Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Иммунотропные эффекты некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты

На правах рукописи

Беляева Светлана Сергеевна

ИММУНОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГАММА-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Быстрова Наталья Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Митченко Петр Петрович кандидат медицинских наук Толмачев Николай Егорович

Ведущее учреждение:

Российский государственный медицинский университет

Зашита состоится « 2004 г. в час. 00 мин. на

заседании диссертационного Совета К 208.039.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КГМУ.

Автореферат разослан «

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Ноотропные препараты - это вещества, активизирующие высшую интегральную деятельность мозга, восстанавливающие нарушенные мнестические и мыслительные функции, снижающие неврологические дефициты и повышающие резистентность организма к экстремальным воздействиям. Группа ноотропов разнообразна как по химической структуре, так и по механизму действия, но все эти вещества объединяет способность улучшать процессы обучения и памяти, повышать устойчивость мозга к внешним неблагоприятным воздействиям, особенно при исходной недостаточности этих функций (Воронина Т.А., 1991; Насыбуллина Н.М., 1997). По фармакологическим свойствам ноотропы отличаются от остальных психотропных средств. Они не оказывают выраженного психостимулирующего или седативного эффекта, не вызывают специфических изменений в биоэлектрической активности мозга. Характерными проявлениями их действия являются: стимуляция передачи возбуждения в центральных нейронах; облегчение передачи информации между полушариями головного мозга; улучшение энергетических процессов и кровоснабжения мозга; повышение устойчивости головного мозга к гипоксии.

В литературе есть сведения, что отдельные препараты из различных групп ноотропов обладают выраженными иммуностимулирующими или имму-носупрессорными эффектами, которые следует учитывать и использовать при выборе средств лечения (Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., 1994; Забродский Б.Ф., 2000; Нечаев О.Г., 2000). Известным иммуномодулирующим действием обладают некоторые представители ноотропов из группы производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибут, натрия оксибутират) (Земсков A.M. и др., 1997). Однако, обобщенных целенаправленных данных, в том числе и сравнительных, по иммуномодулирующим, антиоксидантным и репаративным эффектам остальных представителей данной группы ноотропов в доступной литературе нет, но, учитывая известные механизмы фармакологических эффектов производных гамма-аминомасляной кислоты (в первую очередь, внутриклеточная стимуляция энергетического и пластического обмена), можно предположить, что данная группа ноотропов может обладать указанными свойствами, особенно в условиях патологии.

Целью работы было исследование иммуномодулирующих, - антиокси-дантных и репаративных свойств некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты.

Задачи исследования.

1. Изучить антиоксидантные и гепатотропные эффекты производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибута, пантогама и пикамилона) у здоровых экспериментальных животных и в условиях острого токсического поражения печени.

2. Установить возможное влияние фенибута, пантогама и пикамилона на процессы физиологической и репаративной регенерации гепатоцитов.

3. Выявить закономерности влияния производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибута, пантогама и пикамилона) на развитие гуморального иммунного ответа.

4. Выяснить влияние производных гамма-аминомасляной кислоты на формирование иммунной реактивности в условиях экспериментального иммунодефицита и повышенной иммунной реактивности.

5. Выявить роль спленоцитарных гуморальных факторов в реализации иммуномодулирующих, антиоксидантных и репарационных эффектов фенибу-та, пантогама и пикамилона.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Фенибут (75; 750 мг/кг), пантогам (4,5; 45 мг/кг) и пикамилон; (10; 100; 1000 мг/кг) стимулируют развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа, повышают фагоцитарную и функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитовпериферической крови.

2. Фенибут (750 мг/кг), пантогам (45 мг/кг) и пикамилон (100 мг/кг) оказывают стимулирующее влияние на показатели репаративной регенерации г гепатоцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода или парацетамола.

3. Введение фенибута (750 мг/кг), пантогама (45 мг/кг) или пикамилона. (100 мг/кг) существенно снижает выраженность биохимических синдромов поражения печени и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в условиях острой токсической гепатопатии.

4. У клеток селезенки, прилипающих к стеклу, фенибут индуцирует выделение гуморальных факторов белковой природы, стимулирующих процессы физиологической и репаративной регенерации, а также корригирующих направленность иммунотропного и гепатотропного действия токсикантов.

Научная новизна. Установлены выраженные эффекты фенибута, панто-гама и пикамилона на формирование гуморального и клеточного звена иммун-

ного ответа, процессы перекисного окисления липидов и репаративную регенерацию гепатоцитов. Выявлена роль спленоцитов в реализации репаративных эффектов фенибута, пантогама и пикамилона. Обнаружена: иммуномодули-рующие гуморальные факторы, продуцируемые фракцией спленоцитов, обогащенных макрофагами, крыс, получавших фенибут; охарактеризована их функциональная активность и молекулярная масса. Получены новые данные о закономерностях участия гуморальных факторов селезенки в формировании иммунного ответа в условиях фармакологической коррекции производными гам-ма-аминомасляной кислоты при токсическом поражении печени. Установленные факты фармакологической коррекции взаимодействия гепатоцитов и им-мунокомпетентных клеток углубляют существующие представления о механизмах сохранения гомеостаза в условиях патологии печени.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована возможность стимуляции иммунной реактивности, процессов физиологической и репаратив-ной регенерации гепатоцитов с помощью производных гамма-аминомасляной кислоты: фенибута, пантогама и пикамилона. Экспериментально доказана возможность применения данных препаратов в качестве средств, влияющих на восстановительные процессы в печени в условиях острого токсического поражения. Расшифрованы некоторые механизмы гепатопротекторного, антиокси-дантного и регенерационного эффектов фенибута.

Опытным путем обоснована возможность взаимосвязанной нормализации иммунного, антиоксидантного статусов и функционального состояния гепато-цитов при токсических формах поражения печени путем применения препаратов-производных гамма-аминомасляной кислоты: фенибута, пантогама и пика-милона. Доказана перспективность дальнейшей работы по изучению продуктов катаболизма фенибута, пантогама и пикамилона на иммунный и структурный гомеостаз.

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации обсуждены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2002, 2004), Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2001, 2002), V Конгрессе аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ) (Москва, 2002), ГХ Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, микробиологии, пропедевтики внутренних болезней Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицин-

ский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» (2003).

Публикации. Результаты проведенных исследований полностью отражены в 6 научных работах в центральной и местной печати, в которых содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Структура и объем работы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу и 17 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 3-х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 212 источников на русском, и 65 - на иностранном языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ-Материалы и методы исследования

Исследования проведены на 1430 крысах Вистар массой 180-220 г. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8-10 животных. Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 часов, умерщвление животных проводили путем декапитации под эфирным наркозом. Для исследования от опытных животных получали сыворотку, клетки селезенки, ткань печени, подколенные лимфатические узлы.

Токсическую гепатопатию у лабораторных животных моделировали путем введения индометацина (Скакун Н.П., Климнюк Е.В., 1990), парацетамола (Венгеровский А.И., Саратиков А.С., 1991) или четыреххлористого углерода (Конопля А.И., 1989).

В экспериментальных исследованиях были использованы препараты-производные гамма-аминомасляной кислоты, представленные в таблице 1.

Таблица 1

Применение препаратов ■

Препарат Фирма-производитель Способ введения • Разовая доза,. иг/кг Схема введения

Количество . введений Интервал i между введениями, ч

Фенибут АО «Олайн-фарм», Латвия внутрижелудочно 75;750 15 24

Пантогам ОАО «Щелковский витаминный завод» внутрижелудочно 4,5; 45 15 24

Пикамилон ОАО «Уфавита» внутрижелудочно 10; 100; 1000 15 24

Способ, дозировка, кратность введения препаратов соответствовали рекомендациям, приведенным в литературе, в пособии по фармакологии М.Д. Машковского «Лекарственные средства» и аннотациях к использованию препаратов.

Приготовление антигена. Схемы иммунизации. Оценка интенсивности развития иммунного ответа и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови. В качестве антигена в опытах использовались ЭБ. Для развития ГИО ЭБ вводили внутрибрюшинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела. Выраженность ГИО оценивали на 5 сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа АОК (Мальберг К., Зигль Э., 1987) и РОК (Зауэр X., 1987).

ГЗТ у крыс индуцировали ЭБ. О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контралатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (Федосеева Т.В. и др., 1993).

Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по ФИ и ФЧ (Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991). Функциональная активность нейтрофилов оценивалась в тесте спонтанного и стимулированного зимозаном восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-сп. и НСТ-стим.) (Хаитов P.M. и др., 1995).

Выделение, фракционирование клеток селезенки и определение их иммуномодулирующей активности. Клетки селезенки фракционировали по их способности прилипать к стеклянной поверхности (Дерфлинг П., Вихнер 3., 1987). Прилипающие и не прилипающие клетки селезенки культивировали в среде 199 (5 х 107 клеток на 3 мл среды), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки и антибиотики (пенициллин и стрептомицин), в течение 3-6 часов в ламинарном- боксе при периодическом обновлении газовой среды (95% кислорода и 5% углекислого газа) и готовили пул (от 5-6 животных) куль-туральных жидкостей фракций спленоцитов: общей, прилипающих и не прилипающих к стеклу (КЖС, КЖСП, КЖСН) (Прокопенко Л.Г., Конопля А.И., 1982).

Белки культуральных жидкостей после диализа и концентрирования фракционировали на сефадексе G-150. Для оценки ММ спленоцитарных белков фракций, полученных при гель-хроматографии, определяли объем выхода белков с известной ММ (Детерман Г., 1970; Остерман Л.А., 1985). Получены три фракции спленоцитарных белков: I выходила в количестве 70±7% и содержала белки с ММ более 150 кД, II выходила в количестве 20+4% и содержала белки с ММ 50-60 кД, III выходила в количестве 10+3% и сою; l < ', i с ММ менее

15 кД. Иммуномодулирующую, регенераторную, антиоксидантную и гепато-протекторную активности КЖС, КЖСН, КЖСП и их фракций определяли путем трехкратного внутрибрюшинного введения с интервалом 12 часов интакт-ным аллогенным реципиентам из расчета 5 мг белка на 1 кг массы тела.

Определение биохимических показателей. В сыворотке крови экспериментальных животных (здоровых и с патологией печени) определяли активность аспартат- и аланинаминотрансфераз, щелочной фосфатазы, концентрацию билирубина по Иендрашеку, холестерина по Ильку, (З-липопротеидов по Бурштейну, общего белка, ставили тимоловую пробу. Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами (Меньшиков В.В., 1987). Интенсивность перекисного окисления липидов оценивали по содержанию в сыворотке крови диеновых конъюгатов полиненасыщенных жирных кислот (Стальная И.Д., 1977) и малонового диальдегида (Стальная И.Д., Гаришвили Т.В., 1977). Кроме этого, определялась активность каталазы (По-дильчакМ.А., 1987).

Морфологические методы. Влияние производных гамма-аминомас-ляной кислоты на процессы физиологической и репаративной регенерации в гепатоцитах здоровых крыс и с токсическим поражением печени изучали с помощью морфологических показателей, характеризующих пролиферативную активность гепатоцитов (количество митозов, диаметр ядер гепатоцитов и индекс двуядерных клеток) (Саркисов Д.С. и др., 1983; Бабаева А.Г., 1987).

Примечание: морфологическая часть работы выполнена на базе патоморфологиче-ской лаборатории при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» при консультативной помощи к.м.н., доцента Дудки В.Т., за что выражаем ему искреннюю благодарность.

Статистическая обработка материала. Статистическую обработку результатов исследований проводили путем вычисления средних арифметических величин (М) и стандартных ошибок (а). Существенность различий средних величин оценивали с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни при р<0,05 и по критерию Стьюдента с помощью программного комплекса «Microsoft Excel XP» на ЮМ Intel Pentium IV.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Иммунотропные эффекты фенибута, пантогама и пикамилона. Установлено, что внутрижелудочное пятнадцатикратное введение фенибута

(10 дней до иммунизации и 5 дней - после) в дозе 75 мг/кг массы тела существенно стимулирует формирование гуморального иммунного ответа на ЭБ (количество иммунных АОК и РОК в селезенке данной группы животных было, соответственно, в 6,5 и 2,4 раза выше, чем в контрольной группе).- Применение препарата в дозе 750 мг/кг массы тела вызывало аналогичный эффект. Использование фенибута в дозе 2500 мг/кг приводило к гибели до 60% экспериментальных животных на 4-6 сутки введения препарата. Введение здоровым животным пантогама в том же режиме и кратности в дозе 4,5 мг/кг массы тела вызывало у них усиление развития ГИО к ЭБ по сравнению с контрольной группой животных (количество иммунных АОК и РОК в данной группе животных превышало аналогичные показатели группы контроля, соответственно, в 3,8 и 1,7 раза). Доза препарата, равная 45 мг/кг массы тела, оказывала еще более выраженное влияние на формирование ГИО, так как количество иммунных АОК и РОК в селезенке животных, получавших пантогам в дозе 45 мг/кг массы тела, соответственно, в 5,4 и 2,2 раза превышало показатели контрольной группы крыс. Доза 450 мг/кг оказывала токсический эффект, о чем говорит гибель 50% экспериментальных животных на 4-5 сутки введения препарата. Пикамилон в дозе 10 мг/кг массы тела также стимулировал формирование ГИО к ЭБ, о чем свидетельствует повышение количества иммунных АОК и РОК в селезенке этой группы животных,, по сравнению с контролем, соответственно, в 2,5 и 1,7 раза. Внутрижелудочное введение пикамилона в дозах 100 и 1000 мг/кг также индуцировало формирование гуморального звена иммунитета. При этом достоверных различий между вышеуказанными дозами препарата в наших экспериментах выявлено не было.

Таким образом, нами выявлены не дозозависимые эффекты фенибута и пикамилона и дозозависимое действие пантогама в стимулирующем формировании ГИО.

При изучении влияния препаратов-производных гамма-аминомасляной кислоты на развитие реакции.ГЗТ, индуцированной ЭБ, установлено, что фени-бут в дозе 75 или 750 мг/кг статистически однозначно стимулировал формирование ГЗТ. Пантогам, примененный в дозе 4,5 мг/кг массы тела, также оказывал стимулирующее влияние на развитие реакции ГЗТ, о чем свидетельствует статистически достоверное повышение РМ и РК в этой группе животных в сравнении с контролем. Доза препарата 45 мг/кг оказывала более выраженное воздействие. Пикамилон в дозах 10, 100 или 1000 мг/кг массы тела одинаково повышал показатели ГЗТ по сравнению с аналогичными показателе ми контроль-

ной группы крыс. Таким образом, пантогам обладает дозозависимым, а фени-бут и пикамилон — не дозозависимым стимулирующим эффектом в отношении развития реакции гиперчувствительности замедленного типа.

При изучении влияния препаратов-производных гамма-аминомасляной кислоты на фагоцитарную и функциональную активность нейтрофилов периферической крови, установлено, что фенибут в дозах 75 или 750 мг/кг массы тела статистически достоверно повышает показатели как фагоцитарной, так и функциональной активности нейтрофилов. Об этом свидетельствует повышение фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа, а также спонтанного и стимулированного зимозаном НСТ-теста.

Пантогам в дозе 4,5 мг/кг массы тела также стимулирует фагоцитарную (повышение ФИ и ФЧ) и функциональную (повышение НСТ-сп. и НСТ-стим.) активность нейтрофилов по сравнению с контрольной группой животных. Увеличение дозы пантогама до 45 мг/кг статистически более существенно повышало все показатели фагоцитарной и функциональной активности нейтрофилов. Полученные результаты дают основания сделать вывод о том, что наиболее существенное влияние пантогама на факторы врожденного иммунитета реализуется при введении препарата в дозе 45 мг/кг массы тела.

Пикамилон в дозе 10 мг/кг массы тела практически не влиял на все исследованные показатели, а в дозах 100 или 1000 мг/кг- усиливал их.

Представляло интерес сравнение иммуномодулирующей активности исследованных препаратов. Поскольку все три препарата оказывают однонаправленное стимулирующее воздействие на иммунную реактивность, а эффект пи-камилона по сравнению с остальными препаратами был наименьшей, решено было сравнить фенибут и пантогам именно с действием пикамилона. Установлено, что наиболее выраженным эффектом в отношении ГИО, ГЗТ и нейтро-фильного звена антиинфекционной защиты обладал фенибут (рисунок 1).

Таким образом, можно сделать вывод о наличии иммунотропной активности у всех исследованных нами препаратов. При этом фенибут был одинаково активен в дозах 75 или 750 мг/кг, пантогам - в дозе 45 мг/кг, пикамилон - в дозах 100 или 1000 мг/кг массы тела. В ряду препаратов «фенибут - пантогам -пикамилон» наибольшей активностью обладал фенибут, а наименьшей - пикамилон.

АОК

ФЧ

Рис. 1. Сравнительная иммуномодулирующая активность фенибута, пан-тогама и пикамштона.

Обозначения: I - радиус окружности - показатели крыс, получавших пикамилон (100 мг/кг) (1 группа);

2 - введение фенибута (750 мг/кг) (2 группа);

3-----введение пантогама (45 мг/кг) (3 группа);

4. По сравнению с 1 группой все показатели 2 и 3 групп статистически достоверны (за исключением ФИ и НСТ-стим. 3 группы);

5 - • - р<0,05 по отношению к 3 группе.

Регенерационная активность производных гамма-аминомасляной

кислоты. В дальнейших опытах использовались дозы препаратов, оказавшие эффективное иммунотропное действие: фёнибут - 750 мг/кг, пантогам - 45 мг/кг, пикамилон- 100 мг/кг. Установлено, что все исследованные препараты в данных дозах не оказывают влияния на показатели физиологической регенерации клеток печени.

В дальнейших исследованиях нами было изучено влияние производных ГАМК на процессы репаративной регенерации гепатоцитов в условиях токсического поражения печени, вызванного парацетамолом или ЧХУ.

Введение ЧХУ существенно и статистически достоверно повышает показатели репаративной регенерации клеток печени (МИ, ИДГ, ДЯГ) по сравнению с контрольной группой животных. Этот факт объясняется развитием репа-ративных процессов в печени под воздействием гепатотоксического агента. Применение фенибута еще в большей степени повышало эти показатели по сравнению с крысами, получавшими только ЧХУ.

Введение парацетамола в наших исследованиях статистически достоверно повышало только один показатель репарации - МИ. Фенибут же повышал все исследованные показатели регенерации, а именно МИ, ДЯГ и ИДГ, по сравнению с животным, получавшими только парацетамол. Все эти данные дают возможность говорить о наличии у фенибута репаративных свойств.

Пантогам также обладал репаративными свойствами в условиях экспериментальной токсической тепатопатии, вызванной введением ЧХУ и парацетамола. Так, в условиях отравления ЧХУ, пантогам статистически достоверно повышал все исследованные нами показатели репапративной активности в гепа-тоцитах (МИ, ИДГ, ДЯГ)- Такой же по направленности эффект отмечался и в случае поражения печени, индуцированного парацетамолом. В этих условиях в группе животных, отравленных парацетамолом и получавших пантогам, наблюдалось повышение МИ, ИДГ и ДЯГ, соответственно, в 3,4, 1,2 и 0,9 раз по сравнению с контрольной группой животных.

Подобные по направленности репаративные эффекты были выявлены нами и у пикамилона. В условиях экспериментальной токсической гепатопатии, вызванной введением четыреххлористого углерода, пикамилон повышал показатели регенерации клеток печени (МИ; ДЯГ и ИДГ), причем наиболее существенный стимулирующий эффект проявился в отношении митотического индекса. Аналогичная динамика была выявлена и в условиях введения парацетамола — достоверно повышались все исследованные показатели, а в отношении МИ проявлялся наиболее выраженный стимулирующий эффект.

Таким образом, исследованные нами препараты-производные гамма-аминомасляной кислоты обладают репаративной активностью в условиях токсического поражения печени, вызванного введением парацетамола, причем ре-паративная активность препаратов возрастала в ряду: «пантогам - пикамилон -фенибут».

Учитывая многочисленность данных об участии гуморальных факторов иммунекомпетентных клеток в регенерации печени с диффузным патологическим процессом (Бабаева А.Г., Зотиков Е.А., 1987; Конопля А.И., 1989; Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995), интересно было изучить роль спленоцитов крыс, получавших фенибут, пантогам и пикамилон, в реализации репаративных и гепатопротекторных эффектов.

Изучено репаративное действие культуральной жидкости спленоцитов крыс с острым токсическим поражением печени, вызванным введением парацетамола. КЖС аллогенных здоровых доноров не изменяла МИ по сравнению с

интактными крысами, а КЖС животных, получавших парацетамол, повышала данный показатель. Этот факт говорит о том, что спленоциты являются одним из звеньев реализации репаративных эффектов в организме в норме и в условиях экспериментальной патологии. В связи с этим и в свете установленного нами влияния препаратов-производных ГАМК на свойства иммунокомпетентных клеток естественно возник вопрос о возможности модуляции этого эффекта данными препаратами. Установлено, что введение КЖС животных, отравленных парацетамолом и получавших фенибут, существенно и статистически достоверно повышает МИ у интактных аллогенных реципиентов. Такой же эффект был обнаружен и при введении КЖС животных, получавших парацетамол и пикамилон. Введение же КЖС крыс, отравленных парацетамолом и получавших пантогам, подобного эффекта не вызывало. В этой группе животных не наблюдалось статистически значимого увеличения МИ по сравнению с контрольной группой. Данные факты свидетельствуют о том, что под влиянием препаратов-производных ГАМК спленоциты способны вырабатывать фактор (или факторы) оказывающий стимулирующее влияние на процессы репаратив-ной регенерации. При этом наиболее выраженный эффект достигается при введении фенибута и пикамилона. В случае использования пантогама подобного эффекта не отмечается.

Установлено, что введение КЖСН животных, отравленных парацетамолом и получавших фенибут, не приводило к статистически достоверному увеличению МИ у интактных аллогенных реципиентов. Такой же результат был получен нами и при введении КЖСН крыс, отравленных парацетамолом и получавших пикамилон. Отсутствие стимуляции репаративной регенерации гепа-тоцитов обнаружено и в случае введение КЖСН от животных, которым вводили парацетамол и пантогам.

Введение же интактным аллогенным реципиентам КЖСП от крыс, отравленных парацетамолом и получавших фенибут, вызывало у них статистически значимую стимуляцию МИ по сравнению как с контрольной группой, так и с животными, получавшими КЖСН. КЖСП животных, получавших парацетамол и пикамилон, оказывала такое же влияние на МИ интактных аллогенных реципиентов. В случае же введения КЖСП от крыс, отравленных парацетамолом и получавших пантогам, стимуляции репаративной регенерации гепатоцитов не отмечалось. Из всего вышеизложенного следует, что стимулирующий фактор (или факторы) выделяется прилипающими к стеклу спленоцитами, основную часть которых составляют клетки макрофагального ряда.

Основываясь на изложенном, было проведено колоночное гель-хроматографическое разделение КЖСП крыс, отравленных токсикантом и получавших исследуемые препараты. Введение интактным животным I и III гель-хроматографических фракций КЖСП крыс, получавших парацетамол и фени-бут, оказывало стимулирующее влияние на показатели репаративной регенерации клеток печени, а введение П гель-хроматографической фракции не оказывало значимого влияния на репаративную регенерацию в сравнении с группой контрольных животных; Аналогичное воздействие на репаративную регенерацию специализированных клеток печени оказывало введение I и III гель-хроматографических фракций КЖСП животных, отравленных парацетамолом и получавших пикамилон. Введение интактным аллогенным реципиентам всех трех фракций КЖСП крыс, которые получали парацетамол и панто-гам, не вызывало стимуляции репаративной активности в гепатоцитах, о чем свидетельствует отсутствие различий в данных группах животных в сравнении с контролем.

Таким образом, можно сделать вывод о существенной роли цитокинов, выделяемых клетками макрофагального ряда, на процессы репаративной регенерации гепатоцитов. Установлено также, что наибольшей активностью в этом плане обладают I и III гель-хроматографические фракции, содержащие, соответственно, в основном, белки с ММ более 150 кД и менее 15 кД, КЖСП крыс, отравленных парацетамолом и получавших фенибут или пикамилон. П гель-хроматографическая фракция КЖСП такой активностью не обладала. В случае введения пантогама можно предположить, что он не индуцирует выделения макрофагальными клетками селезенки цитокинов, обладающих свойствами усиливать процессы репаративной регенерации.

Гепатопротекторное и антиоксидантное действие производных гам-ма-аминомасляной кислоты. Важным представляется вопрос о влиянии производных ГАМК на функциональную активность гепатоцитов. Установлено, что введение фенибута (750 мг/кг), пантогама (45 мг/кг) или пикамилона (100 мг/кг) здоровым животным не оказывает действия на функциональную активность гепатоцитов, о чем свидетельствует отсутствие изменений биохимических показателей сыворотки крови в опытных группах животных в сравнении с контролем. Таким образом, нами сделан вывод о том, что исследованные препараты не оказывают существенных влияний на клетки печени, не повышают проницаемость как цитоплазматической мембраны, так и мембран органелл, не изменяют функциональных свойств специализированных клеток печени.

В качестве экспериментальных моделей патологии для исследования активности пантогама, фенибута и пикамилона нами были использованы модели токсического поражения печени, вызванного введением парацетамола и четы-реххлористого углерода.

Введение парацетамола сопровождается возникновением токсического поражения печени, проявляющегося развитием цитолитического (повышение активности АЛТ и ACT в сыворотке крови), холестатического (повышение активности ЩФ, концентрации билирубина, fJ-липопротеидов) и мезенхимально-воспалительного (повышение тимоловой пробы) биохимических синдромов поражения печени (таблица 2). Повышение концентрации первичных (ДК) и вторичных (МДА) продуктов перекисного окисления липидов, а также снижение активности каталазы свидетельствует об усилении процессов ПОЛ у животных в условиях острой токсической гепатопатии, вызванной введением парацетамола.

Применение фенибута в условиях экспериментальной токсической гепа-топатии нормализует активность АЛТ, ACT (не до уровня контроля), ЩФ, концентрацию билирубина и липопротеидов сыворотки крови, тимоловую пробу. В группе отравленных парацетамолом животных, получавших фенибут, отмечается снижение (но не до уровня нормы) концентрации первичных (ДК) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ, а также нормализация активности каталазы (таблица 2).

Таблица 2

Гепатопротекторный эффект фенибута в условиях острого •

токсического поражения печени, вызванного введением индометацина»

JVi п/п Показатели * 1 группа 2 группа 3 группа

Контроль Введение индометацина' Введение мндоме-тапина и фенибута

1. АлТ 0,9110,04 1,71 ±0,2'' июли*2

2. АсТ 0,82±0,03 1,21 ±0,08*' 1,0310,04*и

3. ЩФ 5,8±0,3 6,910,2'' 5,7Ю,2*г

4. Билирубин 0,29+0,05 0,7910,04м 0,33+0,04'z

5. Р-липопротеиды 0,32±0,03 0,41Ю,02'' 0,31 Ю,02*2

6. Тимоловая проба 0,7±0,02 1,310,05*' 0,6210,03*2

7. ДК 0,83±0,03 1,2810,03'' 0,9510,02*и

8. МДА 1,4±0,09 1,92+0,02'' 1,63Ю,03'и

9. Катал аза 10,511,1 8,010,03'' ' 9,9Ю,02*2

Примечание: * - достоверность различий средних, р<0,05. Цифры рядом со звездоч-

кой обозначают, по отношению к показателю какой группы эти различия достоверны.

При применении пантогама или пикамилона в условиях токсической ге-патопатии также отмечалась частичная коррекция показателей ПОЛ и снижение выраженности цитолитического (понижение активности АЛТ и ACT), хо-лестатического (снижение содержания билирубина, Р-липопротеидов и активности ЩФ в сыворотке крови) и мезенхимально-воспалительного (снижение тимоловой пробы) биохимических синдромов поражения печени.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о наличии у всех изученных производных гамма-аминомасляной кислоты гепатопротектор-ной и антиоксидантной активности. При этом,. сколько-нибудь значительная разница в эффективности действия всех препаратов отсутствует.

В дальнейших экспериментах было изучено гепатопротекторное и анти-оксидантное действие фенибута, пантогама и пикамилона в условиях токсического поражения печени, вызванного введением ЧХУ, так как он обладает иным механизмом повреждающего действия на клетки печени, чем парацетамол. Введение ЧХУ, также как и введение парацетамола, сопровождается развитием цитолитического, холестатического и мезенхимально-воспалительног& биохимических синдромов поражения; печени, причем выраженность данных нарушений существенно выше, чем в случае введения парацетамола.

Фенибут в условиях токсического поражения печени, вызванного введением ЧХУ, также как в случае введения парацетамола, оказывал корригирующее воздействие на измененные токсикантом показатели функционального состояния гепатоцитов. Отмечалось снижение (но не до уровня контрольной группы животных) в сыворотке крови активности АЛТ, ACT, ЩФ, концентрации билирубина, -липопротеидов, тимоловой пробы. Помимо этого, наблюдалось заметное снижение интенсивности процессов ПОЛ, о чем говорит понижение концентрации первичных (ДК) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ в сыворотке: крови, а также повышение активности каталазы. Сходные по направленности эффекты отмечались и при применении пантогама и пикамилона.

Таким образом, можно сделать вывод о корригирующем влиянии выбранных нами препаратов-производных гамма-аминомасляной кислоты на функциональное состояние гепатоцитов в условиях экспериментальной токсической гепатопатии, вызванной введением как парацетамола, так и четыреххло-ристого углерода.

Роль гуморальных факторов селезенки в реализации иммуномоду-лирующих, гепатопротекторных и антиоксидантных эффектов фенибута.

Изучено влияние КЖС экспериментальных крыс с острым токсическим пора-

жением печени, вызванным ЧХУ, и получавших фенибут, на формирование ГИО, индуцированного ЭБ, у интактных аллогенных реципиентов. Установлено, что введение здоровым алло генным реципиентам одновременно с антигеном КЖС интактных крыс не влияло на развитие ГИО по сравнению с контролем (только иммунизированные животные). КЖС крыс с острым токсическим поражением печени, вызванным отравлением ЧХУ, обладает выраженным иммуностимулирующим эффектом. Введение здоровым аллогенным реципиентам КЖС крыс, получавших одновременно ЧХУ и фенибут, приводит к достоверному снижению иммуностимулирующего эффекта (не до уровня КЖС здоровых животных) по сравнению с КЖС крыс, отравленных только ЧХУ.

Таким образом, в КЖС крыс с токсическим поражением печени в течение 4 часов инкубации при 37°С клеток селезенки появляются хелперные цитоки-ны. При одновременном введении гепатотропного токсиканта и фенибута иммуностимулирующие свойства КЖС снижаются.

С целью выяснения природы клеток селезенки, участвующих в выработке (или выделении готовых иммуномодулирующих соединений) выявленных гуморальных факторов, их фракционировали по способности прилипать к стеклу с последующим отдельным получением культуральной жидкости каждой фракции спленоцитов (КЖСП, КЖСН).

Установлено, что КЖСН как здоровых крыс, так и животных с токсическим поражением печени, получавших или не получавших фенибут, не обладает хелперной активностью. Введение КЖСП крыс, отравленных ЧХУ, здоровым аллогенным реципиентам стимулирует развитие иммунной реактивности на ЭБ по сравнению с контрольными группами животных (только иммунизация или введение антигена и КЖСП здоровых крыс). Иммуностимулирующая активность КЖСП крыс с токсическим поражением печени, получавших фенибут, существенно снизилась по сравнению с отравленными животными, но не до уровня контрольных животных.

Была изучена роль гуморальных спленоцитарных цитокинов в реализации иммуномодулирующего действия фенибута на формирование ГИО. Установлено, что только введение III гель-хроматографической фракции.КЖСП крыс, получавших ЧХУ, и содержащей белки с ММ 15 кД и менее, стимулирует развитие иммунной реактивности на ЭБ, что свидетельствует о наличии в КЖСП животных хелперных цитокинов. При совместном применении ЧХУ и фенибута ни одна из гель-хроматографических фракций КЖСП не обладает иммуномодулирующим эффектом.

Таким образом, фенибут способен оказывать иммуномодулирующий эффект, влияя на выработку спленоцитами гуморальных факторов, в условиях нарушенной иммунной реактивности, которая сопровождает развитие токсической гепатопатии.

Учитывая многочисленность данных об участии гуморальных факторов в процессах регенерации печени, была изучена роль спленоцитарных соединений в реализации гепатопротекторных и антиоксидантных эффектов фенибута. Выявлено, что у животных с острым токсическим поражением печени (отравление ЧХУ) развивается цитолитический, холестатический и мезенхимально-воспалительный биохимические синдромы поражения печени,. повышаются процессы ПОЛ. Введение КЖС аллогенных здоровых доноров крысам, отравленным ЧХУ, не влияет у последних на биохимические показатели токсического поражения печени, вызванного введением токсиканта.

Введение отравленным ЧХУ крысам КЖС аллогенных доноров с острым токсическим поражением печени частично снижало активность в сыворотке крови АлТ, ЩФ, повышало активность каталазы, снижало концентрацию билирубина, МДА и тимоловую пробу. Введение отравленным ЧХУ крысам КЖС аллогенных доноров, получавших ЧХУ и фенибут, в еще большей степени корригировало показатели биохимических синдромов поражения печени, а также снижало интенсивность процессов ПОЛ, но не до уровня контрольной группы. При дальнейшем изучении гепатопротекторного и антиоксидантного действия цитокинов селезенки выявлено, что введение КЖСН или II гель-хроматографической фракции КЖСП аллогенных доноров, получавших ЧХУ и фенибут, отравленным аллогенным реципиентам не влияет у последних на проявление биохимических синдромов поражения печени и процессы ПОЛ.

Введение КЖСП, I или Ш фракций КЖСП крыс, получавших ЧХУ и фе-нибут, полностью купирует мезенхимально-воспалительный синдром (так как тимоловая проба достоверно не отличается от уровня контрольной группы), частично корригирует холестатический и цитолитический синдромы поражения печени отравленных животных, оказывает выраженный антиоксидантный эффект.

Таким образом, фенибут оказывает выраженные гепатопротекторный и антиоксидантный эффекты в условиях острого токсического поражения печени, вызванного введением ЧХУ, причем данные эффекты препарат индуцирует у I и III фракций спленоцитов, прилипающих к стеклу, содержащих, в основном, соответственно, спленоцитарные белки с ММ более 150 кД и 15 кД и менее.

выводы

1. Пятнадцатикратное внутрижелудочное введение фенибута (750 мг/кг), пантогама (45 мг/кг) или пикамилона (100 мг/кг) не влияет на биохимические показатели перекисного окисления липидов и функциональной активности гепатоцитов здоровых экспериментальных животных. В условиях острой токсической гепатопатии, индуцированной четыреххлористым углеродом или индометацином, препараты существенно снижают выраженность ци-толитического, холестатического и мезенхимально-воспалительного биохимических синдромов поражения печени, уменьшают концентрацию в сыворотке крови первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов и повышают активность каталазы.

2. Фенибут (750 мг/кг), пантогам (45 мг/кг) или пикамилон (100 мг/кг) не влияют на показатели физиологической регенерации гепатоцитов. Введение препаратов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода или парацетамола, стимулирует процессы репаративной регенерации. Наибольшей репаративной активностью обладает фенибут, наименьшей - пантогам. Выявленные эффекты обусловлены клетками макрофагального ряда селезенки и выделяемыми ими белками с ММ более 150 кД и менее 15 кД.

3. Внутрижелудочное пятнадцатикратное введение фенибута здоровым экспериментальным животным в дозах 75 или 750 мг/кг стимулирует развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа, индуцированных эритроцитами барана, повышает фагоцитарную и функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

4. Пятнадцатикратное внутрижелудочное поступление пантогама в дозе 4,5 мг/кг, в большей мере 45 мг/кг повышает показатели гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и нейтрофильного звена антиинфекционной защиты.

5. Внутрижелудочное пятнадцатикратное введение пикамилона в дозе 10, 100 или 1000 мг/кг стимулирует формирование иммунной реактивности, повышает показатели фагоцитарной и функциональной активности полиморф-ноядерных лейкоцитов периферической крови.

6. В ряду производных гамма-аминомаслянои кислоты «фенибут — пантогам - пикамилон» наибольшей иммуномодулирующей активностью обладает фенибут, наименьшей - пикамилон.

7. Иммуномодулирующий эффект фенибута в условиях острого токси-

ческого поражения печени опосредован изменением выработки фракцией спле-ноцитов, содержащей, в основном макрофаги, хелперных цитокинов с ММ 15 кД и менее. Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты данного препарата обусловлены спленоцитарными белками с ММ 150 кД и менее 15 кД, вырабатываемыми клетками селезенки, прилипающими к стеклу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ!

Результаты исследований могут использоваться в учебном процессе медицинских вузов с целью расширения знаний о закономерностях иммунотроп-ного эффекта некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибу-та, пантогама и пикамилона) в условиях патологии, сопровождающейся нарушением 1'. мунной реактивности. Данные материалы вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр фармакологии, клинической иммунологии и аллергологии, внутренних болезней и пропедевтики внутренних болезней Курского государственного медицинского университета, а также ряда кафедр Самарского,.Воронежского, Санкт-Петербургского и Российского государственных медицинских университетов и академий.

' Выявленные иммуномодулирующая, антиоксидантнаяЛ и гепатопротек-торная активности фенибута, пантогама и пикамилона позволяют более широко использовать препараты данной группы в лечении неврологических заболеваний, протекающих на фоне нарушений иммунного статуса и поражений печени лекарственного или токсического генеза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Беляева, С.С. Иммунотропные эффекты некоторых производных гам-ма-аминомасляной кислоты / С.С. Беляева, А.И. Конопля, А.И. Князев // Тез. науч. тр. Первой междунар. конф.- «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 20-22 ноября 2001 г.). - М., 2001. - С. 34.

2. Гепатопротекторная и антиоксидантная активность некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты / С.С. Беляева, А.И. Конопля, А.И. Князев, Е.Н. Конопля // DC Рос. Нац. конгр. «Человек и лекарство»: Тез. докл. (г. Москва, 8-12 апреля 2002 г.). - М, 2002. - С. 634.

3. Беляева, С.С. Иммунотропные эффекты некоторых производных гам-ма-аминомасляной кислоты / С.С. Беляева, А.И. Конопля // «Современные проблемы аллергологии, иммунологии s и иммунофармакологии». 5-й конгр. Рос. Ассоц. аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ): Сб. тр. (12-14 ноября 2002 года, г. Москва). - М., 2002. - Т. 2. - С. 20.

4. Беляева, С.С. Иммунокорригирующие эффекты некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты при острой токсической гепатопатии / С.С. Беляева, А.И. Конопля, Н.А. Конопля // Матер. II Междунар. конф. «Клинические исследования лекарственных средств»-(г. Москва, 20-22 ноября 2002 г.).-М, 2002.-С. 110-111.

5. Беляева, С.С. Механизмы «гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов фенибута / С.С. Беляева, Н.А. Быстрова // Сб. науч. тр. 69-й итог, науч. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог. наук Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН. - Курск: КГМУ, 2004. - С. 77-78.

6. Беляева, С.С. Роль гуморальных факторов селезенки в реализации им-муномодулирующего эффекта фенибута / С.С. Беляева, Н.А. Быстрова // Сб. науч. тр. 69-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед.-биолог. наук Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН. - Курск: КГМУ, 2004. - С. 78-79.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АлТ - аланинаминотрансфераза, ммоль/(ч х л)

АсТ - аспартатаминотрансфераза, ммоль/(ч х л)

АОК - антителообразующие клетки, 103/селезенку

ГАМК - гамма-аминомасляная кислота

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа-

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ДК - диеновые конъюгаты жирных кислот, АЛЛэ/мл крови;

ДЯГ - диаметр ядер гепатоцитов, мкм

ИАФ - индекс активности фагоцитоза

ИДК - индекс двуядерных клеток, %о

ИСН - индекс стимуляции нейтрофилов

КЖС - культуральная жидкость спленоцитов;

КЖСН - культуральная жидкость спленоцитов, не прилипающих к стеклу

КЖСП - культуральная жидкость спленоцитов, прилипающих, к стеклу

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

МИ — митотический индекс, %о

ММ —молекулярная масса, кДа

НСТ-сп. - тест восстановления нитросинего тетразолия, спонтанный НСТ-стим, - тест восстановления нитросинего тетразолия, стимулированный зимозаном ПОЛ - перекисное окисление липидов

РК - разница количества кариоцитов в регионарном и контралате-

ральном лимфатических узлах, 106 РМ - разница массы регионарного и контралатерального лимфати-

ческих узлов, мг РОК1 - розеткообразующие клетки, 106/селезенку

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФЧ - фагоцитарное число (среднее количество поглощенных час-

тиц латекса на один фагоцит) ЧХУ - четыреххлористый углерод

ЩФ - щелочная фосфатаза, мккат/л

ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 12.02.2004 г. Подписано в печать 16.02.2004 г. Формат 30x42 '/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 20А.

Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

« -3 783

Актуальность темы. Ноотропные препараты - это вещества, активизирующие высшую интегральную деятельность мозга, восстанавливающие нарушенные мнестические и мыслительные функции, снижающие неврологические дефициты и повышающие резистентность организма к экстремальным воздействиям (45, 151, 152, 221). Группа ноотропов разнообразна как по химической структуре, так и по механизму действия, но все эти вещества объединяет способность улучшать процессы обучения и памяти, повышать устойчивость мозга к внешним неблагоприятным воздействиям, особенно при исходной недостаточности этих функций (45; 152). По фармакологическим свойствам ноотропы отличаются от остальных психотропных средств. Они не оказывают выраженного психостимулирующего или седативного эффекта, не вызывают специфических изменений в биоэлектрической активности мозга. Характерными проявлениями их действия являются: стимуляция. передачи возбуждения в центральных нейронах; облегчение передачи информации между полушариями головного мозга; улучшение энергетических процессов и кровоснабжения мозга; повышение устойчивости головного мозга к гипоксии.

Антигипоксическое действие является характерной чертой всех ноотропов, что осуществляется за счет уменьшения потребности тканей в кислороде и повышения устойчивости к развившейся гипоксии (99, 81). К настоящему времени накопилось большое число публикаций, свидетельствующих о сложном мультикомпонентном действии ноотропов. Одним из основных механизмов действия ноотропов является изменение метаболических и биоэнергетических процессов в нервной клетке: усиление синтеза и оборота АТФ в мозговой ткани, активация синтеза протеинов и РНК, улучшение утилизации глюкозы, активизация аденилаткиназы и фосфолипаз. Эти структурные изменения приводят к стабилизации биомембран. Как известно, с активацией свободнорадикальных процессов, перекисного окисления липидов, связан целый ряд патологических состояний, в том числе гипоксия (144, 132) и старение, на которые и ориентировано действие ноотропов (94). В связи с этим, можно предположить наличие у препаратов группы ноотропов антиоксидантных и репарационных эффектов.

В литературе есть сведения, что отдельные препараты из различных групп ноотропов обладают выраженными иммуностимулирующими или им-муносупрессорными эффектами, которые следует учитывать и использовать при выборе средств лечения, особенно когда иммунотропное действие желательно (6, 61). Известным иммуномодулирующим действием обладают некоторые представители ноотропов из группы производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибут, натрия оксибутират) (63). Однако обобщенных, целенаправленных данных по влиянию на иммунную реактивность остальных представителей данной группы ноотропов в доступной литературы нет, но, учитывая известные механизмы фармакологических эффектов производных гамма-аминомасляной кислоты (внутриклеточная стимуляция энергетического и пластического обмена), можно предположить, что данная группа ноотропов может обладать выраженными иммуномодулирующими эффектами, особенно в условиях патологии.

Цель работы: исследование иммуномодулирующих, антиоксидантных и репаративных свойств некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты.

Задачи исследования.

1. Изучить антиоксидантные и гепатотропные эффекты производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибута, пантогама и пикамилона) у здоровых экспериментальных животных и в условиях острого токсического поражения печени.

2. Установить возможное влияние фенибута, пантогама и пикамилона на процессы физиологической и репаративной регенерации гепатоцитов.

3. Выявить закономерности влияния производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибута, пантогама и пикамилона) на развитие гуморального иммунного ответа.

4. Выяснить влияние производных гамма-аминомасляной кислоты на формирование иммунной реактивности в условиях экспериментального иммунодефицита и повышенной иммунной реактивности.

5. Выявить роль спленоцитарных гуморальных факторов в реализации иммуномодулирующих, антиоксидантных и репарационных эффектов фенибута, пантогама и пикамилона.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Фенибут (75; 750 мг/кг), пантогам (4,5; 45 мг/кг) и пикамилон (10; 100; 1000 мг/кг) стимулируют развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа, повышают фагоцитарную и функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови.

2. Фенибут (750 мг/кг), пантогам (45 мг/кг) и пикамилон (100 мг/кг) оказывают стимулирующее влияние на показатели репаративной регенерации гепатоцитов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода или парацетамола.

3. Введение фенибута (750 мг/кг), пантогама (45 мг/кг) или пикамилона (100 мг/кг) существенно снижает выраженность биохимических синдромов поражения печени и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в условиях острой токсической гепатопатии.

4. У клеток селезенки, прилипающих к стеклу, фенибут индуцирует выделение гуморальных факторов бежовой природы, стимулирующих процессы физиологической и репаративной регенерации, а также корригирующих направленность иммунотропного и гепатотропного действия токсикантов.

Научная новизна. Установлены выраженные эффекты фенибута, пантогама и пикамилона на формирование гуморального и клеточного звена иммунного ответа, процессы перекисного окисления липидов и репаратив-ную регенерацию гепатоцитов. Выявлена роль спленоцитов в реализации ре-паративных эффектов фенибута, пантогама и пикамилона. Обнаружены им-муномодулирующие гуморальные факторы, продуцируемые фракцией спленоцитов, обогащенных макрофагами, крыс, получавших фенибут; охарактеризована их функциональная активность и молекулярная масса. Получены новые данные о закономерностях участия гуморальных факторов селезенки в формировании иммунного ответа в условиях фармакологической коррекции производными гамма-аминомасляной кислоты при токсическом поражении печени. Установленные факты фармакологической коррекции взаимодействия гепатоцитов и иммунокомпетентных клеток углубляют существующие представления о механизмах сохранения гомеостаза в условиях патологии печени.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована возможность стимуляции иммунной реактивности, процессов физиологической и репаративной регенерации гепатоцитов с помощью производных гамма-аминомасляной кислоты: фенибута, пантогама и пикамилона. Экспериментально доказана возможность применения данных препаратов в качестве средств, влияющих на восстановительные процессы в печени в условиях острого токсического поражения. Расшифрованы некоторые механизмы гепато-протекторного, антиоксидантного и регенерационного эффектов фенибута.

Опытным путем обоснована возможность взаимосвязанной нормализации иммунного, антиоксидантного статусов и функционального состояния гепатоцитов при токсических формах поражения печени путем применения препаратов-производных гамма-аминомасляной кислоты: фенибута, пантогама и пикамилона. Доказана перспективность дальнейшей работы по изучению продуктов катаболизма фенибута, пантогама и пикамилона на иммунный и структурный гомеостаз.

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации обсуждены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2002, 2004), Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2001, 2002), V Конгрессе аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ) (Москва, 2002), IX Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, микробиологии, пропедевтики внутренних болезней Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» (2003).

Публикации. Результаты проведенных исследований полностью отражены в 6 научных работах в центральной и местной печати, в которых содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Структура и объем работы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу и 17 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 3-х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 212 источников на русском и 65 - на иностранном языках.

ВЫВОДЫ

1. Пятнадцатикратное внутрижелудочное введение фенибута (750 мг/кг), пантогама (45 мг/кг) или пикамилона (100 мг/кг) не влияет на биохимические показатели перекисного окисления липидов и функциональной активности гепатоцитов здоровых экспериментальных животных. В условиях острой токсической гепатопатии, индуцированной четыреххлористым углеродом или парацетамолом, препараты существенно снижают выраженность цитолитического, холестатического, мезенхимально-воспалительного биохимических синдромов поражения печени, уменьшают концентрацию в сыворотке крови первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов и повышают активность каталазы.

2. Фенибут (750 мг/кг), пантогам (45 мг/кг) или пикамилон (100 мг/кг) не влияют на показатели физиологической регенерации гепатоцитов. Введение препаратов в условиях острого токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода или парацетамола, стимулирует процессы репаративной регенерации. Наибольшей репаративной активностью обладает фенибут, наименьшей - пантогам. Выявленные эффекты обусловлены клетками макрофагального ряда селезенки и выделяемыми ими белками с ММ более 150 кД и менее 15 кД.

3. Внутрижелудочное пятнадцатикратное введение фенибута здоровым экспериментальным животным в дозе 75 мг/кг, в большей степени 750 мг/кг стимулирует развитие гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа, индуцированных эритроцитами барана, повышает фагоцитарную и функциональную активность нейтрофилов периферической крови.

4. Пятнадцатикратное внутрижелудочное поступление пантогама в дозе 4,5 мг/кг, в большей мере 45 мг/кг повышает показатели гуморального иммунного ответа, гиперчувствительности замедленного типа и нейтрофильного звена антиинфекционной защиты.

5. Внутрижелудочное пятнадцатикратное введение пикамилона в дозе 10, 100 ли 1000 мг/кг стимулирует формирование иммунной реактивности, повышает показатели фагоцитарной и функциональной активность поли-морфноядерных лейкоцитов периферической крови.

6. В ряду производных гамма-аминомасляной кислоты «фенибут -пантогам - пикамилон» наибольшей иммуномодулирующей активностью обладает фенибут, наименьшей - пикамилон.

7. Иммуномодулирующий эффект фенибута в условиях острого токсического поражения печени опосредован изменением выработки фракцией спленоцитов, содержащей, в основном макрофаги, хелперных цитокинов с ММ 15 кД и менее. Гепатопротекторные и антиоксидантные эффекты данного препарата обусловлены спленоцитарными белками с ММ 150 кД и менее 15 кД, вырабатываемыми клетками селезенки, прилипающими к стеклу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты исследований могут использоваться в учебном процессе медицинских вузов с целью расширения знаний о закономерностях иммуно-тропного эффекта некоторых производных гамма-аминомасляной кислоты (фенибута, пантогама и пикамилона) в условиях патологии, сопровождающейся нарушением иммунной реактивности. Данные материалы вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр фармакологии, клинической иммунологии и аллергологии, внутренних болезней и пропедевтики внутренних болезней Курского государственного медицинского университета; а также ряда кафедр Самарского, Воронежского, Санкт-Петербургской и Российского государственных медицинских университетов и академий.

Выявленные иммуномодулирующая, антиоксидантная и гепатопро-текторная активности фенибута, пантогама и пикамилона позволяют более широко использовать препараты данной группы в лечении неврологических заболеваний, протекающих на фоне нарушений иммунного статуса и поражений печени лекарственного или токсического генеза.