Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Исследование особенностей экспрессии и распространённости раково-тестикулярных генов

На правах рукописи

МИСЮРИН ВСЕВОЛОД АНДРЕЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ЭКСПРЕССИИ И РАСПРОСТРАНЁННОСТИ РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРВЫХ ГЕНОВ

Специальность: 14.01.12 - Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

11 2014

МОСКВА, 2014

005556775

005556775

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н. Н. Блохина» Директор

академик РАН

Давыдов Михаил Иванович

Научный руководитель:

профессор, доктор медицинских наук

Барышников Анатолий Юрьевич

Официальные оппоненты:

Голенков Анатолий Константинович — профессор, доктор медицинских наук, руководитель отделения клинической гематологии и иммунотерапии Государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Московский областной научно-исследовательский клинический институт (МОНИКИ) им. М. Ф. Владимирского», Москва.

Киселев Сергей Львович — профессор,доктор биологических наук, заведующий отделом эпигенетики в Федеральном бюджетном государственном учреждении науки «Институт общей генетики им. Вавилова РАН», Москва.

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» Министерства Здравоохранения РФ, Москва.

Защита диссертации состоится «¿-Д » А 2014 г. в 1'

часов на заседании диссертационного совета Д 001.017.02 Федерального государственного бюджетного учреждения «Российский онкологический научный центр имени Н. Н. Блохина» Российской академии медицинских наук по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина» (115478, Москва, Каширское шоссе, 24) и на сайте www.ronc.ru.

Автореферат разослан «_»_2014 г.

Ученый секретарь диссертационного

профессор,

Барсуков Юрий Андреевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Акутуальность темы

Недавно было обнаружено, что в клетках если не всех, то многих злокачественных опухолей происходит активация группы генов, которые в норме экспрессируются только в семенниках. В связи с тем, что их экспрессия характерна как для опухолей, так и для семенников, белковые продукты этих генов, определяющие в значительной степени иммуногенные свойства тех клеток, в которых они присутствуют, называют раково-тестикулярными антигенами (РТА, от английского cancer-testis antigens, CT-antigens).

Исследования последних лет показали, что экспрессия РТА является универсальной особенностью малигнизированных клеток различного происхождения, и это несмотря на то, что опухолевые клетки демонстрируют значительное разнообразие на уровне генетических изменений, которые лежат в основе пусковых молекулярных механизмов злокачественной трансформации. Каков бы ни был исходный генетический дефект, запускающий программу злокачественного перерождения, одним из необходимых условий трансформации является приобретение опухолевой клеткой некоторых черт, характерных для клеток репродуктивной системы, зависящих от способности экспрессировать РТА.

В процессе созревания половые клетки проходят несколько последовательных этапов, которые различаются между собой наборами активных тестикулярных генов. В клетках злокачественных опухолей экспрессируются отдельные представители РТА в различных сочетаниях, причем при переходе опухоли в более агрессивную форму может происходить ингибирование одних и активация других генов этой группы. Кроме того, экспрессия некоторых РТА чаще выявляется при более агрессивных, а других -при менее агрессивных видах злокачественных опухолевых заболеваний. Например, активация генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и FRAME, принадлежащих группе раково-тестикулярных генов (РТГ), кодирующих РТА, была описана разными авторами в опухолях гематологического происхождения, при этом характер экспрессии этих генов был различен в острых и хронических формах гемобластозов. Это позволяет высказать предположение о том, что, во-первых, в половых клетках осуществляется эшелонированная программа последовательной активации и инактивации генов РТА, а во-вторых, вполне вероятно, что в клетках злокачественных опухолей гены РТА также могут активироваться не случайным образом, но в сочетаниях, которые соответствуют определенному этапу созревания половых клеток. Кроме того, вполне вероятно, что агрессивность злокачественной опухоли может зависеть, помимо прочих факторов, от набора

РТА генов, которые в клетках данной опухоли экспрессируются. Мы предполагаем, что активность SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и FRAME относится к различным этапам программы созревания половых клеток, поэтому эти гены могут по-разному определять клинические проявления SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и FRAME- позитивных или негативных гемобластозов.

Сведений об экспрессии РТГ, представленных в научной литературе, в настоящее время недостаточно для полного понимания того, каким образом раково-тестикулярные антигены могут определять клиническое разнообразие злокачественных опухолей. Для прояснения этого вопроса необходимы дополнительные исследования распространенности экспрессии РТГ в злокачественных опухолях различного генеза и степени агрессивности, в том числе генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и FRAME.

Раково-тестикулярные антигены рассматриваются в качестве весьма перспективных мишеней для приложения иммунологических подходов для проведения противоопухолевой терапии. У некоторых пациентов, страдающих злокачественными опухолевыми заболеваниями, иммунный ответ на эти антигены возникает естественным образом. В этом случае опухолевые клетки подвергаются иммунной атаке и уничтожаются. Но далеко не всегда срабатывают естественные механизмы презентации раково-тестикулярных антигенов иммунокомпетентным клеткам, поэтому у многих больных специфическая противоопухолевая иммунная реакция при обычных условиях не развивается. Существуют данные о том, что противоопухолевый ответ можно значительно усилить при использовании различных схем введения пациентам пептидов, синтезированных на основе РТА-последовательностей, либо РТА, выделенных из опухолевых клеток. В связи с этим весьма актуальной является задача изучения особенностей распространения РТА для выявления среди них наиболее перспективных мишеней для проведения противоопухолевой иммунотерапии.

Поводом для проведения настоящей работы послужила высокая актуальность вопроса о фундаментальной роли раково-тестикулярных антигенов в проявлении клинических свойств злокачественных опухолевых заболеваний, а также перспективность РТА в качестве мишеней для иммунотерапии опухолей.

Цель исследования

изучение особенностей экспрессии раково-тестикулярных генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME при различных онкогематологических заболеваниях.

Задачи исследования

1. Исследовать профиль экспрессии генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLPI, SPANXA1, SSX1 й FRAME у пациентов с опухолевыми заболеваниями кроветворной системы.

2. Оценить связь профиля экспрессии генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME с клиническими особенностями гемобластозов.

3. Охарактеризовать профиль экспрессии генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-I, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME в клеточных линиях К562, WI-38, mel Р, mel Si, mel Mtp, mel IL, mel Hn, mel Ibr и mel Kor.

4. Оценить возможность использования экспрессии данных генов в качестве диагностических маркеров и индикаторов различных стадий эволюции онкогематологических заболеваний.

Научная новизна работы

Получены данные о распространении экспрессирующихся генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLPI, SPANXÄl, SSX1 и PRAME при различных онкогематологических заболеваниях. Показана зависимость клинических проявлений гемобластозов от экспрессии раково-тестикулярных генов GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME. Обнаружены различия в профилях экспрессии РТА генов между хроническими и острыми формами онкогематологических заболеваний. Кроме того, показаны различия в профилях экспрессии ранних и поздних стадий хронического миелоидного лейкоза, у первичных больных хроническими миелопролиферативными заболеваниями, лимфогранулематозом, фолликулярной лимфомом, диффузной В-крупноклеточной лимфомой, и острого промиелоцитарного лейкоза. Продемонстрирована возможность проведения мониторинга гемобластозов с использованием количественной оценки уровня экспрессии данных генов методом полимеразно-цепной реакции в реальном времени. Исследован профиль экспрессии генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMGl, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME в клеточных линиях K562, U-937, NOMO-1, THP1, WI-38, mel P, mel Si, mel Mtp, mel IL, mel Hn, mel Ibr и mel Kor.

Научно-практическое значение

На основе метода ПЦР в реальном времени разработаны тест-системы для количественной оценки экспрессии генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEAl, PASDI, SCP1, SEMGl, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME в опухолевых клетках. Показана возможность использования данных тест-систем для определения спектра и интенсивности экспрессии генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEAl, PASDI, SCP1, SEMGl, SLLPI, SPANXA1, SSX1 и PRAME при различных опухолевых заболеваниях кроветворной и лимфоидной ткани с

5

целью выявления клинически значимых вариантов в пределах определенных нозологических форм. Кроме того, данные тест-системы могут применяться для определения уровня опухолевой нагрузки в дебюте заболевания и затем для проведения количественного мониторинга остаточных опухолевых клеток (для определения МОБ - минимальной остаточной болезни), позволяющего судить об эффективности терапии и стабильности ответа, а также для своевременного вывления молекулярного рецидива. Выявление спектра экспрессии генов SP 17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME в первичной опухоли, а также контроль изменения профиля экспрессии этих генов в процессе опухолевой прогрессии, является предпосылкой для последующей разработки индивидуализированных иммунотерапевтических подходов, направленных на подавление роста опухолевых клеток, экспрессирующих тот или иной из перечисленных РТГ. Данные тест-системы могут быть использованы с диагностической целью в различных онкологических и онкогематологических клиниках.

Личный вклад автора

Автором самостоятельно проведён поиск тематических публикаций среди отечественной и зарубежной литературы, разработан дизайн эксперимента, набрана коллекция клинических образцов и изучена первичная клиническая документация. Автор самостоятельно провёл статистический анализ полученных результатов и их интерпретацию. Все публикации по теме диссертации написаны автором самостоятельно.

Соответсвие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.01.12 - «онкология», конкретно пунктам 2 и 3.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Степень агрессивности опухолей связана с изменением профиля экспрессии раково-тестикулярных генов. Более агрессивные опухолевые клетки экспрессируют более широкий спектр PIT, каждый из которых имеет повышенный уровень экспрессии.

2. Хронические миелопролиферативные заболевания и хронический миелолейкоз в хронической стадии имеют близкий профиль экспрессии РТГ.

3. Фаза акселерации и бласшый криз хронического миеловдного лейкоза отличаются от хронической фазы активацией большего числа РТГ.

4. Онкомаркер PRAME экспрессируется в 100% случаев первичного острого промиелоцитарного лейкоза. Высокая экспрессия этого гена в дебюте ОПЛ - фактор благоприятного, а низкая экспрессия - фактор неблагоприятного прогноза.

Апробация работы

Апробация диссертационной работы состаялась 14 февраля 2014 г. на совместной научной конференции ' лаборатории экспериментальной химиотерапии, лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей, лаборатории рекомбинантных опухолевых антигенов, лаборатории трансгенных препаратов, лаборатории биомаркеров и механизмов опухолевого ангиогенеза, лаборатории медицинской биотехнологии НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. Материалы дссертационной работы доложены на двух российских конференциях (X Всероссийской научно-практической конференции «Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике» Москва, 20-21 марта 2014 г.; «II конгресс гематологов России», Москва, 17-19 апреля 2014 года) и двух международных конференциях (18th Congress of the European Hematology Association, Stockholm, June 13-16, 2013; 19th Congress of the European Hematology Association, Milan, June 12-15,2014., где один из тезисов был отмечен премией «travel grant»).

Публикации по теме диссертации

Материлы диссертации изложены в 14 работах, в том числе в 4 статья в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, собственных результатов, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 213 источников. Материалы диссертации изложены на 119 страницах машинописного текста и включают 3 рисунта, 8 таблиц и 9 диаграмм.

Материалы и методы исследования

Клеточные линии. В данной работе профиль экспрессии генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME был исследован в клеточных линиях К562, WI-38, mel Р, mel Si, mel Mtp, mel IL, mel Hn, mel Ibr и mel Kor.

Культивирование клеточных линий проводилось при 37°С в С02-инкубаторе в среде RPMI 1640, содержащей 10% телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1% HEPES и 100 мкг/мл ампициллина. Контроль числа клеток при подсчёте живых и мёртвых клеток в камере Гаряева после их окраски трипановым синим. Для дальнейшей работы с мРНК отбирались не менее 10 клеток каждой культуры.

Исследованные больные. В процессе работы были отобраны пробы крови, костного мозга и лимфатических узлов больных, страдающих от хронических и острых форм различных онкогематологических заболеваний. Среди них были больные с диагнозом: эритремия (п=22), эссенциальная тромбоцитемия (17),

7

хронический миелоидный лейкоз (XMJI) (95), острый промиелоцитарный лейкоз (ОПЛ) (п=90), диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ) (п=17), лимфома Ходжкина (ЛХ) (п=27) и фолликулярная лимфома (ФЛ) (п=22).

Общее количество больных составило 290, причём от некоторых из них материалы для исследования были получены как в дебюте заболевания, так и после достижения ремиссии или при прохождении мониторинга заболевания.

Для создания контрольной группы -была отобрана кровь 15 здоровых доноров.

30 больных с диагнозом острый промиелоцитарный лейкоз наблюдались нами с момента первичной постановки диагноза, оставшиеся 60 в момент начала работы уже находились в состоянии клинической ремиссии. Лечение всех пациентов проводилось согласно протоколу итальянских авторов AIDA.

Выделение РНК и синтез кДНК. Тотальная РНК из образцов крови и костного мозга была выделена при помощи набора реактивов «RNA-экстракт-1 » (ООО «ГеноТехнология», Россия). Этот же набор использовался для получения кДНК. Вся работа проводилось в полном согласии с инструкцией, предложенной разработчиком.

Постановка реакции обратной транскрипции. Проведение реакции количественной ПЦР проходило с использованием наборов реактивов «Онкоскрин-2-lQ», «Онкоскрин-2-20», «Онкоскрин-9<3» и «Онкоскрин-140» (ООО «ГеноТехнология», Россия) для определения уровней экспрессии генов PML/RARa изотипа bcrl, PML/RARa изотипа ЬсгЗ, PRAME и контрольного гена ABL соответственно. Для определения уровня экспрессии генов GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SPANXA1 и SSX1 использовался 2-кратный буфер для ПЦР в реальном времени (ООО «ГеноТехнология», Россия). Системы праймеров и зондов для оценки уровня экспрессии GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SPÄNXA1 и SSX1 были разработаны на основании данных по геномным последовательностям, предоставленным on-line ресурсом http://bIast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi. Синтез специфических праймеров и зондов был заказан в компании «ДНК-технология», Россия.

Статистический анализ данных. Для таких параметров, как пол, возраст, длительность заболевания и терапии, а так же измеренный уровень экспрессии гена, представлено вычисление медианного значения и интерквантильных интервалов. Анализ времени развития рецидива проводился по методу Каплан-Мейера. Для сравнения групп больных по профилям экспрессии РТГ, времени безрецидивной выживаемости и срока достижения ремиссии применялся критерий

Сравнение групп больных с разным диагнозом по такому признаку, как уровень экспрессии конкретного генов, применялся критерий Манна-Уитни. Критерий выбран в связи с тем, что в составе большинства групп было рассмотрено сопоставимое количество случаев. Результаты признавали статистически достоверными на уровне р < 0,05.

Все расчёты проводились в программе Statistica 8.0.

8

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ Особенности активности раково-тестикулярных генов в клеточных линиях К562, \VI-38 и семи линий меланомы. Каждая рассмотренная нами линия клеток обладала уникальным набором активных генов, кодирующих РТА.

В частности, в линии К562 (диагр. 1) экспрессировались все исследуемые РТГ. Поскольку данная линия является моделью властного криза ХМЛ, то не исключено, что при исследовании свежего материала, полученного от больных с данным диагнозом, можно будет наблюдать сходный профиль экспрессии РТГ.

10000%

1000%

100%

10%

1%

0%

Диаграмма 1. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры К562.

При этом, в клетках линии WI-38, являющейся моделью ткани лёгкого человеческого зародыша, экспорессируется меньше генов, и наблюдается меньший уровень их активности (диагр 2.). Данный результат продемонстрировал прежде всего работоспособность экспериментальной системы. Кроме того, наблюдение экспрессии генов не противоречит мировым данным о том, что активность РТГ характерна и для эмбриональных тканей.

Опубликованы данные, согласно которым уровень экспрессии генов, кодирующих РТА, коррелирует со степенью дифференцировки клеточной культуры, что возможно, связано с частотой митозов. Согласно данным И.Н. Михайловой и др., к низкодифференцированным морфологическим формам относятся линии mel Kor, mel Ibr и mel Mtp (диагр. 9, 8, 5). К умереннодифференцированным линиям относятся mel IL, mel Р и mel Нп (диагр. 6, 3, 7). Наконец, линия клеток mel Si классифицирована как высокодифференцированная культура (диагр. 4).

10000%

Диаграмма 2. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры \У138.

Высокий уровень экспрессии генов оказался характерным для двух низкодифференцированных и двух умереннодифференцированных линий. В то же время более низкий уровень экспрессии РТГ выявлен у низко-, умеренно- и высокодифференцированных линий. Следует отметить, что разделение на три группы по признаку уровня экспрессии и частоты активации РТГ оказался невозможным в силу статистической недостоверности полученных результатов.

' му / «

Диаграмма 3. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры ше1 Р.

ю

Диаграмма 4. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры mel Si

Диаграмма 5. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры mel Mtp.

Диаграмма 6. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры mel IL.

10000%

Диаграмма 7. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры mel Нп.

Диаграмма 8. Профиль экспрессии PIT в клетках культуры mel Ibr.

Диаграмма 9. Профиль экспрессии РТГ в клетках культуры те1 Ког.

Таким образом, мы получили данные о том, что для низкодифференцированных клеток меланомы характерен как высокий, так и более низкий уровень экспрессии РТГ. При этом у высокодифференцированной линии обнаружен достоверно более низкий уровень экспрессии РТГ, чем у низкодифференцированных линий.

Экспрессия раково-тестикулярных генов HAGE и SLLP1 у здоровых доноров и больных, страдающих от онкогематологических заболеваний. Два

раково-тестикулярных гена, HAGE и SLLP1, экспрессировались в клетках крови у всех 15 здоровых доноров (таблица 1). При этом никто из группы здоровых доноров не демонстрировал признаков онкогематологического заболевания. Можно сделать вывод о том, что экспрессия раково-тестикулярных генов HAGE и SLLP1 действительно характерна для генетически нормальных ядерных клеток, циркулирующих в кровеносной системе здорового человека.

Таблица 1. Экспрессия раково-тестикулярных генов в крови у здоровых доноров и у больных в дебюте хронических миелоприлиферативных заболеваний (хМПЗ) и хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ ХФ, без лечения).

♦Здесь н далее в: уровень экспрессии гена указан в % отностительно уровня экспрессии гена ABL.

Диагноз Здоровые доноры хМПЗ ХМЛ, ХФ, без лечения

Характеристика больных Количество больных, п 15 39 11

Из них мужчин, п (%) 7; (54%) 11; (27%) 7; (64%)

Возраст, годы, медиана (диапазон) 25; (19-45) 55; (31-79) 43; (36-65)

Гены SP 17 Ч%) - - -

GAGE! - - -

HAGE П(,%) 15 (100%) 2,92% 25 (63,4%) 1,67% 4 (36,4%) 1,41%

m-Eso-i n(;/o) - - -

MAGEAl n(J/o) - - -

SCP1 - - -

SEMGl П(,%) - - -

SLLP1 15; (100%) 0,62% 32 (80,5%) 0,12% 4 (36,4%) 0,15%

SPANXA1 П(„%) - - -

от n(;/o) - - -

FRAME n(;/o) - 4; (10%) 0,5; (0,1-13) 1;(9%) 5,5

Экспрессия раково-тестикулярных генов в клетках крови у больных в дебюте XMJI и Ph'-негативных хМПЗ. Предварительно у больных с диагнозом эритремия и эссенциальная тромбоцитемия была определена мутация JAK2V617F. Материалы, полученные от первичных больных с диагнозом хронический миелоидный лейкоз, были проверены на наличие экспрессии химерного гена BCR-ABL. Материалы, в которых не было выявлено мутация JAK2V617F или отсутствовал транскрипт гена BCR-ABL, из дальнейшего исследования были исключены. У двух первичных больных с диагнозом эритремия и двух больных с диагнозом эссенциальная тромбоцитемия мы наблюдали спонтанную экспрессию ещё одного РТГ - PRAME. Поскольку эритремия и эссенциальная тромбоцитемия, согласно современным представлениям, отнесены к так называемым Ph'-негативным хроническим миелопролиферативным заболеваниям (хМПЗ), в дальнейшем анализе они рассмотрены как одна группа (таблица 1).

Профили экспрессии РТГ в клетках крови у больных со впервые диагностированными хМПЗ и ХФ ХМЛ не отличаются друг от друга (р=0,199). Только у единичных представителей этих групп экспрессирутеся ген PRAME, причём на сопоставимом уровне относительно контрольного гена (р=0,001). Активность других рассматриваемых РТГ не выявлена.

Экспрессия раково-тестикулярных генов в крови и костном мозге больных хроническим миелоидным лейкозом, получающих терапию Иматинибом. У одного из 11 больных, находящихся в хронической фазе (ХФ) ХМЛ и получающих специфическую терапию, в крови обнаружена экспрессия гена SPANXA1. Ген PRAME экспрессировался с одинаковой частотой как у леченых, так и нелеченных больных (р=0,346).

В крови больных, находящихся в фазе акселерации (ФА) и бластном кризе (БК) ХМЛ, экспрессируется больше генов, чем при ХФ (достоверность отличий р=0,032 и р=0,048, соответственно). В частности, при ФА, кроме экспрессии SPANXA1 и PRAME, наблюдалась активность генов GAGE1, MAGEA1, SEMG1 и SSX1. При БК экспрессировались гены GAGE1, SEMG1, SSX1 и PRAME.

В крови пациентов, получающих лечение Иматинибом, отмечено увеличение уровня экспрессии PRAME в БК относительно ХФ (р=0,001) и ФА (р=0,048) (таб. 2).

В костном мозге больных в дебюте заболевания ХМЛ не обнаружено экспрессии каких-либо РТГ. Однако у леченных больных, находящихся в ХФ ХМЛ в костном мозге в единичных случаях экспрессируются гены NY-ESO-1 и SCP1, в ФА экспрессировались гены SEMG и SSX1, и в БК - GAGEL

Только один ген PRAME экспрессировался в клетках костного мозга леченных больных с диагнозом ХФ, ФА и БК ХМЛ. Наблюдаемые значения уровня экспрессии у больных в стадии БК были выше, чем при ХФ (р=0,06) и при ФА (р=0,026) (таб. 3).

Таблица 2. экспрессия PIT в крови больных хроническим миелоидньш лейкозом.

ХМЛ,ХФ ХМЛ, ФА ХМЛ, БК

а М Количество больных, п 11 27 ' 21

а о ю Из них мужчин, п (%) 7; (64%) 10; (37%) 9; (43%)

¡5 О Возраст, годы, медиана (диапазон) 43; (36-65) 50; (23-66) 51; (27-78)

Он ё Длительность заболевания, мес., медиана (диапазон) - 66; (11-195) 57; (12-168)

X Терапия Гливеком, мес., медиана (диапазон) - 61; (10-74) 53;(13-81)

GAGE1 п(%) * - - 4; (19%) 0,3; (0,1-18)

NY-ESO-1 П(%) * - - -

MAGEA1 п(%) * - - 1; (5%) 0,01

? SCP1 п(%) * - - -

О 1-1 SEMG1 п(%) * - - 5; (27%) 0,7; (0,3-1,3)

SPANXA1 п(%) * - 1; (4%) 0,15 1; (5%) 0,01

SSX1 п(%) * - - 3; (14%) 0,3; (0,1-0,4)

PRAME п(%) * i;(9%) 5,5 2; (7%) 43; (38-48) 6; (28%) 3; (0,3-51)

Таблица 3. Экспрессия РТГ в костном мозге больных ХМЛ.

ХМЛ.ХФ, без лечения ХМЛ,ХФ ХМЛ, ФА ХМЛ, БК

Количество больных, п 5 10 6 5

£ о ко Из них мужчин, п (%) 3; (60%) 6; (60%) 4; (67%) 3; (60%)

и Е о Возраст, годы, медиана (диапазон) 62; (33-77) 56; (23-81) 46; (32-50) 53; (36-65)

& и Длительность заболевания, мес., медиана (диапазон) - 5В; (14-156) 63; (29-110) 69; (14-204)

& X Терапия Гливеком, мес., медиана (диапазон) - 55; (1295) 44; (9-50) 59; (9103)

<24 п(%) * - - - 1; (20%) 0,1

п(%) * - 1; (10%) 35,36

ШвЕА1 П(%) * - " ; _

БСР1 П(%) * - 1; (Ю%) 0,14 ~

5ЕМЫ п(%) * - - 2; (33%) 0,5(0,15-1)

ЯРАЮСА! п(%) * - - _

55X2 п(%) * - - 1; (17%) ,03

РЯАМЕ п(%) * 3; (30%) 27; (21-51) 5; (83%) 0,2; (0,1-3,) 4; (80%) 36; (7-81)

Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных острым промиелоцЕтарным лейкозом. В костном мозге у каждого из 30 пациентов ОПЛ, ещё не получивших специфического лечения, были обнаружены транскрипты химерного гена PML/RARa и мРНК гена PRAME (рис. 1). Среднемедианный уровень экспрессии PRAME для больных, имеющих перестройку в точке bcrl, составил 2,9% (при наблюдаемых значениях от 0,001% до 200%). Для пациентов с перестройкой ЬсгЗ медиана уровня экспрессии гена PRAME составила 48,4% (разброс значений от 0,5% до 460%). Ни одна проба клеток костного мозга, полученная от пациентов в дебюте заболевания, не содержала мРНК генов GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD. SCP1, SEMG1 SPANXA1 и SSX1. Начиная с момента установки диагноза, в течение 18 месяцев проводилось наблюдение за больными. На основании соотношения уровней экспрессии генов PRAME и изотипов bcrl и ЬсгЗ PML-RARa выделено две группы пациентов: субгруппы с низким и высоким показателем экспрессии гена PRAME (PRAME/PML-RARa < > 0,05) (р=0,003). В качестве граничного значения мы выбрали уровень соотношения равным 0,05, и разделили всех пациентов на четыре субгруппы (рис. 1). При этом у больных, до начала специфической терапии имеющих очень низкий уровень экспрессии гена PRAME относительно PML/RARa, с высокой частотой наблюдалось развитие раннего рецидива (рис 2.).

PRAME I PML-RARa (bert >

PRAME I PML-RARa (Ьс?3)

550%

- зоо%

о 450%

ъ «Юй

350%

5 300%

X 250%

1 200%

§■ 150»

ё 100%

1 50%

5 О

Я"

275% 250% 225% 200SS 175» 150% 125% 100% 75% 50% 25% 0

I

Уровень зксфесснк PML-RARc.

Уровень эксгресаш PRAME.

Рис. 1. Наблюдаемые соотношения уровней экспрессии гена PRAME и транскриптов гена PML/RARa.

Таким образом, низкий уровень экспрессии PRAME является неблагоприятным признаком у первичных ЬсгЗ-положительных больных ОПЛ.

Транскриггг bcrl

Транскрипт ЬсгЗ

OiS -0,60,40,2 -

PRAME/P-Ra(bai)>0,05;n=4

In-i

PRAME/P-RCI(bCrl) < 0,05; n = 12

1,00,80,60,40,20

---,_.

PRAME/P-Ra(bcr3) >0,05

PRAME/P-Ra(bcr3) <0,

:0,05 n=6 •

3 6 9 12 15 1« 21 Месяцы

9

Месяцы

1 I i Г 12 15 18 21

Рис. 2. Время выживаемости без рецидива у больных ОПЛ в зависимости от соотношения между уровнем экспрессии генов FRAME и изотипов bcrl и ЬсгЗ PML-RARa.

Таблица 4. Профиль экспрессии РТГ у первичных больных с диагнозом диффузная В-крупноклеточная лимфома.

§ Исследованный материал Кровь Костный мозг

11 Количество больных, п 17 12

s а у С Й 10 Из них мужчин, п (%) 7; (41%) 5; (42)

8-X Возраст, годы, медиана (диапазон) 52; (21-77) 50 (21-75)

GAGE1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 3; (17%) 2,52% 2; (16%) 1,36

HAGE Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 13; (76%) 1,67% 11; (96%) 2,86 %

NY-ESO-1 Обнаружен в труппе, п (%) Уровень экспрессии* 1; (6%) 1,1 % .

SCP1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* " 1; (8,4%) 0,04%

Гены SEMG1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 4; (24%) 3,55% 2; (16%) 19%

SLLP1 Обнаружен в группе, п (%) Урозень экспрессии* 8; (47%) 0,78% 6; (50%) 0,33%

SPANXA1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* ' 3; (25%) 0,29%

SSX1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 3; (18%) 0,064% "

PJRAME Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 1; (6%) 65% 2; (16%) 4,56%

Прогностическая значимось уровня экспрессии гена HAGE в дебюте диффузной В-крупноклеточной лпмфомы. Были изученны данные о таких исходах лечения, как достижение полной ремиссии, что классифицировано нами, как благоприятный исход, и достижение частичной ремиссии, либо смерть больного во время проведения курса лечения, что рассматривалось как неблагоприятный исход.

Связи профиля экспрессии РТГ в крови больных в момент постановки диагноза на успех проведенной терапии не было обнаружено.

Единственным признаком, связанным с исходом заболевания, является уровень экспрессии гена HAGE. Так, неблаговриятный исход наблюдался у больных, имеющих относительно высокий уровень экспрессии РТГ HAGE в клетках костного мозга. Среднемедианный уровень экспрессии у таких больных (п=7) составляет 10,9% относительно уровня экспрессии гена АЫ. У больных, благополучно достигших полной ремиссии (п=5), уровень экспрессии РТГ HAGE в клетках костного мозга составлял только 0.69%, достоверность различий была определена по критерию Манну-Уитни (р=0,093). Этот параметр оказался независимым от возраста и проводимой терапии.

Таким образом, мы показали, что высокий уровень экспрессии гена HAGE в костном мозге больных со впервые установленным диагнозом диффузная В-крупноклеточная лимфома связан с меньшей эффективностью терапии.

Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных с диагнозом лимфома Ходжкина. Всего исследовано 27 человек, среди которых было 15 женщин и 12 мужчин. Медиана возраста составляет 36 лет. От всех больных перед началом лечения были отобраны лимфатические узлы, и образцы периферической крови. Все больные получали терапию согласно протоколу R-ВЕАСОРР-14.

В образцах крови, так же, как и в лимфоузлах, полученных от тех же больных, наблюдалась экспрессия GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME, но при этом ни в одном случае не экспрессировался ген MAGEA1. Так же, как в лимфатических узлах, уровни экспрессии были различны, и наблюдались разннобразные сочетания экспрессирующихся РТГ. При этом у одного больного в клетках крови ко-экспрессировалось семь генов (табл. 5). Прогностическая значимость экспрессии того или иного РТГ (или групп РТГ) осталась неясной, так как профиль экспрессии РТГ был индивидуальным у каждого больного.

Проводимое лечение не всегда было результативным. В некоторых случаях после 6 курсов по программе R-BEACOPP-14 достигалась только частичная ремиссия. Для исследования были доступны образцы крови семи больных, достигших ремиссии.

Таблица 5. Профиль экспрессии РТГ у больных с диагнозом с диагнозом лимфома Ходжкина

а Исследованный материал Кровь Лимфатический узел

я н ^ s 3 Количество больных, п 27 27

И Ц S о id VO в- Из них мужчин, п (%) 12; (44%) 12; (44%)

Й Возраст, годы, медиана (диапазон) 36; (19-72) 36; (19-72)

GAGE1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 2; (7%) 1% 2; (7%) 1,2%

HAGE Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 24; (88%) 4,68% 26; (96%) 2,64 %

NY-ESO-1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 6; (22%) 0,2 % 6; (22%) 6,4 %

MAGEA1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* - 2; (7%) 62%

PASD Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 2; (7%) 0,25% 4; (15%) 0,7%

Гены SCP1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* - 1; (8,4%) 0,12%

SEMG1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 12; (44%) 11% 5; (27%) 2,3%

SLLP1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 13; (48%) 0,66% 12; (44%) 0,74 %

SPANXA1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 3; (11%) 1,7% 4; (15%) 2,45%

SSX1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 6; (22%) 0,1% 2; (7%) 20%

PRAME Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 4; (15%) 0,06% 17; (63%) 12,2%

У шестерых больных, после проведения шести курсов химиотерапии, была достигнута полная ремиссия, при которой мы не обнаружили экспрессии РТГ, наблюдаемых до проведения терапии. Таким образом, нам удалось сделать независимое подтверждение элиминации трансформированных клеток у этих больных.

Седьмой больной достиг полной ремиссии после четырёх проведённых курсов полихимиотерапии. В дебюте у этого больного в крови наблюдалась экспрессия гена HAGE на уровне 1,9% относительно гена АЫ (что на 30% выше уровня, характерного для здоровых доноров), и гена NY-ESO-1 на уровне 0,012% относительно АЫ. После диагностирования ремиссии в крови этого больного экспрессировались гены SEMG1, SSX1 и PRAME (их уровни составляли 0,05%,

21

566% и 0,03% относительно АЫ, соответственно), и не наблюдалась экспрессия генов HAGE и SLLP1. Таким образом, несмотря на достигнутую гематологическую ремиссию, профиль экспрессии РТГ в крови больного остался не похожим на профиль экспрессии, наблюдаемый в крови здорового донора.

Экспрессия раксво-тестикулярных генов у больных с диагнозом фолликулярная лимфома. В образцах костного мозга, так же, как и в лимфоузлах, полученных от тех же больных, наблюдалась экспрессия GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME, но при этом ни в одном случае не экспрессировался ген MAGEA1 (таблица 6).

Таблица 6. Экспрессия РТГ у первичных больных с диагнозом фолликулярная лимфома.__

S э Исследованный материал Кровь Костный мозг Лимф, узел

В Й s ¡S й- 5 Количество больных, п 22 22 22

§ 3 Из них мужчин, п (%) 10; (45%) 10; (45%) 10; (45%)

§* X Возраст, годы, медиана (диапазон) 57; (38-75) 57; (38-75) 57; (38-75)

GAGE1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 2; (9%) 1,4% - 4; (18%) 0,4%

HAGE Обнаружен в труппе, п (%) Уровень экспрессии* 22; (100%) 3,7% 20; (90%) 2,3% 19; (86%) 1,4%

NY-ESO-1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 2; (9%) 1,6% 2; (9%) 1,4% -

MAGEA1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* - - 1; (4,5%) 250%

PASD Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* - 1;(4,5%) 0,02% -

Гены SCP1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 1; (4,5%) 28% 3; (13%) 0,27% 3; (13%) 0,4%

SEMG1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 9; (40%) 14% 7; (32%) 11% 8; (36%) 8,4%

SLLP1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 13; (59%) 0,24% 4; (18%) 0,7% 6; (27%) 0,11%

SPANXA1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* - 5; (23%) 1,7% 7; (32%) 0,15%

SSX1 Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 1; (4,5%) 0,02% 3; (13%) 0,07% -

PRAME Обнаружен в группе, п (%) Уровень экспрессии* 3; (13%) 0,6% 10; (45%) 0,45% 14; (64%) 8%

Мы выяснили, что при фолликулярной лимфоме прогностическое значение имеет экспрессия гена FRAME в образцах лимфатических узлов, поражённых заболеванием. Высокий уровень экспрессии РТГ в дебюте заболевания в

дальнейшем сопровождался меньшей эффективностью применяемой терапии. Установлена связь экспрессии гена PRAME в клетках поражённых лимфатических узлов с ответом на терапию. При уровне экспрессии гена FRAME в лифматических узлах на уровне ниже 6% относительно гена АЫ, в основном отмечался хороший клинический ответ, и достигалась полная ремиссия (р=0,0041, согласно критерию Манна-Уитни).

Для экспрессии остальных исследованных генов удалось установить только диагностическое значение. При диагностике клинической ремиссии в клетках крови больных мы наблюдали экспрессию гена HAGE, и не детектировали экспрессию других генов. У этих же больных до начала терапии в исследованных образцах наблюдалась активность генов GAGE], SEMG1, и FRAME. Таким образом, если до лечения в крови больных находились клетки, экспрессирующие данные гены, то после достижения ремиссии, подтверждённой клиницистами, мы показали исчезновение этих клеток.

ВЫВОДЫ

1. Обнаружены различия в профилях экспрессии генов GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 ъ PRAME в клеточных линиях К562, WI-38, mel Р, mel Si, mel Mtp, mel IL, mel Hn, mel Ibr и mel Kor.

2. Обнаружены существенные различия профилей экспрессии генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME между разными видами гемобластозов, при этом опухолевая прогрессия сопровождается увеличением числа и интенсивности экспрессии данных генов.

3. Низкий уровень экспрессии гена FRAME в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза увеличивает вероятность раннего развития рецидива (р=0,0231).

4. Активация экспрессии генов GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX, a также усиление уровня экспрессии PRAME происходит при прогрессии хронического миелолейкоза и при переходе этого заболевания из хроничекой фазы в фазу акселерации (р=0,032) и бластного криза (р=0,048).

5. Неблагоприятным фактором диффузной В-крупноклеточной лимфомы является гиперэкспрессия гена HAGE в клетках костного мозга в дебюте этого заболевания (р=0,093), арезистеностью фолликулярной лимфомы к проводимой химиотерапии (р=0,0041) сопроваждается гиперэкспрессией гена PRAME в лимфатических узлах.

6. Определение уровня экспрессии РТГ GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME можно использовать для мониторинга минимальной остаточной болезни гемобластозов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ В ЖУРНАЛАХ, РЕКОМЕНДОВАННЫХ ВАК РФ

1. Мисюрин, В А. Профили экспрессии раково-тестикулярных генов в клеточных линиях меланомы / В А. Мисюрин, А.В. Мисюрин, А.Е. Лукина, А.А. Л.А. Кругов, Кесаева, И.В. Солдатова, Т.В. Ахлынина, Н.А. Лыжко, О.С. Бурова, Л.Ф. Морозова, И.Н. Михайлова, МЛ. Барышникова, А.Ю. Барышников // Биологические мембраны. — 2014. — Т.31. —№2. — С.104-109.

2. Мисюрин, В.А. Особенности соотношения уровней экспрессии генов PRAME и PML/RARa в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза / В.А. Мисюрин, А.Е. Лукина, А.В. Мисюрин, Л.А. Кесаева, Е.Н. Мисюрина, Ю.П. Финашугина, И.Н. Солдатова, А.А. Кругов, И.В. Санникова, М.Н. Ротанова, В.А. Лапин, О.А. Рукавицын, С.В. Шаманский, Н.К. Хуажева, В.Л. Иванова, Н.В. Архипова, Ю.А. Лесная, О.В. Шитова, Е.А. Борисенкова, Т.М. Толстокорая, Е.Н. Голубева, Н.А. Бычкова, Н.А. Вопшшна, И.И. Гущанская, Г.Н. Михайлова, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. — 2014. — Т. 13. — №. 1. — С. 9-16.

3. Мисюрин, В.А. Новые маркеры прогрессирования хронического миелолейкоза / В .А. Мисюрин, А.В. Мисюрин, Л.А. Кесаева, Ю.П. Финашугина, Е.Н. Мисюрина, И.Н. Солдатова, А.А. Кругов, Н.А. Лыжко, Т.В. Ахлынина, А.Е. Лукина, Т.Н. Колошейнова, Н.В. Новицкая, Е.Г. Аршанская, Е.Г. Овсянникова, Р.А. Голубенко, В.А. Лапин, Т.И. Поспелова, В.А. Тумаков, А.Ю. Барышников // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. — 2014. — Т.7. — №2. — С.206-212.

4. Мисюрин, В.А. Х-хромосомные раково-тестикулярные гены / В .А. Мисюрин // Российский биотерапевтический журнал. —2014. — Т.13. —№2. — С.3-9.

ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ

1. Misyurin, V. Expression pattern of cancer-testis antigens SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESOl, MAGE1, PASD1, SCP, SEMG, SLLPI, SPANXA, SSX1 and PRAME in CML / V. Misyurin, A. Misyurin, A. Krutov, L. Kesaeva, I. Soldatova, E. Misyurina, A. Mastchan, S. Rumyantsev, A. Rumyantsev, A. Baryshnikov // Haematologica. 18th Congress of the European Hematology Association, Stockholm, Sweden, June 13-16, 2013. Abstract book. Abstract B1400.

2. Misyurin, V. Comparison of the expression cancer-testes (CT) antigen profiles in CML and polycythemia vera (PV) / V. Misyurin, A. Misyurin, M. Sokolova, A. Krutov, L. Kesaeva, I. Soldatova, E. Misyurina, A. Mastchan, S. Rumyantsev, A. Rumyantsev, A. Baryshnikov // Haematologica. 18th Congress of the European Hematology Association, Stockholm, Sweden, June 13-16,2013. Abstract book. Abstract B1567.

3. Misyurin, V. High expression level of PRAME gene is favorable prognostic factor in acute promyelocytic leukemia patients / V, Misyurin, A. Misyurin, L. Kesaeva, Y. Finashutina, I. Soldatova, A. Krutov, E. Misyurina, A. Lukina, I. Sannikova, M. Rotanova, V. Lapin, O. Rukavitsyn, S. Shamanskiy, N. Huazheva, V. Ivanova, N. Arhipova, Y. Lesnaya, O. Shitova, E. Borisenkova, T. Tolstokoraya, E. Golubeva, N. Bychkova, N. Vopilina, L Guschanskaya,

G. Mihaylova, A. Baryshnikov // Haematologica. 19th Congress of the European Hematology Association, Milan, Italy, June 12-15,2014. Abstract book. Abstract P170.

4. Misyurin, V. An additional point to confirm a remission in Hodgkin's lymphoma / V. Misyurin, A. Misyurin, A. Lukina, D. Marin, N. Sharkunov, Б. Dubrovin, L. Piastinina, S. Kravchenko, A. Baryshnikov // Haematologica. 19th Congress of the European Hematology Association, Milan, Italy, June 12-15,2014. Abstract book. Abstract PB1755.

5. Misyurin, V. New molecular markers of CML progression / V. Misyurin, A. Misyurin, L. Kesaeva, Y. Finashutina, I. Soldatova, A. Krutov, E. Misyurina, N. Lyzhko, T. Akhlynina, A. Lukina, T. Kolosheinova, N. Novitskaya, E. Arshanskaya, E. Ovsyannikova, R. Golubenko, V. Lapin, T. Pospelova, A. Baryshnikov // Haematologica. 19th Congress of the European Hematology Association, Milan, Italy, June 12-15,2014. Abstract book. Abstract P277.

6. Мисюрин, B.A. Особенности соотношения уровней экспрессии генов PRAME и PML/RARa в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза / В.А. Мисюрин, А.Е. Лукина, A.B. Мисюрин, Л.А. Кесаева, E.H. Мисюрина, Ю.П. Финашугина, И.Н. Солдатова, A.A. Кругов, А.Ю. Барышникоз // Материалы X Всероссийской научно-практической конференции «Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике». Москва, 20-21 марта 2014 г. Российский биотерапевтический журнал. 2014, Т. 13, №1, С. 112.

7. Мисюрин, В.А. Различия в частоте развития рецидива острого промиелоцитарного лейкоза в зависимости от уровня экспрессии гена PRAME / В.А. Мисюрин, А.Е. Лукина, Л.А. Кесаева, A.B. Мисюрин, В.А. Лапин, O.A. Рукавицын, Н.В. Архипова, Е.А. Борисенкова, H.A. Вопшшна, И.И. Гущанская, А.Ю. Барышников // Материалы П конгресса гематологов России, Москва, 17-19 апреля 2014 года. Гематология и трансфузиология. 2014. Т1. приложение№1. С51.

8. Мисюрин, В.А. Сходство профилей экспрессии раково-тестикулярных генов при хронических миелопролиферативных заболеваниях и хроническом миелоидном лейкозе / В.А. Мисюрин, A.B. Мисюрин, Л.А. Кесаева, Ю.П. Финашугина, E.H. Мисюрина, И.Н. Солдатова, A.A. Кругов, H.A. Лыжко, Т.В. Ахлынина, А.Е. Лукина, А.Ю. Барышников // Материалы П конгресса гематологов России, Москва, 17-19 апреля 2014 года. Гематология и трансфузиология. 2014. Т1. приложение №1. С51.

9. Мисюрин, В.А. Изменение профиля экспрессии канцер-тестис генов в крови при прогрессии хронического миелоидного лейкоза / В.А. Мисюрин, A.B. Мисюрин, Л.А. Кесаева, Ю.П. Финашугина, E.H. Мисюрина, И.Н. Солдатова, A.A. Кругов, H.A. Лыжко, Т.В. Ахлынина, А.Е. Лукина, А.Ю. Барышников // Материалы II конгресса гематологов России, Москва, 17-19 апреля 2014 года. Гематология и трансфузиология. 2014. Т1. приложение №1. С52.

10. Мисюрин, В.А. Особенности экспрессии раково-тестикулярных генов в клетках костного мозга больных хроническим миелоидным лейкозом / В.А. Мисюрин, A.B. Мисюрин, Л.А. Кесаева, Ю.П. Финашугина, E.H. Мисюрина, И.Н. Солдатова, A.A. Кругов, H.A. Лыжко, Т.В. Ахлынина, А.Е. Лукина, А.Ю. Барышников // Материалы П конгресса гематологов России, Москва, 17-19 апреля 2014 года. Гематология и трансфузиология. 2014. Т1. приложение №1. С52.

Подписано в печать 19.09.14 Формат 60x84/16. Бумага офисная «БуеЬэСору». Тираж 100 экз. Заказ № 552 Отпечатано на участке множительной техники ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н.Бпохина» 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24