Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Биологическая активность и поиск химических соединений в рядах w-аминокислот, пиримидинов и гуанидина



На правах рукописи Для служебного пользования Экз. №

ПДЕШШШ Михаил Георгиевич

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ПОИСК ХИМИЧЕСКИХ СОВДЩШИЙ' ;В РЯДАХ ю-АМИНОКИСЛОТ, ПИРИМИДШОВ И ГУАНИДЙНА

Специальность 14.00.25- фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Купавна- 2000

Работа выполнена во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ

Научные консультанты: доктор биологических наук

Л.В.Корольченко

Официальные оппоненты:

член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.С.Шашков

заслуженный деятель науки Р5, доктор медицинских наук, профессор Р.Д.Сеифулла

доктор химических наук, профессор Л.Д.Смирнов

Ведущая: организация: Московский медицинский стоматологический

университет

10 Л ^

Защита состоится 2000 г в _часов

на заседании диссертационного совета (Д 098.01.02) во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активны веществ (ВНЦ БАВ) по адресу: Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ: Московская обл., пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23 Автореферат разослан " 0?- "Сб 2000 г

Ученый секретарь диссертационного совета Доктор биологических наук

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность гены.Патология сердечно-сосудистой системы является заннейЕвй медицинской и социальной дробленой XX века. Заболевания сердца я сосудов устойчиво закипают первое место среди причин инвалидности и смертности населения. 3 структуре указанных выье заболеваний ведущее место обычно отводят гипертонической болезни . . ' .

Однако, не менее актуальное значение приобретает и проблема гипотонических состояний,которые характеризуются острым спилением артериального давления и возникают при многих патологических состояниях: при больвих кровопотерях, инфаркте миокарда, аллергических состояниях, отравлениях, острых инфекционных заболеваниях, различных видах шока, травмах, ожогах, а такке при инсульте, анемии, возрастной гипотензии, язвенной болезни келудка, заболеваниях печени, лучевой болезни, после оперативных вмешательств (Е.А.Мухин, 1988). При этом количество применяемых з клинической практике препаратов для лечения хронической гипотонии совсем невелико " ' .

Применяемые в настоящее время пресеоркые (гипертензизные) препарата не отвечают в полкой мере требования;'.! практической медицины: одни малоэффективны, другие имеют существенные недостатки (кратковременность действия, ухудшение кровотока з :::из-меннозанных органах, способность вызывать тахикардию, нарушать метаболические процессы и др.}(2.А.Мухин, I2S3).

Поэтому весьма актуальной остается проблема поиска, изучения, отбора и знедренпя новых эффективных, длительно действующих Гйпертензивных средств для лечения одного из самых распространенных сердечно-сосудистых заболеваний- гипотензии.

Другая часть представленной работы посвящена проблеме поиска эффективных пероральных антидиабетических средств.

Заболеваемость сахарным диабетом в стране и за рубеком характеризуется устойчивой тенденцией роста, составляя в структуре эндокринной патологии 70-80^, и занимает ¡Л место после сердечко-сосудистых и онкологических заболеваний по распространенности, частоте инвалидности и смертности. В медицинской практике применяется очень ограниченный набор (не более 10) пероральных антидиабетиков, причем все они по химической структуре относятся к ряду сульфонилмочевкн или к бнгуанидам.

Б результате длительного применения некоторые препараты теряют свою эффективность. Поэтому поиск новых менее токсичных и более эффективных пероральных антидиабетических средств также является одной из важнейших проблем медицины.

Постановлением Правительства Российской Федерации от 01.06.96 № 6^7 "О мерах государственной поддержки лиц, страдающих сахарным диабетом", образована Межведомственная комиссия и разработана целевая программа "Сахарный диабет" для поддеркки производства российских сахароснижаэщкх препаратов.

Б последнее время внимание фармакологов и химиков все более привлекают естественные метаболиты с широким фармакологическим спектром действия или соединения, близкие к ним по структуре.

Особый интерес представляют малотоксичные природные вещества, которые могут служить исходными компонентами для получения новых лекарственных препаратов.

Основные компоненты должны также иметь активные функциональные группы для синтеза многообразных веществ различной химической структуры. Этим требованиям удовлетворяют У-аминомасляная и оро-товая кислоты и гуанидин, которые выбраны нами в качестве исход-

-Г

ных соединений для поиска новых биологически активных веществ сердечно-сосудистого и антидиабетического действия.

Цель исследования. Целью данной работы является попе,1; нозь'х эффективных биологически активных веществ в рядах (^-аминокислот, пиримидияоз и гуанидина.

Задачи исследования

1. Разработать метода получения биологически активных веществ на основе со -аминокислот, оротоЕой кислоты и гуанидина.

2. Провести поиск новых химических соединений сердечно-сосудистого действия в ряду производных и) -аминокислот. Изучить зависимость меяду химической структурой и биологической активностью веществ сердечно-сосудистого действия. Выявить наиболее эффективные соединения и на их основе разработать потенциальное ишертензивное средство и изучать его специфическую фармакологическую активност]

3. Провести поиск новых химических соединений антидиабетического действия среди производных гуанидина. Изучить зависимость мекду химической структурой и биологической активностью веществ гипо-гликемического действия.Выявить наиболее эффективные соединения и на их основе разработать потенциальное антидиабетическое средство и изучить его специфическую фармакологическую активность.

4. Провести поиск новых химических соединений для выявления веществ с фармакологическими свойствами среди производных ГАГИ, оротозой кислоты и гуанидина.

Научная новизна. Впервне выявлены оригинальные производные ГАГ.® и ороговой кислоты, обладающие гипергензивнш дейотвием; установлена зависимость мекду хшшческоЗ структурой и флриакологическоЛ активностью выявленных биологически активных веществ. Впервые обнаружено вырахенлое гипертензивное действие производного ГМК и орото-вой кислоты.

На экспериментальных моделях гииотензий подтверждены выратен-1Ш5 фармакологический эффект и положительные генодинамичеекке свойства, превосходящие в несколько раз препараты эфедрин и изотурон по терапевтической широте и продолжительности эффекта.

Впервые выявлены оригинальные производные гуанидина и ароматических сульфонатов с гипогликемячесним действием; обнаружено зы-сокоэффектяэное соединение с антядяабетичесхпу действием,

Ка основе ГАМХ, оротовой кислоты я гуакидина выявлены перспективные биологически актизже вещества с гепатозагдитным, антпаллер-гическш и антигипоксическим эффектами.

Научно-практическая значимость.

1. Разработан новый антидиабетический препарат "Гуакарбен" с оригинальной химической структурой, получен приказ на его медицинское применение (Л5С4 от С3.08.1999г). Препарат выпускается в промышленном масштабе.

2. Выявлено оригинальное гипертензивкое и кардиотоническое вещество продолзкителъного действия - "Корбутан", полученное на основе природных метаболитов (ГАКК п оротовой кислоты). По многим фармакологическим показателям (продолжительность действия, низкая токсичность и др.) корбутан превосходит известные препараты аналогичного действия. Проведено доклиническое изучение препарата

в полном объеме и документация передана в 5арг*комитет.

3. Выявлены вещества о другими фармакологическими свойствами (ге-патозащитншя, антиаллергпческими и антигипоксическими), которые находятся на стадии доклинического изучения.

4. Разработаны методы получения корбутана и гуакарбена , а такне методы получения и) -аминокислот, гуанидша и их производных.

5. Ценность полученных новых биологически активных соединений, в том числе сердечно-сосудистого, антидиабетического и гепато-защитного действия, защищена: 30 авторских свидетельств и патентов РЗ на применение и способы иге получения.

Апробация щботы. Материалы диссертации были представлены на: I съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995); Мендународной конференции "Кейрофармакология на рубеке двух тысячелетий" (С.-Петербург, 1992); П Международной конференции "Гипоксия в медицине" (Ыосква, 1995); Европейском Симпозиуме по термическому анализу и калориметрии (лена, 1937); Всесоюзном симпозиуме "Фенибут и замещенные у-аашномаслянол кислоты и альгГе.-пирролидона (клиника, фармакология и химия производств)" (Рига, 1381); I "осковской конференции по органической химии и технология (Москва, 1375); П Московской конференции по органической хакш и технологии (Москва, 1579); Всесоюзной учредительной конференции по токсикологии (Москва, 1980); Всесоюзной научно-технической конференции "Актуальные проблемы производства кровезаменителей, консервантов крови, гормональных и органотерапевтаческих препаратов" (Москва, 1982)^Пенреспубликанокой научно-практической конференции: "Синтез, фармакология и клинические аспекты новых психотропных и сердечно-сосудистых веществ" (Волгоград, 1939); У Mocko.ec-ко° конференции но органической; хлмип и технологии 3X0 к/. Д.И. Менделеева (!,!осква, 1939); Всесоюзной научно"; конференции "Оценка фармакологической активности химических соединений: дринципи и подхода" (Москва, 193?); Конференция: "Технология ключевых соединении, используемых в синтезе биологически активных веществ" (Пенза, 1991); Республиканской конференции: "Естественные науки в решении экологических проблем народного хозяйства" (Пермь, 1991); Российской научной конференции: "Создание лекарственных средств" (Москва, 1992); Симпозиуме: "Средства влияющие на сердечно-сосудистую систему" (Волгоград, 1995); 5-оы Национальном

конгрессе по болезням органов дыхания (Ыосква, 1929); П,П,17,Г, У1,УП Российском национальном конгрессе: "Человек п лекарство" (Москва, 1995,1395,1997,1998,1999,20СЭ).

Публикации. По материалам диссертации опубликоЕапо 79 работ, а том числе 27 авторских свидетельств л 4 патента.

Объегл к структура диссертации. Диссертация изложена на 9 страницах машинописного текста, валачает ^& таблиц, ш-

сунка и состоит пз введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследования, заключения и 9 выводов. Библиография включает 442 ссылок на отечественных п иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

А.Методы получения ХС, используемых б поиске новых биологически активных веществ

В нашем исследовании поиск новых потенциальных биологически активных веществ базировался на синтезе ранее неизвестных производных и аналогов кекотрых линейных и циклических м -аминокислот, а так же кислотно-аддитивных солей на основе оротовой кислоты, ароматических сульфокислот и гуанидина.

Исходным сырьем для этих синтезов служили X -анинокасляная кислота, Е-аыинокапроновая кислота, Ы. -пирролидон, оротовая кислота, гуанидин гидрохлорид и другие продукты. Б наших исследованиях в процессе поиска новых оригинальных биологически активных веществ основой слунили соединения,являющиеся такими классическими производными кислот с ковалентной связью, как амиды,хлорангидриды,сложные эфирь; карбоновых кислот,некоторые циклические лакташ и тиолактаыы.

Нине приведены петоды получения ооноеных ш-аминокислот и других полупродуктов, способы получения новых амидов и других производных кислот с ковалентной связью и оригинальных соединений с кислотно-аддитивной связью.

Одной из вакяейвих и) -аминокислот является У-аминомасляная кислота,выпускаемая з назей стране в качестве лекарственного средства под названием "Аминалон". Мы иироко использовали эту аминокислоту в качестве базового продукта в своих синтезах.

2Г-Акиноиасляная кислота получается щелочных расщеплением ос-пир-ролидона с последующим выделением продукта уксусной кислотой к очисткой технического продукта путем перекристаллизации из спирта с выходом 85% (схеиа I).

Е-Аминокапроновую кислоту получают по технологии близкой к способу получения аыиналона путем щелочного расщепления Е-капролакта-

ма. выход продукта достигает 80-86%,считая на капролактам, качество продукта высокое (схема 2).

!У-Ацетил-Б-аминокапронову;з кислоту (ацемин) получают гидролизом Е-капрлактама с последующим апеллированием уксусным ангрдридом. Выход продукта в производстве достигает 73%,считая на капролактам. Качество продукта соответствует международным стандартам (схема 3).

Гуакидина гидрохлорид получают путем сплавления дпциандиамида с хлористым аммонием при нагревании. Быход составляет 80%,считая на дициандиамид.Преимущество разработанного нами метода состоит в том, что полученный технический гуанидин не требует дополнительной очистки и может сразу использозатьса в дальнейших химических процессах (схема Ц-).

Оротозую кислоту высокого качества получают путем кислотного гидролиза раствором соляной кислоты фармакопейного калия оротата при нагревании (схема 5). Выход продукта составляет 95%, а примеси побочных продуктов не превыпают 0,3%.

Хлорангидрид У-амиисжасляной кислоты служит в качестве промежуточного продукта для синтеза многих функциональных производных ГАМК, в частности,для получения амидов и сложных эфиров этой кислоты.Нами разработан метод получения этого продукта на базе ГАПК и хлористого тионила,сущность которого состоит во взаимодействии суспензии ГАЖ в хлористом метилене с тионилхлоридом з токе азота. Целевой продукт,пригодный для дальнейших синтезов амидов и зфиров кислот получают с количественным выходом (схема б).

Амиды оротовой кислоты с аминокислотами и их металлические соли получают путем взаимодействия сухого хлорангядрида оротовой кислота с раствором аминокислоты и триэтиламина с последующим кислотным гидролизом полученпой водорастворимой комплексной соли соответствун>-щего амида кислоты с триэтиламином. (схема 7).

и

Кислотно-аддитивные соли ионной структуры различного типа могут быть получены путем непосредственного взаимодействия соответствующей карбоновой кислоты и органического азотистого основания в подходящем растворителе, в -котором хорошо растворимы оба компонента. Если ке один из компонентов мало растворим в воде или спирте, то реакция кокно проводить при нагревании.

Для получения аддуктов из хорошо "растворимых кислот и оснований карбонозую кислоту алифатического, бензольного или гетероциклического ряда растворяют в воде и к полученному раствору прибавляют стехиометраческое количество амина или аминокислоты.

Для получения кислотно-аддитивных солнй, в которых один из исходных компонентов плохо растворим в воде, нами разработан метод по которому к суспенции карбоновой кислоты в воде прибавляют соответствующий амшг или аминокислоту.

По этой методике был получен "Корбутан", "Аланор" и ряд других аддуктов оротозой кислоты с аминокислотами и многие другие соединения кислотно-аддитивной структуры (схема 9)-.

Гуанидиновая соль 2.4-дихло"о-5-карбоксибенз олсульйоккслоты-новый отечественный пероралькый антидиабетик под названием "Гуакар-бен" получен по разработанному нами методу путем хлорсульфирозаная 2,4-дихлорбензойной кислоты с последующим гидролизом полученного сульфохлорида до сульфокислоты и взаимодействия последней с гуаня-дином. (схема 10).

Для получения трудно растворимых кислотно-аддитивных солей различных классов нами был предложен новый оригинальный способ получения кислотно-аддитивных солей трудно растворимых карбоновых кислот и аминов либо аминокислот по реакции "двойного обмена", зак-

лючакадися в прибавлении. к зодко." лг.бо спиртовой суспензий мало растворимой карбоковой кислоты тризтплагина, • с последующи". взаимодействием полученного при этом водорастворимого комплекса с водным или спиртовым растэором отдельно приготовленного хлоргидрата соответствующего амина пли аминокислоты.. ■

По этог/.у методу нами было получено более 30-ти новых химических соединений, относящихся к классу кислотно-аддитивных солей хлорзамещенных бензойных кислот, оротовой кислоты, салициловой и ацетилсалициловой кислот, пиридиндикарбоновой кислоты.

Всего было получено более 140 соединений, являющихся производными линейных и циклических аминокислот, ароматических и гетероциклических сульфокислот, оксикислот ароматического ряда, оротовой кислоты, иирэдинкарбоновых кислот, гуанидина, аддуктов кар-бояовых кислот с аминами, аминокислотами, гуанидином, тпомочевияок, аддуктоз ароматических кислот с различными азотистыми основаниями, производных антипирилбигуанидинов и других соединений, которые были подвегнуты первичному скринингу для выявления биологически активных веществ(табл. I). Схемы 1-10 приведены ншке.^ -

СХЕШ ПОЛУЧЕНИЯ СИНТЕЗИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Схема 1.

I I -► КН9(С1Ь)3СООК

шо

КН-,(СН2)3СООН

Схема 2.

(СН2)3

^ --*■ Ш2(СН2)5СО(Жа -► Ш2(СН2)5СООН

Ш О

Схема 3.

(СН2)3

Ш2(СН2)5СООН

ш о

СН3СОШ(СН2)5СООН

Схема 4.

к=с-нк> .КНп с г

II

N11

К'Н4С1 н^ мн2

--► п

ш

■НС1

Схема 5.

НИ

о кн

ок

НС1

Схема 6.

Ш2(СН2)3СООН Схема 7.

50С1,

-*• Ш2(СН2)3СОС1 • НС1

нк

ж

СГ N11

О

ОН

о

шм

л

О №1

О

С1

МН2(СН2)пСООН -

(С2Н5)3К

ш

ж .

О МН ^СО№1(СН2)пСОО!1 . N(02115)3

ня

л „

О ЫН ^СОЫН(СН2)пСООН

Схема 8.

НЫ

Ж .

о ш ^-соон

Вг-СН2-СН=СН7

о

ни'

о'^ы' "^-соон

¿н-,-сн=сьь

Схема 9.

А..

КН2(СИт)3СООН ——1-*

Н3Ы(СН7)3СОО

о кн ^соон I

ны

ж .

О ИН СОО" КН3(СН,)3СООН Ш корбутан

Схема 10.

NH I!

гуакарбен

Химическая структура синтезированных производных аминокислот, оротовой кислоты и суанидина

№№ п/г. Химическая формула Химическое название

1 2 3 4

1. 1МН2-СН2-СН2-СНгСООН у-Аминомасляная кислота (ГАМК) (аминалон"1

2. МН2-СН2-СН2-СН2-С001л Литиевая соль ГАМК

3. МН2-СН2-СНгСН2-СОС1 Хлорангидрид ГАМК

4. №1г(СН2)5-СООН е-Аминокапроновая кислота

5. СИ3СО^И-(СЛ2)5-СООН №Ацет)1Л-с-аминокппроповая кислота

б. С11.,СО-Ш-(СН2)5-СОО№ Натриевая соль Ы-ацетиламинокапроновой кислоты (ацемин)

7. о Л (Т ын ^соон Оротовая кислота

8. И • "С1 N11 Гуанидин гидрохлорид

9. ........ М,Т^'-бис-(2,6-пиридиндикарбонил)-у-аминомасляная кислота

Таблица I (продолжение)

1 1 2 3 1 4

10. 11. ~Л г~ N — С-С — N Ч " " О о '-дитиооксалил-бис-у-бутирол а кгам

(Г112Ц^ о -( хСг"5 •5—{ ЧС2Н5 п - 2, 3 о Производное тиозолидина

12. х\ О N11 ^СО-М1(СН2)ПСООМ М = И, Ыа, К, и п= 1,2. 3,5 Амиды оротс. :ой кислоты и аминокислот и их щелочные соли

13. О Л X О^ N ^-СООН ¿н2-сн=сн2 М-аллилоротовая кислота

1 2 3 4

л о' N1) ^СООН- К Производные оротовой кислоты

14. К ~ МЬ-СНг-СНг-СООН Оротат Р-аланшт («аланор») --------

15. Я = ЫН2-СН2:СН2-СН2-СООН Оротат у-аминомасляной кислоты («корбутан»)

16. К =КП2-СН-СН2-СООП ' соон Оротат аспарагиновой кислоты

17. я = ын2-с^н2 ын Оротат гуаниднна

18. \-С—(СП,)— с — т/ / II 2п 11 \ ■—Л 0 ° // 11 = 2, 3, 4. 8 Производные бис-тиопирролидопа

] 2 3 4

НООСГ N ^СООН Производные пиримидиндикарбоновой кислоты

20. К.-=(С5НП)2Ш

21. К = МН2(СН2)3СООН

22. К = ЫН2(СН2)5СООН

23. О-/""' Я-

24. п^ N11 т К= -

Б.Животные, препараты сравнения.

В экспериментах использовались аутбредные мыши обоего пола массой 18-28 г, крысы обоего пола массой 120-180-220-460 г, содержащиеся в стационарных условиях вивария, морские свинки массой 350-550 г, кролики массой 2,0-2,5 кг, кошки массой 2,5-5,0 кг, собаки массой от 7 до 14 кг.

В качестве препаратов сравнения использовали: капсулы и ампулы эссенциале, субстанции эфедрина, изотурона (этирона), глюкофага, букарбана, адебита, фенформина, бутамида, хлорпропамида, кромогликата натрия, будесонида, теофиллина, саль-бутамола гемисульфата, индометацина, натрия оксибутирата, дофамина, амфетамина, карнитина хлорида.

Первичному скринингу на различные виды биологической активности было подвергнуто около 150 соединений (ХС) различных хими-чеких классов, синтезированных наш в ВНЦ БАВ.

В. Методы исследования и модели

I. Изучение гшертензивного эффекта и механизма действия корбутана.

Испытание гипертекзивного эффекта проводились з соответствии с установленными требованиями Фармкомитета "Методические рекомендации по экспериментальному (фармакологическому) изучению новых со единений, предлагаемых доя клинических испытаний в качестве антигипотензивных (гипергензивных) средств", М., 198?. Нине приведены методы и модели испытаний.

1.1. Показатели гемо- и кардаодинамикн (ОПС, МОК, ЧСС, УО, ВИД, РДН, скорость сокращения и расслабления миокарда) связанные с САД и работой сердца (Н.Б.Каверина, 1930, Р.Рашер, 1981, В.А Алмазов, 1963), изучались методами термодил>юциа в модификаци. М.И.Гуревича с соавт. (1967), Д.Е.Ванькова, Ю.И.Цыбина (1973) и электромагнитной фкуометрии и регистрации сократимости миокарда (В.В.Зарецкий с соаат., 1974).

1.2. Острая токсичность вновь синтезированных ХС (ЛДс^) изучалась на белых мьшах при в/бр введении по методу В.Е.Прозоровского и "Л.П.Прозоровской (195С).

1.3. Изменение коронарного кровотока изучалось методом введения ра диоактивных микросфер (церия и скандия) (О.С.Медведев, 1988).

1.4. Прессорное действие корбутана изучалось на 4-х экспериментальных моделях гипонтензии кивотных (копии, собака): постгеморрагический шок, постоперационная гипоиензия, анафилактически?; (пептонный) ток и наблюдения за животными с хроническим исходно низким давлением.

1.5. Противоишемическое действие ХС у крыс изучали методом 4-х часовой окклюзии коронарной артерии с определением зон ишемии и

некроза дифференциальны?,! индикаторным методом (Л.Н.Сернов, В.З.Гацура, 1383). 1.3. Фармакокпнетика распределения вещества по органам и тканям животных (белые гжэи) изучалась с применением радаоиндикаторного метода с использованием изотопов и % при синтезе "меченого" корбутана. Расчет фе.рмакокинетических констант проведен в рамках двухчастевой фармакокпнетической. медали (В.Н.Соловьев с соазт., 1Э8С).

1.7. ГЗиотропное действие корбутана изучено в опытах на изолированных сегментах портальной вены крыс (Н.П.Ерофеев с соазт.,1560).

1.8. Изучение механизма гиперт ензизного действия корбутана на процессы адренергической медиации проведено с использованием де-гидроэрготамина и талииолола на котиках с двухсторонней адрена-лэктомией (Ю.М.Лопухин, 1371, О.К.Азакян, 1977).

2. Методы и модели при изучении антидиабетической активности

Испытания проводились в соответствии с установленными требованиями "Методические рекомендации по экспериментальному изучен«® новых пероралышх гипоглккемических фармакологических зеществ" (одобрены Фармакологическим комитетом 9 февраля 1984 г, протокол .'* 3). И., 1984.

Резз'льтаты исследований обработаны методами вариационно:" статистики с использованием 1:-критерия Сгыздента (Г.Ф.Лакин, 1380).

РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

I.ПОИСК НОВЫХ СОВДНШЙ СЕРДЕЧНСНЮСУДЙСТОГО ДЕЙСТВИЯ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ и> -АШ'ШОКИСЛОТ

1.1.Поиск новых гппестензпвных к кардиотонкческпх средств на основе У -аминомасляной кислоты к других и) -аминокислот и оценка их биологической активности

Естественные метаболиты организма,вмешиваясь в процессы регуляции сердечно-сосудистой системы, в то не время являются источником синтеза новых кардиоваскулярных средств (А.В.Вальдман,1986; ¡,'.Д „банковский, 1982; Г.В.Ковалев,1985; В.П.Петров,1988). Поэтому понятен интерес исследователей к ГА1.1К, глутаминовой и аспарагино-вой кислоте,таурину,оротовой кислоте,гуанидину и другим метаболитам, на основе которых монно получать новые аналоги и производные,отличающиеся высокой фармакологической активностью пр.и:низкой токсичности соединений. Известно,что ГАМК оказывает прямое действие на миокарду частности,влияет ка кровоснабжение и энергетику миокарда, снижает сопротивление коронарных сосудов,увеличивает напряжение кислорода з ыкокарде,улучшает показатели 'ЗКГ при коронароспазме СР.Г.Бороян,1971; Г.ГЛкчкаков,1994).Имеются сведения о положительном влиянии ГА1.1К на больных инфарктом миокарда (А.Ю.Турозая,1996). Среди производных ГА1ЛК найдены соединения с протекторным действием при гипоксии (В.Г.Гранин,1989; Т.А.Воронина,1995; А.Г.Зказян,1989).

Имеется несколько сообщений о выявлении новых веществ с гг.пер-тензивкьш эффектом у некоторых производных ГА'Ж и глутаминовой кислоты (И.Н.Тюргнков,1987; В.И.Петров,1988; Г.!£.Цулычша,1979; В.К. Верещагин и др. ,1979; Ю.В.Галаев и др.,1979; Н.В.!.;ухика,1987). Однако синтез этих веществ чаще всего дозолько сложен,связан с использованием токсичных фтор- и фосфорсодержащих продуктов и эти исследования не завершились внедрением новых препаратов в кедкцин-ск;,г.з практику.

2S

Изучение зависимости мевду химической структурой и сердечно-сосудистш действием в ряду новых производных ГАМК

Широкие фармакологические исследования сердечно-сосудистого действия медааторных аминокислот и их производных, проводящиеся в течение многих лет в ВНЦ БАВ и на кафедре фармакологии Волгоградской медицинской академии позволили выявить ряд новых веществ, оказывающих гипертензивное действие.Был проведен скрининг,в частности, 25-ти оригинальных соединений, синтезированных нами в ШЦ БАВ, среди которых было выявлено оригинальное эффективное гипертензивное и кардаотони-ческое вещество продолжительного действия под лабораторным шифром ЛОС-7-78, которому затем дали название "КОРБУТАН".

Для исследования зависимости между химической структурой и сосудистым действием было изучено 25' новых соединений, являющихся производными ГАМК. Исходя из химического строения, все соединения были разделены на 3 группы:

1ая группа- моно- и дизамещенные ГАМК (13 веществ), имеющие общую структурную формулу:

R-NH(CH2)r-CO0J?4

П8* группа- кислотно-аддитивные соли ГАМК и литиевые (калиевые) соли ГАЩ (б веществ), имеющие общую структурную формулу:

R,-NH (CH2)3coor2 Rl-NH¡r(cHz)3CO0Rz

Шья группа- циклические производные ГАМК (4 соединения), имеющие

■ структурную формулу: О

Таблица 2

№ и/п Лабораторным шифр С т p у к г у р и ы с формулы веществ Химические названия веществ и их эффект

1 2 3 4

I группа: моно- и днзамсщспные ГАМК

Монозамещенные ГАМК

i JIOC 26-73 хг • НООСГ ^S02-NI!(CH2)3-C00H' гамма-(5-карбокеи-2,4-дихлорфспмл- сульфонамидо)масляпая кислота гипотензивный

2 JIOC 20-74 CI С1—-CO-NH(CH2)3-COOW Ы-(2,4-днхлорбсизоил)-гамма-амииомасляпая кислота гипотензивный 1 *

3 JIOC 10-76 XX ■ Ы,'Ы'-бис(2>6-ни)солидип-карбошпО-гаммп-амшюмасляпая \ кислота ' средний типертензивннй !

4 . JIOC ! 5-76 ос, Ы-(2-окспС)С11,юил)-1'амма-амнномаслмиа» кислота - гипотензивный

5 ЛОС 4-7У 11,С о 3 \ '/ С —NH—(СН2)3-С о он >}-ацстш1-гамма-ямш!Омасл>шая кислота .средний' гипертензивный'

Продолжение таблицы 2

1 2 3 4

6 ■ • 7 - ЛОС 2-75 НС! • ЫНч(СН?)3СОО-СН,-С=С-СН7-ООС(СНт)3ЫНт - НС) 1,4-бис-(гидрохлорнд гамма-_ам11иобу1']|ра_1)-бутн11-2-;и!ола, гипотензивный альфа, гамма-ди (гамма-амиио-бутирпл) гуанпдии солянокислый гипотензивный

ЛОС 1-80 МН-СО(СН2)3КН2 НС1 • нм = с \ КН-СО(СЫ,)3ЫН2

' Д и з а м е щ е п н ьт е ГАМ К

К 9 " ЛОС 1-78 н.ы о 2 \ // с — МН-(СН2)з-С^ НИ ыы-кн2- НС1 гидразмд-4-гуапндипо масляной кислоты гпдрохлорид гипотензивный

ЛОС 11-80 С2Н5°--ННСО(СН2)3КН-СОС113 1-это1<си-4-(М'-ацет1Ш-гамма-аминобутирпл) аминобспзол гипотензивный

10 1 1 1 ЛОС 6-81 ' У; ОС 7-81 02М--ЫЯСО(СН9)3К! 1-СОС1 )3 1 -шггро-4-(М-ацетш1-с-ампмо- .бУЛХФ.пл) амипобепчол..... высокий гппертензивный !

С—(ч /)-ЫИСО(СН2)5^И-СОСМ3 НО N-/ 1 -карбиксп-4-(М-ацс! пл-с-амппо-бутирил) аминобспзол слабый гипотензивный

12 ЛОС 17-81 Нзс—-Тч'ИСО(СН2)5Ш-СОСН3 1-метил-4-(М-ацстнл-£-амипо-бутирил) амииобепзол гипотензивный

Продолжение таблицы 2

ЛОС 7-78

СООН • ЫН2(СН2)3СООН

соль оротопои и гпмма-а м и 11 о м а и I я 11 о Л к и с л от'' ^ыоокий гипертензивный ■ ^

Ци к л и че с к ие производные Г А М К

ЛОС 12-75

ЛОС 13-75

ЛОС 20-75

ЛОС 2-77

Л

О

//

N — С

N1!,

О

N1-1

\ //■

N — С ^ N11^ • ПС1

О

Л

К1 —С — (СП,)т— С — N /II ""'II

Ч ° °

О о

N—С—^--С — N

II N О О

О

о

апьфа-ппрролидопаламид карбамиIюном кислоты

гипотензивный

гидрохлорид М-амидиио-гамма-бутмролактама

гипотензивный

N.'Ы'-ад) кип 1Л-б| 1с-га.мма-бут1 (рола ктам

нет эффекта.

М,М-Г>ие-(2,6-пиколнпош|)-Шфролидоп-2

гипотензивный

Изучение влияния этих 25 ХС на САД показало, что они по разному изменяют уровень САД: 7 ХС, приведенных в табл.3, оказывали выраженное гипертензивное действие, 14 ХС- гипотензивное Елиянке и 4 ХС- не влияли на уровень САД.

Таблица 3

Сравнительное сосудистое и токсическое действие новых производных ГАМК в опытах на наркотизирозанных крысах

Вещество : ЕД20 (иг/кг), : лдзд (иг/кг), ;Терапевтичес :кии индекс

в/в : в/бр : лд50/ЕД50

Л0С-Ю-76 11,59 (7,71-17,42) 1410 (462-9-2749,8) 121,66

ЛОС-6-81 23,48 (10,67-51,95) 1850 (651,0-3350,4) 78,79

ЛОС-1-84 55,70 (24,30-127,0) 1780 (900,0-2300,0) 17,95

ЛОС-7-78 59,90 (58,11-61,72) 7500 (4956-10680,0) 125,21

ЛОС-4-79 112,87 (89,00-142,8) 2350 (2010-3138,0) 20,82

ЛОС-5-79 " 340,70 (241,77-480,12) 3400 (1783-6403,0) 9,98

Анализ результатов скрининга позволил выявить 6 наиболее активных гипертензивных веществ (табл.3), из которых, с учетом их токсичности и величины САД были отобраны 3 наиболее перспективные ХС (100-6-81,Л0С-1-8 и ЛОС-7-78). Среди них последнее соединение (ЛОС-7-78) оказалось в 5 раз менее токсичный,чем Л0С-10-76 и оно по результата!! первичного скрининга наиболее полно удовлетворяло требованиям,предъявляемым к прессорным веществам. Поэтому оно и было выбрано для дальнейшего углубленного фармакологического изучения.

Соединению ЛОС-7-78 было дано название "КОРБУТАН". Оно было получено по следующей схеме:

соон + нн2(сн2)3с00н сАМ1/~СОО~ ^(сн^соон

КОРБУТАН

Норбутан по химической структуре относится к классу кислотно-аддитивных солей с конный ига он связи, исходными компонентами для получения которого служа? два природных метаболита- ГА!лК и оротовая кислота. Это было доказано с помощью современных физико-химических методов исследований СЙК-, ПНР-, масс-спектры, дериватографпческие методы анализа, а такие результаты изучения фаркакокинетики "меченого" корбутана).

Образующие корбутак компоненты не проявляют гипертеизивного аффекта, а ГАЫК даке сникает его.

1.2.Фармакологические исследования нового потен- ,r \

циального гипертеизивного средства- КОРБУТАН

Вазоактивные (гшхортензлваые) свойства корбутана были изучены яри различных путях введения препарата на наркотизированных нембу-талом и на ненаркотизированннх нивотных. изучено влияние корбутана на САД и другие показатели центральной гемодинамики в условиях нормы и при патологических сосотокниях. Проведено сравнение n;osoсорного эффекта корбутана с препаратами эфедрин и изотурон в эквиэффек-тивнои дозе изучена фармакокинетика распределения и элиминации

вещества з органах, влияние соединения на региональным крозоток в Еизненно заяжых органах. Сделана попытка установить механизм действия корбутана. Наконец, гипертензивный эффект препарата был проверен на 4-х экспериментальных моделях гчпстензпй.

Действие корбутана на сездзчно-сосудкстуа систему. Опыты ло определению САД проводились на наркотизированных нивоткых (кошш,кролши собаки) и на яивотшх в свободном поведении в дозах от 0,75 до 500

мг/кг при в/в и з/бр путях введения препарата. Установлено,что эу--

"'Изучение пгепрата проводилось в ВИЦ БАВ совместно с кафедрой фармакологии Волгоградского государственного медицинского института (зав. кафедрой профессор Г.Н.Ковалев),

фект имеет дозозависимый характер, достигает максимального значения 43$ от исходного уровня через 1-2 часа и продолжается до 4-5 часов.

Влияние корбутана на кардио- и гемодинамику животных.Основные по казатели кардио- и гемоданакмики исследованы методом термодилюции (табл.4, разд."а").

В другой серии экспериментов методом магнитной флуометрии и ре гистрации сократимости миокарда оценивалось действие корбутана на центральную гемодинамику и кардиотропное действие препарата (табл.4 разд. "б"). Из приведенных в этой таблице данных следует,что корбу-тан вызывает у наркотизированных кошек повышение артериального (САД и внутрижелудочкового (ВЖД) давления. При этом МОК уменьшается благодаря снижению УО. Сократимость миокарда и ОПС увеличиваются. Ги;, пертензивный эффект препарата начинается через 30 мин и постепенно развивается. Продолжительность его действия 4-5 часов, а.затем давление постепенно восстанавливается до исходного уровня.

Следовательно, корбутан обладает выраженным гипертензивным и кардиотоническим эффектами, причем продолжительность его вазопрес-сорного действия более 4-х часов.

Влияние корбутана на региональный кровоток.Установлено,что веще< тво увеличивает кровоток к почках на 47%, в печени- на 8,5$, скеле' ных мышцах и коже- в 2 раза, в мозге- на 42$, что является благопр; ятнными факторами.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том,что ко; бутан удучшает кровоток в жизненно важных органах, в первую очеред страдающих при гипотензиях.

Сравнительное изучение влияния на сердечно-сосудистую систему корбутана,эфедрина и изотурона.Дпя оценки перспективности нового препарата было проведено сравнение влияния корбутана,эфедрина и из турона на САД и основные показатели центральной и региональной гем

динамики в сопоставимой дозе Щ^д (табл. 5). На основании серии срав нительных экспериментов можно сделать важное заключение,что введете эфедрина и изотурона в дозе ВД^О вызывает непродолжительный гипертен зивный эффект. Повышение САД под влиянием эфедрина обусловлено увеличением МОК и ОПС. Подъем САД под влиянием изотурона осуществляется главным образом за счет резкого увеличения ОПС, в то время как МОК и УО изменяются статистически недостоверно.

В таблице б представлена общая сравнительная фармакологическая характеристика корбутана, эфедрина и изотурона.

С учетом критериев для гипертензивных средств, согласно "Методическим рекомендациям по фармакологическому изучению новых антигипотензивных средств" (Е.А.Мухин и др.,1989), есть основания утверждать,что корбутан в большей степени, чем эфедрин отвечает требованиям, предъявляемым к "идеальному" гипертензивному средству. Он су-цественно превосходит эфедрин и изотурон по величине и продолжительности гипертензивного эффекта и по основным гемодинамическим показателям и при этом не вызывает неблагоприятных для работы сердца по-5очных действий. Кроме того, корбутан в 40 раз менее токсичен, чем эфедрин и в 13 раз- чем изотурон. Поэтому терапевтическая широта *орбутана в 2,5 раза выше,чем у изотурона и в 10 раз выше,чем у эфед рина.

Оценка гипертензивного действия корбутана на_4-х экспериментальных моделях патологических состояний.Выли использованы 4 модели чшотензии: анафилактический шок, постоперационная гипотензия, пост-'еморрагическая гипотензия и наблюдения за животными с хроническим [сходно низким артериальным давлением.

Наиболее выраженное прессорное действие корбутан оказывал в >пытах на кошках с постгеморрагической гипотензией и в опытах на со->аках с анафилактическим шоком.Летальных исходов не наблюдалось.

Таблица 4

Влияние корбутана на гемо- и кардиодинамику у наркотизированных кошек

[]оказате-:_ пи гемо- ; динамики ; 30 мин

После введения корбутана"к исходным показателям ^через:^

60 мин

90 мин

120 мин

180 мин

240 ми:

а) Мет о,ц_т е]жоцштции:

САД +15,6+6,2 +27,5+6,2 - +37,9+5,4 +41,7+7,2 +44,8+3

У0 -26,7+6,8 -47,1+6,3 - -52,8+9,2 -40,8+6,8 -38,7+4,

0ПС +35,7+8,2 +48,9+6,4 - +51,6+7,2 +59,9+13,6 +58,0+3,

МОК -18.9+9.6 -47,4+3,8 - -45,4+10,9 -46,6+12,1 -44,5+3,'

б)Метод электромагнитной флуометрии и регистрации

сократимости миокарда:

САД +15,6+3,4 +18,6+2,4 +31,6+6,2 +39,6+6,4

ОПС +35,7+6,6 +48,9+6,7 +58,6+10,9 +61,3+6,6

МОК -23,6+6,3 -49,4+5,8 -47,6+6,6 -57,6+8,3

ЩД +16,6+5,2 +17,8+3,4 +29,8+7,7 +26*6+6,3

РЖ -12,9+16,8 -34,7+8,3 - -36,4+7,3 -30,6+6,2 -23,4+2

«1р 1<Ш +16,4+7,2 +24,1+5,3 +28,3+5,6 +26,6+6,3

+8,8+4,9 +13,6+6,3 +15,4+8,2 +13,6+7,7

Примечания:

х-вещество вводилось в дозе 75 мг/кг, внутривенно ^-данные статистически достоверны (р<0,05).

Таблица .6

Сравнительная фармакологическая характеристика эфедрина, этирона и соединения ЛОС-7-73 (корбутана) в дозе ЕДрп для каждого вещества -

1зучае»ше параметру

Щедрин

Изотурон

Хорбутан

Острая ТОКСИЧНОСТЬ ЛДдд при няутрабр:оншшо1С"взедз-нии мылам (мг/кг)

Продолжительность прес-сорного действия у наркотизированных кошек

Продолжительность прес-сорчого действия у не-наркотлзированннх кошек в свободной поведений

Тахийалаксия

160

30-40 мин

40 мин

сильно выпаженная

530

45

мин

40 мин

умеренно выраженная

7500

более 5 час

3-4 часа

слабо

зыоаженная

Влияние на ЧСС

Терапевт кческая шпрота ЛД50/2Д20

Влияние на ЦНС

увеличивает

106

тенденция к увелачева-нию

385

стпмтлпруп- угнетающее щее

не изменяет

1000

слабо стимулирующее

¿.ПОИСК НОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ АНИТИДИАБ5ТИЧЕСК0Г0 ДЕЙСТВИЯ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ ПУАНВДША

Несмотря на интенсивный поиск новых инсулинонезависимнх антидиабетических лекарственных средств во многих странах в медицинско$ практике применяют 10-12 препаратов.В сущности, среди них представлены только два класса: сульфонилмочевкны и бигуаниды,соотзетствен£ с общими формулами А и Б

(А)

Л/Н ын

r3-nh-c-nh-a-nhi сб)

могут быть различными заместителями и иметь алифатическую,ароматическую,гетероциклическую,бициклическую и др. химические структуры. В известно;,i препарате диабетон (предиан) одна из -/УН- гр является фрагментом бициклической структуры.

Основными представителями сульфонилмочевин и бигуанидов являют ся букарбан (оранил), манинил (глибенкламкд,даонил), диабетон(преди ан,диамикрон,гликозид), глюренорм, адебит (глибутид), глюкофаг (гли формин),т„е. препараты дане последнего поколения (манинил,предиан, глюренорк) являются модификацией давно известного класса- сульфо-нилмочевик.

Поэтому поиск новых антидиабетиков с новыми химическими структ райи представлет болъеой теоретический и практический интерес. Имен такую задачу мы и поставили перед собой.

Новые инсулинонезависимые антидиабетические лекарственные средства на основе гуакидкна а оценка их биологической активности-

-•Все применяемые антидиабетики по химической структуре являются соединениями с ковалентной связью. Ко очень богатыми возможностями

обладает кислотно-аддитивный вид связи. Поскольку гуанидан способен образовывать такую связь с различными химическими соединениями, содержащими в качестве функциональных групп -СОСН, -SOgH, а последние являются фарм;$5форными для многих биологически активных природных и синтетических соединений, то был осуществлен поиск но<-вых веществ на основе гуанидина и различных сульфокислот, моно- и дикарбоновых кислот, оО-аминокислот, пиримидина и пиридинкарбоно-вых кислот.

Среда них наибольший интерес представляют соединения I и П:

Ни

R-C00H'NH2-C"A/W2 Г

NH

R - S03Н • NH¿ -С- NH2 ТГ

Следует особо отметить, что синтетических антидиабетических средств, в которых гуанидан использовался бы в качестве компонента кислотно-аддитивной структуры, нет, поэтому предлагаемые нами структуры I и П являются оригинальными.

В указанных рядах I и П исследовано ряд соединений, которые приведены ниже. На основе лучшего из них по всем показателям был создан препарат "ГУАКАРБЕН", разрешенный для медицинского применения в качестве перорального антидиабетического средства.

Кислотно-аддитивные соли являются диполярными ионными структурами, их растворимость,электропроводность,физико-химические свойства, структурно-механические параметры и биодоступность в организме могут существенно отличаться (чаще в положительную сторону) от этих же свойств каждого из компонентов, из которых были образованы аддукты и от соединений с ковалентной амидной связью

Основные компоненты для получения новых биологически активных веществ

"Л"

НООСЧ/ЧОзН

N0,

503Н

но•{/

ноос'х/^о.н

ноос-Ч^соон

г ^

н^ „ „1 ;чоон

" >СОО(-^ ^осос

СН--СООН I

СН^СООН

«т Г

"Ч^соон

соон

Н2М-СН-СН2-СН2-С00Н

мн

II

н2и-с-мн2

5(0)

нгм-с-ын2

НгМ-(СН2)ц-С00Н

н^-сн

-О

НН о

между теми же двумя фрагментами в амидах кислот. Это открывает перспективу получения большого ряда биологически активных веществ с высокой фармакологической активностью и биодоступностью.

К тому же, синтез- таких аддуктов обычно очень прост, как правило, экологически чист и позволяет широко варьировать фрагменты в получаемых новых соединениях.

Фармакологические исследования нового антидиабетического средства- ГУАКАрБЕН

Гуакарбен представляет собой аддукт 2,4-дихлор-5-карбокси-бензолсульфокислоты 'и гуанидина формулы

""йг

£0з

тг

Н^-С-МНа

+

Появлению препарата ГУАКАРБЕН предшествовал скриниг более 100 химических соединений. В результате скринига для углубленного исследования первоначально были отобраны 12 соединений, имевших кислотно-аддитивную связь между сульфокислотой и гуанидином , различающихся между-собой лишь характером заместителя в бензольном кольце. Окончательный же выбор в пользу гуакрбена был сделан ввиду его более высокой специфической активности и минимальной токсичности (табл. 7). В связи с тем,что гуакарбен представляет собой аддукт гуанидина и сульфокислоты,представляло интерес сравнительное изучение активности его составляющих и их механической комбинации.

Было установлено, что в отличие от гуакарбена, исходные ком- ' поненты его синтеза ^ ароматическая ;сульфоки^

ила их механическая комбинация не обладают выраженным гипогликемичес-кнм эффектом.

Гуакарбен безопаснее адебита в 5-9 раз, фенформина - в 5 раз, глкжофага - в 1,5-3 раза, хлорпропамида - в 1,2-2,5 раза, бутамида -в 1,8 раза и близок по токсичности к букарбану и тиформину (табл.8).

1,5-месячное введение гуакарбена больным аллоксановым диабетом крысам не оказало неблагоприятного влияния на их обмен веществ и гематологические показатели, тогда как глюкофаг вызывал лактоацидоз, гипоальбуминению, повышал, как и бу:;арбан, СОЭ.

Низкую токсичность препарат показал и при 8-месячном и 12-месячном ежедневном перорадьном введении здоровым животным.

Для сравнения гипогликемической активности гуакарбена и сульфо-нилмочеванных антэдиабетиков препараты назначала здоровым крысам внутрь по 50 мг/кг за исключением глибенклагдида, зводимого в дозе 5 кг/кг. Оказалось, что гуакарбен начинает действовать ухе через 3 часа. Спустя 5 час после начала эксперимента активность .гуакарбена возрастает и становятся аналогичной таковой эталонов, тогда как активность гликлазида, напротив, ослабевает.

Судя по величине средней эффективной дозы, гуакарбен превосходит по специфической активности ткформин в 6,9 раза, букарбан - в 3 раза, глюкофаг - р. 1,9 раза и приближается к адебиту и фенфошину, будучи, однако, при этом гораздо менее токсичным.

Таблица ?

Сравнительная характеристика биологической активности структурных аналогов гуакарбена

Соединенно Острая токсичность ') Гипоглнкемическая актиино'сть г)

N п/п химическая структура n ДЛ50, мг/кг п Уровен.ь-гликем ии-

исходный, ммоль/л через 5 часов

ммоль/л " %

1 2 3 4 5 6 7- . ' 8

2 Cl-^ji^CI HOOC^^SOjH N1 ¡2—С—NH Ли 48 1257 ( 1103 + 1432) 6 17,30 ±0,82 5,81+ 0,60 - 66,4 ± 4,0**\

24 . см3 S03H Nib—С—Nib ¿1н 36 730 ( 579 + 920 ) 8 10,70 ±0,75 3,62 ± 0,60 -66,2 ± 3,0***

50 NH2 i^^CI! S03H'kib—C-N1I3 24 1196 (867 + 16S0) 6 16,02+ 1,7о' 5,92 ± 0,84 -63,1 ± 6,2***

Продолжение таблицы 7

1 2 3 4 5 6 7 8

49 ын2 ¿03Н №12—с-ын2 II ын 24 750(581 +968) 10 13,53 ± 1,57 6,60 ± 1,00 • -51,2 ± 2,5***

51 ЫНОСОСНз 9 ' ' ¿ОзН-ИНг—С-Щг йн 30 1598 ( 11754-2173) 6 15,40 ±1.10 6,82 + 0,49 "- ' ; 55,7 ± 5,5***

79 а¥н йн 24 725(594 +885) 6 10,24 ±0,95 5,08 ±0,63 - 50,4 ± 1,3***

39 най НООС^^ЗОзНКНг—С-Ш II ш 24 767 ( 599 + 982) б 15,11 ±0,86 6,01 ±0,96 60,2 ± 5,1 ***

80 соон ^^ОзН-Шг—С-ЫН2 йн 24 725(585 + 899) 6 14,74 ± 0,90 6,1.2 ±0,89 - 58,5 ± 6,7***

<

Продолжение таблицы 7

I 2 3 4 5 б 1 7 8

81 соон Х,ОСОСНз ^Чо3Н- ИН2—С-тЬ йн 24 525(401 -¡-688) 6 14,42 ±0,94 7,09 ±0,96 ' - 50,9±3,2**

82 С! Х,соон ^"ЧозН-Шг—С-Шг N11 • 30 825(602 + ИЗО) 6 14,47 ±0,72 • б,52,±0,7Г -54,9 ±3,3"

83 N1^ Ж-.503Н- ЫН2—С—ШЬ V Лн Ы02 30 825(640 +1064) 6 12,00 ±0,70 6,20 ±0,98 -48,3 ±4,4** •

!8 ЫН2 ¿гк-БОзН -ЫН2—С—ЫН-, От д„ " 36 929 ( 683 +1263) 6 ■ 18,43 ± 1,76 4,80 ±0,36 . -73,9 ±2,3***

1) мыши, в/6

2) крысы с аллоксановым диабетом, ч/рот (0,1 Д-ГЬо). п - количество животных в опыте.

Достоверность отличий по сравнению с соответствующим контролем при р< 0,0! **, р < 0,00! ***

Показано, что у киеотяых с диабетом каддый прием пищи сопровождался постепенным повышением содержания глюкозы в крови. 7 кр: не, получявапх изучаемый препарат, терапевтический эффект его пр является в том, что в течение 10 часов, несмотря на постоянное к мление, уровень гипергликемпл остается стабильным и лишь к 12 ча опыта действие гуакарбена прекращается и уровень глюкозы в крови начинает возрастать.

Поскольку антидиабетические препараты в условиях клиники ис пользуется много лет подряд, изучено сахароснижагощее действие гу акарбена у больных аллоксановым диабетом животных в условиях дли тельного применения - в течение 1,5 месяцев.

Ка протяжении всего эксперимента кивотные имели свободный доступ к пище и воде. В качестве эталонов использовали глюкофаг я букарбан в равноэффективной дозе по 40 мг/кг (табл.Э).

Показано, что на 7 день введения всех сравниваемых веществ содержание сахара в крови животных с диабетом остается таким же, как и до применения,

После месячного приема шпергликемия у крыс, получавших гуа-карбен, стала нияе исходной не 64,I*, букарбан - на 43,55?, а глю кофаг - на 26,1$. Действие гуакарбена при этом превосходило эффе последнего.

Через 1,5 месяца после качала эксперимента гипогликемизирую щий эффект всех сравниваемых веществ еще более увеличился и обео печил уменьшение содержания глюкозы в крови крыс, иолучавзих гуа карбен, на 68,65?, букарбан - на 55,0$, а глюкофаг - на 48,6/5. Специфическая активность эталонного бигуанида и в этот срок наблюдения уступала таковой гуакарбена.

Терапевтический эффект изучаемого препарата, как и букарбан

был устойчив, обеспечивая последействие з течение недели после отмены назначения, тогда как у крыс, прянипавкпх глюкобаг, гипергликемия вернулась к исходному уровню. Величины терапевтической шроты гуакарбена п букарбана у крыс с диабетом практически равны между собой, будучи значительно большими, чем у глюко^ага. Терапевтический хе индекс букарбана в 2,1, а гл5йСо£вга - в 3,3 раза меньше, чем у гуакарбена.

Показано, что гуакарбеи в условиях длительного регулярного использования полностью обеспечивает проявление первоначальной I ипогликемлзирующей эффективности.

При пероральном использовании гуакарбек, подобно бигуанидагд, замедляет всасывание глпкозы из кишечника здоровых п больных ал-локсаловвк дягбето.ч крыс. По выраженности данного эффекта он превосходит адебит и глюхофаг.

Однократное введение гуакарбена здоровым и больным алиокоачо-вш диабетом крысам не влияет на секрецию инсулина. Везете с то:.';, пра З-суточном назначении здоровым кркса?д он укеяьаает гяперзясу-ланемкю, гщдуцпроЕакную глюкозой. Данный эффект пе только скелет опасность истощения ^-клеток рапсксм ,но п нивелирует нелселатель-ные метаболические последствия резких перепадов инсуллпе'дил при сахарном диабете, обусловленных приемом пища.

В плане регулирующего действия на индуцированную глюкозой гЕперсекрецшо инсулина он приближается не только к биа^уанидам, но и к таким производным сульфонзлкочеванк как диабетон и гшгадзай.

Гуакарбем усиливает сахароснияагэщее действие экзогенного инсулина не только у здоровых, но л у больных аялоксанозы\*> диабетом крыс.

Определенное представление о характере влияния гуакарбена на

ляпидный обмен монет быть получено при его ежедневном однократно введении здоровым крысам перорально в течение 8 месяцев. В конце эксперимента концентрация ^-липопротеидов з крови животных уме ласъ на 30-36^.

На фоне аллоксанового диабета содержание у крыс ^з-лшопро тендов повышено более, чем вдвое. Введение им на протяжении 1,5 сяцев дважды в сутки гуакарбена по 30 мг/кг снинало уровень холе териновои фракции ЛПНП на 1/3. Следует отметить, что оба эталона препарата, применяемых в аналогичном резиме в разноэффектпвных г погликемических дозах, данной активностью не обладали.

При аллоксановом диабете начало свертывания крови у крыс ус корено в 1,5 раза, а его длительность - е 1,9 раза. Для изучения влияния гуакарбена на гемореологические свойства его назначали дважды в день по 30 мг/кг на протякении 1,5 месяцев. В аналогии ном рекиме использовали и препараты сравнения глюкофаг и букарба равноэфрективная доза которых составила при этом 40 мг/кг. В результате систематического применения гуакарбена было достигнуто улучшение показателей электрокоагулогр8^^: время начала сзертын ния крови возросло в 1,7 раза, а его длительность - в 2,5 раза. Эффект глюкофага был менее выранен, а у букарбана - отсутствовал:

Изучены гепатопротекторные свойства препарата на фоне введе ния кивотннм 0С1Д. Назначение гуакарбена и силибора до а во врел: затравки оказывает протективное действие а нивелирует вызываемые последним изменения функции органа.

В таблицах 8,10,11 показано преимущество гуакарбена по анта диабетическому эффекту, токсичности и терапевтическому индексу г сравнению с известными бигуанидами.

В НПО "Биотехнология" была разработана лекарственная форма

препарата , представляющая собой таблетки гуакарбена (0,25 г).

Таким образом, гуачарбен является пероральным протяводаабе-тпческим препаратом с оригинальной структурой и биологическими свойствами. Он значительно менее токсичен, чт бигуанидн и большинство сульфонащочевинных средств как при однократно?.'!, так и при 1-1,5-3-12-месячном введении. Гуакарбек превосходит бигуанкдм и большинство суль^окилмочевинных средств по интенсивности гипо-гликемизируттсего деЗоттзая как при однократном, так и при длительно« применении. Его эффект, как и у эталонных препаратов, более вырзяен на фоне экспериментального сахар?гаго диабета, Гуакарбен не кумулирует з организме зшвотных, сохраняет гппогликемизарук^ее действие прл повторных введениях. Его протззодрлбетнческиЛ эффект проявляется через 2 часа, достигает максимальной выраженности к 6-3 часу и сохраняется в течение 1С часов. Гуакарбен обладает экстрапанкреатическиг.' типом протмводпабетического действия. Он задерживает всасывание углеводов, сникая гппертликемиз и гкперин-сулпнеишо, угнетает эффекты адреналина, гликогенолиз и глшонеоре-нез, активирует поглощение иыщзип глюкоза, гликолиз, эндогенный и экзогенный инсулин. Препарат снижает тромбогенные и атерогенные свойства крови, сосудистую проницаемость, обладает противовоспалительным и гепатопротекторным действием. Все эти данные свидетельствуют, что гуакарбен показан для лечения сахарного диабета 2 типа. При диабете 1-го типа препарат мозет применяться дал коррекции йнсулшюрезистектностя. В качестве вспомогательного средства моает быть использован при лечении атеросклероза.

Таблица 8

Острая токсичность гуакарбена и препаратов сравкеккя для мыс ей и кркс

Ii V т ь 3 3 еде н и я

Препарат Б.чутркбрюаинно, перорально

1 Л лд50 (1ЛГ/КГ) : п ':л%0 ((-г/кг)

.! Ы 2 К

Гуакарбен 48 1257 (1103*1432) 42 1925 (1774*2089)

Глюкофаг . 30 '390 (340+447) 30 1266 (1050*1526)

Адебит 24 138 (97*196) -345 (238*500)

Оенформин 24 202 (151+270) 550—)

Ткфориин 24 1598 (1076+2372)

Букарбан 30 1620 ,(1380*1902) 30 274я (2285*3295)

Бутанид Хлорпропамид 700**) 5ctfea) I800"s)

КРЫСЫ

Гуакарбен 24 165 G (1555*1750) 30 2919 (2151*3961)

Глюкофаг 24 400 (375+427) 24 1519 (980*2354)

Адебит 130 (117*144)й)

Буяарбан 24 1«3 С063*1559) 24 4093 (3276+5114)

Бута-ид 775ЙН) 2500^

ллорлропаыпд ' 500н^ 2390*^

данный Блюгер H.A. '"^-лс" данны:.; Галлер Г. :: Птрауцекберг 3.

по данным Халеезой Л.Д. п- количество животных

Таблица 9

Влияние повторных пероральных введений гуакарбена и эталонных препаратов в равноэффективных дозах на уровень суточной гипергликемии больных аллоксановым диабетом крыс

зпарат, ;оза И з и е н е н и е г л и к е м и и, %

На фоне введения - через I неделю после отмены введения

I неделя : I : ; месяц : 1,5 месяца

збен ;г/кг -13,3+ ±13,6 -64,1+ +6,4***) -68,6+ +5,1***) -40,8+10,1**)

)аг п/кг -13,0+ ±6,9 -26,1+ +2,7х ххх) -48,8+ +8,б+10,7хх)

5ан Укг -18,6+ +8,6 -43,5+ +9,3**) -55,0+ +6,1***) -30,9±6,5**)

сроль -2,4± +4,9 -8,0+ +5,4 . +М± ±1,4 -2,0+5,9

1Г1Г

}остоверность отличий по сравнению с контролем при Р* 0,05", Р<0,01 ?< 0,001 по сравнению с эффектом глидифена при Р<0,05-х

р<0,01-хх, Р<0,001-хх:

Таблица 10

Влияние гуакарбена и производных бигуанида на уровень гликемии здоровых крыс

: Доза : : Уровень гликемии, Изменение

Препарат : мг/кг : п :_ ______ммоль/л____________ гликемии, ы

0 : 5 час р

Гуакарбен 50 б 3,95 ¿0,19 3,00 +0,20 -24,1 +4,35а

Контроль 6 3,65 ,0,61 3,49 +0,72 -4,4 +2,0

Глюкофаг 50 6 5,09 +0,11 5,31 +0,18 +4,3 +4,1®

Контроль 6 4,96 +0,09 4,40 +0,14 -11,2 +2,5

Адебит 50 6 4,21 +0,23 4,04 +0,29 -4,4 ¿3,2

Контроль 6 4,37 +0,34 4,05 +0,29 -7,4 +3,8

Фенформин 50 6 4,26 +0,10 4,18 +0Д7 -1,8 +3,8

Контроль 6 4,31 +0,24 4,11 +0,40 -4,8 +5,9

Способ введения- перорально п- количество животных

Достоверность отличий по сравнению с соответствующим контролем при р<0,01 -**.

Таблица I:

Соотношение терапевтической активности и острой токсичности гуакарбена и препаратов сравнения при пероральном введении

крысам

Препарат

Здоровые крысы

Д%0' мг/кг

Крысы с аллоксано-: Терапев-вым диабетом ; тический

мг/к; индекс

Руакарбен

Глюкофаг

Букарбан

2919 (215143961)

1519 (980-4-2354)

4093 (3276-Т-5П4)

24,0 122

(14,04- 41,0)

45,0 34

(37,0-4-55,0)

72,0 57

(48,0-*Ш,0)

3.ПОИСК НОЗЫХ СОЕДИНЕНИЙ В РЯДУ и)-АМИНОКИСЛОТ Я ДРУГИХ КЛАССОВ С РАЗЛИЧНЫМИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ

На базе больного числа синтезированных нами 1С различных клас-ов в результате вирокого скрининга были выявлены вещества с гепато-ащитными (I), антиаллергическими (П), психотропными (П), аитигипо-сическими (1У) эффектами общих формул:

Лт-СООН'НгМ(СН2)пСООН Ах- £03Н-НгМ(СН2^С00Н

Лг-м-со-Ссн^ми

п

мн мн

К(-НН-С-Шг-КЕССОН К3-50ЛН

яГын-с - Nнг • ноос(СНг)„соен К^-СООН"^)^

о

НИ'

1 Ц. соон'н,м-сн(снг)п-соон -

ЫН > II

я:

но-ноос-

-ЗОзН'Н^ (сНг)пСООН IV

но

\СН2)п

50зН< НИ

IV

V

Некоторые из перечисленных ХС обладают высоким эффектом и могут осматриваться в качестве потенциальных лекарственных средств.

ВЫВОДЯ

1. ю -Аминокислоты, шаримидняы и гуанидш являются перспективными классами для создания биологически активных веществ с широким фармакологическим спектром действия.

2. Анализ зависимости биологической активности от химической стр;/к-туры производных гуанидана и ароматических сульбонатов показал, что наиболее выраженным гипогликемическим действием обладают соединения, имеющие в своей структуре сульфогруппу и незамещенный гуанидш.

3. На основе ароматических сульфонатов и гуалидина создан эффективный перораяьный антидиабетический препарат - гуакарбен, который по сравнению с известными бигуанидами и сульфоншмочевинами. обладает рядом преимуществ: эффективен при длительном применении, менее токсичен, сникает тромбогекнке и атерогеннке свойства крови, активирует поглощение мыпцамп глюкозы, эндогенный и экзогенный инсулин, обладает противовоспалительным и гепатопро-текторным действием.

4. Анализ зависимости фармакологической активности от структуры о)-аминокислот и производных пкриивдина показал, что наиболее выраженным гнпертензивным действием обладают соединения, имевшие в своей структуре пириудцин-б-карбоновую и К-аминомасля-нуто кислоты с ковалентной или кислотно-аддитивной связью.

5. На основе ГАШ и оротозой кислоты выявлен потенциальный элективный гилертензивный препарат - корбутан, который превосходит известные препараты по продолжительности действия, низкой токсичности, терапевтической шроте.

Производные из -амакокаслот, пирамидннов и сульфонатов обладают гепатоза-дйтнп-1. действием, наиболее зыраяеннкЗ эффект выявлен у пройззодак оротозой кислоты и и) -аминокислот с кясдояю-ад-дй7ттано" связью.

На основе оротовой кислоты л $ -алааана получено зеаестзо с выражении-- гепатозащптяы"! эф£ек?ом - аланор, который обладает большой шротой терапевтического действия.

На оскозе ц>-аминокислот, оротовой кислоты а гуаыцдина получены орпгянальнке соединения с антиаялергическнми, антигппоксичес-КШ-Ш эффектами, которые находятся на стадии доклинического изучения.

Разработанные методы получения основных компонентов (ГАГ'К,'3-аг.й-нокапропозая кислота, гуанпдкя, ароматические сульфокпслотн и др. позволяют получать биологически активные вещества с различным фармакологически/ спектром.

СПИСОК

работ, опубликованных по теме диссертации

1. "Способ получения гаша-аминомасляноЯ кислоты? //Авт.свид. В 452196, 1974 (В соавГт.с С.Я.Скачиловой я др.)

2. "Способ получения п-аминобензолсульфонилгуанидина (сульгина] //Авт.свид. $ 471360, 1875 (В соавт. с Д.Ф.Скурыдиной и др.).

3. Скачилова С.Я., Плешаков М.Г. //0 строении солей лактанов. -Журн.орг.химии. IS75.-т.II,-вып.7.-е.1570.

4. Машковскай М.Д.»Плешаков М.Г., Альтшулер P.A., Скачилова C.i //Новый нейротропный препарат а\ш1алон.-Хш,.фарм.журн.-1975.-й9.с.6(

5. Стегко Т.В., Скачилова С.Я., Плешаков М.Г. //Циклизация а) -г нокислот э среде диметилсульфоксида.-Еурн.орг.химии.-1974.-т.10.-вы1 -с.1556.

6. "Способ получения литиевой соли У -аминомасляяой кислоты1.' //Авт.свид. №458232.1974 (В соавт. с С.Я.Скачиловой идр.).

7. Скурыдина Д.Ф., Плешаков М.Г., Кузнецов P.M. я др. //Промыт ный метод получения п-амшобензолсульфонплгуанидина (сульгина).-Хим. фарм. курн. -1976. -JS3. -с. 7Э-81.

8. " ^-(дитиооксалюзО-бис-У-бутиролактам, проявляющий антиш робную активность, и способ его получения.//Азт.свид.Й 528848. 1976 (В соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

9. Скачилова С.Я., Плешаков М.Г., Шемерянкина М.И. //Кинетика циклизации эфироз гаша-аминомаоляной кислоты. //В сб.: I московская конференция по органической хшии и технологии.-М.-1976.-с.88.

10. "Способ получения у-аминомасляной кислоты7//Авт.свид.В 5474 1976 (В соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

11. "Способ получения N,N -дитиооксалил-бис- У -бутиролактама'.' //Авт.свид. В 56G4I8. IS77 (В соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

12. "Производные тиозолидина, проявляющие противогрибковую акта! нооть и способ их получения'.' //Авт.свид. .»5562978. 1977 (В соавт. о С.Я.Скачиловой и др.).

13. "Способ получения хлорангидрида У -аминомасляной кислоты" //Авт.свид. J? 55I32I. 1976 (В соавт. с Р.Г.Глушковым и др.).

14i "Зфиры N -(3,4,5-траметоксибеызоил)- у-аминомасляной кислотъ обладающие психотропной активностью" //Авт.свид. 16 6II4I3 (В соавт. С.Я.Скачиловой и др.).

15." М-(3,4,5-тршетоксибензоил)-2,5-пирролидиндион, обладаю-i анальгетической активностью'.' //Авт.свид. J?333256. IS78 (В соавт. 3.Я.Скачаловой и др.).

15. Плешкова А.П., Ермавов А.И., Скачалова С.Я., Плешаков М.Г. зс-спектры и таутомерия циклических амидов и тиоамидов алкандикар-иовых кислот. //В сб.: П Московская конференция по орг.химии и хнологяи-М.-1979.-с Л 58.

17. Плешаков !Я.Г., Скачилова С.Я., Титаренко В.А. // Производ-э N,м'-(дзтиооксалил)-бис-а>-аминокислот. Там же.-с.156.

18. " М,м'-(ацил)-бис-тиопирролидо1ш-2, проявляющие противогриб-вуто активность, и способа их получения. //Авт.свид.!.? 675798.1379

соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

19. "Способ получения 4-гуанидино-бутяра.мида и его производных" Авт.свид. й 577310. 1973 (В соавт. с С.Я.Скачилозой ддр.).

20. "Способ получения N-ацетил-Е-аминокапроновой кислоты" квт.свид. ]■' 753790. I93G (В соавт. с S.U.Шамшиной и др.).

21. Шолохов В.М., Самойлов H.H., Плепакоз ".Г. //Влияние аниона ли на токсичность, фармакокииетику и психотропный эффект лития.

3 сб.: Всесоюзная учредительная конференция по токсикологии.-U. Э8Э. Тез.докл.-с.134.

22. "Производные лирролидона-2 или тиопирролидона-2, обладашие ихотропной активностью антидепрессивного типа" //Авт.свид. №63516". 30 (3 соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

23. Ермаков А.И., Плешкова А.П., Плешаков ".Г. а др. "асс-опен-ометрия N -замещенных альфа-пирролидока и производных гамма-ами-масляной кислоты. //Всесоюзный симпозиум "Фенибут и-замещенные -аминомасляной кислоты и альфа-пирролидона (клиника, фармакология химия производства)" Рига.-1981.

24. "Цинковые соли производных «J-аминокислот, проявляющие гипо-икемическую активность? //Авт.свид. Js890S97.I382 (В соавт. с В.И. егоцким и др.).

25. "Способ получения Е-аминокапроновой кислоты или N-ацетил-аминокапроновой кислоты'.' //Авт.свид. 'S 890698, 1982 (В соавт. с П.Зуевым я др.).

26. Шрамова З.И., Воронин Б.Г., Закс A.C., Алешина В.А., Котегов В.П., Плешаков М.Г., Скачплова С.Я. //Новые производные соединении бигуанида, проявлящие гипогликемическую активность. -Всесоюзная научно-техническая конференция "Актуальные проблемы производства кровезаменителей, консервантов крови, гормональных и органотерадевтических препаратов".М-1Э82. Тез.докл.-с.191.

27. "Соли оротовой кислоты и и>-аминокислот, предупреждающие развитие утомления при физических нагрузках? //Авт.свид. Л 988314. 1982 (В соавт. с В.Г.Ворониным и др.).

28. "Антипирйлбигуаниды, проявлящие гяпогликемическуа активность? //Авт.сзвд. № 932514. 1983 (В соавт. с З.И.Шрамовой и др.).

29. "Производные соединений бигуанида, проявляющие гипогликеми чеокую активностт? //Авт.свид. Д 9Э2514. 1983 (В соавт. с З.И.Шрамовой и др.).

30. "1,3-Ди-(и>-аминоацил)гуанидины, проявляющие гипогликемиче кую активность, и способ их получения? //Авт.свид, К 1009034.1983 (В соавт. с А.П.Зуевым и др.).

31. " KJ-ацетил-Е-ашшогексаноилсалвдиловая кислота, проявляющая гипогликемическую активность? //Авт.свид. Л III0I33. 1984 (В соавт. с А.П.Зуевым и др.).

32. "Дикалиевая соль N,n'-6rc-(2,6-пиридинкарбонил)- У-ашшо-масляной кислоты, обладающая гипотензивной активностью? //Авг.сввд. ß III5433. 1984 (В соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

33. "Призводнне п-аминофенола, проявляющие гипогликемическую активность? //Авт.свид. JA III9306.I984 (В соавт. с А.П.Зуезым и др.

34. Ермаков А.К., Плешкова А.П., Сорокин A.A., Скачилова С.Я., Плешаков М.Г. //Масс-спектры положительных и отрицательных ионов

N-замещенных«с-пирролидона и У -аминомасляной кислоты.-Журн.орг. химии.-1985.-т.21.-вып.9.-с.1986-1993.

35. "Способ получения раствора натриевой соли n -ацетил-Е-ами-нокапроновой кислоты? //Авт.свид. № I3I9345. 1937 (В соавт. с А.П. Зуевым и др.).

36. Эшптейн H.A., Облапенко Е.й., Воронин В.Г., Плешаков М.Г. и др. //Исследование аддуктов оротовой кислоты с аминокислотами и аминами методами ТГА, ДТА и ПГЛР-спектроскопил. -Европейский Симпози до термическому анализу и калориметрии.ГДР,Иена.-IS57.Тез.докл.-с.

37. "Способ получения оз-аминокислот? //Авт.свад. is 1432Э7Э. 38 (Б соавт. с А.П.Зуевымби др.).

38. "Дилигиевая соль ^М-бяс-(2,о-пиридянкарбонил)- У -амино-сляной кислоты, проявляющая гяпертензивнуга активность? //Авт. ид. J6 I4G3580.IS88 (В соавт. с С.Я.Скачиловой и др.).

39. Плешаков М.Г., Скачялова С.Я., Зуев А.П. и др. //Синтез оизводных i -аминомасляпой кислоты и ее циклических аналогов.-жреспубл. научяо-практ.конф. "Синтез, фармакология и клинич. ас-кты новых психотропн. и сердечно-сосудистых веществ". Волгоград.-ВЭ.Тез.докл.-с.44.

40. Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И., Шамшина E.H.//Синтез аддук-в медиаторных аминокислот с оротовой кислотой,- там же.-с.45.

41. Ковалев Г.З., Мазанова Л.С., Плешаков М.Г. и др. //Поиск единений с ноотропными свойствами среди новых производив медиа-рных аминокислот. Там же.-с.128.

42. Снегоцкий В.И., Эпштейн H.A., Плешаков М.Г. //Синтез и рмрстабильность соединений оротовой кислоты с аминокислота«! и инама. В Сб.: У Московская конф. по орг. химии и технол. ВХО им. 'Л.Менделеева. M.-IS89.Тез.докл. .Ч.П.-С.200.

43. Эпштейн H.A., Плешаков М.Г., Снегоцкий В.'Л. //Термическая тойчизость аддуктов оротовой кислоты с аминокислотами и аминами, им. фарм. яурн. -199 0. -ЖЕ. -с. 75.

44. Кирилина В.П., Беспалов АД'., Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И. К оценке потенциального гиполипидемического действия производных

{-амшоиасляной кислоты.-Всесоюзн.научн.конф. "Оценка фармакологич

тивности хшич. соединений: принципы и подходы".-Lä.-I3Ö5. Тез. кл. ч.П.-с.143.

45. Плегаков М.Г..Скачилова С.Я., Зуев А.П. и др.//Промышленные годы получения лекарственных препаратов на основе lo -аминокислот. Комплексная разработка технологии производства синтетических ле-рственных препаратов".-Сб. трудов ВШЕ®И.-;".-Т938.-с.10.

46. Эпштейн H.A., Михалева Л.Ф., Снегоцкий В.И., Андропов В.Г., ешаков М.Г. и др.//Термические свойства оротовой кислоты, !f -ами-масляной кислоты и ее аддукта - фармакологически активного соединяя.- Там яе.-с.35.

GO

47. Плешаков М.Г., Шшшенко B.C., Тимохина И.А. //Усовершенствование производства фолиевой кислоты. -Всесоюзная конференция: "Технология ключевых соединений, используемых в синтезах биологически активных веществ".-Пенза.-1991,-тездокл.-с.5.

43. Котегов В.П., Закс A.C., Плешаков !Л.Г. и др.//Исследование прогиводиабетической активности нового производного гуанидинг -мат.республ.конф.: "Естественные науки в решения экологических проблем народного хозяйства".-Пермь.-I99I.-с.189.

49. Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И., Шамшина E.H. идр.//Синте: и биологическая активность производных оротовой кислоты (обзор).-Бш. ВНЦ БАВ.-М. -1592. -JS2.-с. 64-S2.

50. Радкевич Л.А..Остапчук И.В..Плешаков М.Г. и др.//Изучение гепатозащитных свойств новых производных органических карбон« вых кислот и сульфокислот.-Рос.научн.чонф.: "Создание лекарственных средств".-U.-1992.Тез.докл.-о.153.

51. Радкевич Л.А., Дстапчук Н.В., Плешаков М.Г., Снегоцкий

B.И. //Изучение гепатозащитных свойств новых производных пирамид карбоновых кислот,- Таг/, же.-с. 154.

52. Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И., Шамшина E.H. и др.//Целенаправленный синтез новых гипергензивных средств.-Там ae.-c.I49.

53. Котегов В.П., Закс A.C., Плешаков М.Г. //Исследование ноотропной активности некоторых производных ГАЖ.-Мат.межресп. конф.: "Естественные науки в реиении экологических проблем народ ного хозяйства".-Пер,ib.-19Э1.-Ч.1.,-0.174.

54. Шрачова З.И., Воронин В.Г..Алешина В.А., Плешаков К.Г. др. //Биологическая активность антипирилгуанвдинов.-Бюл.ВЩ БАВ. M.I992. £2.-с.115-122.

55. Котегов В.П., Капитоненко Т.А., Плешаков М.Г., Закс А.С //Изучение ноотропной активности аддуктов ГАЫК и сульфокислот.-Меядунар.конф.: "Кейрофармакологяя на рубеже двух тысячелетий".-

C.Петербург.-1932. Тез.докл.,ч.1.-е.87.

56. Котегов В.П., Закс A.C., Плешаков М.Г. и др.//Гипоглике мическая активность некоторых производных ГАЫК.-Там же.-с.100.

57. Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И., Каганский L3.M. и др./А1з; чение строения солей оротовой кислоты и некоторых аминокислот инс рументальными методами анализа.-Бюл.ВНЦ БАВ,-1994.-с.75-86.

58. Плешаков M.Г., Серпов Л.H..Снегоцкий Б.И. и др.//Синтез шертевзивных и кардиотонических средств на основе оо-амино-юлот,- П-оЗ Рос.нац.конгресс: "Человек и лекарство"f-M.-1995.

; з.докл•,-с.18.

59. Радкевич Л.А..Остапчук К.В..Плешаков ".Г., Снегоцкий В.И. др. //Новые азотсодержащие производные карбоновых и сульфокислот, гаявляющие гепатозащатннй эффект.- Ш-иЗ Рос. над. конгресс :"Чело-■к и лекарство".-м.-1996. Тез.докл.-с.132.

60. Ковалева ЗЛ. .Плешаков УиГ., Пуфазалова Т.Н.//Новые произ->дные карбоновых кислот с антиасткатическяй и противоаллергячео-

й активностью.-Таг/. же,-с.136.

61. Попова В.В., Сернов Л.Н., Новиков З.В., Плешаков "Исследование противогяпоксического действия некоторых производных I5K.- Там se.-с.44.

62. Мазанова Л.С., Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И. //Новое анти-лотензивное вещество - производное ГАМН.-"Фундаментальные исоле-вания как основа создания лекарственных средств".-Сб.тезисов 1-го езда Российского научного общества фармакологов. Волгоград.-1995. .-I995.-c.255.

63. Робаквдзе Т.Н., Скачилова С.Я., Плешаков Ы.Г., Снегоцкий И.//Поиск антигяпоксантов в различных хшшческих рядах.-ЭДат. 2-ой ядународной конф. "Гипоксия в медицине".-4L,-1996.-й2.-с.5б.

64. Попова 3.3., Серноз Л.Б., Новиков В.В., Плешаков И.Г. Исследование противогипоксического и кардиопротекторяого дейст-я производных Е-аминокапроновой кислоты.-17-ый Рос.нац.конгресс: еловек и лекарство".-М.,-1397. Тез.докл.,-с.285.

65. "Аддукты оротозой кислоты с аминокислотами или аминами, оявлящие гепатозащитныЭ эффект? //Пат. #2047608. 1995 (в сояет. 0.3.Буровым и др.).

66. "Щелочные соли амидов оротовой кис.логы, обладающие гипер-нзивной активностью'.' //Пат. £ 2СБ6543.1997 (В соазг. с Ю.В.Буро-и и др.).

67. "Производные арялсульфокислот, проявляющие гипогликена-скую активность? //Пат. „'¿1838296. 1992 (3 соавт. с Ю.В.Буровам

пр.).

68. Голубева М.И., ¡Пашкина Л.Ф., Федорова Э.А., Алещенко 3, Плешаков М.Г. //Глидифен (гуанидиновая ооль 2,4-дахлор-5-карбокс бензолсульфокислоты).-Токсикологический вестник.-1997, E4.c.3I-í

69. Плешаков М.Г., Снегоцкий В.И., Спасов A.A. и др. //Разработка гипертензивных и кардиотонических средств длительного действия - бутакор и эфкобут.- У-ый Рос. нац.конгресс: "Человек лекарство".-í.i.-1936. Тез.докл.-с.613.

70. Способ получения кислотно-аддитивных солей трудно рас; воримых карбоновых кислот я аминов пли аминокислот" //Пат.

JS 2084441. 1997 (В соавт. с Е.Н.Шамшинои и др.).

71. Плешаков М.Г., Котегов В.П., Серпов Л.Н. и др. //Гуака] бен - антидиабетик новой химической структуры. -Бюл.ВНЦ ЕАЗ.-М. -1999,-Щ.-с.21-35.

72. Веселоза К.И., Ковалева В.Л., Плешаков М.Г. и др.//Ант. аллергическое и противовоспалительное действие новых производим: гуанидина. -IX-ый нац.конгресс по болезням органов дыхания.-ív!. 1999.Тез.докл.,-с.253.

73♦ Ковалева В.Л., Веселова H.H., Плешаков М.Г. и др.//Сра: нительная оценка антиастматической и антифосфодиэстеразной акти: ности новых производных кукаринов и гуанидшов. Там ке.-с.254.

74. Плешаков М.Г., Котегов В.П., Сернов Л.Н. и др.//Гуакар антидиабетик новой химической структура.-У1-ол Рос.нац. конгрес "Человек и лекаретво".-М.,-1399 (доклад).

75. "Композиция, обладающая длительным кардиотоническиы и гипертензивным действием? //Авт.свйд..'Ш301483. (В соавт. с Г.В. валешм и др.).

76. Плешаков М.Г., Сернов Л.Н., Снегоцкий В.И. и др. //Вли ние нового производного ГАМК на коррекцию физической работоспос ности.-УП-ой Рос.нац. конгресс: "Человек и лекарство",М- 2000, Тез.докл.-с.534.

77. Остапчук Н.В., Радкевич Л.А., Пынько Н.Э., Плешаков М. и др./Доследование гепатозащитных свойств аланора. Там же, с.5

. 78. Ковалева В.Л., Чучалин А.Г., Попов Д.С., Плешаков М.Г. др. //Броькорасшряющая активность новых оригинальных арилсуль^ натов аминокислот. Там я®, -с.505.

79. Плешаков М.Г., Сернов Л.Н., Снегоцкий В.И. и др./ДорС тан - новое потенциальное гипертензивное и кардиотоническое сре ство.-Бюл.ВНЦ БАЗ.-М.-2000.-ЖЕ.-с.75-86.