Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунотропные эффекты транскраниальной электростимуляции

РГ6 Ой _

куг,лгшзсудлрственнля медицинская академия

На правах рукописи

. Рубцовенко Андрей Викторович

ИММУНОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ ТРАНСКРАНИАЛЬНОЙ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации па соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Краснодар

1996

Работа выполнена в Кубанской государственной медицине» академии.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор А.Х. Каде доктор медицинских наук, профессор P.A. Хапфсрян Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор В.П. Лебедев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Р.И. Сепнашвилн доктор медицинских наук, профессор А.И. Поляк

Ведущая организация - Институт иммунологии МЗМП РФ (г. Москва)

Защита состоится (TA&Lj-XWb г. i

час.

на заседании диссертационного совета К 084.06.03 в Кубанск государственной медицинской академии (350063, г. Краснодар, ул. Седина,

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотс Кубанской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан ¿¿^Г-г^ 0^996 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук

'Н.Г.Соболева

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В > работах последнего времени, посвященных регуляции иммунного ответа на уровне целостного организма, большое внимание уделяется изучению взаимодействия нммунной и нейроэндокринной систем (Корнева Е.А., 1993, 1994; Besedovsky Н.О., et al„ 1986; Black P.H., 1994; De Kloet E.R. et al„ 1994; Betancur C. et al., 1994; Payne L.C. et al., 1994). Среди медиаторов, обеспечивающих это взаимодействие, важная роль принадлежит опиоидным пептидам, которые вырабатываются клетками обеих систем и являются лигандами опиатных рецепторов, . обнаруженных на нейроэндокринньгх и иммунокомпетентных клетках (Брагин Н.О, 1991; Faith R.E.-et al., 1986; Sibinga N.E., Goldstein A., 1988; Blalock J.E., 1990; Carr D.J. et al., 1990). К настоящему времени накоплены обширные-сведения об иммуномодулирующих свойствах опиоидных пептидов. Однако новые исследования по данной проблеме сохраняют свою актуальность, потому что нынешние представления ещё не позволяют приблизиться к практической реализации тех возможностей направленного влияния на процессы нейро-иммуно-эндокринной регуляции гомеостаза, которые откроются в результате создания целостной системы взглядов на иммунофизиологию человека. Данная работа представляет собой принципиально новый методический подход в решении этой проблемы. В его основе лежит исследование воздействия на организм эндогенных. опиоидных пептидов, выделяющихся в кровь под влиянием транскраниальной электростимуляции головного мозга.

Метод транскраниальной электростимуляции (ТЭС) антиноцицептивной системы предложен д.м.н. Лебедевым и соавт. (1983, 1988). При использовании транскраниальной электростимуляции описаны два типа эффектов: центральные и периферические. К центральным эффектам относят аналгезию, стабилизацию гемодинамики, купирование

алкогольного абстинентного синдрома (Лебедев В.П. и соавт., 1986; Кацнельсон Я.С.Г 1987: Гринешсо А .Я. и соавт., 1993). Среди периферических эффектов известны: замедление роста перевиваемых опухолей, модуляция динамики острофазового ответа при воспалении, ускорение заживления кожных ран, язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, очага некроза при инфаркте миокарда (Александров В.А. и соавт., 1987; Голиков А.П., Павлов В.А. и соавт., 1989; Евтюхин А.И. и соавт., 1991; Бакман А.Б., 1993; Грицкевич Н.Л. и соавт., 1987, 1991, 1993; Александрова В.А. и соавт., 1994; Савченко A.B., 1994). Как центральные, так и периферические эффекты в значительной мере обусловлены возрастанием в крови концентрации опиоидных пептидов (ß-эндорфина и мет-энкефалина). Последние выделяются активированными электростимуляцией структурами мозга, относящимися к антиноцицептивной системе (Айрапетов Л.Н. и соавт., 1985; Лебедев В.П., Савченко А.Б., Петряевская Н.В., 1988; Лебедев В.П., Кацнельсон Я.С. и соавт., 1988; Савченко А.Б., 1994).

Факты, подтверждающие роль опиоидных пептидов во взаимодействии нервной и иммунной систем (Зозуля A.A., 1987; Корнева Е.А., 1993; Faith R.E. et al„ 1986; Golstein A., 1988; Blalock J.E., 1990; Lawrence . D.M.P. et al., 1993), позволяют предположить наличие у транскраниальной электростимуляции иммуномодулирующих

возможностей.

Проведение подобных исследований вызвано не только теоретическим интересом, но и чисто практическими задачами ■ потребностью в физиологичных, не обладающих побочными эффектам* методах иммунокоррекции при синдромах иммунологическо! недостаточности, а также перспективами влияния на течени< разнообразных аллергических заболеваний.

-

Целью исследования было выявление иммуномодулирующих и иммунокорригирующих.эффектов транскраниальной электростимуляции и основных механизмов их реализации.

Задачи настоящего исследования состояли в следующем:

1. Изучить влияние ТЭС в режиме аналгезии на интенсивность первичного гуморального иммунного ответа и 1дЕ-типа у подвергнутых иммобилизационному стрессу мышей.

2. Провести сравнительный анализ влияния ТЭС и синтетического аналога энкефалинов §-42 на'первичный гуморальный иммунный ответ, иммунологические и гематологические показатели у йнтактных мышей и животных с преднизолон-индуцированной иммунодепрессией.

3. Изучить возможное участие опиоидных пептидов в реализации иммуномодулирующего действия ТЭС.

Положения, выносимые на защиту:

1. ТЭС в режиме аналгезии усиливает образование ^М-АОК к эритроцитам барана (ЭБ) в селезёнках мышей линии СВА и снижает интенсивность продукции антиовальбуминовых гомоцитотропных ^Е-антител у подвергнутых иммобилизационному стрессу мышей линии С57ВЬ. Активация эндогенной опиоидергической системы при помощи ТЭС устраняет нарушения в деятельности иммунной системы, обусловленные стрессом.

2. ТЭС оказывает многообразное влияние на гуморальный иммунный ответ и состав субпопуляций иммунокомпетентных клеток у мышей линии С57ВЬ. Иммуномодулирующее действие ТЭС наиболее выражено при преднизолон-индуцированном вторичном иммунодефицитном состоянии и более значительно, чем влияние синтетического аналога энкефалина §-42. Иммунорегуляторные эффекты и ТЭС, и §-42 зависят от фазы иммунного ответа, в которую' они

применяются. В наибольшей степени их влияние проявляется в индуктивную фазу иммунного ответа.

3. Возможно использование ТЭС в качестве метода иммуномодуляции, основной механизм которого обусловлен активацией опиоидергического звена антиноцицептивной системы. Об этом свидетельствуют следующие факты:

1) максимальная выраженность иммуномодулирующих эффектов отмечается при частоте стимуляции, вызывающей аналгезию и активацию опиоидергического звена антиноцицептивной системы;

2) сходство в действии на иммунную систему ТЭС и синтетического аналога мет-энкефалина - §-42;

3) налоксон-чувствительность иммуномодулирующих эффектов

ТЭС.

Новизна исследования. В настоящей работе впервые выявлены:

1) факт модуляции при помощи ТЭС функционирования иммунной системы;

2) опиоидергический механизм иммунотропных эффектов ТЭС;

3) способность ТЭС предотвращать стресс-индуцированные нарушения в деятельности иммунной системы;

4) способность ТЭС отменять преднизолон-индуцированную иммунодепрессию.

Научно-практическая значимость работы. Выявление иммунотропных эффектов ТЭС в режиме аналгезии и установление основного звена - опиоидергического, в механизме реализации данных эффектов дополняет представления о взаимовлиянии центральной нервной и иммунной систем.

Результаты работы создают основу для клинического использования ТЭС с целью коррекции вторичных иммунодефицитных состояний, повышения эффективности иммунизации и специфической

гнпосенсибнлизацин, а также уменьшения числа аллергических осложнении при вакцинации.

Апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе, журнальная статья, 6 - в материалах международных конгрессов, симпозиумов и конференции. Новые данные о стресс-обусловленных изменениях в деятельности иммунной системы нашли отражение в лекционном курсе по патологической физиологии в Кубанской

и Волгоградской государственных медицинских академиях. Сведения об

I

иммунокорригнрующих эффектах ТЭС послужили основой для использование метода ТЭС в лаборатории иммунологии Краевого лечебно-диагностического.центра.

Структура работы. Диссертация написана на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов, методов исследования и экспериментальных подходов, 2 глав

I

собственных исследований (состоящих из 2 и 3 подглав каждая) с изложением полученных результатов и их обсуждением, заключения, выводов, списка литературы и приложении. Библиография включает в себя 207 литературных источников, из них 93 на русском языке. Работа иллюстрирована 12 рисунками и 10 таблицами.

Материалы и методы исследования 1

В качестве экспериментальных животных использовали мышеи линий СВА и С57ВЬ (всего 301 животное), полученных из питомника , "Столбовая" (Москва). Масса мышей составляла 18-20 г, возраст 4-5 мес.

ТЭС производили электростнмуляторамн "ЭТРАНС-1" и "ТРАНСАИР-2" (п/к "Сигнал", г.Кировск Ленинградской области). В экспериментах использовали два режима ТЭС:

- s - —

1) апальгетическпй режим (режим апалгезии), приводящий к актива1 антиноцицептивной системы и повышению уровня ß-эндорфин; сыворотке крови:

2) неанальгстпческнп режим, который не приводит к актива1 антииоцицептивноп системы и повышению уровня ß-эндорфин; сыворотке крови (Савченко Ä.Б., 1994).

Параметры электрического тока, использованного при проведе[

ТЭС приведены в таблице 1.

Таблица 1. параметры электрического тока, использованного при проведении ТЭС в различных режимах у мышей.

Параметры электротока Режим ТЭС

анальгетический неанальгетический

частота, Гц 60±2 50±2

длительность импульса, мс 3,75+0.25 3,75±0.25

действующая сила тока, мА 0,6 0,6

У мышей, фиксированных к препаровочным столикам, Т производили ^ерез игольчатые электроды, расположенные фрон' окципитально. Длительность воздействия составляла во всех случаях мин. Количество сеансов ТЭС в зависимости от серии эксперимент равнялось 1 или 3 (подробнее описано в главе соответствующей сег исследований). •

Постстрессовый| иммунодефицит вызывали острой иммобилизащ мышей путем фиксации к препаровочным столикам за лапки стандартна полосами резины в течение 30 мин. Преднизолон-индуцироваш иммунодефицит получали двукратным введением мышам преднизолон суммарной дозе 5 мг/кг за 24 и 6 ч до иммунизации.

— - э

Количество IgM-A OK в селезёнках мышей, иммунизированных ЭБ, определяли безгелевым методом локального гемолиза по Cunningham. Уровень гомоцитотропных lgE-антител (ГЦТА) в сыворотках крови иммунизированных овальбумином мышей определяли методом пассивной кожной анафилаксии по Levin В. end Vas N. Титры антител (гемагглютининов) к ЭБ определяли микрометодом (Вязов O.E., Ходжаев Ш.Х., 1973). Содержание Т- и B-лимфоцитов в крови мышей и испытуемых людей определяли методом розеткообразования с ЭБ (Е-РОК и ЕАС-РОК соответственно) (Понякина И.Д. и соавт., 1983). За "активные" Е-розеткообразующие клетки принимали лимфоциты, присоединившие 5 и более ЭБ. Метод розеткообразования в'присутствие теофиллина применяли для выявления субпопуляций Т-лимфоцитов, обогащенных клетками с хелперной (теофиллин-резистентные - Тфр-л) и супрессорной (теофиллиц-чувствительные - Тфч-л) активностью (Лебедев К.А., Понякина И;Д., 1990). -

При обработке результатов достоверность изменений определяли по критерию Стъюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

Влияние транскраниальной электростимуляции на постстрессорные изменения первичного иммунного ответа IgM- и IgE-типа у мышей. Для

моделирования стресс-обусловленных нарушений иммунного ответа IgM- и IgE-типа нами были выбраны высокоотвечающие на антигены (ЭБ и ' овальбумин) линии мышей: СВА и C57BL, соответственно. Иммунизацию производили - внутрибрюшинно сразу после окончания стрессового воздействия (иммобилизация) - то есть сразу после снятия животных с препаровочных столиков. Для индукции формирования IgM-AOK была использована пороговая доза антигена 2х107 ЭБ (Корнева Е.А., 1993). Иммунный ответ IgE-типа индуцировали внутрибрюшинным введением овальбумина (1 мкг на мышь) в изотоническом растворе геля гидроокиси

алюминия (1 мг на мышь). Введение налоксона животным одной из груп производили двукратно в суммарной дозе 2 мг/кг массы тела, таки образом, чтобы его время действия перекрывало длительное! анальгетического эффекта ТЭС: непосредственно перед иммобилизацие животных и сразу после окончания ТЭС.

Как видно из рис. 1, иммобилизационный стресс (2 групп, достоверно угнетал иммунный ответ 1дМ-типа и стимулировал иммунны ответ 1«Е-типа: относительное количество ^М-АОК снижалось - до 60%, уровень ^Е-антител повышался - до 190% по отношению к интактны животным.

У животных, находившихся под воздействием стресса одновременной электростимуляцией, не активирующей секреци опиоидных пептидов (3 группа), отмечена тенденция к увеличени. относительного (до 144%) - количества АОК по сравнению с интактными, достоверные различия в содержании АОК при сравнении с животным) подвергнутыми иммобилизационному стрессу (2 группа). У мышей группы, также как у мышей, подвергнутых лишь одной иммобилизации группа), имело место усиление иммунного ответа ^Е-типа - уровень Щ антител состав™ 160% к уровню таковых у интактных животных.

ТЭС в. режиме аналгезии (4 группа) вызывала выраженну активацию образования ^М-АОК - до 288% по сравнению с интактным Причем содержание АОК в селезенках животных 4 группы бы достоверно более высоким, чем в у мышей, подвергнутых ТЭС неанальгетическом режиме (3 группа).

Введение налоксона животным, стимулированным в режи аналгезии (5 группа), приводило к устранению эффекта повышен образования 1дМ-АОК, имевшего место у мышей 3 и 4 групп.

350% 300% 250% § 200% \ 150%

.О О-

100% 50% 0%

* * 288%

* Шн 190% » ЩЗ 1

1 | 160% 144% 67% «

Л Ш 1 79% Й!

¡д », ц

60%

Груги

1Ы животных

3

4

1- интактные животные (100%)

2- иммобилизация

3- иммобилизация и

ТЭС В

нсансиыетическои режиме

4-иммобилизация и ТЭС в режиме аштгзии

5- иммобилизация,

ТЭС в режима ана.11£зии и введение нахоксона

ЖН АОК/млн спленоцнтов ; I ГЦТА

Рнс. 1. Относительное количество ^М-АОК и уровень гомоцнтотропных антител у мышей, подвергнутых иммобилизационному стрессу и ТЭС в различных режимах, выраженные в процентах по отношению к этим показателям 1 группы животных (100%). * - Р<0,05; ** - Р<0,01.

Применение ТЭС в режиме аналгезии (4 группа) обусловливало тенденцию к снижению уровня ^Е-антител до 79% по сравнению ;с интакт-ными животными. Это было достоверно ниже уровня ^Е-антител в сыворотках крови 2-ой и 3-ей групп.

Введение налоксона мышам, стимулированным в режиме аналгезии (5 группа), отменяло эффект снижения ¡цЕ-антителообразоваипя, имевший место у животных 4 группы. Уровень ^Е-антител у животных 4 группы был достоверно выше, чем у интактных - 167% и не имел достоверных отличий по сравнению с мышами, подвергнутыми стрессу (2 группа) и ТЭС в неанальгетическом режиме (3 группа). '

Известно, что один из ведущих механизмов пострессорной иммунодепрессии заключается в нарушении соотношения Т-хелперов и Т-супрессоров в сторону преобладания последних и (или) активации их функции. Так установлено существенное увеличение антиген-

неспецифической супрессии при тяжелых травматических повреждениях (Александров В.Н. и соавт., 1982, 1983), длительном плавательном стрессе (Кирилина Е.А., 1990). Возрастание удельного содержания Т-супрессоров при экстремальны.^ воздействиях (тяжелая физическая нагрузка, хирургические манипуляции, ожоги) зарегестрировано и в клинике (Goodwin J. S. et al.,, 1981). Возможно подобная иммуносупрессия имела место и в условиях нашего эксперимента при действии нммобилизационного стресса. Это выразилось в подавлении образования 1цМ-АОК у высокоотвечающеи на ЭБ линии мышей СВА,

I

иммунизированных низкой дозой антигена сразу после окончания действия стрессора.

Однако в ряде случаев аналогичные стрессорные ситуации не сопровождались развитием дисбаланса иммунорегуляторных субпопуляций Т-лнмфоцитов и усилением супрессии (Adami G.F. et al., 1982), а при физиологических вариантах стресса наблюдалось даже повышение количества Т-хелперов (Kronfol Z. and House J.D., 1984), что расценивалось авторами как проявление нормальной реакции на стресс. Более того, стрессорное воздействие может приводить к подавлению функциональной активности Т-супрессоров, что, очевидно, составляет один из важных механизмов его усиливающего влияния на иммунный ответ (Фролов Б. А. и соавт., 1986). Возможно, данный механизм играет роль в усилении образования IgM-AOK у мышей, стимулированных в неанальгетическом режиме (3 группа). Наиболее вероятно, что некоторая активация образования IgM-AOK у мышей 3 группы обусловлена незначительной стимуляцией опиоидсиЬтезирующих структур мозга. На такую возможность указывают данные Александрова В.А. и соавт. (1994) Савченко А.Б. (1994). Применение указанными авторами тока < отличающимися от предложенных В.П.Лебедевым (1983) параметрам} давало сходные, но гораздо менее выраженные, чем при воздействии tokon

в режиме аналгезии, периферические эффекты, которые также блокировались налоксоном.

Тот факт, что ТЭС с анальгетической частотой (4 группа), вызывающей максимальный рост концентрации р-эндорфина в крови, выраженно усиливает образование 1дМ-АОК и подавляет стресс-

г

индуцированное увеличение синтеза ^Е, служит указанием на участие опиоидных пептидов в развитии описаных эффектов. Подтверждением этому являются и данные об устранении этих эффектов налоксоном (5 группа).

Полученные нами сведения о контрнаправленном действии стресса на иммунный ответ 1дМ- и 1дЕ-типа у мышей линий СВА и С57ВЬ (рис. 1) согласуются с данными Р.А.Ханферяна (1990) и Н.В.Колесниковой (1990),' показавшими, что различные стрессовые воздействия противоположным образом влияют на синтез ^М и 1§Е. Так стрессовые воздействия, стимулирующие ^М-ответ (острая барокамерная гипоксия, гипертрансфузия син-генных эритроцитов, кровопотеря, высокогорная хроническая гипоксия), приводят к угнетению синтеза гомоцитотропных 1§Е-антител. В то же время стрессоры,-угнетающие ^М-антителообразование (фенилгидразиновая анемия, облучение низкими дозами и др.), вызывают стимуляцию синтеза Е- антител.

Возможно, что одним из механизмов, посредством которых' стрессовые факторы, угнетающие образование ^М, стимулируют ^Е-антителогенез, является увеличение в крови концентрации глюкокортикоидов. Имеются факты о иммуносупрессивном действии выделяющихся при стрессе глюкокортикоидных гормонов на иммунный ответ ^М-типа (Корнева Е.А., 1993). В последние годы показано как стимулирующее влияние стрессовых концентраций глюкокортикоидных гормонов непосредственно на продукцию иммуноглобулинов класса Е, так и характерные изменение под влиянием глюкокортикоидов продукции

цптокинов, регулирующих синтез IgE (Wu C.Y. et al., 1991; Nusslein H.G. et al., 1994). Поэтому весьма вероятно, что повышение в крови концентрации эндогенных глюкокортикоидов в сочетании со сдвигами других составляющих ненрогуморального ансамбля при стрессе несет ответственность за обнаруженные нами сгресс-обусловленные изменения в иммунном ответе IgE-типа.

Таким .образом, установлено, что иммобилизационный стресс, непосредственно предшествующий иммунизации, подавляет образование IgM-AOK в селезёнках мышей линии СБА и увеличивает продукцию антиовальбуминовых гомоцитотропных IgE-антител у мышей линии C57BL. Активация опиоидергической эндогенной системы при помощи ТЭС в анальгетическом режиме способна устранять нарушения деятельности иммунной системы, обусловленные стрессом.

Иммуиомодулнрующне эффекты ТЭС н синтетического аналога энкефалинов - S-42 у интактных и иммунодепресснвных мышей. Иммунизацию' производили однократным внутрибрюшинным введением ЭБ (4х107) в 0.2 мл изотонического раствора NC1 - оптимальной, более высокой, чем в предыдущей серии экспериментов, дозой антигена. В качестве объекта исследования использовали слабоотвечающих на ЭБ ,мышей (самцов) линии C57BL. В таких условиях влияние сочетаниого электроболевого и иммобилизационного стресса на иммунный ответ оказывалось минимальным (Корнева Е.А., 1993), Поэтому в данной серии| экспериментов в качестве контрольных не использовали группы животных, подвергнутых иммобилизации, а также сочетанию иммобилизации и ТЭС в неанальгетичеСком режиме.

Синтетический аналог мет-энкефалина S-42 в дозе 1 мкг/кг вводили внутрибрюшинно трехкратно: до иммунизации, в индуктивную или е продуктивную фазы иммунного ответа. В те же сроки мышеГ иммобилизировали и подвергали ТЭС в режиме аналгезии.

На 7-е сутки после иммунизации животных декапитировали. В крови мышей всех групп определяли концентрацию Т- и В-лимфоцитов, субпопуляции Т-лимфоцитов. в том числе "активные" Т-лимфоциты (Еа-РОК), и иммунорегуляторный индекс. В крови мышей, иммунизированных ЭБ. определяли также титры антиэритроцитарных антител (гемагглютининов).

Как следует из рис. 2, ТЭС и §-42 в отсутствие функциональной нагрузки на иммунную систему {у неиммунизированных животных) приводили к следующим статистически значимым изменениям. субпопуляционного состава лимфоцитов крови:

1) возрастанию индекса- Тфр/Тфч, за счёт увеличения Тфр - субпопуляции лимфоцитов преимущественно с хелперной активностью;

2) возрастанию содержания В-лимфоцитов;

3) снижению содержания 0-клеток;

4) увеличению количества Еа-РОК.

Проведение ТЭС и введение §-42 животным в условиях антигенной нагрузки (интактные иммунизированные ЭБ мыши линии С57ВЬ) до иммунизации и в различные фазы иммунного ответа оказывало незначительное влияние на субпопуляционный состав лимфоцитов крови.

Как видно из рис. 3, у интактных иммунизированных ЭБ мышей ТЭС и §-42 до иммунизации (группы 1-1.0, 1-2.0) обусловливали незначительное увеличение титров антиэритроцитарных антител и иммунорегуляторного индекса, а в индуктивную фазу (группы 1-1.1, 12.1) - достоверно снижали данные показатели.

□ 'Г-Л ММТ-тф.р ■ Т-Тф.ч

■ в-л ЕЦо-л ШТФР/ТФЧ

Рис. 2. Субпопуляционный состав (%) и иммунорегуляторный индекс (Тфр/Тфч) лимфоцитов крови у неиммунизированных мышей линии С57ВЬ при применении ТЭС и 8-42. * - различия по сравнению с интактными достоверны - Р<0,05; ** - Р<0.01.

Статистически значимое снижение титров гемагглютининов и иммунорегуляторного индекса имело место и при ТЭС в продуктивную фазу иммунного ответа (группа 1-1.2).

ТЭС и §-42, особенно в индуктивную фазу иммунного ответа, обладали способностью эффективным образом корригировать нарушения субпопуляционного состава лимфоцитов крови у мышей с ■ преднюопон-индуцированной иммунодепрессией (рис. 4): достоверно возрастало содержание В-лимфоцитов, теофиллин-резистентных лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса, "активных" Е-РОК; снижалось относительное содержание 0-клеток.

Группы животных

И5$1 - Ьо)? титра антител ЩЦ Индекс Т-тф.р/Ттф.ч

Рис." 3. Влияние ТЭС и £-42 на титры гемагглютининов и иммунорегуляторныи индекс у иммунизированных ЭБ мышеи линии С57ВЬ (в % по отношению к интактным). * - Р<0,05.

1-1.0 - ТЭС в режиме анальгезии в течение 3 суток + иммунизация на 4-е сутки

1-1.1 - иммунизация + ТЭС в режиме анальгезии в индуктивную фазу иммунного ответа (в течение

первых 3 суток после иммунизации) 1-1.2 - иммунизация + ТЭС в режиме анальгезии в продуктивную фазу иммунного ответа (с 4 по 6

сутки после иммунизации) 1-2.0 - введение $-42 в течение 3 суток + иммунизация 1-2.1 - иммунизация + введение $-42 в индуктивную фазу иммунного ответа 1-2.2 - иммунизация + введение Б -42 в продуктивную фазу иммунного ответа

Как следует из рис. 4, применение преднизолона до иммунизации ЭБ (группа 2) вызывало резкое снижение антителообразования до 81% к интактным (группа 1). ТЭС иммунодепрессивных мышей и в индуктивную (группа 2-1.1), и в продуктивную фазу иммунного ответа (группа 2-1.2), приводила к полной отмене угнетающего действия преднизолона на антителообразование. Введение §-42 иммунодепрессивным животным ■ увеличивало титр гемагглютининов до уровня интактных лишь в индуктивную фазу иммунного ответа (группа 2-2.1).

Ifei} • Log титра антител Индекс Т-тф р / Т-тф.ч

Рис 4. Влияние ТЭС и $-42 на титры гемагглютннинов и иммунорегуляторный индекс у им^унодепрессивных мышей линии C57BL (в % по отношению к интактным).

Примечание: * - достоверны различия между средними значениями показателей данной группы по отношению ко 2-ой группе животных (иммунизированных на фоне иммунодепресснн);

Р<0,05; ** РОДИ, *** Р<0,001.

1 - интактные (100%)

2 - введение преднкзолона + иммунизация

2-1.1 - введение преднизолона + иммунизация + ТЭС в режиме анальгезии в индуктивную фазу иммунного ответа (ИО)

j 2-1.2 - введение преднизолона + иммунизация + ТЭС в режиме анальгезии в продуктивную сразу

ИО

2-2.1 - введение преднизолона + иммунизация + введение $-42 в индуктивную фазу ИО 2-2.2 - введение преднизолона + иммунизация + введение §-42 в продуктивную фазу ИО

Полученные данные позволяют утверждать, что ТЭС на фоне стрессового воздействия, либо на фоне введения фармакологических, нммуносупрессивных доз глюкокортикоидных гормонов повышает функциональную активность иммунной системы до уровня интактных животных, а в некоторых случаях - сверх последнего.

Результаты настоящей работы согласуются с данными многочисленных исследований, в которых выявлена способность опиоидных пептидов нормализовать отклоненные в ту или иную сторону

под воздействием различных факторов показатели функциональной

активности иммунной системы (Щурин М.Р., 1991; Я.РакЬ е! а!., 1984).

Выводы

1. ТЭС в режиме аналгезии налоксончувствительно усиливала образование ^М-АОЕС к эритроцитам барана в селезёнках иммобилизированных мышей линии СВА и снижала интенсивность продукции антиовальбуминовых гомоцитотропных ^ Е-антител у подвергнутых иммобилизационному стрессу мышей линии С57ВЬ. Таким образом, активация эндогенной опиоидергической системы при помощи ТЭС устраняла нарушения в деятельности иммунной системы, обусловленные стрессом.

2. Проведение ТЭС в отсутствие функциональной нагрузки на иммунную систему (у неиммунизированных животных) приводило к сдвигу соотношения субпопуляций лимфоцитов в сторону активации иммунной системы.

3. Применение ТЭС у интактных иммунизированных эритроцитами барана мышей до введения антигена выявило тенденцию к увеличению титра антител, а в индуктивную и продуктивную фазы иммунного ответа вызывало достоверное угнетение антителообразования.

4. ТЭС, особенно в индуктивную фазу иммунного ответа, обладала способностью эффективным образом корригировать нарушения антителообразования и субпопуляционного состава лимфоцитов крови мышей с преднизолон-индуцированной иммунодепрессией: титры гемагглютининов повышались до контрольного уровня; наблюдалось достоверное возрастание содержания В-лимфоцитов, теофиллин-резистентных лимфоцитов, индекса Тфр/Тфч, "активных" Е-РОК, снижение относительного содержания 0-клеток.

5. Иммуномодулирующие эффекты ТЭС' были аналогичны действию синтетического аналога мет-энкефалина §-42, однако влияние ТЭС имело большую выраженность. Особенно эффективным оказывалось применение ТЭС с целью коррекции преднизолон-индуцированного иммунодефицита.

6. Иммунотропные эффекты ТЭС, также как и синтетического аналога мет-энкефалина §-42, зависали, во-первых, от исходного состояния иммунной системы, во-вторых, от времени в которую проводилось воздействие по отношению к моменту иммунизации. Иммунотропные эффекты ТЭС и §-42 в большей степени были выражены при нанесении указанных воздействий в' индуктивную фазу иммунного ответа.

7. ТЭС в режиме аналгезии обладает выраженными иммуномодулирующими эффектами, особенно в условиях угнетения иммунной системы. Основной механизм реализации этих эффектов обусловлен активацией опиоидергического звена антиноцицептивной системы ствола головного мозга.

Работы-автора, опубликованные по теме диссертации

1. Каде А.Х.. Лебедев В.П., Парахонский А.П., Рубцовенко А.В. Иммуно-модулирующие эффекты синтетического аналога энкефалинов и транскраниальной электростимуляции высвобождения эндогенных опиоид-ных пептидов // Усп. физиол. наук. - 1994. - №3, т.25. - С. 24.

2. Kade A.Ch., Lebedev V.P., Parachonski A.P., Khanferyan R.A., Rubtsovenko A.V Immunorehabilitation possibilities of opioid peptides // Intern. Jorn. Immunoreabilit. Abstracts of the 1st Int. Congr. on Immunorehabilit. - 1994. - №1, Suppl. - P.151.

3. Рубцовенко А.В. Иммуномодулирующие возможности транскраниаль-• ной электроаналгезии // Материалы 55-ой студ. научн. конференции с уч. молодых ученых. - Краснодар. - 1994. - С. 137-138.

4. Rubtsovenko A., Kade A., Borovikov О. Transcranial electrical stimulation effect on stress-induced humoral immune response imbalance // Allergy. - № 26, v. 50. - 1995.-P. 404.

5. Рубцовенко A.B. Влияние транскраниальной электростимуляции на формирование антителообразующих клеток в селезёнках мышей линии СВА // Материалы 56-ой конференции студ. научн. об-ва. - Краснодар. -1995.-С. 435-436.

6. Каде А.Х., Рубцовенко А.В. Транскраниальная электростимуляция как метод иммунореабилитации // Intern. Jorn. on Immunorehab. - 1995, № 1. -P. 59.

7. Рубцовенко А.В., Каде A.X., Парахонский А.П., Боровиков О.В. Влияние транскраниальной электростимуляции на постстрессорные изменения иммунитета// Тез. докл. III Межд. симп. врачей. - Геленджик. - 1995. - С. 120-121.

8. Каде А.Х., Парахонский А.П., Боровиков О.В., Рубцовенко А.В. Опиодергичёская модуляция функций иммунной системы: возможности и перспективы // Кубанский научный медицинский вестник. - 1995. - № 5-6. - С. 37 - 39.