фагоцитоза нейтрофилов; НСТ - нитросиний тетразолий; ИАН - индекс активации нейтрофилов.

При изучении показателей на 1, 5 и 12 сутки стресса было выявлено, что наиболее выраженная депрессия иммунитета отмечается на 5 сутки. В связи с этим изучение стресс-протекторной эффективности ХС - 3635 проводили именно при 5- суточной иммобилизации.

Как видно из данных таблицы 4, на фоне 5-и суточного стресса наблюдались лимфо- и эозинопения, нейтрофилез в сочетании с угнетением фагоцитарной и метаболической активности нейтрофилов. Полученные результаты соответствуют литературным данным, характеризующим стресс (Селье Г., 1972, 1982; Крыжановский Г.Н. ссоавт., 1997; Вогашс М., 1987).

Микроскопия периферической крови позволила выявить, что морфологическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов хорошо согласуется с

данными, приведенными на рисунке 3. Нейтрофилы интактных мышей активно поглощают частички латекса. Стресс значительно угнетал их функцию и на 5-е сутки видны клетки не участвующие в фагоцитозе или поглотившие единичные гранулы. Выявленная картина активности фагоцитоза нейтрофи-лов согласуется с данными, опубликованными В.Г. Подсеваткиным и соавторами (2006).

" .................Б

Рис. 3. Фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов мышей интактной группы (А) и группы стресс-контроля (Б).

Рис. 4. Влияние терапии диазепамом на фагоцитарную активность пей-трофилов в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Результаты наших исследований показали, что диазепам (0,5 мг/кг) не влияет на лейкоформулу и фагоцитоз нейтрофилов. Его действие проявляется лишь в отношении выраженности НСТ-теста и ИАН. На фоне диазепама указанные показатели не отличаются от контрольных значений. Следовательно, диазепам нивелирует стресс-индуцированную иммунодепрессию кислород-зависимых систем нейтрофилов, но на активность фагоцитоза достоверного действия не оказывает (рис. 4).

При исследовании влияния ХС - 3635 на регистрируемые показатели неспецифической защиты выявлены несколько разнонаправленные эффекты по сравнению с диазепамом. ХС - 3635 нормализует долю сегментоядерных нейтрофилов и препятствует развитию лимфопении. Другие показатели лейкоцитарной формулы не корригировались. В отличие от диазепама, ХС -3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофилов (рис. 5), увеличивая ее в 1,4 раза против контрольных цифр (р<0,05). Однако значения НСТ-теста и ИАН на фоне ХС - 3635 прогрессивно снижались даже ниже уровня группы стресс-контроля. Механизм данного явления на сегодняшний день остается неясным.

Рис. 5. Влияние субстанции 3635 на функциональное состояние нейтрофилов в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Таким образом, со стороны неспецифического звена клеточного иммунитета в условиях стресса были выявлены изменения, зависящие от длительности иммобилизации. Они не в полной мере корригировались диазепамом. Соединение 3635 проявляло заметный эффект на клеточном уровне, что выражалось в поддержании активности фагоцитоза и нормализации пула эози-нофилов и лимфоцитов.

Таким образом, ХС - 3635 способствует снижению летальности, поддержанию поведенческих реакций и условнорефлекторной деятельности, нарушенных при стрессе. Оказывает протекторное действие на слизистую оболочку при стресс-индуцированных гастродуоденопатиях, предотвращая развитие эрозивно-язвенных поражений. А также обладает иммунокорриги-рующим влиянием на клеточное звено неспецифической защиты организма при стрессе.

Выводы

1. Трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэтокси-фосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в дозе 4,3 мг/кг/сут оказывает протекторное действие при хроническом иммобилизационном стрессе на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации.

2. В условиях хронического иммобилизационного стресса (28 суток по 6 часов 6 раз в неделю) ежедневное внутрибрюшинное введение ХС-3635 снижает летальность мышей.

3. ХС-3635 корригирует стресс-опосредованную депрессию двигательной, исследовательской и условнорефлекторной деятельности, проявляя свойства, характерные для ноотропных средств.

4. Действие ХС-3635 в условиях стресс-индуцированной гастродуодено-патии сопровождается уменьшением тяжести поражения желудка и 12-перстной кишки, а также проявляется уменьшением степени повреждения покровного эпителия, выраженности отека и степени лейкоцитарной инфильтрации органов.

5. ХС-3635 восстанавливает фагоцитарную активность нейтрофилов, подавленную стрессом, нормализует содержание сегментоядерных нейтрофиль-ных гранулоцитов и лимфоцитов.

Практические рекомендации

Полученные результаты позволяют рекомендовать целенаправленное углубленное исследование эффективности производного фенилфосфорилук-сусной кислоты (лабораторный шифр 3635) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии стресс-индуцированных психоневрологических и соматических заболеваний.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Балашова Г.В. Стресс - индуцированная патология: возможности фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений. /Балашова Г.В., Литюшкипа A.A., Французова Т.Н., Чистяков И.С. // Вестник интенсивной терапии, 2007.- №6,- С. 15.

2. Балашова Г.В. Новые подходы к медикаментозной коррекции стресс-индуцированных состояний. /Балашова Г.В., Чистяков С.И., Тарасова Р.И, Кирюхина C.B., Французова Т.И. и др.//Казанский мед. журнал,-2007, том 88.-№4. С. 67-68.

3. Балашова Г.В. Фармакологические способы антистрессорной защиты больных в периоперационном периоде./ Балашова Г.В., Французова Т.Н., Литюшкина A.A., Чистяков С.И. // Тез. докл. II Беломорского симпозиума с международн. участием.- Архангельск, 2007. - С. 191.

4. Литюшкина A.A. Фармакопрофилактика гастродуоденальных кровотечений различной этиологии. / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Тарасова Р.И., Балашов В.П., Чистяков С.И.// Тез. докл. II Беломорского симпозиума с междупародн. участием.- Архангельск, 2007. - С. 201.

5. Литюшкина A.A. Новые подходы к терапии острых стресс и НПВП-индуцированных гастродуоденопатий / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Балашов В.П., Тарасова Р.И., Чистяков С.И.// Тез. докл. II Беломорского симпозиума с междупародн. участием.- Архангельск, 2007. -С. 201.

6. Литюшкина A.A. Морфологическая картина слизистой желудка и 12-перстной кишки при медикаментозной коррекции гастродуоденопатий различного генеза. / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Тарасова Р.И., Балашов В.П., Чистяков С.И.// Тез. докл. VII съезда науч. общества гастроэнтерологов России. Приложение №1 к журналу «Эксперим. и клинич. гастроэнтерол.» -М.: Анахарсис, 2007. С. 84-85.

7. Литюшкина A.A. Метод коррекции стресс-индуцированных гастродуоденопатий. /Литюшкина A.A., Балашов В.П., Тарасова Р.И., Балашова Г.В., Чистяков С.И. // Тез. докл. XII Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 2007. С. 841.

8. Балашов В.П. Морфология слизистой оболочки желудка мышей при стрессе и терапии производным фосфорилуксусной кислоты / Балашов

B.П., Литюшкина A.A., Чистяков С.И., Альмяшсва М.И., Балашова Г.В., Абрамов В.Н. // Морфологические ведомости, 2008. - №1-2.-

C.16-19.

9. Литюшкина A.A. Морфология слизистой оболочки желудка мышей при экспериментальной патологии и терапии / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Балашов В.П., Чистяков С.И., Тарасова Р.И., Абрамов В.Н., Акимова И.С. // Морфология, 2008.- №4,- С. 78.

10. Чистяков С.И. Морфофункциональные критерии фармакологической коррекции стресс-индуцированных состояний / Чистяков С.И., Балашова Г.В., Французова Т.И. // Тез. докл. Всероссийск. конфер. «Боевой стресс. Медико-психологическая реабилитация лиц опасных профессий». - М., 2008. - С. 304-306.

БАЛАШОВА Галина Васильевна

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО ФЕНИЛФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 10.11.08. Формат 60x84 '/ig. Усл. печ. л. 1,16. Тираж 127 экз. Заказ № 5464

Отпечатано в полном соответствии с качеством предоставленных оригиналов в ГУП РМ «Республиканская типография "Красный Октябрь"» 430000, Мордовия, г. Саранск, ул. Советская, 55а

Актуальность исследования. В современных условиях человек находится в постоянном тесном контакте со стрессовыми факторами различной природы. Научно-технический прогресс, ухудшение экологии, рост эмоциональной напряженности в обществе привели к значительному росту разнообразной патологии, в этиопатогенезе которой основная роль принадлежит стрессу (Бобровицкий И.П., Ушаков И.Б., 1998; Гурович И.Я. и соавт., 2000; Гурович И.Я., 2001; Дмитриева Т.Б., Кондратьев Ф.В., 2001; Акарачкова Е.С., 2006; Mausch К., 1994).

Большие проблемы связаны со стрессом в хирургии, влияющем и на течение анестезии, и на функции организма в периоперационном периоде на фоне компенсаторного напряжения симпатоадреналовых механизмов ауторегуляции. Это приводит к нарушениям тканевой перфузии, гипоксии и различным послеоперационным осложнениям (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988,1989; Гельфанд Б.Р. и соавт., 2007).

Причина любого расстройства стрессорного генеза всегда носит сложный многозвеньевой характер и напряжение ЦНС находит своё выражение на различных уровнях, изменения которых свидетельствуют об активации, мобилизации организма, переходе его на иной уровень гомеостатической регуляции (Бадыштов Б.А., 1998; Александровский Ю.А., 1999; Маслова М.И. 2005).

Это ярко проявляется как в изменении поведенческих реакций, так и в структурных изменениях многих областей головного мозга (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007; Мс Ewen B.S.et al., 2000; Panerai A.E.et al., 2000).

Другой мишенью реализации стрессовых факторов в организме являются верхний и средний отделы желудочно-кишечного тракта, которые реагируют на стрессовые воздействия возникновением острых эрозивно-язвенных поражений. Указанная патология является одной из важнейших проблем современной гастроэнтерологии и хирургии (Верткин A.JI. и соавт., 2005; Amnon S., 2007).

Серьезные последствия вызывают воздействия стресса на иммунную систему организма. Многие процессы нарушения иммунитета при стрессовом воздействии достаточно подробно описаны в литературе (Селье Г., 1982; Shader R.I.,1988; Jasnow A.M. et al., 2001). Кроме того, показана взаимосвязь клеточных факторов иммунитета с процессами язвообразования в ЖКТ (Шаляпина В .Г. и соавт., 2002).

Поэтому изучение закономерностей реализации стресс-индуцированной патологии в стандартных условиях и в условиях действия веществ со стресс-протекторными свойствами является актуальной задачей современной науки и представляет серьезный интерес для практической медицины.

В настоящее время разрабатываются и успешно используются в лечении стресс-индуцированной патологии разнообразные методы. Одним из таких является терапия с использованием гипербарической оксигенации (Сапов И.А. и соавт., 1991; Яковлев В.А. и соавт., 1993; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2006). В эксперименте была показана ее высокая эффективность в лечении стресс-опосредованных нарушений метаболизма, параметров иммунитета, органных нарушений (Кирюхина С.В. и соавт., 2000; Глебочкина В.И., 2003; Подсеваткин В.Г., 2006; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007).

К сожалению, широко использовать данный метод в лечебной сети, особенно в амбулаторной практике, по различным причинам невозможно, и первую очередь из-за отсутствия материально-технической базы, что серьезно сдерживает широкое применение ГБО, как эффективного метода лечения стресс-индуцированных состояний.

Другим перспективным методом совершенствования фармакотерапии стресс-опосредованных патологических состояний является использование синтетических антиоксидантов из группы фосфорорганических б неантихолинэстеразных средств (Гарбузова В.Ю., Давыдов В.В., 1998). В частности в исследованиях Хафизьяновой Р.Х. (1991), Цыбулысиной В.Н. (1997), Зорькина В.И. (2003), Кулысовой Г.П. (2006) продемонстрирован антиульцерогенный эффект димефосфона при стрессовых язвах в эксперименте и в клинике.

К указанной группе соединений относится также производное фосфорилуксусной кислоты - трифторуксуснокислая соль 4 -диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (лабораторный шифр соединения - 3635). Его кардиопротекторные свойства при экспериментальном стрессе были продемонстрированы Кульковой Н.П. (2007). Близкие по структуре вещества (3587 и 3567) по ранее полученным данным также проявляют стресспротекторные, антиаритмические и антиоксидантные свойства (Тарасова Р.И. и соавт., 2002; Курмышева Т.В. и соавт., 2004; Балашов В.П. и соавт., 2007а; б) Учитывая данные литературы об этиопатогенезе стресс-индуцированной патологии и комплексе фармакодинамических свойств соединения 3635, молено предположить, что это вещество может явиться эффективным средством для создания препарта комплексной теарпии стресс-индуцированных состояний, что и определило цель и задачи нашего исследования.

Целью исследования явилось изучение протекторной активности трифторуксуснокислой соли 4 — диметиламинофенил — 2 -хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в условиях хронического иммобилизационного стресса.

В соответствии с поставленной целью в условиях хронического стресса решались задачи исследования влияния производного фенилфосфорилуксусной кислоты:

1. на летальность мышей;

2. на поведенческие реакции животных;

3. на некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета;

4. на состояние слизистой оболочки желудка и 12-ти перстной кишки.

Работа выполнена по плану НИР Мордовского государственного университета в рамках научной проблемы «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии». Номер государственной регистрации 01.2.007 04781.

Научная новизна. В работе на модели иммобилизационного стресса показан комплекс протекторных эффектов производного фенилфосфорилуксусной кислоты. Стресспротекторные свойства соединения выявлены на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации живой материи. Трифторуксуснокислая соль 4 -диметиламинофенил — 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида эффективно коррегирует ряд показателей неспецифической иммунорезистентности организма, оказывает выраженный гастро- и дуоденопротекторный эффекты. Впервые выявлена способность вещества 3635 регулировать поведенческие реакции подопытных животных в тестах "открытое поле" и "Т-образный лабиринт".

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для углубленного изучения эффективности производного фенилфосфорилуксусной кислоты в комплексном лечении и профилактике заболеваний, в этиологии и патогенезе которых важная роль принадлежит стресс-реакциям. Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии и общей хирургии и анестезиологии Мордовского государственного университета им.

H.П. Огарева. Используются в учебном процессе на кафедре фармакологии Мордовского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

I. Производное фенилфосфорилуксусной кислоты уменьшает летальность белых мышей при иммобилизационном стрессе.

2. Соединение 3635 корригирует стресс-опосредованные нарушения поведенческих реакций мышей.

3. Соединение 3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов крови мышей, угнетенную хроническим иммобилизационным стрессом.

4. Вещество 3635 уменьшает выраженность эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки при стресс— индуцированных гастродуоденопатиях у мышей.

Основные сведения об апробации работы.

Материалы, представленные в диссертации, докладывались и обсуждались на XXXIII Юбилейной сессии, посвященной 40-летию ЦНИИ гастроэнтерологии (Москва, 2007), Объединенном съезде Научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2007), XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), II Беломорском симпозиуме (Архангельск, 2007), Всероссийском конгрессе анестезиологов и реаниматологов (Москва, 2007), III съезде анестезиологов и реаниматологов Приволжского федерального округа (Н. Новгород, 2007); научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д.А. Жданова (Москва, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 в изданиях рекомендованных ВАК Рособрнадзора РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного набора, документирована 16 таблицами и иллюстрирована 17 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), заключения и библиографического указателя, включающего 246 источников, в том числе 105 зарубежных.

выводы

1. Трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 -хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в дозе 4,3 мг/кг/сут оказывает протекторное действие при хроническом иммобилизационном стрессе на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации.

2. В условиях хронического иммобилизационного стресса (28 суток по 6 часов 6 раз в неделю) ежедневное внутрибрюшинное введение ХС-3635 снижает летальность мышей.

3. ХС-3635 корригирует стресс-опосредованную депрессию двигательной, исследовательской и условнорефлекторной деятельности, проявляя свойства, характерные для ноотропных средств.

4. Действие ХС-3635 в условиях стресс-индуцированной гастродуоденопатии сопровождается уменьшением тяжести поражения желудка и 12-перстной кишки, а также проявляется уменьшением степени повреждения покровного эпителия, выраженности отека и степени лейкоцитарной инфильтрации органов.

5. ХС-3635 восстанавливает фагоцитарную активность нейтрофилов, подавленную стрессом, нормализует содержание сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты позволяют рекомендовать целенаправленное углубленное исследование эффективности производного фенилфосфорилуксусной кислоты (соединение с лабораторным шифром 3635) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии стресс-индуцированных психоневрологических и соматических заболеваний.