Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Инволюционные изменения кожи и их коррекция с применением комплекса протеогликанов и каратиноидов

На правах рукописи

Коргунова Регина Викторовна

ИНВОЛЮЦИОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОЖИ И ИХ КОРРЕКЦИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОМПЛЕКСА ПРОТЕОГЛИКАНОВ И КАРОТИНОИДОВ

14 00.11 - кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2005

Работа выполнена в отделениях научном консультативно-диагностическом и патоморфологическом Федерального Государственного Учреждения «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Росздрава» и отделениях морфологии и биохимии Федерального Государственного Учреждения «Научно-исследовательский институт физико-химической медицины Росздрава»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, академик РАМН Анна Алексеевна Кубанова

доктор медицинских наук, академик РАМН Валерий Иванович Сергиенко

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук

доктор биологических наук, профессор

Ольга Сергеевна Панова Людмила Игоревна Маркушева

Ведущее научное учреждение:

Российский Университет Дружбы Народов, г Москва

Зашита диссертации состоится « » 2005 года в 12 часов дня

на заседании Диссертационного совета Д-208 115 01 в Федеральном Государственном Учреждении «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Росздрава» по адресу 107076, г Москва, ул. Короленко, д 3, корп 4

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ЦНИКВИ Росздрава» по адресу 107076, г Москва, ул Короленко, д 3, корп.4.

Автореферат разослан « » 2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета Кандидат медицинских наук

Н К Иванова

&06-Ч

9т

Общая характеристика работы

Актуальность. Старение кожи является частью необратимых биологических процессов, протекающих в организме и обусловленных генетическими, эндокринными нарушениями, а также воздействием окружающей среды, включая УФ-излучение В основе патогенеза биологического и фотоиндуцированного старения кожи лежат нарушения в системе антиоксидангной защиты клетки, приводящие к деструкции биомембран, перекисному окислению липидов (Танков О.П.,1997, Орлов Е.В, Шакуров И.Г. с соавт ,1998; Тедеско А ,1998; Хертель Б.,2000; Исаков С А с соавт., 2001). Эта изменения приводят к формированию морщин, сухости кожи, потере ее упругости и эластичности. Основываясь на патогенезе процесса старения, представляется возможным разработать методы коррекции инволюционных изменений. Поиск новых методов коррекции инволюционно-измененных тканей липа выделен в перспективное направление дермагокосметологии (Кубанова А.А, 1998; Скрипкин Ю.К с соавт., 1999; Коновалова ЭК. с соавт., 1998; Эрнандес Е.И. с соавт,2000; Панова О.С., 2001; Fitzpatrick Т. В., Bernhard J D, 1993; Buettner G R., 1993; Carrulhers A. et al., 1996)

Однако до настоящего времени изучены только общие механизмы биологического старения, но не описаны более тонкие звенья патогенеза старения, не проведено сопоставление прооксидантной и антиоксидангной систем сыворотки крови, не изучался микрорельеф и количественные характеристики эластических волокон эпидермиса у пациеэток различных возрастных групп.

Цель исследования. Изучить признаки и механизмы физиологического старения кожи и разработать метод коррекции возрастных изменений с помощью комплекса протеогликаиов и каротиноидов. Задачи исследования

1. Провести морфологическое исследование и изучить состояние структуры коллагеновых и эластических волокон дермы у пациенток с физиологическим старением кожи

2. Изучить стереоультрасгруктуру клеток рогового слоя эпидермиса у пациенток с клиническими признаками физиологического старения кожи.

3. Изучить и провести сравнительный анализ антиоксидаягаой активности ферментов в сыворотке крови (супероксиддосмутазы, катал азы, глутатионпероксидазы) и вторичных продуктов окисления липидов (ТБК - реактивных продуктов, диеновых коныогатов) пациенток различных возрастных трупп.

4 Разработать методы профилактики и коррекции инволюционных изменений кожи лица на основании биохимического исследования прооксидантного и антиоксидантного статуса

■'и*.. 11лц.т>11/0«ьид<< БИБЛИОТЕКА

сыворотки крови, электронной микроскопии поверхности кератиноцитов и гистологического исследования биоптатов кожи с оценкой состояния эластических волокон. Научная новизна. В результате морфологического исследования и морфометрического анализа установлены структурные изменения коллагеновых и количественные изменения эластических волокон дермы у пациенток с клиническими признаками биологического старения У пациенток старше 45 лет отмечается уменьшение количества эластических волокон с 7,2% до 2,6% на единицу площади в сравнении с пациентками 18-20 лет

Впервые разработан математический метод объективизации микрофотографий и введено понятие «условные единицы рельефности», позволяющее провести сравнительный анализ показателей рельефа кожи пациенток различных возрастных групп и классов морщин При исследовании микрорельефа рогового слоя эпидермиса пациенток возрастной группы 25-34 лет показатель рельефности составил 2,748±0,2 условные единицы, у падаенток возрастной группы старше 45 лет - 3,378±0,3.

Впервые изучены показатели автиоксиданггной активности сыворотки крови (СОД, каталазы, глутзтионпероксядазы) и содержание продуктов пероксидации липидов (ТБК-реактивных продуктов, диеновых коньюгагов) у пациентов с физиологическим старением кожи в различных возрастных группах. Проведен сравнительный анализ показателей антиоксидантной активности и показателей продуктов пероксидации липидов у пациентов, принимающих антиоксидангный комплекс и не использующих его

Впервые объективно установлено положительное влияние антиоксидантов на структуру кожного профиля при 6-месячном системном приеме антиоксидантного комплекса в группе 25-34 лет на 0,972±0,2 условные единицы, отмечено изменение сгереоультраструктуры эпидермиса - уменьшение рельефности и складчатости в группе старше 45 лет на 1,943±0,3 условные единицы рельефности.

Установлено, что шестимесячный курс применения антиоксидантного комплекса вне зависимости от возраста пациенток приводит к уменьшению в сыворотке крови первичных и вторичных продуктов ПОЛ (диеновых коньюгагов на 31±8 мкМ (р<0,05) и карбонильных соединений на 0,30 ± 0,04 мкМ (р<0,05) в среднем) и вызывает повышение активности СОД на 1,92 ± 0,27 ед/мг гемоглобина (р<0,05), глутатиояпероксидазы на 1,75 ± 0,51 ед/мг гемоглобина (р<0,05) и каталазы на 189 ± 59 мкмоль Н2Ог в мин на 1 мг гемоглобина (р<0,05) в среднем, что означает частичное подавление интенсивности свободнорадикальных процессов в крови Практическая значимость.

Установлено, что морфологические признаки биологического старения имеются уже в возрасте 25 лет.

Возрастные изменения в коже сопровождаются параллельно нарастающими изменениями активности перекисного окисления липидов крови и антиокислигельной системы. Эти изменения имеют противоположную направленность- уровень продуктов перекисного окисления липидов с возрастом нарастает, а активность ангаоксидаптов снижается Выявленные закономерности служат прямым основанием для назначения комплекса аятиоксцдантов, как протективного средства при биологическом старении кожи.

В результате изучения прооксицангаого статуса установлен уровень реактивных продуктов тиобарбитуратовой кислоты, который составил в возрастной группе 25-35 лет 0,52±0,11 мкМ, 3 5-45 лет - 0,57±0,14 мхМ, старше 45 лет - 0,71±0,15 мкМ (р>0,05) и уровень диеновых конъюгатов у женщин в возрасте 25-35 лет составил 75±3,1 мкМ, 35-45 лет -81±2,4 мкМ, старше 45 лег - 83±2,4 мкМ (р>0,05).

При исследовании антиоксидангаого статуса установлен уровень супероксиддисмутазы в возрастной группе 25-35 лет равный 4,3±0,4 ед/мг гемоглобина, в груше 35-45 лет - 3,9±0,7 ед/мг гемоглобина, в группе старше 45 лет - 3,2±0,5 ед/мг гемоглобина (р0,05); уровень глутатионпероксидазы в группе 25-35 лет составил 4,6±0,5 ед/мг гемоглобина, в группе 35-45 лет - 4,1 ±0,6 ед/мг гемоглобина, в группе старше 45 лет -3,2±0,9 ед/мг гемоглобина (р>0,05), уровень катал азы в возрастной группе 25-35 лег -995±59 мкмоль/мин/мг, в группе 35-45 лет - 938±62 мкмоль/мин/мг, в группе старше 45 лег - 863±75 мкмоль/мин/мг (р>0,05).

В результате изучения антиоксидаятного и прооксидантного статуса, установлена стадийность процесса, зависимость от активности воздействия физических факторов, определена доза и продолжительность применения препарата Имедин (комплекса протеогликанов и каротиноидов). Схема применения зависит от возраста и класса морщин пациенток' в возрасте 25-44 лет и при наличии 1 класса морщин по 3,125 г в сутки и в возрасте 45-55 лет и при наличии 2 класса морщин по 6,25 г в сутки во время еды. Доказана необходимость проводимой системной антноксидаятной терапии сроком не менее 6 месяцев Данный метод коррекции инволюционных изменений кожи, может быть рекомендован в широкую дерматокосметологическую практику. Основные положения, выносимые на защиту.

1 Повышение активности перекисного окисления липидов способствует преждевременному старению кожи.

2 У женщин с возрастом меняются показатели антиокислительной системы, стереоультрасгруктура эпидермиса, количество эластических и структура коллагеновых волокон.

3 Основным направлением профилактики преждевременного биологического старения является системный прием ангиоксидангных комплексов Внедрение работы. Результат работы внедрены в клиническую практику научного консультативно-диагностического отделения и учебную программу последипломной подготовки врачей в шпсле врачебной косметологии Федерального Государственного Учреждения «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Росздрава»

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов (7-10 июня 2005 года)

Публикации По теме диссертации опубликовано 3 научные работы

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах машинописного

текста, иллюстрирована 16 таблицами и 25 рисунками

Диссертация состоит из введения и 4 глав' «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», «Результаты исследования», «Результаты лечения», а также заключения, выводов и списка литературы, включающего 115 источников (54 на русском и 61 на иностранных языках)

Содержание работы.

Материалы и методы исследования. В период 2001-2004 гг под наблюдением в научно-консультативном отделении ФГУ ЦНИКВИ Росздрава наблюдались 94 пациентки в возрасте от 25 до 65 лет с клиническими проявлениями биологического старения кожи (1-2 класс морщин по Т В. Fitzpatrick) (таблица 1)

Таблица 1.

Классификация моршнн по морфо-функциональиым особенностям

Класс моршнн Характеристика Число пациенток абс.(отиос-)

Первый Невыраженные морщинки с тонко-подчеркнутой линией и прекрасной текстурой в количестве 1-3 32(34%)

Второй Средней выраженности морщины с небольшой дисхромией, средним папиллярным эластозом, умеренной глубины в количестве 1-6 62(66%)

ВСЕГО 94(100%)

Критериями исключения из исследования стали кожные заболевания в стадии обострения, аутоиммунные заболевания, системные болезни крови, беременность, гинекологические заболевания и заболевания ЖКТ, местное использование ретиноидов и других средств коррекции инволюционных изменений в течение последних 6 месяцев, а

также все хронические соматические заболевания в стадии обострения и курение более 10 сигарет в день.

После проведенного комплексного обследования, у 54 (57,4%) из 94 пациенток диагностированы следующие сопутствующие заболевания вне стадии обострения гасгродуоденит - у 16 (17%), миомы различной локализации - у 14 (14,8%), мастопатии в 11 (11,7%) случаях, хронический тонзиллит у 8 (8,5%), мигрень - в 7 (7,4%) случаях, дискинезия ЖВП - у 5(5,3%), вегето-сосудистая дистопия - у 4(4,2%), у 1 (1%) - язва желудка и 12-перстной кишки, у 1 (1%) - хронический пиелонефрит, 1(1%) аднексит, 1(1%) хронический колит Пациент с сопутствующими заболеваниями были обследованы врачами других специальностей, назначено соответствующее лечение.

Все женщины были обследованы у гинеколога-эндокринолога с целью выявления гормональных дисфункций, лица с выявленными заболеваниями не включались в исследование Критерием отбора пациенток старше 45 лет являлось наличие менопаузы.

Пациентки были разделены на три возрастные подгруппы: 25 - 34 лет, 35-44 лет и пациентки старше 45 лет (таблица 2)

В зависимости от метода коррекции обследованные женщины разделены на две группы основную - 72 пациентки (83,7%), принимавшие антиоксидаптный комплекс (препарат Имедин) и группу сравнения - 22 пациентки (16,3%), не принимавшая комплекс.

Таблица 2

Распределение пациентов по возрасту

Возрастная группа Число пациенток Число пациенток

(лет) основной группы группы сравнения

абсолют. % абсолют. %

25-34 16 22,2 5 22,7

35-44 26 36,1 7 31,8

старше 45 30 41,7 10 45,5

ВСЕГО 72 100 22 100

Средний возраст обследованных женщин составил в основной группе - 42.3 ± 0,5 года, в группе сравнения - 42,7 ± 0,5 года

Возрастные характеристики основной и группы сравнения соответствовали друг другу, не отмечалось достоверного различия между пациентками данных групп (р>0,05)

С целью объективизации эстетического эффекта производили цифровую фотограф010 фациальной зоны (в двух проекциях - обзорная и прицельная фотография с соблюдением стандартных ракурсов съемки, вариантов освещенности) до начала и через 3,

6 месяцев после коррекции Использовали автоматическую цифровую камеру Canon Power Shot S45 (Япония)

Всем пациентам были проведены общеклинические исследования общий анализ крови и мочи, биохимическое исследование крови, анализ кала на дисбактериоз Морфологическое исследование биоптатов кожи проведено у 13 пациенток различных возрастов Материалом для морфологического исследования пациенток различных возрастных групп служили биоптаты кожи, взятые с тыльной поверхности кисти как наиболее подверженные биологическому и фотостарению Исследуемый материал окрашивали по общепринятой методике гематоксилин-эозином и по Вейгергу

Исследование отпечатков поверхности кератиноцитов методом TAPfc-STRIPPED произведено у 24 женщин различных возрастных групп на 0, 3 и 6 месячных этапах в лаборатории электронной микроскопии Института физико-химической медицины. Изменение стереоультрасгруктуры изучали с помощью отпечатков липкой ленты, полученных с поверхности кожи латеральной части окологлазничной области и покрытых золотом в диодном спутере (FIKO Ю-З(Япония)). Образцы анализировали в растровом (сканирующем) микроскопе S-530 (Hitachi (Япония)) при ускоряющем напряжении 15 кВ Для объективизации полученных микрофотографий разработан «показатель рельефности», вычисляемый по формуле A=Si-S2 и выраженный в условных единицах, где Si- толстая структура; вг-тонкая структура, Д-разница характеризующая долю особенностей на изображении, коррелирующую со степенью полученных изменений

Исследование прооксидантного и антиоксидантного статусов проводили у пациенток основной и группы сравнения по стандартным методикам до и через 3 и 6 месяцев терапии В сыворотке крови измеряли накопление вторичных продуктов перекисного окисления лшщдов (продуктов альдегидной природы, в основном малоновый диалъдегид) и диеновых кояъюгатов Антиоксидантный статус характеризовали по активности антиокислительных ферментов - супероксиддисмутазы, глутагионпероксидазы и каталазы

Все методы, оборудование и приборы имели государственную регистрацию и разрешены к применению на территории России

Статистическая обработка данных проводилась с помощью компьютерных программ «EXCKL'97 FOR WINDOWS», «GRAPHER», «STATISTICA 5,0 i-OR WINDOWS». Результаты клинических и экспериментальных исследований обрабатывали с применением квадратов разностей и использованием t-критерия Стьюдента Статистически значимыми считали показатели с уровнем вероятности не менее 95%

Результаты собственных исследований.

В качестве группы сравнения для оценки изменений, полученных у пациенток с биологическим старением, изучались коллагеновые и эластические волокна у женщин 18-2О лет, полученные при взятии биоптатов с закрытых участков кожи.

В результате полученных исследований выявлено, что коллагеновые волокна представлены тонкими пучками соединительной ткани, ориентированными в различных направлениях, в сетчатом слое дермы образуют более плотную сеть. Вокруг сосудов поверхностного сплетения скудные гисгао-лимфоцитарные инфильтраты При дополнительной окраске по Вейгерту эластические волокна структурированы, в сосочковом слое располагаются перпендикулярно базалыюй мембране. В сетчатом слое дермы эластические волокна анастомозируют друг с другом, образуя петлистую сеть. При морфометрическом анализе количество эластических волокон составило 7,2%.

При изучении биоптатов кожи пациенток возрастной группы 25-34 обнаружены признаки биологического старения: коллагеновые волокна умеренно уплотнены в верхней половине дермы, имеются нарушения структуры эластических волокон В сосочковом слое дермы эластические волокна практически отсутствуют, в сетчатом слое эластические волокна обнаруживаются в виде утолщенных, фрагменгированных пучков, беспорядочно ориентированных и разволокненных Вокруг сосудов поверхностного сплетения обнаруживаются скудные гисгао-лимфоцитарные инфильтраты При морфометрическом анализе количество эластических волокон составило 6%.

При морфологическом исследовании кожи пациенток возрастной группы 35-44 с признаками биологического старения определены следующие изменения При окраске по Вейгерту эластические волокна утолщены, особенно в ретикулярной дерме, частично с признаками фрагментации, имеют вид спиралевидного скручивания и обнаруживаются в виде очень мелких фрагменгированных структур (по типу пунктирных линий), в сетчатом слое эластические волокна имеют вид утолщенных, спирально закрученных пучков, ориентированных в различных направлениях. Как в сосочковой, так и в сетчатой дерме выявляется умеренно выраженный интерстициальный отек При морфометрическом анализе количество эластических волокон составило 4,1%.

При изучении биоптатов кожи пациенток в возрастной группе старше 45 лет выявлены изменения структуры эластических волокон - фрагментация и нарушение ориентации В сосочковом и сетчатом слоях дермы эластические волокна обнаруживаются в виде мелких, утолщенных, фрагменгированных структур. Отмечается уплотнение коллагеновых волокон, как в верхних, так и в нижележащих отделах дермы, что приводит к сглаживанию дермальных сосочков, наблюдается очаговая гиалинизагом. При

морфометрическоч анализе обнаружено уменьшение количества эластических волокон на единицу площади (по сравнепию с возрастпой группой 25-34 лет) до 2.6% Вокруг сосудов поверхностного сплетения обнаруживаются скудные гистио-лимфоцитарные инфильтраты

Таким образом полученные данные свидетельствуют о том, что у пациенток всех возрастных групп наблюдаются в различной степени выраженные признаки биологического старения кожи, выражающиеся уменьшением количества эластических волокон с 7,2% до 2,6% (при сравнении пациенток 18-20 и старше 45 лет)

При анализе стереоультраструктуры клеток рогового слоя эпидермиса кожи латеральной области глаз у 9 пациенток возрастной 1руппы 25-34 обнаружено, что корнеоциты располагаются группами, между которыми находятся пространства (30 х 100 микрон), свободные от прикрепленных клеток Основным элементом рельефа поверхности кожи являются гребни, длиной от 3-12 микрон, высотой и шириной 1 мкм На микрофотографиях при большем увеличении (х 1000-2000) удается различить структуры, похожие на микроворсинки, высотой 0.3-0,2 мкм и длиной 0,5-1 мкм (рисунок 1)

Рисунок 1 Микрорельеф поверхности корнеоцитов пациентки Е (возрастная группа 25-34) Увеличение х1000

Таким образом, у женщин возрастной группы 25-34 лет, обнаружены возрастные дегенеративные изменения, появление умеренной рельефности исследуемых участков, соответствующих начальным признакам старения кожи (1 класс морщин по Фитцпатрику)

При изучении стереоультраструктуры корнеоцитов у 5 пациенгок возрастной группы 35-44 лет значимых отличий от возрастной группы 25-34 лет не обнаружено

При исследовании стереоультраструктуры рогового слоя эпидермиса, у 10 пациенток возрастной группы старше 45 лет при малых увеличениях (х500) обнаружены следующие изменения: корнеоциты располагаются островками, между которыми находятся (приблизшельно 30 х 100 микрон) пространства, свободные от прикрепленных клеток, вс1речаются единично расположенные клетки Основным рельефообразующим элементом

являются гребни, длиной от 5 - 15 мкм (микрон), высота этих гребней 2 мкч и ширина приблизительно 1 мкм Также встречаются образования, напоминающие микроворсинки или «блебсы», которые представляют собой возвышающиеся нал корпеоцитом структуры, высотой 0,4 - 0,3 мкм и длиной 1,5-2 мкм (рисунок 2).

ШШ^Шж^ШЩШШШШШШЖ

о.. <, \, ^ 'у"*" Г с е с о 1 1 о у, .- ШШШ'кШ. Л \ У

Рисунок 2 Микроре1ьеф поверхности корнеоцитов пациентки Р (возрастная ¡руппа старше 45 лет) Увеличение х1 ООО

Таким образом, в результате исследований стерео\ тьтраструктуры участков кожи латеральной области гла! показано, что у женщин в вофасгной группе старше 45 лет, выявлены выраженные инволюционные изменения кожи. характеризующиеся «складчатостью и морщинистостью» и ыубокой рельефностью стереоультраструкгуры эпидермиса, чго соответствует выраженным признакам старения (2 класс морщин по Фитцпатрику)

Для объективизации полученных результатов разработаны «условные единицы рельефности», позволяющие оценить структуру микрорельфа керашноциюв магматическим методом

В рс!\льтате проведенною сравнительного анализа установлено, что показатель рельефности пациенток возрастной гртлшы 25-34 лег с 1 классом морщин составил 2 748±0 2 \словных е шниц, показатеп, рельефности у пациенток возрастной группы старше 45 лст со 2 классом морщин - 3,378-0,3 условны* единиц

Показатели рельефа кожи пациенток возрастных групп 25-34 и старше 45 лет

Гв возрастная группа 25-35 лет а возрастная группа старше 45 лет |

*

Количественная оценка продуктов перекисною окисления липидов (ПОЛ) крови предоставляет возможность оценить активность снободнорадикальных процессов, протекающих как в органах и тканях, так и в коже.

Изучение уровня реактивных продуктов тиобарбитураювой кислоты и диеновых конькиатов у пациенток различных возрастных групп показало следующие результаты (таблица 3)

Таблица 3

Уровень реактивных продушив Iиобарбитуратовой кислоты и диеновых конъюгатов

в сыворо1ке крови у пациенток различных возрастных групп

Возрастная группа (лет) Число пациенток (абсол /относ) ТБК-реакт ивные продукты, мкМ диеновые , конъюгаты, мкМ 1

25-34 16 (22,2%) 0,52±0,11 75±3,1 !

35-44 26(36,1%) 0,57*0,14 81+6,1

старше 45 30(41,7%) 0,71±0,15 83+2,4 !

*- достоверное изменение при сравнении признаков меж,[у собой (р< 0,05)

Таким образом, с увеличением во ¡рас га и выраженности процессов старения наблюдалась тенденция к увеличению уровня 'ПЖ-реактивных продуктов (р>0,05)

Уровень антиокислительных ферментов в различных возрастных т-руинах составил (таблица 4)

Таблица4

Активность супероксиддиемутазы, глутатионпероксндазы и каталазы у пациенток

всех возрастных групп

Возрастная группа (лег) Число пациенток (абсол./относ) СОД, ед/мг гемоглобина ГП, ед/мг гемоглобина Каталаза, МКМОЛЬ Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина

25-34 16 (22,2%) 4,3±0,4 4,6±0,5 995±59

35-44 26(36,1%) 3,9±0,7 4,1±0,6 938±62

старше 45 30(41,7%) ЗД±0,5 3,2±0,9 863±75

*-достоверное изменение при сравнении признаков между собой (р< 0,05)

Таким образом, с увеличением возраста и выраженности процессов старения наблюдалась тенденция к снижению уровня показателей всех антиокислительных ферментов (р>0,05)

Выявленные выраженные изменения признаков старения, характеризующиеся снижением количества эластических волокон, наличием глубокой рельефности сгереоультраструктуры эпидермиса, тенденцией к нарушению аигиокислигельных процессов, послужили поводом для назначения антиоксидантного комплекса Препарат Имедин. произведенный компанией Рептсал А/Б (Дания) (регистрационный номер РК-ЛП-5X2000041), содержащий активные компоненты 105 мг Вютаппе Сошр1ех™ (экстракт из морепродуктов и полисахариды), 100 мг ЬисоРЬепсе 08™ - 29 мг Ьисорегеюш аезси1етшт (экстракта томатов) и 28 мг УШэ ушГета Ь. (экстракта косточек винограда), 30 мг экстракта Ацеролы и неактивные компоненты' микрокристаллическая целлюлоза 80,78 мг и диоксид кремния 4,22 мг Пациентки основной группы (72 женщины) получали препарат на протяжении 6 месяцев В зависимости от выявленных изменений пациентки с 1 типом морщин (возрастная группа 25-34) получали комплекс в дозировке 3,125 грамм (1 таблетка) в сутки, пациентки со 2 типом морщин (возрастные труппы 35-44 и старше 45 лет) принимали комплекс по 6,25 грамм (2 таблетки одновременно) в сутки во время еды Группе сравнения коррекционная терапия не проводилась

При изучении микрофотографий, выполненных через 6 месяцев у пациенток группы 25-35 лет, на фоне проведенной терапии, отмечено, что клетки рогового слоя эпидермиса расположены по всей поверхности пленки Часто встречаются корнеоциты, расположенные в несколько слоев Анализ микрорельефа корнеоцитов после лечения при больших увеличениях показал, что на всей поверхности исследуемых участков практически отсутствуют гребни, лишь на некоторых корнеоцитах обнаруживается незначительное

количество «микроворсинкоподобных» структур, длиной 0,2-0,1 мкм и высотой 0,5-1 мкм (рисунок 5)

При изучении микрофотографий, выпотненных через 6 месяцев после проведенной терапии, при малом увеличении у пациенток группы старше 45 лет, выявлено, чю клетки рогового слоя эпидермиса также занимают всю поверхность, изредка удается обнаружить

места, свободные от корнеоцитов Встречаются корнеоциты, расположенные в несколько слоев Анализ микрорельефа корнеоцитов при больших увеличениях показал, что на их поверхности полностью отсутствуют 1 ребни. лишь на некоторых корнеоцитах обнаруживается незначительное количество «микроворсинкоподобных» структур, размером 0,3 - 0,2 мкм и высотой 1 мкм (рисунок 7)

тттящжш

тщщжжт^шшйгш

¡ШШШШШМШШШ-

Рисунок 4,5. Микрорельеф поверхности корнеоцитов пациентки Е. (возрастная группа 2534) до и после 6 месяцев приема Имедина. Увеличение хЮОО

Рисунок 6.7 Микрорельеф поверхности корнеоцитов пациентки Р (возрастная группа старше 45 лет) до и после 6 месяцев приема Имедина Увеличение хЮОО

Таким образом, исследование рельефа кожного профиля методом пектронной микроскопии через 6 месяцев, позволяют сделать вывод, что использование антиоксидаиттгого комплекса оказывает положительное влияние на структуру рогового слоя эпидермиса, приводит к уменьшению рельефности и склалчагости поверхности \ пациенток всех возрастных групп

В результате проведенного сравнительного анализа графических изображений отмечено, что «рельефность» поверхности кожи через 6 месяцев приема антиоксидантного комплекса, уменьшается в группе пациенток 25-34 года на 0,972±0,2 условные единицы; старше 45 лет на 1,943±0,3 (рисунок 8)

Рисунок 8

Показатели рельефа кожи пациенток возрастных групп 25-34 и старше 45лет после применения антиоксидантного комплекса

группа 25-35 лет

группа старше 45 лет

8 до начала коррекции В после проведенной коррекции

Таким образом проведенная коррекция в течение полугода, приводит к сглаживанию рельефа кожного профиля у пациенток всех возрастных групп

Па фоне проведенной терапии антиоксидантным комплексом в течение 3-х месяцев у пациенток всех возрастных групп отмечается тенденция к снижению уровня реактивных продуктов тиобарбитуратовой кислоты (р>0,05) (таблица 3)

Таблица 3.

Уровень реактивных продуктов тиобарбитуратовой кислоты и изменение

параметров

(А-снижевне) в сыворотке крови у пациенток различных возрастных групп и через 3 и 6 месяцев на фоне коррекции

Возрастная группа (лег) число пациенток (абсол /относ) до начала коррекции через 3 месяца (Д) через 6 месяцев (Д)

25-34 16 (22,2%) 0,52±0,11 - 0,11±0,12 - 0,27±0,08*

35-44 26 (36,1%) 0,57±0,]4 - ОД2±ОДЗ - 0,32±0,07*

старше 45 30(41,7%) 0,71 ±0,15 - 0.10±0,14 -0,31 ±0,09*

(Д) - изменение абсолютных величин прооксидантной активности ферментов сыворотки крови, *-достоверное изменение при сравнении данных до и после лечения (р<

0,05)

Полученные данные доказывают, что через 6 месяцев приема антиоксидангного комплекса уровень ТБК-реактивных продуктов достоверно снижался в среднем на 0,30 ± 0,04 мкМ (Л*) во всех возрастных группах (р<0,05)

На фоне 3-х месячного приема компленкса, отмечается тенденция к снижению уровня диеновых коиьюгатов у пациенток различных возрастных трупп (р>0,05) (таблица 4)

Таблица 4

Уровень диеновых коиьюгатов и изменение параметров (А-уменыпение) в сыворотке

крови у пациенток различных возрастных групп и через 3 и 6 месяцев на фойе коррекции

Возрастная группа (лет) число пациенток (абсол./относ) до начала коррекции через 3 месяца, (Д) через 6 месяцев, (Д)

25-34 16 (22,2%) 75±3,1 -10±7 -28±0,08*

35-44 26(36,1%) 81±6,1 -11±11 -30±0,06*

старше 45 30 (41,7%) 83±2,4 -14±9 -35±0,11*

(Д) - изменение абсолютных величин прооксидантной активности ферментов сыворотки крови, *-достоверное изменение при сравнении данных до и после лечения (р< 0,05)

Через 6 месяцев отмечалось достоверное снижение уровня диеновых конъюгатов у пациенток всех возрастных групп в среднем на 31±4 мкМ (р<0,05)

Полученные данные свидетельствуют о том, что через 6 месяцев приема препарата пациентками интенсивность процессов ПОЛ в крови замедлялась, что и нашло свое отражение в достоверном снижении продуктов ПОЛ в сыворотке крови (р<0,05)

На фоне проведенной коррекции антиоксидантным комплексом в течение 3-х месяцев у женщин всех возрастных групп отмечается тенденция к увеличению уровня СОД (р>0,05) (таблица 5)

Таблица 5

Изменение активности супероксиддисмутазы (А- увеличение) у пациенток всех

возрастных групп и через 3 и 6 месяцев на фоне коррекции

Возрастная группа (лет) число пациенток (абсол./относ.) до начала коррекции через 3 месяца (Д) через 6 месяцев (А)

25-34 16 (22,2%) 4,3±0,4 +0,23±0,12 +2,00±0,41*

35-44 26 (36,1%) 3,9±0,7 +0,19±0,29 +1,96±0,32*

старше 45 30 (41,7%) 3,2±0,5 +0,22±0,28 ■И,78±0,34*

(Д) - изменение абсолютных величин антиоксидангной активности ферментов сыворотки крови; "-достоверное изменение при сравнении данных до и после лечения (р<0,05)

Через 6 месяцев ангаоксидангаой коррекции активность СОД достоверно возрастала и составила 1,92 ± 0,27 ед/мг гемоглобина (Д*) в среднем у пауциенток всех возрастных групп (р<0,05)

На фоне применения антиоксидантного комплекса в течение 3-х месяцев у пациенток всех возрастных трупп отмечается тенденция к увеличению уровня глугатионпероксидазы (р>0,05) (таблица 6)

Таблица 6.

Изменение активности глутатнонпероксидазы (А-увеличение) у пациенток всех

возрастных групп и через 3 и 6 месяцев иа фоне коррекции

Возрастная группа (лет) число пациенток (абсол./относ) до начала коррекции через 3 месяца (А) через 6 месяцев (А)

25-34 16(22,2%) 4,6±0,5 +0,33±0,39 +2,10±0,39*

35-44 26 (36,1%) 4,1±0,6 +0,48±0,44 +1,66±0,43*

старше 45 | 30(41,7%) 3,2±0,9 +0,13±0,51 +1,95±0,46*

(Л) - изменение абсолютных величин антиоксидангной активности ферментов сыворотки крови; '-достоверное изменение при сравнении данных до и после лечения (р<0,05)

Через 6 месяцев приема препарата активность глутатионпероксидазы достоверно возрастала и составила 1,75 ± 0,51 ед/мг гемоглобина.

Анализ изменения активности каталазы показал, что у пациенток всех возрастных групп через 3 месяца приема комплекса отмечалась тенденция к некоторому увеличению активности антиокислителыкн о фермента (р>0,05) (таблица 7)

Таблица 7

Изменение активности каталазы (Д-увеличение) у пациенток всех возрастных групп

и через 3 и 6 месяцев на фоне коррекции

Возраст (лет) число пациенток (абсол /относ) до начала коррекции через 3 месяца (А) через 6 месяцев(Д)

25-34 16 (22,2%) 995±59 +30±32 +218±77*

35-44 26(36,1%) 938*62 +41±78 +174±67*

старше 45 30 (41,7%) 863±75 +55±45 +195±44*

(А) - изменение абсолютных величин антиоксидантной активности ферментов сыворотки крови; '-достоверное изменение при сравнении данных до и после лечения (р<0,05)

Через 6 месяцев приема антиоксидантного комплекса у пауциенток всех возрастных группах активность каталазы достоверно возрастала и составила 189 ± 59 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина (Д*)(р<0,05).

Полученные данные доказывают, что через б месяцев проводимой терапии, эффективность антиокислительной ферментативной системы крови достоверно повышалась (р<0,05) Это позволяет сделать вывод, что у пациенток, на протяжении 6 месяцев принимающих Имедин, происходит частичное подавление интенсивности свободнорадикальных процессов в крови и положительная динамика клинических проявлений старения кожи. Выводы:

1 Признаки биологического старения кожи у женщин морфологически проявляются с 25 летнего возраста Они заключаются в уменьшении количества эластических и нарушении структуры коллагеновых волокон Количество эластических волокон прогрессивно уменьшается 7,1 % - 18 лет, 6% - 25-34 года, 4,1% - 35-44 года, 2,6% - старше 45 лет

2 Показатель рельефности рогового слоя эпидермиса коррелирует с возрастом и классом морщин В возрастной группе 25-34 с 1 классом морщин составляет 2,748±0,2 условные единицы, в группе старше 45 лет со 2 классом морщин - 3,378±0,3 условные единицы

3 С увеличением возраста наблюдается тенденция к снижению уровня активности антиокислительных ферментов супероксидцисмутазы, глутатионпероксидазы, каталазы в

возрастной группе 25 - 34 года - 4,3±0,4 и 4,6±0,5 ед/мг гемоглобина, 995±59 мкмоль IhOi в мин на 1 мг гемоглобина соответственно, в группе 35 - 44 года - 3,9±0,7 и 4,1 ±0,9 ед/мг гемоглобина, 938±62 мкмоль ЬЬСЬ в мин на 1 мг гемоглобина соответственно, в группе старше 45 лет - 3,2±0,5 и 3,2±0,9 ед/мг гемоглобина и 863±75 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина (р>0 05), соответственно Наблюдается тенденция к увеличению активности продуктов перекисного окисления лигшдов реактивных продуктов шобарбитуратовой кислоты и диеновых коньюгатов в возрастной группе 25 - 34 года 0,5±0,1и 75±3,1 мкМ соответственно; в группе 35 - 44 года - 0,6±0,1 и 81±6,1 мкМ соответственно, в группе старше 45 лет - 0,7±0,2 и 83±2,4 мкМ (р>0,05), соответственно

4 Системное применение антиоксидантного комплекса, как протективното средства в течение 6 месяцев приводит к сглаживанию кожного профиля и уменьшению рельефности и складчатости поверхности в среднем на 1,457±0,25 условных единиц рельефности во всех возрастных группах Происходит повышение уровня антиокислительных ферментов сыворотки крови в возрастных группах 25-34, 35-44 и старше 45 лет супероксиддисмутазы на 2,0±0,4, на 2,0±0,3, на 1,8±0,3 ед/мг гемоглобина (р<0,05), соответственно, глутатионпероксидазы на 2,1±0,4 ед/мг , на 1,7±0,4 и на 2,0±0,5 ед/мг гемоглобина (р<0,05), соответственно; катал азы на 218±77, на 174±67 и на 195±44 мк/моль/мг гемоглобина Ср<0,05), соответственно Отмечено снижение уровня продуктов прооксидантного статуса в возрастных группах 25-34, 35-44 и старше 45 лет ТБК-реактивных продуктов на 0,3±0,1, на 0,3±0.1 и на 0,3±0,1 мкМ (р<0,05), соответственно; диеновых коньюгатов на 28±0 1, на 30±0,1 и на 35±0,1 мкМ (р<0,05), соответственно

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Korgunova R V., Kubanova A A Assesment of antioxidant properties of «Imedeen® Time Perfection™» used for prevention of premature and light-induced skin agening // Reactive oxygen and nitrogen species, ontioxidants and human health Internation conference work collection -Smolensk, Russia, 2003 -P 191.

2 Коргунова P В Результаты исследования антиоксидантного и прооксидантного статусов сыворотки крови у пациенток, принимающих Имедин // Сборник тезисов научных работ IX Всероссийского съезда дерматовенерологов - М ,2005 - Т I -С 93.

3 Коргунова Р В Результаты электронной микроскопии кожного профиля у женщин различных возрастных групп с признаками биологического старения на фоне лечения антиоксидаитным комплексом // Сборник тезисов научных работ ГХ Всероссийского съезда дерматовенерологов - М. 2005 -Т I -С 93

Коргунова Регина Викторовна

Инволюционные изменения кожи и их коррекция с применением комплекса протеогликанов и каротиноидов

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЛИЦЕНЗИЯ ПД № 00608

Формат 60x84/16 1,25 усл. п.л.

Бумага офсетная 80 гр. Тираж 110 экз. Заказ № 112

Отпечатано с готовых о/м в типографии ООО «Медина-Принт» ул. Новослободская д. 14/19 стр. 5 тел./факс: 787-62-21

р 1 1 L 6 i

РНБ Русский фонд

2006-4 9946

Старение кожи является частью необратимых биологических процессов, протекающих в организме и обусловленных генетическими, эндокринными факторами, а также воздействием окружающей среды, включая УФ-излучение. В основе патогенеза биологического и фотоиндуцированного старения кожи лежат нарушения в- системе антиоксидантной защиты клетки, приводящие к деструкции биомембран, перекисному окислению липидов (Танков О.П.,1997; Орлов Е.В., Шакуров И.Г. с соавт.,1998; Тедеско А.,1998; Хертель Б.,2000; Исаков С.А. с соавт., 2001). Эти изменения приводят к формированию морщин, сухости кожи, потере ее упругости и эластичности. Основываясь на патогенезе процесса старения, представляется возможным разработать методы коррекции инволюционных изменений. Поиск новых методов коррекции инволюционно-измененных тканей лица выделен в перспективное направление дерматокосметологии (Кубанова А.А., 1998; Скрипкин Ю.К. с соавт., 1999; Коновалова Э.К. с соавт., 1998; Эрнандес Е.И. с соавт.,2000; Панова О.С., 2001; Fitzpatrick Т. В., Bemhard J. D., 1993; Buettner G.R., 1993; Carruthers A. et al., 1996).

Однако до настоящего времени изучены только общие механизмы биологического старения, но не описаны более тонкие звенья патогенеза старения, не проведено сопоставление прооксидантной и антиоксидантной систем сыворотки крови, не изучался микрорельеф и количественные характеристики эластических волокон эпидермиса у пациенток различных возрастных групп.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Изучить признаки и механизмы физиологического старения кожи и разработать метод коррекции возрастных изменений с помощью комплекса протеогликанов и каротиноидов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Провести морфологическое исследование и изучить состояние структуры коллагеновых и количество эластических волокон дермы у пациенток с физиологическим старением кожи.

2. Изучить стереоультраструктуру клеток рогового слоя эпидермиса у пациенток с клиническими признаками физиологического старения кожи.

3. Изучить и провести сравнительный анализ антиоксидантной активности ферментов в сыворотке крови (супер оксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы) и вторичных продуктов окисления липидов (ТБК - реактивных продуктов, диеновых конъюгатов) пациенток различных возрастных групп.

4. Разработать методы профилактики и лечения инволюционных изменений кожи лица на основании биохимического исследования прооксидантного и антиоксидантного статусов сыворотки крови, электронной микроскопии поверхности кератиноцитов и гистологического исследования биоптатов кожи с оценкой состояния эластических волокон.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

В результате морфологического исследования и морфометрического анализа установлены структурные изменения коллагеновых и количественные изменения эластических волокон дермы у пациенток с клиническими признаками биологического старения. У пациенток старше 45 лет отмечается уменьшение количества эластических волокон с 7,2% до 2,6% на единицу площади в сравнении с пациентками 18-20 лет.

Впервые разработан математический метод объективизации микрофотографий и введено понятие «условные единицы рельефности», позволяющее провести сравнительный анализ показателей рельефа кожи пациенток различных возрастных групп и классов морщин. При исследовании микрорельефа рогового слоя эпидермиса пациенток возрастной группы 25-34 лет показатель рельефности составил 2,748±0,2 условные единицы, у пациенток в возрастной группы старше 45 лет - 3,378±0,3.

Впервые изучены показатели антиоксидантной активности сыворотки крови (СОД, каталазы, глутатионпероксидазы) и содержание продуктов пероксидации липидов (ТБК-реактивных продуктов, диеновых конъюгатов) у пациентов с физиологическим старением кожи в различных возрастных группах. Проведен сравнительный анализ показателей антиоксидантной активности и показателей продуктов пероксидации липидов у пациентов, принимающих антиоксидантный комплекс и не использующих его.

Впервые объективно установлено положительное влияние антиоксидантов на структуру кожного профиля при 6-месячном системном приеме антиоксидантного комплекса в группе 25-34 лет на 0,972±0,2 условные единицы, отмечено изменение стереоультраструктуры эпидермиса - уменьшение рельефности и складчатости в группе старше 45 лет на 1,943±0,3 условные единицы рельефности.

Установлено, что шестимесячный курс применения антиоксидантного комплекса, вне зависимости от возраста пациенток, приводит к уменьшению в сыворотке крови первичных и вторичных продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов на 31 ±8 мкМ (р<0,05) и карбонильных соединений на 0,30 ± 0,04 мкМ (р<0,05) в среднем) и вызывает повышение активности уровня антиокислительных ферментов (СОД на 1,92 ± 0,27 ед/мг гемоглобина (р<0,05), глутатионпероксидазы на 1,75 ± 0,51 ед/мг гемоглобина (р<0,05) и каталазы на 189 ± 59 мкмоль Н2Ог в мин на 1 мг гемоглобина (р<0,05) в среднем), что означает частичное подавление свободнорадикальных процессов в крови.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Установлено, что морфологические признаки биологического старения имеются уже в возрасте 25 лет.

Возрастные изменения в коже сопровождаются параллельно нарастающими изменениями активности перекисного окисления липидов крови и антиокислительной системы. Эти изменения имеют противоположную направленность: уровень продуктов перекисного окисления липидов с возрастом нарастает, а активность антиоксидантных ферментов снижается. Выявленные закономерности служат прямым основанием для назначения комплекса антиоксидантов, как протективного средства при биологическом старении кожи.

В результате изучения прооксидантного статуса установлен уровень реактивных продуктов тиобарбитуратовой кислоты, который составил в возрастной группе 25-34 лет 0,52±0Д1 мкМ, 35-44 лет - 0,57±0,14 мкМ, старше 45 лет - 0,71±0Д5 мкМ (р>0,05) и уровень диеновых конъюгатов у женщин в возрасте 25-34 лет составил 75±ЗД мкМ, 35-44 лет - 81±2,4 мкМ, старше 45 лет -83±2,4 мкМ (р>0,05).

При исследовании антиоксидантного статуса установлен уровень супероксиддисмутазы в возрастной группе 25-34 лет равный 4,3±0,4 ед/мг гемоглобина, в группе 35-44 лет - 3,9±0,7 ед/мг ~гемоглобина," в~ группе "старше ~45~~лет~- 3,2±0,5 "ед/мг гемоглобина (р0,05); уровень глутатионпероксидазы в группе 2534 лет составил 4,6±0,5 ед/мг гемоглобина, в группе 35-44 лет -4Д±0,6 ед/мг гемоглобина, в группе старше 45 лет - 3,2±0,9 ед/мг гемоглобина (р>0,05); уровень каталазы в возрастной группе 25-34 лет - 995±59 мкмоль/мин/мг, в группе 35-44 лет - 938±62 мкмоль/мин/мг, в группе старше 45 лет - 863±75 мкмоль/мин/мг (р>0,05).

В результате изучения антиоксидантного и прооксидантного статуса, установлена стадийность процесса, зависимость от активности воздействия физических факторов, определена доза и оптимальная продолжительность применения с помощью препарата Имедин (комплекса протеогликанов и каротиноидов). Схема применения зависит от возраста и класса морщин пациенток: в возрасте 25-34 лет и при наличии 1 класса морщин по 3,125 г в сутки и в возрасте старше 45 лет и при наличии 2 класса морщин по 6,25 г в сутки во время еды. Доказана необходимость проводимой системной антиоксидантной терапии сроком не менее 6 месяцев. Данный метод коррекции инволюционных изменений кожи, может быть рекомендован в широкую дерматокосметологическую практику.

ВНЕДРЕНИЕ РАБОТЫ.

Результаты работы внедрены в клиническую практику научного консультативно-диагностического отделения и учебную программу последипломной подготовки врачей в цикле врачебной косметологии Федерального Государственного Учреждения «Центральный научно-исследовательский кожновенерологический институт Росздрава».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации доложены на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов (7-10 июня 2005 года) и V Международном конгрессе эстетической медицины (15-17 сентября 2005 года).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ.

ВЫВОДЫ

1. Признаки биологического старения у женщин проявляются с 25 летнего возраста. Они заключаются в уменьшении количества эластических и нарушении структуры коллагеновых волокон. Количество эластических волокон прогрессивно уменьшается: 7,1% -18 лет, 6% - 25-34 лет, 4,1% -35-44 лет, 2,6% - старше 45 лет.

2. Показатель рельефности рогового слоя эпидермиса коррелирует с возрастом и классом морщин. В возрастной группе 25-34 лет с 1 классом морщин составляет 2,748±0,2 условные единицы, в группе старше 45 лет со 2 классом морщин - 3,378±0,3 условные единицы.

3. С увеличением возраста наблюдается тенденция к снижению активности антиокислительных ферментов супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы, каталазы: в возрастной группе 25 - 34 лет - 4,3±0,4 и 4,6±0,5 ед/мг гемоглобина, 995±59 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина соответственно; в группе 35 - 44 лет - 3,9±0,7 и 4,1±0,9 ед/мг гемоглобина, 938±62 мкмоль Н202 в мин на 1 мг гемоглобина соответственно; в группе старше 45 лет - 3,2±0,5 и 3,2±0,9 ед/мг гемоглобина и 863±75 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина (р>0,05), соответственно. Наблюдается тенденция к увеличению активности продуктов перекисного окисления липидов реактивных продуктов тиобарбитуратовой кислоты и диеновых конъюгатов: в возрастной группе 25 - 34 лет 0,5±0,1и 75±3,1 мкМ соответственно; в группе 35 - 44 лет - 0,6±0,1 и 81±6,1 мкМ соответственно; в группе 45 - 55 лет - 0,7±0,2 и 83±2,4 мкМ (р>0,05), соответственно.

4. Системное применение антиоксидантного комплекса, как протективного средства в течение 6 месяцев приводит к сглаживанию кожного профиля и уменьшению рельефности и складчатости поверхности в среднем на 1,457±0,25 условные единицы рельефности во всех возрастных группах. Происходит повышение уровня антиокислительных ферментов сыворотки крови в возрастных группах 25-34, 35-44 и старше 45 лет: супероксиддисмутазы на 2,0±0,4, на 2,0±0,3, на 1,8±0,3 ед/мг гемоглобина (р<0,05), соответственно; глутатионпероксидазы на 2,1±0,4 ед/мг , на 1,7±0,4 и на 2,0±0,5 ед/мг гемоглобина (р<0,05), соответственно; каталазы на 218±77, на 174±67 и на 195±44 мк/моль/мг гемоглобина (р<0,05), соответственно. Отмечено снижение уровня продуктов прооксидантного статуса в возрастных группах 25-34, 35-44 и старше 45 лет: ТБК-реактивных продуктов на 0,3±0,1, на 0,3±0,1 и на 0,3±0,1 мкМ (р<0,05), соответственно; диеновых коньюгатов на 28±0,1, на 30±0,1 ина35±0,1 мкМ (р<0,05), соответственно.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В современном мире увеличивается продолжительность жизни, возрастает желание продлить молодость, в связи с этим, эстетическое восприятие и здоровье личности становится все более актуальным, являясь критерием комфорта индивидуума и показателем качества жизни человека.

Процессы старения кожи непосредственно связаны с проблемой старения организма. Основным патогенетическим механизмом старения является накопление клеточных повреждений, вызванных действием активных форм кислорода и продуктов, образующихся в результате взаимодействия с биологически активными молекулами, а также нарушения в системе антиоксидантной защиты клеток, приводящие к деструкции биомембран, перекисному окислению липидов и ДНК, мутациям. Поэтому изучение механизмов физиологического старения кожи с комплексной оценкой изменений ферментативной активности про- и антиоксидантных статусов сыворотки крови с одной стороны, и, параллельно изучение изменений рельефа кожи на уровне стереоультраструктуры, а также гистологическое исследование биоптатов кожи с морфометрическим подсчетом количества эластических волокон у пациенток различных возрастных групп и возможность коррекции изменений с помощью патогенетически обоснованных средств для предотвращения клинических признаков старения и улучшения внешности, является актуальной проблемой косметологии.

Литературные данные не достаточно полно освещают данную проблему: в 1987 году В.Г.Акимов изучил свободнорадикальное окисление липидов у больных фотодерматозом и дискоидной красной волчанкой; в 1988 году появились работы Сулеймановой Г.Г., посвященные интенсивности свободнорадикального окисления, активности « гидролаз лейкоцитов крови у больных лейкоплакией слизистой полости рта:

Процессы свободнорадикального окисления при приеме системных антиоксидантов, а именно антиоксид антная и прооксидантная защита ферментов сыворотки крови у женщин с биологическим старением кожи, подтвержденная данными стереоультраструктуры и морфологическим исследованиями эпидермиса не описаны.

Все вышесказанное явилось поводом для проведения настоящего исследования и разработки нового метода эффективной косметологической коррекции инволюционно-измененнной кожи.

Под наблюдением находилось 94 женщины, с проявлениями биологического старения кожи лица, в возрасте от 25 до 55 лет с 12 классами морщин по Фитцпатрику, сформировавшие основную группу, которой назначалась антиоксидантная коррекционная терапия. Для более, точной характеристики и оценки динамики изменений, пациентки основной группы разделены на три возрастные группы - 25-34 лет, 35-44 лет и старше 45 лет. Для объективизации и контроля, отобрана группа сравнения, находившаяся без лечения, в составе 22 женщин, соответствующих по возрасту и клиническим признакам пациенткам основной группы.

Основной группе назначался антиоксидантный препарат Имедин (Ferrosan A/S, Дания). В состав Имедина входят протеогликаны и каротиноиды. Предполагалось, что антиоксид анты, перехватывающие активные формы кислорода и свободные радикалы, препятствуют развитию свободнорадикальному перекисному окислению липидов, защищая структурные элементы кожи от повреждения.

Схема коррекции пациенток основной группы: 3,125 г (1 таблетка) назначалось женщинам с 1 классом морщин, 6,25 г (2 таблетки) - со 2 классом морщин в сутки во время еды, продолжительностью - 6 месяцев.

У 13 пациенток всех возрастных групп, на фоне 6-месячного приема антиоксидантного препарата, проведено гистологическое исследование биогггатов кожи для оценки состояния эластических волокон. В результате исследования, выявлены структукрные изменения коллагеновых и количественные изменения эластических волокон, соответствующие данным В.Н. Мордовцева и Г.М. Цветковой (1993). У пациенток возрастных групп 25-34 лет и 35-44 лет, коллагеновые волокна умеренно уплотнены в верхней половине дермы, в возрастной группе 45-55 лет, наблюдалось уплотнение и утолщение коллагеновых волокон и в нижележащих отделах дермы, их расположение параллельно поверхности эпидермиса, приводящее к сглаживанию сосочков. С увеличением возраста1 эластические волокна утолщаются, частично фрагментируются и располагаются войлокообразно. Подобные изменения с нарастанием, в зависимости от степени инволюционных изменений, соответствуют описанию ультраструктуры дермы Marta Y. Petersen (2002) и 3. Гетлинг (2002). В литературе не найдено данных морфометрического анализа у женщин с признаками биологического старения в зависимости от возраста. В нашем исследовании при морфометрическом анализе у пациенток старше 45 лет отмечается уменьшение количества эластических волокон на единицу площади по сравнению с возрастом 18-20 лет (с 7,2% до 2,6%).

До начала исследования, через 3 месяца и через 6 месяцев после назначения коррекционной терапии, у женщин всех возрастных групп для изучения эффективности проводимой терапии, проведена электронная микроскопия рогового слоя эпидермиса. Подобные исследования не проводились для оценки динамики изменения рельефа эпидермиса на фоне антиоксидантной терапии. У пациенток всех возрастных групп на микрофотографиях обнаружены изменения, свидетельствующие о возрастной инволюции кожи различной степени выраженности, соответствующие 1 и 2 классам морщин, характеризующиеся' «складчатостью и морщинистостью» стереоультраструктуры эпидермиса и различной степени выраженности рельефности исследуемых структур. При изучении фотографий, выполненных через 6 месяцев после проведенной терапии, у всех пациенток основной группы уменьшилась рельефность и складчатость поверхности (в среднем на 1,457 условные единицы рельефности), обнаружена положительная динамика в картине, отображающей структуру кожного профиля и гладкости кожи. Следовательно, применение антиоксидантного комплекса улучшает структуру эпидермиса.

Параллельно проведено биохимическое исследование прооксидантного статуса сыворотки крови пациенток с признаками старения, где изучено накопление вторичных продуктов окисления липидов - ТБК-реактивных продуктов и диеновых коньюгатов, а также исследование антиоксидантного статуса сыворотки крови с измерением содержания антиокислительных ферментов - супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и каталазы. Подобных исследований для изучения клинических признаков старения кожи не проводилось.

При исследовании прооксидантного статуса исходный уровень ТБК-реактивных продуктов у пациенток возрастной группы 25 - 34 лет составил 0,52±0,11 мкМ; в возрастной группе 35 - 44 лет - 0,57±0,14 мкМ; в группе 45-55 лет - 0,71±0,15 мкМ; исходный уровень диеновых коныогатов в группе 25 - 34 лет составил 75±3,1 мкМ; в группе 35 - 44 лет - 81±6,1 мкМ; в группе 45-55 лет - 83±2,4 мкМ, (р>0,05).

После проведенного биохимического исследования установлено, что применение препарата не оказывало закономерного влияния на активность прооксидантных ферментов; крови в течение 3-х месяцев его использования, наблюдали лишь тенденцию к некоторому снижению ТБК-реактивных продуктов и» диеновых конъюгатов (р>0,05). Через 6 месяцев приема препарата выявлено достоверное снижение ТБК-реактивных продуктов, которое составило 0,30 ± 0,04 мкМ (р<0,05) в среднем во всех возрастных группах. В группе 25 - 34 лет - 0,27±0,08 мкМ (р<0,05), 0,32±0,07 мкМ (р<0,05) в группе 35 - 44 лет и 0,31±0,09 мкМ (р<0,05) в группе 45-55 лет. В- группе 25 - 34 лет зарегистрировано ■ достоверное уменьшение уровня диеновых конъюгатов Д составила 28±8 мкМ (р<0,05), в группе 35 - 44 лет -30±6 мкМ (р<0,05); в группе 45-55 лет - 35±11мкМ (р<0,05). Это говорит о том, что только через 6 месяцев приема препарата интенсивность процессов ПОЛ в крови замедлялась, что и нашло свое отражение в достоверном снижении продуктов ПОЛ в сыворотке крови (р<0,05).

При исследовании исходного уровня антиокислительных ферментов получены следующие результаты: уровень СОД в возрастной группе 25 - 34 лет составил 4,3±0,4 ед/мг гемоглобина; в группе 35 - 44 лет - 3,9±0,7 ед/мг гемоглобина; в группе 45-55 лет - 3,2±0,5 ед/мг гемоглобина; уровень глутатионпероксидазы в группе 25 - 34 лет составил 4,6±0,5 ед/мг гемоглобина; в группе 35 - 44 лет - 4,1±0,675 ед/мг гемоглобина; в группе 45-55 лет - 3,2±0,9 ед/мг гемоглобина; уровень каталазы в группе 25 - 34 лет составил 995±59 мкмоль Н2Ог в мин на 1 мг гемоглобина; в группе 35-44 лет - 938±62 мкмоль Н2Ог в мин на 1 мг гемоглобина; в группе 45-55 лет - 863±75 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина, (р>0,05).

Через 3 месяца, на фоне проводимой терапии, во всех возрастных группах при исследовании антиоксидантного статуса выявлена тенденция к увеличению активности супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и каталазы, (р>0,05). Через 6 месяцев приема препарата активность СОД достоверно возрастала и А составила 1,92 ± 0,27 ед/мг гемоглобина в среднем у всех возрастных групп (р<0,05). В группе 25 - 34 лет - 2,0±0,4 ед/мг (р<0,05), в группе 35 - 44 лет - 2,0±0,3 ед/мг (р<0,05) и в группе 45-55 лет - 1,78±0,3 ед/мг (р<0,05). Через 6 месяцев приема препарата, активность глутатионпероксидазы достоверно возрастала и А составила 1,75 ± 0,51 ед/мг гемоглобина в среднем у всех возрастных групп (р<0,05). В группе 25 - 34 лет - 2,1±0,4 ед/мг (р<0,05), в группе 35 - 44 лет 1,7±0,4 ед/мг (р<0,05), в группе 45-55 лет - 2,0±0,5 ед/мг(р<0,05). Активность каталазы достоверно возрастала и А составила 189 ± 59 мкмоль Н2О2 в мин на 1 мг гемоглобина соответственно (р<0,05). В группе 25 - 34 лет -218±77 мкмоль/мин/мг гемоглобина (р<0,05), в группе 35 - 44 лет

174±67 мкмоль/мин/мг гемоглобина (р<0,05) и в группе 45-55 лет -195±44 мкмоль/мин/мг гемоглобина(р<0,05). Таким образом, обнаружено достоверное увеличение активности антиокислительных ферментов во всех возрастных группах через 6 месяцев приема препарата (р<0,05).

В крови пациенток, не получавших коррекционную терапию группа сравнения, как через 3, так и через 6 месяцев исследования не наблюдалось изменения уровня активности как диеновых конъюгатов и ТБК-реактивных продуктов, так и СОД, каталазы и глутатионпероксидазы.

Суммируя результаты исследований, можно констатировать, что антиоксидантный препарат Имедин, в составе которого присутствуют протеогликаны и каротиноиды, через 6 месяцев применения оказал положительное влияние на структуру рогового слоя эпидермиса. После проведенной терапии в основной группе произошли следующие изменения: у пациенток всех возрастных групп произошло сглаживание рельефа кожного профиля, увеличение активности антиокислительных ферментов и снижение уровня продуктов перекисного окисления липидов, следовательно, произошло частичное подавление интенсивности свободнорадикальных процессов в крови, которое привело к положительной динамике в клинике инволюционных изменений кожи. Переносимость препарата на протяжении всего курса лечения хорошая. Осложнения на фоне применения препарата отметили 25 (35%) пациенток за время всего исследования. Наблюдались обострение акне 5(7%), усиление себореи 8(11%) составили большинства кожных проявлений, среди остальных осложнений наиболее часто встречались отеки 4(5,6%) и увеличение массы тела на 0,5-4 кг у 17 (23,6%) пациенток.

Таким образом, антиоксидантную терапию для коррекции и профилактики признаков биологического и фотостарения, следует назначать длительностью не менее 6 месяцев.