Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты

ДИССЕРТАЦИЯ
Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты - тема автореферата по медицине
Балашова, Галина Васильевна Саранск 2009 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.25
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты

На правах рукописи

БАЛАШОВА Галина Васильевна

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО ФЕНИЛФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

14.00.25 -фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003460712

Саранск 2009

003460712

Работа выполнена на кафедре общей хирургии и анестезиологии и кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева»

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Чистяков Сергей Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

профессор Балыкова Лариса Александровна

кандидат медицинских наук Шумкин Валерий Николаевич

Ведущая организация: Всероссийский научный центр безопасности биологически активных веществ Ст. Купавна (Московская обл.)

Защита состоится «_ »__2009 года в_на заседании

диссертационного совета Д 212.117.08 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430000 г. Саранск, ул. Ульянова, 26 а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430000 г. Саранск, ул. Большевистская, д.68).

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте ГОУВПО "Мордовский государственный университет" WWW.mrsu.ru

E-mail :dscvet@mrsu.ru

Автореферат разослан «_»_2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук доцент

А.Г. Голубев

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. В современных условиях человек находится в постоянном контакте со стрессовыми факторами различной природы, что сопровождается значительным ростом патологии, в этиопатогснезе которой основная роль принадлежит стрессу (Бобровицкий И.П., Ушаков И.Б., 1998; Гурович И.Я. и соавт., 2000; Гурович И.Я., 2001; Акарачкова Е.С., 2006; Mausch К., 1994).

Негативное действие стресса проявляется на функциях практических всех органов и систем организма. В кардиологии стресс - этиопатогенетиче-ский фактор гипертонической болезни и ишемической болезни сердца, в психиатрии - триггерный и поддерживающий фактор ряда эндогенных и экзогенных психозов, а также невротических расстройств, в хирургии стресс влияет на течение анестезии, на функции организма в периоперационном периоде на фоне компенсаторного напряжения симпатоадреналовых механизмов ауторегуляции. Основное негативное действие стресса реализуется через нарушения микроцикуляции и тканевой перфузии, приводящей к гипоксии (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988,1989; Гельфанд Б.Р. и соавт., 2007).

Причина любого расстройства стрессорного генеза носит сложный многозвеньевый характер и напряжение ЦНС находит своё выражение на различных уровнях, изменения которых свидетельствуют об активации, мобилизации организма, переходе его на иной уровень гомеостатической регуляции (Бадыштов Б.А., 1998; Александровский Ю.А., 1999; Маслова М.Н. 2005). Это ярко проявляется как в изменении поведенческих реакций, так и в структурных изменениях многих областей головного мозга (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007; Me Ewen B.S.et al., 2000; Panerai A.E.et al., 2000).

Одной из мишеней реализации стресса в организме являются верхний и средний отделы желудочно-кишечного тракта, реагирующие возникновением острых эрозивно-язвенных поражений. Указанная патология является одной из важнейших проблем современной гастроэнтерологии и хирургии (Верткин АЛ. и соавт., 2005; Amnon S., 2007). Серьезные нарушения вызывает стресс и в иммунной системе (Селье Г., 1982; Shader R.I.,1988; Jasnow A.M. et al., 2001). Кроме того, показана тесная взаимосвязь клеточных факторов неспецифического иммунитета с процессами язвообразования в ЖКТ (Шаляпина В.Г. и соавт., 2002). Поэтому изучение закономерностей реализации стресс-индуцированной патологии и действия веществ со стресс-протекторными свойствами на организм является актуальной задачей современной науки и представляет серьезный интерес для практической медицины.

В настоящее время в лечении стресс-индуцированной патологии разрабатываются и успешно используются разнообразные подходы. Одним из таких является использование гипербарической оксигенации (Сапов И.А. и соавт., 1991; Яковлев В.А. и соавт., 1993; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2006; 2007). В эксперименте была показана ее высокая эффективность в лечении стресс-опосредованных нарушений метаболизма, параметров иммунитета, органных нарушений (Кирюхина C.B. и соавт., 2000; Глебочкина В.И., 2003;

Заказ № 5464

Подсеваткин В.Г., 2006; 2007). В клинике показана эффективность метода в лечении невротических расстройств и реактивных психозов (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2008). К сожалению, широкое использование метода ГБО невозможно из-за отсутствия дорогостоящего оборудования в лечебных учреждениях.

Другим перспективным методом фармакотерапии стресс-опосредованных патологических состояний является использование синтетических антиоксидантов, в том числе, - из группы фосфорорганических неан-тихолинэстеразных средств. Ранее в исследованиях Хафизьяновой Р.Х. (1991), Цыбулькиной В.Н. (1997), Зорькина В.И. (2003), Кульковой Г.П. (2006) был продемонстрирован антиульцерогенный эффект димефосфона.

Перспективными в плане исследования стресспротекторных свойств являются также производные фенилфосфорилуксусной кислоты. Кардиопро-текторные свойства соединения этой химической группы (лабораторный шифр 3635) при хроническом стрессе были продемонстрированы Кульковой Н.П. (2007). Другие производные фенилфосфорилуксусной кислоты (лабораторные шифры 3587 и 3567) по данным ряда авторов (Тарасова Р.И. и соавт., 2002; Курмышева Т.В. и соавт., 2004; Балашов В.П. и соавт., 2007а; б) также проявляют антистрессорные свойства.

Учитывая современные взгляды на этиопатогенез стрссс-индуцированной патологии и комплекс фармакодипамических свойств соединения 3635, можно предположить, что это вещество может быть перспективным источником для создания эффективного средства терапии стресс-индуцированных состояний, что и определило цель и задачи исследования.

Целью исследования явилось изучение протекторной активности триф-торуксуснокислой соли 4 — диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорил-ацетилгидразида (соединение 3635) в условиях хронического иммобилизаци-онного стресса.

В соответствии с поставленной целью в условиях хронического стресса решались задачи исследования влияния производного фенилфосфорилуксусной кислоты:

1. на летальность мышей;

2. на поведенческие реакции животных;

3. на некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета;

4. на состояние слизистой оболочки желудка и 12-ти перстной кишки.

Работа выполнена по плану НИР Мордовского государственного университета в рамках научной проблемы «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии». Номер государственной регистрации 01.2.007 04781.

Научная новизна. На модели иммобилизационного стресса показан комплекс протекторных эффектов производного фенилфосфорилуксусной кислоты. Стресспротекторные свойства соединения выявлены на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации живой материи. Соединение 3635 корригирует ряд показателей неспецифической им-мунорезистентности организма, оказывает выраженный гастро- и дуодено-

протекторный эффекты. Выявлена способность вещества 3635 регулировать поведенческие реакции животных. Показана способность изучаемого соединения повышать жизнеспособность животных.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для продолжения работ по созданию лекарственных средств на основе производных фенилфосфорилук-сусной кислоты для лечения и профилактики заболеваний, в этиологии и патогенезе которых важная роль принадлежит стрессу. Материалы диссертации используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедр фармакологии, цитологии, гистологии и эмбриологии и общей хирургии и анестезиологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Производное фенилфосфорилуксусной кислоты уменьшает летальность белых мышей при иммобилизационном стрессе.

2. Соединение 3635 корригирует стресс-опосредованные нарушения поведенческих реакций мышей.

3. Соединение 3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов крови мышей, угнетенную хроническим иммобилизаци-онным стрессом.

4. Введение соединения 3635 уменьшает выраженность эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки при стресс-индуцированных гастродуоденопатиях у мышей.

Основные сведения об апробации работы.

Материалы, представленные в диссертации, докладывались и обсуждались на XXXIII Юбилейной сессии, посвященной 40-летию ЦНИИ гастроэнтерологии (Москва, 2007); Объединенном съезде Научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2007); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); II Беломорском симпозиуме (Архангельск, 2007); Всероссийском конгрессе анестезиологов и реаниматологов (Москва, 2007); III съезде анестезиологов и реаниматологов Приволжского федерального округа (Н. Новгород, 2007); научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д.А. Жданова (Москва, 2008); Всероссийской конференции «Боевой стресс. Медико-психологическая реабилитация лиц опасных профессий» (Москва, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 3 работы в изданиях рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного набора, документирована 16 таблицами и иллюстрирована 17 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), заключения и библиографического указателя, включающего 247 источников, в том числе 105 зарубежных.

Заказ № 5464

Материалы и методы исследования

Предметом нашего исследования явилось фосфорорганическое соединение: трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэток-сифосфорилацетилгидразида, синтезированное на кафедре органической химии Казанского государственного технологического университета под руководством ведущего научного сотрудника к.х.н. Р.И. Тарасовой. Психотропная активность некоторых представителей этого класса была изучена на кафедре фармакологии Казанского государственного технологического университета (Тарасова Р.И., 1998; Семина И.И. и соавт., 1996, 1999, 2000, 2002; Файзуллин Д.А. и соавт., 2001). Структура исследуемого соединения представлена на рисунке 1.

Рис. 1. Структурная формула трифторуксуснокислой соли 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС 3635).

Соединение 3635 - белый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворим в воде, метаноле и этаноле, ацетоне, хлороформе, бензоле. В работе использовали водные растворы вещества. Во всех опытах соединение вводили в дозе 4,3 мг/кг, что составляет 10"5 моль/кг.

Эксперименты выполнены на 469 лабораторных белых мышах обоего пола весом 18-23 г. Иммобилизационный стресс у животных моделировали методами: 1) Коломейцева И.А., 1988; Hecht et. al., 1971 и 2) Desiderato О., et al., 1974. Различные методы иммобилизации выбраны с учетом литературных данных об их адекватности для изучения каждой группы параметров гомео-стаза. В промежутках между иммобилизацией мыши находились в стандартных условиях вивария. Все подопытные животные были разбиты на группы, данные о которых приведены в таблице 1.

Двигательную активность белых мышей оценивали в тесте «открытое поле» (Калуев A.B., 1998), условнорефлекторную деятельность изучали в тесте «Т-образный лабиринт» при положительном питьевом подкреплении (Воронина Т.А., Островская Р.У., 1998).

Для оценки иммунного статуса определяли клеточные факторы неспецифической резистентности: активность фагоцитоза нейтрофилов (АФН) (Нестерова И.В. с соавт., 1997; Сидельникова В.И., Лифшиц В.М., 1997); тест с нитросиним тетразолием (HCT - тест) и индекс активации нейтрофилов (ИАН). Кровь забирали путем декапитации мышей. Подсчитывали общее число лейкоцитов крови и их популяций в лейкоформуле (Меньшиков В.В. с соавт., 1987).

Макроморфометрическую оценку слизистой ЖКТ проводили с помощью стереоскопического микроскопа МБС-9 (Автандилов Г.Г., 1990). Для характеристики макроскопической картины слизистой желудка и 12-

о

перстной кишки и расчета показателей язвообразования использовали метод Виноградова В.А. (1983).

Таблица 1.

Объем и структура исследования

№ п/п Условия эксперимента Фармакологическое средство Кол-во мышей Показатель

Без иммобилизации - 10

1 Иммобилизация 1 месяц по 6 ч ежедневно 6 раз в неделю №С1 0,9 % Пирацетам соединение 3635 40 10 10 Летальность

Без иммобилизации - 17 Поведенческие реакции

2 Иммобилизация 5 суток по 10 ч №С1 0,9 % пирацетам соединение 3635 17 17 17

Без иммобилизации - 8 Морфология

3 Иммобилизация 3 суток по 3 ч №С1 0,9 % Фамотидин соединение 3635 8 8 8 слизистой органов ЖКТ

Без иммобилизации - 62

4 Иммобилизация 5 суток по 5 ч №С1 0,9 % диазепам соединение 3635 36 29 36 Клеточный иммунитет

Итого 469

Тяжесть поражения (ТП) характеризовали средним баллом. Частоту поражения (ЧП) вычисляли как отношение числа мышей с язвами к их общему числу в группе. Множественные поражения (МП) рассчитывали как отношение числа язв у всех мышей к их числу в группе. Язвенный индекс (ЯИ), вычисляли по формуле ТП+ЧП+МП. Оценку противоязвенной активности препаратов проводили по методу Шаталова В.Н. и Полонского В.М. (1981). Индекс язвообразования (ИЯ) вычисляли по формуле:

ИЯ = СБ +КМЯ/(КМ*2) - КЯ/КМ, где: СБ - средний балл; КМЯ -количество мышей с язвами; КМ - количество мышей в группе; КЯ - общее количество язв в группе.

Состояние слизистой желудка и 12-перстной кишки оценивали, также методом световой микроскопии после окраски гематоксилином и эозином. Приготовленные микропрепараты изучали под микроскопом Jenaval (Karl Zeiss, Jena). Микроморфологическую картину регистрировали цифровой видеокамерой САМ V-200 (Австрия), с последующей обработкой изображения в Adobe Photoshop 8,0.

Статистическую обработку результатов исследования проводили методами "х2" и ^критерия Стыодеита при 5% уровне значимости (Беленький М.Л., 1963; ЗаксЛ, 1976).

Результаты исследований и их обсуждение

Для решения поставленной цели была проведена оценка антистрессор-ной эффективности химического соединения 3635 на различных уровнях организации жизни: организменпом, органном, тканевом и клеточном. В опытах использовали две модели хронического иммобилизационного стресса у мышей, а исследуемое соединение вводили в дозе 4,3 мг/кг.

Действие вещества на организменпом уровне оценивали по его влиянию на летальность мышей (рис. 1) и на поведенческие реакции в тестах «открытое поле» (рис. 2) и «Т-образный лабиринт» (рис. 3).

В контрольной группе стресс вызывал летальность у 30% животных, что согласуется сданными других авторов (Балашов В.П. и соавт., 2002).

В тесте «открытое поле» нарушения поведения мышей проявлялись снижением горизонтальной и вертикальной двигательной активности до 17% и 56% от исходного. Отмечали значительный рост уровня тревожности животных, (по увеличениию груминга в 15 и 18 раз на 1-е и 5-е сутки опыта соответственно). В последний день наблюдения отмечалось угнетение и норкового показателя.

*ХС-3635 *Пирацетам •ЦитохромС Димефосфон Мексидол Пропранолол Стресс Интактные

Рис.1. Влияние соединения 3635 и препаратов сравнения на летальность мышей в условиях иммобилизационного стресса

Примечание * - р<0,05 относительно соответствующих показателей в группе стресс-контроля; цитохром с, димефосфон, мексидол и пропранолол приведены для сравнения по материалам публикации Балашов В.П. и соавт., 2002.

Тестирование в «Т-образном лабиринте» показало, что на фоне стресса у животных исчезал выработанный условный рефлекс и мыши совершали большое количество ошибок. Это еще раз подтверждает, что стресс вызывает нарушения процессов в ЦНС, отвечающих за формирование памяти.

Наиболее заметным действием пирацетама явилось предупреждение летальности мышей при хроническом стрессе (рис. 1).

100

80

60

40 20

А 0

горизонтальная вертикальная норковый рефлакс

активность активность

100 80 60

40

20

0

Б

Рис. 2. Влияние ХС - 3635 и пирацетама на поведение мышей в «открытом поле» при 10 часовом стрессе. Данные отнормированы в % по отношению к соответствующим показателям у интактных животных. А - первые сутки, Б - пятые сутки наблюдения.

..........................................................................................................................................................................................................................1

■ * я 1 * I — --1

горизонтальная а ктивность

вертикальная активность

норковый рефлекс

1Стресс

ИХС 3635

■ П ирацетам

сек зо

25 20 15 10 5 0

исход тренировка стресс ХС-3635 пирацетам

абс. 2,5 число

2

1,5

0,5 О

Рис. 3. Влияние ХС - 3635 и пирацетама на поведение мышей в «Т-образном лабиринте».

Примечания: а - отличия от исходных значений ("исход") достоверны при р<0,05; * - отличия от значений при контрольном стрессировании мышей ("стресс") достоверны при р<0,05.

Оценивая влияние пирацетама на поведение мышей в "открытом поле", следует отметить его благоприятное действие на горизонтальную активность в 1-е и 5-е сутки опыта, а также положительное влияние на исследовательскую активность животных в заключительный день эксперимента.

Груминг на фоне терапии пирацетамом не подвергался статистически значимым изменениям. Причина этому, на наш взгляд, состоит: во-первых, в том, что пирацетам не обладает анксиолитическими свойствами, во-вторых, в том, что модель стресса, использованная в работе, нарушает условие информативности теста (в тесных пеналах мышам не имеют возможность поддерживать должное гигиеническое состояние).

В опытах в Т-образном лабиринте, использование пирацетама позволило сохранить животным выработанный условный рефлекс (рис. 3). В отличие от контрольных экспериментов, время рефлекса статистически отличалось как от показателя на 1-й день тренировки (исход), так и от соответствующего показателя в контроле (стресс). Животные не совершали ошибок после 5 суток действия стресса, что подтверждает его свойства ноотропного препарата, поддерживающего мнестические свойства ЦНС.

Использование химического соединения 3635 существенно повышало жизнеспособность мышей при хронической иммобилизации (рис. 1) и сни-

ВРЕМЯ РЕФЛЕКСА

/

/

*

а / А *

/ •

/ / г Р

ЧИСЛО ОШИБОК

жало степень стресс-опосредованного угнетения поведения мышей в тесте «открытое поле» (рис. 2). Последний эффект в наибольшей степени проявлялся в 1-е сутки опыта, поскольку горизонтальная активность на фоне терапии ХС-3635 снижалась лишь до 56% от исходной (в контроле до 24%). На 5-е сутки наблюдения динамика данного показателя сохраняла лишь уровень тенденции. Другим благоприятным эффектом изучаемого соединения являлось поддержание исследовательской активности животных на 5-е сутки опыта (подобно эффекту пирацетама). Статистически значимого влияния на груминг соединение 3635 не оказывало. Причины этого, видимо аналогичны причинам, рассмотренным при описании эффекта пирацетама.

ХС - 3635 оказывало заметный стресс-протекторный эффект и при тестировании животных в Т-образном лабиринте. Однако, исследуемое соединение, в отличие от пирацетама, способствовало только сохранению времени рефлекса. Следует отметить, что время рефлекса после 5 суток стресса на фоне ХС - 3635 было даже несколько меньшим, чем у тех же животных на заключительном этапе тренировки. Аналогичным свойством обладает и пир-ацетам. Учитывая однотипность эффектов пирацетама и ХС - 3635, можно предположить наличие у ХС - 3635 свойств, присущих ноотропным препаратам.

Таким образом, опираясь на полученные результаты можно предположить, что ХС - 3635 оказывает ряд эффектов, позволяющих сделать заключение о наличии у него стресс-протекторных свойств.

Для уточнения некоторых аспектов стресс-протекторного действия ХС 3635 мы оценивали его способность препятствовать стресс-опосредованному изъязвлению слизистой оболочки органов желудочно-кишечного тракта.

Учитывая вышеизложенное, нами предпринята попытка оценить активность ХС - 3635 в профилактике стрессовых повреждений слизистой желудка и 12-перстной кишки, т.е. его антистрессовое действие на органном уровне организации живого. В качестве препарата сравнения выбран фамо-тидин - один из наиболее эффективных препаратов, понижающих продукцию соляной кислоты и активность пепсина (Белоусова Е.А., Логинов А.Ф., 2003; Яковенко A.B. и соавт., 2006). Кроме того, фамотидин является активным ан-тиоксидантом (Хомерики С.Г., Хомерики Н.М., 2002) и имеет инъекционную форму, что позволило соблюсти одинаковый способ введения исследуемых веществ (внутрибрюшинно).

Результаты макроморфологического исследования показали (табл. 2.), что стресс вызывал повреждение слизистой оболочки желудка у всех животных: в виде гиперемии, точечных кровоизлияний, эрозивных дефектов слизистой, которые нередко имели тотальный характер. У одной мыши наблюдали развитие множественного язвенного поражения.

При изучении гистологических микропрепаратов выявлено, что в области эрозий наблюдалось повреждение слизистой желудка, что проявлялось разрушением клеток призматического секреторного эпителия. Строение желез в собственной пластинке слизистой было близко к норме, однако, имела

место гиперплазия и некоторая гипертрофия париетальных клеток. Отмеченная картина гипертрофии, на наш взгляд, является следствием усиленного функционирования париетальных клеток желудка. В большинстве микропрепаратов наблюдали перикапиллярный отек слизистой и ее инфильтрацию лейкоцитами различной степени выраженности. Отек собственной пластинки слизистой, возможно, происходит вследствие воспалительной реакции.

Таблица 2.

Влияние фамотидина и ХС - 3635 на развитие стресс-опосредованных _гастропатий у мышей__

Исследуемые показатели Стресс- Фамотидин, ХС - 3635,

контроль 5,0 мг/кг 4,3 мг/кг

(п=8) (п=8) (п=8)

Тяжесть поражения 1,25±0,25а 0,625±0,18 0*

Частота поражения 0,125 0 0

Множественные поражения 0,625 0 0

Язвенный индекс 2,0 0,625 0

Среднее число язв 0,625±0,625 0 0

Среднее число эрозий 2,625±0,532а 1,13±0,40* 0*

Летальность 2 (25%) 0 (0%) 0 (0%)

Примечание: а-отличия от соответствующих показателей у интактных животных достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей у животных группы стресс-контроля достоверны при р<0,05.

Анализ полученных нами результатов свидетельствует, что фамотидин оказывал заметное положительное действие в условиях стресс-опосредованной гастропатии. В частности, тяжесть поражения была снижена вдвое, язвенный индекс был также существенно меньшим, чем в контрольной группе. Значительному снижению подверглись показатели среднего числа эрозий, а язвенные дефекты не обнаружены совсем. Следует подчеркнуть, что в группе животных, получавших фамотидин, летальность составила 0%. Показатели "множественные поражения" и "частота поражения" также были равны нулю.

Микроморфологические изменения слизистой желудка соответствовали картине макроморфометрии. Слизистая оболочка животных, получавших фамотидин, выглядела менее поврежденной, чем у мышей контрольной группы. Клетки покровного эпителия на значительном протяжении не были повреждены. Отек был незначительным, однако часть капилляров собственной пластинки слизистой имела расширенный просвет. Инфильтрация лейкоцитов в слизистой встречалась значительно реже и была менее выражена. Строение желез не отличалось от нормальной картины. Гипертрофия париетальных клеток, имевшая место у животных контрольной группы, практически отсутствовала.

ХС-3635 превосходило по своим протекторным свойствам фамотидин и препятствовало развитию эрозивно-язвенпых поражений желудка (расчетные показатели поражения слизистой желудка были равны 0). Летальность в группе также составила 0%.

При использовании ХС - 3635 микроскопическая картина слизистой желудка была близка к нормальной, а покровный эпителий характеризовался высокой степенью сохранности. Выраженность отека слизистой и лейкоцитарной инфильтрации заметно варьировала от картины близкой к норме до состояния, наблюдаемого при стрессе. Строение желез было близким к норме.

На следующем этапе исследования мы провели анализ влияния стресса и исследуемых препаратов на строение слизистой оболочки тонкого отдела кишечника. Учитывая, что из всех отделов топкой кишки, по данным литературы (Gracham D.Y.,2002; Lewis J.H., 1998), наиболее часто поражается 12-перстная кишка, следующим объектом исследования явился именно данный отдел тонкой кишки.

У мышей группы интактного контроля при макро- и микроскопическом исследовании строение слизистой 12-перстной кишки соответствовало норме. У животных, подвергшихся стрессу, в слизистой оболочке 12-перстной кишки наблюдали повреждения только эрозивного характера (табл. 3.). В связи с этим показатели интенсивности язвообразования были равны 0, а язвенный индекс (1,375) количественно был равен средней величине "тяжести поражения" (1,375±0,25). Следует отметить, что интенсивность эрозивного поражения слизистой 12-перстной кишки была значительно выше аналогичного показателя повреждения в желудке, соответственно 5,875±1,32 против 2,625±0,532.

Таблица 3.

Влияние фамотидина и соединения 3635 на развитие стресс-опосредованных _дуоденопатий у мышей__

Исследуемые показатели Стресс- Фамотидин ХС- 3635

контроль 5,0 мг/кг 4,3 мг/кг

(п=8) (п=8) (п=8)

Тяжесть поражения 1,375±0,25а 0,625±0,18* 0*

Частота поражения 0 0 0

Множественные поражения 0 0 0

Язвенный индекс 1,375 0,625 0

Среднее число язв 0 0 0

Среднее число эрозий 5,875±1,32а 1,0±0,38* 0*

Примечание: а - отличия от соответствующих показателей у интактных животных достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей у животных группы стресс-контроля достоверны при р<0,05.

При микроскопии в области эрозий отмечали множественные повреждения ворсинок, выраженный отек, нарушающий их целостность. Отдельные

ворсинки были существенно редуцированы. Однако клетки покровного эпителия в основном выглядели не поврежденными. В собственной пластинке слизистой на значительных участках отмечены множественные скопления лейкоцитов. Таким образом, слизистая 12-перстной кишки реагировала, в основном, образованием эрозий, особенностью которых являлся выраженный отек.

У мышей, получавших фамотидин, в слизистой 12-перстной кишки значительно снижались степень и размер эрозивных повреждений. Тенденции эрозивно-язвенного процесса в 12-перстной кишке на фоне терапии фа-мотидином в принципе однонаправлены с аналогичными изменениями в слизистой желудка. Показатель тяжести поражения был статистически ниже, чем в контроле (0,625±0,18 против 1,375±0,25), а значения показателей "частота поражения" и "множественные поражения" равны 0. Наиболее значимым эффектом фамотидина было снижение эрозий с 5,875±1,32 до 1,0±0,38 (р<0,05).

По данным микроскопии фамотидин способствовал сохранности покровного эпителия ворсинок, снижал отек собственной пластинки слизистой и степень ее инфильтрации лейкоцитами. Следует отметить, что число лейкоцитов на разных участках слизистой сильно варьировало. Также в поле зрения можно наблюдать ворсинки почти не измененные и с умеренной степенью отека.

На фоне введения ХС- 3635 в слизистой 12-перстной кишки не выявлено ни язв, ни эрозий, а все интегральные показатели были равны "О". Изучение микропрепаратов показало, что участки слизистой по своему строению напоминали картину в группе интактного контроля. Эпителий ворсинок не претерпевал существенных изменений, отдельные ворсинки были умеренно отечны. Отек собственной пластинки слизистой был выражен слабо, инфильтрация лейкоцитами встречалась редко. Собственная и мышечная пластинка слизистой также были без признаков повреждения.

Данная картина подтверждает высокую протекторную активность соединения 3635 при стресс-индуцированных дуоденопатиях. Исследуемое вещество в большей степени, чем фамотидин, уменьшало степень поражения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки в условиях стресс-индуцированной патологии. При этом его эффект в 12-перстной кишке был более значимым.

Резюмируя полученные результаты можно предположить, что соединение 3635, может быть эффективным потенциальным дополнением к современному лекарственному комплексу, применяемому для коррекции гастро-дуоденопатий стрессового генеза. Большую эффективность препарата следует ожидать при эрозивно-язвенных поражениях стенки 12-перстной кишки. Механизм воздействия ХС - 3635 на слизистую желудка, скорее всего, опосредован через антистрессорное влияние, хотя может существовать другой, не изученный механизм его воздействия на слизистую.

Известно, что при стрессе наряду с другими реакциями организма происходят значительные изменения иммунитета (Tan Z., Nagata S., 2002). В

нашей работе мы исследовали изменения со стороны его неспецифичсского фагоцитарного звена. Изменения его параметров мы рассматриваем как реакцию организма на стресс на клеточном уровне организации жизни. Протекторные свойства ХС-3635 в этом разделе работы мы сравнивали с активностью диазепама - препарата, используемого в стандартах лечения постстрес-сорных невротических расстройств.

"Оптимальные" характеристики стресса, вызывающие наибольшие изменения неспецифичсского клеточного иммунитета были выявлены в предварительных экспериментах совместно с к.м.н. Кирюхиной C.B. (табл. 4).

Таблица 4.

Некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета у мышей при иммобилизационном стрессе

№ п/п Исследуемые показатели Без иммобилизации (п=62) Стресс + NaCl контр (п=36) Стресс + ХС - 3635 (п=36) Стресс + диазепам (п=29)

1 Лейкоциты,х 10% 3,75±0,21 3,6±0,25 4,5±0,99 3,7 ± 0,19

2 ПЯ нейтрофилы, % 0,45±0,09 1,2±0,4а 2,3±0,96 0,5б± 0,15

3 СЯ нейтрофилы, % 23,6±1,32 34,9±3,7а 21,6±7,2* 42,2 ±2,1

4 лимфоциты, % 73,1±1,41 58,4±3,7а 70,6±7,8* 52,0 ±2,1

5 моноциты, % 1,82±0,26 4,8±0,7а 4,8±2,1 3,4 ±0,54

6 эозинофилы, % 0,36±0,07 0,7±0,4 1,5±0,7 1,57 ±0,37

7 АФН, % 45,6±2,1 24,3±1,87а 34,1 ±3,3* 32,1 ±2,0

8 НСТ-тест, % 17,5±1,23 10,б±1,11" 5,0±1,9* 19,0 ± 1,4*

9 ИАН, у.е. 0,24±0,02 0,12±0,02а 0,05±0,02* 0,23 ± 0,02*

Примечания: а - достоверность отличия от животных без иммобилизации р <0,05;

* - достоверность отличия от животных при стрессе; ПЯ - палокоядер-ные; СЯ - сегментоядерпые; АФН — активность фагоцитоза нейтрофилов; НСТ - нитросиний тетразолий; ИАН - индекс активации нейтрофилов.

При изучении показателей на 1, 5 и 12 сутки стресса было выявлено, что наиболее выраженная депрессия иммунитета отмечается на 5 сутки. В связи с этим изучение стресс-протекторной эффективности ХС - 3635 проводили именно при 5- суточной иммобилизации.

Как видно из данных таблицы 4, на фоне 5-и суточного стресса наблюдались лимфо- и эозинопения, нейтрофилез в сочетании с угнетением фагоцитарной и метаболической активности нейтрофилов. Полученные результаты соответствуют литературным данным, характеризующим стресс (Селье Г., 1972, 1982; Крыжановский Г.Н. ссоавт., 1997; Вогашс М., 1987).

Микроскопия периферической крови позволила выявить, что морфологическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов хорошо согласуется с

данными, приведенными на рисунке 3. Нейтрофилы интактных мышей активно поглощают частички латекса. Стресс значительно угнетал их функцию и на 5-е сутки видны клетки не участвующие в фагоцитозе или поглотившие единичные гранулы. Выявленная картина активности фагоцитоза нейтрофи-лов согласуется с данными, опубликованными В.Г. Подсеваткиным и соавторами (2006).

" .................Б

Рис. 3. Фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов мышей интактной группы (А) и группы стресс-контроля (Б).

Рис. 4. Влияние терапии диазепамом на фагоцитарную активность пей-трофилов в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Результаты наших исследований показали, что диазепам (0,5 мг/кг) не влияет на лейкоформулу и фагоцитоз нейтрофилов. Его действие проявляется лишь в отношении выраженности НСТ-теста и ИАН. На фоне диазепама указанные показатели не отличаются от контрольных значений. Следовательно, диазепам нивелирует стресс-индуцированную иммунодепрессию кислород-зависимых систем нейтрофилов, но на активность фагоцитоза достоверного действия не оказывает (рис. 4).

При исследовании влияния ХС - 3635 на регистрируемые показатели неспецифической защиты выявлены несколько разнонаправленные эффекты по сравнению с диазепамом. ХС - 3635 нормализует долю сегментоядерных нейтрофилов и препятствует развитию лимфопении. Другие показатели лейкоцитарной формулы не корригировались. В отличие от диазепама, ХС -3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофилов (рис. 5), увеличивая ее в 1,4 раза против контрольных цифр (р<0,05). Однако значения НСТ-теста и ИАН на фоне ХС - 3635 прогрессивно снижались даже ниже уровня группы стресс-контроля. Механизм данного явления на сегодняшний день остается неясным.

Рис. 5. Влияние субстанции 3635 на функциональное состояние нейтрофилов в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Таким образом, со стороны неспецифического звена клеточного иммунитета в условиях стресса были выявлены изменения, зависящие от длительности иммобилизации. Они не в полной мере корригировались диазепамом. Соединение 3635 проявляло заметный эффект на клеточном уровне, что выражалось в поддержании активности фагоцитоза и нормализации пула эози-нофилов и лимфоцитов.

Таким образом, ХС - 3635 способствует снижению летальности, поддержанию поведенческих реакций и условнорефлекторной деятельности, нарушенных при стрессе. Оказывает протекторное действие на слизистую оболочку при стресс-индуцированных гастродуоденопатиях, предотвращая развитие эрозивно-язвенных поражений. А также обладает иммунокорриги-рующим влиянием на клеточное звено неспецифической защиты организма при стрессе.

Выводы

1. Трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 - хлорэтокси-фосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в дозе 4,3 мг/кг/сут оказывает протекторное действие при хроническом иммобилизационном стрессе на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации.

2. В условиях хронического иммобилизационного стресса (28 суток по 6 часов 6 раз в неделю) ежедневное внутрибрюшинное введение ХС-3635 снижает летальность мышей.

3. ХС-3635 корригирует стресс-опосредованную депрессию двигательной, исследовательской и условнорефлекторной деятельности, проявляя свойства, характерные для ноотропных средств.

4. Действие ХС-3635 в условиях стресс-индуцированной гастродуодено-патии сопровождается уменьшением тяжести поражения желудка и 12-перстной кишки, а также проявляется уменьшением степени повреждения покровного эпителия, выраженности отека и степени лейкоцитарной инфильтрации органов.

5. ХС-3635 восстанавливает фагоцитарную активность нейтрофилов, подавленную стрессом, нормализует содержание сегментоядерных нейтрофиль-ных гранулоцитов и лимфоцитов.

Практические рекомендации

Полученные результаты позволяют рекомендовать целенаправленное углубленное исследование эффективности производного фенилфосфорилук-сусной кислоты (лабораторный шифр 3635) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии стресс-индуцированных психоневрологических и соматических заболеваний.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Балашова Г.В. Стресс - индуцированная патология: возможности фармакологической коррекции морфофункциональных нарушений. /Балашова Г.В., Литюшкипа A.A., Французова Т.Н., Чистяков И.С. // Вестник интенсивной терапии, 2007.- №6,- С. 15.

2. Балашова Г.В. Новые подходы к медикаментозной коррекции стресс-индуцированных состояний. /Балашова Г.В., Чистяков С.И., Тарасова Р.И, Кирюхина C.B., Французова Т.И. и др.//Казанский мед. журнал,-2007, том 88.-№4. С. 67-68.

3. Балашова Г.В. Фармакологические способы антистрессорной защиты больных в периоперационном периоде./ Балашова Г.В., Французова Т.Н., Литюшкина A.A., Чистяков С.И. // Тез. докл. II Беломорского симпозиума с международн. участием.- Архангельск, 2007. - С. 191.

4. Литюшкина A.A. Фармакопрофилактика гастродуоденальных кровотечений различной этиологии. / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Тарасова Р.И., Балашов В.П., Чистяков С.И.// Тез. докл. II Беломорского симпозиума с междупародн. участием.- Архангельск, 2007. - С. 201.

5. Литюшкина A.A. Новые подходы к терапии острых стресс и НПВП-индуцированных гастродуоденопатий / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Балашов В.П., Тарасова Р.И., Чистяков С.И.// Тез. докл. II Беломорского симпозиума с междупародн. участием.- Архангельск, 2007. -С. 201.

6. Литюшкина A.A. Морфологическая картина слизистой желудка и 12-перстной кишки при медикаментозной коррекции гастродуоденопатий различного генеза. / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Тарасова Р.И., Балашов В.П., Чистяков С.И.// Тез. докл. VII съезда науч. общества гастроэнтерологов России. Приложение №1 к журналу «Эксперим. и клинич. гастроэнтерол.» -М.: Анахарсис, 2007. С. 84-85.

7. Литюшкина A.A. Метод коррекции стресс-индуцированных гастродуоденопатий. /Литюшкина A.A., Балашов В.П., Тарасова Р.И., Балашова Г.В., Чистяков С.И. // Тез. докл. XII Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 2007. С. 841.

8. Балашов В.П. Морфология слизистой оболочки желудка мышей при стрессе и терапии производным фосфорилуксусной кислоты / Балашов

B.П., Литюшкина A.A., Чистяков С.И., Альмяшсва М.И., Балашова Г.В., Абрамов В.Н. // Морфологические ведомости, 2008. - №1-2.-

C.16-19.

9. Литюшкина A.A. Морфология слизистой оболочки желудка мышей при экспериментальной патологии и терапии / Литюшкина A.A., Балашова Г.В., Балашов В.П., Чистяков С.И., Тарасова Р.И., Абрамов В.Н., Акимова И.С. // Морфология, 2008.- №4,- С. 78.

10. Чистяков С.И. Морфофункциональные критерии фармакологической коррекции стресс-индуцированных состояний / Чистяков С.И., Балашова Г.В., Французова Т.И. // Тез. докл. Всероссийск. конфер. «Боевой стресс. Медико-психологическая реабилитация лиц опасных профессий». - М., 2008. - С. 304-306.

БАЛАШОВА Галина Васильевна

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО ФЕНИЛФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 10.11.08. Формат 60x84 '/ig. Усл. печ. л. 1,16. Тираж 127 экз. Заказ № 5464

Отпечатано в полном соответствии с качеством предоставленных оригиналов в ГУП РМ «Республиканская типография "Красный Октябрь"» 430000, Мордовия, г. Саранск, ул. Советская, 55а

 
 

Оглавление диссертации Балашова, Галина Васильевна :: 2009 :: Саранск

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. МЕХАНИЗМЫ СТРЕССОРНОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ОРГАНИЗМА И

СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Основные реакции организма на воздействие стресса.

1.2. Повреждение иммунной системы при стрессе.

1.3. Фармакологическая коррекция стресс-индуцированной патологии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика исследуемого соединения.

2.2. Характеристика подопытных животных.

2.3. Методы экспериментальных исследований.

2.4. Методы статистической обработки полученных результатов.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНЫХ СВОЙСТВ СОЕДИНЕНИЯ 3635 НА ОРГАНИЗМЕННОМ УРОВНЕ ОРГАНИЗАЦИИ ЖИВОГО.

3.1. Исследование влияния соединения 3635 на летальность мышей в условиях хронического стресса.

3.2. Исследование поведенческих реакций экспериментальных животных в условиях стресса.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНЫХ СВОЙСТВ СОЕДИНЕНИЯ 3635 НА ОРГАННОМ УРОВНЕ ОРГАНИЗАЦИИ ЖИВОЙ МАТЕРИИ.

4.1. Оценка гастропротекторных свойств соединения 3635.

4.2. Оценка дуоденопротекторных свойств соединения

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕССПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНОГО ФЕНИЛФОСФОРИЛУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ НА КЛЕТОЧНОМ И УРОВНЕ ОРГАНИЗАЦИИ ЖИВОГО.

5.1. Влияние производного фенилфосфорилуксусной кислоты на показатели неспецифического клеточного иммунитета.

ОБСУЖДЕНИЕ РЁЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

 
 

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Балашова, Галина Васильевна, автореферат

Актуальность исследования. В современных условиях человек находится в постоянном тесном контакте со стрессовыми факторами различной природы. Научно-технический прогресс, ухудшение экологии, рост эмоциональной напряженности в обществе привели к значительному росту разнообразной патологии, в этиопатогенезе которой основная роль принадлежит стрессу (Бобровицкий И.П., Ушаков И.Б., 1998; Гурович И.Я. и соавт., 2000; Гурович И.Я., 2001; Дмитриева Т.Б., Кондратьев Ф.В., 2001; Акарачкова Е.С., 2006; Mausch К., 1994).

Большие проблемы связаны со стрессом в хирургии, влияющем и на течение анестезии, и на функции организма в периоперационном периоде на фоне компенсаторного напряжения симпатоадреналовых механизмов ауторегуляции. Это приводит к нарушениям тканевой перфузии, гипоксии и различным послеоперационным осложнениям (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988,1989; Гельфанд Б.Р. и соавт., 2007).

Причина любого расстройства стрессорного генеза всегда носит сложный многозвеньевой характер и напряжение ЦНС находит своё выражение на различных уровнях, изменения которых свидетельствуют об активации, мобилизации организма, переходе его на иной уровень гомеостатической регуляции (Бадыштов Б.А., 1998; Александровский Ю.А., 1999; Маслова М.И. 2005).

Это ярко проявляется как в изменении поведенческих реакций, так и в структурных изменениях многих областей головного мозга (Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007; Мс Ewen B.S.et al., 2000; Panerai A.E.et al., 2000).

Другой мишенью реализации стрессовых факторов в организме являются верхний и средний отделы желудочно-кишечного тракта, которые реагируют на стрессовые воздействия возникновением острых эрозивно-язвенных поражений. Указанная патология является одной из важнейших проблем современной гастроэнтерологии и хирургии (Верткин A.JI. и соавт., 2005; Amnon S., 2007).

Серьезные последствия вызывают воздействия стресса на иммунную систему организма. Многие процессы нарушения иммунитета при стрессовом воздействии достаточно подробно описаны в литературе (Селье Г., 1982; Shader R.I.,1988; Jasnow A.M. et al., 2001). Кроме того, показана взаимосвязь клеточных факторов иммунитета с процессами язвообразования в ЖКТ (Шаляпина В .Г. и соавт., 2002).

Поэтому изучение закономерностей реализации стресс-индуцированной патологии в стандартных условиях и в условиях действия веществ со стресс-протекторными свойствами является актуальной задачей современной науки и представляет серьезный интерес для практической медицины.

В настоящее время разрабатываются и успешно используются в лечении стресс-индуцированной патологии разнообразные методы. Одним из таких является терапия с использованием гипербарической оксигенации (Сапов И.А. и соавт., 1991; Яковлев В.А. и соавт., 1993; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2006). В эксперименте была показана ее высокая эффективность в лечении стресс-опосредованных нарушений метаболизма, параметров иммунитета, органных нарушений (Кирюхина С.В. и соавт., 2000; Глебочкина В.И., 2003; Подсеваткин В.Г., 2006; Подсеваткин В.Г. и соавт., 2007).

К сожалению, широко использовать данный метод в лечебной сети, особенно в амбулаторной практике, по различным причинам невозможно, и первую очередь из-за отсутствия материально-технической базы, что серьезно сдерживает широкое применение ГБО, как эффективного метода лечения стресс-индуцированных состояний.

Другим перспективным методом совершенствования фармакотерапии стресс-опосредованных патологических состояний является использование синтетических антиоксидантов из группы фосфорорганических б неантихолинэстеразных средств (Гарбузова В.Ю., Давыдов В.В., 1998). В частности в исследованиях Хафизьяновой Р.Х. (1991), Цыбулысиной В.Н. (1997), Зорькина В.И. (2003), Кулысовой Г.П. (2006) продемонстрирован антиульцерогенный эффект димефосфона при стрессовых язвах в эксперименте и в клинике.

К указанной группе соединений относится также производное фосфорилуксусной кислоты - трифторуксуснокислая соль 4 -диметиламинофенил - 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (лабораторный шифр соединения - 3635). Его кардиопротекторные свойства при экспериментальном стрессе были продемонстрированы Кульковой Н.П. (2007). Близкие по структуре вещества (3587 и 3567) по ранее полученным данным также проявляют стресспротекторные, антиаритмические и антиоксидантные свойства (Тарасова Р.И. и соавт., 2002; Курмышева Т.В. и соавт., 2004; Балашов В.П. и соавт., 2007а; б) Учитывая данные литературы об этиопатогенезе стресс-индуцированной патологии и комплексе фармакодинамических свойств соединения 3635, молено предположить, что это вещество может явиться эффективным средством для создания препарта комплексной теарпии стресс-индуцированных состояний, что и определило цель и задачи нашего исследования.

Целью исследования явилось изучение протекторной активности трифторуксуснокислой соли 4 — диметиламинофенил — 2 -хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в условиях хронического иммобилизационного стресса.

В соответствии с поставленной целью в условиях хронического стресса решались задачи исследования влияния производного фенилфосфорилуксусной кислоты:

1. на летальность мышей;

2. на поведенческие реакции животных;

3. на некоторые показатели неспецифического клеточного иммунитета;

4. на состояние слизистой оболочки желудка и 12-ти перстной кишки.

Работа выполнена по плану НИР Мордовского государственного университета в рамках научной проблемы «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии». Номер государственной регистрации 01.2.007 04781.

Научная новизна. В работе на модели иммобилизационного стресса показан комплекс протекторных эффектов производного фенилфосфорилуксусной кислоты. Стресспротекторные свойства соединения выявлены на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации живой материи. Трифторуксуснокислая соль 4 -диметиламинофенил — 2 - хлорэтоксифосфорилацетилгидразида эффективно коррегирует ряд показателей неспецифической иммунорезистентности организма, оказывает выраженный гастро- и дуоденопротекторный эффекты. Впервые выявлена способность вещества 3635 регулировать поведенческие реакции подопытных животных в тестах "открытое поле" и "Т-образный лабиринт".

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием для углубленного изучения эффективности производного фенилфосфорилуксусной кислоты в комплексном лечении и профилактике заболеваний, в этиологии и патогенезе которых важная роль принадлежит стресс-реакциям. Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии и общей хирургии и анестезиологии Мордовского государственного университета им.

H.П. Огарева. Используются в учебном процессе на кафедре фармакологии Мордовского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

I. Производное фенилфосфорилуксусной кислоты уменьшает летальность белых мышей при иммобилизационном стрессе.

2. Соединение 3635 корригирует стресс-опосредованные нарушения поведенческих реакций мышей.

3. Соединение 3635 нормализует фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов крови мышей, угнетенную хроническим иммобилизационным стрессом.

4. Вещество 3635 уменьшает выраженность эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки при стресс— индуцированных гастродуоденопатиях у мышей.

Основные сведения об апробации работы.

Материалы, представленные в диссертации, докладывались и обсуждались на XXXIII Юбилейной сессии, посвященной 40-летию ЦНИИ гастроэнтерологии (Москва, 2007), Объединенном съезде Научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2007), XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), II Беломорском симпозиуме (Архангельск, 2007), Всероссийском конгрессе анестезиологов и реаниматологов (Москва, 2007), III съезде анестезиологов и реаниматологов Приволжского федерального округа (Н. Новгород, 2007); научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д.А. Жданова (Москва, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 в изданиях рекомендованных ВАК Рособрнадзора РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного набора, документирована 16 таблицами и иллюстрирована 17 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), заключения и библиографического указателя, включающего 246 источников, в том числе 105 зарубежных.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование стресс-протекторной активности производного фенилфосфорилуксусной кислоты"

выводы

1. Трифторуксуснокислая соль 4 - диметиламинофенил - 2 -хлорэтоксифосфорилацетилгидразида (ХС-3635) в дозе 4,3 мг/кг/сут оказывает протекторное действие при хроническом иммобилизационном стрессе на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях организации.

2. В условиях хронического иммобилизационного стресса (28 суток по 6 часов 6 раз в неделю) ежедневное внутрибрюшинное введение ХС-3635 снижает летальность мышей.

3. ХС-3635 корригирует стресс-опосредованную депрессию двигательной, исследовательской и условнорефлекторной деятельности, проявляя свойства, характерные для ноотропных средств.

4. Действие ХС-3635 в условиях стресс-индуцированной гастродуоденопатии сопровождается уменьшением тяжести поражения желудка и 12-перстной кишки, а также проявляется уменьшением степени повреждения покровного эпителия, выраженности отека и степени лейкоцитарной инфильтрации органов.

5. ХС-3635 восстанавливает фагоцитарную активность нейтрофилов, подавленную стрессом, нормализует содержание сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты позволяют рекомендовать целенаправленное углубленное исследование эффективности производного фенилфосфорилуксусной кислоты (соединение с лабораторным шифром 3635) с целью разработки лекарственных средств для комплексной терапии стресс-индуцированных психоневрологических и соматических заболеваний.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Балашова, Галина Васильевна

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия./ Автандилов ТТЛ Руководство.- М.: Медицина, 1990.-384 с.

2. Акарачкова Е.С. Хронический стресс и нарушение адаптации у медицинских работников. / Акарачкова Е.С.// Журнал «Трудный пациент», 2006.- №8.- С.6-8.

3. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные взаимодействия: их роль в дисрегуляторной патологии / Акмаев И.Г.// Патол. физиол. эксп. тер.-2003.-N4.-C.3-10.

4. Акмаев И.Г. Нейроммуноэндокринология: истоки и перспективы развития / Акмаев И.Г. // Усп. физиол. наук.- 2003.- Т.34.- N4.- С.4-15.

5. Александровский Ю.А. Пограничные психические расстройства / Александровский Ю.А // Руководство для врачей / М., 1993. - 400 с.

6. Александровский Ю.А. К вопросу о механизмах развития невротических расстройств (Идеи И.П. Павлова и современность) / Александровский Ю.А. // VI Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 19-23 апреля 1999 г. М., 1999. - 32 с.

7. Арцимович Н.Г. Стресс-индуцированная иммуносупрессия и её фармакологическая коррекция / Арцимович Н.Г., Галушина Т.С, Фадеева Т.А.// V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Тез. докл. -М., 1998. - С. 430.

8. Бадыштов Б.А. Фенотипы реакций здоровых добровольцев на эмоциональный стресс и бензодиазепиновые транквилизаторы / Бадыштов Б.А. // Дисс. докт. мед. наук. М., 1998. - 336 с.

9. Балашов В.П. Сравнительное исследование стресспротекторного действия гипербарической оксигенации и реланиума / Балашов В.П., Подсеваткин В.Г., Комков А.П., Кирюхина С.В. // Гипербарическая физиология и медицина.- М.,1996.- №4. -С. 4.

10. Балашов В.П. Новый метод оценки безопасности потенциальных противоаритмических средств. / Балашов В.П., Балыкова JI.A., Шувалова Е.Н., Шеворакова Т.И., Подеров В.Н. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-2002.- Т.133, №5,- С. 598-600.

11. Бачев И.И. К вопросу об улучшении результатов лечения больных язвенной болезнью / И.И. Бачев // Клин. мед.-1992, №2.-С.88-91.

12. Белова Е.В. Роль системы «гормоны-циклазы» в патогенезе поражений желудка и двенадцатиперстной кишки. / Белова Е.В. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2004 г., №5.- С. 1820.

13. Белоусова Е.А. Возможности блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов в современной гастроэнтерологии. / Белоусова Е.А., Логинов А.Ф. // Consilium medicum, 2003.- Т. 5.- №10. С.15-18.

14. Березина Т.П. О механизмах торможения сократительной активности гастродуоденальной зоны при психогенном стрессе у кроликов. / Березина Т.П., Овсянникова В.И. // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова, том 93, №1, 2007, с.76-89.

15. Бобровницкий И.П. Принципы фармакологической коррекции метаболических расстройств, инициированных стрессами внешней среды /Бобровницкий И.П., Ушаков И.Б. // V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Тез. докл. - М., 1998. - С. 432.

16. Бондаренко Ю.И. Нейрогуморальные, метаболические и микроциркуляторные нарушения в патогенезе стрессорных повреждений желудка и их коррекции./ Бондаренко Ю.И.// Дисс. докт. мед. наук. М., 1988.-435 С.

17. Васильева О.А., Решетников В.И., Иванова С.А. Иммунологические исследования при неврозах и психогенной депрессии. //Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Иммунология.- 1991.-C.3-31.

18. Вейн A.M. Неврозы. / Вейн A.M., Колосова О.А., Яковлев Н.А. // -М., 1995.-231 с.

19. Виноградов В.М. Фармакологическая стратегия адаптации / Виноградов В.М., Бобков Ю.Г // Фармакологическая регуляция состояний дезадаптации / Под ред. Бобкова Ю.Г.-М., 1986.-С. 7-16.

20. Воронина Т.А. Экспериментальное изучение препаратов с ноотропным типом действия. / Воронина Т.А., Островская Р.У. // Ведомости Фармакологического Комитета.-1998. №2.-С.25 - 31.

21. Восконян Н.А. Иммунологический статус обезьян в процессе акклиматизации и коррекция левомизолом. / Восконян Н.А., Джикидзе Э.К., Почхуа М.А.// Ж.микробиол., эпидемиол. И иммунологии.- 1986.-№3.- С. 62-65.

22. Ганджа И.М. Иммунные реакции у здоровых лиц в условиях Эмоционального стресса и однократной пищевой нагрузки липидами. / Ганджа И.М., Мягкая И.П., Бобрик Н.В. // Тер. архив. 1979.-№ 5.-С. 50-52.

23. Гарбузова В.Ю. Возрастные особенности влияния диметилсульфоксида на каталазную активность миокарда при иммобилизационном стрессе /Гарбузова В.Ю., Давыдов В.В. //

24. Экспериментальная и клиническая фармакология. М., 1998. - Т. 61. -№6. -С. 62-64.

25. Гвак Г.В. Хирургический стресс. Клинико-лабораторные параллели в условиях активации естественных стресс-лимитирующих систем. / Гвак Г.В., Еременко В.Г., Иванов Е.А., Сманцер В.А. // Анестезиол. и реаниматол.- 2004.- №3.- С. 33-35.

26. Гельфанд Б.Р. Профилактика стресс-повреждений желудка у больных в критических состояниях. / Гельфанд Б.Р., Гурьянов В.А., Мамонтова О.А., Кириенко П.А., Попов Т.В., Лукашин О.В. // Consilium medicum, 2007.- Т. 5 № 2. С. 21-23.

27. Голиков П.П. Влияние стресса на транслокацию глюкокортикоид-рецептороного комплекса в ядра гепатоцитов крыс / Голиков П.П.// Пат. физиология и эксперимент, терапия, 1992. № 2. - С. 48 -49.

28. Гребнев A.JI. /Нейрогуморальная регуляция пищеварения. /Под ред. Василенко В.Х., Кочиной Е.К. //М., 1993. С. 192 - 201.

29. Завадская И. С. Серотонинергический компонент в механизме развития нейрогенного повреждения желудка / И.С. Завадская // : Москва Фармакол. и токсик.-1987.-№1. С.77.

30. Зимин Ю.И. Стресс-иммунологические аспекты. / Зимин Ю.И. // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Актуальные проблемы молекулярной клеточной и клинической иммунологии, Т. 12, / Под ред. акад. Марчука Г.И., акад. АМН СССР Петрова Р.В., М., 1983, с. 41-85.

31. Зимина Т.А. Влияние П-тирозола на окислительный метаболизм сукцината и процессы ПОЛ в митохондриях мозга крыс при стрессе /Зимина Т.А. // Дисс. канд. мед. наук. Томск, 1989. -121 с.

32. Зорькин В.И. Экспериментальное исследование гастропротективного действия эмоксипина, димефосфона и их комбинации. /Зорькин В.И. //Автореф. дис. .канд. мед. наук. — Саранск. 2003. - 14 с.

33. Зорькина А.В. Антиоксидантное действие цитохрома С в условиях пролонгированного иммобилизацио'нного стресса / Зорькина А.В., Инчина В.И., Костин Я.В. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. М., 1997. - № 6. - Т. 123. -С. 642-644.

34. Зорькина А.В. Влияние ксимедона на адаптацию к длительному иммобилизационному стрессу Экспериментальная и клиническая фармакология. / Зорькина А.В., Инчина В.И., Кудашкин С.С. и соавт. // М.: Фолиум, 1997. - Т. 60. - № 1. - С. 65-67.

35. Исаков В.А. Гастропатии, связанные с приёмом нестероидных противоспалительных препаратов: патогенез, лечение, профилактика. / Исаков В.А. // Клиническая фармакология и терапия, 2005,- №14.- С 14-17.

36. Козлова Н.М. Эффективность кваматела в лечение язвенной болезни. /Козлова Н.М., Нечаева Е.В., Кулькова М.Э. // Рос журн. гастороэнт., гепатол., колонопроктол Т.8.- 1998. - №4. - С.92 - 94.

37. Комков А.П. Сравнительная эффективность бензодиазепиновых транквилизаторов и гипербарической оксигенации в лечении больных неврозами / Комков А.П., Подсеваткин Д.В. // Гипербарическая физиология и медицина. М., 2000. - №1.-С. 2-3.

38. Кононов А.В. Язвенная болезнь — утрата нозологической монолитности. / Кононов А.В. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2004.- №1.- С.69-78.

39. Корнеев А.А. О механизме повреждающего действия гипоксии на дыхательную цепь и способах её фармакологической коррекции / Корнеев А.А., Комиссаров И.А. // Экспериментальная и клиническая фармакология. М., 1996.-Т.57.-№1.- С. 45 - 47.

40. Корнеев А.А. Новые возможности метаболической защиты от гипоксии беременных крыс и их потомства / Корнеев А.А., Комиссарова И.А., Чиркова Е.М. и соавт. // Экспериментальная и клиническая фармакология. М.: Фолиум, 1996. - Т. 59.-№ 5.- С. 31 - 35.

41. Корнетов Н.А. Психогенная депрессия (клиника, патогенез)./ Корнетов Н.А. //- Томск.: Изд. Томск. Ун-та, 1993.- 239 с.

42. Крыжановский Г.Н. Нейроиммунология. / Крыжановский Г.Н., Шагаева С.В., Макаров С.В. // -М., 1997.- 282 с.

43. Кулькова Н.П. Исследование кардиопротекторной активности фосфорилацетогидразидов при ишемическом и стрессорном повреждениях миокарда. /Кулькова Н.П.//Автореф. дис. .канд. мед. наук. Саранск. -2007.-16 с.

44. Лысенко А.В. Дипептидный ноотроп ГВС-111 предотвращает накопление продуктов ПОЛ при иммобилизации / Лысенко А.В., Ускова Н.И., Островская Р.У. и соавт. // Экспериментальная и клиническая фармакология. М.: Фолиум, 1997.-Т. 60. -№5.-С. 15-18.

45. Ляшко В.Н. Клеточная рецепция глюкокортикоидов у человека и различия в типе реагирования на стресс / Ляшко В.Н., Налбандян М.А., Гринберг К.Н. // Вест. АМН СССР, 1989. № 9. - С. 73 - 80.

46. Маев И.В. Использование иммунокорректоров в лечении хронических эрозий желудка. /Маев И.В., Нефедова Ю.В., Вьючнова Е.С., Нефедова Е.А. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатолог., колонопрокт. — Т8. -№4. 1998. — С.33-38.

47. Маев И.В. Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки: различные подходы к современной консервативной терапии. / Маев И.В., Самсонов А.А. // Consilium medicum, 2004.- Т. 6.- № 1.- С. 22-25.

48. Маслова М.Н. Молекулярные механизмы стресса. / Маслова М.Н. // Российский физиологический журнал им.И.М.Сеченова. Том 91, №11, 2005, с.1320-1328.

49. Малашхия Ю.А. Иммунный барьер мозга (иммунология и ммунопатология спинномозговой жидкости)./ Малашхия Ю.А. II- М.: Медицина, 1986.- 160с.

50. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 т.- 14 изд. /(Машковский М.Д.//- М.: Новая волна, 2000.- Т. 1,2.

51. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. / Меерсон Ф.З. //- М.: Медицина, 1984. -272 с.

52. Меерсон Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. / Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. // М, 1988. - С. 76 - 87.

53. Меерсон Ф.З. Стресс-лимитирующие системы организма и новые принципы профилактической кардиологии / Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. // Современные проблемы кардиологии. М.: "Союзмединформ", 1989. - № 3. - С. 87 - 89.

54. Меерсон Ф.З. Адаптационная медицина: механизмы и защитные эффекты адаптации. /Меерсон Ф.З.// М. - СПб.: Интер. союз, 1993. - С. 331.

55. Меерсон Ф.З.Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. / Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю. // М.: Наука, 1993. -158 с.

56. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник. /Под ред. Меньшикова В.В. //М.: Медицина. 1987. -386 с.

57. Михайленко А.А. Практическая иммунология. / Михайленко А.А., Базанов Г.А., Покровский В.И., Коненков В.И. // Москва-Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2004.- 448 с.

58. Михайлов А. П. Острые язвы и эрозии пищеварительного тракта. / Михайлов А. П., Данилов А. М., Напалков А. Н., Шульгин В. Л. // Учебное пособие. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004.- 96 с.

59. Михайлова А.А., Василенко A.M. Участие нейропептидов в иммуномодуляции./ Михайлова А.А., Василенко A.M. // Иммунофизиология. /ред. Е.А. Корнева.- Л.: Наука, 1993.- С.592-605.

60. Михайлова А.А. Механизмы снижения иммунного ответа при стрессе и его коррекция миелопидом. / Михайлова А.А., Захарова Д.А.,

61. Кириллина Б.А., Садыбаева Д.В. // Стресс и иммунитет, Тез. докл. Всесоюзн. конф. "Стресс и иммунитет (психонейроиммунология)".- Л., 1989.- С.31-32.

62. Назаров И.П. Стресспротекция в хирургии повышенного риска. / Назаров И.П., Дыхно Ю.А., Островский Д.В. // Красноярск, 2003.- Т. 1.

63. Николай С.Л. Влияние антиангинальных средств на интенсивность перекисного окисления липидов в миокарде и печени крыс при гипербарической оксигенации / Николай С.Л. // Фармакол. и токсикол.-1988. -N5. С. 65 - 68.

64. Никоненко Б.В. Нарушения имммунологической реактивности и развитие инфекции./ Никоненко Б.В. Гордиенко С.П., Литвинов В.И. //Иммунология инфекционного процесса под редакцией В.И. Покровского, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинова.- М., 1993.- С. 193-199.

65. Новикова Г.В. Исследование продолжительности эффекта гипербарической оксигенации и бензодиазепиновых анксиолитиков при экспериментальном стрессе и у больных неврозами. Дисс. канд. мед. наук. /Новикова Г.В.// Саранск, 2002.-174 с.

66. Ожерелков С. В. Течение экспериментальной инфекции, вызванной вирусом Лангет у мышей, на фоне стресса, связанного с ограничением движения / Ожерелков С. В., Хозинский В. В., Семенов Б.Ф. // Вопросы вирусологии, 1986. -N 5.-С. 634 - 635.

67. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. / Панин Jl.~E.ll -Новосибирск: Наука, 1983.-232 с.

68. Панефельд Т. И. Функциональная активность иммуноцитов при стрессе. / Панефельд Т. И. // Иммунитет и иммунологические реакции. -Семипалатинск, 1981. С. 123 - 130.

69. Першин С.Б. Иммунореабилитация экспериментальной стрессогеиной иммунопатии ннзкоэнергетнческим инфракрасным лазерным излучением. / Першин С.Б., Зубкова С.М., Кончугова Т.В. и др. // Иммунология., 1996; № 4.-С.23.

70. Петровский Б.В. Гипербарическая оксигенация и сердечнососудистая система. / Петровский Б.В., Ефуни С.Н., Демуров Е.А., Родионов В.В. // М: Наука, 1987. - 327 с.

71. Подсеваткин В.Г. Морфофункциональная характеристика нейтрофилов при экспериментальном стрессе и действии кислорода под повышенным давлением /Подсеваткин В.Г., Кирюхина С.В., Балашов В.П. // Морфологические ведомости. № 3-4. - С. 51-53.

72. Покровский В.И. Иммунология инфекционного процесса. / Покровский В.И., Гордиенко С.П., Литвинова В.И. // М., 1994. - 305 с.

73. Полунина Т.Е. Симптоматические гастропатии у пожилых / Полунина Т.Е. //. Consilium medicum, 2006.- Т. 8, № 12.- с. 10-12.

74. Прохорова И.С. Лечение резистентных депрессий Л-триптофаном и декарисом (левамизолом)./ Прохорова И.С. //Вопросы психофармакотерапии.- М., 1984.- СЛ 21-127.

75. Пятницкий А.Н. Новый подход к лечению эндогенных депрессий с с ипользованием антиоксидантов./ Пятницкий А.Н., Бондарь В.В., Яковлева О.Б. //Бюл. эксперим. биол. и мед.-1994.-№ 2 .-С.218 .

76. Савченкова JI.B. Возможные механизмы антиоксидантного действия блокаторов кальциевых каналов при гипоксическом синдроме / Савченкова JI.B., Дзубан Е.М., Лукьянчук В.Д. // Экспериментальная и клиническая фармакология. М., 1996.-Т. 59. -№ 2. -С. 53-55.

77. Сайфутдинов P.P. Влияние шлемника байкальского на энергетический метаболизм головного мозга крыс при гипоксии: Автореф. дисс. канд. мед. наук. / Сайфутдинов P.P. // Томск, 1997. - 23 с.

78. Сайфутдинов P.P. Влияние экстракта шлемника байкальского на окисление янтарной кислоты митохондриями головного мозга крыс при гипоксии / Сайфутдинов P.P., Хазанов В.А.// Экспериментальная и клиническая фармакология. М., 1998.-Т. 61.-№5.-С. 27-29.

79. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. / Селье Г. // М.: Медгиз., 1960. 254 с.

80. Селье Г. Стресс без дистресса. / Селье Г. // М.: Прогресс, 1982.124 с.

81. Семченко В.В. Гистологическая техника: учебное пособие. — 3-е изд., доп. и перераб. / Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.Н.,

82. Артемьев В.Н. // — Омск Орел: Омская областная типография, 2006. — 290 с.

83. Студенцова И.А. Изучение антиацидотической активности димефосфона. / Студенцова И.А., Заиконникова И.В., Визель А.О., Гараев Р.С. //Каз. мед. журн. 1989. - №2. - С.118-120.

84. Студенцова И.А. Фармако-токсикологическя характеристика димефосфона. / Студенцова И.А., Гараев Р.С., Мокринская И.С. // Экологические проблемы фармакологии и токсикологии: Тез. докл. науч. конф.-Казань, 1990. С.101 -102.

85. Студенцова И.А. Итоги клинической апробации димефосфона как вазоактивного средства, нормализующего функции нервной системы. /Студенцова И.А., Данилов В.А., Хафизьянова Р.Х. // Каз. мед. журн. -1995. -№3.-С. 101-102.

86. Судаков К.В. Новые акценты классической концепции стресса / Судаков К.В. //Бюлл. эксп. биол. мед.- 1997.- Т. 123.-N2.- С.124-130.

87. Тарасова Р.И. Синтез и фармакологические свойства фосфорилацетогидразонов и фосфорилацетогидразинов /Р.И. Тарасова, О.В.

88. Воскресенская, И.И. Семина, В.П. Балашов, Т.В. Курмышева, В.В.// Москва Химико-фармацевтический журнал.- 2002.- Т. 36. №6.- С. 17-20.

89. Ткаченко Е.И. НПВП-индуцированная гастропатия: проблемы и пути их решения./ Ткаченко Е.И., Успенский Ю.П., Пахомова И.Г. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2006.- №6,- С. 31-36.

90. Торопова А.А. Морфофункциональная характеристика экспериментальных повреждений желудка и их фитокоррекция. Автореферат дисс. канд. мед. наук. / Торопова А.А. // Улан-Удэ, 2006,- 20 с.

91. Успенский Ю.П. Клинико-морфологическая характеристика эрозивных гастродуоденитов: Автореф. дис. .д-ра мед. наук. / Успенский Ю.П.//-М., 1994.-С.23.

92. Филиппова О.В.Влияние тимогена на состояние сердца при реперфузии./ Филиппова О.В., Резников К.М., Алабовский В.В., Хамбуров В.В., Винокуров А.А. //Экспериментальная и клиническая фармакология .1997.- Том 60.- №3.- С.27-29.

93. Фролов Б.А. Стрессорные нарушения функций иммунной системы: Автореф. дисс. докт. мед. наук. / Фролов Б.А. // Л. 1987. - 40 с.

94. Хафизьянова Р.Х. Повышение устойчивости организма к гипоксии под влиянием димефосфона. / Хафизьянова Р.Х. // Тез. докл. Всеросс. конф. "Науч. раб. на кафедре как основа твор. роста преподавателя". — Волгоград, 1993. — С.88-89.

95. Хомерики С.Г. Скрытые аспекты клинического применения Н2-блокаторов. Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии. / Хомерики С.Г., Хомерики Н.М. // Фарматека, 2002. -№9.-С. 9-15.

96. Циммерман Я.С. Роль симпатической нервной системы в патогенезе и саногенезе язвенной болезни (теоретические и практические аспекты). Обзор/Я.С. Циммерман, С.Д.Гройсман: Москва//Мед. реф.ж. Раздел .Гастроэнтерология,- 1979, №2.-С.31 -32.

97. Циммерман Я.С. Хронический гастрит и язвенная болезнь / Я.С. Циммерман: Пермь // Очерки клинической гастроэнтерологии. — 2000. — Вып. 1.- 255 с.

98. Цыбулькина В.Н. Предпосылки к применению димефосфона для лечения эрозивно-язвенных заболеваний гастродуоденальной зоны. /Цыбулькина В.Н., Новожилова А.А. //Казанский медицинский журнал. -2000.-№1.-С.34.

99. Чирков A.M. Функциональная активность симпатоадреналовой системы и стероидпродуцирующих желез при стрессорных воздействиях у обезьян: Дисс. канд. мед. наук. / Чирков A.M. // Сухуми, 1983. - 252 с.

100. Шаляпина В.Г. Кортиколиберинергические механизмы нейроэндокринной регуляции стресса / Шаляпина В.Г., Рыбникова Е.А., РакицкаяВ.В. // Рос. Физиол. Журн. им. И.М.Сеченова.- 2000.- Т.86.- N1.-C. 1435-1445.

101. Шаляпина В.Г. Индивидуально-типологические особенности гормональных реакций у собак при психоэмоциональном стрессе /

102. Шаляпина В.Г., Войлокова Н.Л., Суворов Н.Ф., Ракицкая В.В. // Рос. Физиол. Журн. им. И.М.Сеченова. -2001.- Т.87.- N7.-C.926-932.

103. Шаляпина В.Г. Реактивность гипофизарно-адренокортикальной системы на стресс у крыс с активной и пассивной стратегиями поведения / Шаляпина В.Г., Ракицкая В.В.// Рос. физиол. журн. им. И.М.Сеченова.-2003.- T.89.-N5.-C.585-590.

104. Шостак Н.А. О желудочно кишечных кровотечениях, индуцированных нестероидными противовоспалительными препаратами. /Шостак Н.А., Аксенова А.В., Рябкова А.А. //Тер. арх. - 2000. - №5. - С.60-61.

105. Якобсон Г.С. Состояние стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем при остром инфаркте миокарда / Якобсон Г.С., Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н. // Пат. физиол. и эксперим. терапия. М., 1994.-№4.-С. 59-64.

106. Якупова С.П. Вегетокоррегирующие свойства димефосфона у больных ревматоидным артритом. /Якупова С.П., Салихов И.Г., Исмагилов М.Ф. //Тез. докл. IX Росс. нац. конгр. "Человек и лекарство". Москва, 2002.-С. 535.

107. Ader Robert, Cohen Nicolas, Felten David. Psychoneuroimmunology: interractions between the nervous system and the immune system./ Ader Robert, Cohen Nicolas, Felten David. //Lancet.- 1995. P.39-46. P.30-34.

108. Aguilera G. Corticotropin releasing hormone, receptor regulation and stress response / Aguilera G // Trends Endocrinol. Metab., 1998. № 9. - P. 329 -336.

109. Amnon S. Time Trends of Ulcer Mortality in Europe. / Amnon S. // Gastroenterology, June 2007, volume 132, №7.-P.14-19.

110. Armario A. Comparison of the behavioral and endocrine response to forced swimming stress in five inbred strains of rats / Armario A., Gavalda A., Marti O. //Psychoneuroendocrinology.-1995.- Vol.20.- P.879-890.

111. Armario A. Long-term effects of a single exposure to immobilization on the hypothalamic-pituitary-adrenal axis: neurobiologic mechanisms / Armario A., Marti O., Valles A., Dal-Zotto S., Ons S //Ann. N.Y.Acad.Sci.-2004.-Vol.1018.-P. 162-172.

112. Armario A. A single exposure to severe stressors causes long-term desensitisation of the physiological response to the homotypic stressor/ Armario A., Valles A., Dal-Zotto S., Marquez C, Belda X.// Stress.- 2004.- Vol.7.- N3.- P. 157-172.

113. Arsenijevic Y. Isolation of multipotent neural precursors residing in the cortex of the adult human brain. / Arsenijevic Y., Villemure J.G., Brunet J.F. et al. //Exp. Neurol., 2001.-M.-170.-№l.-p. 48-62.

114. Baker D. Corticotropin-releasing hormone in depression and posttraumatic stress disorders / Baker D., Geratioti T.D. // Peptides.- 2001.-Vol.22.- P.845-851.

115. Baldwin D.R. The effects of voluntary exercise and immobilization on humoral immunity and endocrine responses in rats / Baldwin D.R., Wilcox Z.C., Zheng G. // Physiol. Behav.- 1997.- Vol.61.- N3.- P.447-453.

116. Blaser M.J. Helicobacter pylori and gastric disease. / Blaser M.J. // Br. Med. J., 1998. 316.-P.1507-1510.

117. Boer W. A. How to treat Helicobacter pylori infection shuld treatment strategies de based on testing bacterial susceptibility? A personal viewpoint / Boer W. A., Tytgal G. N. J. //Eur. J. С Gastroenterol., Hipatol. -1996. -Vol.8.№7. P. 709-717.

118. Boer W.A. Two-day 'weekend' lansoprazole-quadruple therapy or Helicobacter pylori infection. / Boer W.A. et al. // Aliment. Pharmacol. Ther., 1998.- 12(1).—P.77-81.

119. Bolanos Juan P. Roles of oxide in brain hipoxia-ischemia / Bolanos Juan P., Almeica Angeles.// Biochim. et biophys. acta. Bioeneng. Jncl. Rev., Bioenerg., 1999. № 2 - 3. - P.415-436.

120. Boranic H. Suppression of immune response in rat by stress and drugs interfering with metabolism of serotonin/ Boranic H. et al. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1987. Vol.496., P. 485-491.

121. Bower B. Ouestions of mind over immunity: Scientists rethink the link between psychology and immune function. / Bower B. //Sci. News.- 1991.-№14.-P.216-217.

122. Bremner G.D. Elevated corticotropin releasing factor concentration in posttraumatic stress disorders / Bremner G.D., Licino I., Darnell A. // Amer.J.Psychiatry.- 1997.-Vol. 154.-N5.-P.624-629.

123. Buller K.M. Systemic apomorphine alters HPA axis responses to interleukin-1 beta administration but not sound stress / Buller K.M., Crane J.W., Spencer S.J., Day T.A. //Psychoneuroendocrinology. 2003 Aug; 28(6):715-32.

124. Checkley S. The neuroendocrinology of depression and chronic stress/ Checkley S. //Brit.Med.Bul.- 1996.- Vol.52.- P.597-617.

125. Christofer J. Effect of Risk Factors on Complicated and Uncomplicated Ulcer in the TARGET Lumiracoxib Outcomes Study. / Christofer J. Hawkey. // Gastroenterology, volumel33, №1, July 2007. P. 16 24.

126. Cook D.J. Stress ulcer prophylaxis in critically ill patients. / Cook D.J., Reeve B.K., Guyatt G.H. et al. // JAMA 1996, 275: 308-314.

127. Cook D.J. A comparison of sucralfate and ranitidine for the prevention of upper gastrointestinal bleeding in patients requiring mechanical ventilation./ Cook D.J., Guyatt G.H., Marshall J. et al.: // N Engl J Med 1998, 338:791-797.

128. Cooper C.L. The role of stress in the health and disease processes/ Cooper C.L. // Br. J. Hosp. Med. 1993. - Vol. 50, № 9. - P. 3 - 16.

129. Desiderato O. Development of gastric ulcers in rats following stress termination / Desiderato O., MacKinnon J., Hissom H. // J.comp.physiol.Psychol.- 1974.- Vol.87.- P.208-214.

130. Dhabhar F.S. Enhancing versus suppressive effects of stress hormones on skin immune function / Dhabhar F.S., McEwen B.S. // Neuroendocrinology.-1997.- Vol.65.- P.360-368.

131. Dorian В. Abberation in lympocyte subpopulations and function during psychological stress./ Dorian В., Garfun Kel P.,Brown G. et al. //Clin exp. Immunol. 1982. - Vol. 50. - P. 132-138.

132. Egger J. Phisiologische Korrelate kognitive emotionaler Prozesse Befunde zur empirischen Psychosomatic (Teil 2). / Egger J. Stress, Angst, Krankheit // Heilkunst, 1989. Bd. 102. - № 10. - S. 406 - 418.

133. Freitas F.L. Sobre о uso prolongado e perina tal de drogas / Freitas F.L., Palermo N. J., Nasello A.G. // Ciene e cult., 1988. V. 40. - №4. p. 323 -333.

134. Felix R.A. P-glycoprotein expression in rat brain endothelial cells: evidence for regulation by transient oxidative stress / Felix R.A., Barrand M.A. // J. Neurochem., 2002. 80.-№l.-P. 64-72.

135. Franci L. Una ricerca esplicativa sullo stress degli infermieri / Franci L., Ravecca D., Ferretti P.G. et al. // G. Gerontol., 1994. V. 42. - № 12. - P. 949.

136. Freidin E. Frustration and sexual behavior in male rats/ Freidin E., Mustaca A.E. // Learn Behav.- 2004.- Vol.32.- N3.- P.311-320

137. Gates E. Stress appaling / Gates E. // Occup. Safety and Health., 1995.-V. 25.-№9.-P.38-41.

138. Grossberg Georg Т. Benzodiazepine treatment of late-life anxiety disorders. / Grossberg Georg T. //Biol. Psychiat. :Proc. 5th World. Congr., Florence, 9-14 June, 1991 .Vol. 1 .-Amsterdam, ets.,1991 .-P. 765-766.

139. Hanish E. Sympathetic influence upon gastric function implications for peptic ulcer disease / Hanish E. // Hepato-gastroent. - 1985. - Vol. 32. - №. 5. -P. 217-219.

140. Hanna-Pladdy B. Stress as a diagnostic challenge for postconcussive symptoms: seguelae of mild traumatic brain injury or physiological stress response / Hanna-Pladdy В., Berry Z.M., Bennett T. et al. // Clin. Neuropsychol., 2001. -№3.- P. 289 -304.

141. Jasnow A.M. Acute and chronic social defeat suppresses humoral immunity of male Syrian hamsters (Mesocricetus auratus) / Jasnow A.M., Drazen D.L., Huhman K.L., Nelson R.J., Demas G.E. // Horm. Behav.- 2001.- Vol.40.-N3.- P.428-433.

142. Jiang C.G. Immunosuppression in mice by cold water stress. / Jiang C.G., Morrow-Tesch J.L., Beller D.I. // Brain, Behav.a immunity. 1990. - Vol. 4. - P. 278-291.

143. Keller S. Stress-induced suppression of immunity in adrenalectomized rats/ Keller S., Weiss J.M., Schleifer S.J., Miller N.E., Stein M // Science.- 1983.-Vol.221.-N4617.-P. 1301-1304.

144. Kim J.J., Yoon K.S. Stress: metaplastic effects in the hippocampus / Kim J.J., Yoon K.S. // Trends Neurosci., 1998. Vol. 21. - № 12. - P. 505 - 509.

145. Laader M.H. Problems in the diagnosis and treatment of anxiety disorders. / Laader M.H. //Biol. Psychiat. :Proc. 5th World. Congr., Florence, 914 June, 1991.Vol. 1 .-Amsterdam, etc., 1991 .-P.732-734.

146. Lam N.P. National survey of stress ulcer prophylaxis. / Lam N.P., Phuong-Dung Т., Crawford S.Y., Patel S // Crit Care Med 1999, 27:98-103.

147. Lehmann J. Effect of a single maternal separation at different pup ages on the corticosterone stress response in adult and aged rats / Lehmann J., Russig H., Feldon J., Pryce C.R.// Pharmacol. Biochem. Behav. 2002.- Vol.73.- N1.- P. 141-145.

148. Leonard B.E. Stress, norepinephrine and depression / Leonard B.E. // J. Psychiatry Neurosci., 2001. Sep. 26. - Suppl. 11-16.

149. Leonard B.E. Stress, norepinephrine and depression / Leonard B.E. // J. Psychiatry Neurosci., 2001. Sep. 26. - Suppl. 11-16.

150. Levine S. The psychoendocrinology of stress / Levine S. // Ann.N.Y.Acad.Sci.- 1993.-Vol.697.-P.:61-69.

151. Lhuilier D., Grosdeva T. Stress et conduite de systeme complexe / Lhuilier D., Grosdeva T. // Energ.Sante, Serv. Etud. Med., 1993. V. 4. - № 3. -P. 50.

152. Liu J. Immobilisation stress causes oxidative damage to lipid, protein, and DNA in the brain of rats / Liu J., Wang X., Shigenaga M.K. et al. // FASEB J., 1996. -Nov. 10.-№13.-P. 1532-1538.

153. Marti O. Anterior pituitary response to stress: time-related changes and adaptation / Marti O., Armario A. // Int. J. Dev. Neurosci.- 1998.- Vol. 16.-N3-4.-P.241-260.

154. Marti O. Activation of the hypothalamic-pituitary axis in adrenalectomised rats: potentiation by chronic stress/ Marti O., Harbuz M.S., Andres R., Lightman S.L., Armario A. // Brain Res.- 1999.-Vol. 821.-P. 1-7.

155. Marquez С. The hypothalamic-pituitary-adrenal and glucose responses to daily repeated immobilisation stress in rats: individual differences / Marquez

156. C, Nadal R., Armario A. //Neuroscience.- 2004.- Vol.123.- N3.- P.601-612.

157. Matuszewich L. Altered forebrain neurotransmitter responses to immobilization stress following 3,4 methylenedioxymethamphetamine / Matuszewich L., Filon M.E., Finn D.A., Yamamoto B.K. // Neuroscience., 2002. -110. -№ 1. P. 41 -48.

158. Mc Ewen B.S. Stress and cognitive function / Mc Ewen B.S., Sapolsky R.M. // Curr. Opinion Neurobiol., 1999. Vol. 5. - № 2. - P. 205 - 216.

159. Mc Ewen B.S. Protecting and damaging effects of stress mediators / Mc Ewen B.S. //New Eng. J. Med.- 1998.- Vol.338.- P.171-179.

160. Meichembaum D. Stress reduction and prevention. Meichembaum D., /Jaremko M.E. // -New York, London: Plenum Press, 1983. 444 p.

161. Melia K.R. Induction and habituation of immediate early gene expression in rat brain by acute and repeated restraint stress / Melia K.R., Ryabinin A.E., Schroeder R. et al. //J. Neurosci., 1994. № 14. - P. 5929 - 5938.

162. Merlot E. Suppression of restraint-induced plasma cytokines in mice pretreated with LPS / Merlot E., Moze E., Dantzer R., Neveu P.J.// Stress.-2002.- Vol.5.- N2.- P.131-135.

163. Mercier S. L.Behavioural changes after an acute stress: stressor and test types influences / Mercier S., Canini F., Buguet A., Cespuglio R., Martin S., Bourdon // Behav. Brain Res.- 2003.- Vol.139.-N1-2.- P.167-175.

164. Metz C.A. Impact of multiple risk factors and ranitidine prophylaxis on the development of stress-related upper gastrointestinal bleeding: A prospective, multicenter, double-blind, randomized trial./ Metz C.A., Livingston

165. D.H., Smith J.S., Larson G.M., Wilson T.H // Crit. Care Med. 1993, 21:18441849.

166. Minano F.J. Protective effect GABA and sodium valproate on stress-induced gastric lesions in guinea-pigs / Minano F.J., Serrano J.S., Duran J.A., Sansibrian M. // J.Pharm. Pharmacol., 1985.- Vol. 37. P. 675 - 677.

167. Moraska A. Treadmill running produces both positive and negative physiological adaptations in Sprague-Dawley rats / Moraska A., Deak Т., Spencer R.L., Roth D., Fleshner M./l Am. J. Physiol. Regul. Integr. 2000.-Vol.279.-N4.-P. 1321-1329.

168. Palermo-Neto J. Effects of physical and psychological stressors on behavior, macrophage activity, and Ehrlich tumor growth / Palermo-Neto J., de Oliveira Massoco C, Robespierre de Souza W. // Brain Behav. Immun.- 2003.-Vol.17.-Nl.- P.43-54.

169. Patterson S.M. Effects of acute mental stress on serum lipids: mediating effects of plasma volume / Patterson S.M. // Psychosom Med., 1993. -Vol. 55, № 6. P. 525 - 532.

170. Pencea V. Neurogenesis in the subventricular zone and rostral migratory stream of the neonatal and adultprimate forebrain./ Pencea V., Bingaman K.D., Freedman L.J., Luscin M.B. // Exp. Neurol., 2001. Nov. 172. -№ l.-P. 1 - 16.

171. Pijlman F.T. Physical but not emotional stress induces a delay in behavioural coping responses in rats / Pijlman F.T., van Ree J.M. // Behav. Brain Res.- 2002.- Vol.136.- N2.-P.365-373.

172. Pijlman F.T. Cueing unavoidable physical but not emotional stress increases long-term behavioural effects in rats / Pijlman F.T., Wolterink G., van Ree J.M. // Behav. Brain Res.- 2002.- Vol.134.- N1-2.- P.393-401.

173. Radahmadi M. Effects of stress on exacerbation of diabetes mellitus, serum glucose and Cortisol levels and body weight in rats / Radahmadi M., Shadan F., Karimian S.M., Sadr S.S., Nasimi A. // Pathophysiology.- 2005.-P.14-15.

174. Ruiz de Gordoa J.C. Modification of rat plasma lipoproteins induced by acute immobilization stress. / Ruiz de Gordoa J.C. //- Psychosom. Med., 1994.- Vol. 56, № 6. P. 486 - 492.

175. Sanchez O. Acute stress-induced tissue injury in mice: differences between emotional and social stress / Sanchez O., Arnau A., Pareja M. et al. // Cell Stress Chaperones, 2002.-№l.-P. 36-46.

176. Shader R.I. Stress, fear, and anxiety. In J.P.Tupin, D.S. Harnett (eds.), Handbook of Clinical Psychopharmacology. / Shader R.I. // Northvale, NJ: Aronson, 1988. P. 73-96.

177. Shanks N.Early-life exposure to endotoxin alters hypothalamic-pituitary-adrenal function and predisposition to inflammation / Shanks N.,

178. Windle R.J., Perks P.A., Harbuz M.S., Jessop D.S.Ingram CD., Lightman S.L. // Proc. Natl. Acad. Sci. U SA.- 2000.-Vol.97.-N10. P.5645-5650.

179. Schepp W: Stress ulcer prophylaxis: still a valid option in the 1990's. / Schepp W// Digestion 1993, 54:189-199.

180. Schmidt A.M. The multiligand receptor RAGE as a progression factor amplifying immune and inflamatory responses. / Schmidt A.M., Yan S.D., Yan S.F., Stem D.M. // J.Clin. Jnvest., 2001. -108. № 7. - P. 949 - 955.

181. Silberman D.M. Effects of chronic mild stress on lymphocyte proliferative response. Participation of serum thyroid hormones and corticosterone/ Silberman D.M., Wald M., Genaro A.M. // Int.Immunopharmacol- 2002.- Vol.2.- N4.- P.487-497.

182. Smith M.A. Stress and glucocorticoids affect the expression of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 m RNAs in the hippocampus/ Smith M.A., Makino S., Kvetnansky R., Post R.M. // J. Neurosci., 1995. № 15. -P. 1768-1777.

183. Spiro H. Peptic ulcer is not a disease, only a sign! Stress is a factor in more than a few dyspeptics. / Spiro H. // Psychosom. Med. 2000. 62(2). - P. 186-187.

184. Solberg L.C. Depressive-like behavior and stress reactivity are independent trails in a Wistar-Kyoto and Fisher 344 cross / Solberg L.C., Ahmadiych N., Baum A.E. et al.// Psychiatry.- 2003.-Vol.8.-P.423-433.

185. Solomon G.F. Emotion, immunity and phylosophical perspective. // Stress, immunity and aging / Solomon G.F. // Marsel Dekker, Inc., N.Y., Basel, 1984. P.l-10.

186. Stevens A. Human Histology/ Stevens A., Lowe J.S.//, 2nd, London: Mosby, 1997.-368 P.

187. Sneider H. Esomeprazole 40 mg administered intravenously has similar safety and efficacy profiles to the oral formulation in patients with erosive esophagitis./ Sneider H., Van Rensburg C., Schmidt S. et al. // Digestion 2004; 70: P. 250-256.

188. Tan Z. PVN c-fos expression, HPA axis response and immune cell distribution during restraint stress / Tan Z., Nagata S. // J. UOEH.- 2002.-Vol.24.- N2.- P. 131-149.

189. Tafet G.E. Psychoneuroendocrinological studies on chronic stress and depression/ Tafet G.E., Smolovich J. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004.- N1032.-P.276-278.

190. Tanaka Masatochi. Seishin igaku./ Tanaka Masatochi //Clin. Psychiat. .- 1994.-36, № l.-P 43-48.

191. Thome J. Stress differentially regulates synaptophysin and synaptotagmin expression in hippocampus / Thome J., Pesold В., Baader M. et al.// Biol. Psychiatry, 2001. Nov. 15. -№10.-P. 809-812.

192. Weinstock M.A. Alterations induced by gestational stress in brain morphology and behaviour of the offspring / Weinstock M.A. // Prog. Neurobiol., 2001.- №5. -P. 427-451.

193. Wormsley K.G. Association between duodenal ulcer and other diseases. /Wormsley K.G. Scand. J. //Gastroenter. 1980. Vol. 15, №63. P. 2735.

194. Yamamotova A. The influence of repeated prestressors on single stress response in rats/ Yamamotova A., Starec M., Raskova H., Rokyta R. // Pharmacol. Toxicol. 2000. - Vol.86.-Nl.-P.8-15.

195. Yoshitatsu, Molntyre Todd, Skolnick Phil, Arora Prince K. // Life Sci.- 1991.-№9.- P. 671-676.

196. Zha H. B. An serum immunodepressive factor in rat under restriction stress. / Zha H. В., Fan S. B. // 1st Intern. Congress ISNIM (4th Intern. Workshop, on Neuroimmunomodulation), Florence, Italy. May 23-26, 1990. -Abstr. 1990. - P. 526.

197. Zelena D. Role of hypothalamic inputs in maintaining pituitary-adrenal responsiveness in repeated restraint / Zelena D., Mergl Z., Foldes A., Kovacs K.J., Toth Z., Makara G.B. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab.- 2003.-Vol.285.-N5.-P.ll 10-1117.