Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Иммуноцитохимический метод в дифференциальной диагностике первичных и метастатических новообразований внутригрудной локализации
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.01.12
Автореферат диссертации по медицине на тему Иммуноцитохимический метод в дифференциальной диагностике первичных и метастатических новообразований внутригрудной локализации
На правах рукописи
МБХЕДА Лариса Владимировна
ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПЕРВИЧНЫХ И МЕТАСТАТИЧЕСКИХ НОВООБРАЗОВАНИЙ ВНУТРИГРУДНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ
14.01.12 - онкология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
1 3 ЛЕН 2012
Москва-2012
005057326
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина» Российской академии медицинских наук (директор - академик РАН и РАМН, профессор Давыдов Михаил Иванович)
Научный руководитель: Доктор медицинских наук, профессор, руководитель цитологической лаборатории Центральной клинической больницы №1 Открытого акционерного общества
"Российские железные дороги" Наум Абрамович Шапиро Официальные оппоненты:
Валентин Сергеевич Мазурин доктор медицинских наук, профессор,
заведующий кафедрой онкологии и торакальной хирургии, руководитель хирургического торакального отделения ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского Евгения Владиславовна Степанова доктор медицинских наук,
заведующая лабораторией биомаркеров и механизмов опухолевого ангио -генеза НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им Н. Н. Блохина» РАМН
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научный центр рентгенорадиологии" Минздравсоцразвития РФ
Защита состоится £/ 2012 г. в ^часов на заседании
диссертационного совета Д 001.017.01 Федерального государственного бюджетного учреждения «Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина» Российской академии медицинских наук (115478, Москва, Каширское шоссе, 23).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН (115478, г. Москва Каширское шоссе, 24). Автореферат разослан <гЧ 2012 г.
/у*
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Юрий Йладимирович Шишкин
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Общеизвестно, что решение о проведении и объеме иммуноцитохимического (ИЦХ) исследования принимается после проведения стандартного (рутинного) цитологического исследования. Поэтому в нашей работе под термином «ИЦХ» подразумевается комплекс исследований, включающий в себя рутинное цитологическое исследование и собственно иммуноцитохимическое.
Актуальность темы
Несмотря на широкое внедрение цитологического метода в практику лечебных учреждений, его высокую достоверность, он имеет свои пределы и ограничения. Определение гистологической формы опухоли при использовании рутинного цитологического метода оказывается возможным в 60-70% наблюдений.
Лишь в половине случаев, при опухолях внутригрудной локализации, по результатам рутинных цитологических исследований клиницист получает от цитопатолога уверенный диагноз с указанием гистогенеза опухоли и еще реже - с указанием её органной принадлежности. В этих ситуациях, а также тогда, когда получение материала для гистологического исследования затруднено или невозможно по каким-то иным причинам, дополнительные методы цитологической диагностики приобретают особую значимость и становятся порой единственным шансом на установление полноценного морфологического диагноза.
Вышеизложенное подчеркивает актуальность проблемы, а полученные данные позволяют определить научно-обоснованные показания к выбору диагностической тактики в морфологическом анализе при первичных и метастатических образованиях внутригрудной
локализации и как следствие - повышению эффективности лечебных мероприятий.
Цель исследования
Совершенствование цитологической диагностики первичных и метастатических образований внутригрудной локализации с использованием жидкостной цитологии и иммуноцитохимического метода.
Задачи исследования
1. Изучить возможности ИЦХ - метода в диагностике первичных опухолей и метастатических новообразований внутригрудной локализации
2. Сопоставить и проанализировать результаты ИЦХ и ИГХ методов при первичных и метастатических новообразованиях внутригрудной локализации
3. Выработать алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистогенеза и органопринадлежности новообразований
внутригрудной локализации
4. Оцененить преимущества и недостатки использования жидкостной
цитологиим при ИЦХ исследовании.
5. Провести анализ и установить причины ошибок цитологической и ИЦХ диагностики в определении гистогенеза и органопринадлежности новообразований внутригрудной локализации
Научная новизна
На морфологическом материале из новообразований внутригрудной локализации сопоставлены данные ИЦХ с использованием жидкостной цитологии с результатами рутинной гистологии и ИГХ, что позволило оценить эффективность, диагностическую точность цитологического
4
исследования, дополненного иммуноцитохимическими исследованиями в опухолях различного гистологического типа и органной принадлежности.
Предложен новый подход к приготовлению и обработке цитологических препаратов для иммуноцитохимического исследования с использованием жидкостной цитологии, что позволяет стандартизировать исследование, получить клетки в монослое и сэкономить дорогостоящие реактивы, снизив их расход в 6-8 раз, сократить время приготовления и просмотра материала.
Предложен новый подход к определению панели МКАТ и к выполнению ИЦХ исследования.
Научно-практическая значимость
На основании проведенного анализа Предложен принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и просмотра материала.
Выработан алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистогенеза опухоли лёгкого и органной при его метастатическом поражении.
Данный алгоритм, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и просмотра материала может быть рекомендован к внедрению в практику онкологических учреждений.
Основные положения, выносимые на защиту.
• Использование метода жидкостной цитологии позволяет получить при исследовании серию стандартизированных достаточно информативных монослойных препаратов.
• Наличие достаточного количества стандартизированных, идентичных препаратов делает возможным, при необходимости,
расширение панели МКАТ без дополнительного получения материала.
• При определении гистологической формы первичный опухолей легких ИЦХ значимо дополняет рутинную цитологию.
• При метастатическом поражении легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры ИЦХ демонстрирует высокую диагностическую точность в определении органопринадлежности опухоли.
• Сопоставляя результаты ИЦХ и ИГХ можно говорить о том, что метод иммуноцитохимической диагностики не уступает методу ИГХ по своим возможностям и может использоваться наравне с ним. Апробация
Апробация состоялась 13 июня 2012 года на совместной научно-практической конференции с участием лаборатории клинической цитологии, отделения хирургического №2 (диагностики опухолей), эндоскопического, хирургического торакального, отделения женской репродуктивной системы, лаборатории иммунологии гемопоэза, кафедры онкологии ФУВ РНИМУ им Пирогова.
Структура и объем работы Диссертация состоит из списка сокращений, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты собственных исследований», которая включает в себя раздел «Обсуждение результатов собственных исследований», заключения, выводов и списка литературы, включающего 50 отечественных и 104 зарубежных источника. Материалы диссертации изложены на 140 страницах машинописного текста и иллюстрированы 26 таблицами и 59 рисунками.
Материалы и методы
Основой для исследований послужил цитологический материал, полученный из опухолевых новообразований легких и метастатических
поражений внутригрудных лимфатических узлов и плевры больных, проходивших лечение в РОНЦ им H.H. Блохина в период с 2009 по 2012 гг. До момента забора материала пациентам не проводилось противоопухолевого лечения по поводу первичного процесса или возникшего прогрессирования заболевания.
На материале, полученном от 210 больных, выполнено 1288 иммуноцитохимических исследований, приготовленных двумя методами: «жидкостная цитология» (1138 препаратов) и приготовленных обычным (стандартным) способом (150 препаратов).
Иммуноцитохимические исследования проводились на дооперационном, или интраоперационном материале с целью определения гистогенеза и органной принадлежности опухоли.
Для оценки распространенности опухолевого процесса выполнялось комплексное обследование, включающее: рентгенотомографию грудной клетки, фибробронхоскопию, УЗИ печени, почек и забрюшинного пространства, при необходимости - рентгеновскую компьютерную томографию легких, средостения, брюшной полости, головного мозга, сканирование скелета, а также другие методы диагностики.
Гистологическая структура опухоли определялась при исследовании биопсийного или операционного материала на основе общепринятой классификации, рекомендованной Всемирной Организацией Здравоохранения («Pathology and Genetics of Tumor of the Lung, Pleura, Thymus and Heart» World Health organization Classification of Tumors 2009).
Из 210 человек, материал от которых исследовался цитологически и иммуноцитохимически, мужчин было 129 (61,4%), женщин - 81 (38,6%), соотношение - 1,6 : 1. Возраст пациентов колебался от 28 до 78 лет. Большинство больных находились в возрасте от 45 до 59 лет (53,9%). У мужчин в эту возрастную группу попали 58,1% наблюдения, а у женщин -46,9% случаев.
Пол Всего больных Возраст
до 45 лет 45-59 лет 60-69 лет >70лет
Мужчины 129 (100%) и (8,6%) 75 (58,1%) 39 (30,2%) 4 (3,1%)
Женщины 81 (100%) 9 (11,1%) 38 (46,9%) 26 (32,1%) 8 (9,9%)
Всего 210 (100%) 20 (9,5%) 113 (53,9%) 65 (30,9%) 12 (5,7%)
Первичные опухоли легкого выявлены у 116 (51,26%) человек, а метастатическое поражение легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры - у 94 (44,8%)
У мужчин первичная опухоль легкого встречалась в 65,1% наблюдений (84 больных), у женщин в 39,5% (32 пациентки).
100 90
80 65,1 70 ] 60 50 40 30 20 10 0
60,5
34,9
■
и мужчины я женщины
первичная метастатическое опухоль легкого поражение
Рисунок 1. Характер опухолевого поражения у мужчин и женщин.
Анализ гистологических форм первичных опухолей легкого показал, что аденокарцинома выявлялась чаще (48,3%), чем плоскоклеточный рак (24,1%), остальные гистологические формы представлены меньшим числом наблюдении (таблица №2)
Таблица 2. Типы гистологических форм первичной опухоли легких, диагностированные цитологически и ИЦХ.
Плоскоклеточный рак Аденокарцинома БАР МРЛ Карциноид Всего
28 56 11 11 10 116
(24,1%) (48,3%) (9,5%) (9,5%) (8,6%) (100%)
-------- »»»»«ми "ч'^млч.^п.пс'м
легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры выявила, что наиболее часто проводилась морфологическая дифференциальная диагностика при метастатическом раке молочной железы (22,4%) и раке толстой кишки (19,1%).
Таблица 3. Количество пациентов с метастатическим поражении легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры.
Источник метастазирования Количество %
М1з рака молочной железы 21 22,4
ЛИз рака толстой кишки 18 19,1
рака желудка 9 9,6
Ми рака щитовидной железы 10 10,6
ЗФГ 1 1,1
ДИв меланомы 8 8,5
М{з рака почки И 11,7
Ми саркомы 10 10,6
М1з рака яичников 6 6,4
ВСЕГО 94 100
время хирургического вмешательства (57,6%), а трансторакальная пункция была выполнена каждому третьему пациенту. При этом в 70% наблюдений диагностический материал был получен из легкого. Количество проведенных ИЦХ исследований по этому материалу - 883 (68,6%). Плевральная жидкость послужила материалом для исследования у 11 пациентов - 79 ИЦХ реакций, (таблица № 4)
Таблица 4. Количество проведенных ИЦХ исследований.
Локализация опухоли Количество больных Количество исследований
Абс % Абс. %
Лёгкие 147 70,00 883 68,56
Лимфатические узлы 35 16,7 241 18.7
Плевральная жидкость 11 5,2 79 6,1
Париетальная и висцеральная плевра 17 8,1 85 6,6
Всего 210 100 1288 100
Оценка качества рутинного цитологического материала.
При анализе рутинных цитологических препаратов качество материала можно было признать удовлетворительным в 79 % случаев. В 21% наблюдений к препаратам с неудовлетворительным качеством отнесены:
- клеточный материал скуден и/или «разбросан» по всей площади стекла, что затрудняло поиск диагностическиценного материала;
- клеточный материал в виде нагромождающихся друг на друга скоплений, иногда густо перемешанных с элементами крови и/или клеточным детритом, что делает препарат частично или полностью нечитабельным;
- клеточный материал деформирован и разрушен в процессе приготовления мазка.
Оценка качества цитологического материала, приготовленного по методу «Жидкостной цитологии».
Результаты наших исследований выявили отсутствие морфологических изменений в строении опухолевых клеток и их структурных образованиях даже после пребывания в питательной среде в
течение 48 часов. Все препараты отличались хорошим качеством полученных мазков.
Жидкостная цитология, в отличие от рутинных методов приготовления материала, позволяет:
• готовить препараты хорошего качества. Опухолевые клетки в этих препаратах расположены в монослое, локализованы в ограниченной зоне, клетки максимально сохранны, так как не подвергались жесткому механическому воздействию при нанесении материала на предметное стекло;
• стандартизировать исследования (в том числе ИЦХ);
• не требовать от клинициста повторного получения материала для исследования, в связи с отсутствием жестких ограничений в количестве препаратов, что важно, когда речь идет об ИЦХ;
• избегать неоправданных расходов дорогостоящих реактивов и времени медицинского персонала, так как:
- возможность хранения взвеси клеток в холодильнике в течение как минимум 48 часов позволяет принимать абсолютно взвешенные поэтапные решения о дальнейших диагностических шагах;
- расход ИЦХ реактивов на этих препаратах в 6-10 раз меньше;
- при просмотре информативного препарата с «чистым» фоном и локально расположенным материалом врач-цитопатолог тратит на оценку результатов значительно меньше времени;
• использовать современные компьютерные технологии обработки изображений, проведения морфометрических исследований.
Применение метода жидкостной цитологии при цитологическом и иммуноцитохгшическам исследованиях имеет неоспоримые
преимущества перед рутинным способам приготовления
цитопрепаратов.
Для уточнения гистогенетической и органной принадлежности опухоли проведено 1288 иммуноцитохимических исследований 210 больным.
Алгоритм проведения ИЦХ исследования. Если при рутинном исследовании препаратов цитологом выдано заключение типа
«Злокачественное новообразование неясной этиологии», проводилось ИЦХ с ЕМА и СК
При ЕМА (+) и СК (+) - подтверждается предположение об эпителиальной природе опухоли.
В этом случае, а так же если при рутинном исследовании препаратов цитопатологом выдано заключение
«рак (без дополнительных уточнений)»
Или
«аденокарцинома (без дополнительных уточнений)» проводилось исследование с ТТЛ (основной маркер для аденокарциномы лёгкого).
тт (+)
ТТЛ (+) при ТЪуп^1оЬи1ш (-) ^ аденокарцинома лёгкого ТТЛ (+) при ТЬуп^1оЬиИп (+) рак щитовидной железы**.
ТТЖ1 (-)
в этом случае, а так же, если при рутинном исследовании препаратов цитопатологом высказано предположение о наличии
плоскоклеточного рака, что подтверждается положительной экспрессией СК5/6. СК5/6 (+) ^ рак плоскоклеточный. Если СК 5/6 -или,
если при отрицательном ТТЛ, цитопатолог сохраняет уверенность в том, что он имеет дело с аденогенным раком использовались:
СК7 Обычно положительный в клетках аденокарциномы легкого СК20 Обычно отрицательный в клетках аденокарциномы легкого * ЕМА положительный в клетках эпителиальных опухолей ТЬуп^оЬиИп отрицательный в клетках опухолей легкого ЩПри иммуноцитохимическом подтверждении наличия БАР необходимо учитывать содержание муцина в клетках опухоли.
Муцинозный БАР часто отрицателен с ТОМ ( в среднем в 25% случаев) и может быть положителен с СК20.
**3а исключением опухолей щитовидной железы, все метастатические новообразования легкого отрицательны с ТТЛ.
Для подтверждения нейроэндокринной опухоли, к которым, в соответствии с последней классификацией ВОЗ, относятся:
- мелкоклеточный рак (МРЛ),
- крупноклеточный нейроэндокринный рак (ЬСЫЕС), -типичный карциноид (ТС),
- атипичный карциноид (АС)
используются Ои-отойгапш А и\или Зупар^рЬуят. Определение позитивности одного из этих маркеров достаточно для установления диагноза «нейроэндокринный рак».
Иногда при рутинном цитологическом исследовании рак легкого не обнаруживает морфологических признаков нейроэндокринной опухоли, но демонстрирует иммуноцитохимические доказательства
нейроэндокринной дифференцировки.
Это может произойти в 10 - 20% опухолей, которые оценивались как плоскоклеточные раки, аденокарциномы и крупноклеточные раки, но наблюдается чаще всего в аденокарциномах.
Такие варианты опухоли сегодня принято называть НМРЛ с нейроэндокринной дифференцировкой (HMPJI-ND).
При дифференциальной диагностике с другими раками необходимо учитывать, что клетки нейроэндокринной опухоли реагируют с TTF-1 положительно в 50% -90% случаев; ЕМА положительно; ВегЕР4 положительно; СК20 отрицательно.
ИЦХ диагностика метастазов рака
Все метастатические поражения легкого, за исключением опухолей из щитовидной железы, отрицательны с TTF1.
Для подтверждения предположения о метастазе после оценки морфологических признаков изучаемой опухоли, при необходимости, целесообразно использовать дополнительно следующие МКАТ при подозрении на наличие
рака толстой кишки - Cdx2; рака молочной железы - Estrogen Receptor(ER) и Progesterone receptor; рака щитовидной железы - Thyroglobulin; рака яичника - ER, WT-1, СК7
рака предстательной железы - PSA; рака из желудочно-кишечного тракта -СК20
Значимым дополнением в дифференциальной диагностике органной принадлежности опухолей является совокупная оценка ИЦХ реакций с СК7 и СК20
ИЦХ диагностика метастазов неэпителиальной опухоли Отсутствие экспрессии ЕМА и CK позволяют утверждать о неэпителиальной природе опухоли.
Диагностика метастазов сарком
Все диагностические случаи сарком, подтверждены отсутствием экспрессии ЕМА.
Саркомы, вызывающие трудности при диагностике возможно дифференцировать с другими опухолями с помощью МКАТ, представленных в следующей таблице:
Таблица 5. Оценка наличия экспрессии CD4S; Vimentin; Desmin; S100; клетками различных сарком.
Опухоль CD45 Vimentin Десмин S 100
Остеогенная саркома
Хондросаркома + * •
Рабдомиосаркома + ■
Лимфома + •+ V
С045 использовался только в случае необходимости (по результатам рутинного цитологического исследования) дифференцировки с лимфомой.
Диагностика метастазов меланомы.
Диагностика меланом, как правило, не представляет больших трудностей. Исключение (2-5%) могут составлять невусоподобные, веретеноклеточные или эпителиоидоподобные меланомы с низким содержанием меланина или беспигментные.
В этих случаях крайне ценной оказывается возможность проведения ИЦХ исследования с МКАТ, демонстрирующими экспрессию в клетках меланомы. Это Б-100, НМВ-45, \Timentin, Ме1ап А.
В наших случаях для подтверждения диагноза «Меланома», высказанного по результатам исследования рутинного цитологического материала было достаточно убедиться в экспрессии клетками опухоли
Б-100 и УтаепИп.
Диагностика мезотелиомы
При злокачественной мезотелиоме цитопатолог наблюдает турбопапиллярные или железистые структуры. Часто по рутинному цитологическому материалу дифференциальная диагностика с аденокарциномой бывает затруднена.
В этих случаях для ИЦХ диагностики используются МКАТ, представленные в следующей таблице:
Таблица 6. Совокупная оценка наличия экспрессии некоторых МКАТ в дифференциальной диагностике злокачественной мезотелиомы и аденокарциномы легкого.
Иммуиоцитохимические маркеры Злокачественная мезотелиома Аденокарцинома легкого
ЕМА • .. ' -V - + * , .
СК7
Т1Т-1 +
СК5/6
НВМЕ-1 +
МезоЛеНп ■ - ' .+
В наших случаях в первую очередь нами использовались ПЛ, СК7. При отсутствии их экспрессии в клетках опухоли НВМЕ-1, МезоИгеНп.
На практике не возникало необходимости использовать панель из всех МКАТ, указанных в таблице №6.
Достаточным для исключения мезотелиомы уже являлась положительная экспрессия ТТЛ в клетках опухоли.
Диагностическая точность рутинной цитологии и ИЦХ Для изучения диагностической точности рутинной цитологии и ИЦХ был проведен анализ гистологических (201 случай) и иммуногистохимических (168 случаев) заключений по данной группе наблюдений. Т.е. рутинное гистологическое исследование в 84% случаев было подтверждено иммуногистохимическим методом, что делает проведенный анализ еще более достоверным.
В группе больных раком легкого при определении гистогенеза и органопринадлежности опухоли диагностическая точность цитологического + ИЦХ метода составила 97,3%.
Таблица 7. Количество пациентов, которым проводилось параллельно цитологическое с ИЦХ и гистологическое с ИГХ исследования при диагностике первичных опухолей легкого.
Количество пациентов Количество совпадений а
которым проводилось цитологического я г
Опухоль параллельно с ИЦХ и
(Цитологический диагноз) цитологическое с ИЦХ и гистологического
гистологическое с ИГХ с ИГХ а
исследования исследований в*
Аденокарцинома легкого 51 51
Плоскокклеточный рак 26 26
Мелкоклеточный рак 10 10
Карциноид 10 10
БАР 11 10 1
Диморфный 2 0 2
Итого 110 107 3
В группе больных с метастатическим поражением легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры диагностическая точность цитологического + ИЦХ метода составила 98,9%.
Таблица 8. Количество пациентов которым проводилось параллельно цитологическое с ИЦХ и гистологическое с ИГХ исследования при диагностике вторичных опухолей внутригрудной локализации
Опухоль (Цитология) Количество пациентов которым проводилось параллельно цитологическое с ИЦХ и гистологическое с ИГХ исследования Количество совпадений цитологического с ИЦХ и гистологического с ИГХ исследований Расхождения
М15 рака молочной железы 21 20 1
КИэ рака кишки 18 18
КЙэ рака почки 11 11
саркомы 10 10
М1э рака желудка 9 9
ГуНэ рака щитовидной железы 9 9
Мй меланомы 8 8
М1э рака яичников 4 4
Злокач фиброзная гистиоцитома 1 1
Итого 91 90 1
Расхождений диагноза уровня «наличие - отсутствие опухоли» в
случаях, вошедших в наше исследование, не было.
Сопоставляя результаты ИЦХ и ИГХ методов можно говорить о том, что метод иммуноцитохимической диагностики не уступает методу ИГХ по своим возможностям и может использоваться наравне с ним.
Выводы
1. При рутинном цитологическом исследовании материала из опухолей уверенный диагноз с указанием гистологической формы опухоли выносится лишь в 56% случаев. Заключения, в которых о гистологической форме опухоли говориться в предположительной форме или она не указывается вообще, составляют 44%.
2. Уверенный диагноз с указанием органной принадлежности опухоли в 48% заключений.
3. При определении гистогенеза и органоспецифичности первичных опухолей легкого ИЦХ метод демонстрирует диагностическую точность 97,3%.
4. При определении гистогенеза и органоспецифичности опухоли в группе больных с метастатическим поражением легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры ИЦХ метод демонстрирует диагностическую точность 98,9%.
5. Разработанный алгоритм проведения ИЦХ исследований позволяет, в большинстве случаев, ограничиться двумя — тремя МКАТ и не требует развертывания широкой (дорогостоящей) панели антител.
6. Использование метода жидкостной цитологии позволяет повысить качество и информативность препаратов с 79% при обычном способе приготовления материала до 99%;
7. Метод жидкостной цитологии позволяет стандартизировать препараты для исследования и исключить неоправданные расходы дорогостоящих реактивов и времени медицинского персонала на обработку, просмотр и интерпретацию препаратов.
Список опубликованных работ в журналах, рекомендованных ВАК РФ
1. Городецкий, В.Р. Ревматоидный Артрит с синдромом Шегрена и MALT - лимфомой околоушной слюнной железы, ассоциированный с множественной миеломой. Описание случая и обзор литературы. / В.Р. Городецкий, H.A. Пробатова, O.A. Логвиненко, В.И. Васильев, М.Д. Огородникова, М.В. Симонова, Т.Н. Сафонова, Е.Ю. Варламова, JI.B. Мехеда, Н.В. Малахова, E.JI. Насонов// Научно-практическая ревматология.- 2010. -№ 1.-С. 103-106.
2. Городецкий, В.Р. Ревматическая маска Т-клеточного пролимфоцитарного лейкоза. Описание клинического наблюдения. /
B.Р. Городецкий, В.И. Васильев, Е.В. Николаева, Ю.В. Сидорова,, Т.Н. Обухова, Е.А. Смирнова, H.A. Купрышина, O.A. Логвиненко, М.Д. Огородникова, H.A. Пробатова JI.B. Мехеда, Е.Л. Насонов// Клиническая онкогематология. - 2011. - Т. 4, №1 - С.50 - 53.
3. Богатырев, В.Н. Генетические аспекты метахронного рака молочной железы/ Богатырев, В.Н. К.П.Лактионов, Н.В Лепкова., Л.В. Мехеда, Л.М. Якупова // Российский онкологический журнал. - 2008. - №2. С. 4-8.
4. Лепкова, Н.В. Диагностика метахронного рака молочной железы/ Н.В. Лепкова, К.П.Лактионов, В.Н.Богатырев, Л.М.Якупова, Л В Мехеда//Вестник РОЩ им. Н.Н.Блохина РАМН. -2007.- Т. 18, № 3, -
C. 45-49
Список опубликованных работ
5. Мехеда,Л.В. Возможности цитологической диагностики при заболеваниях легких./ JI.B. Мехеда, Л.П. Карева, В.Н. Богатырев// Новости Клинической цитологии России. - 2010. - Т. 14, №3-4,-С.5-14.
6. Цитологические характеристики гистологических форм рака молочной железы / H.H. Волченко, З.Д. Гладунова, E.H. Славнова, М.В. Савостикова, Вл.С. .Медовый, JI.B. Мехеда, - М.: МНИОИ им.П.А.Герцена, 2003.-31с.
7. Волченко, H.H. Цитологическая диагностика различных форм рака молочной железы/ З.Д. Гладунова, Е.Н.Славнова, Л.В.Мехеда./ Материалы 3 съезда онкологов и радиологов СНГ. - Минск, 2004, -4.1. - С. 301.
8. Мехеда, JI.B. К вопросу о пределах возможностей цитологической диагностики злокачественных опухолей (ошибки и неудачи метода)/ JI.B. Мехеда// Лабораторное дело. - 1990. - №1.- С. 5- 6.
9. Применение электронных технологий в работе лаборатории клинической цитологии: Сборник статей. Лабораторные информационные системы Л.В. Мехеда, С.Б. Богач. - Москва «Лабораторные информационные системы» - 2006. - С 120-126.
Список сокращений
AKJI - аденокарцинома легкого БАР - бронхиолоальвеолярный рак ГРЛ - гигантоклеточный рак легкого DAB - 3,3 - диаминобензидин
ИГХ - иммуногистохимическое определение биомаркеров
ИЦХ - иммуноцитхимическое определение биомаркеров
КРЛ - крупноклеточный рак легкого
МКАТ - моноклональные антитела
МРЛ - мелкоклеточный рак легкого
НМРЛ - немелкоклеточный рак легкого
НЭО - нейроэндокринные опухоли
ОЦК - общие цитокератины
ПРЛ - плоскоклеточный рак легкого
РЭА - раково-эмбриональный антиген
ТАБ - толстоигольная пункционная биопсия
ЦК- цитокератины
ЭМА - эпителиальный мембранный антиген PSA - Prostate-Specific Antigen TTF1 - Thyroid Transcription Factor CK-Cytokeratin
EMA - Epithelial Membrane Antigen HBME - Mesothelial Cell CD45 - Leucocyte Common Antigen ЗФГ - злокачественная фиброзная гистиоцитома
VJ
Подписано в печать 02.08.12 Формат 60x84/16. Бумага офисная «8уе1оСору». Тираж 100 экз. Заказ №977 Отпечатано на участке множительной техники ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН 115478, г. Москва, Каширское ш., 24
Оглавление диссертации Мехеда, Лариса Владимировна :: 2012 :: Москва
Список сокращений.
Цель исследования.
Глава 1 Обзор литературы.
Глава 2 Материалы и методы исследования.
2.1. Характеристика материала.
2.1.1. Получение и подготовка материала к исследованию.
2.2. Приготовление препаратов с использованием методов ЖЦ.
2.3. Метод иммуноцитохимического исследования.
Глава 3 Результаты собственных исследований.
3.1. Использование метода «Жидкостная цитология» для приготовления препаратов.
3.2. Иммуноцитохимический метод в определении гистологической формы опухоли.
3.3. Цитологический и ИЦХ анализ первичных опухолей легкого.
3.4. ИЦХ диагностика метастазов в лёгкие.
3.5. Сопоставление результатов цитологического с ИЦХ и. гистологического с ИГХ исследований.
3.6. Обсуждение результатов собственных исследований.
Введение диссертации по теме "Онкология", Мехеда, Лариса Владимировна, автореферат
в тех случаях, когда затруднено или невозможно дооперационное получение материала для гистологического исследования.
Сопоставление результатов определения экспрессии молекулярных маркеров при ИЦХ и ИГХ проводилось рядом исследователей. Получена хорошая корреляция. Совпадение результатов этих исследований составило от 61% до 92% (Глухова Е.И., 2003; Лукашина М.И., 2003; Афанасьева З.А. и соавт., 2003; 2004; Bozzetti С., 2006 и соавт.).
ИЦХ в своем развитии значительно отстала от ИГХ. Это было связано с трудностями выполнения исследований на обычных мазках. Необходимым условием для точной оценки морфологии клеток при цитологическом исследовании является высокое качество препарата. Эффективность цитологической диагностики зависит от многих факторов: способа и качества получения материала, соблюдения методик фиксации и окрашивания, опыта и профессионализма цитопатолога, от формулировки диагноза, использования дополнительных, современных методов исследования и т.д. (Чепурная Ю.Ю., 2004). Нередко традиционное цитологическое исследование ассоциируется с высоким уровнем ложноотрицательных и ложноположительных результатов (Петрова Г.В., 2003; Grace А. и соавт., 2002).
С появлением жидкостной цитологии (ЖЦ) и, соответственно, возможностью приготовления качественных монослойных препаратов, их стандартизации, ИЦХ выходит на совершенно новый уровень. Сведения об использовании ЖЦ в ИЦХ исследовании в изученной отечественной литературе единичны (Савостикова М.В. 2010).
Жидкостная цитология (ЖЦ) (Liquid based cytology - LB С) по праву занимает важное место среди методов, нацеленных на улучшение качества цитологических препаратов, повышение эффективности цитологической диагностики. Тонкослойные препараты позволяют использовать современные методы автоматизированного скрининга и компьютерные технологии, а также дают возможность проводить молекулярно - биологические исследования. (Шабалова И.П., 2001; 2002; Vassilacos Р. и соавт., 2002; Abulafia О. и соавт., 2003; Parker Е.М. и соавт., 2004; Thienpont L. и соавт., 2004).
ИЦХ исследование может стать решающим, когда имеются трудности в определении гистологического строения опухоли; позволяет обнаружить даже единичные клетки опухоли в пунктате, установить источник метастазирования при невыявленном первичном очаге, определить происхождение метастаза при первично множественных опухолевых поражениях на дооперационном этапе.
Для решения этих задач сегодня может применяться широкий спектр цитоспецифических маркеров. Это тиреоглобулин для выявления метастазов и первичной диагностики папиллярного и фолликулярного рака, кальцитонин - для опухолей из С-клеток, а также простатоспецифический антиген для опредления рака предстательной железы. В настоящее время установлена органоспецифичность метастазов по экспрессии высоко- и низкомолекулярных цитокератинов. (Савелов Н.А и соавт., 2005). Экспрессия Melana А, меланосомного антигена НМВ - 45 позволяет в 80 -100% случаев диагностировать метастазы пигментсодержащей меланомы. Применение моноклональных антител НВМЕ - 1 к мезотелиальному антигену позволяет в 90% наблюдений отличить злокачественную мезотелиому от реактивных изменений мезотелия. Кроме того, экспрессия белков - факторов транскрипции, таких как TTF-1, Cdx2, TFE3 позволяют различить аденокарциному легкого, желудочно-кишечного тракта, подтвердить наличие почечноклеточного рака и т.п.
Таким образом, использование ИЦХ исследований, методов жидкостной цитологии позволит значительно расширить возможности цитологической диагностики первичных и метастатических поражений легких.
Клинические аспекты актуальности.
Согласно последней классификации, рак легкого, подразделяется на две большие группы: мелкоклеточный (MKPJI) и немелкоклеточный (HMPJI) и характеризуется принципиально разными подходами к объему лечения. (ВОЗ, 2004). При HMPJI, как правило, используется хирургический метод лечения. При MKPJ1 - всегда рассматривается консервативная терапия. Обязательным условием для адекватного выбора схемы лечения является чётко установленная гистологическая форма новообразования. Цитологическое исследование приобретает особую ценность при периферическом PJI, когда опухоль недоступна для биопсии. Заключения «немелкоклеточный рак лёгкого» клиницисту недостаточно для определения тактики лечения. Необходимо на дооперационном этапе четко определиться с диагнозом: аденокарцинома (АК), плоскоклеточный рак (ПРЛ), крупноклеточный рак (КРЛ), диморфный рак, карциноид и проч. Кроме того, среди органов, наиболее часто поражаемых метастазами, легкие занимают одно из ведущих мест. Частота и характер метастазирования зависят, как правило, от первичной локализации опухоли. Изолированное метастатическое поражение легких встречается в 6-30% случаев. Для некоторых локализаций злокачественных опухолей (саркомы мягких тканей, рак почки, хорионэпителиома матки) легкие являются как бы мишенью и в 60-70% случаев длительное время остаются единственным местом отдаленного метастазирования. Примерно у 1/3 больных с изолированным поражением легких наблюдаются единичные метастазы, которые в 70-90% случаев располагаются на периферии легких и потому могут подвергаться хирургическому или комбинированному лечению. Современные подходы в диагностике позволяют добиться у части больных не только положительного эффекта лечения, но и выздоровления. (Трахтенберг А.Х., Пикин О.В., Паршин В.Д., 2009; Рыбакова Н.И., 1964; Самсонов В.А., 1970; Дымарский Л.Ю, 1966; Левшин В.В., 1970; Miller К.М., 1987; Thomford N.R., 1995).
Хирургу, ещё до оперативного вмешательства, важно знать природу опухолевых изменений в лёгких, так как это напрямую связано с объемом планируемой операции - от краевой резекции при метастатическом поражении, до лобэктомии с систематической медиастинальной лимфодиссекцией (СМЛД) при РЛ. При срочном интраоперационном морфологическом исследовании заключение, в плане первичной органной принадлежности опухоли, часто неинформативно, что заставляет хирурга ограничиваться атипичной резекцией лёгкого. При получении заключения при плановом морфологическом исследовании: «Рак лёгкого», необходимо выполнять повторное хирургическое вмешательство в объеме анатомической резекции лёгкого с СМЛД. Итак, по-прежнему открыт вопрос о возможности дифференциальной диагностики новообразований легких. Цель исследования - усовершенствование цитологической диагностики первичных и метастатических образований внутригрудной локализации с использованием жидкостной цитологии и иммуноцитохимического метода. Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:
1. Изучены возможности цитологического и ИЦХ - методов в диагностике первичных и метастатических образований внутригрудной локализации.
2. Сопоставлены и проанализированы результаты ИЦХ и ИГХ исследований при первичных и метастатических образованиях внутригрудной локализации.
3. Выработан алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистологической формы и органной принадлежности опухолевых образований внутригрудной локализации.
4. Оценены преимущества и недостатки использования жидкостной цитологии при ИЦХ исследовании.
5. Проведен анализ и установлены причины ошибок цитологической и ИЦХ диагностики в определении гистологической формы и органной принадлежности опухолевых образований внутригрудной локализации. Научная новизна
На морфологическом материале, полученном из новообразований легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры сопоставлены данные традиционной цитологии и цитологии с использованием ИЦХ с результатами гистологии и гистологии с использованием ИГХ, что позволило оценить эффективность цитологического исследования, диагностическую точность ИЦХ реакций в опухолях различного гистологического типа и органной принадлежности.
Предложен новый подход к приготовлению и обработке цитологических препаратов для ИЦХ исследования с использованием ЖЦ, что позволяет стандартизировать исследование, получить клетки в монослое и сэкономить дорогостоящие реактивы, снизив их расход в 6-8 раз, сократить время приготовления и просмотра материала. Научно-практическая значимость
На основании проведенного анализа предложен принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и микроскопического анализа материала.
Выработан алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистологической формы опухоли лёгкого и органной принадлежности при метастатическом поражении.
Данный алгоритм, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и просмотра материала, может быть рекомендован к внедрению в практику онкологических учреждений.
Заключение диссертационного исследования на тему "Иммуноцитохимический метод в дифференциальной диагностике первичных и метастатических новообразований внутригрудной локализации"
Выводы
1. При рутинном цитологическом исследовании материала из опухолей уверенный диагноз с указанием гистологической формы опухоли выносится лишь в 56% случаев.
Заключения, в которых о гистологической форме опухоли говориться в предположительной форме или она не указывается вообще составляют 44%.
Уверенный диагноз с указанием органной принадлежности опухоли в 48% заключений.
2. В диагностике первичных опухолей внутригрудной локализации, в группе больных раком легкого цитологический + ИЦХ метод демонстрирует при определении гистогенеза и органоспецифичности опухоли диагностическую точность 97,3%.
3. В группе больных с метастатическим поражением легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры цитологический + ИЦХ метод демонстрирует диагностическую точность при определении гистогенеза и органоспецифичности опухоли - 98,9%.
4. Разработанный алгоритм проведения ИЦХ исследований для подтверждения гистологической формы опухоли, или её органной принадлежности позволяет в ряде случаев ограничиться двумя - тремя МКАТ и не требует развертывания широкой (дорогостоящей) панели антител.
5. Использование метода жидкостной цитологии позволяет повысить качество и информативность препаратов с 79% при обычном способе приготовления материала до 99%; исключить неоправданные расходы дорогостоящих реактивов и времени медицинского персонала на обработку, просмотр и интерпретацию препаратов; стандартизировать препараты для исследования.
6. Заключение.
41
Если при рутинном исследовании препаратов цитологом выдано заключение типа
Злокачественное новообразование» (без дополнительнительных уточнений) проводилось ИЦХ с ЭМА (или ОЦК) и вимет ином.
Д.
При ЭМА (+) и виментин (-) что подтверждает предположение об эпителиальной природе опухоли).
В этом случае, а так же в случае если при традиционном исследовании препаратов цитопатологом выдано заключение типа «рак (без дополнительных уточнений)» проводилось исследование с ТТИ (маркер для аденокарциномы лёгкого и рака щитовидной железы из А-клеток). тт (+)
ТТР1 (+) при Тиреглобулине (-) ^ аденокарцинома лёгкого
ТТП (+) при Тиреглобулине (+) рак щитовидной железы**
Описанный алгоритм можно изобразить в виде схемы:
При ТТИ (-), а так же, если при традиционном исследовании препаратов цитопатологом высказано предположение о наличии плоскоклеточного рака если ЦК 5/6 (+) 4 рак плоскоклеточный; еслиЦК 5/6 (-), или, если при отрицательном ТТР1, цитопатолог сохраняет уверенность в том, что изучаемая эпителиальная опухоль аденогенного происхождения, использовались:
СК7 положительный в клетках молочной железы, аденокарциномы легкого СК20 обычно отрицательный в клетках аденокарциномы легкого *
Тиреоглобулин всегда отрицательный в клетках опухолей легкого.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Мехеда, Лариса Владимировна
1. Агамова К. А., Тихомирова Е.Е, //Современные достижения и перспективы развития цитологической диагностики в легочной патологии//Диагностика и лечение рака легкого. М., 1984. - С.58-63.
2. Афанасьева З.А. // Комплексная диагностика рака щитовидной железы // Автореф. дис. канд. мед. наук. Казань, 2000.
3. Афанасьева З.А., Володина Г.И., Петров C.B., Гилязутдинов И.А. //Опухоли гормонально-зависимых и гормонопродуцирующих органов// под ред. проф. И.А. Гилязутдинов и проф. Р.Ш. Хасанова. -М: МЕДпресс-информ, 2004. С. 49 - 89.
4. Беляев A.M., Раскин Г.А., Захаренко A.A., Кондрацов С.А. //Иммуноцитохимическое исследование цитологических препаратов жидкостной цитологии злокачественных плевритов и асцитов// том 12,Физиология, январь 2011, стр. 179-184.
5. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., //Цитологическая диагностика в легочной патологии// Актуальные проблемы в онкопульмонологии. «Всероссийская научно -практическая конференция». Мурманск. 2002.
6. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., Мельникова В.Ю. //Срочная интраоперационная цитологическая диагностика при опухолях различных локализаций// Пособие для врачей. М. - 2004. - С. 3.
7. Волченко H.H., Савостикова М.В., //Атлас цитологической и иммуноцитохимической диагностики опухоли// Москва. 2010.
8. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., Мельникова В.Ю. //Цитологический метод в выявлении метастатического поражения лимфатических узлов// Российский онкологический журнал №3, 2010, с. 12.
9. Давыдов М. И., Полоцкий Б. Е. Современные принципы выбора лечебной тактики и возможность хирургического лечения немелкоклеточного рака легкого.// Сб. «Новое в терапии рака легкого» под редакцией Н.И. Переводчиковой, М. 2003, 41-53
10. Давыдов М.И. Полоцкий Б.Е. //Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого. Современные принципиальные позиции. Анналы Московского онкологического общества//, №2, 1997, 16-17.
11. Давыдов М.И., Пирогов А.И., Полоцкий Б.Е. и др. //Современные принципы хирургического лечения рака легкого. // I съезд онкологов стран СНГ 1996г. Материалы съезда, часть 2, стр. 375.
12. Давыдов М.И., Полоцкий Б.Е. //Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого. Современные принципиальные позиции // Анналы Московского онкологического общества.- 1997.-№2.- С. 16- 17.
13. Давыдов М.И. //Хирургический метод в лечении мелкоклеточного рака легкого// В кн. "Новое в терапии рака легкого".
14. Давыдов М. И., Аксель Е. М. //Статистика рака легкого в СНГ и России// Ежеквартальный научно-практический журнал «Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина», том 20, N3 (77), прил. 1, июль-сентябрь 2009.
15. Имянитов E.H., Хансон К.П., //Молекулярная онкология: клинические аспекты// Санкт-Петербург. Издательский дом СПбПМАПО. 2007., с.27-56.
16. Казанцева И.А., Федосенко А.К., Гуревич J1.E., //Иммуногистохимические исследования в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных поражений щитовидной железы.// Архив патологии 2001; 4: 18.
17. Кешта P.A. //Молекулярно-биологические маркеры как факторы прогноза при саркоме мягких тканей // Автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. мед. наук. М. - 2003.
18. Коган Е.А., Угрюмов Д.А. //Соотношение процессов пролиферации и клеточной гибели в немелкоклеточном раке легкого с железистой дифференцировкой на разных стадиях опухолевой прогрессии// Архив патологии 2002. - Вып. 1 - С. 33 - 37.
19. Коган Е.А., Жак Г., Кайзер У., Шилли М., Виттен А., Шурман М., Шерер А., Хавеманн К. Иммуногистохимия биомолекулярных маркеров рака легкого. // Архив патологии 1997, 6: 23-30.
20. Криволапов Ю.А., Белянин В.Л. //Морфологические различия фолликулярных лимфом и фолликулярной гиперплазии лимфатических узлов// Архив патологии. №5, том 65, Москва, 2003, с.17-20.
21. Ковригина A.M., Пробатова H.A. //Морфоиммуно-гистохимическая дифференциальная диагностика лимфомы Ходжкина с лимфоидным преобладанием и В-крупноклеточных лимфом// Архив патологии -том 67, № 4. 2005. - С. 10 - 16.
22. Лактионов K.K. Плоскоклеточный рак легкого (значение клинико-морфологических и молекулярно-генетических характеристик опухоли в прогнозировании результатов хирургического лечения).// Дис. докт.мед.наук. М.,2004.
23. Лукашина М.И., Жукова Л.Г., Глухова У.И. и др. //Сравнение иммуноцитохимического и иммуногистохимического методов определения биомаркеров при раке молочной железы// Клин. Лаб. Диагностика. 2002. - № 8. - С. 37 - 40.
24. Лукашина М.И. //Экспрессия биомаркеров при раке молочной железы// Дис. на соиск. уч.ст.к.м.н., М., 2003.
25. Малаев С.Г. //Опухолевые плевриты и метастатические опухоли легких// Мед. Помощь. 2000. - № 2. - С. 16 - 18.
26. Петров C.B. //Иммуногистохимическая диагностика опухолей щитовидной железы, матки, яичников, яичек// В.: Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Казань: РИЦ «Титул», 2000; 72.
27. Петров C.B., Райхлин Н.Т. //Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека// Казань 2004 С.7 -57.
28. Пожарисский K.M., Леенман Е.Е. //Значение иммуногисто-химических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний// Архив патологии М., №5, том №62, 2000, С. 3 - 11.
29. Пожарисский K.M., Леенман Е.Е. //Прогностическое и предсказательное значение иммуногистохимических маркеров при онкологических заболеваниях// Материалы III съезда онкологов и радиологов СНГ. Минск 2004. - часть И. - с. 113.
30. Полоцкий Б.Е. Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого (результаты, факторы прогноза и биологические особенности опухоли).// Дис. докт.мед.наук. М., 1995.
31. Савостикова М.В. //Иммуноцитохимическое исследование в диагностике и важнейших факторов прогноза злокачественных и доброкачественных образований// Автореф. дис. на соиск. уч. степ, канд. мед. наук. М. - 2003.
32. Свиридова Т.Е., Коган Е.А., Пальцев М.А. и соавт. //Гистологические и молекулярно-биологические маркеры злокачественности в различных вариантах папиллярного рака щитовидной железы// Архив патологии. 2002. - №6. - С. 19 - 23.
33. Трахтенберг А.Х., Чиссов В.И. //Клиническая онкопульмонология// М. ГЭОТАР Медицина, 2000. - 600 С.
34. Трахтенберг А.Х., Франк Г.А., Волченко H.H., Стукалов М.А., Колбанов К.И. //Медиастинальная лимфоаденэктомия при немелкоклеточном раке легкого// Пособие для врачей. 2003.
35. Чепурная Ю.Ю. //«Клиническое значение жидкостной цитологии в диагностике заболеваний шейки матки»// Дисс. К.м.н., Москва 2004.
36. Чиссов В.И., Трахтенберг А.Х., Франк Г.А., Волченко H.H., Стукалов
37. М.А., Колбанов К.И. //Варианты регионарного метастазирования118немелкоклеточного рака легкого и выбор объема медиастинальной лимфоаденэктомии.// Российский онкологический журнал. 2003. -№2.-С. 4-10.
38. Шабалова И.П. //Интерактивные программы и молекулярные исследования для оптимизации цитологической диагностики// Дис.д.м.н., Москва, 2002. 227с.
39. Шапиро Н.А. //Цитологическая диагностика опухолей легких (морфологические и клинические аспекты, проблемы)// Дис.д.м.н., Москва, 1977.
40. Шапиро Н.А. //Цитологическая диагностика заболеваний легких// Цветной атлас, 2005. с. 8-33.
41. Эллиниди В.Н., Аникеева Н.В., Максимова Н.А. //Практическая иммуногистоцитохимия// Методические рекомендации, Санкт -Петербург, 2002.
42. Эндрю Р.Хериет, Кевин С.Гаттер //Молекулярная клиническая диагностика. Методы// Под ред. С.Херрингтона и Дж.Макги. Издательство «МИР» 1999. С. 20 50.
43. Юдин Д.И. Молекулярно-генетические особенности опухоли в индивидуальном прогнозировании результатов хирургического лечения немелкоклеточного рака легкого // Дисс. докт. мед. наук, 2005.
44. Abulafia О., Pezzullo J.C., Shere D.V. //Performance of ThinPrep liguid-based cervical cytology in comparison with conventionally prepared Papanicolaou smears: a guantitative survey// Gynecologic Oncology. -2003.-Vol. 90.-№ l.-P. 137-144.
45. Agnelli A. //Quimioterapia em cancer de deux pulmáo pequeñas células// Q: Younes RN, editor. Tumores Torácicos. Rio de Janeiro meds. In 1997. pp. 269-80.
46. Alexopoulou D., Tsiambas E., Lambropoulou S., Kompotis K., Papaspyrou S., Karameris G.A. //Morphometric and immunocytochemical study of acase of malignant melanoma in fine needle aspiration specimen// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 48.
47. Andy C., Turner L.F., Neher J.O.// Is the ThinPrep better than conventional Pap smear at detecting cervical cancer?// J.Fam.Pract. 2004. - Vol. 53. -№4.-P. 313-315.
48. Bai X.Z., Masters J.R., 0,Donoghue N., h coaBT. //Prognostic markers in clinically localized prostate cancer// Int. J. Oncol. 1999. - Vol. 14. - P. 785-791.
49. Bai Hongwei. Sung C., James. Steinhoff Margaret M. //ThinPrepR Pap Test promotes detection of glandular lesions of the endocervix.// Diagn. Cytopathol. 2000. - 23, № 1. - C. 19 - 22.
50. Bilchik A., Miyashiro M., Kelley M. h coaBT. //olecular detection of metastatic pancreatic carcinoma cells using a multimarker reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay// Cancer. 2000; 88: 1037.
51. Biscotti Charles V., Shorie Julie H., Gramlich Terry L., Easley Kirk A. //ThinPrepR vs. conventional smear cytologic preparations in analyzing fine needle aspiration specimens from palpable breast masses// Diagn. Cytopathol. - 1999.-21, №2.-C. 137-141.
52. BozzettrC., Nizzoli R., Naldi N., h coaBT. // Fine needle aspiration technigue for the concurrent immunocytochemical evaluation of multiplebiologic parameters in primary breast carcinoma // Breast Cancer Res Treat., 1994. V. 32, p. 221 228.
53. Calaminici M., Piper K., Norton A.J. //CD23 expression in mediastinal large B-cell lymphomas // Histopathology. 2004. - Vol.45. - P. 619 -624.
54. Caraway NP, Stewart J. Primary effusion lymphoma. Pathology Case Reviews. 2006;11.
55. Carella R., Deleonardi G., D'Errico А. и соавт. // Immunohistochemical panels for differentiating epithelial malignant mesothelioma from lung adenocarcinoma: a study with logistic regression analysis.// Am J. Surg. Pathol. 2001; 5:3.
56. Chang F., Vu C., Chandra А. и соавт.// Endoscopic ultrasound guided fine needle aspiration cytology of pancreatic neuroendocrine tumours: cytomorphological and immunocytochemical evaluation//Cytopathology. -2006.-Vol. 17, №1. -P.10 - 17.
57. Choi HR, Batsakis JG, Zhan F, h coaBT. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis. Hum Pathol. 2002; 33:158-164.
58. Colby TV, Koss MN, Travis WD, eds. //Tumors of the Lower Respiratory Tract.// Washington, DC: Armed Forces Institute ofPathology; 1995. Atlas of Tumor Pathology; Third Series,Fascicle 13.
59. Cho EY, h coaBT. Fine needle aspiration cytology of solitary fibrous tumours of the pleura. Cytopathology. 2007; 18:20.
60. Dabbs DJ. Immunohistology of metastatic carcinoma of unknown primary. In Diagnostic Immunhistochemistry, D. Dabbs, ed, 2nd ed, 2006, Philadelphia, Churchill LivingstoneElsevier, p: 180.
61. Dail D.H., Cagle P.T., Marchevsky A.M., Khoor A., Geisinger K., Pugatch B., Finkelstein S.D., Kerr K., Brambilla C. // Metastases to the lung// Tumours of the Lung Secondary tumours, P. 122-124
62. DeLellis RA, Hoda RS. Immunochemistry and molecular biology in cytological diagnosis. In Koss' Diagnostic cytology and its histopathologic bases. 5th ed, 2006. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, p. 1635.
63. Doi S., Woodhouse N. //Ablation of thyroid remnant and 1311 dose in differentiated thyroid cancer// J. Clin. Endocrin. 2000. - Vol. 52. - P.765 -773.
64. Dorovitsa C., Lavranou E., Kontou P., Apatzidou K., Alexandraki A. and Kalogerakos N. //Comparative study of ThinPrep and conventional smears in cervical cytology.// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 25.
65. Duffy M.J., //Evidence for the clinical use of tumour markers.// Ann. Clin. Biochem. 2004. - Vol. 41. - P. 370 - 377.
66. Duray P.H., Palazzo J., Gown A.M. h coaBT. //Melanoma cell heterogeneity; a study of two monoclonal antibodies compared with S-100 protein in paraffin sections // Cancer. 1988; 61: 2460.
67. Eloubeidi M.A, Tamhane A, Chen V.K., Cerfolio R.J. //Endoscopic ultrasound guided fine-needle aspiration in patients with non-small cell lung cancer and prior negative mediastinoscopy// Ann. Thorac. Surg. -2005.-Vol.80, N4.-P. 1231-1239.
68. Fletsch PA, Abati A. //Immunocytochemistry in effusion cytology. A contemporary review.// Cancer (Cancer Cytopathol). 2001; 93:293.
69. Folpe A.L., Schmidt R.A., Chapman D., Gown A.M. //Poorly differentiated synovial sarcoma. Immunohistochemical distinction from primitive neuroectodermal tumors and high-grade malignant peripheral nerve sheat tumors.// Am J. Surg Pathol. 1998; 22; 673.
70. Fulciniti F., Benincasa G., Troncone G. h coaBT. //Cytopathologic features of the follicular variant of papillary thyroid carcinoma on FNAB samples: Experience with 16 cases// Acta cytol. 1999. - 43, № 4. - P. 725 - 726.
71. Gabric S and Kern I. //Two color immunostaining of pleural effusions with BerEP4 and CK5/6 // Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 14.
72. Geisinger KR, h coaBT. Effusions. In Modern cytopathology. Geisinger KR, et al, eds.Philadelphia, Churchill Livingstone, 2004, p. 257.
73. Gia-Khanh Nguyen//ES SENTIALS OF LUNG TUMOR CYTOLOGY//Laboratory Medicine and Pathology University Of AlbertaEdmonton, Alberta, Canada, 2008. P. 2-104
74. Gown A.M., //Carcinomas: determination of primary site using immunohistochemical technigues.// DAKO Facts 2002; 1: 9.
75. Grace A., McBrearty P., Troost S. h coaBT. //Comparative study: conventional cervical and ThinPrep Pap test in a routine clinical setting // Cytophathology. 2002. - Vol.13. - №4. - P. 200-205.
76. Guillou L., Wadden C., Calouje E. h coaBT., // S-100 protein reactivity in synovial sarcomas a potentially frequent diagnostic pitfall. Immunohistochemical analysis of 100 cases. App Immunohistochem. -1996; 4: 167.
77. Guiter Gerardo E.,Gatscha Rose Marie, Zakowski Maureen F. // ThinPreRvs. Conventionals mearsin fine needle aspirations of sarcomas: Amorphological and immunocytochemicals tudy.// Diagn.Cytopathol. -1999. 21. №5.-C. 351 -354.
78. Gray JA, Nguyen GK. Primary pulmonary rhabdomyosarcoma diagnosed by fine needle aspiration cytology. Diagn Cytopathol. 2003; 29:181.
79. Hanly AJ, Elgart GW, Jorda M, h coaBT. Analysis of thyroid transcription factor-1 and cytokeratin 20 separates Merkel cell carcinoma from small cell carcinoma of lung. J Cutan Pathol. 2000;27:118-120.
80. Hans C.P., Weisenburger D.D., Greiner T.C. //Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using tissue microarray // Blood. 2004. - Vol. 103. - P. 275 - 282.
81. Harrow E. M., Abi-Saleh W., Blum J. et all.// The utility of transbronchial needle aspiration in the staging of bronchogenic carcinoma//Ibid. 2000. -Vol. 161.-P. 601-607.
82. Harris, Harald Stein, James W.Vardiman // Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues// Pathology & Genetics / World Health Organization Classification of Tumours/ IARCPress, Lyon, 2001, p. 109 115.
83. Hong Zhang, Jing Liu, Philip T Cagle, Timothy Allen C, Alvaro C Lagaand Dani S Zander //The difference between pulmonary small cell124carcinoma from poorly differentiated squamous cell carcinoma: immunohistochemical approach// Mod Pathol 2005; 18:111-8
84. Husain M, Nguyen GK. //Cytopathology of granular cell tumor of the lung.// DiagnCytopathol. 2000; 23: 294.
85. Jing Liu and Anwar Farhood // Thyroid Transcription Factor 1 Immunocytochemical Staining of Pleural Fluid Cytocentrifuge Preparations for Detection of Small Cell Lung Carcinoma// Acta Cytologica. - 2004. -V.48. - № 5 - P 635 - 640.
86. Jaishree Jagirdar //Application of Immunohistochemistry to the Diagnosis of Primary and Metastatic Carcinoma to the Lung// Arch Pathol Lab Med. 2008; 132:384-396.
87. Jaishree Jagirdar //Application of Immunohistochemistry to the Diagnosis of Primary and Metastatic Carcinoma to the Lung // Arch Pathol Lab Med. 2008;132:384-396
88. Ionescu DN, h coaBT. //Nonsmall cell lung carcinoma with neuroendocrine differentiation-an entity of no clinical or prognostic significance//. Am J Surg Pathol. 2007; 31:26.
89. Younes, R., Gross JL, Deheinzelin D. //Follow-up in lung cancer: how often and for what purpose? //Chest. 1999, 115 (6) : 1494-9.
90. Kandaraki C., Politi E., Apostolopoulos C., Kyritsi Th., Stoforou E.,
91. Argyrakos T. end Koutselini E. // Diagnostic utility of HBME-1, Calretinin125and Cytokeratin 5-6 in pleural effusions// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2).-P. 15.
92. Kaufmann O, Dietel M. Expression of thyroid transcription factor-1 in pulmonary and extrapulmonary small cell carcinomas and other neuroendocrine carcinomas of various primary sites. Histopathology. 2000;36:415-420.
93. Kim J.J., Wright T.C., Goldie S.J. //Cost-effectiveness of alternative triage strategies for atypical sguamous cells of undetermined significance // JAMA. 2002. - Vol. 287. - P. 2382 - 2390.
94. Koss LG, Melamed MR. //Tumors of the lung: conventional cytology and aspiration biopsy. In Koss' Diagnostic cytology and its histopathologic bases// 5th ed, Koss LG, Melamed MR, eds. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins. 2006, p 643.
95. Limaye A., Connor A.J., Huang X., Luff R. //Comparative analysis of conventional Papanicolaou test and fluid based thin - layer method// Arch. Pathol. Lab. Med. - 2003. - Vol. 127. - P. 200 - 204.
96. Lin O, h coaBT. //Immunohistochemical staining of cytologic smears with MIB-1 helps distinguish low-grade from high-grade neuroendocrine neoplasms. //Am J Clin Pathol 2003; 120:209-216.
97. Miettinen M.//Immunohistochemical marker for gastrointestinal, urothelial and Merkel cell carcinoma.// Mod Pathol. 1995; 8: 384 - 388.
98. Mountain CF.//Changes in the international staging system for lung cancer//Chest. 1997, 111 (6) : 1710-7.
99. Naruke T, R Tsuchiya, condo-H, H Asamura, H. Nakayama //The consequences of staging in lung cancer. Chest. 1997, 112 (4 Suppl): 242S-248S.
100. Nguyen GK, h coaBT. //Cytodiagnosis of bronchogenic carcinoma and neuroendocrine tumor of the lung by transthoracic fine-needle aspiration. //Diagn Cytopathol, 2000; 23:431.
101. Nizzoli R., BozzettrC., Savoldi L., h coaBT. //Immunocytochemical assay of estrogen and progesterone receptors in fine needle aspirates from breast cancer patients // Acta Cytol., 1994. V. 38, p. 933 938.
102. Nizzoli R., BozzettfC., Crafa P. h coaBT. //Comparison of the results of immunocytochemical evalution of HER2/neu on fine needle aspirates from primary breast carcinomas // Diagn. Cytopathology, - 2003. -Vol.28.-P.142-146.
103. Odashiro AN, h coaBT. //Primary lung leiomyosarcoma detected by bronchoscopy cytology// Diagn Cytopathol. 2005; 33: 220.
104. Ogino S, h coaBT. //Cytopathology of oncocytic carcinoid tumor of the lung mimicking granular cell tumor. A case report.// Acta Cytol 2000; 44:247-250.
105. Olszewski W.T.//Cytology of lung metastases differential diagnosis// 30th Congress of Cytology. - 2004. - P.31.
106. Osinsky S., Gluzman D.F., Grebelnaya N.I. h coaBT. //Immunocytochemical detection of tumor cells in bone marrow of patients with pancreatic cancer// Pancreatology. 2002. - 2. - 326.
107. Park SY, h coaBT. //Panels of immunohistochemical markers help determine primary sites ofmetastatic adenocarcinoma.// Arch Pathol Lab Med. 2007; 131: 1561.
108. Parkin M., Tyczynski J.E., Boffetta P., Samet J., Shields P., Caporaso N. //Lung cancer epidemiology and etiology// Tumours of the Lung. P. 12 -13.
109. Parotti M., Landolfi S., Volante M. //Surgical Pathology Update 2001 18 th European Congress of Pathology / S. Hauptmann, M. Dietel, M. Sobrinho Simoes. - 2001. - P. 195 - 197.
110. Pralong C., J. L. Pauze and Due C. // Cytologic criteria for papillary breast tumors on fine needle aspiration by ThinPrep.// Cytopathology . -2004. - V. 15 (Suppl. 2). - P. 4.
111. Protopapas Z., Westcoff J.L.//Transthoracic needle biopsy of mediastinal lymph nodes for staging lung cancer and other cancers// Radiology. 1996. - Vol. 199. - P. 489-496.
112. Raab SS, h coaBT. //Metastatic tumors in the lung: a practical approach to diagnosis. In Practical pulmonary pathology.// Leslie KO and Wick WR, eds. Philadelphia, Churchill Livingstone, 2005, 603.
113. Shimosato Y, Noguchi M. Pulmonary neoplasms. In Sternberg's Diagnostic surgical pathology. 4th ed, 2004. Mills SE, et al, eds. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins,l 173.
114. Somers K., Poppe K., Verfaillie G., Velkeniers B. and Bourgain C.//Liguid based cytology in FNA of thyroid nodules// Cytopathology . -2004. - V. 15 (Suppl. 2). - P. 46.
115. Sotiropoulou G., Plyta S., Delliou E., Panoussi A., Papagika A., Alexiadou A., Poulianou E. and Kalargirou C.H. // Difficulties in the diagnosis of malignant mesotheliomas in effusions.// Cytopathology . -2004.-V. 15 (Suppl. 2).-P. 17.
116. Taylor C.R. and Cote C.R. //Immunomicroscopy: a diaqnostic tool for the surgical pathologist.// Philadelphia, 1997.
117. Tezuka F., Hamanaka K., Oikawa H. and Higashiiwai H. //Liguid-based cytology in Japan: diagnostic efficacy and validity of the ThinPrep method in cervical cytology.// Cytopathology . 2004. - V. 15 (Suppl. 2). -P. 38.
118. Thienpont L., Cochand-Priollet B„ Willems J.S. and Schelfhout A.M. //Value of immunocytochemistry in thyroid liguid based cytology// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 46.
119. Travis WD, h coaBT. //Pathology and genetics of tumours of the lung, pleura, thymusand heart. In WHO Classification of Tumors// Lyon, IARCPress, 2004.
120. Traktenberg A., Frank G., Volchenko N., Kolbanov K., Stucalov M.,Pikin O. //The optimal extent of mediastinal lymphadenectomy in patients with nonsmall cell lung cancer// The European Cancer Conference (ECCO 12). - Kopenhagen. - 2003. - P. 322.
121. Tsampra G. and Gomousa-Michael M. //Immunocytochemical profile of metastatic malignancy in effusions. A clue to the primary site// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 17.
122. Utz J.P., Patel A.M., Edell E.S. //The role of transcarinal needle aspiration in the staging of bronchogenic carcinoma// Chest. 1993. - Vol. 104.-P. 1012-1016.
123. Vassilacos P., Carrel S., Petignat P. и соавт. //Use of automated primary screening on liguid-based, thin-layer preparations// Acta Cytol. -2002. Vol.46. -№ 2. - P. 291-295.
124. Vyberg M. //Metastatic tumors of unknown origin: immunohistochemical approach and pitfalls.// DAKO facts 2001; 1 (2): 17.
125. Wang BY, Gil J, Burstein DE, и соавт. //p63 in pulmonary epithelium, pulmonary squamous neoplasms and other pulmonary tumors.// Hum Pathol. 2002;33:921-926.
126. Weintraub J., Morabia A. //Efficacy of a liguid based thin layer method for cervical cancer screening in a population with a low incidence of cervical cancer.// Diagn. Cytopathol. - 2000. - 22, № 1. - C. 52 - 59.
127. Wiatrowska BA, и соавт. //Large cell neuroendocrine carcinoma of the lung: proposed criteria for cytologic diagnosis.// Diagn Cytopathol 2001; 24:58.
128. Whitaker D, h coaBT. //Mesothelioma.// In Diagnostic cytopathology, 2nd ed, Gray W,McKee GT, eds, 2003, London, Churchill Livingstone, p. 205.
129. Yao Jorge I., Cangiarella Joan F., Cohen Jean Marc. H coaBT. //Lymphomas of T-cell origin: A cytologic and immunophenotypic study // Acta Cytol. - 1999.- V.43,№5.- P.943.
130. Zachou K., Tzartza E., Skenteri A., Orologa A., Kostopoulou E., Boni K. // Ascitic fluid, peritoneal washing and cul de sac aspiration cytology in women under the age of 40: a retrospective study.// Cytopathology . 2004. - V. 15 (Suppl. 2).-P. 17.
131. Zoppi J. A., Rotundo A.V., Sundblad A.S //Correlation of immunocytochemical and immunohistochemical determination of estrogen and progesterone receptors in breast cancer.// Acta Cytol. 2002. - V.46-P.337 -340.