Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Эффективность стандартизированного экстракта ginkgo biloba (билобила) при острой почечной недостаточности в эксперименте

Направахрукописи

Назаренко Максим Евгеньевич

ЭФФЕКТИВНОСТЬ СТАНДАРТИЗИРОВАННОГО ЭКСТРАКТА GINKGO BILOBA (БИЛОБИЛА) ПРИ ОСТРОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2004

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель—

Доктор медицинских наук, профессор Штрыголь Сергей Юрьевич Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Резников Константин Михайлович

Доктор медицинских наук, профессор Федоров Владимир Николаевич

Ведущая организация — государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет" Министерства Здравоохранения Российской Федерации

совета К 208.039.01 государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства Здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Защита с о с

заседании диссертационного

Е.Н. Пашин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Острая почечная недостаточность (ОПН) относится к числу часто встречающихся и наиболее опасных неотложных состояний. В настоящее время в общей популяции частота ОПН приближается к 200 на 1 млн. населения, причем она возникает в 5 раз чаще у пожилых, чем у молодых (Klinknecht D., Pallot I., 1998). Грубые нарушения водно-электролитного и азотистого обмена при ОПН приводят к расстройству функций всех жизненно важных органов и систем: сердечно-сосудистой, нервной, дыхательной систем, печени. Так, по данным Н.Р. Kierdorf (1995), начиная с 90-х годов, прослеживается устойчивая тенденция, в соответствии с которой ОПН все чаще становится не моноорганной патологией, а составляющей синдрома полиорганной недостаточности, неблагоприятно влияя на выживаемость больных. Поэтому, несмотря на совершенствование методов профилактики и лечения, летальность при данной патологии сохраняется высокой и составляет около 50 % (Гланц Р. М. с соавт., 1985; Витворт Дж. А., Лоренс Дж. Р., 2000).

В настоящее время продолжается активное изучение патогенеза ОПН, разрабатываются новые подходы к ее профилактике и лечению. Положительные результаты получены при лечении экспериментальной ОПН различными растительными препаратами, которые обладают широким спектром фармакологических и биохимических эффектов, например лес-пефланом (Гуляев В.Г. с соавт., 1992; Гуляев В.Г. с соавт., 1993) и экстрактом бегонии краснолистной (Урбан А. С. с соавт., 1998). В этом аспекте представляются перспективными препараты реликтового растения Ginkgo biloba L., богатые флавоноидами и микроэлементами, содержащие уникальные соединения — встречающиеся только в данном растении гинкго-лиды и билобалид (DeFeudis F. V., Drieu К., 2000). Однако в настоящее время изучаются главным образом их цереброваскулярные, нейро- и психотропные эффекты, имеются лишь единичные сведения о влиянии на функцию почек. В многочисленных исследованиях было показано, что стандартизированный экстракт Ginkgo biloba обладает мощным антиокси-дантным действием- и, кроме того, вазоактивным, антиагрегантным эффектами, стимулирует митохондриальное дыхание (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; DeFeudis F. V., Drieu К., 2000). Все это дает основания предполагать наличие ренальных эффектов у препаратов Гинкго. Одним из наиболее распространенных препаратов является билобил (KRKA, Словения), который представляет собой стандартизированный экстракт Ginkgo biloba. В поисковых исследованиях, выполненных на кафедре фармакологии Ив-ГМА, было установлено, что билобил обладает мочегонным действием у интактных крыс в основном за счет повышения скорости клубочковой фильтрации и может усиливать почечный

Штрыголь С. Ю., 2001; Лиманова О.А. с соавт., 2002 а, б). Представляет несомненный интерес возможное влияние билобила на функцию почек при ОПН. Билобил, с учетом его антиоксидантных свойств и установленной в цитированных исследованиях способности усиливать почечный кровоток, по-видимому, может оказать защитный эффект в отношении почек. Однако исследования, посвященные оценке нефропротективных свойств препаратов Гинкго в условиях ОПН, ранее не проводились.

На основании изложенного правомочно заключить, что дальнейшее изучение ренальных эффектов билобила, особенно в условиях нарушения функции почек, является актуальным и перспективным.

Цель исследования

Выяснить характер и механизмы влияния стандартизированного экстракта Ginkgo biloba (билобила) на функциональное состояние почек в условиях экспериментальных моделей острой почечной недостаточности.

Задачи исследования

1. Выяснить влияние билобила на выделительную функцию почек у ин-тактных крыс при спонтанном мочеотделении.

2. Определить эффекты билобила на функциональное состояние почек, интенсивность процессов перекисного окисления липидов и выживаемость экспериментальных животных в условиях нефротоксической (глицероловой) модели острой почечной недостаточности у крыс.

3. Сравнить эффективность билобила и леспенефрила на нефротоксиче-ской модели острой почечной недостаточности.

4. Оценить влияние билобила на выделительную функцию почек, почечный кровоток, состояние процессов липопероксидации и выживаемость крыс с моделью ишемической острой почечной недостаточности.

Научная новизна и практическая значимость

Впервые изучены ренальные эффекты стандартизированного экстракта Ginkgo biloba у интактных крыс при спонтанном мочеотделении и в условиях экспериментального нарушения функции почек. Выявлены новые эффекты билобила - диуретический и нефропротективный; последний проявляется улучшением функционального состояния почек: в условиях глицероловой модели - уменьшением выраженности полиурии и протеи-нурии, активизацией процессов канальцевой реабсорбции, а при ишемиче-ской модели повышением как канальцевой реабсорбции, так и клубочко-вой фильтрации. Показано, что с благоприятным влиянием билобила на выделительную функцию почек при их токсическом повреждении связано повышение выживаемости животных.

Установлены механизмы защитного, противоишемического действия билобила, связанные со способностью препарата активировать антиок-сидантную систему, блокировать процессы перекисного окисления липи-дов в почках и усиливать их кровоснабжение.

Результаты работы свидетельствуют о перспективности использования препаратов Ginkgo biloba в нефрологии и могут служить экспериментальным обоснованием целесообразности их применения с целью профилактики и лечения ОПН у человека.

Государственный регистрационный номер темы: 01.200.2 08377

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации представлены на научной конференции "Основы рационального применения лекарств" (Ярославль, 2002), на научной конференции, посвященной 50-летию Алтайского государственного медицинского университета, а также на научных конференциях ИвГМА (2002 - 2004 гг.).

Публикации и сведения о внедрении в практику

По теме диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 3 журнальные статьи. Результаты исследования используются в преподавании соответствующих разделов фармакологии в ИвГМА.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 104 страницах компьютерного текста и содержит введение, обзор литературы (глава 1), описание материалов и методов исследования (глава 2), результаты собственных исследований (глава 3), обсуждение результатов (глава 4), выводы и список использованной литературы (152 источника, в том числе 79 на русском и 73 на иностранном языке). Иллюстрации представлены 9 таблицами и 5 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные животные. Работа выполнена на 225 беспородных белых крысах обоего пола массой 200-250 г, полученных из питомника "Белый мох" Московской области. Животных содержали в пластиковых клетках группами до 8 крыс в каждой при естественном освещении и температуре воздуха около 20°С.

Общее состояние животных оценивали по таким критериям, как поведение, аппетит, чистота и цвет кожных покровов и слизистых оболочек, отсутствие видимых признаков заболеваний. Руководствовались "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных"

з

и "Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных". Болезненные манипуляции осуществляли под наркозом.

Опыты на интактных животных

Изучение показателей функционального состояния почек и их динамики под действием билобила. Для сбора мочи животных помещали в обменные клетки на 24 часа. Измеряли суточный диурез и питьевое потребление воды. Рассчитывали эффективность выведения выпитой жидкости как отношение диуреза к объему выпитой за сутки жидкости. Кровь получали сразу после сбора мочи при декапитации животных под глубоким нембуталовым наркозом. В пробах мочи и крови определяли концентрацию креатинина, натрия, калия. В моче, кроме того, определяли содержание белка, в крови — концентрацию мочевины. Рассчитывали показатели клубочковой фильтрации и реабсорбции натрия и воды. Оценивали суточную экскрецию креатинина, натрия и калия, наличие и выраженность про-теинурии. Концентрацию креатинина в моче и сыворотке крови определяли по реакции Яффе (Берхин Е. Б., Иванов Ю. И., 1972) с использованием фотоэлектроколориметра ФЭК-56ПМ. Количество белка в моче определяли методом Эрлиха-Альтгаузена (Альтгаузен А. А., 1959). Анализ содержания натрия и калия в моче и сыворотке крови проводили при помощи ионоселективных электродов с использованием ионоселективного анализатора (микроалкальанализатор ПС-5, Венгрия). Концентрацию мочевины в сыворотке крови определяли при помощи набора LACHEMA (Чехия) с использованием фотоэлектроколориметра.

Для оценки влияния стандартизированного экстракта Ginkgo biloba (билобил, KRKA, Словения) на выделительную функцию почек у интакт-ных крыс животным ежедневно через зонд в желудок вводили водный раствор препарата в дозе 2 мг/кг в течение 3-х дней, после чего их помещали в обменные клетки. Эта доза, оказывающая влияние на выделительную функцию почек в предварительных исследованиях, была выбрана на основе данных литературы (Лиманова О. А., Штрыголь С. Ю., 2001). Контролем служили крысы, которым вместо раствора билобила вводили воду в том же объеме.

Измерение скорости почечного кровотока. Почечный кровоток определяли в корковом веществе почек и в почечной артерии, для чего под нембуталовым наркозом выполняли срединную лапаротомию и выделяли левую почку. Исследование кровотока в корковом веществе почки производили при помощи лазерного доплеровского флоуметра BLF-21 (Transonic Systems Inc., США) с использованием интраоперационого игольчатого датчика, который устанавливали на поверхность почки. После этого отсепаровывали левую почечную артерию и определяли в ней объемную скорость кровотока с помощью датчика 2SB ультразвукового фло-

уметра Т101 (Transonic Systems Inc., США). Показатели регистрировали через 10-15 минут, когда происходила стабилизация кровотока.

Оценка состояния перекисного окисления липидов и антиоксидант-ной защиты. Под глубоким нембуталовым наркозом крыс декапитировали, забирали кровь для исследования и быстро извлекали почки. В сыворотке крови концентрацию МДА определяли спектрофотометрически (СФ-46 ЛОМО) по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Коробейникова Э.Н., 1989). Почки гомогенизировали в соотношении 1 : 9 при помощи стеклянного гомогенизатора в ледяном 20 мМ фосфатном буфере на 105 мМ КС1 с рН 7,4. После этого гомогенат почек центрифугировали для удаления не полностью разрушенных клеток и ядер при 1000 g в течение 10 минут (Прохорова М.И., 1982). В полученном гомогенате определяли концентрацию МДА методом Э. Н. Коробейниковой (1989) до и после инкубации с раствором FeSC>4 (Лебедев А. А., Петренко Н. А., 1996). Активность анти-оксидантной системы почек оценивали по способности присутствующих в гомогенате антиоксидантов блокировать ПОЛ, индуцированное ионами Fe2+ (Промыслов М. Ш., Демчук М. Л., 1990), для чего рассчитывали процент прироста МДА в гомогенате после инкубации.

Исследования на крысах с нефротоксической (глицероловой) моделью острой почечной недостаточности

Нефротоксическую модель ОПН вызывали однократным внутримышечным введением 50 % водного раствора глицерола в дозе 10 мг/кг (Greven J., 1979, цит. по Носковой А.П., 1981; Урбан А. С. и др., 1998; Лебедев А. А., Гребенева С. В., 1996; Жизневская Н.Г., Макаренко B.C., 1988) у крыс, разделенных на 3 группы. Животным 1-й группы вводили в желудок через зонд раствор билобила в дозе 2 мг/кг сразу после инъекции гли-церола и в дальнейшем ежедневно, а животным, специально оставленным для наблюдения за выживаемостью, - до 5-го дня ОПН. Животные 2-й группы получали водный раствор леспенефрила (DARCI Pharma member of UCB Pharma/Group UCB, Франция) по той же схеме в дозе 2 мл/кг. Контрольным животным (3-я группа) вместо препаратов в желудок вводили воду в том же объеме.

Выделительную функцию почек оценивали на 1-е, 2-е и 4-е сутки ОПН. Через 48 часов после введения глицерола определяли концентрацию МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек до и после инкубации с раствором FeSO^ Летальность экспериментальных животных оценивали в течение трехнедельного наблюдения.

Исследования на крысах с ишемической моделью острой почечной недостаточности

Крысы исходно были разделены на 2 группы. Животным одной из

них за 1 день и за 1,5 часа перед операцией вводили в желудок раствор би-лобила в дозе 2 мг/кг. Крысам второй (контрольной) группы вводили воду в том же объеме. Тотальную ишемию обеих почек производили после срединной лапаротомии под нембуталовым наркозом (35 мг/кг) путем наложения зажимов на почечную ножку (артерия, вена, мочеточник) сроком на 75 минут (Канус И. И., 1989).

Выделительную функцию почек оценивали на 1-е и 2-е сутки ОПН. Кровоток в корковом веществе и почечной артерии левой почки регистрировали непосредственно перед наложением зажима и строго через 15 минут после снятия зажима. Кроме того, через 48 часов после операции производили релапаротомию и исследовали скорость почечного кровотока. Для исследования антиоксидантных свойств билобила почки забирались сразу после 75-минутной ишемии и 15-минутной реперфузии. Концентрацию МДА определяли в гомогенате почек до и после инкубации с раствором FeSC>4. Летальность экспериментальных животных оценивали в течение трехнедельного наблюдения.

Статистическая обработка полученных результатов

Количество определений каждого показателя в группе составляло от 6 до 10. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали параметрический критерий t Стьюдента при наличии нормального распределения и непараметрический критерий W Уайта при его отсутствии. Внутригрупповые различия анализировали по парному критерию Вил-коксона. Достоверность различий результатов, выраженных в альтернативной форме (выживание-гибель), определяли по критерию Различия считали достоверными при р < 0,05. Результаты в работе представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. Для выяснения наличия связи между различными величинами использовали коэффициент корреляции г. Вычисления производили на компьютере при помощи электронных таблиц Excel (Молодавкин Г. М., 2001).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Ренальные эффекты билобила у интактных животных в условиях спонтанного мочеотделения

Результаты экспериментов, выполненных на интактных животных, показывают, что билобил оказывает у крыс диуретический эффект в условиях спонтанного мочеотделения.

Экстракт Ginkgo biloba достоверно повышал у крыс СКФ в среднем на 57% и суточный диурез на 73%, при этом уровень реабсорбции воды и натрия существенно не отличался от показателей контрольных животных.

Эти данные находятся в соответствии с результатами исследований, ранее проведенных на кафедре фармакологии ИвГМА, которые выявили способность билобила увеличивать диурез у крыс в условиях водной нагрузки (Лиманова О. А., Штрыголь С. Ю., 2001; Лиманова ОА. с соавт., 2002 а, б). Заслуживает внимания тот факт, что увеличение диуреза как при спонтанном мочеотделении, так и в условиях водной нагрузки происходит главным образом за счет возрастания СКФ. На процессы канальцевой ре-абсорбции натрия и воды в интактном организме билобил существенно не влияет.

Механизм выявленного диуретического эффекта экстракта Ginkgo biloba, видимо, связан со способностью препарата усиливать кровоток в корковом веществе почки и почечной артерии (Лиманова О. А., Штрыголь С. Ю., 2001). Подобный эффект на выделительную функцию почек оказывают производные ксантина, например, эуфиллин. Считается, что влияние эуфиллина на почечную гемодинамику играет ведущую роль в развитии диуретического эффекта, так как увеличение почечного кровотока приводит к усилению клубочковой фильтрации, что в свою очередь сопровождается увеличением экскреции натрия и воды (Лебедев А.А., 1984).

Влияние билобила на почечный кровоток обусловлено, очевидно, действием отдельных его компонентов. Так, флавоноиды способны инги-бировать фермент фосфодиэстеразу, что приводит к накоплению в гладко-мышечных клетках артериол цГМФ и снижению тонуса артериол (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; DeFeudis F.V., 1988). Кроме того, экстракт Ginkgo способен повышать образование эндотелиального релаксирующего фактора (Delaflotte S. et al., 1984). Гинкголиды ингибируют фактор активации тромбоцитов, уменьшая их агрегацию, а также агрегацию эритроцитов, вследствие чего улучшаются реологические свойства крови (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; Dutta-Roy А. К. et al., 1999; Li S. et al., 1999).

Мочегонный эффект билобила может иметь благоприятное терапевтическое значение при ОПН, так как диуретики на сегодня являются наиболее эффективными препаратами для профилактики и лечения острого нарушения выделительной функции почек. С этой точки зрения экстракт Ginkgo biloba, обладающий дополнительно антиоксидантным, вазодиляти-рующим, антиагрегантным, противоишемическим, противоапоптозным эффектами, может оказать положительное влияние на функциональное состояние почек при ОПН.

Результаты исследования на глицероловой модели ОПН

Развитие глицероловой модели ОПН сопровождалось выраженным расстройством выделительной функции почек, азотистого и водно-электролитного обмена у контрольных животных (рис. 1). Наблюдалось снижение СКФ в течение первых суток после введения глицерола (0,11±0,02 мл/мин/100 г против 0,17±0,01 у интактных крыс), выраженное

Рис. 1. Влияние билобила на показатели функционального состояния почек при глицероловой модели ОПН

Статистически значимые различия (р<0,05): А-с показателями группы интактныхживотных, * - с показателями группы ОПН.

нарушение процессов реабсорбции натрия и воды, вследствие чего значительно увеличивались диурез и питьевая активность у крыс, причем поли-урия развивалась уже на первые сутки ОПН. В крови возрастала концентрация креатинина и мочевины. Значительно увеличивалась экскреция белка с мочой. Данные нарушения достигали своего максимума на вторые сутки после инъекции глицерола - уровень креатининемии в среднем был в 5 раз выше, чем у интактных животных, а диурез увеличился более чем в 3 раза. К концу четвертых суток ОПН, несмотря на то, что наблюдалась нормализация СКФ и показателей азотистого обмена, сохранялись нарушения, связанные с дисфункцией канальцевого эпителия - низкая реаб-сорбция воды и полиурия, значительная протеинурия; кроме того, развивалась гипокалиемия. Интересно, что уровень канальцевой реабсорбции натрия и концентрация натрия в сыворотке крови при этом были достоверно выше, чем у интактных животных. Эти результаты могут свидетельствовать об активации ренин-ангиотензин-альдостероновой системы у крыс с глицероловой нефропатией. Повышение концентрации натрия в сыворотке крови, как и развивающаяся гипокалиемия, может быть связано с увеличением выработки альдостерона в надпочечниках. В свою очередь гипока-лиемия может обусловливать низкую реабсорбцию воды и увеличение диуреза (Наточин Ю.В., 1976).

Известно, что при ОПН вследствие нарушения азотистого и водно-электролитного обмена страдают функции всех органов и систем организма. Формируется процесс срочной адаптации, что сопровождается напряжением функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой и ренин-ангиотензин-альдостероновой систем (Канус И. И., 1989). В результате повышенной выработки кортикостероидов происходит снижение как клеточного, так и гуморального иммунитета, поэтому ОПН часто сопровождается инфекционными осложнениями, которые являются одной из основных причин смерти таких больных (Шейман Дж.А., 1997). Кроме того, нарушение выделительной функции почек в условиях глицероловой модели ОПН развивается на фоне выраженного эндотоксикоза в результате рабдомиоли-за, что также может приводить к снижению компенсаторных возможностей организма. С этими обстоятельствами, видимо, связана высокая летальность у крыс с данной модельной патологией: за три недели наблюдения в контрольной группе погибло 51,6 % животных.

В настоящей работе выявлена высокая эффективность стандартизированного экстракта Ginkgo biloba при глицероловой ОПН. Защитный эффект билобила проявился главным образом в отношении функции каналь-цевого эпителия (рис. 1). Так, при его применении отмечалось достоверное снижение протеинурии, повышение реабсорбции натрия и воды по сравнению с контрольной группой. Улучшение канальцевой реабсорбции привело к существенному ограничению полиурии и полидипсии.

В опытах на интактных животных применение билобила сопровождалось значительным усилением клубочковой фильтрации, поэтому можно

было ожидать, что препарат будет способствовать восстановлению фильтрации и в условиях почечной недостаточности. Однако СКФ при глицеро-ловой ОПН под действием билобила не повышалась. Напротив, отмечалась тенденция к снижению СКФ (0,09+0,02 мл/мин/100 г). Отсутствие ожидаемого эффекта, возможно, связано с некоторыми особенностями развития ОПН при рабдомиолизе, а именно с тем обстоятельством, что большую роль в снижении СКФ при данной патологии играет внутриканальцевая обструкция (Милованов Ю.С., Николаев А.Ю., 1999). Билобил, видимо, не предупреждает преципитации миоглобина в просвете почечных канальцев. Напротив, увеличивая реабсорбцию натрия и воды и таким образом уменьшая канальцевый ток жидкости, билобил в некоторой степени может способствовать развитию внутриканальцевой обструкции. Для профилактики преципитации миоглобина и обструкции просвета канальцев при раб-домиолизе с успехом используется инфузионная ощелачивающая терапия (Ермоленко В. М., 1986; Cameron J. S., 1990; Valderrabano F. et al., 1995).

Несмотря на то, что СКФ на фоне применения билобила несколько снижалась, уровень креатининемии не отличался от показателя контрольной группы животных, а концентрация мочевины в крови даже несколько снижалась, что, очевидно, связано с внепочечным действием экстракта Ginkgo biloba, возможно, с антикатаболическим эффектом флавоноидов (Гуляев В.Г. с соавт., 1992).

Летальность экспериментальных животных — это интегральный показатель эффективности препарата при моделируемой патологии. Поэтому особенно важен тот факт, что билобил достоверно снижал летальность при глицероловой модели ОПН с 51,6 до 20 % (р<0,05). Очевидно, что повышение выживаемости экспериментальных животных в первую очередь обусловлено нормализацией функционального состояния почек. Вместе с тем можно предположить, что повышению выживаемости животных с рабдомиолизом способствуют и внепочечные эффекты экстракта Гинкго. Известны его нейро- и кардиопротективные свойства (Clostre F., 2001). Кроме того, в литературе имеются свидетельства "антистрессового" эффекта экстракта Ginkgo biloba, связанного с влиянием препарата на функцию гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (DeFeudis F. V., Drieu К., 2000).

Механизм реализации выявленного в данной работе нефропротек-тивного действия билобила, вероятно, является комплексным и складывается из целого ряда эффектов препарата. Известно, что ренальная форма ОПН в 75% случаев обусловлена острым тубулярным некрозом (Ермоленко В.М., 2000). При этом одной из ведущих причин развития острого тубу-лярного некроза, в том числе и в условиях глицероловой модели ОПН, является ишемия почек и, как следствие, активация процессов ПОЛ и угнетение митохондриального дыхания (Ермоленко В.М., 2000; Зимина Л. Н. и др., 1998; Лебедев А. А., 1984). Поэтому билобил, обладающий мощным антиоксидантным эффектом, а также способный увеличивать кровоснаб-

жение почек и стимулировать митохондриальное дыхание, может воздействовать одновременно на несколько важных звеньев патогенеза глицеро-ловой ОПН.

Как показывают результаты данного исследования, развитие глице-роловой ОПН сопровождается увеличением количества МДА в сыворотке крови и гомогенате почек по сравнению с показателями интактных животных (таблица). Билобил в этих условиях оказывал ингибирующее влияние на ПОЛ, что характеризовалось нормализацией концентрации МДА в почках и сыворотке крови. Кроме того, препарат блокировал накопление МДА в гомогенате почек при инкубации с ионами Ре2+ (процент прироста МДА оказался более чем в 2 раза ниже, чем у контрольных и даже интактных животных). Эти данные свидетельствуют о способности билобила активировать антиоксидантную систему в почках.

Таблица

Влияние билобила на ПОЛ и антиоксидантный статус в условиях глицероловой модели ОПН у крыс (n = 9)

Показатель Интактные Контроль ОПН +

крысы (ОПН) билобил

МДА в сыворотке крови,

мкмоль/л 6,2±0,4 8,6±0,4Л 6,9+0,3*

МДА в гомогенате почек,

мкмоль/л 6,4±0,3 8,0+1,2 7,0±0,5

Прирост МДА в гомогена-

те почек после инкубации 65,8±12,2 67,5±7,0 28,7±5,2Л*

с Бе2+, %

Примечание. Статистически значимые различия (р < 0,05): л — с показателями группы интактных животных; с показателями контрольной группы.

Усиливать антиоксидантную защиту почек могут как флавоноидные, так и терпеноидные компоненты экстракта Ginkgo biloba - флавоноиды действуют как "ловушка" для свободных радикалов и способны связывать ионы двухвалентного железа, обладающие прооксидантными свойствами (Ramassamy С. et al., 1993), а терпеноиды препятствуют образованию свободных радикалов (Pietri S. et al., 1997). С антиоксидантным эффектом би-лобила, видимо, связана нормализация функции канальцевого эпителия -усиление процессов реабсорбции натрия и воды, что в итоге проявляется повышением выживаемости экспериментальных животных с глицероловой моделью ОПН.

Результаты, полученные в ходе исследований на глицероловой модели ОПН, хорошо согласуются с данными M.U. Naidu et al. (2000), которые выявили, что экстракт Ginkgo biloba при пероральном применении у крыс в дозе 300 мг/кг препятствует развитию нефротоксической ОПН, вызванной большими дозами гентамицина. В данной работе также было показано, что препарат препятствует повышению МДА в сыворотке крови и почечных тканях. С антиоксидантным эффектом авторы связывают благоприятное действие экстракта Ginkgo на выделительную функцию почек в условиях гентамициновой модели ОПН.

Нефропротекторная эффективность билобила подтверждена при изучении его влияния на функциональное состояние почек и выживаемость крыс с глицероловой моделью ОПН в сравнении с другим растительным препаратом, также содержащим флавоноиды — леспенефрилом. Билобил к концу четвертых суток глицероловой нефропатии полностью восстанавливал основные показатели работы почек - СКФ, уровень креа-тининемии, реабсорбцию натрия и воды, диурез. Применение леспенефри-ла, в отличие от билобила, не предупреждало развития полиурии у крыс -суточный диурез и относительный диурез оказались даже несколько выше, чем у контрольных животных. При этом уровень канальцевой реабсорбции натрия и воды был значительно ниже, чем в контрольной группе и группе животных, получавших билобил. Кроме того, отмечалось снижение СКФ и повышение концентрации креатинина крови по сравнению с другими двумя группами. В итоге применение билобила сопровождалось достоверным снижением летальности экспериментальных животных по сравнению с контрольной группой с 51,6 % до 20 %, а при использовании леспенефрила отмечалась лишь незначительная тенденция к снижению летальности до 40%.

По данным В.Г. Гуляева с соавт. (1992, 1993), леспефлан - отечественный аналог леспенефрила - улучшает функциональное состояние почек и оказывает гипоазотемическое действие у животных с ОПН ишемическо-го и токсического (вызываемой введением сулемы) происхождения. Поэтому можно было ожидать, что леспенефрил будет эффективен и при гли-цероловой модели ОПН. Однако, как показывают результаты данного исследования, леспенефрил не только не улучшает выделительную функцию почек, но и может существенно нарушать ее при глицероловой нефропа-тии. Возможно, данное неблагоприятное действие препарата связано с его способностью снижать канальцевую реабсорбцию натрия и воды. Учитывая то обстоятельство, что глицероловая нефропатия сопровождается по-лиурической формой ОПН, уменьшение реабсорбции натрия и воды под действием леспенефрила, очевидно, может усиливать полиурию и приводить к снижению объема циркулирующей крови. Вместе с тем известно, что снижение объема циркулирующей крови закономерно сопровождается почечной вазоконстрикцией, снижением СКФ и повышением концентрации креатинина крови (Лебедев А. А., 1984).

Таким образом, более высокая эффективность билобила по сравнению с леспенефрилом в условиях глицероловой модели ОПН может быть связана с тем, что билобил в отличие от леспенефрила не нарушает ка-нальцевую реабсорбцию. Кроме того, только в билобиле, помимо флаво-ноидов, содержатся гинкголиды, обладающие противоишемической активностью (Pietri S. et al., 1997; Spinnewyn B. et al., 1987) и билобалид, предохраняющий митохондриальную респираторную функцию (Spinnewyn В. et al., 1995; Janssens D. et al., 1995; Janssens D. et al., 1999), способные оказать дополнительное защитное действие при остром тубулярном некрозе.

Итак, билобил оказывает выраженный нефропротективный эффект у крыс в условиях глицероловой модели ОПН, что проявляется повышением канальцевой реабсорбции натрия и воды, уменьшением выраженности протеинурии и полиурии. Нормализация показателей водно-электролитного обмена сопровождается достоверным повышением выживаемости экспериментальных животных. Один из механизмов благоприятного действия экстракта Ginkgo biloba при глицероловой нефропатии, очевидно, связан с антиоксидантными свойствами препарата.

Результаты исследований на ишемической модели ОПН

В многочисленных исследованиях на животных было показано, что экстракт Ginkgo biloba оказывает выраженный противоишемический эффект в отношении мозга, сердца и сетчатки глаза (DeFeudis F. V. et al., 1991; DeFeudis F. V. et al., 1998; Spinnewyn B. 1992; Pietri S. et al., 1997; Clostre F., 2001). Вместе с тем хорошо известно, что ишемия почек - основная причина развития острого тубулярного некроза и связанной с ним ОПН (Ермоленко В.М., 2000). Поэтому возможность оценить защитные свойства билобила непосредственно при экспериментальной ишемии почек представляла несомненный интерес.

Результаты исследования показывают, что повреждение почек вследствие их ишемии и последующей реперфузии сопровождается грубым нарушением выделительной функции данного органа у контрольных крыс, максимально выраженным в течение первых суток ОПН (рис. 2). У большинства животных расстройства водно-электролитного и азотистого обмена в этот период соответствовали олигурической стадии ОПН, а у части животных развивалась анурия. Отмечалось падение СКФ, уровень которой составил в среднем лишь 12 % от показателя интактных животных. Эти изменения функционального состояния клубочкового аппарата сопровождались 11-кратным повышением концентрации креатинина в крови, развитием гиперкалиемии, гиперволемии, о чем свидетельствует выявленная гипонатриемия. Определялись выраженные нарушения процессов ка-нальцевой реабсорбции воды и натрия. Ко вторым суткам ОПН отмечался рост СКФ в среднем до 24 % от уровня интактных животных, в результате чего несколько снизилась концентрация креатинина в крови, однако

Рис. 2. Влияние билобила на выделительную функцию почек при ишемической модели ОПН Статистически значимые различия (р<0,05): А- с показателями группы интактных животных, *-с показателями группы ОПН.

сохранялась гиперкалиемия. При этом наблюдалось выраженное нарушение реабсорбции натрия и воды, и у большинства животных наступала по-лиурическая стадия ОПН. Как на первые, так и на вторые сутки ишемиче-ской модели ОПН отмечалась высокая протеинурия. Таким образом, ОПН, развивающаяся вследствие тотальной 75-минутной ишемии почек, характеризуется значительно более выраженным нарушением их выделительной функции по сравнению с глицероловой моделью. Однако летальность у крыс оказалась максимальной при глицероловой ОПН (51,6 % против 33,3 % при ишемической модели), что может быть связано с полиорганностью поражения при глицероловом рабдомиолизе и свидетельствовать о более сложных механизмах развития данной модели ОПН.

В настоящей работе выявлено, что использование билобила в исследуемой дозе оказывает положительный эффект в отношении выделительной функции почек при их ишемическом повреждении. Показана динамика нарастания данного эффекта билобила на 1-е и 2-е сутки ОПН. Так, в течение первых суток ишемической ОПН отмечалась лишь тенденция к повышению реабсорбции натрия и воды, к снижению уровня протеинурии, что может указывать на улучшение состояния канальцевого эпителия под действием препарата. Ко вторым суткам ОПН у экспериментальных животных, получавших экстракт Ginkgo biloba, отмечалось уже достоверное улучшение основных показателей работы почек - увеличение СКФ и реабсорбции воды. Однако, несмотря на то, что реабсорбция натрия и воды под действием билобила возрастала, она оставалась на низком уровне. Вследствие этого у крыс, получавших билобил, так же как и в контрольной группе, ко вторым суткам развивалась полиурическая стадия ОПН. Наряду с этим достоверно уменьшалась экскреция белка, наблюдалась отчетливая тенденция к снижению креатинина крови, повышению уровня реабсорб-ции натрия. Известно, что гиперкалиемия является одним из самых грозных осложнений ОПН, при котором требуется экстренное проведение гемодиализа (Милованов Ю.С., Николаев А.Ю., 1999). Поэтому особо необходимо отметить то, что на фоне применения экстракта Ginkgo biloba как на 1-е, так и на 2-е сутки ишемической ОПН повышение концентрации калия в крови было менее выраженным по сравнению с контрольной группой и не достигало достоверных различий с группой интактных животных. Снижение в крови концентрации как калия, так и креатинина под действием билобила, очевидно, обусловлено усилением клубочковой фильтрации.

Таким образом, экстракт Ginkgo biloba в условиях ишемической модели, в отличие от глицероловой модели ОПН, увеличивает СКФ, способствуя улучшению показателей азотистого и электролитного обмена. Вместе с тем, положительное влияние препарата на интенсивность канальце-вой реабсорбции оказалось недостаточным, так как билобил при ишемиче-ском поражении почек не препятствовал развитию полиурии у крыс. Возможно, этим обстоятельством можно объяснить отсутствие значимого влияния билобила на летальность животных с ишемической моделью

ОПН. Так, в группе, получавшей лечение, отмечалась лишь небольшая тенденция к снижению летальности с 33,3 % в контрольной группе до 28%.

Влияние билобила на функциональное состояние почек при их ише-мическом повреждении может свидетельствовать о способности препарата препятствовать развитию острого тубулярного некроза. Основные механизмы, с которыми может быть связано данное противоишемическое действие экстракта Ginkgo biloba — антиоксидантный, антиагрегантный, вазо-активный и защита митохондриального дыхания (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; DeFeudis F. V., Drieu К., 2000). В исследованиях, ранее проведенных на кафедре фармакологии ИвГМА на интактных крысах, было выявлено, что билобил может усиливать почечный кровоток (Лиманова О. А., Штрыголь С. Ю., 2001; Лиманова О.А. с соавт., 2002 а, б). В настоящем исследовании было показано, что билобил оказывает антиоксидантное действие в отношении почек при глицероловой нефропатии. Эти два эффекта экстракта Ginkgo biloba могут иметь особенно большое значение при ишемическом и реперфузионном повреждении почек (Биленко М.В., 1989). Поэтому мы попытались оценить роль антиоксидантных свойств билобила и его способности усиливать почечный кровоток в реализации выявленного нами благоприятного влияния препарата на выделительную функцию почек при ишемической ОПН. Необходимо подчеркнуть, что в условиях тотальной ишемии билобил может повлиять на кровоснабжение почек только в реперфузионном периоде, вследствие чего особое значение для предупреждения острого тубулярного некроза приобретают антиоксидант-ные свойства препарата. Однако, как свидетельствуют результаты данной работы, билобил не оказывает влияния на интенсивность ПОЛ при 75-минутной тотальной ишемии и последующей 15-минутной реперфузии почек, хотя при его использовании отмечалась тенденция к увеличению ан-тиоксидантного потенциала почечных тканей. Возможно, слабая выраженность антиоксидантного эффекта билобила при тотальной ишемии связана с небольшой общей дозой препарата (2 мг/кг/сутки) и прекращением поступления компонентов экстракта в ткани почек при полном выключении их из кровообращения. Так, в большинстве исследований, в которых были продемонстрированы противоишемические свойства экстракта Ginkgo biloba в отношении ряда органов, использовались гораздо более высокие дозы препарата - 25 мг/кг/сутки и выше (Spinnewyn В., 1992; Pietri S. et al., 1997; Clostre F., 2001; Chandrasekaran K. et al., 2003). Можно предположить, что при увеличении общей дозы препарата больше его компонентов поступит в почки до прекращения их кровоснабжения и антиоксидантный эффект будет выражен сильнее. В дальнейших исследованиях представляется целесообразным использование более высоких доз билобила при ишемической модели ОПН. Хотя экстраполяция подобных доз на клиническую патологию человека может представляться проблематичной.

Рис. 3. Влияние билобила на кровоток в почечной артерии и

корковом веществе при экспериментальной ишемии почек у крыс

Статистически значимые различия (р<0,05):

Л-с исходными показателями;

*-с показателями контрольной группы

Со слабовыраженным антиоксидантным действием билобила, назначаемого с целью профилактики развития острого тубулярного некроза и ишемической ОПН, может быть связано недостаточно выраженное повышение реабсорбции воды и натрия в канальцах почек, развитие полиурии и отсутствие значимого влияния препарата на выживаемость экспериментальных животных.

Эксперименты по изучению состояния почечного кровотока у крыс с ишемической ОПН показали, что восстановление кровоснабжения почек у крыс после тотальной 75-минутной ишемии происходит не сразу, а постепенно, то есть имеет место постишемическая гипоперфузия органа - феномен no-reflow (рис.3). Основной причиной данного феномена считается дисфункция поврежденного ишемией эндотелия, которая сопровождается усилением вазоконстрикторной реакции (Биленко М.В., 1989). Кроме того, к нарушению кровотока на уровне микроциркуляторного русла может приводить отек эндотелия и тканей почек, адгезия и агрегация элементов крови. Билобил в этих условиях значительно увеличивал исходный уровень почечного кровотока и способствовал более быстрому восстановлению кровоснабжения почек в реперфузионном периоде. Эти данные хорошо согласуются с результатами исследований О.А. Лимановой и СЮ. Штрыголя (2001), в которых была выявлена способность билобила усиливать почечный кровоток у интактных крыс. Улучшение кровоснабжения почек под действием экстракта Ginkgo biloba как у интактных крыс, так и в условиях ишемической модели ОПН можно объяснить синергидным действием его компонентов - гинкголидов, обладающих антиагрегантными свойствами (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; Dutta-Roy А. К. et al., 1999; Li S. et al., 1999), и флавоноидов, которые оказывают сосудорасширяющий эффект (Захаров В. В., Яхно Н. Н., 2001; DeFeudis F.V., 1988; Delaflotte S. et al., 1984). Вероятно, с увеличением почечного кровотока связано выявленное нами благоприятное действие билобила на выделительную функцию почек у крыс с ишемической ОПН, что проявляется усилением клу-бочковой фильтрации, улучшением показателей азотистого и электролитного обмена.

Итак, стандартизированный экстракт Ginkgo biloba (препарат билобил) оказывает выраженное влияние на функциональное состояние почек у крыс. У интактных животных билобил увеличивает мочеотделение, главным образом за счет усиления клубочковой фильтрации. В условиях ишемической и глицероловой ОПН билобил улучшает выделительную функцию почек, способствует нормализации показателей азотистого и водно-электролитного обмена, что сопровождается повышением выживаемости экспериментальных животных.

В заключение необходимо подчеркнуть, что препараты стандартизированного экстракта Ginkgo biloba могут быть рекомендованы как для профилактики острого тубулярного некроза у лиц с высоким риском его развития, так и в качестве компонента комплексной терапии ОПН ишеми-

ческого или нефротоксического происхождения, способного значительно улучшить результаты лечения. Можно полагать, что сочетание хорошо известных нейропротекторных и установленных в данном исследовании нефропротекторных свойств экстракта Ginkgo biloba окажется благоприятным при этой тяжелой и опасной патологии.

ВЫВОДЫ

1. Стандартизированный экстракт Ginkgo biloba (билобил) в дозе 2 мг/кг/сутки оказывает умеренный диуретический эффект у интактных крыс при спонтанном мочеотделении, главным образом за счет увеличения скорости клубочковой фильтрации.

2. В условиях нефротоксической модели острой почечной недостаточности у крыс билобил усиливает антиоксидантную защиту почек, препятствуя активации процессов перекисного окисления липидов; способствует уменьшению выраженности канальцевых расстройств: снижает степень полиурии и протеинурии, повышает реабсорбцию натрия и воды. Следствием перечисленных благоприятных эффектов билобила является статистически значимое снижение летальности экспериментальных животных с 51,6 % в контроле до 20 %.

3. Леспенефрил, в отличие от билобила, в дозе 2 мл/кг/сутки не оказывает положительного эффекта в отношении выделительной функции почек в условиях глицероловой модели острой почечной недостаточности, существенно не влияет на выживаемость экспериментальных животных.

4. Применение билобила в исследуемой дозе (2мг/кг) не оказывает существенного влияния на выживаемость крыс с ишемической моделью острой почечной недостаточности, не влияет на интенсивность процессов липопероксидации в почках при их тотальной ишемии. Однако препарат несколько улучшает интегральный показатель антиоксидантной защиты почек, повышает исходный уровень почечного кровотока и способствует более быстрому восстановлению кровоснабжения почек в ре-перфузионном периоде. С этими механизмами действия билобила связано улучшение функционального состояния почек, что проявляется усилением процессов клубочковой фильтрации и канальцевой реаб-сорбции.

5. На основе выполненного экспериментального исследования разработан новый подход к профилактике и лечению острой почечной недостаточности. Он заключается в применении стандартизированного экстракта Ginkgo biloba, у которого выявлено нефропротекторное действие. Препарат стандартизированного экстракта Ginkgo biloba билобил, обладающий многогранным механизмом действия и широким спектром фармакологических эффектов, может быть рекомендован для проведения клинических испытаний в качестве нефропротектора.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Назаренко, М.Е. Влияние билобила и леспенефрила на функцию почек при экспериментальной острой почечной недостаточности [Текст] / М.Е. Назаренко, СЮ. Штрыголь // Вестн. Ивановской мед. акад. - 2001. - № 3-4. - С. 87.

2. Лиманова, О.А. Новые аспекты фармакологии стандартизированного экстракта Гинкго билоба (билобил): ренальные эффекты [Текст] / О.А. Лиманова, М.Е. Назаренко, СЮ. Штрыголь // Новости здравоохранения. - 2002. - № 3. - С. 36-40.

3. Штрыголь, СЮ. Влияние стандартизированного экстракта Гинкго билоба (билобил) на выделительную функцию и кровоснабжение почек в условиях ишемической модели почечной недостаточности [Текст] / СЮ. Штрыголь, М.Е. Назаренко // Актуальные проблемы фармакологии: тез. докл. научн. конф., посвященной 50-летию Алт. гос. мед. ун-та / Под ред. В.М. Брюханова. - Барнаул: АРМУ, 2003. -С 63.

4. Назаренко, М.Е. Нефропротективный эффект билобила при экспериментальной острой почечной недостаточности [Текст] / М.Е. Назаренко, СЮ. Штрыголь, В.Б. Слободин // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2003. - № 6. - С. 29-31.

5. Назаренко, М.Е. Влияние билобила на почечный кровоток при экспериментальной ишемии почек [Текст] / М.Е. Назаренко, СЮ. Штрыголь, Т.Р. Гришина // Вестн. Ивановской мед. акад. - 2003. - № 3-4.-С 25-27.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

МДА - малоновый диальдегид ОПН—острая почечная недостаточность ПОЛ — перекисное окисление липидов СКФ - скорость клубочковой фильтрации цГМФ - циклогуанидинмонофосфат

Печать офсетная. Усл. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 22

Изготовлено по технологии и на оборудовании фирмы XEROX The Document Company Центром документации XEROX г. Иваново, ул. Степанова, 17, тел.: 41-00-33 /многоканальный/ Лицензия серия ПД № 5-0053 от 1 июля 2000 г.

$20 993

Актуальность проблемы. Острая почечная недостаточность (ОПН) относится к числу часто встречающихся и наиболее опасных неотложных состояний. В настоящее время в общей популяции частота ОПН приближается к 200 на 1 млн. населения, причем она возникает в 5 раз чаще у пожилых, чем у молодых (Klinknecht D., Pallot I., 1998). Постоянно растет количество больных, нуждающихся в экстракорпоральных методах очищения организма. Грубые нарушения водно-электролитного и азотистого обмена при ОПН приводят к расстройству функций всех жизненно важных органов и систем: сердечно-сосудистой, нервной, дыхательной систем, печени. Так, по данным Н.Р. Kierdorf (1995), начиная с 90-х годов, прослеживается устойчивая тенденция, в соответствии с которой ОПН все чаще становится не моноорганной патологией, а составляющей синдрома полиорганной недостаточности, неблагоприятно влияя на выживаемость больных. Поэтому, несмотря на совершенствование методов профилактики и лечения, летальность при данной патологии сохраняется высокой и составляет около 50 % (Гланц P.M. с соавт., 1985; Витворт Дж.А., Лоренс Дж.Р., 2000).

В настоящее время продолжается активное изучение патогенеза ОПН, разрабатываются новые подходы к ее профилактике и лечению. Так, при экспериментальной ОПН выявлена эффективность простациклина, простагландина Ег, субстратов, усиливающих продукцию АТФ (глюкозо-1(шш 6)-фосфат, соединение Mg-АТФ), веществ, восстанавливающих медуллярный кровоток (адренолитики, пентоксифиллин, дофамин), блокато-ров кальциевых каналов (нифедипин, верапамил), антиоксидантов (супер-оксиддисмутаза, а-токоферол, селенит натрия), инсулиноподобного фактора роста-1, способствующего регенерации, атриалыюго натрийуретического пептида, предупреждающего снижение клубочковой фильтрации (Шумаков В.И. с соавт., 1983; Гланц P.M. с соавт., 1988; Витворт Дж.А., Лоренс Дж.Р., 2000; Ермоленко В.М., 2000). Однако результаты клинического использования перечисленных препаратов не дали ожидаемого эффекта, вероятно, вследствие более сложных и разноплановых механизмов повреждения почек у человека.

Положительные результаты получены и при лечении экспериментальной ОПН различными растительными препаратами, которые обладают широким спектром фармакологических и биохимических эффектов, например леспефланом (Гуляев В.Г. с соавт., 1992; Гуляев В.Г. с соавт., 1993) и экстрактом бегонии краснолистной (Урбан A.C. с соавт., 1998). В этом аспекте представляются перспективными препараты реликтового растения Ginkgo biloba L., богатые флавоноидами и микроэлементами, содержащие уникальные соединения - встречающиеся только в данном растении гинк-голиды и билобалид (DeFeudis F.V., Drieu К., 2000). Однако в настоящее время изучаются главным образом их цереброваскулярные, нейро- и психотропные эффекты, имеются лишь единичные сведения о влиянии на функцию почек. В многочисленных исследованиях было показано, что стандартизированный экстракт Ginkgo biloba обладает мощным антиокси-дантным действием, и, кроме того, вазоактивным, антиагрегантным эффектами (Захаров В.В., Яхно H.H., 2001). Все это дает основания предполагать наличие ренальных эффектов у препаратов Гинкго. Одним из наиболее распространенных препаратов является билобил (KRKA, Словения), который представляет собой стандартизированный экстракт Ginkgo biloba. В поисковых исследованиях, выполненных на кафедре фармакологии Ив-ГМА, было установлено, что билобил обладает мочегонным действием у интактных крыс в основном за счет повышения скорости клубочковой фильтрации и может усиливать почечный кровоток (Лиманова O.A., Штрыголь С.Ю., 2001; Лиманова O.A. с соавт., 2002 а, б). Представляет несомненный интерес возможное влияние билобила на функцию почек при ОПН. Билобил, с учетом его антиоксидантных свойств и установленной в цитированных исследованиях способности усиливать почечный кровоток, по-видимому, может оказать противоишемический эффект в отношении почек, препятствуя развитию острого тубулярного некроза, который в 75 % случаев является морфологическим субстратом ренальной формы ОПН (Ермоленко В.М., 2000). Таким образом, экстракт Ginkgo biloba, очевидно, способен увеличить выживаемость больных с острым тубулярным некрозом. Однако исследования, посвященные оценке нефропротективных свойств препаратов Гинкго в условиях ОПН, ранее не проводились.

На основании изложенного правомочно заключить, что дальнейшее изучение ренальных эффектов билобила, особенно в условиях нарушения функции почек, является актуальным и перспективным.

Цель исследования. Выяснить характер и механизмы влияния стандартизированного экстракта Ginkgo biloba (билобила) на функциональное состояние почек в условиях экспериментальных моделей острой почечной недостаточности.

Задачи исследования.

1. Выяснить влияние билобила на выделительную функцию почек у ин-тактных крыс при спонтанном мочеотделении.

2. Определить эффекты билобила на функциональное состояние почек, интенсивность процессов перекисного окисления липидов и выживаемость экспериментальных животных в условиях нефротоксической (глицероловой) модели острой почечной недостаточности у крыс.

3. Сравнить эффективность билобила и леспенефрила на нефротоксической модели острой почечной недостаточности.

4. Оценить влияние билобила на выделительную функцию почек, почечный кровоток, состояние процессов липопероксидации и выживаемость крыс с моделью ишемической острой почечной недостаточности.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые изучены ренальные эффекты стандартизированного экстракта Ginkgo biloba у ин-тактных крыс при спонтанном мочеотделении и в условиях экспериментального нарушения функции почек. Получены дополнительные данные относительно диуретических свойств билобила у интактных крыс - выявлена способность препарата усиливать мочеотделение за счет увеличения скорости клубочковой фильтрации в условиях не только индуцированного водной нагрузкой, но и спонтанного диуреза.

Выявлен нефропротективный эффект билобила при глицероловой и ишемической моделях ОПН, который проявляется улучшением функционального состояния почек: в условиях глицероловой модели - уменьшением выраженности полиурии и протеинурии, активизацией процессов ка-нальцевой реабсорбции, а при ишемической модели повышением как ка-нальцевой реабсорбции, так и клубочковой фильтрации. Показано, что с благоприятным влиянием билобила на выделительную функцию почек при их токсическом повреждении связано повышение выживаемости животных. Установлены механизмы защитного, противоишемического действия билобила, связанные со способностью препарата активировать антиокси-дантную систему, блокировать процессы перекисного окисления липидов в почках и усиливать их кровоснабжение.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования препаратов Ginkgo biloba в нефрологии и могут служить экспериментальным обоснованием целесообразности их применения с целью профилактики и лечения ОПН у человека.

Государственный регистрационный номер темы: 01.200.2 08377 Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации представлены на научной конференции "Основы рационального применения лекарств" (Ярославль, 2002), на научной конференции, посвященной

50-летию Алтайского государственного медицинского университета, а также на научных конференциях ИвГМА (2002 — 2004 гг.).

Публикации и сведения о внедрении в практику. По теме диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 3 журнальные статьи. Результаты исследования используются в преподавании соответствующих разделов фармакологии в ИвГМА.

ВЫВОДЫ

1. Стандартизированный экстракт Ginkgo biloba (билобил) в дозе 2 мг/кг/сутки оказывает умеренный диуретический эффект у интактных крыс при спонтанном мочеотделении, главным образом за счет увеличения скорости клубочковой фильтрации.

2. В условиях нефротоксической модели острой почечной недостаточности у крыс билобил усиливает антиоксидантную защиту почек, препятствуя активации процессов перекисного окисления липидов; способствует уменьшению выраженности канальцевых расстройств: снижает степень полиурии и протеинурии, повышает реабсорбцию натрия и воды. Следствием перечисленных благоприятных эффектов билобила является статистически значимое снижение летальности экспериментальных животных с 51,6 % в контроле до 20 %.

3. Леспенефрил, в отличие от билобила, в дозе 2 мл/кг/сутки не оказывает положительного эффекта в отношении выделительной функции почек в условиях глицероловой модели острой почечной недостаточности, существенно не влияет на выживаемость экспериментальных животных.

4. Применение билобила в исследуемой дозе (2мг/кг) не оказывает существенного влияния на выживаемость крыс с ишемической моделью острой почечной недостаточности, не влияет на интенсивность процессов липопероксидации в почках при их тотальной ишемии. Однако препарат несколько улучшает интегральный показатель антиоксидантной защиты почек, повышает исходный уровень почечного кровотока и способствует более быстрому восстановлению кровоснабжения почек в ре-перфузионном периоде. С этими механизмами действия билобила связано улучшение функционального состояния почек, что проявляется усилением процессов клубочковой фильтрации и канальцевой реаб-сорбции.

5. На основе выполненного экспериментального исследования разработан новый подход к профилактике и лечению острой почечной недостаточности. Он заключается в применении стандартизированного экстракта Ginkgo biloba, у которого выявлено нефропротекторное действие. Препарат стандартизированного экстракта Ginkgo biloba билобил, обладающий многогранным механизмом действия и широким спектром фармакологических эффектов, может быть рекомендован для проведения клинических испытаний в качестве нефропротектора.