ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)

Буланкин, Денис Георгиевич

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.) - тема автореферата по медицине

Буланкин, Денис Георгиевич Самара 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)

Буланкин Денис Георгиевич

ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 О [.¡АР 2077

Самара-2011

4839971

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

доктор химических наук, профессор

Куркин Владимир Александрович

Лозовая Галина Федоровна Пурыгин Петр Петрович

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « ' » апреля 2011 г. в 'У часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (443079, г. Самара, пр. К. Маркса, 165 Б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171)

Автореферат разослан «__»___2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

И.К. Петрухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ряд факторов, среди которых важнейшими являются напряженный ритм жизни, сопутствующие ему стрессовые ситуации, самолечение, постоянное увеличение количества больных с нарушениями мозгового кровообращения, стимулирует поиск новых эффективных лекарственных средств (J1C), способных восстанавливать или компенсировать нарушенные функции головного мозга. Своевременный прием лекарственных препаратов (ЛП) данной группы не только повышает качество жизни, но и препятствует развитию соматической патологии, вызванной психогенными факторами. Препараты растительного происхождения занимают особую нишу в группе ноотропных средств. Известно, что растительные ноотропы. действующие не менее эффективно, чем синтетические субстанции, при правильном их использовании вызывают меньше побочных эффектов. Большинство растительных JII1 продолжают поступать из-за рубежа. В основном это ЛИ, изготовленные на основе листьев гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L., сем. Гинкговых - Ginkgoacae).

Листья гинкго двулопастного входят в Европейскую и Британскую фармакопеи. На основе извлечений из листьев гинкго двулопастного производятся такие препараты как танакан, билобил, мемоплант, гинкор форт, гинкор гель и др., разрешенные к применению в Российской Федерации. Препараты листьев гинкго широко применяются за рубежом. Что касается отечественных производителей, то они ориентированы в настоящее время на производство биологически активных добавок (несколько десятков). Однако это не позволяет решать проблему лекарственного обеспечения населения. В связи с этим актуальна разработка отечественных препаратов, в частности, настойки и экстракта листьев гинкго двулопастного.

Созданию импортозамещающих ноотропных ЛП препятствует такие факторы, как недостаточная степень изученности химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации. Кроме того, до сих пор не решены проблемы стандартизации. На данный момент в нашей стране отсутствуют какие-либо виды нормативной документации на сырье «Гинкго двулопастного листья». До сих пор не решены вопросы определения подлинности сырья и препаратов гинкго с использованием ТСХ и УФ-спектроскопии, хотя ранее проводились исследования по стандартизации сырья и препаратов гинкго. Однако в итоге этот процесс привел к использованию методики, описанной в американской фармакопее. На наш взгляд, данная методика не является специфичной для гинкго билоба, поскольку при анализе принимаются во внимание только агликоны флавоноидов (кемпферол, кверцетин и изорамнетин), полученные кислотным

гидролизом в среде хлористоводородной кислоты. Одним из диагностических флавоиоидов листьев гинкго двулопастного является гинкгетин (диметилированное производное 8,3'-бисапигенина). который не обнаруживается в условиях предложенного ВЭЖХ-анализа. В нашем исследовании мы опирались на анализ нативных флавоиоидов гинкго — как гликозидов (производные кемпферола, изорамнетина и др.), так и метилированных производных аментофлавона, или 8,3'-бисапигенина (гинкгетин, изогинкгетин), присущих именно этому виду сырья, что повышает достоверность и эффективность как качественного, так и количественного анализа.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое исследование листьев гинкго двулопастного, культивируемого в РФ, по обоснованию и разработке унифицированных методик анализа сырья и препаратов на основе данного растения и созданию импортозамещающих ноотропных лекарственных средств (ЛС).

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследование химического состава групп биологически активных веществ (БАС), присутствующих в листьях гинкго двулопастного, культивируемого в РФ (терпеноиды, флавоноиды, дубильные вещества).

2. Сравнительное исследование флавоноидного состава листьев гинкго двулопастного и препаратов на основе сырья гинкго.

3. Разработка методик качественного анализа диагностических флавоиоидов листьев гинкго двулопастного для оценки подлинности данного сырья и препаратов на его основе.

4. Разработка методики количественного определения флавоиоидов (гинкгетина, изогинкгетина, никотифлорина, нарциссина, рутина) в листьях гинкго двулопастного.

5. Обоснование способа получения сухого экстракта из листьев гинкго двулопастного.

6. Обоснование способа получения настойки из листьев гинкго двулопастного.

7. Изучение показателей и норм качества сырья гинкго двулопастного листьев, экстракта сухого и настойки гинкго двулопастного.

8. Разработка и оформление проекта нормативной документации - ФСП на фитопрепараты - «Гинкго двулопастного листьев экстракт сухой» и «Гинкго двулопастного листьев настойка».

Научная новизна. В результате изучения химического состава листьев гинкго двулопастного. культивируемого в Краснодарском крае, выделены и

идентифицированы 5 индивидуальных соединений. Среди них доминирующее флавоноидное вещество гинкгетин (диметилированное производное 8,3'-бисанигенина), изогинкгегин, никотифлорин и нарциссин в РФ из данного растения выделены впервые и идентифицированы с использованием УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии и масс-снектрометрии. Также для гинкго, культивируемого в Российской Федерации, в процессе исследования выделен и определен рутин.

Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов листьев гинкго двулопастного по флавоноидам (ведущая группа БАС) и, в частности, по выявленным диагностическим соединениям - гинкгетину, изо! инкгетину, никотифлорину, нарциссину и рутину.

Обнаружено, что гинкгетин является одним из доминирующих и специфичных для гинкго двулопастного флавоноидов и имеет диагностическое значение для стандартизации сырья и препаратов гинкго с точки зрения химического состава.

Разработаны подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении диагностического доминирующего флавоноида - гинкгетина с использованием ТСХ-анализа, ГСО рутина и УФ-спектроскопии.

Выявлена нейротропная активность препаратов (танакан. билобил) на основе гинкго и обоснована необходимость коррекции дозирования их приема в течение суток.

Научно обоснована целесообразность создания лекарственных растительных препаратов «Гинкго двулопастного экстракт жидкий» и «Гинкго двулопастного настойка», обладающих нейротроппой активностью, в том числе ноотропным действием.

Практическая значимость. На основе фитохимических исследований разработана методика качественного и количественного анализа сырья - гинкго двулопастного листьев. Разработана методика качественного и количественного анализа сухого экстракта гинкго и настойки гинкго. Методики качественного анализа основываются на определении гинкгетина и изогинкгетина по отношению к внешнему стандарту (ГСО рутина) .методами тонкослойной хроматографии, хроматоспектрофотометрии. Разработанные методики количественного анализа ЛРС и Л С гинкго базируются на определении содержания суммы флавоноидов методом хроматоспектрофотометрии в пересчете на рутин.

Впервые разработаны проекты нормативной документации (НД):

- проект ФСП «Гинкго двулопастного листьев экстракт сухой»;

- проект ФСП «Гинкго двулопастного листьев настойка».

Результаты исследований используются в научных исследованиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и

кафедре химии фармацевтического факультета СамГМУ (акты внедрения от 22.04.2010 г.), в ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области», а также в ЗАО «Самаралектравы» (нос. Антоновка Самарской области}.

Также по результатам исследований оформлено два рационализаторских предложения:

- удостоверение на рационализаторское предложение № 107 от 27.12.20Т0 «Способ качественного анализа лекарственного растительного сырья (листьев) и настойки гинкго двулопастного»;

- удостоверение на рационализаторское предложение № 108 от 27.12.2010 «Способ количественного анализа лекарственного растительного сырья (листьев) и настойки гинкго двулопастного».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации.

2. Разработка методики стандартизации листьев гинкго двулопастного.

3. Разработка методики стандартизации получаемого на основе листьев гинкго сухого экстракта.

4. Разработка методики стандартизации получаемой на основе листьев гинкго настойки.

5. Обоснование способа получения экстракционного препарата «Гинкго двулопастного листьев настойка».

6. Обоснование способа получения экстракционного препарата «Гинкго двулопастного листьев экстракта сухой».

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа была выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200405620, 01200900658) и при поддержке Федерального целевого проекта 02.740.11.0650 «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XIII конгрессе "Экология и здоровье человека" (Самара,

2008): на межвузовской конференции «Аспирантские чтения» (Самара. 2008; 2009; 2010); на VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва,

2009); VII Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2009); в рамках федеральной программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» (Самара, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 научных работ, в том числе 4 статьи - в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах машинописного текста, содержит 15 рисунков и 15 таблиц, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), характеристики объектов и методов исследования (глава 2), описания исследования химического состава сырья и препаратов (глава 3), описания хода разработки методик стандартизации сырья гинкго двулопастного (глава 4), исследования по разработке и стандартизации новых препаратов на основе гинкго билоба (глава 5), выводов к главам и общих выводов, списка литературы, включающего 188 источников, и том числе 70 иностранных, 3 приложения (акты внедрения результатов диссертационной работы, проекты фармакопейных статей предприятия, клинико-фармакологические статьи на препараты гинкго двулопастного).

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава I содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований гинкго двулопастного, в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растения, фармакологической активности, применению в медицинской практике.

В главе 2 представлена характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики химического, физико-химического и фармакологического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов.

В главах 3-5 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава плодов гинкго двулопастного, совершенствованию методик стандартизации данного сырья и ЛП на его основе, оценке их качества.

В приложения вынесены материалы по разработке ФСП, акты внедрения и 'Н-ЯМР-спектры диагностических флавоноидов гинкго двулопастного. Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах, в формулах, на рисунках, которые приведены в тексте диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Изучение химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации

В результате предварительных исследований химического состава листьев гинкго двулопастного с использованием химических реакций в данном сырье обнаружены флавоноиды (цианидиновая реакция, цианидиновая реакция по Брианту). терпепоиды (реакция Либермана-Бурхарда), дубильные вещества (реакция с хлоридом железа (III)) и другие фенольные соединения (реакция с диазобензолсульфокислотой). С целью обоснования методик качественного и количественного анализа нами проведена препаративная хроматографическая работа по выделению доминирующих флавоноидов - нарциссина, никогифлорина, пшкгетина и изогинкгетина. С использованием колоночной хроматографии и последующей перекристаллизацией получены вещества, которые по физико-химическим константам, данным УФ-, ЯМР и масс-спектров, а также качественным реакциям и реакциям химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз) охарактеризованы как никотифлорин (З-О-рутинозид кемпферола), нарциссин (З-О-рутинозид изорамнетина), а также диметилированные производные бифлавоноида (бисапигенина) - гинкгетин и изогинкгетин (табл. I).

Таблица 1

Состав и структура выделенных соединений

№ Название, химическая формула Состав VT агликона

1. Нарциссин OCHj ^V^Nj^^OGIc Rtiam ОН О с28н32о,6 316

2. Гинкгетин ^X^HOO^JJ," С32Н22О10 536

3. Изогинкгетин Т Д 4>-ОСН-! 1 II 1! йо- X -о. Л гУ' хх х - ™ А X 1 С32Н22О10 536

4. Никогифлорин С27Ч30О15 286

Т II 1|

- (;|с-0-иЬтчп

1 II он о

5. Рутин ?н т т т УУ^О - (■к-()-К1|;1111» он о С27Н30О16 302

Нарцисспн (1). Желтые кристаллы состава С^ИзгО^ (З-О-рутинозид изорамнетина), т. пл. 173-175°. [а]^. + 12,0о (0.83, вода). УФ-спектр (ЕЮН, им): 257, 268пл.; +Д1С13: 268, 276пл., 403 им, 357 им. 'Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и Э20 (300 МГц) (Вгикег ЛМ 300) 3: 7,97 (д. 2 Гц. Н-2'). 7.66 (да, 2 и 8,5 Гц, Н-6'), 6,96 (д. 2 Гц, Н-5'), 6,50 (д, 2 Гц, Н-8'), 6,24 (д. 2 Гц. Н-6), 5,23 (д. 7 Гц, Н-1" глюкопиранозм), 4.50 (д, 2 Гц, Н-Г" рамнопиранозы), 3.95 (с, ЗН, СН30), 3,2-3,8 (10 И Сахаров), 1,04 (д, 6 Гц, СИ, рамнозы). Спектр 'Н-ЯМР нонаацетата (1) (СЭСЬ) 8: 8,08 (Н-5'), 7,88 (Н-2'), 7,60 (Н-6'), 7,30 (Н-8), 6,80 (Н-6), 3.97 (СН30), 3,1-5,4 (м, 12Н Сахаров), 2,45 (ЗН), 2.34 (ЗН). 2,32 (ЗН) -синглеты грех Ас-аром., 1.93-2,17 (синглеты 6 Ас-алифат.), 1,09 (СН3 рамнозы).

Гннкгетни (2). Кристаллы светло-желтого цвета, состава С32Н22О10 (8,3-диметилбисапигенин), УФ-спектр (ЕЮН, А.„а„ им): 271. 330; +А1С13: 279, 330, 348, 385; +А1С13+НС1: 279, 330, 348, 385. Спектр 'Н-ЯМР (300 МГц), (ДМСО-с16, 5, м.д., 1/Гц): 3.77 (ЗН, с, 4'-ОСН3), 3.84 (ЗН, с, 7-ОСН3), 6.43 (1Н, с. Н-6"), (1Н. д, .Г = 2.5, Н-6), 6.48 (1Н, д, ] = 2.5, Н-8), 6.72 (1Н, д, ] =9, Н-3'), 6.80 (1Н, с, Н-3). 6.90 (III, с, Н-3"), 6.94 (2Н, д, Г =9, Н-3'" и Н-5'"), 7.50 (III, д, .1 =9, Н-3'). 7.62 (2Н, д, J = 9, Н-2'" и Н-6'"), 8.10 (Ш, д. } = 2.5, Н-6'), 8.18 (Ш, дд, } = 2.5 и 1 =

9.0. Н-2'). 12.93 (1Н, с. 5-ОН группы). 13.05 (1Н. с, 5"-ОН группы). Масс-спектр (70 eV. 200 °С, m/z, %): М+ 566 (100).

Изогннкгетин (3). Кристаллы светло-желтого цвета, состава C^HiiOio (8,3'-диметилбисапигенин). УФ-спектр (EtOH, им): 271, 330; +А1С13: 279, 330, 348, 385; +А1С13+НС1: 279, 330, 348, 385. Спектр 'Н-ЯМР (300 МГц), (ДМСО-с16, 8, м.д., J/Гц): 3.77 (ЗН, с, 4'-ОСН3), 3.84 (ЗН, с, 7-ОСН3), 6.43 (1Н, с. Н-6"). (111. д, J = 2.5. Н-6), 6.48 (1Н, д, J = 2.5, Н-8), 6.72 (IM, д, J =9, Н-3'), 6.80 (1Н, с, Н-3), 6.90 (1Н, с, Н-3"), 6.94 (2Н, д, 3 =9, Н-3'" и Н-5'"), 7.50 (1Н, д, J =9, Н-3'), 7.62 (211, д, .1 = 9, Н-2'" и Н-6'"), 8.10 (1Н, д. J = 2.5, Н-6'), 8.18 (1Н, дд, } = 2.5 и J = 9.0, Н-2'), 12.93 (1Н, с. 5-ОН группы), 13.05 (1Н, с, 5"-ОН группы). Масс-спектр (70 cV, 200 °С, m/z. %): М+ 566 (100).

Никотифлорин (4). Кристаллы светло-желтого цвета, состава С27Н30О15 (З-О-рутинозид кемпферола).т.пл. 182-186 °С, УФ-спектр (EtOH, Ятах, им): 266, 355; +A1CI,, 270, 304, 390; +А1С13+НС1 270, 304, 400. Спектр 'Н-ЯМР (300 МГц), (ДМСО-й6, ft, м.д., J/Гц); 0.98 (ЗН, д. .1 = 6.0. СН3 рамнозы), 3.00-3.85 (ЮН сахарной части), 4.38 (111. д, .1=2.0, Н-Г" рамнозы), 5.31 (1Н, д, J=7.0, Н-1" глюкозы), 6.20 (1Н, д, J = 2.5, Н-6), 6.30 (1Н, д, J = 2.5, Н-8), 6.88 (2Н, д, J =9, Н-3' и Н-5'). 7.97 (2Н, д, J = 9, Н-2' и Н-6'), 12.56 (1Н, с, 5-ОН группы). Масс-спектр (70 eV, 200 °С, m/z, %); М* агликона286 (100).

Рутин (5). Светло желтое аморфное вещество состава С27Н30О16 (З-О-рутинозид кверцетина), УФ-спектр (EtOH, А.тал, им): 258, 266 пл, 362 им. 'Н-ЯМР-спектр 7,65 (д, 9 Гц, Н-2'), 7.57 (д, 9 Гц, Н-6'), 6,9 (д. 9 Гц, Н-5'), 6,43 (д, 2,5 Гц, Н-8). 6,20 (д. 2.5 Гц, Н-6), 5,05 (д, 7 Гц, Н-1"), 4.55 (д, 2 Гц. Н-Г"), 4,5 - 3.2 (м, бН-пиокозы + 4Н рамнозы).

2. Стандартизация сырья н препаратов гинкго двулопастного

Согласно современным требованиям, предъявляемым к нормативной документации (ИД) на лекарственное растительное сырье (JIPC), фитохимический анализ включает задачи качественного и количественного анализа ЛРС по содержанию ведущих групп БАС, обеспечивающих фармакологическую активность.

Учитывая высокое содержание флавоноидов в листьях гинкго двулопастного, их несомненную значимость в проявлении биологической активности ЛП из данного сырья, представляется целесообразным изучение компонентного состава гинкго для обоснования возможности стандартизации данного ЛРС по содержанию нативных флавоноидов.

Необходимость разработки НД объясняется в данном случае её отсутствием на российском фармацевтическом рынке. В имеющихся методиках качественной и

количественной оценки сырья и препаратов гинкго двулопаетного анализ производится с помощью общих методов, исключающих ориентирование на специфичные именно для этого растения БАС.

В этом отношении особый интерес представляет тонкослойная хроматография, которая в последнее время все более широко используется в методиках качественного анализа.

._ ^ -лой связи, нами предложены новые подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении доминирующего и

диагностического флавоноида лшкгспша в присутствии ГСО рутина (качественные реакции), а также определение суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотомстрии.

2.1. Качественный анализ листьев гинкго двулопаетного

С целью определения подлинности сырья гинкго двулонастного использовали ТСХ-анализ. основанный на обнаружении и идентификации доминирующего флавоноида и качественные реакции.

В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих эффективно разделить основные компоненты сырья и однозначно идентифицировать доминирующее БАС - гинкгегин.

В результате проведенных опытов с различны ми хромато графическим и системами (хлороформ-этанол. хлороформ-метанол,

хлороформ-метанол-вода в различных

соотношениях) предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ-метанол-вода (26:14:3), обеспечивающей наиболее четкое разделение флавоноидов, в том числе и доминирующего компонента З-О-рутинозид кемпферола. При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм гинкгетин и изогинкгетин обнаруживаются в виде одного доминирующего пятна желто-

5. 6

Рис. 1. Схема хроматограммы растворов флавоноидов-свидетелей и настойки гинкго двулопаетного

Обозначения-

Настойка гинкго 70% (1:5); Раствор ГСО рутина; Раствор нарциссина; Раствор никотифлорина; Раствор гимкгетина; Раствор изогинкгетина.

оранжевого цвета с Rr около 0.9; никоти-флорин - в виде темно-желтого пятна с Rf около 0,5: нарциссип - в виде желтого пятна с Rf около 0,4-0,5 (рис. 1).

Для обнаружения вещества хроматограмму просматривали в видимом свете, УФ-свете и после проявления с раствором диазобензолсульфокислоты. При обработке реактивом хроматографические пластинки нагревали при температуре 110 °С в течение 5 минут в сушильном шкафу. При этом все описанные вещества проявляются в виде хорошо заметных пятен желто-оранжевого цвета.

На наш взгляд, в данной методике целесообразно использовать ГСО рутина, по физико-химическим свойствам близкий к вышеописанным флавоноидам, так как расчет величины Rs позволит повысить объективность методики для анализируемого вещества.

В ходе разработки методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях гинкго изучены УФ-слектры водно-спиртовых извлечений из данного сырья. Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena).

200 250 '.К 350 40] 45 О 500 550 60Ü Б50 М

ЛЬаотЬапсс

Рис. 2. Электронные спектры раствора водно-спиртового извлечения гинкго двулопастного (1) и извлечения в присутствии 3% спиртового раствора АЮз (2)

Рис. 3. Дифференциальный электронный спектр раствора водно-спнртового извлечения гинкго двулопастного и извлечения в присутствии 3% спиртового раствора А1С1}

При разработке методики количественного определения суммы флавоноидов использовали реакцию комплексообразоиания с раствором А1С1) для исключения вклада в значение оптической плотности других групп соединений. В этом случае наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов, который обнаруживается в спектре в виде максимума поглощения при длине волны 406 нм (рис.2). Это находит подтверждение в условиях дифференциальной спектрофотометрии: максимум поглощения при 406 нм (рис. 3).

Полученные нами результаты были использованы при разработке методики количественного определения.

2.2. Количественный анализ листьев гинкго двулопастного

С целью разработки методики количественного определения суммы флавоноидов определены оптимальные условия экстракции листьев гинкго: экстрагент 70% этиловый спирт; соотношение сырье - экстрагент - 1:30; извлечение на водяной бане при температуре 85-90 "С в течение 60 мин (табл. 2).

Таблица 2

Зависимость полноты извлечения суммы флавоноидов листьев гинкго двулопастного от условий экстракции

№ п/п Экстрагент Соотношение сырье:экстрагент Время экстракции, мин Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье. %

I 20% этиловый спирт 1:30 60 0.80 + 0,02

2 30% этиловый спирт 1:30 60 0,93 ± 0,03

3 40% этиловый спирт 1:30 60 1.06 ±0,03

4. 50% этиловый егшрт 1:30 60 1,80 + 0,04

5. 60% этиловый спирт 1:30 60 1,95 ±0,05

6. 96% этиловый спирт 1:30 60 2,02 ± 0,05

7. 70% этиловый спирт 1:30 45 1,10 ±0,02

8. 70% этиловый спирт 1:30 60 2,15 ±0,04

9 70% этиловый спирт 1:30 90 2,16 + 0,04

10. 70% этиловый спирт 1.30 120 2,14 ±0,04

С использованием разработанных методик определено содержание суммы флавоноидов в листьях гинкго двулопастного, культивируемого в различных регионах (табл. 3).

Таблица 3

Содержание суммы флавоноидов листьев гинкго двулопастного в зависимости от места культивирования

№ п/п Место культивирования Время экстракции, мим Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абс. сухое сырье <в%)

1. Краснодарский Ботанический Сад (август 2008 г.) 60 2,15 + 0,03

2. Краснодарский Ботанический Сад (август 2009 г ) 60 2,20 ±0,04

3. НИИ Физиологии растений, г. Москва (октябрь 2009 г.) 60 2,01 ±0,03

Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в листьях гинкго двулопастного методом хроматоспектрофотометрии представлены в таблице 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях гинкго двулопастного

/ X 5 Р, % t(PJ) АХ Е, %

10 2,15 0.0200 95 2,23 0,080 4,12

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы флавоноидов в листьях гинкго двулопастного с доверительной вероятностью 95% составляет 4,12%.

2.3. Стандартизация препаратов на основе гннкго двулопастного

В основу качественного анализа экстракционных препаратов гинкго двулопастного в соответствии с принципом унификации методик положены ранее обсужденные для Л PC подходы: разработана ТСХ-методика определения доминирующего специфического флавоноида гинкгетина и качественные реакции.

В основу количественного определения суммы флавоноидов в настойке и экстракте гинкго двулопастного, как и в случае сырья, положен метод дифференциальной спектрофотометрии. Определение суммы флавоноидов во всех рассматриваемых случаях предложено проводить в пересчете на рутин, что нашло отражение в проектах ФСП на сухой экстракт гинкго и настойку гинкго.

Поскольку ранее было обосновано, что оценку качества сырья целесообразно проводить по содержанию флавоноидов, аналитическая длина волны составляет 406 им. В данной области спектра спиртовые растворы препаратов и флавоноиды имеют прямопропорциональную зависимость оптической плотности от концентрации. В условиях УФ-спектроскопии близкие характеристики имеет раствор ["СО рутина, длинноволновый максимум поглощения которого в присутствии А1С13 составляет 412 нм. Это свидетельствует о возможности использования данного стандарта в методике количественного определения. Данное обстоятельство позволяет использовать дифференциальную спектрофотометрию для количественного определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в настойке и экстракте гинкго двулопастного представлены в таблице 5.

Таблица 5

Метрологические характеристики спектрофотометрическои методики количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте и настойке гинкго двулопастного

Наименование лекарственного препарата / X 5 Р, % tlPJ) АХ £ %

Гинкго двулопастного экстракт сухой 10 10,07 0,1704 95 2,23 0,379 3,85

Гинкго двулопастного настойка 10 0,41 0,0254 95 2,23 0,015 3,76

2.3.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Гинкго двулопастного настойка». 1 мл настойки помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 70 % спиртом до метки (раствор А). I мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл прибавляют I мл алюминия хлорида (III) и доводят объем раствора 96 % спиртом до метки (раствор Б).

Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 406 нм. В качестве раствора сравнения используется 1 мл раствора А, помещенный в мерную колбу вместимостью 25 мл и доведенный 96 % спиртом до метки.

Параллельно определяют оптическую плотность ГСО рутина в присутствии А!С13.

Содержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на рутин в процентах (X) вычисляют по формуле:

^_ Pxm„x25x25xlxl00 _ Охл»0х25

50x25 50 хЦ, ' '

D - оптическая плотность испытуемого раствора (раствор Б);

Do - оптическая плотность раствора ГСО рутина;

то - масса рутина, взятого для приготовления ГСО, г;

ш - масса навески испытуемого вещества, г;

Vnpoew- объем пробы, мл.

2.3.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Гинкго двулопастного экстракт сухой». 0,05 г (точная навеска) экстракта сухого помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 15 мл спирта этилового 70 % и растворяют при нагревании и периодическом перемешивании на кипящей водяной бане. Извлечение охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора 70% спиртом этиловым до метки и фильтруют через бумажный фильтр с синей полосой в колбу вместимостью 25 мл (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% раствора хлорида алюминия в 95% спирте этиловом и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки (испытуемый раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл испытуемого раствора (Б), доведенного до метки 95% этиловым спиртом в мерной колбе, вместимостью 25 мл (раствор сравнения Б). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 406 им. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора ГСО рутина при длине волны 406 им, приготовленного по аналогии с испытуемым раствором.

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 406 нм через 40 мин после приготовления всех растворов. Содержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на рутин в процентах (X) вычисляют по формуле: ¿> х т„ х 25 х I х 25 х 100 х 100 _ ¿>хтих50х100 ~ Д> хтх50х 1x25x000- ~ Ц,хтх(100-И')

где В - оптическая плотность испытуемого раствора; Д, - оптическая плотность раствора ГСО рутина; т - масса препарата, г; т0 - масса ГСО рутина, г; IV— потеря в массе при высушивании, %.

3. Обоснование целесообразности создания и использования экстракционных препаратов «Гинкго двулопастного настойка» н «Гинкго двулопастного экстракт сухой» в медицинской практике

Листья гинкго двулопастного являются ценным источником получения нейротропных и, в частности, ноотропных ЛС. Имеющиеся в Российской Федерации возможности для более широкого культивирования, литературные источники, сведения народной медицины, опыт применения зарубежных препаратов, уникальность терапевтического действия делают гинкго перспективным объектом в

плане обоснования целесообразности создания импортозамещающих ноотропных препаратов на основе сырья данного растения.

С использованием разработанных методик анализа, в которых мы опираемся на анализ диагностических флавоноидов гинкго, как гликозидов (производные кемпферола, изорамнетина и др.), так и метилированных производных бифлавоноидов (гинкгетин. изогинкгетин), обоснованы способы получения новых ЛП «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой». Согласно методикам анализа определены показатели качества разработанных нами на основе сырья гинкго экстракционных препаратов. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин варьируют в настойке от 0,35% до 0,5%, а в сухом экстракте от 9,5% до 11,2%. В качестве нижнего предела рекомендованы соответственно значения «не менее 0,3%» (настойка) и «не менее 9%» (сухой экстракт).

В настоящее время всё шире в медицинской практике применяются препараты на основе экстракта гинкго EGb 76!. Нами поставлена задача по разработке способа получения препарата «Гинкго двулопастного настойка» в соотношении 1:5 и препарата «Гинкго двулопастного экстракт сухой». На наш взгляд, ноотропный препарат в такой лекарственной форме будет иметь на российском фармацевтическом рынке высокие показатели комплаеитности.

Проекты ФСП «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой» впервые разработаны в Самарском государственном медицинском университете при участии ЗАО «Самаралектравы». ФСП распространяются на ноотропные ЛС внутреннего применения. Сырьем для производства препарата являются листья гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.).

Для выявления ноотропной и нейротропной активности нами были исследован новый лекарственный препарат «Гинкго двулопастного настойка», полученный на основе листьев гинкго двулопастного в соотношении сырье-экстрагент (1:5) методом модифицированной мацерации, экстракт гинкго сухой, полученный методом реперколяции с последующей сушкой, и препараты на основе стандартизированного экстракта гинкго двулопастного EGb 761. Были также исследованы биологические свойства выделенного нами гинкгетина. Вещество вводили однократно, параллельно сравнивали эффекты от однократного введения пирацетама.

Обнаруженная нами ноотропная активность бифлавоноидпого соединения показывает, что этот компонент влияет на развитие фармакотерапевтического эффекта препаратов гинкго. Это обстоятельство является очень важным, ведь данный компонент является уникальным для гинкго двулопастного. Следовательно,

необходимым условием является обнаружение этого компонента при фитохимическом исследовании сырья и препаратов листьев гинкго, что и было нами учтено в плане совершенствования методов их стандартизации.

Таким образом. ЛС нового состава «Гинкго двулопастного настойка» (1:5) и «Гинкго двулопастного экстракт сухой», обладающие выраженной ноотропной и психотонизирующей активностью, по сравнению с промышленными образцами соответствующих аналогов являются перспективными для применения в медицинской практике.

ВЫВОДЫ

1. В результате изучения химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации, впервые выделены 5 индивидуальных веществ, относящихся к флавоноидным соединениям.

2. Выделенные вещества идеитифицированы с помощью УФ-, Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и результатов химических превращений (кислотный и ферментный гидролиз) как нарциссин, никотифлорин, рутин, изогинкгетин и гинкгетип.

3. Разработаны методики качественного ТСХ-анализа гинкго двулопастного, основанные на обнаружении доминирующих диагностических флавоноидов -гинкгетина, никотифлорина, а также на определении параметров УФ-спектра.

4. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов гинкго билоба по содержанию суммы флавоноидов с использованием ГС'О рутина, имеющего близкие спектральные характеристики с анализируемым веществом (количественное определение) и по содержанию доминирующих БАС гинкгетина и никотифлорина (качественные реакции).

5. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в листьях гинкго двулопастного в пересчете на ГСО рутина с использованием дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,12%.

6. Содержание суммы флавоноидов в образцах, культивируемых в Краснодарском крае, находится пределах от 2,01% до 2,15%, что дает основание рекомендовать в качестве нижнего предела показатель «не менее 1,9%».

единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойке и экстракте с помшцыо разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет ±4.10% и ±4,38% соответственно. На методики получены рационализаторские предложения.

8. Впервые определено, что флавоноид гинкгетин, выделенный из листьев гинкго, обладает выраженной ноотропной активностью, и, следовательно, наряду с другими действующими веществами вносит вклад в фармакологический эффект препаратов на основе данного сырья.

9. Установлено, что новые лекарственные препараты «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой» обладают выраженным ноотрогшым и психотонизирующим действием, что свидетельствует о перспективности применения данных препаратов в медицинской практике.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Буланкин, Д.Г. Перспективы исследования биологически активных соединений гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.) / Д.Г. Буланкин. В.А. Куркин // Известия Самарского научного центра РАН. - 2008. - Т. 2. - С. 197-201.

2. Буланкин, Д.Г. Перспективы исследования биологически активных соединений гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.) / Д.Г. Буланкин, В.А. Куркин //Традиционная медицина. - 2009. -№ 3 (18).-С. 121-122.

3. Куркин, В.А. Актуальные аспекты создания новых нейротропных фитопрепаратов / В.А. Куркин, O.E. Правдивцева, JT.H. Зимина, A.B. Дубищев, Д.Г". Буланкин, Д.В. Корчагина // Медицинский альманах. - 2009. - № 1 (6). -С. 46-49.

4. Буланкин, Д.Г. Определение флавоноидов в сырье и препаратах гинкго двулопастного / Д.Г. Буланкин, В.А. Куркин // Фармация. - 2011. - Т. 59. -№2.-С. 12-14.

5. Буланкин, Д.Г. Фармакогностичсское исследование сырья и препаратов гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.) II Аспирантские чтения - 2007: Труды межвузовской конференции молодых учёных. Приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья». - 2007. - С. 203-208.

6. Куркин, В.А. Подходы к стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды и фенилпропаноиды / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, O.E. Правдивцева, A.B. Куркина, М.В. Егоров, О.В. Шарова, Е.С. Артамонова, В.М. Рыжов, Ф.Ш. Сатдарова, A.B. Егорова, Д.Г. Буланкин,

М.М. Анисимова, Л.Н. Зимина // Человек и лекарство: Тезисы докладов XV Российского национального конгресса. - М, 2008. - С. 545-546.

7. Kurkin, V. A.. The new methodological approaches to the standartization of the some medicinal plants containing the flavonouds and phenylpropanoids / E.V. Avdeeva, V.B. Braslavsky, O.E. Pravdivtseva, A.V. Kurkina, M.V. Egorov, V.M. Ryzhov, O.V. Sharova, E.S. Artamonova, F.S. Satdarova. A.V. Egorova, Mohammed Lamrini, L.N. Zimina, M.M. Anisimova, D.G. Bulankin. A.V. Smirnov // XXIV'1' International conference on Polyphenols Communications: Vol.1., Salamanca, 2008.-P. 185-186.

8. Буланкин, Д.Г. Исследование биологически активных соединений гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.). / Д.Г. Буланкин. В.А. Куркин // VII Международный симпозиум по фенольным соединениям: фундаментальные и прикладные аспекты. Материалы докладов. - М.. Институт физиологии растений РАН им. К.А. Тимирязева, 2009. - С. 41-42.

9. Буланкин, Д.Г. Химико-фармацевтическое исследование сырья и препаратов гинкго двулопастного // Аспирантские чтения — 2009: Груды межвузовской конференции молодых учёных. Приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья». - Самара, 2009. - С. 286-289.

Ю.Буланкин. Д.Г. Перспективы исследования биологически активных соединений гинкго двулопастного // Материалы VIII Международного симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования». - М., 2009. - С. 33-34.

11.Буланкин, Д.Г. Перспективы создания отечественных инновационных препаратов на основе листьев гинкго двулопастного / Международная научно-техническая конференция «Проблемы и перспективы развития двигателестроения»: сборник тезисов. - Самара, 2009. - С. 32-34,

12.Куркин, В.А. Актуальные вопросы создания новых нейротропных препаратов / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин // Медико-социальная экология личности, состояние и перспективы: Материалы VII Международной конференции. - Минск, 2009. - С. 345-347.

13.Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего фенольные соединения / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева. А.В. Куркина. В.В. Стеняева, В.М. Рыжов, Ф.Ш. Сатдарова, Л.Н. Зимина, М.Х. Ламрини, Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Л.Р. Сулейманова // Человек и лекарство: тезисы докладов XVI Российского национального конгресса. - М.. 2009. - С. 690.

14.Куркин, В.А. Лекарственные растения как источник импортозамещающих гепатопротекторных. антиоксидантных, иммуномодулирующих и пейротропных средств / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, O.E. Правдивцева, A.B. Куркина, М.В. Егоров, В.В. Стеняева, В.М. Рыжов, Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова // Материалы VIII Международного симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования». - М., 2009. - С. 360-363.

15.Буланкин, Д.Г. Химико-фармакологическое исследование сырья и препаратов гинкго двулопастного / Материалы VIII съезда фармацевтических работников Республики Беларусь. - Витебск. 2010. - С. 407-411.

16.Буланкин, Д.Г. Исследование по стандартизации сырья и препаратов гинкго двулопастного / Д.Г. Буланкин, В.А. Куркин // Сборник тезисов международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений». - Ташкент, 2010. - С. 27.

17.Куркин, В.А. Актуальные аспекты использования государственных стандартных образцов в фармацевтическом анализе растительного сырья и фитопрепаратов / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, O.E. Правдивцева, A.B. Куркина, М.В. Егоров, В.В. Стеняева, В.М. Рыжов. Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Л.Р. Сулейманова. Н.Р. Шагалиева,

A.И. Хусаинова // Человек и лекарство: Тезисы докладов XVII Российского национального конгресса. - М., 2010. - С. 658-659.

18.Куркин, В.А. Флавоноиды и фенилпропаноиды как биологически активные соединения лекарственных растений / В.А. Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, O.E. Правдивцева, A.B. Куркина, М.В. Егоров, В.В. Стеняева,

B.М. Рыжов, О.В. Шарова, A.B. Егорова. Л.Н. Зимина, Д.Г. Буланкин, М.М. Анисимова, Н.Р. Шагалиева, Е.И. Вельмяйкина, А.И. Закиева // Сборник тезисов международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений». - Ташкент, 2010. - С. 8.

19.Куркин. В.А. Химико-фармакологическое исследование сырья и препаратов гинкго двулопастного / В.А. Куркин, Д.Г. Буланкин // Материалы 4-й всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование 2010»: ч. II «Научные основы создания новых лекарственных средств» - Воронеж, 2010. - С. 226-228.

20.Куркин, В.А. The new methodological approaches to the standardisation of the some medicinal plants containing flavonoids / Е.В. Авдеева, O.E. Правдивцева, В.Б. Браславский. A.B. Куркина, М.В. Егоров, В.В., В.М. Рыжов,

Д.Г. Буланкин. М.М. Анисимова. Л.В. Егорова, J I.I I. Зимина // Polyphenols Communications 2010. - С. 548-549.

21.Удостоверение на рационализаторское предложение № 107 ГОУ BIIO «СамГМУ Росздрава» от 27.12.2010 «Способ качественного анализа лекарственного растительного сырья (листьев) и настойки гинкго двулопастного» / Д.Г. Буланкин, В.А. Куркин.

22.Удостоверение на рационализаторское предложение № 108 ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» от 27.12.2010 «Способ количественного анализа лекарственного растительного сырья (листьев) и настойки гинкго двулопастного» / Д.Г. Буланкин, В.А. Куркин.

Подписано в печать 24.02.2011 г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Объем 1,4 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 135.

Отпечатано в типографии ООО «Офорт». 443080, г. Самара, ул. Революционная, 70, литера I I. Тел.: 372-00-56, 372-00-57.

Оглавление диссертации Буланкин, Денис Георгиевич :: 2011 :: Самара

1. ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Историческая справка.

1.2. Ботаническое описание.

1.3. Промышленное возделывание.

1.4. Микроскопия листьев гинкго двулопастного.

1.5. Химический состав гинкго двулопастного.

1.6. Фармакологические свойства гинкго двулопастного и препаратов на его основе.

1.7. Применение препаратов гинкго двулопастного в медицине.

1.8. Перспективы создания новых препаратов на основе листьев гинкго двулопастного и разработка методов их стандартизации.

1.8.1. Современные подходы к технологии получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья.

Выводы к главе 1.

2. ГЛАВА

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1 Метод колоночной хроматографии.

2.2.2. Метод тонкослойной хроматографии.

2.2.3. Хроматография на бумаге.

2.2.4. Метод УФ-спектроскопии.

2.2.5. ^-ЯМР-спектроскопия.

2.2.6. Масс-спектрометрия.

2.2.7. Методы, использованные для установления строения и идентификации выделенных соединений.

2.2.8. Методы, использованные для получения лекарственных средств и определения числовых показателей сырья и препаратов гинкго.

2.2.9. Фармакологические исследования.

3. ГЛАВА

ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО.

3.1. Извлечение суммы биологически активных веществ из сырья «Листья гинкго двулопастного» и их хроматографическое разделение.

3.2. Физико-химическая характеристика выделенных соединений и их производных.

Выводы к главе 3.

4. ГЛАВА

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ «ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО ЛИСТЬЯ».

4.1. Качественный анализ сырья гинкго двулопастного.

4.2. Количественный анализ сырья гинкго двулопастного.

Выводы к главе 4.

5. ГЛАВА

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И СТАНДАРТИЗАЦИИ НОВЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО

ДВУЛОПАСТНОГО.

5.1. Качественный анализ препаратов на основе листьев гинкго двулопастного.

5.2. Количественное определение суммы флавоноидов в препаратах на основе гинкго двулопастного.

5.2.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Гинкго двулопастного экстракт сухой».

5.2.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Гинкго двулопастного настойка».

5.3. Обоснование способа получения препарата «Гинкго двулопастного настойка».

5.4. Обоснование способа получения препарата «Гинкго двулопастного экстракт сухой».

5.5. Обоснование целесообразности создания и использования лекарственных средств «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой» в медицинской практике.

5.5.1. Исследования ноотропной активности.

5.5.2. Исследование психостимулирующей активности.

Выводы к главе 5.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Буланкин, Денис Георгиевич, автореферат

Актуальность темы. Ряд факторов, среди которых важнейшими являются напряженный ритм жизни, сопутствующие ему стрессовые ситуации, возможность приобретения лекарственных средств растительного происхождения без рецепта врача, постоянное увеличение количества больных с нарушениями мозгового кровообращения, стимулирует поиск новых эффективных лекарственных средств, способных восстанавливать или компенсировать нарушенные функции головного мозга. Своевременный прием средств данной группы не только повышает качество жизни, но и препятствует развитию соматической патологии, вызванной психогенными факторами. Препараты растительного происхождения занимают особую нишу в группе ноотропных средств. Известно, что растительные лекарственные средства (JIC) с ноотропным эффектом, действующие не менее эффективно, чем синтетические субстанции, при правильном их использовании, вызывают меньше побочных эффектов. Большинство растительных лекарственных препаратов (ЛП), продолжают поступать из-за рубежа. В основном это JIC, изготовленные на основе листьев гинкго двулопастного {Ginkgo biloba L., сем.

Гинкговых - Ginkgoacae).

Листья гинкго двулопастного входят в Европейскую и Британскую фармакопеи. На основе извлечений из листьев гинкго двулопастного t производятся такие препараты как танакан, билобил, мемоплант, гинкор форт, гинкор гель и др., разрешенные к применению в Российской Федерации. Препараты листьев гинкго широко применяются за рубежом, однако, что касается отечественных производителей - они ориентированы в настоящее время на производство БАДов (несколько десятков). Однако это не позволяет решить проблему лекарственного обеспечения населения. В связи с этим актуальна разработка отечественных препаратов — настойки и экстракта листьев гинкго двулопастного.

Созданию импортозамещающих ноотропных лекарственных препаратов препятствует такие факторы как недостаточная степень изученности химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации. Кроме того, до сих пор не решены проблемы стандартизации. На данный момент в нашей стране отсутствуют какие-либо виды нормативной документации на сырье «Гинкго двулопастного листья». До сих пор не решены вопросы определения подлинности сырья и препаратов гинкго с помощью ТСХ и УФ-спектроскопии, хотя ранее проводились исследования по стандартизации сырья и препаратов гинкго. Однако в итоге они привели к использованию методики, описанной в американской фармакопее. При этом данная методика не является специфичной именно для гинкго билоба, поскольку при анализе принимаются во внимание только агликоны флавоноидов (кемпферол, кверцетин и изорамнетин), полученные кислотным гидролизом в среде хлористоводородной кислоты. Однако одним из диагностических флавоноидов листьев гинкго двулопастного является гинкгетин (диметилированное производное 8,3'-бисапигенина), который не обнаруживается в условиях предложенного ВЭЖХ-анализа. В нашем исследовании мы опирались на анализ нативных флавоноидов гинкго - как гликозидов (производные кемпферола, изорамнетина и др.), так и метилированных производных аментофлавона, или 8,3'-бисапигенина (гинкгетин, изогинкгетин), присущих именно этому виду сырья, что повышает достоверность и эффективность как качественного, так и количественного анализа.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

2. Сравнительное исследование флавоноидного состава листьев гинкго двулопастного и препаратов на основе сырья гинкго;

3. Разработка методик качественного анализа диагностических флавоноидов листьев гинкго двулопастного для оценки подлинности данного сырья и препаратов на его основе;

4. Разработка методики количественного определения флавоноидов (гинкгетина, изогинкгетина, никотифлорина, нарциссина, рутина) в листьях гинкго двулопастного;

5. Обоснование способа получения сухого экстракта из листьев гинкго двулопастного;

6. Обоснование способа получения настойки из листьев гинкго двулопастного;

7. Изучение показателей и норм качества сырья гинкго двулопастного листьев, экстракта сухого и настойки гинкго двулопастного;

8. Разработка и оформление проекта нормативной документации -ФСП на лекарственные препараты - «Гинкго двулопастного листьев экстракт сухой» и «Гинкго двулопастного листьев настойка».

Научная новизна. В результате изучения химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Краснодарском крае, выделены и идентифицированы 5 индивидуальных соединений. Среди них доминирующие флавоноидные вещества, гинкгетин (диметилированное производное 8,3-бисапигенина), изогинкгетин, никотифлорин и нарциссин в РФ из данного растения выделены впервые и идентифицированы с использованием УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. Также для гинкго, культивируемого в Российской Федерации, в процессе исследования выделен и определен рутин.

Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов листьев гинкго двулопастного по флавоноидам (ведущая группа БАС) и, в частности, по выявленным диагностическим соединениям -гинкгетину, изогинкгетину, никотифлорину, нарциссину и рутину.

Выявлена нейротропная активность препаратов (танакан, билобил) на основе гинкго и обоснована необходимость коррекции дозирования их приема в течение суток.

Научно обоснована целесообразность создания лекарственных растительных препаратов «Гинкго двулопастного экстракт жидкий» и «Гинкго двулопастного настойка», обладающих нейротропной активностью, в том числе ноотропным действием.

Практическая значимость. На основе фитохимических исследований разработана методика качественного и количественного анализа сырья - гинкго двулопастного листьев. Разработана методика качественного и количественного анализа сухого экстракта гинкго и настойки гинкго. Методики качественного анализа основываются на определении гинкгетина и изогинкгетина по отношению к внешнему стандарту (ГСО рутина) методами тонкослойной хроматографии, хроматоспектрофотометрии. Разработанные методики количественного анализа ЛРС и JIC гинкго базируются на определении содержания суммы флавоноидов методом хроматоспектрофотометрии в пересчете на рутин.

Впервые разработаны:

- проект ФСП «Гинкго двулопастного листьев экстракт сухой»;

- проект ФСП «Гинкго двулопастного листьев настойка».

Результаты исследований используются в научных исследованиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии и кафедре химии фармацевтического факультета СамГМУ (акты внедрения от 22.04.2010 г.), в ГУЗ «Центр контроля качества лекарственных средств Самарской области», а также в ЗАО «Самаралектравы» (пос. Антоновка Самарской области).

Также по результатам исследований оформлено два рационализаторских предложения:

- удостоверение на рационализаторское предложение № 107 от 27.12.2010 «Способ качественного анализа лекарственного растительного сырья (листьев) и настойки гинкго двулопастного»;

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

Результаты изучения химического состава листьев гинкго двулопастного;

Разработка методики стандартизации листьев гинкго двулопастного;

Разработка методики стандартизации получаемого на основе листьев гинкго сухого экстракта;

Разработка методики стандартизации получаемого на основе листьев гинкго настойки;

Обоснование способа получения гинкго двулопастного листьев настойки;

Обоснование способа получения гинкго двулопастного листьев экстракта сухого. /

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа была выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200405620, 01200900658) и при поддержке проекта Федерального целевого проекта 02.740.11.0650 «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 20092013 годы.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XIII конгрессе "Экология и здоровье человека" (Самара, 2008); на межвузовской конференции «Аспирантские чтения» (Самара, 2008; 2009; 2010); на VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009); VII Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2009); в рамках федеральной программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» (Самара, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 23 научных работы, в том числе 5 статей - в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 116 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), характеристики объектов и методов исследования (глава 2), описания исследования химического состава сырья и препаратов (глава 3), описания хода разработки методик стандартизации сырья гинкго двулопастного (глава 4), исследования по разработке и стандартизации новых препаратов на основе гинкго билоба (глава 5), выводов к главам и общих выводов, списка литературы, включающего 188 источников, в том числе 70 иностранных, 5

Заключение диссертационного исследования на тему "ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)"

ВЫВОДЫ

2. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, 'Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и результатов химических превращений (кислотный и ферментный гидролиз) как нарциссин, никотифлорин, рутин, изогинкгетин и гинкгетин.

3. Разработаны методики качественного ТСХ-анализа гинкго двулопастного, основанные на обнаружении доминирующих флавоноидов гинкгетина, никотифлорина, а также на определении параметров УФ-спектра.

4. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов гинкго билоба по содержанию суммы флавоноидов с использованием ГСО рутина, имеющего близкие спектральные характеристики с анализируемым веществом (количественное определение) и по содержанию доминирующих БАС гинкгетина и никотифлорина (качественные реакции).

6. Содержание суммы флавоноидов в образцах, культивируемых в Краснодарском крае, находится пределах от 2,01% до 2,20%, что дало основание рекомендовать в качестве нижнего предела показатель «не менее 1,90%».

7. Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой» с использованием ТСХ и дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойке и экстракте с помощью разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,10% и ±4,38% соответственно. На методики получены рационализаторские предложения.

9. Установлено, что новые лекарственные препараты «Гинкго двулопастного настойка» и «Гинкго двулопастного экстракт сухой» обладают выраженным ноотропным и психотонизирующим действием, что свидетельствует о перспективности применения данных препаратов в медицинской практике.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Буланкин, Денис Георгиевич

1. Авдеева, Е.В. Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений: Автореф. Дис. канд. фармац. наук / Е.В. Авдеева. — Москва, 1997. 23 с.

2. Антидепрессантная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов / В.А. Куркин, A.B. Дубищев, В.Н. Ежков и др. // Хим.-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 11. - С. 33-38.

3. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П, Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Фармация. 2006. -Т. 54, № 4. - С.8-12.

4. Арзамасцев, А.П. Государственные стандартные образцы лекарственных , веществ (проект общей фармакопейной статьи) / А.П. Арзамасцев, В.Л.

5. Дорофеев, Н.П. Садчикова // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. МЗ РФ, 2000. - № 3. - С. 24-26.

6. Арзамасцев, А.П. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, В.Л. Багирова // Хим.-фарм. журн. 2000. - №5 - С. 47-49.

7. Арушанян, Э. Б. , Бейер Э. В. Ноотропные свойства препаратов гинкго билоба // Экспериментальная и клиническая фармакология. — Т.71, №4. — 2008.-С. 57-63.

8. Ахрем, A.A. Тонкослойная хроматография / A.A. Ахрем, А.И. Кузнецова. М.: Наука. - 1964. - 153 с.

9. Багирова, В.Л. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова // Хим. фарм. журн. - 2001.- Т. 34, № 11. - С. 46-47.

10. Балашова, Т. С., Кубатиев А. А. Влияние танакана на перекисное окисление липидов крови и агрегационные свойства тромбоцитов у больных инсулинзависимым сахарным диабетом // Терапевтический архив.— 1998.— Т. 70, № — С. 49-54.

11. И. Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976. - 260 с.

12. Барабой, В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Медицина, 1984. - 160 с.

13. Беленький, Б.Г. Тонкослойная хроматография. В кн.: Успехи хроматографии. К 100-летию со дня рождения М.С. Цвета. / Под ред. К.В. Чмутова и К.И. Сакодынского. М.: Наука. — 1972. с. 134-162.

14. Беликов, В.В. Применение ВЭЖХ в анализе флавоноидных препаратов / В.В. Беликов // Проблемы стандартизации и контороля качества лекарственных средств: Мат. докл. всесоюз. конф., 18-21 декабря 1991. -М„ 1991.-Т. 2, ч. 1 С. 14-16.

15. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973.-С. 168-172.

16. Беляков, К.В. Методические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом. — М., 2004. 186 с.

17. Биологически активные вещества растительного происхождения / Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А. и др.: в трех томах. — М.:Наука, 2001.

18. Биофлавоноид кверцетин высокоэффективный антиоксидант / Савченко Л.В., Мусатова З.И., Высоцкий И.Ю., Сафонов Ю.П.: Деп. в УкрННИНТН 0608.90. № 1248 - Ук. 90.

19. Блажей, А. Фенольные соединения растительного происхождения: Пер. со словацк. -М.: Мир, 1977. 236 с.

20. Васильев, В.П. Аналитическая химия. В 2-х ч. Ч II. Физико-химические методы анализа. Учеб. для химико-технол. спец. вузов. / В.П. Васильев. -М.: Высш. шк. 1989. 384 с.

21. Воронина, Т.А. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Т.А. Воронина, С.Б. Середенин. -М., 2000. С. 122-136.

22. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред. Сироткиной Е.Е. — Томск.: Изд. Томского унивесит., 1987. 184 с.

23. Гаврилова, С. И: Опыт клинического применения танакана при лечении синдрома мягкого когнитивного снижения / С. И. Гаврилова, Я. Б. Федорова, И. Ф. Рощина, И. В. Колыхалов // Журнал неврологии и психиатрии. № 10. - 2006. - С. 42-46.

24. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения / А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Кадаев, А.Н. Яценко-Хмелевский. М.: Высшая школа, 1983. - 400 с.

25. Геккелер, К. Аналитические и препаративные лабораторные методы / К. Геккелер, X. Экштайн. М.: Химия, 1994. - 409 с.

26. Георгиевский, В.П. Применение хроматографии в тонком слое для идентификации и количественного определения биологически активных веществ растительного происхождения. М.: Наука, 1978. — 68 с.

27. Георгиевский, В.П. 50 лет тонкослойной хроматографии / В.П. Георгиевский, Ю.В. Шостенко // Фармация. 1989. - Т. 38, № 3. - С. 8687.

28. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук -Новосибирск: Наука, Сиб. отд. 1990. - 330 с.

29. Головкин, Б.Н. О чем говорят названия растений / Б.Н. Головкин. М.: Колос. - 1992.-192 с.

30. Государственная фармакопея Российской Федерации. 12 изд. — М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. -4.1.-704 с.

31. Государственная фармакопея СССР. Десятое издание. — М.: Медицина.- 1986.- 1078 с.

32. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа / МЗ СССР.- 11 изд. М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. - 336 с.

33. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11 изд. — М.: Медицина, 1990.-Вып. 2.-398 с.

34. Государственный реестр лекарственных средств. Т. 1. Официальное издание. - М.: ООО «Информационно-издательское агентство «Ремедиум», 2008. - 1398 с.

35. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений. Учеб. пособие для фарм. вузов / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др. М.: Высшая школа, 1983. - 176 с.

36. Громова, O.A. Препараты гингко билоба в зеркале экспериментальной и клинической фармакологии / O.A. Громова, И.Ю. Торшин // Фарматека. -№15. -2008. -С. 50-54.

37. Дамулин, И. В. Танакан при дисциркуляторной энцефалопатии / И. В. Дамулин, В. В. Захаров, М. Н. Елкин, Н. Н. Яхно // Клинич. геронтология.— 1996.— № 4.— С. 51-56.

38. Гутник A.B. Гинкго двулопастный в Дальневосточном Ботаническом саду // Бюлл. ГБСД969, № 69. С. 106.

39. Дзяк JI. А., Голик В. А. Эффективность лечения ишемии мозга, обусловленной изменениями в магистральных артериях головы, с использованием препарата «Танакан» (EGb 761) // Лжарська справа.— 1998.—№6.—С. 125-127.

40. Долгова, A.A. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии / A.A. Долгова, Е.Я. Ладыгина. -М.: Медицина. 1977. - С. 215.

41. Дюкова В.В., Белова О.И. К вопросу об экстракции растительного сырья с подогревом// Сб. научн. тр. ВНИИФ, 1979.-т. 17.-С. 163-169.

42. Жидкостная колоночная хроматография / Под ред. 3. Дейла, К. Мацека, Я. Янака (пер. с англ.). М.: Мир. - 1978. - 428 с.

43. Зайцев, В.М., Прикладная медицинская статистика / Лифляндский В.Г., Маринкин В .И. С.-Пб. Фолиант. - 2003. - 432 с.

44. Запесочная, Г.Г. Фенилпропаноиды перспективные биологически активные вещества лекарственных растений / Г.Г. Запесочная, В.А. Куркин, В.П. Бойко, В.К. Колхир // Хим. - фармац. журн. - 1995. - Т. 29, № 4. - С. 47-50.

45. Запесочная, Г.Г. Фенилпропаноиды в стандартизации лекарственных растений / Г.Г. Запесочная, В.А. Куркин // III Международная конференция "Экологическая патология и ее фармакокоррекция": Тез. докл. Чита, 1991. - Ч. II. - С. 23.

46. Запрометов М.Н. Основы биохимии природных соединений. — М., 1974. 214 с.

47. Захаров В. В. Применение танакана в нейрогериатрической практике // Неврологический журнал. -1997. № 5.'- С. 42-49.

48. Каухова, И.Е. Новая методика получения растительных препаратов // Фармация. 2006. - № 1. - С. 37-39.

49. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография. В 2-х томах. / Пер. с англ. Под ред. д.х.н., проф. В.Г. Березкина. М.: Мир. -1981. - 1139 с.

50. Клиническая фармакология / Лоуренс Д.Р., Беннетт П.А., Браун М.Дж. и др.: Пер. с англ. М.: Медицина, 2002. - 669 с.

51. Козак, С. С., Дубченко О. Ю., Лагутш А. Ю. Досвщ використання танакану у дггей з вегетативними дисфункщями // Пед1атр1я, акушерство та гшекол.— 1999.— № 4.— С. 86.

52. Колесникова, В.Г., Марченко В.А., Сыровежко Н.В. Лекарственные растения: мифы и реальность / В.Г. Колесникова, В.А. Марченко, Н.В. Сыровежко С.-Пб.: СПХФА, 1998.-261 с.

53. Кузнецова, С. М., Глазовская И. И., Кузнецов В. В. Влияние танакана на функциональное состояние центральной нервной системы у больных с остаточными явлениями инсульта // Лжарська справа.— 1997.— № 6.— С. 132-134.

54. Куркин В.А. Актуальные аспекты создания новых нейротропных фитопрепаратов // Медицинский альманах. / Куркин В.А. Правдивцева O.E., Зимина Л.Н., Дубищев A.B., Буланкин Д.Г., Корчагина Д.В. № 1. -2009. - С. 46-49.

55. Куркин В.А. Ноотропная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов // Растительные ресурсы / Куркин В.А., Дубищев A.B., Ежков В.Н., Титова И.Н., Авдеева Е.В., Браславский В.Б., Куркина A.B., Сатдарова Ф.Ш. Т. 43, №> 2. - 2007. - С. 76-88.

56. Куркин В.А. Современные аспекты химической классификации биологически активных соединений лекарственных растений / В.А. Куркин // Фармация. 2002. - Т. 51, № 2. - С. 8-16.

57. Куркин В.А. Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). 2-е изд., перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ». - 2007. - С.794-799.

58. Курс органической химии / П. Каррер; Пер с немец. В.Э. Вассерберга, Э.М. Левиной, Л.Д. Родионовой; Под ред. М.Н. Колосова. С-Пб.: Гос. Научно-техническое издат. хим. Литературы, 1962. — 1216 с.

59. Лавренов, В.К., Лавренова, Г.В. Энциклопедия лекарственных растений народной медицины / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова — С.-Пб.:I

60. Издательский дом «Нева». 2003. - 272 с.

61. Лекарственные растения государственной фармакопеи 1 и 2 том / Под ред. Самылиной И.А., Северцева В.А. М. Анми. 1999, 2003.

62. Лекарственные растения: Справочное пособие / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др.; Под ред. Н.И. Гринкевич. М.: Высш. Шк. - 1991.-С. 324-325.

63. Лечение растениями: основы фитотерапии: Учеб. пособие / В.М. Баева -М.: ООО «Издательство Астрель». 2004. - 202 с.

64. Любимов, Б.И. Опыт оценки безопасности фармакологических средств в России (1991-1996) //• Проблемы и перспективы: Тез. докл. Всероссийского научного симпозиума. С.-Пб. 1997. - С. 299-300.

65. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Практ.пособие. В.2 т. Т.2. — 14 изд., перераб., исправ. и доп. -М.: Новая волна. 2000. - 608 с.

66. Муравьева Д.А. Тропические и субтропические лекарственные растения. М.: Медицина. 1983. - 384 с.

67. Муравьева Д.А. Фармакогнозия: Учебник / Д.А. Муравьева. М.: Медицина, 1991. - С. 512-513.

68. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия: учеб. / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.

69. Назаренко М.Е. Эффективность стандартного экстракта Гинкго билоба (билобила) при острой почечной недостаточности в эксперименте. // Диссертация на соискание степени кандидата медицинских наук. Курск 2004. - 128 с.

70. Настойки, экстракты эликсиры и их стандартизация / Под. Ред. проф. B.JI. Багировой, проф. В.А.Северцева. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223 с.

71. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, эликсиров в ведущих странах Европы и Америки П.Г., Багирова B.JL, Сокольская Т.А., и др. // Фармация. 2002. - С. 40-42.

72. Онбыш Т.Е. , Макарова JI.M. , Погорелый В.Е. Механизмы реализации фармакологической активности экстракта гинкго билоба // Современные наукоемкие технологии. №5. - 2005. - С. 22-25.

73. Орлов, В.И. Жидкостная хроматография: теоретические основы / В.И. Орлов, A.A. Аратсков. Дзержинск, 1997. - 82 с.

74. ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств». Основные положения 91500.05.001 -00 (ОСТ).

75. Пастушенков, JI.B., Лесиовская, Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии / Л.В. Пастушенков, Е.Е Лесиовская // Ч. I, II. - С.-Пб.: СПХФИ, 1995.

76. Патент РФ №2121358, приор на изобретение «Лекарственные формы для лечения гнойных ран и способ лечения гнойных ран /C.B. Первушкин, А.А.Сохина, М.О. Тархова, В.А. Куркин, Е.А. Столяров // приор, от 30.07.964 зарег. 10.11.98, бюл. №31.

77. Петрини О., Сколи Э. Комбинация женьшеня и гинкго для улучшения когнитивных навыков. // Новости науки и техники. Серия: Медицина. Психиатрия. № 9. - 2006. - С. 251.

78. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. — М.: Медицина, 1976. 203 с.

79. Правила сбора и сушки лекарственных растений / под ред. А.И Шретера. М.: Медицина, 1985. - 328 с.

80. Преображенская И. С. Ноотропные препараты в гериатрической практике // Русский медицинский журнал. -Т. 12, № 5. 2004. - С. 256561.

81. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтическойпродукции: сб. науч. тр. / под ред. E.H. Вергейчика, H.H. Каревой //

82. Пятигорская ГФА, С.-Пб. ГХФА. Пятигорск, 20Q7. - С. 207-208.

83. Растения для нас: Справочное издание / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф.

84. Блиновой. С.-Пб.: Учебная книга, 1996. — 654 с.

85. Регистр лекарственных средств России / под ред. Г.Л. Вышковского. -М.: РЛС-2007, 2006. 1312 с.

86. Рудый Р. Гинкго 1— целебный реликт // Провизор.— 1997.— № 22.— С. 50-51.

87. Самылина В. А. Основы палеонтологии. Голосеменные и покрытосеменные. Медицина. - Москва. - 1963. - 392 с.

88. Самылина И.А., Сорокина A.A. Лекарственные растения тропиков и субтропиков. М.: Мир бизнеса, 1998. - 104 с. /

89. Самылина, И.А. Основные направления исследований лекарственных растений на современном этапе / И.А. Самылина, И.С. Грицаенко, Н.К. Горчакова // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды. Т. XXXIV. М., 1995. - С. 3-6. ^

90. Самылина, И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И.А. Самылина, И.А. Баландина // Фармация. — 2004. №2. - С. 39-41.

91. Соколов, С.Я. Сравнительное исследование стимулирующих свойств некоторых фенилпропаноидов / С.Я. Соколов, В.П. Бойко, В.А. Куркин // Хим. фармац. журнал. - 1990. - Т. 24, № 10. - <3^66-68.

92. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Рук. для врачей. / С.Я. Соколов. М.: Медицинское информационное агенство, 2000. - С. 224228.

93. Справочник лечебных средств и терапевтических методов = The prevention how — to dictionary of healing remedies and techniques: Более 350 различ. методов лечения: Пер. с англ. М.: Рипол классик,2001. - 472 е.: ил.

94. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным^растениям (фитотерапия): Справ. / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. -М.: Медицина, 1988. 463 с.

95. Сухие экстракты из лекарственного растительного сырья / Степанова

96. Юб.Фармакогнозия. Атлас. Учеб. пособие для студентов фармацевт, ин-тов и фармацевт, фак-тов мед. ин-тов / Е.Я. Ладыгина, Н.И. Гринкевич, И.А.

97. Самылина и др.; Под ред. Н.И. Гринкевич., Е.Я. Ладыгиной. — М.: Медицина, 1989. — 511 е.: ил. (Учеб. лит. для студентов мед. ин-тов Фармацевт, фак-т).

98. Фармакология: Учеб. / Д.А. Харкевич 9-е изд., перераб., доп. и испр. М.: ГЭОТАР - Медиа, 2006. - 736 е.: ил.

99. Фармакопея США, USP 29. Национальный формуляр, NF 24. — в 2 т.: (пер. с англ.). М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - ТЛ. - 1720 с.

100. Фенилпропаноиды лекарственных растений^/ В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева, В.Н. Ежков. Самара: Офорт; СамГМУ, 2005. -128 с. у.

101. ПО.Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г.

102. Кукеса-М.,1999. 125 с. Ш.Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М.: Медицина, 2007. -832 с.

103. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Н.И.Гринкевич. — М.: Высшая школа, 1983. — 278 с.

104. Хржановский, В.Г. Практикум по курсу общей ботаники: Учеб. пособие / В.Г. Хржановский, С.Ф. Пономаренко. М.: Высш. школа, 1979. - 422 с.

105. Хроматография в тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир, 1965. -508 с.115.1Наршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. — М.: Мир, 1980.-Т.1,2. ^

106. Юрьев, Д.В. Анализ флавонолгликозидов в препаратах и Б АД на основе гинкго билоба / Д.В. Юрьев, К.И. Эллер, А.П. Арзамасцев // Фармация. -2003.-Т. 51.- №2.-С. 7. V

107. Allard, М. Traitement des troubles du vieillissernent par extrait de Ginkgo biloba: De la pharmacologic a la clinique // Presse Med.— 1986.— Vol. 15, No. 31.— P. 1540-1545. ^

108. Arnould, T. Effect of Ginkor Fort on hypoxia-induced neutrophil adherence to human saphenous vein endothelium / T. Arnould, C. Michiels, D. Janssens, N. Berna, J. Remacle // J. Cardiovasc. Pharmacol.— 1998.— Vol. 31, No. 3.— P. 456-463.

109. Attella, M. J. Ginkgo biloba extract facilitates recoveiVfrom penetrating brain injury in adult male rats / M. Attella J., S. W. Hoffman, M. J. Stasio, D. G. Stein // Exp. Neurol.— 1989.— Vol. 105, No. 1.— P. 62-71.

110. Atzori, C. Activity of bilobalide, a sesquiterpene from Ginkgo biloba, on Pneumocystis carinii / C. Atzori, A. Bruno, G. Chichino, E. Bombardelli, M. Scaglia, M. Ghione // Antimicrob. Agents Chemother.— 1993.— Vol. 37, No. 7.—P. 1492-1496. /'

111. Augent, M. Effect of Ginkgo biloba extract on\rabbit isolated blood vessels / M. Augent, P. Braquet // Cerebral ischemia / A. Bes etc.,-Amsterdam, 1984.— P. 347-254. :

112. Augent, M. Bases phatmacologiques de l'impact vasculaire de l'extrait de Ginkgo biloba / M. Augent, F. Clostre // Presse Med.— Vol. 31, No. 15, P. 1524-1528.

113. Auguet, M. Effects of Ginkgo biloba on arterial smooth muscle responses to vasoactive stimuli / M. Auguet, F. V. DeFeudis, F. Clostre // Gen. Pharmacol.—1982.—Vol. 13, No. 2.—P. 169/171.

114. Auguet, M. Effects of an extract of Ginkgo biloba on rabbit isolated aorta / M. Auguet, F. V. DeFeudis, F. Clostre, R. Deghenghi // Gen. Pharmacol.— 1982.— Vol. 13, No. 3.— P. 225-230.

115. Auguet, M. Bases pharmacologiques de l'impact vasculaire de l'extrait de Ginkgo biloba: Review / M. Auguet, S. Delaflotte, A. Hellegouarch, F. Clostre //Presse Med.— 1986/-Vol. 15, No. 31.—P. 1524-1528.

116. Bauer, U. L'extrait de Ginkgo biloba dans le traitement de Parteriopathie des membres inférieurs: Etude sur 65 semaines // Presse Med.— 1986.— Vol. 15, No. 31.—P. 1546-1549. ^

117. Bikram, S. etc. Biology and chemistry of Ginkgo biloba // Fitoterapia, No. 79, 2008.-P. 401-418

118. Blume, J. Placebokontrollierte Doppelblindstudie zur Wirksamkeit von Ginkgo-biloba-Spezialextrakt EGb 761 beixaustrainierten Patienten mit Claudicatio intermittens / J. Blume, M. Kieser, U. Hölscher // Vasa.— 1996.—

119. Bourgain, R. H. Effect of ginkgolide PAF-acether antagonists on arterial thrombosis / R. H. Bourgain, R. Andries, P. Braquet // Adv. Prostaglandin, Thromboxane, Leukotriene Res.— Vol. 17B.— P. 815-817.

120. Brailowsky, S. Motor function in young and aged hemiplegic rats: effects of a Ginkgo biloba extract / S. Brailowsky, T. Monliel // Neurobiol. Aging.— 1997.—Vol. 18, No. 2.—P. 219-227.

121. Braquet, P. Ethnopharmacology and the development of natural PAF antagonists as therapeutic agents: Review / P, Braquet, D. Hosford // J. Ethnopharmacol.— 1991.—Vol. 32, No. 1-3.—pN<35-139.

122. British Pharmacopoeia 2007 Incorporating the Requirements of the 5 Edition of the European Pharmacopoeia 1997 as amended by Supplement 2007. — System Simulation Ltd., 2007. 1680 p.

123. Bruel, A. Effects of Ginkgo biloba extract on glucose transport and glycogen synthesis of cultured smooth mucsle cells from pis aorta / A. Bruel, J. Gardette, E. Berrou, M. T. Droy-Lefaix, J. Picard // Pharmacol Res.— 1989.— Vol. 21.—P. 414-421.

124. Vol. 25, No. 3.—P. 265-274.

125. Bruno, C. Regeneration of motor nerves in bilobalide-treated rats / C. Bruno, R. Cuppini, S. Sartini, T. Cecchini, P. Ambrogini, È. Bombardelli // Planta Med.— 1993.-Vol. 59,No.4.— P. 302-307.

126. Chen, X. Extracts of Ginkgo biloba and ginsenosides exert cerebral vasorelaxation via a nitric oxide pathway / X. Chen, S. Salwinski, T. J. Lee // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.— 1997.—Vol. 24, No. 12.—P. 958-959.

127. Chun, Shi. Protective effects of Ginkgo biloba extract (EGb761) and its constituents quercetin and ginkgolide B against amyloid peptide-induced toxicity in SH-SY5Y cells // Chemico-Biological Interactions. — Guangdong, China.-2008.-40 p.

128. Clostre, F. De l'organisme aux membranes cellulaires: les différents niveaux d'actions pharmacologiques de l'extrait de Ginkgo biloba: Review // Presse

129. Med.— 1986.—Voll5, No. 31.— P. 1529-153,8.

130. Cohen, A. J. Ginkgo biloba for antidepressant-mduced sexual dysfunction / A. J. Cohen, B. Bartlik // J. Sex Marital Therapy.^1998,— Vol. 24, No. 2.— P. 139-143. ^

131. Dana, K. Präkonditionierung der Rattenleber durch Ginkgo Biloba Extrakt (Egb 761) vor warmer Ischämie und Reperfusion // dissertation zur Erlangung des Grades einer doktorin der Veterinärmedizin. Hannover. - 2005. - 106 p.

132. Dean, P. D. G. Ed Affinity Chromalography i. / P.D.G. Dean, W.S. Johnson, F.A. Middle // A Practical Approach IRL Press. Oxford, England 1985.-215 p. \

133. Defeudis, F.V. Bilobalide and neuroprotection // Pharmacological Research. -T. 46, No. 6. 2002. - C. 565-568. \

134. Delaflotte, S. Endothelium-dependent relaxations of rabbit isolated aorta produced by carbachol and by Ginkgo biloba extract / S. Delaflotte, M.

135. Auguet, F. V. DeFeudis, J. Baranes, F. Clostre, K. Drieu, P. Braquet // Biomed. Biochim. Acta.— 1984/-Vol. 43, No. 8-9.—P. S212-S216.

136. Diwok, M. Superoxiddismutasen aktivitet von Ginkgo-biloba-Extrakt / M. Diwok, B. Kuklinski, B. Ernst // Ztschr. Ges. Innere Medizin und Ihre Grenzgebiete.— 1992.—Bd. 47, No. 7.— S. 308-311.

137. Doly, M. Effet de l'extrait de Ginkgo biloba sur 1'electrophysiologic de la retine isolee de rat diabetique / M. Doly, M. T. Droy-Lefaix, B. Bonhomme, P. Braquet // Presse Med.— 1986.—Vol. 15, No. 31.—P. 1480-1483.

138. Droy-Lefaix, M. T. Antioxidant effect of a Ginkgo biloba extract (EGb 761) on the retina / M. T. Droy-Lefaix, J. Cluzel, J. M. Menerath, B. Bonhomme, M. Doly // Int. J. Tissue React.— 1995.— Vol. 17, No. 3.— P. 93-100.

139. Duke, M. V. Purification and characterization of an iron-containing superoxide dismutase from a eucaryote, Ginkgo biloba / M. V. Duke, M. L. Salin // Arch. Biochem. Biophys.— 1985.— Vol. 243, No. 1-P. 305-314.

140. Eng Shi Ong. Extraction methods and chemical standardization of botanicals and herbal preparations // Journal of Chromatography B, No. 812. 2004. - P. 23-33.

141. European Pharmacopoeia, Technical Guide for the Elaboration of Monografs, 3rd ed., Strasbourg: Council of Europe. 1999.

142. European Pharmacopoeia. 2004. - Vol. 6. - No. 20.4.

143. Forgacs, E. Molecular Bases of Chromalographic Separation. SpringerVerlag, Heidelberg, Germany. - 1997. - 288 p.

144. Hanrahan, J. R. Semisynthetic Preparation of Amentoflavone: A Negative Modulator at GABAA Receptors // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. - Vol. 13.-P. 2281-2284.

145. Hori, T. In., editors. Ginkgo biloba — a global treasure. From biology to medicine. Tokyo: Springer, 1997. - 237 p.

146. Choi, J.G. Antibacterial activity of hydroxyalkenyl salicylic acids from sarcotesta of Ginkgo biloba against vancomycin-resistant Enterococcus // FitoterapiaNo. 80. -2009. P. 18-20.

147. Hanrahan, J. R. etc. Semisynthetic Preparation of Amentoflavone: A Negative Modulator at GABAa Receptors // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, No. 13, 2003. P. 2281-2284.

148. Kenneth, R. C NMR studies of some naturally occurring amentoflavone and hinokiflavone biflavonoids // Phytochemistry. Vol. 26, No. 12, 1987. — P. 3335-3337.

149. Kleijnen, J. Ginkgo biloba / J. Kleijnen, P. Knipschild // Lancet. 1992. - V. 340, No. 7. - P. 1136.

150. Kressmann, S. Pharmaceutical quality of different Ginkgo biloba brands / S. Kressmann, W. Muller, H. Blumell // Journal of Pharmacy and Pharmacology. No.5. — 2002. -P.5.

151. Kurkin, V.A. Phenylpropanoids from Medicinal Plants: Distribution, Classification, Structural Analysis, and Biological Activity // Chemistry of Natural Compounds. T. 39, No. 2. - 2003. - P. 123.

152. Wang, L. Direct analysis of alkylphenols in Ginkgo biloba leaves by thermochemolysis-gas chromatography/mass spectrometry in the presence of tetramethylammonium hydroxide // Journal of Analytical and Applied PyrolysisNo. 85.-2009.-P. 66-71.

153. Yamaguchi, L. F. Biflavonoids from Brazilian pine Araucaria angustifolia as potentials protective agents against DNA damage and lipoperoxidation // Phytochemistry No. 66/. 2005. - P. 2238-2247.

154. Mahadevan, S. Multifaceted therapeutic benefits of Ginkgo biloba L.: chemistry, efficacy, safety, and uses // Journal of food science—vol. 73, No. 1, 2008.-P. 14-19.

155. Ritu, T. Effects of Egb 761 on bone mineral density, bone microstructure, and osteoblast function: Possible roles of quercetin and kaempferol // Molecular and Cellular Endocrinology No. 302. 2009. - 86-91 p.

156. Sarah, E. etc. Differential cognitive effects of Ginkgo biloba after acute and chronic treatment in healthy young volunteers // Psychopharmacology No. 179, 2005.-P. 437^446.

157. Sasakia, K. Chemistry and biological activities of Ginkgo biloba. -Hokkaido, 2007. 177 p.

158. Shahid, M. Isolation of ginkgolides A, B, C, J and bilobalide from G. biloba extracts / M. Shahid, N. Koji // Phytochemistry No. 65. 2004. - P. 28972902.

159. Teris, A. van Beeka. Chemical analysis and quality control of Ginkgo biloba leaves, extracts, and phytopharmaceuticals // Journal of Chromatography A, No. 1216. -2009. P. 2002-2032.

160. Touchslone, J.C. Practice of Thin Layer Chromatography, 3rd Ed. John Wiley & Sons, New York. U.S.A. - 1992-416 p.

161. United States Pharmacopeia. — 31-th Ed. — Rockville: United States Pharmacopeial Convention, Inc., 2008. —2105 p.

162. Yi-Zeng, L. Quality control of herbal medicines // Journal of Chromatography B, No. 812. 2004. - P. 53-70.

163. Zakharov, Y.V. The efficacy of treatment with tanakan (EGb 761) in relation to cognitive impairment in patients with cerebrovascular disease // European Neuropsychopharmacology. 2005. - P.228-229.

Автореферат диссертации по медицине на тему ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИСТЬЕВ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО (GINKGO BILOBA L.)

Оглавление диссертации Буланкин, Денис Георгиевич :: 2011 :: Самара

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Буланкин, Денис Георгиевич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Буланкин, Денис Георгиевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций