Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование новых производных индаедиона для выявления потенциальных антикоагулянтов непрямого действия

> "

- МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ <£> ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

АРКАДЬЕВА Галина Владимировна

ИССЛЕДОВАНИЕ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ

ИНДАНДИОНА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ АНТИКОАГУЛЯНТОВ НЕПРЯМОГО ДЕЙСТВИЯ

14.00.25— Фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НАУЧНЫР1 РУКОВОДИТЕЛЬ

академик МАИ, профессор Юрий Федорович Крылов

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор А. Г. Рудаков доктор медицинских наук, профессор В. С. Ефимов

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Российский университет дружбы народов

З^иа^а диссертации состоится « ¥ » г.

в. 7.7... часов на заседании диссертационного совета № Д.084.08.01 при Московском медицинском стоматологическом институте по адресу: 103005, Москва, ул. Долгоруковская, дом 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института по адресу: 125206, Москва, ул. Вучетича, дом 10а.

Автореферат разослан « У -»г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор " Л. Л. К и р и ч е н к о

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

АРКАДЬЕВА Галина Владимировна

ИССЛЕДОВАНИЕ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ

ИНДАНДИОНА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ АНТИКОАГУЛЯНТОВ НЕПРЯМОГО ДЕЙСТВИЯ

14.00.25— Фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

академик МАИ, профессор Юрий Федорович Крылов

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор А. Г. Рудаков доктор медицинских наук, профессор В. С. Ефимов

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Российский университет дружбы народов

Защита диссертации состоится « ».......1995 г.

в.......часов на заседании диссертационного совета

№ Д.084.08.01 при Московском медицинском стоматологическом институте по адресу: 103005, Москва, ул. Долгоруковская, дом 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института по адресу. 125206, Москва, ул. Вучетича, дом 10а.

Автореферат разослан « ».......1995 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор " Л. Л. Кириченко

ОБИ'АЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Проблема гро{илактики и лечения тромбозов продоляает оставаться актуальной для современной медицина. Б связи с этим поиск и изучение новых лекарственных средств для антикоагулянтной терапии является важной задачей фармакологии. Лекарственное воздействие на систему гемостаза представляет собой реальный путь снижения числа сердечно-сосудистых заболеваний и смертности от тромбоэмбо-лических осложнений (Е.Н.Чазов, К.М.Лакнн, 1977 г., К.К.Ла-кин, 1984 г. и др)'.

Б настоящее время для продол'л'.тельного снижения свертывания крови г.спользуот антикоагулянты непрямого действия. Все эти препараты снижают свертывание крови только после введения в организм; Ln- ^titO эффекта они ве даст. Как непрямые антикоагулянты применяют производные 4-оксикумарина -неодикумарин, $епро.\:арон, нитро{арин, синкумар у др. Менее широкое распространение при лечении трэмбээмболических заболеваний получили антикоагулянты из группы инданлгонг, имеющие некоторые особенности действия кгк по выраженности, так г. го продолжительности его. В нааеГ стране в госреестре имеется лишь |еннлин - 2-]ешлиндандпон-1,3.

Изучение новых производных индандиона с целью выявления антикоагулянтов представляется перспективным. Б Московском химико-технологическом институте им. Д.И.Менделеева Т.I'.Смирновой и сотрудниками были синтезированы новые производные индандиона, которые изучены в данной работе.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение влияния новых производных индандиона на свертываемость

крови. Были поставлена следущие задачи:

1. Изучить антикоагулянтную эктгеность производных кндандиона.

2. Сравнить соединения, обладающие значительной анти-коагулянтной активностью с известным лекарственным препаратов - фенилином.

3. Быявить соединения, перспективные для дальнейших исследования по программе доклинических испытаний.

Научная новизна. Б ходе исследований изучено 3? аналогов 3-замещенных индандиона, часть из которых представляет соединения, внл:оча:ощие наряду с индандионом и 4-оксикумари-новый (тиокумариновый)цикл. В ходе проведенных исследований были выявлены соединения, обладающие высокой и средней анти-коагулянтной активностью и не обладающие таковой. Степень гипокоагуляции и длительность действия проявляли четкую зависимость от дозы. Анализ развития антикоагулянтного эффекта при введении высокоактивных соединений индандиона в дозах 2, 5 и 10 мг/кг в желудок интактных животных, показал, что по сравнению с фенилином действие развивается раньше и быстрее наступает его максимум.

Данные, полученные в результате исследования использованы в направленном синтезе новых производных индандиона,часть из которых мокет сказаться перспективной для профилактики и лечения тромбоэмболических заболеваний.

Три наиболее активных вещества из числа изученных нами соединений рекомендованы для дальнейших доклинических исследований с целью подготовки материалов "по новому лекарственному средству" и их представлению в Млнздравмедпром России.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Результаты фармакологического исследования 37 новых производных пндандгона.

- Три новых соединения по активности не уступают фени-лину, (в некоторых тестах - превосходят его), в связи с чем перспективны для дальнейшего изучения по параметрам безопасности.

Апробация работы. Основное содержание диссертации доложено на У съезде фармакологов (Минск, 1989 г.), У1 съезде фармакологов Украинской ССР (Харьков, 1990 г.), конференции молодых ученых МГ,!СИ км. Н.А.Семашко (1990 г.), расширенном заседании кафедры фармакологии и кафедры терапии СУВ ММСИ км. К.А.Семашко (1994 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 196 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, экспериментальной части, заключеш'я, выводов и указателя литературы, включающего 155 источников (103 на русском и 52 на иностранных языках). Работа иллюстрирована 40 таблицам!', и 31 рисункам!».

Материалы и методы исследования. Исследуемые соединения синтезированы в Московском химико-технологическом институте v.u. Д.И.Менделеева, имеют следующие структуры и шифры:

3-ЛС-(индан-1,3-дион-2-ил)-4-нитробензил/-4-оксикума-рин - AT-IB; Ъ-Ц.-(индан-1,3-дион-2-кл)-4-метилбензил'-4-01:си-кумарин - AT-I9; 2-/JL-(индан-1,2-д1:он-2-ил)-4-метокснбен-зил/-4-оксикумарин - АТ-20; 3-/^-(инлан-1,3-дион-2-гл)-3-хлорбензил/-4-окс1:кумарин - AT-2I; 3-/^-(индан-1,3-дион-2-нл)-2,4-дихлорбензилМ-оксикумаркн - АТ-22; 3-/^-(иидан-1,3-дгоя-

2-ил)-4-Зрог,:Зензил/-4-оксику.иар1'н - АТ-23; 3-/»£-(индан-1,3-дкон-2-1и1)-2-фгорбзнзил/-4-окскк1'маргн - АТ-24; (индан-1,3-дион-2-ил)-2,4-дпметокси(5ензил/-4-оксккумарин -АТ-25; 3-/е£-(индан-1,3-д1'он-2-1!л)-2-бром,4-нитро,5ензг.л/-4-оксккумарин — АТ-26; 3-/^-( индан-1,3-дион-2-ил)-2-метокси-Зензил)-4-окскку1.:арин - АТ-27; 3-/«£-(индан-1,3-даон-2-кл)-4-этоксис$енз1!л/-4-окоукунарин - АТ-28; Ъ-/аС (индан-1,3-дион-

2-ил)-4-хлор<5ензил£-1-тио-4-оксикумарин - АТ-29; 3-/вС (индан-1,3-дион-2-ил)-3-броы:5ензпл/-1-тио-4-оксикумарин - АТ-30;

3-/^-(индан-1,3-дкон-2-ил)-2-мегоксибензхл/-1-Т1ю-4-оксгку-марин - АТ-32; индан-1,3-днон-2-ил)-2-:5ром, 4-штро-сЗекзкл/-1-тио-4-окс1;кумаркн - АТ-33; Анилид 2-(4-метокск$е-нкл) индан-1,3-дион-2-ил-уксусноЯ кислоты - АТ-36; Анилид 2-(3,4-диметоксифенил) индан-1,3-дион-2-кл-уксусной кислоты - АТ-37; Анилид 2-(3-эгокси-4-метоксифенил) индан-1,3-ди-он-2-кл-уксусной кислоты - АТ-28; 4-метоксианклг.д 2-фенилик-дан-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-39; З-метиланилид 2--£енилиндан-1,3-дион-2-ш1-уксусной кислоты - АТ-40; 4-кетил-анплид 2-(4-амилокси$енил) пндан-1,3-дион-2-ил-уксусноИ кисло ты - АТ-41; Амид 342,4-диметокс1:$еш1л) кндак-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-42; Амид 2-(4-дпметилампнобензил) ин-дан^Г,3-дион-3доьуксусной кислоты - АТ-43; Анилид 2-(4-нитро-бензил) индан-1,3-днон-2-ил-уксусной кислоты - АТ-44; 4-ме-тиланилид 2-(4-метокси$ен1!л) индан-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-45; Анилид 2-(4-этоксифенил) индан-1,2-дион-2-нл-уксусной кислоты - АТ-54; Амид 2-(3-этокси$енил) индак-I,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-55; Амид 2-(4-у.етилфенил) г.ндан-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-56; Амид 2-(3-эток-

си-4-метоксифенил) нндан-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты -АТ-57; 2(3,4-.ши,'.етокси5ензплен) индан-1,3-дион - АТ-58; 2(4-метоксибензилен) индан-1,3-диок - АТ-59; 2(4-диыетгл-амикобензил) индэн-1,3-д1:он - АТ-61; Анилид 2-(4-диметил-аминофенил) нндак-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-62; Анилид 2-(4-бромбензил) кндан-1,3-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-бЗ; Амид 2-(фенялиндан-1,3)-дион-2-ил-уксусной кислоты - АТ-65; 4 метоксиакилпд 2-(4-бромфенил) индан-1,3-диок-2-ил-уксуской кислоты - АТ-66; 4-этоксианилид 2-фенплиндан-1,3-дион-2-ил-уксусноГ1 кислоты - АТ-68.

Из 37 соединений 15 соединений представляют из себя ко-валентносвязанные индандионовые и кумариновые структуры; четыре из них содержат вместо кумаринового ядра - тиокумарин. Остальные вещества являются 3-замещенными индандиона, которые содержат апетанплиды и оксиалкилы при бензольном кольпе второго заместителя. Эффекты вышеперечисленных соединений сравнивали с таковыми фенилина - 2-фенилинландион-1,3.

Гее Еецества растворяются в апетоне, хлороформе, 2^-вод-ном растворе едкого натра. Ограниченно растворяются в этиловом и изопропиловом спиртах.

Антикоагулянтную активность соединений изучали на 570 кроликах породы "шиншилла", обоего гола, массой 2,С-3,5 кг. Вещества вводились однократно в келудок в дозах 2, 5 и 10 мг/кг. Кровь для исследования брали из краевой вены уха. Пробы крови забирались до введения исследуемых веществ,через 12 часов после него и далее кагдые 24 часа до возвращения изучаемых показателей к исходному уровню.

Использованы следующие методы:

1. Определение тромбопластинового времени по Квику.

2. Определение времени рекальцнфикации плазмы.

3. Определение толерантности крсви к гепарину.

4. Графическая регистрация гемокоагуляиии (тромбоэласто-графия).

Полученные данные обрабатывались на ЗБГЛ IBM - AT/PS методами вариационной статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе с целью выявления новых антикоагулянтов непрямого действия проводилось сравнительное изучение 37 впервые синтезированных производных индандиона. Выполненная работа является фрагментом комплексных исследований, проводимых кафедрой фармакологии ММСИ ум. Н.А.Семашко и Московским химико-технологическим институтом им. Д.Н.Менделеева.

Влияние соединений на свертываемость крови сопоставлено с таковши фенилина - известным лекарственным средством.

В ходе проведенных исследований была выявлена зависимость мезду вводимой дозой и выракенностью антикоагулянтного эффекта. Выбор доз основан на материалах экспериментального и клинического изучения фемшина (Л.Л.Кириченко,1988 г., К.М.Ла-кин, 1984 г. и др., Д.Д.Машковский.1993 г. и др.). Изучаемые вещества вводили в эквимолекулярных фенилину дозах.

Установлено, что соединение AT-I8 значимо влияло на свертываемость крови (рис.I). Б дозах 2, 5 и 1С мг/кг увеличивало временные параметры развития эффекта "R" - время реакции и "К + К" - константы коагуляции в 1,5; 1,7; 1,7.и 1,3; 1,5; 1,4 соответственно через 36 часов после введения.

к £ (и

е-

<и

о «

□

а: я н о а

§ £ о к

£

ш

к

&

>0 «=; 0} ж ш р.

£ Р) <0 го р.ч РЧ с.

200 150 100 50

200 150 100 50 0

12 24 36 48

72 96 120 Время в часах

--- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

----г 10 мг/кг

12 24 36 48

96

120

к и

о &

л н

о о ас н

а р. и

я р.

го С

О)

е- х

200 150 100 50 0

Время в часах

--- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

10 мг/кг

12 24 36 48

72

96

120

Рис. I.

Время в часах

Изменение тромбопласткнового времени по Квику (I), времени рекальиификаиии глаэмц (П) и толерантности крови к гепарину (Ш) при введении вещества АТ-1В в дозах 2, 5 и 10 мг/кг, вира-ценной в процентах от исходного, принятого за 100$.

2

Причем при дозе 5 мг/кг показатели ТЭГ "Я" и "й + К" уже к 12 часам увеличивались в 1,2 раза. Возвращение показателей ТЭГ в дозе 2 мг/кг зарегистрировано к 96 часу, а при дозах 5 и 10 мг/кг-к 120 часу, хотя гкпокоагуляпия сохранялась до 4-х суток.

Тромбопластиновое время по Квику максимально увеличивалось через 36 часов в 1,2 раза при дозе 2 мг/кг, а при дозах 5 и 10 мг/кг в 1,4 раза. Эффект держался в течение следующих 12 часов, а затем отмечалась постепенная нормализация показателей к исходному уровню на четвертые сутки при дозе 2 мг/кг и на шестые сутки при дозах 5 и 10 мг/кг.

Время рекальтгфккаиии плазмы удлинялось с увеличением доз вводимого соединения через 36 часов соответственно в 1,6; 1,7; 1,9 раза. Возвращение показателей времени рекалыге-фикаиии плазмы к исходному уровню наблюдалось при дозах 2 и 5 мг/кг к 96 часам, а при дозе 10 мг/кг на сутки позяе.Толерантность крови к гепарину снижалась при дозе 2 мг/кг через 24 часа в 1,6 раза, а при дозах 5 и 10 мг/кг через 36 часов в 1,7; 1,8 раза соответственна Нормализация показателей толерантности крови к гепарину во всех дозах отмечалась на пятиь сутки.

Таким образом можно сделать вывод, что вещество АТ-18 обладает антикоагулянгной активностью, причем с увеличением дозы отмечено не только возрастание интенсивности фармакологического ответа, но и его длительности.

При изучении влияния на гемокоагуляиию вещества АТ-19 (рис.2) методом тромбоэласгографии установлено, что эффект отчетливо проявлялся к 36 часу.

§

о &

0) о л о к 200 150

5 СО В | 100

1 ^ 50

£ §

12 24 36 48

72 96 120 Бремя в часах

--- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

10 мг/кг

12 24 36 48

<4 о

200 150 100 50

О

96 120 Время в часах

-- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

10 мг/кг

12 24 36 48

72

96

120

Время в часах

Рис.2. Изменение тромбопластинового времени по Квику (I), времени рекальпификаиии плазмы (П) и толерантности крови к гепарину Ш) яри введении вещества АТ-19 в дозах 2, 5 и 10 мг/кг, выраженной в процентах от исходного, принятого за 100%.

О

Так показатель ТЭГ "Я" возрос в дозах 2, 5 и 10 мг/кг в 1,3; 1,6; 1,4 раза соответственно. При дозах 5 и 10 мг/кг эффект продолжал нарастать в течение следующих 12 часов (увеличение в 1,8 и 1,5 раза). Причем время реакции "й" в дозе 5 мг/кг увеличивалось уяе к концу первых суток в 1,3 раза. Время 'Т? + К" максимально увеличивалось в дозе 2 мг/кг к 36 часу в 1,4 раза, а в дозах 5 и 10 мг/кг к 48 часу в 1,5 и 1,4 раза. Статистически значимые колебания "Я + К" отмечались уже через 12 часов и сохранялись до 5 суток. Исходных значений время реакции "К" достигало в дозах 2 и 10 мг/кг на пятые сутки, а в дозе 5 мг/кг на шестые. Нормализация времен:'. "В + К" во всех дозах наступала на шестые сутки.Отмечалось некоторое увеличение "Мд", но оно было незначительное. Из данных видно, что наибольший эффект наблюдался при введении АТ-19 в дозе 5 мг/кг.

Тромбопластиновое время по Квику при дозе 2 и 5 мг/кг увеличивалось в 1,2 раза через 36 часов, а при дозе 10 мг/кг в 1,3 раза. Возвращение тромбопластинового времени к исходному уровню отмечалось во всех дозах на четвертые сутки. По выраженности тромбопластиновое время по Квику на максимуме действия несколько превосходило эффект при дозе 10 мг/кг, чем при дозе 5 мг/кг и было больше на 10

Время рекальиификации плазмы увеличивалось с возрастанием дозы вводимого соединения соответственно в 1,5; 1,6; 1,7 раза через 36 часов после введения, К исходному уровню показатели времени рекальиификации плазмы возвращались не четвертые сутки при дозе 2 мг/кг, и на пятые при дозах 5 и 10 мг/кг.

- 13 -

Толерантность крови к гепарину снижалась в дозах 2, 5 и 10 мг/кг в 1,8; 1,9; 2 раза соответственно через 26 часов.Нормализация толерантности крови к гепарину отмечена в те ке сроки, что и время рекальиификации плазмы.

Тагил образом, вещество АТ-19 обладает антикоагулянтной активностью, причем по данным ТЭГ более выраненно проявлялся эффект при введении в дозе 5 мг/кг. Снижение толерантности крови к гепарину при дозе 10 мг/кг отмечалось в 2 раза. В целом именно доза 10 мг/кг дает так называемый (в клинике) "терапевтический" уровень снгчения свертывания крови в 2 - 2,5 раза.

При изучении влияния на гемокоагуляцию соединения АТ-23 методом тромбоэластографии установлено, что это вещество удлиняло 'время реакции "И", "К + К" и несколько поникало ее максимальную амплитуду. Наибольшие изменения временных параметров ТЭГ отмечались на вторые сутки. Сила антикоагулянтного эффекта при введении вещества АТ-23 в дозах 2 р. 5 мг/кг на максимуме действия через 36 часов была приблизительно одинакова (увеличение в 1,3 раза). В дозе 10 мг/кг время реакции "I?" увеличивалось максимально в 1,4 раза, что на 6? больше, по сравнении с дозами 2 и 5 мг/кг, а "И + К" в 1,2 раза.Исходных значений данные параметры ТЭГ достигали на пятне сутки. Тромбспласти-новое время по Квику увеличивалось в дозах 2, 5 и 10 мг/кг соответственно в 1,2; 1,3; 1,5 раза через 36 часов после введения вещества АТ-23. Возвращение тромбопластинового времени по Квику к исходному уровню отмечалось в дозах 2 и 5 мг/кг на пятые сутки, в лозе 10 мг/кг но шестые. Время рекэльцифнкации плазмы удлинялось в дозах 2, 5 и 1С мг/кг, соответственно в 1,4; 1,5; 1,6 раза через 36 часов.Возвращение этого показателя

отмечено во всех дозах на пятне сутки. Толерантность крови к гепарину понижалась в исследуемом диапазоне доз соответственно в 1,4; 1,5; 1,6 раза через 36 часов, когда был зарегистрирован эффект. В дозе 10 мг/кг этот показатель был больше на 1252, по сравнении с дозой 2 мг/кг, и на 1%, по сравнению с дозой 5 мг/кг. К исходному уровню толерантность крови к гепарину возвращалась в теже сроки, что и время рекальцификаиии ■ т.е. на пятые сутки. По данным всех гестов ыогно отметить, что наибольший эффект наблюдался через 36 часов, деркался следующие 12 часов, а затем постепенно убывая, заканчивался на пятые сутки.

Анализируя полученные данные, мояшо отметить, что с увеличением доз вещества АТ-23 антнкоагулянтный эффект усиливается.

При введении вещества АТ-24 изменения ТЭГ показали удлинение времени реакции "К" в дозах 2, 5 и 10 мг/кг соответственно в 1,2; 1,4; 1,4 раза через 36 часов, а время "К + К" при дозах 5 и 10 мг/кг в 1,2 раза. Нормализация показателей ТЭГ отмечена на пятые сутки. Отмечалось некоторое понижение максимальной амплитуды ТЭГ. АТ-24 в дозах 2, 5 и 10 мг/кг удлиняло тромбопластиновое время по Квику через 36 часов после введения (на максимуме действия) соответственно в 1,3; 1,3; 1,4 раза. Наибольшее удлинение отмечалось при введении вещества АТ-24 в дозе 10 мг/кг. Эффект заканчивался на пятые сутки. Время рекальцификаиии плазмы в дозах 2, 5 и 10 мг/кг показало максимальное увеличение к 36 часу в 1,6; 1,7; 1,8 раза соответственно. Нормализация показателей времени рекальцификаиии плазмы была такал »е, как и при тесте Квика т.е. на пятые сутки. АТ-24 в исследуемом диапозоне доз снижало

толерантность крови к гепарину через 36 часов (на максимуме действия) в 1,3 - 1,4 раза. Окончание эффекта зарегистрировано на пятне сутки, С увеличением дозы вводимого вещества АТ-24 до 10 мг/кг отмечено усиление выраженности антикоагу-лянтного эфректа по данным всех использовании нами методов, за исключением показателя ТЭГ "Я + К", который менялся незначительно. Таким образом можно сказать, что АТ-24 обладает антикоагулянтной активностью, но по сравнению с АТ-18, АТ-19, АТ-23 она выражена несколько меньше.

При изучении влияния на гемокоагулявдт вещества АТ-30 методом тромбоэластографив установлено, что наибольший эффект проявлялся к 36 часу. В дозе 2 мг/кг врегля реакции "К" увеличивалось в 1,3 раза, а при дозах 5 и 10 мг/кг в 1,4 раза. Бремя 'ТЯ + К" увеличивалось в среднем в 1,2 - 1,3 раза, Нормализация показателей ТЭГ отмечалась на пятые сутки при дозе 2 мг/кг, на шестые при дозах 5 и 10 мг/кг. Наибольшее удлинение тромбопластинового времени по Квику отмечено при дозе 10 мг/кг увеличение в 1,4 раза, что на 11% больше по сравнению с дозой 2 мг/кг. Время рекальинфикаиии с увеличением доз удлинялось в 1,5 - I, 6 раза соответственно. Нормализация показателей зарегистрирована на пятне сутки, как и при тесте Квика. Максимальное снижение толерантности крови к гепарину наблюдалось через 36 часов после введения вещества АТ-30 в дозах 2, 5 и 10 мг/кг в 1,4; 1,5; 1,6 раза соответственно; Таким образом, с увеличением дозы АТ-30 отмечено более выраженная антикоагулянтиая активность, хотя и не прямо пропорционально дозе.

При изучении влияния на гемокоагулянию вещества АТ-33 (рис.3) методом ТЭГ установлено, что наибольший эффект проявлялся к 26 часу. Б дозе 2 мг/кг время реакции "Я" увеличивалось в 1,3 раза. Сила антикоагулянтного эффекта на максимуме действия при введении вещества в дозах 5 и 10 мг/кг была приблизительно одинакова (увеличение в 1,6 раза). Время "И + К" увеличивалось в 1,2 - 1,3 раза. Возвращение показателей ТЭГ отмечено на четвертые сутки. Тромбопластиновое время по Квику через 36 часов удлинялось одинаково в дозах 2 и 5 мг/кг в 1,3 раза, а в дозе 10 мг/кг в 1,4 раза. Время рекальцификации максимально удлинялось через 36 часов в дозе 10 мг/кг в 1,7 раза, что на 10$ больше, по сравнению с дозами 2 и 5 мг/кг. Возвращались данные показатели к исходному уровню, что и при тесте Квика, на пятые сутки. Наибольшее снижение толерантности крови к гепарину отмечено через 24 часа при дозах 2 и 5 мг/кг в 1,3 раза, при дозе 10 мг/кг через 36 часов в 1,6 раза. Нормализация показателей толерантности наблюдалась на четвертые сутки при дозе 2 мг/кг и на пятые при дозах 5 и 10 мг/кг.

Таким образом наибольшие изменения при введении АТ-33 в диапазоне доз от 2 до 10 мг/кг отмечены во времени рекальцификации плазмы и показателях ТЭГ (время реакции "И"). Обнаружена обычная зависимость: с увеличением дозы антикоагулянт-ный эффект усиливается.

Исследования вещества .АТ-45 показали, что показатели ТЭГ "Я" на максимуме действия удлинялись через 36 часов в дозах 2, 5 и 10 мг/кг соответственно в 1,3; 1,4; 1,4 раза, в "И + К" в 1,2; 1,2; 1,3 раза. Нормализация показателей отмечена на четвертые сутки при дозах 2 и 5 мг/кг и на сутки позже при дозе 10 мг/кг.

О)

п.

о

а

/О

о «

о К (5 Е-"

и со Ч С о д

Ч £

о

В

в к

я

со

I

Б

►а Ч со X а> Р.

о а) со

(Ь

о &

л н о о к н

к . со со Р. с

5Г <и

Ч ^ о

Е-" К

&

с р.

200 150

100 50 0

12 24 36 48

200 150 100 50 0

72 96 120 Время в часах

--- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

10 мг/кг

12 24 36 48

200 Т50 11)0 50

0

Рис.3.

72 96 120 Время в часах

--- 2 мг/кг

- 5 мг/кг

..... 10 мг/кг

12 24 36 48

72

96 120 Бремя в часах Изменения тромбопластинового времени го Квику (I), времени рекальцификаиии плазмы (П) и толерантности крови к гепарину (И]) при введении вещества АТ-33 в дозах 2, 5 и 10 мг/кг, выраженной в процентах от исходного, принятого за 100$.

Наибольшее удлинение тромбопластинового времени по Квику зарегистрировано при введении дозы 1С мг/кг также через 36 часов (увеличение в 1,3 раза). Проведенное исследование показало что при введении вещества АТ-45 время рекалышфикаиии плазмы увеличивалось к 36 часу в дозах 2, 5 и 10 мг/кг соответственно в 1,5; 1,6; 1,7 раза. Нормализация показателей отмечена на пятые сутки. Толерантность крови к гепарину в дозах 2 и 5 мгА снижалось к 36 часу в 1,4 раза, а в дозе 10 мг/кг в 1,6 раза. Возвращение показателей толерантности крови к гепарину отмечена в дозе 2 мг/кг на четвертые'сутки, в дозах 5 и 10 мг/кг на пятые. Таким образом, при введении вещества АТ-45 наиболее отчетливо эффект проявлялся в дозе 10 мг/кг через 36 часов по всем показателям. Более выраженные были изменения времени "К" ТЭГ, времени рекальипфикаиии плазмы и толерантности крови к гепарину. С увеличением дозы АТ-45 антикоагулянтный эффект был более выракен, но не по всем тестам.

Выше приведенные данные свидетельствуют, что вещества АТ-18, АТ-19, АТ-23, АТ-24, АТ-30, АТ-33, АТ-45 обладают выраженной антикоагулянтной активностью, но отличаются между собой по силе и длительности действия. Мы зафиксировали этот эффект по всем применяемым тестам, однако наиболее чувствител! ными к антикоагулянтному действию исследуемых соединений в наших экспериментах оказались параметры тромбоэластографии и времени рекальцифмкэции плазмы.

В качестве препарата сравнения - эталонного вещества, нами использован давно применяемый в клинической практике один из производных индандиона - фенилин (2-фенилиндандион-1,3).

Мы провели изучение действия феншшна в тех ке тестах, которые применяли для оценки антикоагулянтной активности новых представителей ряда индандиона. В основном, полученные нами данные совпадали с ранее опубликованными.

Так, при введении фенилина в дозах 2, 5 и 10 мг/кг время реакции "И" и "И + К" увеличивалось через 36 часов в 1,7; 1,6; 1,7 и в 1,3; 1,3; 1,4 раза соответственно. Эффект продолжал нарастать в течение следующих 12 часов. Причем при дозе 2 и 5 мг/кг показатель ТЭГ "К" уже к 24 часам увеличивался в I,4 раза. Возвращение показателей ТЭГ зарегистрировано во всех дозах к 120 часу, гипокоагуляция сохранялась до 4 суток. Отмечено некоторое понижение максимальной амплитуты тромбозластографии. Тромбопластиновое время по Квику максимально увеличивалось б дозах 2, 5 е 10 мг/кг к 48 часу в 1,3; 1,3; 1,4 раза соответственно. Возвращение тромбопластинового времени по Квику к исходному уровню отмечено на четвертые сутки при дозе 2 мг/кг и на сутки позже при дозах 5 и 10 мг/кг. Бремя рекалыцфжаши! глазми удлинялось к 36 часу в 1,5 - 1,6 раза. Нормализация показателей зарегистрирована к 96 часу. Толерантность крови к гепарину в дозах 2, 5 и 10 мг/кг понижалась в 1,5; 1,6; 1,6 раза соответственно через 36 часов. Эффект держался в течение следущих 12 часов, затем нормализо-вывался на 5 сутки. Обращает на себя внимание отмеченное нами неполное соответствие выраженности эффекта от-дозы. Видимо, в пределах от 2 до 10 мг/кг фенилин дает оптимальный и стойкий уровень снижения свертываемости крови, достаточной для терапевтических целей.

Сравнение эффектов соединений, обладавших в наших экспериментах выраженным антикоагулянтнкм действием, с фенилином показало, что время реакций "Я" и "Я + К" практически одинаково возрастало как при введении фенилина, так и соединений АТ-18 и АТ-19 (увеличение в 1,5 - 1,8; 1,3 - 1,4 раза соответственно) во всех дозах. Эффект отчетливо проявлялся через 36 часов, держался в течение следующих 12 часов, затем постепенно нормализовался, хотя гипокоагуляция сохранялась до 4 сутс

При введении вещества АТ-33 в дозах 5 и 10 мг/кг время реакции "Я" изменялось такае, как и при действии фенилина, а время "Я + К" возрастало менее значимо. По сравнению с фенилином действие АТ-23, АТ-24, АТ-30 и АТ-45 было менее выраженным. Так время реакции "Я" увеличивалось в 1,3 - 1,4 раза, а "Я + К" в 1,2 - 1,3 раза. Максимальная амплитуда ТЭГ менялась незначительно. Изменение тромбопластинового времени по Квкку было более выраженным при введении АТ-18 и АТ-23, чем при действии фенилина, а при введении АТ-24, АТ-30 и АТ-33 одинаковое, по сравнению с ним. Вещества АТ-19 и АТ-45 в дозах 5 и 10 мг/кг увеличивали тромбопластиноцое время по Квику в 1,2 - 1,3 раза, что на 10 - 155? меньше по сравнению с фенилином, хотя продолжительность их действия была одинаковой. Время рекальпификаиии плазмы при введении АТ-18, АТ-19 и АТ-24 в дозах 5 и 10 мг/кг максимально удлинялось через 36 часов в 1,7 - 1,9 раза, что на 30$ больше по сравнению с фенилином. Действие этих соединений отмечено на 12 часов раньше, чем у фенилина,а нормализация показателей на сутки позже-. У соединений АТ-33 и АТ-45 время рекальцкфикации плазмы было на 10% больше, по сравнению с фенилином. Действие

АТ-23 было практически такое ке, как и у фенилина в дозах 5 и 10 мг/кг (увеличение в 1,5-1,6 ' раза).Изменение толерантности крови к гепарину было более выраженное при введении АТ-18 и АТ-19 в дозе 10 мг/кг, чем при фенилине (снижение . в 1,8 и 2 раза соответственно), что на 25% больше по сравнению с фенилином. Эффект отчетливо проявлялся через 24 часа при введении АТ-18 и АТ-19 и через 36 часов при введении фенилина, что на 12 часов позке. Нормализация показателей толерантности крови к гепарину отмечалась на пятые сутки, как и у фенилина. АТ-23, АТ-30, АТ-33 и АТ-45 в дозах 5 и 10 мг/кг понижало толерантность крови к гепарину в равной степени с фенилином (в 1,5-1,6 раза). При введении АТ-24 снижение толерантности наблюдалось на 20/5 меньше, по сравнения с фенилином.

Таким образом, мокко отметить, что действие фенилина и соединений АТ-18, АТ-19 и АТ-33 практически одинаково, хотя при исследовании времени рекзльпифнкаиии плазмы и толерантности крова к гепарину э{фект был более выраженным у АТ-18 и АТ-19, чем у фешлина, а у АТ-33 несколько меньше по сравнению с ним. Сравнительная опенка влияния на свертывание крови, по данным всех использованных методов, позволяет сделать вывод о том, что под влиянием соединений АТ-18 и АТ-19, по сравнению с фенилином, эффект развивается несколько раньше, является более выраженным по силе, а у соединения АТ-33 он практически одинаковый. По данным проведенных исследований прослеживается четкая зависимость выраженности и длительности фармакологического эффекта, в данном случае антикоагу-лянтного, от вводимой дозы исследуемых соединений, а именно с увеличением дозы возрастало сила и продолжительность

действия соединений. Аналогичная зависимость эффекта от дозы антикоагулянтов непрямого действия ранее описана в литературе (К.М.Лакин, Е.К.Чазов, 1977 г., Л.Л.Кириченко 1988 г. :: др,

Среди соединений, обладающих слабой антикоагулянтной активностью, АТ-26, АТ-39 и АТ-56 при введении в келудок в дозе 10 мг/кг вызывали увеличение параметра ТЭГ "П" в 1,4 раза. Остальные соединения этой группы показатели ТЭГ существенно не меняли. Бремя рекальшф'капии плазмы удлинялось наиболее выракеннэ при введении АТ-39, АТ-41, АТ-57 л АТ-63: увеличение в 1,5-1,6 раза. Этот показатель также возрастал под влиянием АТ-22, АТ-26, АТ-38, АТ-54, АТ-56 и АТ-68 в 1,4 раза, Толерантность крови к гепарину снижалось в 1,4 раза при введении АТ-22, АТ-26, АТ-39, АТ-41, АТ-63. Из этой группы соединений наиболее выраженной антикоагулянтной активностью обладал АТ-39 (в дозе 10 мг/кг): время реакции "й" увеличивалась в 1,4 раза.время рекальцификапии плазмы в 1,6 раза, а толерантность крови к гепарину снижалась^ 1,4 раза; тромбо-пластиновое время по Квику г. время "й + К" ТЭГ менялось незначительно (увеличение в 1,2-1,3 раза).

Среди веществ, которые мы назвали "неактивными", некоторые по ряду тестов снижали свертываемость крови: наблюдалось увеличение времени рекальпифпкаиии плазмы в 1,4 раза при дозах 5 и 10 мг/кг(АТ-20, АТ-21, АТ-32, АТ-36, АТ-42, АТ-43, АТ-58, АТ-62, АТ-65 и АТ-66); вещества АТ-40, АТ-55 удлиняли время рекальпификации в 1,5 раза (в больших дозах); понижение толерантности крови к гепарину в 1,3 раза наблюдалось при введении соединений АТ-21, АТ-28, АТ-36, АТ-40, АТ-42, АТ-58, АТ-65 и АТ-66 и в 1,4 раза у АТ-25.

Суммируя изложенное, можно сказать, что некоторые изученные соединения, производные пндандиона, в условиях введения в желудок являются высокоактивными антикоагулянтами непрямого действия, близкими или даже превосходящими по антикоа-гулянтной активности фенилин (АТ-18, АТ-19, АТ-33). Среди них очень важным является более раннее развитие эффекта, скорейшее наступление максимума действия (на сутки раньше, т.е. через 24 часа).

Таким образом нами были выявлены вещества, обладающие выраженной антикоагулянтной активностью (АТ-18, АТ-19, АТ-23, АТ-24, АТ-30, АТ-33, АТ-45); вещества, имещке слабовыражен-ный антикоагулянтный эффект (АТ-22, АТ-26, АТ-38, АТ-39, АТ-41, АТ-54, АТ-56, АТ-57, АТ-62, АТ-68); вещества не обладащие антикоагулянтной активностью (АТ-2С, АТ-21, АТ-25, АТ-27, АТ-28, АТ-29, АТ-32, АТ-36, АТ-37, АТ-40, АТ-42, АТ-43, АТ-44, АТ-55, АТ-58, АТ-59, АТ-61, АТ-62. АТ-65, АТ-66 (см.табл.1).

Имеющийся в нашем распоряжении достаточно ограниченный экспериментальный материал не позволнет дать четких рекомендаций химиком-синтетг.кам по направлениям синтеза новых производных индандиона с целью получения соединений с заданными антнкоагуляитиыш: свойствами. Вместе с тем определенные закономерности могут быть подчеркнуты. Так вещества, сочетающие индандионовий и кумариновый циклы в целом более активны. При этом тиокумариновое ядро придает соединению (по крайней мере некоторым из них - АТ-30 к АТ-33), высокую антикоагулянтную активность. Видимо, существенное значение, имеет гидрофобный заместитель (пара-хлорфеннл и др.) при метиленовом мостике, соединяющем названные циклы.

Таблица У I

Характеристик! акп'коагулянтной активности усследуемнх соединений

ш пп Шифр ! Антикоагулянтная активность

I 2 ! 3

I. ЛТ-18 Обладает Еыраренсой антикоагулянтной активностью

2. АТ-19 Обладает Еыра*енной антикоагулянтной активностью

2. АТ-20 Не обладает антикоагулянтной активностью, хотя и отмечено некоторая тенденция уве-личепш времени рекальцификации плазмы

4. АТ-21 Не обладает антикоагулянтной активностью

5. АТ-22 Обладает слабовнраженной антикоагулянтной активностью

6. АТ-23 Обладает выракенной антикоагулянтной активностью

г* < • АТ-24 Обладает выраненной антикоагулянтной активность»

8. АТ-25 Не обладает антикоагулянтной активностью

9. АТ-26 Обладает слабоЕнраженной антикоагулянтной активностью

10. АТ-27 Не обладает антикоагулянтной активностью

II. АТ-28 Не обладает антикоагулянтной активностью

12. АТ-29 Не обладает антикоагулянтной активностью

13. АТ-30 Обладает выра-кенной антикоагулянтной активностью

14. АТ-32 Не обладает антикоагулянткой активностью

15. АТ-33 Обладает выракенной антикоагулянтной активностью

16. АТ-26 Не обладает антикоагулянтной активностью

17. АТ-37 Не обладает антикоагулянтной активностью

I ! 2 !_3__

18. АТ-38 Обладает слабовыраженной антикоагулянтной

активностью

19. АТ-39 Обладает слабовыраженной антикоагулянтной

активностью

2С. АТ-40 Не обладает антикоагулянтной активностью,

хотя и отмечено некоторое увеличение времени рекальпификации плазмы

21. АТ-41 Обладает слабовыраженной антикоагулянтной

активностью

22. АТ-42 Не обладает антикоагулянтной активностью

23. АТ-43 Не обладает антикоагулянтной активностью

24. АТ-44 Не обладает антикоагулянтной активностью

25. АТ-45 Обладает выраженной антикоагулянтной

активностью

26. АТ-54 Обладает слабовыракенной антикоагулянтной

активностью

27. АТ-55 Не обладает антикоагулянтной активностью,

хотя и отмечено некоторое увеличение времени рекальпификации плазмы

28. АТ-56 Обладает слабовыраженной антикоагулянтной

активностью

29. АТ-57 Обладает слабовнражепной антикоагулянтной

активностью •

ЗС. АТ-58 Не обладает антикоагулянтной активностью

31. АТ-59 Не обладает антикоагулянтной активностью

32. АТ-61 Не обладает антикоагулянтной активностью

33. АТ-62 Не обладает антикоагулянтной активностью

34. АТ-63 Обладает слабовыраженной антикоагулянтной

активностью

35. АТ-65 Не обладает антикоагулянтной активностью.

36. АТ-66 Не обладает антикоагулянтной активностью

37. АТ-68 Обладает слабовыракенной антикоагулянтной

активностью.

22 соединения, представлящие собой ди 2-замещенные ин-дандиона, также проявляли антикоагулянтные свойства в той

- 26 -

или иной степени. Однако только одно из них - соединение АТ-45 по активности сравнимо с эталонным греларатом фенилином -(2-фенилиндандион-1,3). Обращает на себя внимание, что АТ-45 в отличии, например, от ЛТ-44 или АТ-54 и АТ-62, которые не обладают способностью подавлять свертываемость крови или слабо подавляют ее, при ацетанилиде имеет метильную группу, значимо уменьшащую гидроф1и:ьность вещества. Е иелом, можно придти к предварительному заключению, что в рамках исследованных структур антикоагулянтная активность возрастает с увеличением гид-рофобности соединения.

По итогам работы соединения АТ-18, АТ-19 и АТ-33 перспективны для дальнейшего изучения по программе доклинических испытаний.

ВЫВОДЫ

1. Б экспериментах на кроликах изучено влияние на свертывание крови 37 новых грои.зводных и.ндандиона. Обнаружена антикоагулянтная активность некоторых исследованных соединений, сравнимая с таковой эталонного препарата - фенилина.

2. Антикоагулянтное действие проявлялось в увеличении тромбопластинового времени по Квику, понижении толерантности крови к гепарину, увеличении времени рекальикфикашш плазмы, удлинении времени "Н" и "К + К" тромбоэластограммы.

3. При введении -(индан-1,3-дион-2-ил)-4-нитробензил/-4-оксикумаринЧАТ-18)и 3-/о<-(индзн-1,3-дион-2-нл)-4-метклбензкл/-4-оксикумарин-йТ-19)отмечен более выраженный антикоагулянтный эффект по сравнению с фенилином: быстрее наступал его максимум.

4. У веществ 3-/о{-(индан-1,3-дион-2-ил)-4-бромбензил/-4-оксикумарин-(АТ-23), 3-М-(индан-1,3-дион-2-ил)-2-фторбен-зил/-4-оксикумарин-(АТ-24), 3-/с^-(индан-1,3-дион-2-ил)-3-бром-бензил/-1-тио-4-оксикумарин-(АТ-30), Ъ-/о{-(индан-1,3-дион-2-ил)-

2-бром, 4-нитробензпл/-1-тио-4-окс1:кумарин-(АТ-33) и 4-метгл-анклид 2-(4-метоксифенил) индан-1,3-дкон-2-ил-уксусной кислоты-(АТ-45), антккоагулянтная активность выражена в пределах таковой феиилина или низе ее.

5. Остальные изуненные соединения (30) антикоагулянтной активностью не обладали.

По материалам диссертации опубликовании следующие работы:

1. "Влияние производных кумарина и индандиона на свертываемость крови". Тезисы докладов У съезда фармакологов, 1909 г., г. Минск (в соавторстве).

2. "Влияние новых производных 4-оксикумаринов на свертывание крови". Материалы У1 съезда фармакологов Украинской ССР, 1990 г., г. Харьков (в соавторстве).

3. "Исследование влияния новых комплексных соединений натриевой соли фепромарона с ннзкомолекулярными спиртами на свертывание крови". Тезисы докладов объединенной научной конференции молодых ученых, 1990 г., г. Махачкала (в соавторстве).

4. "Сравнительное экспериментальное изучение антиагрега-иионноЯ активности новых производных ксантиноЕ". В журнале "Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики внутренних болезней", 1992 г., г. Москва (в соавторстве).

ПК!«. . п». .< а о / д{г д.., 2 % _тир, ю

Типограф.. Пра ХмаЯоаокои упридсаа Мааираа« Росса»