Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование эффективности глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеинта натрия при эрозивно-язвенных гастродуоденопатиях в эксперименте

На правах рукописи

КРУПНОВА Татьяна Сергеевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЛ У ТАМИЛ-ТРИПТОФАНА И ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНТА НАТРИЯ ПРИ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННЫХ ГАСТРОДУОДЕНОПАТИЯХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 - фармаколога», клиническая фармакология

2 6 Я Н В 2012

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саранск - 2012

005007778

Работа выполнена в Медицинском институте Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева»

доктор медицинских наук Блинов Дмитрий Сергеевич

доктор биологических наук профессор

Шилова Елена Владимировна

доктор биологических наук Калинина Татьяна Сергеевна

доктор медицинских наук профессор

Козлов Иван Генрихович

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Минздравсоцразвития РФ»

Защита состоится « »...................2012 года на заседании диссертационного совета Д.001.024.01 при НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН по адресу: 125315 Москва, ул. Балтийская, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в ученой части НИИ фармакологии имени В.В. ЗакусоваРАМН по адресу: 125315 Москва, ул. Балтийская, д.8.

Научный руководитель: Научный консультант:

Официальные оппоненты:

Автореферат разослан « »...........2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Е.А. Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Язвенная болезнь по-прежнему является одним из наиболее распространённых заболеваний желудочно-кишечного тракта, принимающим в значительной части случаев неблагоприятное осложненное течение, требующим оперативного лечения, что приводит к значительным трудовым потерям, а порой - к инвалидизации больных трудоспособного, творчески активного возраста. В настоящее время ведущими этиопатогенетическими факторами считаются инвазия слизистой оболочки желудка и метаплазированного эпителия двенадцатиперстной кишки Helicobacter pylori и повышенное образование соляной кислоты.

В тоже время не вызывает сомнений и роль иммунных нарушений в развитии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Большинство авторов исследований отмечают дисбаланс в количественном содержании и функциональной активности клеточного иммунитета. При рецидиве язвенной болезни большинство исследователей отмечают снижение абсолютного и относительного процентного содержания Т-лимфоцитов в сыворотке крови, где общее число последних составляет 40-53% (Циммерман Я.С., Михалёва Е.Н., 2007). Снижение уровня лимфоцитов происходит в основном за счёт CD4+, реже за счёт CD8+, что сопровождается изменениями иммунорегуляторного индекса в сторону его уменьшения (Мягкова Л.П., Алекперов Р.Т., 2001).

Практически всеми авторами отмечается не только количественные изменения Т-лимфоцитов, но и угнетение их функциональной активности. Более противоречивы данные о количестве В-лимфоцитов в периферической крови и содержании иммуноглобулинов в сыворотке крови, которые характеризуют гуморальное звено иммунитета и функциональное состояние В-лимфоцитов. Не отрицая важности вышеуказанных изменений иммунитета у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, следует признать, что большой интерес и значимость представляет изучение цитокн-новой системы при данной патологии, а также уточнение ее роли в развитии

з

и поддержании воспаления в слизистой оболочке. В настоящее время установлен ряд свойств Helicobacter pylori, которые вызывают как прямое цито-литическое воздействие на эпителий желудка, так и опосредованное нарушение целостности эпителия, через дезинтеграцию базальной мембраны. Однако первичная неспецифическая защитная реакция на инфекцию видимо является основой в запуске патологических изменений слизистой оболочки, а желудочный эпителий главным источником выработки цитокинов (Мягкова Л .П., Алекперов Р.Т., 2001).

Кроме того, исследования последних лет свидетельствуют о наличии корреляционных связей между изменением иммунологической реактивности и образованием интеферона. Интерфероновая система значительно опережает ответ иммунной системы. Доказано, что при хронических бактериальных инфекциях имеет место глубокое подавление интерфероногенеза (Воробьёва Т. А., 2001.).

Поскольку в патогенезе эрозивно-язвенных поражений желудочно-кишечного тракта существенную роль играют иммунологические нарушения в настоящей работе мы исследовали два иммунокорректора: глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия. Дезоксирибонуклеинат натрия является достаточно изученным препаратом, который обладает противоязвенным действием в клинике при язвенной болезни желудка и 12-пертсной кишки (Ромашкина Т.С, 1999; Каплина Э.Н., Вайнберг Ю.П., 2004). Однако исследования препарата в условиях экспериментального ульцерогенеза, воспроизводящего клинические симптоматические дефекты слизистой оболочки верхнего отдела ЖКТ - стрессового, спирто-преднизолонового, НПВП-ассоциированного, - не проводилось. О глугамил-триптофане в доступной литературе данных о его противоязвенном действии нет (кроме неспецифического язвенного колита). Главным показанием для применеия глутамил-триптофана является вторичное иммунодефицитное состояние (Смирнова B.C., 2004), сопровождающее большинство инфекций, острых и хронических инфекционно-воспалительных заболеваний. Глутамил-триптофан - малотоксичный и подифункциональный биорегулятор. Его противовоспалительные

свойства могу т быть связаны с его антиоксидантными свойствами (Лшмарин И.П., 1986,1989).

В связи с этим, поиск лекарственных средств, которые бы наряду с коррекцией иммунных нарушений, имеющих важное патогенетическое значение в развитии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, обладали бы собственным ульцеропротекторным действием, является одной из актуальных проблем современной экспериментальной и клинической фармакологии (Маев И.В., Гаджиева М.Г., 2004).

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: сравнительное изучение эффектов иммунокорректо-ров глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеииата натрия при моделировании острых и хронических эрозивно-язвенных поражениях желудка и двенадцатиперстной кишки различной этиологии.

Для достижения поставленной цели в процессе выполнения работы решились следующие ЗАДАЧИ:

1. Провести сравнительное исследование активности иммунокоррек-торов глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеииата натрия при НПВС-ассоциированной эрозивно-язвенной гастродуоденопатии у мышей.

2. Изучить фармакологическое действие глутамил-триптофана и де-зоксирибонуклеината натрия при стресс-индуцированном ульцерогенезе.

3. Исследовать активность глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеииата натрия в условиях эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, вызванного введением спирто-преднизолоновой смеси.

4. Изучить влияние исследуемых препаратов на кровоснабжение стенки желудка и двенадцатиперстной кишки в условиях курсового введения диклофенак натрия.

5. Исследовать моторную функцию желудочно-кишечного тракта и влияние на неё иммунокорректоров дезоксирибонуклеииата натрия и глутамил-триптофана на фоне развития НПВС-гастродуоденопатии.

6. Изучить гистологическую структуру слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки при введении диклофенак-натрия на фоне коррекции глутамил-триптофаном и дезоксирибонуклеинатом натрия.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Проведено сравнительное исследование эффективности глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеината натрия с использованием различных моделей гастродуоденопатии у мышей.

Установлено, что в условиях стресс-индуцированного ульцерогенеза исследуемые препараты проявляют свойства гастроцито- и дуоденопротекго-ров при парентеральном введении животным в эквимолярных дозах, при этом по своей фармакологической активности не уступают препарату сравнения фамотидину, вводимому в сопоставимой дозе. В тех же дозах глута-мил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия изучены на модели формирования острых спирто-преднизолоновых дефектов слизистой оболочки желудка, умеренная гастропротекторная активность выявлена лишь у дезоксирибонуклеината натрия в дозе 7,5 мг/кг.

На модели НПВС-ассоциированной гастродуоденопатии, вызванной введением животным диклофенак-натрия, установлена дозозависимость терапевтического действия препаратов: наибольший протекторный эффект проявляется у глутамил-триптофана в дозе 0,5 мг/кг и дезоксирибонуклеината натрия в дозе 7,5 мг/кг, при снижении вводимой дозы терапевтическая активность препаратов снижается. Развитие эффекта сопровождается восстановлением целостности эпителия слизистой оболочки желудка и 12-персгной кишки.

Впервые изучено влияние исследуемых соединений на некоторые функциональные показатели, отражающие состояние желудочно-кишечного тракта - кровенаполнение слизистой оболочки и двигательную активность желудка и двенадцатиперстной кишки. Показано, что и глутамил-триптофан дезоксирибонуклеинат натрия в эквимолярных дозах стимулируют перистальтику кишечника и повышают кровенаполнение стенки желудка мышей с диклофенак-индуцированной эрозивно-язвенной гастродуоденопаткей.

б

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Получены новые данные о спектрах, фармакологической активности препаратов из группы иммуномодуляторов. Данные о ранозаживляющих свойствах иммуномо-дуляторов в условиях разных причинных моделей развития язвенного дефекта слизистых оболочек ЖКТ, с одной стороны, являются основанием для поиска и анализа новых механизмов иммуномодуляторов или их специфической роли в различных функциях организма, а с другой стороны, могут способствовать более глубокому пониманию фундаментальных механизмов интеграции разных систем организма (нервной, иммунной, гуморальной) при восстановительных процессах. Практическое значение работы состоит в том, что результаты исследования представляют экспериментальную основу для дальнейшего анализа возможности и целесообразности расширения показаний при медицинском применении глутамил-триптофана и дезоксирибонук-леината натрия.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе кафедр фармакологии с курсом клинической фармакологии, цитологии, гистологии и эмбриологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. В условиях НПВП-индуцированного повреждения слизистой оболочки желудка и 12-перстиой кишки высокую протекторную активность проявил дезоксирибонуклеинат натрия. Наименьший антиульцерогенный эффект показал глутамил-триптофан в минимальной дозе (0,25 мг/кг).

2. Глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия уменьшали выраженность эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки при стресс-индуцированной гастродуоденопа-гии у мышей.

3. Исследуемые вещества эффективно корригируют нарушения микроциркуляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияния на данный процесс в тонком кишечнике. Глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследований, представленные в диссертации, докладывались на XV и XVI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2010, 2011), VI Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009), ежегодных Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского госуниверситета, Саранск, 2009-2011), конференциях молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2009-2011), Всероссийской конференции по гастроэнтерологии и гепатологии (Нижний Новгород, 2010), XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей с международным участием «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2011), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Алмазовские чте-ния-2011» (Санкт-Петербург, 2011).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 - в рецензируемых изданиях и журналах, рекомендованных ВАК Минобрануки России.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 142 страницах компьютерного набора, документирована 13 таблицами и иллюстрирована 20 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава II), изложения собственных результатов (глава III, IV, V), заключения и библиографического указателя, включающего 356 источников, в том числе 220 отечественных и 136 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования послужили два препарата с иммуномодули-рующей активностью: дезоксирибонуклеинат натрия и глутамил-триптофан. В работе использовали жидкую лекарственную форму дезоксирибонуклеина-та натрия «деринат» (НПО «Техномедсервис», Россия») во флаконах по 5 мл 1,5% официнального раствора.

Глутамил-триптофан - иммуномодулирующий препарат. В работе использовали жидкую лекарственную форму глутамил-триптофана («тимоген», МБНПК ЗАО «Цитомед») во флаконах по 1 мл 0,01% официнального раствора.

В качестве препарата сравнения использовался ингибитор гистамино-вых Иг-рецепторов - фамотидин («Квамател», GedeonRichter, Германия) во флаконах по 20 мг.

Поскольку дезоксирибонуклеинат натрия и глутамил-триптофан являются малотоксичными веществами и представителями разных классов химических соединений при выборе доз для исследования мы пользовались принципом эквимолярности.

Работа выполнена на 250 половозрелых нелинейных белых мышах обоего пола массой 18 - 23 г. Все подопытные животные были разделены на группы, данные о которых приведены в таблице 1.

Для оценки эффективности исследуемых препаратов мы остановились на трех моделях экспериментального эрозивно-язвенного поражения желудка и двенадцатиперстной кишки, включая острые и субхронические варианты, руководствуясь различиями в характере их течения и механизме возникновения (A.B. Подзорова, 1999; A.B. Стефанов и соавт., 2001).

Первым этапом наших исследований стало изучение противоязвенной активности на модели «диклофенакового» эрозивно-язвенного поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Его вызывали внутрижелудочным введением животным диклофенак-натрия 1 раз в день в течение 10 дней в дозе 50 мг/кг (Пентюк H.A. и соавт., 1998).

Моделирование иммобилизационных (субхронических) язв проводили по методу D.A. Brodie (1971, Прописнова В.В., 1999). За сутки до иммобилизации животные не получали еду при сохраненном доступе к воде.

Стресс воспроизводили иммобилизацией мышей, фиксируя их за лапки к дощечкам брюшком вверх на 24 часа.

Острое поражение верхнего отдела желудочно-кишечного тракта для изучения влияния исследуемых препаратов воспроизводили путем моделирования спирто-преднизолоновой язвы у мышей (Стефанов A.B. и соавт., 2001). Спирто-преднизолоновую смесь (преднизолон в дозе 20 мг/кг и этиловый спирт 76% из расчета 0,6 мл на 100 г массы тела животного) вводили внут-рижелудочно однократно.

Фармакологический эффект препаратов оценивали по макроморфоло-гической картине слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки мышей, выведенных из эксперимента путем краниальной дислокации под эфирным

Таблица 1.

Распределение животных по экспериментальным группам.

Раздел исследования Условия эксперимента Количество животных

I раздел (изучение ульце- ропротекторного действия) йнтактный контроль 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) + фамотидин (1 мг/кг) 10

Циклофенак-натрия (50 мг/кг) + Цезоксирибонуклеинат натрия (3,7 мг/кг) 10

Циклофенак-натрия (50 мг/кг) + Цезоксирибонуклеинат натрия (7,5 мг/кг) 10

Циклофенак-натрия (50 мг/кг) + Глутамил-триптофан (0,25 мг/кг) . 10

Циклофенак-натрия (50 мг/кг) + Глутамил-триптофан (0,5 мг/кг) 10

II раздел (изучение ульце- ропротекторного действия) Интактный контроль 10

Стресс 10

Стресс + квамател(1 мг/кг) 10

Стрссс + дезоксирибонуклеинат натрия (7,5 мг/кг) 10

Стресс+глутамил-триптофан (0,5мг/кг) 10

III раздел (изучение ульце-ропротекторного действия) Интактный контроль 10

Спирто-преднизолоновая смесь 10

Спирто-преднизолоновая смесь + фамотидин (1 мг/кг) 10

Спирто-преднизолоновая смесь + дезоксирибонуклеинат натрия (7,5 мг/кг) 10

Спирто-преднизолоновая смесь + Глутамил-триптофан (0,5 мг/кг) 10

IV раздел (изучение кровенаполнения) Интактный контроль 10

Циклофенак-натрия (50 мг/кг) 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) + Дезоксирибонуклеиат натрия (7,5 мг/кг) 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) + Глутамил-триптофан (0,5 мг/кг) 10

V раздел (изучение функционального состояния ЖКТ) Янтактный контроль 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) Дезоксирибонуклеинат натрия (7,5 мг/кг) 10

Диклофенак-натрия (50 мг/кг) + Глутамил-триптофан (0,5 мг/кг) 10

наркозом. Макроморфометрическую оценку состояния слизистой оболочки проводили визуально (с помощью стереоскопического микроскопа МБС-9, Россия). Для систематизации и анализа макроскопической картины слизи-

стой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки использовали методику В.А. Виноградова (1983), предполагающую расчет ряда показателей: 1 - количество эрозий; 2 - количество язвенных дефектов; 3 - тяжесть поражения; 4 - частоту поражения; 5 - множественность поражения и 6 - суммарный показатель - язвенный индекс; 7 - определяли индекс язвообразования.

Тяжесть поражения (111) характеризовали средним баллом. Частоту поражения (ЧП) вычисляли как отношение числа животных с язвами к общему числу животных в группе. Множественность поражения (МП) рассчитывали как отношение числа язв у всех мышей к числу животных в группе. Суммарный показатель - язвенный ивдекс (ЯИ), вычисляли по формуле: ТП+ЧП+МП.

Оценку противоязвенной активности исследуемых соединений проводили по методу В.Н. Шаталова и В.М. Полонского (1981). Индекс язвообразования (ИЯ) вычисляли по формуле: ИЯ = СБ + КМЯ/(КМ х 2) - КЯ/КМ,

где: СБ - средний балл; КМЯ - количество мышей с язвами; КМ - количество мышей в группе; КЯ - общее количество язв в группе.

Для проведения микроморфологического исследования использовали фрагменты желудков и двенадцатиперстной кишки белых мышей, окрашенных гематоксилином и эозином. Микропрепараты просматривали в световой микроскоп Jenawal (CarlZeiss - Jena, Германия). Регистрацию микроморфологической картины проводили цифровой фотокамерой CanonPowerShotA540, с последующей обработкой изображения в AdobePhotoshop 7,0.

В ходе наших экспериментов было также изучено влияние испытуемых лекарственных средств на функциональные показатели деятельности ЖКТ.

Изучение влияния веществ на двигательную активность ЖКТ проводили по методу J.S. Stickney и соавт. (Прописнова В.В., 1999). Опытным животным вводили исследуемые соединения однократно, а контрольной группе - эквивалентное количество воды. Через 1 час всем животным перорально вводили по 0,3 мл контрастной массы (10% суспензия активированного угля в 1% крахмальном клейстере.) Через 40 минут животных выводили из экспе-

римента под эфирным наркозом. Затем у опытных и контрольных животных проводили измерение (в см) абсолютной длины кишечника и пути, пройденного контрастной массой по нему. В качестве интегрального показателя, характеризующего силу перистальтики ЖКТ, использовали процент длины кишечника, пройденный контрастной массой по отношению к абсолютной длине последнего.

Для изучения уровня кровотока в стенке желудка использовали гемо-глобинцианидный метод обнаружения гемоглобина в биологических жидкостях (Меньшиков В.В. и соавт., 1987, Пупкова В.И., 2001), модифицированный в 1994 г. профессором В.Г. Малышевым. Метод основан на измерении объема крови в биологической ткани. В работе использовали стандартный набор реактивов «Ольвекс-диагностикум» (Россия).

Концентрацию гемоглобина вычисляли по формуле:

С = Eon/Ed * Ск * 17,7, где: С - концентрация гемоглобина, г %; Еоп- оптическая плотность пробы; Ест - оптическая плотность калибровочного раствора гемоглобинцианида = 0,065; Ск - концентрация гемоглобинцианида в калибровочном растворе = 59,75; 17,7 - коэффициент разведения пробы в стандарте. Полученные данные пересчитывали на 1 г сырой ткани и концентрацию гемоглобина выражали в г на 1 г ткани желудка и 12-перстной кишки.

При проведении статистической обработки и исследовании достоверности различия полученных результатов использовали непараметрический критерий «ч - квадрат». Достоверность различий средних величин определяли, с помощью параметрического критерия t Стьюдента при 5 % уровне значимости (Закс JL, 1976).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

На первом этапе нашего исследования были проведены серии опытов по изучению гастродуоденопротекторной активности исследуемых фармакологических препаратов на модели стресс-индуцированного ульцерогенеза. Воздействие стресса на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки по выраженности повреждения несколько различалось (табл. 2,3).

Таблица 2.

Характеристика стресс-опосредованных гастропатий под влиянием исследуемых препаратов

Исследуемые показатели Интакт-ные животные Стресс -контроль Фамоти- дин (1 мг/кг) Дезокси-рибонукле-нат натрия (7,5 мг/кг) Глутам ил-триптофан (0,5 мг/кг)

Среднее число эрозий 0 1,13±0,40б 0* 0,67±0,39* 0,33±0,39*

Среднее число язв 0 3,67±0,39б 0* 0* 0,67±0,17*

Тяжесть поражения 0 3,67±0,39б 0,625± 0,18* 0,67±0,39* 1 ±0,58*

Частота поражения 0 1 0 0 0,33

Множественность поражения 0 1,33 0 0 0,33

Язвенный индекс 0 6 0,625 0,67 1,66

Индекс язвообра-зования 0 10,17 2 2 2,84

Примечание: б - отличия от соответствующих показателей интактных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс - контроля, достоверны при р<0,05 (критерий у-квадрат).

В желудке отмечалось образование эрозий и язв, у всех животных отмечались участки гиперемии и точечных кровоизлияний (табл. 2). Изменения

дуоденальной области заключались в формировании повреждений, в основном, эрозивного характера (табл. 3).

Исследуемые препараты, вводимые внутримышечно в профилактическом режиме в эквимолярных дозах, значительно снижали выраженность эрозивно-язвенного процесса в желудке белых мышей, об этом свидетельствуют все регистрируемые нами показатели. Причем, если язвообразование в равной степени предотвращали и глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеи-нат натрия, то наибольший эффект профилактике образования стрессовых эрозий показал препарат дезоксирибонуклеинат натрия в дозе 7,5 мг/кг. При микроскопическом изучении препаратов слизистой желудка морфологическая картина была близка к нормальной, характерной для животных интакт-ного контроля.

Таблица 3.

Характеристика стресс-опосредованных дуоденопатнй под влиянием исследуемых препаратов

Исследуемые показатели Интактные животные Стресс-контроль Фамоти-дин(1 мг/кг) Дезоксирибонуклеинат яатрия (7,5 мг/кг) "лутам ил-трипто-фа^О,5 мг/кг)

Среднее число эрозий 0 1,0±0,38б 0* 0* 0,33± 0,19

Среднее число язв 0 0,67 ±0,176 0* 0* 0*

Тяжесть поражения 0 0,67 ±0,176 0,625± 0,18 0* 0,33± 0,39

Частота поражения 0 0,33 0 0 0

Множественность поражения 0 0,33 0 0 0

Тзвенный индекс 0 1,33 0,625 0 0,33

Индекс язвообра- 0 2,5 0 0 1

зования

Примечание: б - отличия от соответствующих показателей у интактных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс -контроля, достоверны при р<0,05 (критерий х-квадрат).

Иммунокорректоры глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия оказывали выраженное протекторное действие на структуру слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки белых мышей, подвергнутых хроническому иммобилизационному стрессу. Как и при анализе состояния слизистой оболочки желудка, макроморфометрия не выявила наличия язв и эрозий в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки. Изучение данного процесса на микроскопическом уровне подтвердило наличие дуоденопротекторных свойств у изучаемых соединений. Участки слизистой оболочки по своему строению очень напоминали фрагменты двенадцатиперстной кишки, полученные от животных серии интактного контроля.

Таким образом, приведённые выше данные демонстрируют наличие у изучаемых препаратов гастродуоденопротекторных свойств при стресс-индуцированном повреждении.

Спирто-преднизолоновая модель повреждения слизистой верхнего отдела желудочно-кишечного тракта характеризовалась формированием дефектов слизистой оболочки только в желудке. Выраженность повреждения была умеренной. При изучении гастропротекторных возможностей изучаемых соединений на модели острого повреждения слизистой желудка спирто-преднизолоновой смесью не был выявлен статистически значимый протекторный эффект.

Изучение гастропротекторной активности глутамил-триптофана и де-зоксирибонуклеината натрия мы проводили также на модели НПВС-ассоциированного язвообразования (табл. 4).

Таблица 4.

Характеристика диклофенак натрий — индуцированного процесса язво-образования в слизистой оболочке желудка под влиянием исследуемых

препаратов

Исследуемые показатели Контроль (диклофе-пак-натрнй) Фамоти- ДИН (I мг/кг) Дезокси-рибонук-леинат натрия (3,7 мг/кг) Дезокси-рибонук-лениат натрия (7,5 мг/кг) Глугамил-гриптофан [0,25 мг/кг) Глутамил-трнптофаи (0,5 мг/кг)

Среднее чис- 0,25± 0,07 0,25± 0,17± 0,14± 0 0,29±

ло эрозий 0,07 0,06 0,03* 0,07

Среднее чис- 1,25±0,3б 0* 0*в 0*в 0,34± 0*

ло язв 0,11*

Тяжесть по- 1,5±0,12б 0,25± 0.17± 0,14± 0,34± 0,29±

ражения 0,07* 0,06* в 0,03 *в 0,11* 0,04*

Частота по- 0,5 0 0 0 0,17 0

ражения

Множест- 0,75 0 0 0 0,17 0

венность по-

ражения

Язвенный 2,75 0,25 0,17 0,14 0,68 0,29

индекс

Индекс язво- 5,5 1 1 1 1,91 2

образования

Примечание: б - отличия от соответствующих показателей интактных животных, достоверны при р<0,05; * - отличия от соответствующих показателей группы стресс -контроля, достоверны при р<0,05; в - отличия от соответствующих показателей у животных, получавших глутамил-триптофан, достоверны при р<0,05 (критерий х-квадрат).

Результаты макроморфологического исследования убедительно демонстрируют формирование признаков НПВС-гастропатии у всех животных, получавших парентерально диклофенак-натрия в дозе 50 мг/кг в течение 10

суток. Они проявлялись в виде появления острых множественных эрозий и язв, преимущественно в антральном отделе желудка, связанного с основным системным действием НПВС (угнетение синтеза простагландинов) (Каратеев

A.Е.. 2000). Случаи летальности животных в этой серии составили 30%.

Нами установлена дозозависимость гастропротекторного действия веществ на представленной модели. Так, наибольшая активность отмечена у глутамил-триптофана в дозе 0,5 мг/кг и дезоксирибонуклеината нагрия в дозе 7,5 мг/кг, при этом, снижение дозы препаратов вдвое сопровождалось существенным снижением фармакологической активности препарата.

При микроскопическом изучении слизистой оболочки желудка мышей, получавших диклофенак-натрий, во всех случаях отмечались дистрофические изменения эпителия. Микроскопическая картина в изучаемых препаратах характеризовалась выраженным отёком собственной пластинки слизистой оболочки (Аруин Л.И., 1998; Голофеевский В.Ю., 1994; Успенский

B.М., 1994). Коррекция патологического процесса исследуемыми препаратми приводила к положительным изменениям микроморфологической картины: снижалась степень отека собственной пластинки слизистой и лейкоцитарная инфильтрация.

Эрозивно-язвенный процесс, развивающийся у белых мышей на фоне длительного приема нестероидного противовоспалительного средства, сопровождается нарушениями микроциркуляции, о чем свидетельствует снижение содержания концентрации гемоглобина в тканях желудка и двенадцатиперстной кишки (рис. 3.).

о

Желудок Кишечник

□ Контроль ШДиклофенак-Ма

□ Дезоксирибонуклеинат натрия □ Глутамил-триптофан__

Рис. 3. Влияние исследуемых препаратов на содержание гемоглобина (мг/г сырой ткани) в органах ЖКТ мышей, получавших диклофенак-натрий

Примечание: * - различия при сравнении с животными контрольной группы достоверны при р<0,05; А - различия при сравнении с животными, получавшими только диклофенак-натрий, достоверны при при р<0,05.

Исследуемые вещества эффективно корригируют дефицит кровотока в поврежденном желудке, но не оказывают влияния на данный процесс в тонком кишечнике.

Эрозивно-язвенный процесс, развивающийся у белых мышей на фоне длительного приема нестероидного противовоспалительного средства, сопровождается снижением перистальтической активности желудочно-кишечного тракта (рис. 4.).

Иммунокоректоры глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия при внутримышечном введении в дозах 0,5 мг/кг и 7,5 мг/кг соответственно стимулируют моторную активность желудочно-кишечного тракта.

Ш Контроль Ш Диклофенак-Ма

□ Дезоксирибонуклеинат натрия 7,5

□ Глутамил-триптофан 0,5_

Интегральный показатель, %

Рис. 4, Влияние исследуемых препаратов на двигательную активность органов ЖКТ мышей, получавших днклофенак-натрпй

Примечание: * - различия при сравнении с животными контрольной группы достоверны при р<0,05; А — различия при сравнении с животными, получавшими только дик-лофенак-натрий, достоверны при при р<0,05.

Обобщая приведённые выше данные, характеризующие активность изучаемых препаратов с иммуномодулирующей активностью при стрессе, воздействии агрессивных факторов на слизистую оболочку желудка и 12-перстной кишки, можно утверждать, что дезоксирибонуклеинат натрия и глутамил-триптофан обладают собственным ульцеропротекторным эффектом. Механизм действия препаратов на слизистую оболочку ЖКТ на сегодня ещё не изучен, но в свете полученных результатов, характеризующих исследуемые химические соединения как эффективные потенциальные гастропро-текторы, его изучение представляет большой научный и практический интерес для медицины.

выводы

1. Иммуномодуляторы глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеи-нат натрия в условиях экспериментальной НПВС-гастродуоденопатии оказывают гастродуоденопротекторный эффект. Глутамил-триптофан, в дозах 0,25 мг/кг и 0,5 мг/кг, и дезоксирибонуклеинат натрия, в дозах 3,7 мг/кг и 7,5 мг/кг, проявляют высокую протекторную активность, сопоставимую с препаратом сравнения фамотидин в дозе 1 мг/кг.

2. При микроскопическом исследовании показано, что глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия практически полностью восста-новливали целостность слизистой оболочки, что подтверждается высокой степенью сохранности поверхностного эпителия.

3. На модели стресс-индуцированной гастродуоденопатии дезоксирибонуклеинат натрия оказывал наибольшее протекторное действие, влияние глутамил-триптофана было менее значительным. Морфологическая картина при использовании исследуемых соединений была близка к нормальной, характерной для животных интактного контроля.

4. При изучении эффективности препаратов на спирто-преднизолоновой модели язвообразования отмечен лишь незначительный протекторный эффект при использовании деринатаезоксирибонуклеината натрия в дозе 7,5 мг/кг.

5. Глутамил-триптофан и дезоксирибонуклеинат натрия оказывают влияние на функциональные показатели ЖКТ: эффективно корригируют нарушения микроциркуляции в поврежденном желудке, но не оказывают влияние на данный процесс в тонком кишечнике; стимулируют моторную активность ЖКТ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные нами результаты позволяют рекомендовать использование средств иммуномодулирующей терапии, и, в частности, глутамил-триптофана и дезоксирибонуклеината натрия, в комплексном лечении больных с симптоматическими - стрессовыми и НПВС-ассоциированными - эро-зивно-язвенными поражениями гастродуоденальной зоны, в патогенезе которых значительную роль играют нарушения иммунной системы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Крулнова, Т.С. Макроморфологическая характеристика слизистой оболочки желудка мышей, получающих цитопротекторную терапию [Текст] / Т.С.Крупнова, Ю.А.Тазина, Д.С.Блинов, В.П.Балашов // Материалы XXXVIII научной конференции. «Огаревские чтения» медицинского института Модовского Университета. - Саранск, 2009. - С. 65 - 66.

2. Крулнова, Т.С. Морфологическое обоснование антиульцероген-ной терапии в эксперименте [Текст] / Т.С.Крупнова, Ю.А.Тазина, Д.С.Блинов, В.П.Балашов, И.В.Бровкина, Е.В.Блинова // Морфология. - 2009. -Т. 136, №4.-С. 134-136.

3. Тазина, Ю.А. Гатропротекторная активность дерината и некоторых антиоксидангных средств в условиях стресс-индуцированной гатропатии [Текст] / Д.С.Блинов, Ю.А.Тазина, Т.С.Крупнова, Л.В.Ванькова, Е.В.Блинова // Материалы XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2010. - С. 580-581.

4. Блинов, Д.С. Патогенетическое обоснование эффективности препаратов с иммуномодулирующей и цитопротекторной активностью в коррекции эрозивно-язвенных гатродуоденопатий различной этиологии [Текст] / Д.С.Блинов, Ю.А.Тазина, Т.С.Крупнова, Л.В.Ванькова, Е.В. Шилова // Медицинский альманах. -2010. - Т. 10, № 1. - С. 134-135.

5. Крупнова, Т.С. Эффективность дезоксирибонуклеината натрия и деанола ацеглумата в коррекции экспериментальной эрозивно-язвенной гаст-родуоденопатии [Текст] / Т.С.Крупнова, М.В.Вертянкин, Е.В.Блинова, Е.В.Шилова// Материалы XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей с международным участием «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье». - СПб., 2011.-С. 140-141.

6. Блинова, Е.В. Эффективность деанола ацеглумата и дерината в коррекции эрозивно-язвенных гастродуоденопатий, протекающих на фоне сахарного диабета и иммобилизации в эксперименте [Текст] / Е.В.Блинова, Д.С.Блинов, Т.С.Крупнова, Е.Д.Гогина, М.В.Вертянкин, Е.В.Шилова, Л.В.Пивкина // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Алмазовские чтения-2011». - СПб, 2011. -С. 54.

7. Блинов, Д.С. Исследование гастропротекторной активности глу-тамил-триптофана при стрессе [Текст] / Д.С.Блинов, Е.Д.Гогина, Т.СКрупнова, Е.В.Блинова, М.В.Вертянкин // Вестник новых медицинских технологий. - 2011. - №1. - С, 123-125.

Подписано в печать 19.01.2012 г.

Заказ № 334 Типография ООО "Медлайн-С" 125315, г. Москва, Ленинградский пр-т, д.78, к.5 Тел.(499)152-00-16 Тираж 100 шт.