Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина

Шашкова, Ольга Александровна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Шашкова, Ольга Александровна Санкт-Петербург 2009 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина

На правах рукописи

ШАШКОВА Ольга Александровна

ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АУТОАНТИТЕЛ ПРОТИВ

ТИРЕОГЛОБУЛИНА

14.00.36 — аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2009

003463531

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении Российски научный центр радиологии и хирургических технологий Министерств здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Климович Владимир Борисович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Сесь Татьяна Павловна

доктор медицинских наук, профессор Бубнова Людмила Николаевна

Ведущее учреждение: Федеральное государственное учреждение

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М.Никифорова Министерства Российской Федерации по делам гражданской обороны, чрезвычайным ситуациям и ликвидации последствий стихийных бедствий

Защита состоится " ¿к-ся. 2009 года в /3 часов на заседани

Диссертационного совета Дм 001.022.01 при Государственном учреждени Научно-исследовательский институт экспериментальной медицинь Российской академии медицинских наук (197376, Санкт-Петербург Каменноостровский пр., д.69/71).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ Научно исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН по адресу 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12.

Автореферат разослан " 2009 года

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук

Л.А. Бурова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Антитела, которые выявляют во взрослом рганизме при очевидном отсутствии иммунизирующих стимулов, а также у юворожденных и у стерильных животных, называют естественными [Avrameas, 1991]. Они способны реагировать со многими чужеродными антигенами, что дало овод обозначать их как полиреактивные [Notkins, 2004]. Эти антитела также заимодействуют с аутоантигенами, поэтому их называют естественными утоантителами (ЕАА) [Avrameas, Ternynk, 1995]. Репертуар ЕАА формируется на анних этапах онтогенеза и остается стабильным в течение жизни индивида [МегЫ t al., 2007]. Большая часть ЕАА кодируется V генами зародышевой линии, тносится преимущественно к IgM и обладает низкой (К^ 10 4-10 7 mol/1) ффинностыо [Coutinho, Kazatchkine, 1995]. Четко установленным различием между АА и монореактивными антителами, выявляемыми при иммунизации и при атологических состояниях, является их эпитопная специфичность [Stahl et al., 2000; hou et al., 2007]. ЕАА распознают главным образом эволюционно консервативные нтигенные детерминанты [Bouvet, Dighiero, 1998].

Роль ЕАА в организме остается недостаточно изученной. Показано, что с ими связана бактерицидная активность сыворотки крови, что они участвуют в еакциях нейтрализации, опсонизации и активации системы комплемента [Zhou et 1., 2007]. Поэтому предполагают, что ЕАА являются одним из компонентов первой инии защиты от инфекций. Возможно, они принимают участие в поддержании естественной толерантности [Boes et al., 1998, Ehrenstein et al., 2000, Reitan et al., 2002].

К числу аутоантигенов, с которыми реагируют ЕАА в норме и при патологии, относится тиреоглобулин (Тг). В крови здоровых людей и животных обнаруживают значимые количества ЕАА против Тг. При развитии аутоиммунного тиреоидита их содержание по сравнению с нормой возрастает в десятки раз [Gentile et al., 2004], а репертуар распознаваемых эпитопов сужается [Caturegli et al., 1994]. На молекуле Тг выявлено около 40 антигенных детерминант [Ruf et al., 1987], степень вовлечения которых в продукцию ЕАА и во взаимодействия с ними может быть различной.

Данные о биологической активности антител против Тг ограничены. В большей части исследований были использованы выделенные из сыворотки поликлональные антитела. Введение таких препаратов экспериментальным животным не дало однозначных результатов [Vladutiu, Rose, 1971; Inoue et al., 1993; Tomer et al., 1997]. В работах по получению гибридом из клеток неиммунизированных взрослых или новорожденных мышей [Dighiero et al., 1983; Ternynck, Avrameas, 1986] свойства ЕАА против Тг не исследованы. Моноклональные антитела (МКАТ) способны распознавать отдельные эпитопы молекул антигенов. Это дает возможность выявить те детерминанты Тг, которые взаимодействуют с ЕАА, а также оценить влияние ЕАА с разной эпитопной специфичностью на функции щитовидной железы.

Цель исследования состояла в получении моноклональных вариантов ЕАА против Тг, изучении их свойств и возможной роли в развитии нарушений тиреоидного статуса у мышей.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи. 1. Создать панель МКАТ, распознающих Тг мыши.

2. Исследовать эпитоппуго специфичность и перекрестную реактивност полученных МКАТ.

3. Сравнить свойства МКАТ и ЕАА, присутствующих в сыворотке интактны мышей.

4. Изучить влияние МКАТ с различной эпитопной специфичностью на тиреоидны статус мышей.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Получена панель МКАТ, распознающих 19 эпитопов на молекуле Тг мыши.

2. На основании данных об эпитопной специфичности и перекрестной реактивност( среди полученных МКАТ отобраны реагенты, которые представляют собо моноклональные варианты ЕАА.

3. Введение МКАТ, обладающих свойствами ЕАА, вызывает у мышей изменени структуры и функции щитовидной железы.

4. Иммунизация мышей Тг на фоне введения МКАТ, связывающих некоторы эпитопы Тг, вызывает развитие лимфоцитарной инфильтрации щитовидной железы.

Научная новизна работы.

1. Создана наиболее широкая из описанных в литературе панелей МКАТ распознающих эволюционно консервативные эпитопы Тг мыши.

2. Впервые устаЕювлено, что репертуар эпитопов Тг, распознаваемых ЕА" интактных инбредных мышей, варьирует индивидуально и не коррелирует генетически обусловленной восприимчивостью животных к индукци аутоиммунного тиреоидита.

3. Впервые показано, что введение моноклональных ЕАА, распознающих некоторы эпитопы Тг мыши, вызывает нарушения синтеза тиреоидных гормонов и структурь ткани щитовидной железы.

Теоретическая и практическая значимость работы. Работа направлена на решение фундаментальной проблемы иммунологии расшифровку механизмов, участвующих в нарушении иммунологическо толерантности при развитии аутоиммунных заболеваний. В результат исследования созданы МКАТ, представляющие собой моноклональные варианть ЕАА. Полученные реагенты открывают новые возможности для изучени репертуара ЕАА против Тг и антигенной структуры Тг животных различных видов.

Данные о влиянии моноклональных вариантов ЕАА на тиреоидный стату мышей согласуются с гипотезой, что ЕАА могут участвовать в развита аутоиммунных патологических процессов. Полученные МКАТ могут быт использованы при разработке новых экспериментальных моделей аутоиммунног тиреодита.

Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Фонд Фундаментальных Исследований (гранты 99-04-49823,01-04-49781 и 05-04-48862).

Личный вклад автора в проведение исследований. Основные данные представленные в работе, получены лично автором. Автором проведены вс экспериментальные исследования на животных, изучен их тиреоидный статус I свойства ЕАА. Получение МКАТ и изучение их свойств осуществлялось совмести с группой сотрудников лаборатории гибридомной технологии ФГУ Российског научного центра радиологии и хирургических технологий МЗСР РФ. Авторо выполнены все этапы создания гибридом, получения МКАТ, изучения их свойств. Обработка результатов экспериментов и подготовка публикаций сделаны автором

диссертации совместно с научным руководителем. При оценке гистологического материала автор пользовался консультативной помощью сотрудников лаборатории иммуногистохимии, группы патоморфологии с прозектурой ФГУ Российского научного центра радиологии и хирургических технологий МЗСР РФ и кафедры цитологии и гистологии Санкт-Петербургского государственного университета.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на XII Международном совещании по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2001), Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2002), Всероссийских форумах "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 1999, 2002, 2003, 2005, 2006), Международной научно-практической школе-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), 6-ой и 7-ой школах Джона Хамфри по иммунологии (Пущино, 2002; Москва, 2005), 5-ом Конгрессе "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002), научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2003), II и 111 съездах иммунологов России (Сочи, 1999, Екатеринбург, 2004), научной конференции "От лучей Рентгена - к инновациям XXI века: 90 лет со дня основания первого в мире рентгено-радиологического института" (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации. Материалы диссертации отражены в 6 статьях и 21 тезисах.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, включающей методы и результаты исследования; обсуждения; выводов; списка литературы, состоящего из 281 источника; приложения. Работа изложена на 127 страницах и содержит 29 рисунков и 19 таблиц.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Животные. В работе были использованы мыши линий SJL/j, СВА, BALB/c, а также межлинейные гибриды Fl(SJL/jxBALB/c).

Антигены. Использованы коммерческие препараты Тг человека (Алкор, Аллерген, Hytest), быка и свиньи (Sigma), ацетилхолинэстеразы из эритроцитов быка, миозина из сердца свиньи, инсулина быка (Sigma), тиреоидной пероксидазы (Hytest), трийодтиронина (ТЗ) и тироксина (Т4) (Алкор). Препараты Тг мыши, крысы, человека и курицы были получены из гомогенатов щитовидных желез методом солевой экстракции с последующим осаждением полунасыщенным нейтральным раствором сульфата аммония. Тг человека и крысы подвергали дополнительно очистке методом гель-фильтрации. Тг мыши выделяли методом аффинной хроматографии на колонке с иммобилизованными МКАТ, полученными в ходе выполнения настоящей работы.

Антитела и антисыворотки. Для изучения взаимодействия с антигенами МКАТ и/или сывороточных антител использовали полученные в лаборатории аффинно очищенные кроличьи антитела против иммуноглобулинов мыши, меченные пероксидазой из корней хрена, козьи антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные со щелочной фосфатазой (Sigma), МКАТ против ТЗ и Т4 (Алкор). Изотипы мышиных иммуноглобулинов определяли при помощи моноспецифических антисывороток (Calbiochem).

При определении концентрации мышиных иммуноглобулинов использовал! полученные в лаборатории аффинно очищенные кроличьи антитела против F(ab) фрагментов иммуноглобулинов мыши.

Для изучения свойств ЕАА, распознающих Тг, получены образцы пуловых i индивидуальных сывороток крови интактных мышей линий SJL/j, СВА и BALB/c глобулиновая фракция из которых выделена с помощью осаждения сульфато аммония.

Твердофазный иммуноферментный анализ. Способность антите взаимодействовать с Тг мыши, крысы, человека, быка, свиньи, курицы, ТЗ и Т изучали методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) Для изучения специфичности МКАТ и ЕАА в отношении эпитопов Тг мыш использовали метод ингибиторного ИФА. Перекрестную реактивность МКАТ ацетилхолинэстеразой, тиреоидной пероксидазой, кардиомиозином и инсулино исследовали методами непрямого и ингибиторного ИФА. В сыворотке кров определяли концентрацию Т4 методом ингибиторного ИФА при помощи набор реагентов "ТироидИФА-тироксин-01" для количественного определения общего Т в сыворотке крови человека (Алкор) и титр антител против Тг крысы при помопц метода непрямого ИФА.

Гистологическое и иммуногистохимическое исследования. Щитовидны железы мыши, крысы, человека, собаки, кошки и голубя фиксировали в 10%-ном водном формалине, заключали в парафин и готовили срезы толщиной 3-5 мкм. Срезы ткани окрашивали гематоксилином и эозином. Взаимодействие МКАТ с Т на срезах ткани щитовидных желез мыши, кошки, собаки и голубя было изучено при помощи непрямого иммуногистохимического метода.

Получение гибридомных клеток-продуцентов МКАТ против Тг мыши. Мышей линии SJL/j иммунизировали экстрактом из ткани щитовидной железы крысы или Тг человека в количестве 10-20 мкг на инъекцию: первый раз внутрикожно, второй - подкожно, в полном и неполном адъюванте Фрейнда, соответственно (Sigma). В последующем 5-30 мкг антигена вводили внутрибрюшинно в фосфатно-солевом буфере. Гибридомы получали согласно общепринятой методике [Galfe et al., 1977] путем слияния иммунных клеток селезенки или смеси клеток селезенки, костного мозга, паховых и подколенных лимфатических узлов и клеток миеломного штамма 653А.

Присутствие в культуралыюй жидкости антител к иммуногену выявляли помощью метода непрямого ИФА. Позитивные культуры клонировали методо лимитирующих разведений. Гибридомы-продуценты МКАТ, распознающих Т мыши, отбирали с помощью непрямого иммуногистохимического метода на среза ткани щитовидных желез интактных мышей линии SJL/j при использованш супернатантов массовых культур.

Клетки гибридом прививали мышам Fl(SJL/jxBALB/c). МКАТ из асцитической жидкости осаждали сульфатом аммония. Дальнейшую очистку осуществляли при помощи метода аффинной хроматографии с использованием протеин-С-сефарозы. МКАТ конъюгировали с перексидазой из корней хрена по методу Накане.

Методы статистического анализа. Сравнение обратных титров антител против Тг и концентраций Т4 проводили при помощи U-критерия Манна-Уитни в программе Statistica (StatSoft).

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Получение МКАТ, распознающих Тг мыши, и изучение их свойств.

Для создания МКАТ, взаимодействующих с Тг мыши, было использовано два подхода. Один из них предполагал создание антител против антигенных детерминант общих для Тг мыши и человека, второй - для Тг мыши и крысы. Донорами иммунных лимфоцитов служили мыши линии SJL/j, которые обладают ослабленным контролем экспансии В-лимфоцитов, что предполагает синтез более широкого репертуара антител, чем у животных других инбредных линий, и генетической восприимчивостью к индукции аутоиммунного тиреоидита с помощью Тг [Haran-Ghera et al., 1967; Vladutiu, Rose, 1971]. Было испытано несколько схем иммунизации, которые различались количеством введений антигена и интервалами между ними, общей длительностью иммунизации. В результате пяти проведенных слияний отобрано 23 стабильных штамма гибридом-продуцентов антител искомой специфичности. Для удобства изложения всем МКАТ были присвоены порядковые номера.

Среди МКАТ преобладают реагенты IgG изотипа (IgGl - 30%, lgG2a - 26%, IgG2b - 13%), треть реагентов (30%) относится к классу IgM.

Из полученных 23 МКАТ пять обладают сильным сродством к Тг мыши -распознают антиген в концентрациях менее 1 мкг/мл, тогда как остальные - только в количествах превышающих 1 мкг/мл (рис. 1). Таким образом, большинство МКАТ обладает низкой способностью связывать аутоантиген. Специфичность взаимодействия МКАТ с Тг мыши была подтверждена в иммуногистохимическом исследовании.

Рис. 1. Взаимодействие МКАТ с иммобилизованным на твердой фазе Тг мыши.

По оси абсцисс — концентрация МКАТ (мкг/мл). По оси ординат - оптическая плотность.

-МКАТ 4 (10, 14) -МКАТ 6 (8) -МКАТ 19(13) —i—МКАТ 3(15) -МКАТ 20

0,001

—Ж—МКАТ 5 (1, 7, 17, 23) -МКАТ 11 (2, 9, 18,22) -МКАТ 12 -МКАТ 16 -МКАТ 21

Выявлены реагенты, взаимодействующие с эпитопами, представленными на Тг млекопитающих (10 МКАТ) или Тг млекопитающих и птиц (13 МКАТ). Для исследования эпитопной специфичности МКАТ оценивали их способность ингибировать взаимодействие друг друга с Тг мыши. Чтобы установить, распознают

ли антитела, которые взаимно препятствуют связыванию с антигеном двух и боле МКАТ, общий эпитоп, сопоставили их перекрестную реактивность с Тг животны разных видов. В результате было показано, что полученные МКАТ распознают н молекуле Тг мыши, по крайней мере, 19 консервативных эпитопов (табл. 1 и 2) Изучена перекрестная реактивность антител с антигенами, которые обладаю общими эпитопами с Тг (тиреоидными гормонами, ацетилхолинэстеразой \ тиреоидной пероксидазой), и негомологичными антигенами, которые, также как Тг, вовлекаются в аутоиммунные процессы (инсулином и кардиомиозином). Ря МКАТ взаимодействует помимо Тг с ацетилхолинэстеразой, тиреоидноГ пероксидазой, инсулином или кардиомиозином (табл. 1 и 2). Не выявлено реагентов связывающихся с тиреоидными гормонами, таким образом МКАТ не направлены гормоногенным участкам Тг.

Таблица 1.

Перекрестная реактивность МКАТ, распознающих Тг млекопитающих

антигены номер МКАТ

21 18 10/14 6 11 7 5 13 16

Тг крысы

Тг человека

Тг быка

Тг свиньи

Тг кошки

Тг собаки

ацетилхолинэстеоаза

инсулин

кардиомиозин

Таблица 2.

Перекрестная реактивность МКАТ, распознающих Тг млекопитающих и птиц

антигены номер МКАТ

1/23 8 9 2/22 12 4 17 20 19 3/15

Тг крысы

Тг человека

Тг быка

Тг свиньи

Тг кошки

Тг собаки

Тг курицы

Тг голубя

ацетилхолинэстераза

тиреоидная пероксида и

кардиомиозин

Примечание: Через дробь обозначены МКАТ, направленные к одному эпитопу Тг (ингибируют взаимодействие друг друга с Тг мыши и обладают идентичной видовой специфичностью).

| | - наличие перекрестного взаимодействия с антигеном.

2. Сопоставление свойств МКЛТ и ЕЛА мышей.

Исследовали содержание аутоантител против Тг в сыворотках крови интактных мышей линий резистентных (ВАЬВ/с) и восприимчивых (БЛ^, СВА) к индукции аутоиммунного тиреоидита. У мышей инбредного штамма СВА значения титров находятся в диапазоне 1/50-1/450, у БЛ^ и ВАЬВ/с - 1/20-1/50. Таким образом, содержание ЕАА, распознающих Тг, у мышей линии СВА достоверно выше, чем у животных других линий (р<0,05). Различий между титрами ЕАА у мышей и ВАЬВ/с не выявлено.

Изучена специфичность ЕАА мышей в отношении всех эпитопов Тг мыши, выявленных в настоящей работе. Использованы 19 МКАТ, каждое из которых распознает отдельный эпитоп аутоантигена. Глобулиновые фракции пуловых сывороток мышей всех трех линий ингибируют связывание с Тг мыши 10 МКАТ и не препятствуют связыванию с антигеном 9 МКАТ. Аналогичное исследование было проведено с использованием индивидуальных сывороток интактных мышей линий БЛ^ и ВАЬВ/с. Все образцы индивидуальных сывороток ингибируют взаимодействие с Тг большинства МКАТ. Связыванию шести реагентов с антигеном препятствовали индивидуальные сыворотки 2-5 мышей каждой линии (табл. 3).

Таблица 3.

Влияние глобулиновых фракций пуловых и индивидуальных сывороток интактных мышей на __взаимодействие МКАТ с Тг мыши_

номер МКАТ пуловые сыворотки индивидуальные сыворотки

линия мышей линия мышей / образец сыворотки

СВА БЩ ВЛЬВ/с ВЛЬВ/с

1 2 3 4 6 1 9 ч 4 6

4 5 ---------------- ——

10 „ ; ¡11 ;

12 =

20 .1 1.....•

Примечание:

| | - ингибирование (> 30%) сульфатными фракциями сывороток связывания

меченных перексидазой из корней хрена МКАТ с Тг мыши. 1 1 - отсутствие ингибирования.

Таким образом, все эпитопы, к которым направлены полученные МКАТ, распознаются ЕАА. Не выявлено различий в эпитопной направленности ЕАА, распознающих Тг, у мышей линий генетически восприимчивых (БЛЬ^, СВА) и

устойчивых (BALB/c) к индукции аутоиммунного тиреоидита. Индивидуальны сыворотки интактных мышей одной и той же линии обладают различным! спектрами эпитопной направленности распознающих Тг ЕАА.

Созданные МКАТ представляют собой мышиные аутоантитела против Тг поскольку получены от мышей и взаимодействуют с аутоантигеном. Вс моноклональные аутоантитела соответствуют ЕАА мышей по эпитопиоГ специфичности. Среди них выделено 10 реагентов также обладающих еще двумя и таких характерных свойств ЕАА как перекрестная реактивность с негомологичными антигенами, низкая способность связываться с Тг мыши и принадлежность к IgM изотипу, и 10 других МКАТ одним свойством - низкой способностью взаимодействовать с аутоантигеном. Оставшиеся три реагента с наименьшей долей вероятности могут быть отнесены к ЕАА, поскольку соответствуют им только по эпитопной специфичности (табл. 4).

Сопоставление свойств полученных МКАТ и ЕАА*

Таблица 4.

номер МКАТ аффинитет изотип полиреактивность

1 nii;i;nii l(i\1 тиреоидная пероксидаза

10 111ПЫ1И IgM не выявлено

14 KUSKHii не выявлено

17 ни ¡кий . '¿' Ч ацетилхолинэстераза

22 низкий L JiM не выявлено

3 иыажпп - '¿>1 кардйомкозшг

15 m.k'ouiii L к41 к.|р дичмнч.пи

5 ни жии IgG2a шкч.пш | аие ■ >I-Iч 1 >.11■ 1 ■ ччорпм

11 iiii;khi; IgG2b кардиомиозин

19 яички» IgGl КДр1К(>М1||ЧИН

2 НИЗКИЙ IgG2b не выявлено

4 ни :i:iii; IgG2a ацелилхолинэстераза

6 низкий rgGl не выявлено

7 Ш11КШ1 IgG2b не выявлено

8 ипжии IgG2a не выявлено

9 низкий IgG2a не выявлено

12 т:;кин IgGl не выявлено

13 HI! {KITH IgGl не выявлено

18 шпкии IgGl не выявлено

23 НИИ.™ IgGl тиреоидная пероксидаза

16 ВЫСОКИЙ IgG2a не выявлено

20 ВЫСОКИЙ IgGl не выявлено

21 ВЫСОКИЙ IgG2a не выявлено

Примечание:

|_) - соответствие свойствам ЕАА.

* - все МКАТ соответствуют ЕАА по эпитопной специфичности.

3. Изучение влияния введения аутоантител против Тг на тиреоидный статус мышей.

Для исследования влияния эпитопной специфичности инъецированных аутоантител на тиреоидный статус мышей линии было выбрано 9 МКАТ.

Каждое МКАТ распознает отдельную антигенную детерминанту и в различной степени обладает характеристиками ЕАА. Помимо эпитопной специфичности антитела 1, И, 14, 15 обладают еще двумя свойствами ЕАА (перекрестная реактивность с негомологичными антигенами и/или низкая способность связываться с Тг мыши и/или принадлежность к 1§М изотипу); антитела 2, 4, 7, 13 - только низкой способностью взаимодействовать с аутоантигеном; антитело 21 - ни одним. Чтобы выяснить, существуют ли различия в ответе животных различных инбредных штаммов на введение одних и тех же МКАТ, три реагента инъецировали мышам линии СВА.

МКАТ вводили внутрикожно в полном адъюванте Фрейнда в количестве 0,02 мг на животное, через две недели осуществляли повторное введение антител в той же дозе подкожно в неполном адъюванте. Контролем служили интактные мыши соответствующей линии, а также животные, которым вводили полученные в лаборатории МКАТ против флуоресцеина (2АЗ), МКАТ против видоспецифичного эпитопа Тг человека (5Е6) или только адъювант Фрейнда.

Введение любого из МКАТ, распознающих Тг мыши, вызывало у реципиентов нарушения тиреоидного статуса (табл. 5).

Таблица 5.

номер МКАТ структура щитовидной железы Т4 антитела против Тг

сутки от начала опыта

14 28 42 56 70

мыши линии SJL/j

1 N N 1 N

11 N 1 т

14 N N 1 н.и.

15 N N N 1 н.и.

2 N N 1 н.и.

4 N N N N т N

7 N 4. Г

13 N N 4 н.и.

21 N N N N N 1 т

мыши .ниши ( ВА

11 N N 4- н.и.

15 N N N N 1 н.и.

21 N 4 11.11.

Примечание: N - не отличается от наблюдаемого у интактных мышей. п - достоверно выше/ниже, наблюдаемого у интактных мышей (р<0,05). н.и. - не исследовали.

- структура ткани щитовидной железы отличается от нативной.

Изменения структуры ткани щитовидной железы, а также содержания Т4 и антител против Тг в сыворотках крови отмечали в разных экспериментальных группах на один-четыре срока исследования. Концентрация Т4 была достоверно ниже, чем у интактных животных. Исключение составили мыши, получавшие

инъекции МКАТ 4 - концентрация Т4 была достоверно выше, чем у интактных животных. У мышей линии БЛ^^' исследовано влияние введения некоторых из МКАТ на содержание в сыворотке крови антител против Тг. При инъекциях МКАТ 1 или 4 титр антител сохранялся на уровне нормы и был повышен после введения МКАТ 7, 11 или 21. На рисунках 2 и 3 в качестве иллюстрации представлены результаты изучения содержания Т4 и антител против Тг у мышей одной из экспериментальных групп.

Рис. 2. Концентрации Т4 в сыворотках крови мышей линии БЛУ), которым вводили МКАТ 11.

По оси абсцисс - сутки от начала опыта.

По оси ординат - концентрация Т4 (нмоль/л).

Квадрат/ромб - медиана;

прямоугольник - квартальный размах (25%, 75%

процентили);

линии - минимальное и максимальное значения; пунктир - выбросы.

Рис. 3. Титры антител против Тг крысы в сыворотках крови мышей линии SJL/j, которым вводили МКАТ 11.

По оси абсцисс - сутки от начала опыта. По оси ординат - обратный титр антител против Тг крысы (log,). Квадрат/ромб - медиана;

прямоугольник - квартальный размах (25%, 75% процентили);

линии - минимальное и максимальное значения; пунктир - выбросы.

Выявлено три морфологических варианта изменения структуры ткани щитовидной железы. Наиболее распространенным было уплощение тиреоцитов и увеличение размеров фолликулов по сравнению с нативной структурой ткани - 1 тип изменений. Наряду с изменениями 1 типа у мышей некоторых экспериментальных групп наблюдали отложения солей кальция в коллоиде (II тип) или увеличение размера тиреоцитов, в большинстве случаев сопровождающееся отложением солей кальция в коллоиде (III тип) (рис. 4). Нарушения структуры ткани щитовидной железы наблюдали у животных всех экспериментальных групп, за исключением мышей линии SJL/j, которым вводили МКАТ 21. При этом у животных инбредного штамма СВА после введения данного антитела морфология ткани щитовидной железы была изменена. В отличие от остальных МКАТ антитело 21 направлено к наименее консервативному эпитопу аутоантигена, представленному только на Тг мыши и крысы, и соответствует ЕАА только по эпитопной специфичности. Полученные данные позволяют предположить, что генетический фон реципиента оказывает влияние на степень серьезности тиреоидных нарушений при введении антител, обладающих в основном свойствами иммуноглобулинов, ассоциированных с аутоиммунной патологией.

14 28 42 56 ТО

□ интактные О МКАТ 11

5,8 5,6 5,4 5,2 5,0 4,8 4,6 4,4 4,2 4,0 3,8 3,6 3,4

:Х>

□

□ ннтактные О МКАТ 11

Рис. 4. Гистологическое исследование ткани щитовидных желез мышей (окрашивание гематоксилином и эозином) (200х).

А - нативная структура ткани.

Б - I тип изменений. В - II тип. Г - III тип.

Серые стрелки указывают на коллоид, белые - на тиреоциты, черные - соли Са2+.

Таким образом, введение МКАТ, распознающих Тг мыши, вызывает у мышей линий Б-ЛТ) и СВА функциональные нарушения тиреоидного статуса в большинстве случаев сопровождающиеся изменениями структуры ткани щитовидной железы.

4. Изучение влияния введения аутоантител и Тг на тиреоидный статус мышей.

Изучение тиреоидного статуса после введения аутоантител и Тг проводили на мышах линии БЛ-Т) с использованием МКАТ 11, 14 или 21. В предыдущем разделе было показано, что у мышей данной линии после введения МКАТ 11 почти на все сроки исследования изменена структура ткани щитовидной железы: уплощены тиреоциты и увеличены фолликулы, в ряде случаев происходит отложение солей кальция в коллоиде. Антитело 14 вызывает нарушения морфологии железы, наблюдаемые при инъекциях большинства из МКАТ: на три срока исследования отмечали уплощение тиреоцитов и увеличение размеров фолликулов. При инъекциях антитела 21 сохранялась нативная структура ткани щитовидной железы.

МКАТ вводили внутрибрюшинно в фосфатно-солевом буфере четыре раза с интервалом 2-3 дня в течение двух недель в количестве 0,25 мг на инъекцию. Через двое суток после последней инъекции МКАТ вводили Тг крысы. Инъекцию Тг в количестве 0,05 мг осуществляли внутрикожно в полном адъюванте Фрейнда, через две недели подкожно в неполном адъюванте. В качестве контроля отдельно исследовали влияние введения Тг без МКАТ.

После введения Тг в сочетании с любым из МКАТ у реципиентов в сыворотке крови увеличивалось содержание Т4 и титр антител против' Тг по сравнению с интактными мышами. Исследовали только титр антител против Тг подкласса ^01, чтобы исключить выявление введенных МКАТ, которые относятся к другим изотипам (рис. 5 и 6). Аналогичные изменения тиреоидного статуса наблюдали и при введении Тг без МКАТ.

Рис. 5. Концентрации Т4 в сыворотках крови мышей после введения Тг и МКАТ.

По оси абсцисс - сутки от начала опыта. По оси ординат - концентрация Т4 (нмоль/л). Квадрат/ромб/треугольник/круг - медиана; прямоугольник - квартальный размах (25%, 75% процентили);

линии - минимальное и максимальное значения; пунктир - выбросы.

Рис. 6. Титры антител подкласса против Тг крысы в сыворотках крови мышей после введения Тг и МКАТ.

По оси абсцисс - сутки от начала опыта. По оси ординат - обратный титр антител класса против Тг крысы (1о§3). Квадрат/ромб/треугольник/круг - медиана; прямоугольник - квартальный размах (25%, 75% процентили);

линии - минимальное и максимальное значения.

Изменения структуры ткани щитовидной железы наблюдали только при введении Тг в сочетании с аутоантителами. При использовании МКАТ 11 наблюдали развитие инфильтрации ткани железы лимфоидными клетками к 35 суткам после первого введения антигена (рис. 7). Введение Тг на фоне инъекций МКАТ 14 и 21 вызывало формирование у некоторых мышей гигантских фолликулов с уплощенными тиреоцитами. У ряда реципиентов после введения Тг и любого из МКАТ наблюдали увеличение размера тиреоцитов.

50 —■-1-■14 28 35

□ интактные О МКАТ II Л МКАТ 14 • МКАТ21

14 28 35

■ интактные О МКАТ 11 й МКАТ 14» МКАТ 21

Рис. 7. Лимфоцитарная инфильтрация ткани щитовидной железы после введения мышам Тг и МКАТ 11 (окрашивание гематоксилином и эозином) (200х).

Серые стрелки указывают на коллоид, белые - на тиреоциты, черные - лимфоциты.

Таким образом, введение моноклональиого аутоантитела 11 в сочетании с Тг индуцирует развитие у мышей линии аутоиммунного заболевания щитовидной железы: лимфоцитарную инфильтрацию ткани железы, нарушение синтеза тиреоидных гормонов, повышение титра антител против Тг.

ВЫВОДЫ

1. На основе лимфоцитов мышей линии SJL/j, иммунизированных тиреоглобулином человека или крысы, получено 23 штамма гибридом-продуцентов моноклональных антител, распознающих на молекуле тиреоглобулина мыши 19 эволюционно консервативных эпитопов.

2. Моноклональиые антитела конкурируют с естественными аутоантителами мышей линий SJL/j, СВА и BALB/c за связывание с тиреоглобулином мыши.

3. Полученные моноклональиые антитела могут быть отнесены к категории естественных аутоантител на основании их интерференции с аутоантителами интактных мышей и перекрестной реактивности с другими антигенами.

4. Введение моноклональных аутоантител вызывает у мышей нарушения тиреоидного статуса и изменения структуры ткани щитовидной железы.

5. Введение моноклональных аутоантител в сочетании с тиреоглобулином индуцирует развитие у мышей инфильтрации ткани щитовидной железы лимфоидными клетками и повышение уровня тиреоидных гормонов и антител против тиреоглобулина в сыворотке крови.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи

1) Климович В.Б., Руденко И.Я., Василевский Д.П., Львова (Шашкова) O.A. Изотопический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина// Медицинская Иммунология. 2000. Т.2. № 4. С.377-383.

2) Волкова А.Р., Дора C.B., Львова (Шашкова) O.A. Аутоиммунный тиреоидит: современный взгляд на проблему// Медлайн Экспресс. 2003. Т.164. № 7. С.13-15.

3) Пиневич A.A., Руденко И .Я., Львова (Шашкова) O.A., Климович В.Б. Эволюционно консервативные и видоспецифические антигенные детерминанты тиреоглобулинов млекопитающих// Журнал Эволюционной Биохимии и Физиологии. 2005. Т. 41. №5. С.414-420.

4) Шашкова O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Волкова А.Р., Дора C.B., Климович

B.Б. Исследование аутоантител к тиреоглобулину при лечении аутоиммунного тиреоидита L-тироксином // Медицинская Иммунология. 2005. Т.7. № 5-6. С.511-516.

5) Руденко И.Я., Пиневич A.A., Шашкова O.A., Климович В.Б. Сравнительно-биологический подход к идентификации антигенных детерминант молекулы тиреоглобулина// Журнал Эволюционной Биохимии и Физиологии. 2008. Т.44. № 2. С.209-211.

6) Климович В.Б., Пиневич A.A., Руденко И.Я., Шашкова O.A. Антигенные детерминанты тиреоглобулинов человека и животных, выявляемые с помощью моноклональных антител// Российский Иммунологический Журнал. 2008. Т.2 (11). № 1.

C.38-47.

Тезисы докладов

1) Руденко И.Я., Львова (Шашкова) O.A., Василевский Д.И., Романчишен А.Ф., Климович В.Б. Изотопический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина// Медицинская Иммунология. 1999. Т.1. № 3-4. С.82.

2) Руденко И.Я., Львова (Шашкова) O.A., Василевский Д.И., Климович В.Б. 1999. Изучение разнообразия аутоантител против тиреоглобулина// Russian Journal of Immunology. 1999. Vol.4. Suppl.l. P.140.

3) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И.Я., Климович В.Б. Филогенетически консервативные эпитопы тиреоглобулина и их взаимодействие с аутоантителами//

Сборник трудов Международной конференции "XII Международное Совещание и V Школа по эволюционной физиологии", Санкт-Петербург, 19-25 ноября 2001 г. С.85-86.

4) Львова (Шашкова) O.A. Исследование аутоантител к тиреоглобулину у здоровых людей и пациентов с аутоиммунным тиреоидитом// Вестник Российского Государственного Медицинского Университета. 2002. № 1 (22). С. 137.

5) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Климович В.Б. Исследование ответа мышей линии SJL/J на иммунизацию тиреоглобулинами человека и крысы// Медицинская Иммунология. 2002. Т. 4. № 2. С.127-128.

6) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И .Я., Пиневич A.A., Климович В.Б., Волкова А.Р. Аутоантитела к тиреоглобулину у здоровых людей и пациентов с аутоиммунным тиреоидитом// Цитокины и Воспаление. 2002. Т. 1. № 2. С. 98.

7) Lvova (Shashkova) O.A., Rudenko I.Y., Pinevich A.A., and Klimovich V.B. The study of thyroglobulin autoantibodies epitope specificity// Abstracts of the 6-th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "Molecular Basis of the Immune Response", Pushchino, September 15-22, 2002. P. 80-81.

8) Pinevich A.A., Rudenko I.Y., Lvova (Shashkova) O.A., and Klimovich V.B. Immunohistochemical study of animal and human thyroglobulin in normal tissue and in pathology// Abstracts of the 6-th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "Molecular Basis of the Immune Response", Pushchino, September 15-22,2002. P.102-103.

9) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Климович В.Б. Изучение аутоантител у мышей при иммунизации тиреоглобулином и моноклональными антителами// Сборник трудов 5-го Конгресса "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии", Москва, 12-14 ноября 2002 г. Т. II. С.82.

10) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Климович В.Б. Изучение роли аутоантител к тиреоглобулину при экспериментальном аутоиммунном тиреоидите// Медицинская Иммунология. 2003. Т. 5. № 3-4. С. 259-260.

11) Пиневич A.A., Руденко И.Я., Львова (Шашкова) O.A., Климович В.Б. Исследование экспрессии консервативных и неконсервативных эпитопов тиреоглобулина при помощи моноклональных антител// Медицинская Иммунология. 2003. Т. 5. № 3-4. С. 212-213.

12) Львова (Шашкова) O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Климович В.Б. Аутоантитела к тиреоглобулину при аутоиммунном тиреоидите// Материалы научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине", Санкт-Петербург, 7-8 октября 2003 г.

13) Пиневич A.A., Руденко И.Я., Львова (Шашкова) O.A., Климович В.Б. Изучение антигенной структуры тиреоглобулинов (ТГ) позвоночных животных// Russian Journal of Immunology. 2004. T.9. № 1. C.64.

14) Пиневич A.A., Руденко И.Я., Шашкова O.A., Климович В.Б. Изучение антигенной структуры тиреоглобулина у представителей разных таксонов позвоночных животных// Медицинская Иммунология. 2005. Т. 7. JVa 2-3. С. 119-120.

15) Шашкова O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Климович В.Б. Влияние моноклональных антител против тиреоглобулина на тиреоидный статус экспериментальных животных//Медицинская Иммунология. 2005. Т. 7. № 2-3. С. 126.

16) Pinevich A.A., Rudenko I.Y., Shashkova O.A., and Klimovich V.B. The nature of thyroglobulin epitopes recognized by monoclonal antibodies (Mab)// Abstracts of the 7-th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "The Interferface Between Immunology and Medicine", Moscow, September 5-9, 2005. P. 38.

17) Shashkova O.A., Rudenko I.Y., Pinevich A.A., and Klimovich V.B. The influence of monoclonal antibodies (Mab) to thyroglobulin (Tg) on thyroid status of mice// Abstracts of the 7-

th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "The Interferface Between Immunoiogy and Medicine", Moscow, September 5-9, 2005. P. 41.

18) Пиневич A.A., Руденко И .Я., Шишкова О.А., Климович В.Б. Характеристика антигенных детерминант тиреоглобулинов позвоночных животных при помощи моноклональных антител// Медицинская Иммунология. 2006. Т. 8. № 2-3. С. 167.

19) Шашкова О.А., Руденко И.Я., Пиневич А.А., Климович В.Б. Изучение эпитопов тиреоглобулина, к которым направлены естественные аутоантитела мышей линии SJL/j// Медицинская Иммунология. 2006. Т. 8. № 2-3. С. 190-191.

20) Пиневич А.А., Руденко И.Я., Шашкова О.А., Климович В.Б. Сравнительно-биологический подход к изучению антигенных детерминант тиреоглобулина// Материалы научной конференции "От лучей Рентгена - к инновациям XXI века: 90 лет со дня основания первого в мире рентгенорадиологичеекого института (Российского научного центра радиологии и хирургических технологий)", Санкт-Петербург, 8-10 октября 2008 г. С.316.

21) Шашкова О.А., Руденко И.Я., Пиневич А.А., Климович В.Б. Роль антител к тиреоглобулину при развитии повреждений ткани щитовидной железы// Материалы научной конференции "От лучей Рентгена - к инновациям XXI века: 90 лет со дня основания первого в мире рентгенорадиологичеекого института (Российского научного центра радиологии и хирургических технологий)", Санкт-Петербург, 8-10 октября 2008 г. С.319.

Лицензия ЛР № 020593 от 07.08.97

Подписано в печать 04.02.2009. Формат 60x84/16. Печать цифровая. Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 4008Ь.

Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором, в Цифровом типографском центре Издательства Политехнического университета. 195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул., 29. Тел.:(812)550-40-14 Тел./факс: (812) 297-57-76

Оглавление диссертации Шашкова, Ольга Александровна :: 2009 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Естественные аутоантитела.

1.2. Тиреоглобулин как аутоантиген.

1.3. Аутоантитела против тиреоглобулина.

1.4. Аутоиммунные заболевания щитовидной железы. Роль аутоАТ против Тг

1.5. Моноклональные антитела против тиреоглобулина.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Животные и методы работы с ними.

2.2. Антигены.

2.3. Антитела и антисыворотки.

2.4. Методы твердофазного иммуноферментного анализа.

2.4.1. Изотипирование AT.

2.4.2. Исследование взаимодействия AT с Тг.

2.4.3. Определение эпитопной специфичности AT.

2.4.4. Исследование перекрестной реактивности AT с ТЗ, Т4, тиреоидной пероксидазой, ацетилхолинэстеразой, кардиомиозином и инсулином.

2.4.5. Исследование концентрации общего тироксина.

2.5. Гистологическое и иммуногистохимическое исследования.

2.6. Получение гибридомных клеток-продуцентов МКАТ против Тг мыши.

2.7. Прививка гибридомных клеток мышам.

2.8. Замораживание и размораживание гибридомных клеток.

2.9. Выделение и конъюгация МКАТ.

2.10. Определение концентрации МКАТ.

2.11. Методы статистического анализа.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Создание панели МКАТ, распознающих Тг мыши, и изучение их свойств.53 '

3.1.1. Получение и первичная характеристика МКАТ.

3.1.2. Изучение свойств МКАТ, распознающих эпитопы Тг мыши.

3.1.2.1. Качественная оценка аффинитета МКАТ.

3.1.2.2. Взаимодействие МКАТ с Тг животных других видов.

3.1.2.3. Эпитопная специфичность МКАТ.

3.2. Сопоставление свойств полученных МКАТ и ЕАА мышей.

3.2.1. Изучение эпитопной специфичности аутоАТ против Тг интактных мышей линий SJL/j, СВА и ВALB/c.

3.2.2. Взаимодействие МКАТ против Тг с другими антигенами.

3.3. Изучение влияния введения аутоАТ против Тг на тиреоидный статус мышей.

3.3.1. Изучение тиреоидного статуса у интактных мышей линий SJL/j и СВА.

3.3.2. Изучение влияния различных схем введения МКАТ, распознающих Тг мыши, на тиреоидный статус мышей.

3.3.3. Изучение влияния введения МКАТ, распознающих Тг мыши, на тиреоидный статус мышей линии SJL/j.

3.3.4. Изучение влияния введения МКАТ, распознающих Тг мыши, на тиреоидный статус мышей линии СВА.

3.4. Изучение влияния введения аутоАТ и Тг на тиреоидный статус мышей.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Шашкова, Ольга Александровна, автореферат

Актуальность проблемы

Антитела, которые выявляют во взрослом организме при очевидном отсутствии иммунизирующих стимулов, а также у новорожденных и у стерильных животных, называют естественными [Avrameas, 1991]. Они способны реагировать со многими чужеродными антигенами, что дало повод обозначать их как полиреактивные [Notkins, 2004]. Эти антитела также взаимодействуют с аутоантигснами, поэтому их называют естественными аутоантителами (ЕАА) [Avrameas, Ternynk, 1995]. Репертуар ЕАА формируется на ранних этапах онтогенеза и остается стабильным в течение жизни индивида [Merbl et al., 2007]. Большая часть ЕАА кодируется V генами зародышевой линии, относится преимущественно к IgM и обладает низкой (Kj Ю-4-Ю-7 mol/1) аффинностью [Coutinho, Kazatchkine, 1995]. Четко установленным различием между ЕАА и монореактивными антителами, выявляемыми при иммунизации и при патологических состояниях, является их эпитопная специфичность [Stahl et al., 2000; Zhou et al., 2007]. ЕАА распознают главным образом эволюционно консервативные антигенные детерминанты [Bouvet, Dighiero, 1998].

Роль ЕАА в организме остается недостаточно изученной. Показано, что с ними связана бактерицидная активность сыворотки крови, что они участвуют в реакциях нейтрализации, опсонизации и активации системы комплемента [Zhou et al., 2007]. Поэтому предполагают, что ЕАА являются одним из компонентов первой линии защиты от инфекций. Возможно, они принимают участие в поддержании естественной толерантности [Boes et al., 1998; Ehrenstein et al., 2000; Reitan ct al., 2002].

Данные о биологической активности антител против Тг ограничены. В большей части исследований были использованы выделенные из сыворотки поликлональные антитела. Введение таких препаратов экспериментальным животным не дало однозначных результатов [Vladutiu, Rose, 1971; Inoue et al., 1993; Tomer et al., 1997]. В работах по получению гибридом из клеток неиммунизированных взрослых или новорожденных мышей [Dighiero et al., 1983; Ternynck, Avrameas, 1986] свойства EAA против Тг не исследованы. Моноклональные антитела (МКАТ) способны распознавать отдельные эпитопы молекул антигенов. Это дает возможность выявить те детерминанты Тг, которые взаимодействуют с ЕАА, а также оценить влияние ЕАА с разной эпитопной специфичностью на функции щитовидной железы.

Цель и задачи исследования

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Создать панель МКАТ, распознающих Тг мыши.

2. Исследовать эпитопную специфичность и перекрестную реактивность полученных МКАТ.

3. Сравнить свойства МКАТ и ЕАА, присутствующих в сыворотке интактных мышей.

4. Изучить влияние МКАТ с различной эпитопной специфичностью на тиреоидный статус мышей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Получена панель МКАТ, распознающих 19 эпитопов на молекуле Тг мыши.

2. На основании данных об эпитопной специфичности и перекрестной реактивности среди полученных МКАТ отобраны реагенты, которые представляют собой моноклональные варианты ЕАА.

3. Введение МКАТ, обладающих свойствами ЕАА, вызывает у мышей изменения структуры и функции щитовидной железы.

4. Иммунизация мышей Тг на фоне введения МКАТ, связывающих некоторые эпитопы Тг, вызывает развитие лимфоцитарной инфильтрации щитовидной железы.

Научная новизна работы

1. Создана наиболее широкая из описанных в литературе панелей МКАТ, распознающих эволюционно консервативные эпитопы Тг мыши.

2. Впервые установлено, что репертуар эпитопов Тг, распознаваемых ЕАА интактных инбредных мышей, варьирует индивидуально и не коррелирует с генетически обусловленной восприимчивостью животных к индукции аутоиммунного тиреоидита.

3. Впервые показано, что введение моноклональных ЕАА, распознающих некоторые эпитопы Тг мыши, вызывает нарушения синтеза тиреоидных гормонов и структуры ткани щитовидной железы.

Теоретическая и практическая значимость работы

Работа направлена на решение фундаментальной проблемы иммунологии -расшифровку механизмов, участвующих в нарушении иммунологической толерантности при развитии аутоиммунных заболеваний. В результате исследования созданы МКАТ, представляющие собой моноклональные варианты ЕАА. Полученные реагенты открывают новые возможности для изучения репертуара ЕАА против Тг и антигенной структуры Тг животных различных видов.

Данные о влиянии моноклональных вариантов ЕАА на тиреоидный статус мышей согласуются с гипотезой, что ЕАА могут участвовать в развитии аутоиммунных патологических процессов. Полученные МКАТ могут быть использованы при разработке новых экспериментальных моделей аутоиммунного тиреоидита.

Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты 99-04-49823, 01-04-49781 и 05-04-48862).

Личный вклад автора в проведение исследований

Основные данные, представленные в работе, получены лично автором. Автором проведены все экспериментальные исследования на животных, изучен их тиреоидный статус и свойства ЕАА. Получение МКАТ и изучение их свойств осуществлялось совместно с группой сотрудников лаборатории гибридомной технологии ФГУ Российского научного центра радиологии и хирургических технологий МЗСР РФ. Автором выполнены все этапы создания гибридом, получения МКАТ, изучения их свойств. Обработка результатов экспериментов и подготовка публикаций сделаны автором диссертации совместно с научным руководителем. При оценке гистологического материала автор пользовался консультативной помощью сотрудников лаборатории иммуногистохимии, группы патоморфологии с прозектурой ФГУ Российского научного центра радиологии и хирургических технологий МЗСР РФ и кафедры цитологии и гистологии Санкт-Петербургского государственного университета.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на XII Международном Совещании по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2001), Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2002), Всероссийских форумах "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 1999, 2002, 2003, 2005, 2006), Международной научно-практической школе-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), 6-ой и 7-ой Школах Джона Хамфри по иммунологии (Пущино, 2002; Москва, 2005), 5-ом Конгрессе "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002), научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2003), II и III съездах иммунологов России (Сочи, 1999; Екатеринбург, 2004), научной конференции "От лучей Рентгена - к инновациям XXI века: 90 лет со дня основания первого в мире рентгено-радиологического института" (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации

Материалы диссертации отражены в 6 статьях и 21 тезисах.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, включающей методы и результаты исследования; обсуждения; выводов; списка литературы, состоящего из 281 источника; приложения. Работа изложена на 127 страницах и содержит 29 рисунков и 19 таблиц.

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина"

выводы

2. Моноклональные антитела конкурируют с естественными аутоантителами мышей линий SJL/j, СВА и BALB/c за связывание с тиреоглобулином мыши.

3. Полученные моноклональные антитела могут быть отнесены к категории естественных аутоантител на основании их интерференции с аутоантителами интактных мышей и перекрестной реактивности с другими антигенами.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Шашкова, Ольга Александровна

1. Бабаев Т.А., Артемова Е.П. Роль иммунных комплексов при заболеваниях щитовидной железы// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1992. Т.113. - № 2. - С.168-170.

2. Березин В.А., Гербильский JI.B., Корниловская И.Н. Тиреоглобулин// Пробл. эндокринол. 1993. - Т.39. - № 4. - С.54-59.

3. Боровиков В. STATISTIC А. Искусство анализа данных на компьютере: для профессионалов. Издание 2-ое. СПб.: Питер, 2003. 688 с.

4. Вольпе Р. Аутоиммунные заболевания щитовидной железы. В кн.: Болезни щитовидной железы. Ред. Браверман Л.И. М.: Медицина, 2000. С. 140-172.

5. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. 288 с.

6. Калинин А.П., Потемкина Е.Е., Пешева Н.В., Рафибеков Д.С. Иммунологические аспекты аутоиммунного тиреоидита// Пробл. эндокринол. 1994. - Т.40. - № 1. — С.56-58.

7. Климович В.Б., Руденко И.Я., Василевский Д.И., Львова О.А. Изотипический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина// Медицинская иммунология. 2000. - Т.2. - № 4. - С.377-383.

8. Клиническая эндокринология (руководство). Заболевания щитовидной железы. Ред. Старкова Н.Т. М.: Медицина, 1991. 512 с.

9. Кэтти Д., Райкундалиа Ч. Иммунодиффузия в геле, иммуноэлектрофорез и методы иммунохимического окрашивания. В кн.: Антитела. Т.1. Ред. Кэтти Д.М. М.: Мир, 1991а. С.197-237.

10. Кэтти Д., Райкундалиа Ч. Получение моноклональных антител и контроль их качеств. В кн.: Антитела. Т.1. Ред. Кэтти Д.М. М.: Мир, 19916. С.33-115.

11. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969. 645 с.

12. Мак-Керн Т.Д. Клонирование гибридомных клеток путем лимитирующего разведения в жидкой фазе. В кн.: Моноклональные антитела. Ред. Кеннет Р.Г., Мак-Керн Т.Д., Бехтол К.Х. М.: Медицина, 1983. 374 с.

13. Механизмы иммунопатологии. Ред. Коэн С., Уорд П.А., Мак-Класки Р.Т. М.: Медицина, 1983. С. 181-206.

14. Рябчун М.В., Агейкин В.А. Аутоиммунные процессы при заболеваниях щитовидной железы// Пробл. эндокринол. 1992. - Т.38. — № 4. - С. 15.

15. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.:Мир, 1985. 358 с.

16. Урбаиовичус В.Ю., Даиис Ю.К., Некрасова JI.B. с соавт. Клиника, гуморальные нарушения и гуморальный иммунитет у больных аутоиммунным тиреоидитом// Пробл. эндокринол. 1990. - Т.36. -№ 6. - С.3-7.

17. Allander S.V., Larsson С., Ehrenborg Е. et al. Characterization of the chromosomal gene and identification of a functional promoter for human insulin-like growth factor binding protein-5// J. Biol. Chem. 1994. - Vol.269. - P.10891-10898.

18. Alliel P.M., Perin J.P., Jolles P., Bonnet F.J. Testican, a multidomain testicular proteoglycan resembling modulators of cell social behaviour// Eur. J. Biochem. 1993. — Vol.214.-P.347-350.

19. Allison A.C., Denman A.M., Barnes R.D. Cooperating and controlling functions of thymus-derived lymphocytes in relation to autoimmunity// Lancet. 1971. - Vol.2. -P.135-140.

20. Alvino C.G., Acquaviva A.M., Curanzano A.M.M., Tassi V. Evidence that thyroglobulin has an associated protein kinase activity correlated with presence of an adenosine triphosphate binding site// Endocrinology. 1995. - Vol.136. - P.3179-3185.

21. Amigorena S., Bonnerot C. Role of B-cell and Fc receptors in the selection of T-cell epitopes// Curr. Opin. Immunol. 1998. - Vol.10. - P.88-92.

22. Arata N., Ando Т., Unger P., Davies T.F. By-stander activation in autoimmune thyroiditis: studies on experimental autoimmune thyroiditis in the GFP+ fluorescent mouse// Clin. Immunol. 2006. - Vol.121. - P. 108-117.

23. Avrameas S. Natural autoantibodies: from "horror autotoxicus" to "gnothi seauton"// Immunol. Today. 1991.-Vol. 12.-P. 154-159.

24. Avrameas S., Ternynk T. Natural autoantibodies: The other side of the immune system// Res. Immunol. 1995. - Vol.146. - P.235-248.

25. Avrameas S., Ternynk T. The natural antibody system: between hypothesis and facts// Mol. Immunol. 1993.-Vol.30.-P.1133-1142.

26. De Baets M.Ii., Theunissen R., Kok K. et al. Monoclonal antibodies to human thyroglobulin as probes for thyroglobulin structure// Endocrinology. 1987. - Vol.120. — № 3. - P. 1004-1011.

27. Ban Y., Greenberg D.A., Concepcion E. et al. Amino acid substitution in the thyroglobulin gene are associated with susceptibility to human murine thyroid disease// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 100. - P. 15119-15124.

28. Basalp A., Yiicel F. Development of mouse hybridomas by fusion of myeloma cells with lymphocytes derived from spleen, lymph node, and bone marrow// Hybridoma and hybridomics. 2003. - Vol.22. - № 5. - P.329-331.

29. Baudry N., Lejeune P.-J., Delom F. et al. Role of multimerized porcine thyroglobulin in iodine storage// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - Vol.242. - P.292-296.

30. Bedin C., Ropars A., Mignon-Godefroy K., Charreire J. Molecular heterogeneity of antigen- or idiotype-induced anti-thyroglobulin monoclonal autoantibodies// Clin. Exp. Immunol. 1995. - Vol. 100. - P.463^169.

31. Berg M., Uellner R., Langhorne J. Fey receptor II dependency of enhanced presentation of major histocompatibility complex class II peptides by а В cell lymphoma// Eur. J. Immunol. 1997. - Vol.27. - P. 1022-1028.

32. Berland R., Wortis H.H. Origins and functions of B-l cells with notes on the role of CD5// Annu. Rev. Immunol. 2002. - Vol.20. - P.253-300.

33. De Boer M., Ossendorp F.A., Bruning P.F., Tager J.M. Direct evidence for a primary immune response of murine B-lymphocytes after in vitro immunization of dissociated splenocytes// Hybridoma. 1987. - Vol.6. - P.253-258.

34. Boes M., Prodeus A.V., Schmidt T. et al. A critical role of natural immunoglobulin M in immediate defense against systemic bacterial infection// J. Exp. Med. 1998. - Vol.188. - № 12. - P.2381-2386.

35. Bouanani M., Bataille R., Piechaczyc M. et al. Autoimmunity to human thyroglobulin// Arthritis Rheum. 1991. -Vol.34.-№ 12. - P.1585-1593.

36. Bouanani M., Hanin V., Bastide M., Pau B. New antigenic clusters on human thyroglobulin defined by an expanded panel of monoclonal antibodies// Immunol. Lett. -1992,-Vol.32.-P.256-264.

37. Bouanani M., Piechaczyc M., Pau В., Bastide M. Significance of the recognition of certain antigenic regions on the human thyroglobulin molecule by natural autoantibodies from healthy subjects// J. Immunol. 1989. - Vol.143. - № 4. - P. 1129-1132.

38. Bouvet J.-P., Dighiero G. From natural polyreactive autoantibodies to a la carte monoreactive antibodies to infectious agents: is it a smoll world after all?// Infect. Immun. 1998. - Vol.66. -№ 1. - P. 1-4.

39. Braley-Mullen H., Johnson M., Sharp G.C., Kyriakos M. Induction of experimental autoimmune thyroiditis in mice with in vitro activated splenic T cells// Cell. Immunol. -1985.-Vol.93.-№ 1. P.132-143.

40. Braley-Mullen H., Sharp G.C., Kyriakos M. Differential requirement for antibody-producing В cells for induction of lymphocytic versus granulomatous experimental autoimmune thyroiditis// J. Immunol. 1994. - Vol.152. -P.307-314.

41. Braley-Mullen H., Sharp G.C., Medling В., Tang H. Spontaneous autoimmune thyroiditis in NOD H-2h4 mice// J. Autoimmun. 1999. - Vol.12.-P. 157-165.

42. Brazillet M.P., Batteux F., Abehsira-Amar O. et al. Induction of experimental autoimmune thyroiditis by heat-denatured porcine thyroglobulin: a Tel-mediated disease// Eur. J. Immunol. 1999. - Vol.29. - P. 1342-1352.

43. Bresler H.S., Burek C.L., Rose N.R. Autoantigenic determinants on human thyroglobulin. I. Determinant specificities of murine monoclonal antibodies// Clin. Immunol. Immunopathol. 1990b. - Vol.54. - P.64-75.

44. Carayanniotis G., Chronopoulou E., Rao V.P. Distinct genetic pattern of mouse susceptibility to thyroiditis induced by a novel thyroglobulin peptide// Immunogenetics. -1994,-Vol.39.-P.21-28.

45. Carayanniotis G., Rao V.P. Searching for pathogenic epitopes in thyroglobulin: parameters and caveats// Immunol. Today. 1997. - Vol.18. - № 2. - P.83-88.

46. Caturegli P., Kuppers R.C., Mariotti S. et al. IgG subclass distribution of thyroglobulin antibodies in patients with thyroid disease// Clin. Exp. Immunol. 1994a. - Vol.98. -P.464-469.

47. Caturegli P., Mariotti S., Kuppers R.C. et al. Epitopes on thyroglobulin: a study of patients with thyroid disease// Autoimmunity. 1994b. - Vol.18. - P .41^-9.

48. Caturegli P., Vidalain P.O., Vali M. et al. Cloning and characterization of murine thyroglobulin cDNA// Clin. Immunol. Immunopathol. 1997. - Vol.85. - P.221-226.

49. Cervera R., Shoenfeld Y. Pathogenic mechanisms and clinical relevance of autoantibidies. In: Autoantibodies. Second edition. Edited by Shoenfeld Y., Gershwin M.E., Meroni P.L. Publisher Elsevier Science, 2006. P.29-35.

50. Champion B.R., Rayncr D.C., Byfield P.G. et al. Critical role of iodination for T cell recognition of thyroglobulin in experimental murine thyroid autoimmunity// J. Immunol. 1987. - Vol.139. - P.3665-3670.

51. Chan С.Т., Byfield P.G., Callus M. et al. Structural differences around hormogenic sites on thyroglobulins from different species detected by monoclonal antibodies// Eur. J. Biochem. 1986. - Vol. 159. - P.563-567.

52. Chan C.T.J., Byfield P.G.H, Himsworth R.L., Shepherd P. Human autoantibodies to thyroglobulin are directed towards a restricted number of human specific epitopes// Clin. Exp. Immunol. 1987. - Vol.70. - P.516-523.

53. Chen Z.J., Wheeler C.J., Shi W. et al. Polyreactive antigen-binding В cells are the predominant cell type in the newborn В cell repertoire// Eur. J. Immunol. 1998. -Vol.28. - P.989-994.

54. Choi E.W., Shin I.S., Bhang D.H. et al. Hormonal change and cytokine mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells during the development of canine autoimmune thyroiditis// Clin. Exp. Immunol. 2006. - Vol.146. - P.101-108.

55. Chronopoulou E., Michalak T.J., Carayanniotis G. Autoreactive IgG elicitcd in mice by the non-dominant but pathogcnic thyroglobulin peptide (2495-2511): implications for thyroid autoimmunity// Clin. Exp. Immunol. 1994. - Vol.98. - P.89-94.

56. Clark P.M., Beckett G. Can we measure serum thyroglobulin?// Ann. Clin. Biochem. — 2002,-Vol.39.-P. 196-202.

57. Cleveland L., Erlanger B. The auto-anti-idiotypic strategy for preparing monoclonal antibodies to receptor combining sites// Meth. Enzymol. 1986. - Vol.121. - P.95-107.

58. Comtesse N., Heckel D., Maldener E. et al. Probing the human natural autoantibody repertoire using an immunoscreening approach// Clin. Exp. Immunol. 2000. - Vol.121. - P.430-437.

59. Consiglio E., Acquaviva A.M., Formisano S. et al. Characterization of phosphate residues on thyroglobulin//J. Biol. Chem. 1986.-Vol.262.-P.10304-10314.

60. Corap9ioglu D., Tonyukuk V., Kiyan M. et al. Relationship between thyroid autoimmunity and Yersinia enterocolitica antibodies// Thyroid. 2002. - Vol.12. - № 7. -P.613-617.

61. Coutinho A., Kazatchkine M.D. Natural autoantibodies// Curr. Opin. Immunol. 1995. -Vol.7.-P.812-818.

62. Dai Y.D., Carayanniotis K.A., Eliades P. et al. Enchancing or suppressive effects of antibodies on processing of a pathogenic T cell epitope in thyroglobulin// J. Immunol. -1999. Vol. 162. - P.6987-6992.

63. Dai Y.D., Rao V.P., Carayanniotis G. Enhanced iodination of thyroglobulin facilitates processing and presentation of a cryptic pathogenic peptide// J. Immunol. 2002. -Vol.168.-P.5907-5911.

64. Dawe K.I., Hutchings P.R., Geysen M. et al. Unique role of thyroxine in T-cell recognition of a pathogenic peptide in experimental autoimmune thyroiditis// Eur. J. Immunol. 1996. - Vol.26. - P.768-772.

65. Deshpande V., Venkatesh S.G. Thyroglobulin, The pro thyroid hormone: chemistry, synthesis and degradation// Biochem. Biophys. Acta. 1999. - Vol.1430. - P. 157-178.

66. Devey M.E., Bleasdale-Barr K.M., McLachlan S.M. et al. Serial studies on the affinity and heterogeneity of human autoantibodies to thyroglobulin// Clin. Exp. Immunol. -1989. -Vol.77.-P.191-195.

67. Devies T.F., Weber C.M., Wallack P., Platzer M. Restricted heterogeneity and T cell dependence of human thyroid autoantibody immunoglobulin G subclasses// Endocrinol. Metab. 1986. - Vol.62. - № 5. - P.945-949.

68. Dietrich G., Piechaczyk M., Pau В., Kazatchkine M.D. Evidence for a restricted idiotypic and epitopic specificity of anti-thyroglobulin autoantibodies with autoimmune thyroiditis//Eur. J. Immunol. 1991.-Vol.21.-P.811-814.

69. Dighiero G., Limbery P., Mazie J.C. et al. Murine hybridomas secreting natural monoclonal antibodies reacting with self antigens// J. Immunol. 1983b. - Vol.131. -P.2267-2272.

70. Dighiero G., Rose N.R. Critical self-epitopes are key to the understanding of self-tolerance and autoimmunity// Immunol. Today. 1999. - Vol.20. -№ 9. - P.423^428.

71. Dunn J.Т., Kim P.S., Dunn A.D. et al. The role of iodination in the formation of hormone-rich peptides from thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1983. - Vol.258. - P.9093-9099.

72. Duthoit C., Estienne V., Delom F. et al. Production of immunoreactive thyroglobulin C-terminal fragments during thyroid hormone synthesis// Endocrinology. 2000. -Vol.141.-P.2518-2525.

73. Duthoit С., Estienne V., Giraud A. et al. Hydrogen peroxide-induced production of a 40 kDa immunoreactive thyroglobulin fragment in human thyroid cells: the onset of thyroid autoimmunuty?// Biochem. J. 2001. - Vol.360. - P.557-562.

74. Ehrenstein M.R., Cook H.T., Neuberger M.S. Deficiency in serum immunoglobulin (Ig) M predisposes to development of IgG autoantibodies// J. Exp. Med. 2000. - Vol.191. -№ 7. - P.1253-1258.

75. Erregragui K., Cheillan F., Defoort J.P. et al. Autoantibodies to thyroid hormones. The role of thyroglobulin// Clin. Exp. Immunol. 1996. - Vol.105. - P.140-147.

76. Erregragui K., Prato S., Miquelis R. et al. Antigenic mapping of human thyroglobulin. Topographic relationship between antigenic regions and functional domains// Eur. J. Biochem. 1997. - Vol.244. - P.801-809.

77. Fathman C.G., Soares L., Chan S.M., Utz P.J. An array of possibilities for the study of autoimmunity// Nature. 2005. - Vol.235. - P.605-611.

78. Filetti S., Bidart J.-M., Arturi F. et al. Sodium/iodide symporter: a key transport system in thyroid cancer cell metabolism// Eur. J. Endocrinol. 1999. - Vol.141. -P.443-457.

79. Forouhi N.G., McLachlan S.M., Middleton S.L. et al. T cell regulation of thyroglobulin autoantibody IgG subclasses in Hashimotos' thyroiditis// Clin. Exp. Immunol. 1987. -Vol.69. -№ 2. -P.314-322.

80. Foti D., Rapoport B. Carbohydrate moieties in recombinant human thyroid perixidase: role in recognition by antithyroid perixidase antibodies in Hashimoto's thyroiditis// Endocrinilogy. 1990. - Vol.126. - P.2983-2988.

81. Fukuma N., McLachlan S.M., Petersen V.B. et al. Human thyroglobulin autoantibodies of subclasses IgG2 and IgG4 bind to different epitopes on thyroglobulin// Immunology. 1994,-Vol.67.-P.129-131.

82. Fukuma N., Petersen V.B., McLachlan S.M. et al. Human monoclonal thyroglobulin autoantibodies of high affinity. I. Production, characterization and interaction with murine monoclonal thyroglobulin antibodies// Autoimmunity. 1991. - Vol.10. - P.291-295.

83. Fuller B.E., Okayasu I., Simon L.L. et al. Characterization of resistance to murine experimental thyroiditis: duration and afferent action of thyroglobulin- and TSH-induced suppression// Clin. Immunol. Immunopathol. 1993. - Vol.69. - P.60-68.

84. Galesa К., Pain R., Jongsma M.A. et al. Structural characterization of thyroglobulin type-1 domains of equistatin//FEBS Lett. 2003. - Vol.539. - P. 120-124.

85. Galfe G., How S.C., Milstein C. et al. Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lines// Nature. 1977. - Vol.266. - P.550-552.

86. Gardas A., Blottner A., Domek H. Comparision of autoantibodies levels in thyroid autoimmune diseases estimated by different methods// Exp. Clin. Endocrinol. 1988. -Vol.92. - P.77-84.

87. Gentile F., Conte M., Formisano S. Thyroglobulin as an autoantigen: what can we learn about immunopathogenicity from the correlation of antigenic properties with protein structure?// Immunology. 2004. - Vol.112. - P.13-25.

88. Gleason S.L., Gearhart P., Rose N.R., Kuppers R.C. Autoantibodies to thyroglobulin are encoded by diverse V-gene segments and recognize restricted epitopes// J. Immunol. -1990,-Vol.145.-P.1768-1775.

89. Godal Т., Karesen R. Induction of thyroiditis in guinea pigs by serum from rabbits immunized with guinea pig thyroglobulin// Acta Path. Microbiol. Scandinav. 1967a. -Vol.69.-P.332-342.

90. Godal Т., Karesen R. Induction of thyroiditis in guinea pigs by serum from guinea pigs immunized with guinea pig thyroglobulin// Acta Path. Microbiol. Scandinav. 1967b. -Vol.69.-P.343-350.

91. Goodnow C.C., Sprent J., De St Groth F., Vinuesa C.G. Cellular and genetic mechanisms of self tolerance and autoimmunity// Nature. 2005. - Vol.435. - P.590-597.

92. Green L.M., Lazarus J.P., LaBue M., Shah M.M. Reduced cell-cell communication in a spontaneous murine model of autoimmune thyroid disease// Endocrinology. 1995. -Vol.136.-P.3611-3618.

93. Guigou V., Guilbert В., Moinier D. et al. Ig repertoire of human polyspeeific antibodies and В cell ontogeny// J. Immunol. 1991. - Vol.146. - № 4. - P.1368-1374.

94. Guilbert В., Dighiero G., Avrameas S. Naturally occurring antibodies against nine common antigens in human sera. I. Detection, isolation and characterization// J. Immunol. 1982. - Vol. 128. - P.2779-2787.

95. Guilbert В., Mahana W., Gilbert M. et al. Presence of natural autoantibodies in hyperimmunized mice// Immunology. 1985. - Vol.56. - P.401-408.

96. Haran-Ghera N., Kotler M., Meshorer A. Studies of leukemia development in the SJL/J mice// J. Nat. Cancer Inst. 1967. - Vol.39. - P.653-661.

97. Hassani R.A.E., Estienne V., Blanchin S.et al. Antigenicity and immunogenecity of the C-terminal peptide of human thyroglobulin// Peptides. 2004. - Vol.25. - P.1021-1029.

98. Hegediis L. Heredity and environment in the etiology of Graves' disease// Hot Thyroidology (http://www.hotth yro ido 1 i g у. со m). 2001. - № 1.

99. Henry M., Malthiery Y., Zanelli E., Charvet B. Epitope mapping of human thyroglobulin//J. Immunol. 1990.-Vol. 145.-№ 11.-P.3692-3698.

100. Henry M., Zanelli E., Malthiery Y. Anti-human thyroid peroxidase and anti-human thyroglobulin antibodies present no cross-reactivity on recombinant peptides// Clin. Exp. Immunol. 1991. - Vol.86. -P.478-482.

101. Henry M., Zanelli E., Piechaczyk M. et al. A major human thyroglobulin epitope defined with monoclonal antibodies is mainly recognized by human autoantibodies// Eur. J. Immunol. 1992. - Vol.22. - P.315-319.

102. Van Herle A.J., Uller R.P., Mattheus N.L., Brown J. Radioimmunoassay for measurement of thyroglobulin in human serum// J. Clin. Invest. 1973. - Vol.52. -P.1320-1327.

103. Hitzel C., Kanzler PI., Konig A. et al. Thyroglobulin type-I-like domains in invariant chain fusion proteins mediate resistance to cathepsin L digestion// FEBS Lett. 2000. -Vol.485. - P.67-70.

104. Hoshioka A., Kohno Y., Katsuki T. et al. A common T cell epitope between human thyroglobulin and thyroid peroxidaseis related to murine experimental autoimmune thyroiditis// Immunol. Lett. 1993. - Vol.37. - P.235-239.

105. Hoshioka A., Kohno Y., Niimi H. Identification and immunopathogenicity of a common T cell epitope between human thyroglobulin and thyroid peroxidase// Nippon Rinsho. -1994b. Vol.52. - P.1063-1069.

106. Hutchings P.R., Cooke A., Dawe K. et al. A thyroxine-containing peptide can induce murine experimental autoimmune thyroiditis// J. Exp. Med. 1992. - Vol.175. - P.869-872.

107. Inoue K., Niesen N., Milgrom F., Albini B. Transfer of experimental autoimmune thyroiditis by in situ purfusion of thyroids with immune sera// Clin. Immunol. Immunopathol. 1993. - Vol.66. - P.l 1-17.

108. Di Jeso В., Gentile F. TSH-induced galactose incorporation at the NH2-tcrminus of thyroglobulin sccreted by FRTL-5 cells// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. -Vol.189. -P.1624-1630.

109. Kawakami Y., Kuzuya N., Watanaabe T. et al. Induction of experimental thyroiditis in mice by recombinant interferon у administration// Acta Endocrinol. 1990. - Vol.122. -P.41-48.

110. Karras E., Carayanniotis G., Lymbery P. Induction of murine thyroiditis by non dominant Ek-resricted peptide of human thyroglobulin// Immunology. 2003. - Vol.108. - P.556-561.

111. Kim P.S., Dunut D., Dunn J.T.D. Altered immunoreactivity of thyroglobulin in thyroid disease// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1988. - Vol.69. - P.161-168.

112. Kimura A,, Nakashima R., Inoeu H. et al. Differential production of monoclonal antibodies to carbohydrate moiety or peptides moiety of glycoproteins by different routes of immunization// Hybridoma. 1998. - Vol.17. - P.245-250.

113. Kodama K., Sikorska H., Bayly R. et al. Use of monoclonal antibodies to investigate a possible role of thyroglobulin in the pathogenesis of Graves' ophthalmopathy// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1984. - Vol.59. -№ 1. - P.67-73.

114. Koh L.K., Greenspan F.S., Yeo P.P. Interferon-alpha induced thyroid disfunction: three clinical presentations and review of the literature// Thyroid. 1997. - Vol.7. - № 6. -P.891-896.

115. Kohno Y., Naito N., Hiyama Y. et al. Thyroglobulin and thyroid peroxidase share common epitopes recognized by autoantibodies in patients with chronic autoimmune thyroiditis// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1988a. - Vol.67. - P.899-907.

116. Kohno Y., Nakajima H., Tarutani O. Interspecies cross-reactive determinants of thyroglobulin recognized by autoantibodies// Clin. Exp. Immunol. 1985a. - Vol.61. -P.44^18.

117. Kohno Т., Tsunetoshi Y., Ishikawa E. Existence of anti-thyroglobulin IgG in healthy subjects// Biochem. Biophys Res. Commun. 1988b. - Vol.155. - P.224-229.

118. Kondo E., Kondo Y. Monoclonal antibodies to hog thyroglobulin recognizing disulfide dependent conformational structures// Mol. Immunol. 1984. - Vol.21. - P.581-588.

119. Kong Y.-C., David C.S., Giraldo A. et al. Regulation of autoimmune response to mouse thyroglobulin: influence of H-2D-End genes// J. Immunol. 1979. - Vol.123. - P.115-123.

120. Kong Y.M., Giraldo A.A. Autoimmune disease models. A Guidebook. San Diego: Academic Press, 1994. P.123-145.

121. Kong Y.M., McCormick D.J., Wan Q. et al. Primary hormonogenic sites as conserved autocpitopes on thyroglobulin in murine autoimmune thyroiditis: Secondary role of iodination//J. Immunol. 1995.-Vol.155.-P.5847-5854.

122. Kotani Т., Maeda M., Ohtaki S et al. Analyses of the specificity of monoclonal antibodies to syngenic and allogenic thyroglobulins// Clin. Immunol. Immunopathol. -1985.-Vol.34.-P.147-157.

123. Kotani Т., Umeki K., Hirai K., Ohtaki S. Experimental murine thyroiditis induced by porcine thyroid peroxidase and its transfer by the antigen-specific T cell line// Clin. Exp. Immunol.- 1990.-Vol.80.-P. 11-18.

124. Kurata A., Ohta K., Mine M. et al. Monoclonal antihuman thyroglobulin antibodies// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1984. - Vol.59. - P.573-579.

125. Lacroix-Desmazes S., Kaveris V., Mouthon L. et al. Self-reactive antibodies (natural autoantibodies) in healthy individuals// J. Immunol. Meth. 1998. - Vol.216. - P. 117137.

126. Lamas L., Anderson P.C., Fox J.W., Dunn J.T. Consensus sequence for early iodination and hormonogenesis in human thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1989. - Vol.264. -P.13541-13545.

127. Latrofa F., Pichurin P., Guo J. et al. Thyroglobulin-thyroperoxidase autoantibodies are polireactive? not bispecific: analysis using human monoclonal autoantibodies// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003. - Vol.88. - P.371-378.

128. Laver W.G., Air G.M, Webster R.G., Smith-Gill S.J. Epitopes on protein antigens: misconceptions and realities// Cell. 1990. - Vol.61. № 4. - P.553-556.

129. Lenarcic В., Krishnan G., Borukhovich R. et al. Saxiphilin, a saxitoxin-binding protein with two thyroglobulin type 1 domains, is an inhibitor of papain-like cysteine proteinases// J. Biol. Chem. 2000. - Vol.275. - P. 15572-15577.

130. Lenarcic В., Ritonja A., Strukelj B. et al. Equistatin, a new inhibitor of cysteine proteinases from Actinia equina, is structurally related to thyroglobulin type-1 domain// J. Biol. Chem. 1997. -Vol.272. - P.13899-13903.

131. Lenarcic В., Turk V. Thyroglobulin type-1 domains in equistatin inhibit both papain-like cysteine proteinases and cathepsin D// J. Biol. Chem. 1999. - Vol.274. - P.563-566.

132. Lewis M., Fuller B.E., Giraldo A.A., Kong Y.-C. Resistance to experimental autoimmune thyroiditis is correlated with the duration of raised thyroglobulin level// Clin. Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol.64. - P.197-204.

133. Liu C., Gosselin E.J., Guyre P.M. FcyRII on human В cells can mediate enhanced antigen presentation// Cell. Immunol. 1996. - Vol.167. - P.188-194.

134. Ludewig В., Junt Т., Hengartner H., Zinkernagel R.M. Dendritic cells in autoimmune diseases// Curr. Opin. Immunol. 2001. - Vol.13. - P.657-662.

135. Ludgate M. Animal models of Graves' disease// Eur. J. Endocrinol. 2000. - Vol.142. -P.1-8.

136. Ludgate M., Dong Q., Soreq H. et al. The pathophysiological significance of a thyroglobulin-acetylcholineserase shared epitope in patients with Graves' ophtalmopathy// Acta Endocrinol. 1989b. - Vol.121. - P.38-45.

137. Malthiery Y., Lissiyzky S. Primary structure of human thyroglobulin deduced from the sequence of its 8,448 base complementary DNA// Eur. J. Biochcm. 1987. - Vol.165. -P.491-498.

138. Mamula M.J., Craft J. The expression of self antigenic determinants: implications for tolerance and autoimmunity// Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol.6. - P.882-886.

139. Mann K., Deutzmann R., Aumailley M. et al. Amino acid sequence of mouse nidogen, a multidomain basement membrane protein with binding activity for laminin, collagen IV and cells// EMBO J. 1989. - Vol.8. - P.65-72.

140. Mappouras D.G., Philippou G., Haralambous S. et al. Antibodies to acetylcholinesterase cross-reacting with thyroglobulin in myasthenia gravis and Graves' disease// Clin. Exp. Immunol. 1995. - Vol.100. - P.336-343.

141. Marchalonis J.J., Adelman M.K., Robey I.F. et al. Exquisite specificity and peptide epitope recognition promiscuity, properties shared by antibodies from sharks to humans// J. Mol. Recognit. 2001. - Vol.14. - P. 110-121.

142. Marchalonis J.J., Hohman V.S., Thomas C., Schluter S.F. Antibody production in sharks and humans: a role for natural antibodies// Dev. Сотр. Immunol. 1993. - Vol.17. -P.41-53.

143. Marino M., Zhehg G., Chiovato L. et al. Role of megalin (gp330) in trancytosis of thyroglobulin by thyroid cells// J. Biol. Chem. 2000. - Vol.275. - № 10. - P.7125-7137.

144. Mariotti S., Borbesino G., Caturegli P. et al. Assay of thyroglobulin in serum with thyroglobulin autoantibodies: an unobtainable goal// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - Vol.80.-P.468-472.

145. Maron R., Zerubavel R., Friedman A., Cohen I.R. T lymphocyte line specific for thyroglobulin produces or vaccinates against autoimmune thyroiditis in mice// J. Immunol. 1983. - Vol.131. - P.2316-2322.

146. Martin F., Kearney J.F. B1 cells: similarities and differences with other В cell subsets// Curr. Opin. Immunol.-2001.-Vol.13.-P.195-201.

147. Matsuda Т., Tomita M., Uchihara J.-N. et al. Human T cell leukemia virus type I-infected patients with Hashimoto's thyroiditis and Graves' disease// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005. - Vol.90. - P.5704-5710.

148. Mcintosh R.S., Asghar M.S., Watson P.F. et al. Cloning and analysis of IgGK and IgGA, anti-thyroglobulin autoantibodies from patient with Hashimoto's thyroiditis// J. Immunol.- 1996. -Vol.157. -P.927-935.

149. McLachlan S.M., Feldt-Rasmussen U., Young E.T. et al. IgG subclass distribution of thyroid autoantibodies: a "fingerprint" of an individual's response to thyroglobulin and and thyroid microsomal antigen// Clin. Endocrinol. 1987. - Vol.26. - P.335-346.

150. McLachlan S.M., Nagayama Y., Rapoport B. Insight into Graves' hyperthyroidism from animal models// Endocr. Rev. 2005. - Vol.26. - P.800-832.

151. McLachlan S.M., Stephenson A., Devey M. et al. IgG subclasses of microsomal and thyroglobulin antibodies: functional affinity and patterns of inheritance. In: Thyroid. Proc. Int. Thyroid Symp., Tokyo, 13-15 July, 1988. Amsterdam ect., 1988. P.137-140.

152. McLachlan S.M., Rapoport B. Evidence for a potential common T cell epitope between human thyroid peroxidase and human thyroglobulin with implication for the pathogenesis of autoimmune thyroid disease// Autoimmunity. 1989. - Vol.5. - P.101-106.

153. McLachlan S.M., Rapoport B. The molecular biology of thyroid perixidase: cloning, expression and role as autoantigen in autoimmune thyroid disease// Endocr. Rev. 1992. -Vol.13.-P.192-206.

154. McPhee-Quigley K., Vedwick Т., Taylor P., Taylor S.S. Profile of the disulfide bonds in acetylcholinesterase deduced from its cDNA// J. Biol. Chem. 1986. - Vol.261. -P.13565-13570.

155. Merbl Y., Zucker-Toledano M., Quintana F.G., Cohen I.R. Newborn humans manifest autoantibodies to defined self molecules detected by antigen microarray// J. Clin. Invest.- 2007. Vol. 117. - № 3. - P.712-718.

156. Mercken L., Simons M.J., Swillens S. et al. Primary structure of bovine thyroglobulin deduced from the sequence of its 8,431 base complementary DNA// Nature. 1985. -Vol.316.-P.647-651.

157. Mezgrhani H., Mziant H., Courageot J. et al. Identification of the membrane receptor binding domain of thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1997. - Vol.272. - № 37. - P.23340-23346.

158. Morabito M.A., Moczydlowski E. Molecular cloning of bullfrog saxiphilin: a unique relative of the transferrin family that binds saxitoxin// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1994. Vol.91. - P.2478-2482.

159. Morabito M.A., Moczydlowski E. Molecular cloning of bullfrog saxiphilin: a unique relative of the transferrin family that binds saxitoxin// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1995,-Vol.92.-P.6651.

160. Mori N., Iton N., Salvaterra P.M. Evolutionary origin of cholinergic macromolecules and thyroglobulin// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol.84. - P.2813-2817.

161. Nabozny G.H., Simon L.L., Kong Y.M. Suppression in experimental autoimmune thyroiditis: The role of unique and shared determinants on mouse thyroglobulin in self-tolerance// Cell. Immunol. 1990. - Vol. 131. -P.140-149.

162. Naito N., Saito K., Hosoya T. et al. Anti-thyroglobulin autoantibodies in sera from patients with chronic thyroiditis and from healthy subjects: differences in cross-reactivity with thyroid peroxidase// Clin. Exp. Immunol. 1990. - Vol.80. - P.4-10.

163. Nakamura R.M., Weigle W.O. Transfer of experimental autoimmune thyroiditis by serum from thyroidectomized donors// J. Exp. Med. 1969. - Vol.130. - P.263-285.

164. Nakane P.R., Kawaoi A. Peroxidase labeled antibody. A new method of conjugation// J. Histochem. Cytochem. 1974. - Vol.22. - P. 1084-1091.

165. Nlend M.C., Canvi D., Venot N. et al. Thyrotropin regulates tyrosine sulfation of thyroglobulin//Eur. J. Endocrinol. 1999.-Vol. 141.-P.61-69.

166. Notkins A.L. Polyreactivity of antibody molecules// Tr. Immunol. 2004. - Vol.25. - № 4. - P.174-178.

167. Ochsenbein A.F., Zinkernagel R.H. Natural antibodies and complement link innate and acquired immunity// Immunol. Today. 2000. - Vol.21. - P.624-630.

168. Oppenheim Y., Ban Y., Tomer Y. Interferon induced autoimmune thyroid disease (A1TD): a model for human autoimmunity// Autoimm. Rev. 2004. - Vol.3. - № 5. -P.388-393.

169. Parish N.M., Cooke A. Animal models of autoimmune endocrine disease and their uses in developing new methods of intervention// Bailliere's Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - Vol.9.-№ 1. - P.175-198.

170. Parish N.M., Cooke A. Mechanisms of autoimmune thyroid disease// Drug Discovery Today: Disease Mechanisms. 2004. - Vol.1. - № 3. - P.337-344.

171. Park Y.N., Arvan P. The acetylcholinesterase homology region is essential for normal conformational maturation and secretion of thyroglobulin// J. Biol. Chem. 2004. -Vol.279.-№ 17. - P.17085-17089.

172. Paul S., Li L., Kalaga R. et al. Characterization of thyriglobulin-directed and polyreactive catalytic antibodies in autoimmune disease// J. Immunol. 1997. - Vol.159. -№ 3. - P.1530-1536.

173. Peterson L.K., Tsunoda Y., Fujinani R.S. Role of CD5+ B-l cells in EAE pathogenesis// Autoimmunity. 2008. - Vol.41. - № 5. - P.353-362.

174. Peyelle-Brogard В., Ternyck Т., Guilbert В., Avrameas S. Anti-tubulin antibodies in rabbits before and after immunization in pig tubulin// Mol. Immunol. 1989. - Vol.26. -P.121-128.

175. Piechaczyk M., Cardes Т., Cot M.C. et al. Production and characterization of monoclonal antibodies against human thyroglobulin// Hybridoma. 1985. - Vol.4. -P.361-367.

176. Prentice L., Kiso Y., Fukuma N. et al. Monoclonal thyroglobulin autoantibodies: variable region analysis and epitope recognition// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. -Vol.80. - P.977-986.

177. Quantana F.J., Cohen I.R. The natural autoantibody repertoire and autoimmune disease// Biomed. Pharmacother. 2004. - Vol.58. № 5. - P.276-281.

178. Rajewsky K., Foster I., Cumano A. Evolutionary and somatic selection of the antibody repertoire in the mouse// Science. 1987. - Vol.238. - P. 1088-1094.

179. Rao V.P., Balasa В., Carayanniotis G. Mapping of thyroglobulin epitopes: presentation of a 9mer pathogenic peptide by different mouse MHC class II isotypes// Immunogenetics. 1994. - Vol.40. - P.352-359.

180. Rao V.P., Carayanniotis G. Contrasting immunopathogenic properties of highly homologous peptides from rat and human thyroglobulin// Immunology. 1997. - Vol.90.- P.244-249.

181. Rao V.R., Kajon A.E., Spindler K.R., Carayanniotis G. Involvement of epitope mimicry in potentiation but not initiation of autoimmune disease// J. Immunol. — 1999. Vol.162.- P.5888-5893.

182. Rasooly L., Rose N.R., Saboori A.M. et al. Iodine is essential for human T cell recognition of human thyroglobulin// Autoimmunity. 1998. - Vol.27. - P.213-219.

183. Rawitch A.B., Pollock H.G., Yang S.X. Thyroglobulin glicosylation: location and nature of the N-linked oligosaccharides in bovine thyroglobulin// Arch. Biochem. Biophys.1993. Vol. 300. - P.271-279.

184. Rayfield L.S., Smith T.A., Andrews S.J., Bergmeier L.A. Induction of experimental autoimmune thyroiditis in В cell-depleted mice// Immunol. Lett. — 1989. Vol.20. -P.21—27.

185. Resetkova E., Notenboom R., Arreaza G. et al. Seroreactivity to bacterial antigens is not unique phenomenon in patients with autoimmune thyroid diseases in Canada// Thyroid. —1994.-Vol.4. № 3. - P.269-274.

186. Reitan S.K., Hannestad K. Immunoglobulin heavy chain constant regions regulate immunity and tolerance to idiotypes of antibody variable regions// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol.99. -№11.- P.7588-7593.

187. Riezman H., Woodman P.G., Van Mear G., Marsh M. Molccular mechanisms of endocytosis// Cell. 1997. - Vol.91. - P.731-738.

188. Roitt I.M., Campbell P.N., Doniach D. The nature of the thyroid auto-antibodies present in patients with Hashimoto's thyroiditis (lymphadenoid goiter)// Biochem. J.- 1958. -Vol.69. -P.248-254.

189. Rose N.R. The discovery of thyroid autoimmunity// Immunol. Today. 1991. - Vol.12. -№ 5. -P. 167-168.

190. Rose N.R., Bonita R., Burek C.L. Iodine: an environmental trigger of thyroiditis// Autoimmun. Rev. 2002. - Vol. 1. - P.97-103.

191. Rose N.R., Bresler H.S., Burek C.L. et al. Mapping the autoepitopes of thyroglobulin// Isr. J. Med. Sci. 1990. - VoL.26. - P.666-672.

192. Rose N.R., Burek C.L. Autoantibodies to thyroglobulin in health and disease// Biochem. Biothechnol. 2000. - Vol.83. - P.245-254.

193. Rose N.R., Twarog F.J., Crowle A.J. Murine thyroiditis: importanse of adjuvant and mouse strain for the induction of thyroid lesions// J. Immunol. 1971. - Vol.106. -P.698-704.

194. Rose N.R., Saboori A.M., Rasooly L., Burek C.L. The role of iodine in autoimmune thyroiditis// Crit. Rev. Immunol. 1997. - Vol.17. -P.511-517.

195. Ruf J., Carayon P., Lissitzky S. Various expressions of a unique anti-human thyroglobulin antibody repertoire in normal state and autoimmune disease// Eur. J. Immunol. 1985. - Vol. 15. - P.268-272.

196. Ruf J., Feldt-Rasmussen U., Hegedus L. et al. Bispecific thyroglobulin and thyroperoxidase autoantibodies in patients with various thyroid and autoimmune diseases// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1994. - Vol.79. - P. 1404-1409.

197. Ruf J., Ferrand M., Durand-Gorde J.M., Carayon P. Immunopurification and characterization of thyroid autoantibodies with dual specificity for thyroglobulin and thyroperoxidase// Autoimmunity. 1992. - Vol. 11,- P. 179-188.

198. Ruf J., Ferrand M., Durand-Gorde J.M. et al. Significance of thyroglobulin antibodies cross-reactive with thyroperoxidase (TGPO antibodies) in individual patients and immunized mice// Clin. Exp. Immunol. 1993. - Vol.92. - P.65-72.

199. Saboori A.M., Burek C.L., Rose N.R. et al. Triptic peptides of human thyroglobulin: I. Immunoreactivity with murine monoclonal antibodies// Clin. Exp. Immunol. — 1994a. -Vol.98. -P.454-458.

200. Saboori A.M., Caturegli P., Rose N.R. et al. Triptic peptides of human thyroglobulin: II. Immunoreactivity with sera from patients with thyroid diseases// Clin. Exp. Immunol. -1994b. Vol.98. - P.459-463.

201. Saboori A.M., Rose N.R., Bresler H.S. et al. Iodination of human thyroglobulin (Tg) alters its immunoreactivity. I. Iodination alters multiple epitopes of human Tg// Clin. Exp. Immunol. 1998a. - Vol.113. - P.297-302.

202. Saboori A.M., Rose N.R., Burek C.L. Amino acid sequence of a tryptic peptide of human thyroglobulin reactive with sera of patients with thyroid diseases// Autoimmunity. 1995,-Vol.22.-P.87-94.

203. Saboori A.M., Rose N.R., Burek C.L. Iodination of human thyroglobulin (Tg) alters its immunoreactivity. II. Fine specificity of a monoclonal antibody that recognizes iodinated Tg// Clin. Exp. Immunol. 1998b. - Vol.113. - P.303-308.

204. Saboori A.M., Rose N.R., Kuppers R.C. et al. Immunoreactivity of multiple molecular forms of human thyroglobulin// Clin. Immunol. Immunopathol. 1994c. - Vol.72. - № 1. - P.121-128.

205. Saboori A.M., Rose N.R., Yuhasz S.C. et al. Peptides of human thyroglobulin reactive with sera of patients with autoimmune thyroid disease// J. Immunol. 1999. - Vol.163. -P.6244-6250.

206. Salamero J., Remy J.J., Michel-Bechet M., Charreire J. Experimental autoimmune thyroiditis induced by a 5-10 kDa triptic fragment from porcine thyroglobulin// Eur. J. Immunol. 1987. - Vol.17. - P.843-848.

207. Santamaria P. Effector Lymphocytes in autoimmunity// Curr. Opin. Immunol. 2001. -Vol.13. -P.663-669.

208. Schneider S.C., Sercarz E.E. Antigen processing differences among APC// Hum. Immunol. 1997. - Vol.54. - P. 148-158.

209. Schumacher M., Champs S., Maulet Y. et al. Primary structure of Torpedo californica acetylcholinesterase deduced from its cDNA sequence// Nature. 1986. - Vol.319. -P.407-409.

210. Schuppert F., Muller-Kunert E., Stocker W. et al. Cytokine therapy and the endocrine system: is it necessary to monitor more than the thyroid gland?// Med. Klin. — 1996. — Vol.91. -№ 2. -P.59-65.

211. Sharp G.C., Wortis H.H., Dunnore B. The biological effects of anti-thyroid antibodies. Thyroid eosinophilia following passive transfer of anti-thyroglobulin antibody// Immunology. 1967. - Vol.13. - P.39^18.

212. Shumacher M., Camps S., Maulet Y. et al. Primary structure of Torpedo californica acetylcholineserase deduced from its cDNA sequence// Nature. 1986. - Vol.319. -P.407-409.

213. Sikorska H.M. Anti-thyroglobulin anti-idiotypic antibodies in sera of patients with Hashimoto's thyroiditis and Graves' disease// J. Immunol. 1986. - Vol.137. - № 12. -P.3786-3795.

214. Slifka M.K., Anita R., Whitmire J.K., Ahmed R. Humoral immunity due to long-lived plasma cells// Immunity. 1998. - Vol.8. - P.363-372.

215. Spencer C.A. Recoveries cannot be used to authenticate thyroglobulin (Tg) measurements when sera contain Tg autoantibodies// Clin. Chem. 1996. - Vol.42. -P.661-663.

216. Spencer C.A., Takeuchi M., Kazaroyan M. Current status and performance goals for serum thyroglobulin assays// Clin. Chem. 1996. - Vol.42. - P. 164-173.

217. Spencer C.A., Wang C.C. Thyroglobulin measurement. Techniques, clinical benefits, and pitfalls// Endocrinol. Metab. Clin. N.A. 1995. - Vol.24. - P.841-863.

218. Spitzweg C., Heufelder A.E., Morris J.C. Thyroid iodide transport// Thyroid. 2000. -Vol.10.-P.321-330.

219. Stahl D., Lacroix-Desmazes S., Mouthon L. et al. Analysis of human self-reactive antibody repertoives by quantitative immunoblotting// J. Immunol. Meth. 2000. -Vol.240.-P.l-14.

220. Stockinger B. Capacity of antigen uptake by В cells, fibroblasts or macrophages determines efficiency of presentation of a soluble self antigen (C5) to T lymphocytes// Eur. J. Immunol. 1992. - Vol.22. - P.1271-1278.

221. Swillens S., Ludgate M., Mercken L. et al. Analysis of sequence and structural homologies between thyroglobulin and acetylcholinesterase: possible functional and clinical significance// Boichem. Biophys. Res. Commun. 1986. — Vol.137. - P. 142148.

222. Takamatsu J., Yoshida S., Yokozawa T. et al. Correlation of antithyroglobulin and antithyroidperoxidase antibody profiles with clinical and ultrasound characteristics of chronic thyroiditis// Thyroid. 1998. - Vol.8. -P.l 101-1106.

223. Tang H., Bedin C., Texier В., Charreire J. Autoantibody specific for a thyroglobulin epitope inducing experimental autoimmune thyroiditis or its anti-idiotype correlates with the disease// Eur. J. Immunol. 1990. - Vol.20. - P. 1535-1539.

224. Teng W.P., Weetman A.P. Epitope binding of human thyroglobulin autoantibodies of different IgG subclasses//J. Clin. Lab. Immunol. 1990.-Vol.31.-P. 101-104.

225. Ternynck Т., Avrameas S. Murine natural monoclonal autoantibodies: a study of their polyspecificities and their affinities// Immunol. Rev. 1986. - Vol.94. - P.99-112.

226. Texier В., Bedin C., Tang H. el al. Characterization and sequencing of a 40-amino acid peptide from human thyroglobulin inducing experimental autoimmune thyroiditis// J. Immunol. 1992. - Vol.148. - P.3405-3411.

227. Thrasyvoulides A., Likata E., Lymberi P. Spreading of antibody reactivity to non-thyroid antigens during experimental immunization with human thyroglobulin// Clin. Exp. Immunol. 2007. - Vol.147. - P. 120-127.

228. Thrasyvoulides A., Lymberi P. Antibodies cross-reacting with thyroglobulin and thyroid peroxidase are induced by immunization of rabbits with an immunogenic thyroglobulin 20mer peptide// Clin. Exp. Immunol. 2004. - Vol.138. - P.423^129.

229. Tomazic V., Rose N.R. Autoimmune murine thyroiditis VIII. Role of different thyroid antigens in the induction of experimental autoimmune thyroiditis// Immunology. 1976.- Vol.30.-P.63-68.

230. Tomer Y. Anti-thyroglobulin autoantibodies in autoimmune thyroid'diseases: cross-reactive or pathogenic?// Clin. Immunol. Immunopathol. 1997. - Vol.82. - P.3-11.

231. Tomer Y., Gilburd В., Sack J. et al. Induction of thyroid autoantibodies in naive mice by idiotypic manipulation// Clin. Immunol. Immunopathol. 1996. - Vol.78. - P.180-187.

232. Toyoda N., Nishikawa M., Iwasaka T. Anti-thyroglobulin antibodies// Nippon Rinsho. -1999,-Vol.57.-P.1810-1814.

233. Twarog F.J., Rose N.R. The production of thyroid autoantibodies in mice// J. Immunol. -1968. Vol.101. - № 2. - P.242-250.

234. Vaidya В., Kandall-Taylor P.; Pearce S.H.S. Genetics of endocrine disease. The genetics of autoimmune thyroid disease// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2002. - Vol.87. — P.5385-5397.

235. Vali M., Rose N.R., Caturegli P. Thyroglobulin as autoantigen: structure-function relationships// Rev. Endocrine Metab. Disord. 2000. - Vol.1. - P.69-77.

236. Vanderpump M.P.J., Tunbride W.M.G., French J.M. et al. The incidence of thyroid disorders in the community: a twenty-year follow-up of the Wickham Survey// Clin. Endocrinol. (Oxf.). 1995. - Vol.43. -P.55-68.

237. Verginis P., Stanford M.M., Carayanniotis G. Delineation of five thyroglobulin T cell epitopes with pathogenic potential in experimental autoimmune thyroiditis// J. Immunol.- 2002. Vol. 169. - P.5332-5337.

238. Viau M., Zouali M. B-lymphocytes, innate immunity, and autoimmunity// Clin. Immunol. 2005. - Vol.114. - P. 17-26.

239. Villa M., Durand-Gorde J.-M., Carayon P., Ruf J. Idiotypic study of a bispecific thyroglobulin and thyroperoxidase monoclonal antibody// J. Autoimmun. 1996. -Vol.9.-P.653-660.

240. Vladutiu A.O. Experimental autoimmune thyroiditis in mice chronically treated from birth with anti-IgM antibodies// Cell. Immunol. 1989. - Vol.121. - P.49-59.

241. Vladutiu A.O., Rose N.R. Autoimmune murine thyroiditis. Relation to hystocompatibility (H-2) type// Science. 1971a. - Vol. 174b. - P.l 137-1139.

242. Vladutiu A.O., Rose N.R. Transfer of experimental autoimmune thyroiditis of the mouse by serum// J. Immunol. 1971 b. - Vol. 106. - P.l 139-1142.

243. Wan Q., Motte R.W., McCormick D.J. et al. Primary hormonogenic sites as conserved autoepitopes on thyroglobulin in murine autoimmune thyroiditis: role of MHC class II// Clin. Immunol. Immunopathol. 1997. - Vol.85. -№ 2. - P. 187-194.

244. Wang L., Zheng W.F. Measurement and clinical significance of thyroid microsomal and thyroglobulin antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay// Chin. Med. J. — 1989. -Vol.102. -№ 4,-P.282-289.

245. Weetman A.P., Black C.M., Cohen S.B. et al. Affinity purification of IgG subclasses and the distribution of thyroid autoantibody reactivity in Hashimoto's thyroiditis// Scand. J. Immunol. 1989. - Vol.30. - P.73-82.

246. Weetman A.P., De Groot L.J. Autoimmunity to the thyroid gland last. In: The thyroid and its diseases, http://www.thyroidmanager.org, 2008. P. 1-78.

247. Weetman A.P., McGregor A.M. Autoimmune thyroid disease: further development in our understanding// Endocr. Rev. 1994. - Vol.15. - P.788-830.

248. Weigle W.O. Recent observation and concepts in immunological unresponsiveness and autoimmunity// Clin. Exp. Immunol. 1971. - Vol.9. - P.437-447.

249. Wenig B.M., Hoffes C.S., Adair C.F. Atlas of endocrine pathology. W.B.Saunders Company Philadelphia, London, Toronto ect., 1997. P.378.

250. Wong V., Fu A., Xi-Li G. et al. Thyrotoxicosis induced by alpha-interferon therapy in chronic viral hepatitis// Clin. Endocrinol. 2002. - Vol.56. - № 6. - P.793-798.

251. Xiu L.L. Studies on autoimmune mechanisms of thyroglobulin autoantibody in autoimmune thyroid disease// Hiroshima J. Med. Sci. 1994. - Vol.43. - P. 1-11.

252. Yamamoto K., Tsuji Т., Irimura Т., Osawa Y. The structure of carbohydrate unit В of porcine thyroglobulin//Biochem. J. 1981. -Vol.195. -P.701-713.

253. Yamashita M., Konagaya S. A novel cysteine protease inhibitor of the egg of chum pj salmon, containing a cysteine-rich thyroglobulin-like motif// J. Biol. Chem. 1996. - / Vol.271. -P.1282-1284.

254. Yen P.M. Physiological and molocular basis of thyroid hormone action// Physiol. Rev. -2001. Vol.81. - P. 1097-1141.

255. Yokochi Т., Inoue Y., Fukada M. et al. Histological and functional changes in the thyroid glands of mice implanted with hybridomas secreting monoclonal autoantibody against mouse thyroglobulin// Autoimmunity. -1991.- Vol. 10.-P.125-131.

256. Zanetti M., De Baets M., Rogers J. High degree of idiotypic cross-reactivity among murine monoclonal antibodies to thyroglobulin// J. Immunol. 1983. - Vol.131. -P.2452-2457.

257. Zarrilli R., Formasino S., Di Jeso B. Hormonal regulation of thyroid peroxidase in normal and transformed rat thyroid cells// Mol. Endocrinol. 1990. - Vol.4. - № 1. -P.39—45.

258. Zhang X., Arvan P. Cell type dependent differences in thyroid peroxidase cell surface expression// J. Biol. Chem. 2000. - Vol.275. - № 41. - P.31946-31953.

259. Zhou Z.-H., Tzioufas A.G., Notkins A.L. Properties and function of polyreactive antibodies and polyreactive antigen-binding В cells// J. Autoimmun. 2007. - Vol.29. -№ 4.-P.219-228.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина

Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина

Оглавление диссертации Шашкова, Ольга Александровна :: 2009 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Шашкова, Ольга Александровна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование специфичности и биологической активности моноклональных аутоантител против тиреоглобулина"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Шашкова, Ольга Александровна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций