Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномодулирующий эффект теплового воздействия и его коррекция эссенциале при токсическом поражении печени

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР КУРСКИИ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИИ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КОНОПЛЯ Евгения Никитична

Иммуномодулирующий эффект теплового воздействия и его коррекция зссенциале при токсическом поражении печени

14.00.36. Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск — 1991

ГаЗота выполнена е Курском ордена Трудового Красного Знамени государственном мсд::цш:скси институте

Научный руководитель:

—доктор медицинских паук, профессор Л. Г. Прокопенко

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Ю. А. Блинков — кандидат медицинских паук Ю. Б. Степанов

Защита состоится <:<

1С* (К'¿О- ¿'>

1091 г. в /{У час

на заседании слецпалпзирошшгого совета К 001.57.01 при Курском ордена Трудового Красного Знамени государственном ксдпцнпскод! институте (305033, г. Курск, ул. К. Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться и библиотеке Курского ордещ Трудового Красного Зпамсшн государственного медицинского ипстптутг

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских неук, доцент

НОВИКОВ.

ощла характеристика тчтт

Актуальность зео&гокц. Бсшши задачами современно*} .агиу-юлоют являются выяснение и механизмов нарзтаеявя ишу-

гологяческой реактивности организма в отноиэния различных ан-игзноа з условиях патологии и разработка та этой основе а®ск-•ивнкх своообов ;1:.т:.г/яст1орро:адп. Иимунвне механизмы играй? вак-ув роль з латогеяе^о л сакогеяеэе заболеваний печееи либоа к:слота:: (lornnoo A.C., Екок D.E., 1987; Hizcta, 1987). Kit-'* евдиояназ и токсические аорйЕеаия печена характеризуется зка-згвльга варуиениви юяуиояогаческоЗ реактивности организма в тношени;; Т-гпвислмых антпх^ноз (Ильчевич Н.В. а др. ,1984; Цро-отеяко Л.Г., Конопля А.К. ,1?г,5; HLdaKa, ISÖ8).

Поотупшшс в организм гепатотроишх ддов часто сочетается : действием на организм высокой температуры охруяэпщеЕ среди хшвчесгсае производства, сельскохозяйственные работа о првке-окяеа пестицздов). Пребывание в условиях высокой вгшаяей тем~ Эра туры, сопровождающееся вовшеяивы температуры тела, лриво-ит к снижению потребления икшь» аечезз; кислорода, уианьпоняя хтивноств некоторых окиййгт&льно-зосотакотателышх <$орглвнтов, адтаэнив энергетического обмена, синтеза белков, цуалсиковьк

и липадоз в гетгаговд-зх-(Карцева З.М. я др.,1й36; ст;ов Д.Г., 1989; Макаренко Т.Г., ISS9). Возникающие прк ззмв-6Ш1ЛХ «шературкогс реакиа метаболические сдвига являются до--оли:телт,ноц причиной наруичнай шл/упологлтесяих функция при зболесаняят'. . '

. Иааененке 'ягазгамойгавскоа- рвавтавкости при совместной всз-вйсгвак: гепэтдат^оккого. ада' я умеренно янсокой вэелягеЗ шлгера-уркиослодовано достаточно. Ке ясна» осявято? «саросы лаку-¿к'.рр&сса »¿увяк«!' г-.ri/räoi-o ссвена 'ара зогд^яствиЕ тепле. а

условиях поражения печени.

Целью работа было изучение развития имыунно:э ответа, иодированного Т-зависимда антигеном, при сочетанном действии на организм гопатотропного ада и умеренно высокой внеаней температуры, а также пойся эффективных средств коррекции ищункого ответа при стих состояниях.

Основтае задачи работы: I) изучение влияния умеренно высокой температуры на развитие гуморального иммунного ответа (ПТО) и пшерчувствптел! .оста замедленного те. .а (13Т), нвдупярованньк эритроциташ барана ОБ), щи токсической гепатопапш, вызванной введением гетрахлорметана; 2) выяснение роли гуморальных факторов сыворотки крови и сплоноцатов в регуляции толунного ответа при сочетанном действии на организм гепатстропкого яда "Л ушрез-но вы -окой внешней температура; 3) азучеша экстракорпорального влияния дрогревгчия на звделение ишуномодудирукшдах факторов клетками селезенки животных, отразяеншх гецаготроикш ядои; 4) изучение влияния эссенциалэ на развитие имкунного ответа пр» сочетанном действии на организм гепатотропного яда и умеренно высокой внеиней тегшэратуры.

. НовУв научяао положения, вншсЕше 1-л затату. При ссчтан-ной действии на организм гепатотропного яда и умеренно высокой вн;лней т^шературы, в отличив от действия каздого из гтях агентов в отдольности, развивается резко выраженное угнетение ивдун-ного отвага на Т-зависшый антиген.

Эффак-х угнетения шцунодогиче ской реактивности обусловлен ивдуадумаи влиянием прогревания на ввдаление клетками селезенки шлкупосулрессирующцх факторов.

Экстракорпоральное дейсша^е уыеронно высокой ваешнэй тем-

перазтрн на 1-леяш колезснкп ставленных яетрзхчормэтанои крыс индуцирует вццелснпз ими ж^мунос^гассирупцал факторов.

Супресспрувщев- влияет о гепатотропного яда и умеренно высокой внесшей температуры на развзтае иммунного ответа, индуцированного Т-зависимш антигеном, отменяется введением зссенциало. йчцунокоррегирувдпе влияние эссепцааде обусловлено его блокирую- . щии влпяшел ка активность игллуномодулирулдос факторов сыворотки кровл а клеток селезенки.

Практическая значимость. Показана целесообразность исаодь-зования экстракорпоральной, тепловоз обработки идлунокомтетентпых хдеток для оценки их функционального состояния пр.. различных формах патология печени.

Экспериментально обоснована перспектиьяость недытанкй фектлвносст эссендаэле в качестве шыувомодулятора прп стрессе и в условиях паголотза.

Суцоственло расширены существующие представления о развитии различных фор.» иммунного ответа прп сочетании,! действии агентов, влнящвх ка реактивность- иммунной сяотеми в отношении Г-зависимнх антигенов, а также о способах корревдаи нарушений иилунологачео-кой реактивности» возншкаодах в этих условиях.

■Апробашгя рабоуи. Материалы исследований обсуэщены на конференции молодых ученых фрского госудг ротвенного медицинского лести тута (1989, 1990), та паучно-праг.5ачасно£. конференции "Актуальные вопросы хлрургачесхой гастроэнтерологии" (фрак,1989), I Всесоюзном игл^олсгяческом съезде (Сочи, 1989), объединенной научной конференция мс;юдах учених, специалистов ь студентов ".'¿едацинекке "аукп - лрбктичеспс:,^ здравоохранении" (йэхачкала, 1290), итоговой научней конференция '^трскоро государственного

медицинского института, посвященной вопросам обдай и прикладной иммунологии (1991).

1|£Ляикаачл. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Объа:» а ы дп:?.7Ра работа, Диссертация состоят из введения, обзора лигераауры (глава I в 2), описания гздолчзованного материала а методов (глаза 3), пзлосеияя ссбогсенш'х исследовань-2 (главы 4-7), заключения а в-шсдоб. материалы диссертации кзлоке-т на uj'/j стрркщах «агтногаси, ьклпчая ?? таблиц, 5 расушсов, 4 шкрсфотогта^яи, указатель иотдельвоэдциой литературы, содерга-ü;eä 108 источников ore лестаенной и III источников зарубежной дягерагтрк.

СОД12Рс;Й1П1Т5 PÄL'CTü |.1атоьиады ;; .-.¡етодц исследования

Исследования проведены на 16:;5 крыса;: Зяогар, массой 120150 г. Объектами исследования слугаяа сыворотка крови, клетки селезенка, почена и подаелудочной железы.

Gctpoe гоксичоское порашшо гечеш: вызывали введеявеы 5ÜJJ раствора техрааворметана в оливковом иасле. Раствор виодайи в ышцу оедра (через денх меняя лапка) по 3 ылДг в течение 5 дней подряд иди по 2 мл/кг в течение 3-22 над с интервалом 72 ч. Ocsv рый панкреатит (СП) у крае визцв&»л под гексокалоти наркозом, комо'иннруя перевязку пророка ветвей селезсночкоЯ артерия, крово-свайшгцой хюдаалудочнуи гелезу, с ышакической травмой селеза-ночь^го сешзкга органа (Пашков С.Л., 18Еу).

Прогревание край цроводалм в воздушном термостате при температуре 40°С в отпосиголх:;оЛ маа ;оста I5J» ш 40 мин еаедиешо а течоиие I, 2 или 3 суток. Теизературу тала jekbokdu хтерилц о коаощь» здекгрогедесметра 2ПЗД--1. Зрохуева.ше вызывали «ссмя~

а;е двигательного гос^удатта :: повкпеию рэкталт roil тегяшрату-ju до 0w,3—1 Л. 1ерез 5-1С :.тп:: еэсло прогрспанця ото цифры азгаддс:. до яс::од:;эД скстракорпора.ииое прогреванпа

иетоз; оелозслс: г^эеодллл в всс-упюи термостате в течение I ч ■i-.fc.

с^сороп™ слугг.гт лнгаптпые, отравлепаге тотра-::opl'cï3ho:.; ^ прогрсгпе :::иси. Лул еивсрот::!; O'j 4-5 однородных :о олцт/ ::рас лсод:;^: аллогешши рецзштонгаг.: одновременно с ан-•пге:;о:: сдпог.ратно, р;;утрг.<Зр:х:::кло по 5 цдЛчГ массы тола. Болел даоро-пс: кроет разделяли соловил методом. алпкпа в осанок ís.'i^T, получение пр-т 5Cf! пасицеляя серпог-лслш.' а^юегтем (01-50), >рллг:ога:ровалЕ по ;:po::aTorpa;¡jnecr.oíl колонке, •сатголпегого;! сефа-ícr.co;.: tí-IOO. Остаз-пгеся в налосадге бел'": С1Г-ЗС) фрзгасзоппро-юле па со?адог.со С -FC- Для от;с:га ¡голокулярпо," г.-ассн (мл,".) :шзопотот:зс: Зстнов, звдеюигас: яри йякстопяровагагп на се?ягск-:a:t, спреде;"тлп об-о:- bit:о."я белка с пзвестяоЯ м.ч. (Детер.шн, '970). Дчшутгошдуллрутсо'м активность xpor,:arorpac¿r!40cia:x фракций >предоляд:: путем однократного зпугрпбриилшото введения пх лн-j zzíbotícíc.' в оАа.ю, содвряацсы 50 иг балка на кг i.iaccu гола с одновременной лнъекцпе". антигена.

Снлекощти ¡пгакпш;:, прогретих и отравленных тетрахлорге-:а:;о:.: ;:¡:i;c <£ра;кцкош;рова.ш по их способности прилипать к стеклу Лолушл:: ó.i. и др., 1ГС.З). ¡йдссадочиу!? клеток селэ-

>еша; (liUCO) готозалп по ..ютоду, разработанному Грокопенко 1.Г. * ; .Сокэдля Л.И. (10CZ). И&уно^одулирукизую ахтизпость HZJCC аияв^ 1л;га путем однократного ¿зпутрпйрюппшгаго введения пнтактным ал-¡огаши рецллкепга,,! в о<Зье:.:о, содэ±йащам f мг йсудя tía кг шс-:ы тела крнль. Спле.коци7ар;ше оалкл, находящиеся в 1ÜJCC, фрак-сюзшровала ка софадэксе С-ICO. йшуномодутшругйуэ активность

дсрсматограйических фракций Н2КС определяла онашотгаго дельной НЖКС, яо доза ввсдге,юго крысам болка составила 2 иг/яг.

В часта опытов экслершаенга^аши отвотнш лводюш эссеа-ццвлс (Еаттэршн, ФРГ, для гиъркци2}. Препарат медали внугри-бркетнио, пятикратно с интервалов 24 ч по I мл/кг (50 иг/кг эс-сенциадьншс Фосйо,шпд1т,ое) , одновременно с кнъэщяявд теярахнор-мэтапа. В части сннтоз в дни трех заглкчктелнт ин'ьезщай Еосен-ЕЯалэ'лцвотша: подворггши дойстап» умеренно езсокоД тешеразури, Крис тлмуштровади ЭБ, подученными по методике, ошюань'ой Еейос и ;.:о£зр (1Э66). ЗЕ-дводз.ли однократно, вну-грийришшо в виде ^ взвеси иь расчета 2x10^ .чдекок на кг массы талл крысы. Антиген взоделк одновременно с поедэдней виьевдазд хе-трахлормв-таш, эесешШало ила в доиь гавльчит&тшюго прогревания. Интенсивность развкиш ГЛО оценивали на 5 день поело иммунизации но кол2ч«сг£у в сэлэз&ккп клейкие, образующих антитела ЭБ (АОК) (Мздьсюрг К., Злтль 1., 13В'') и числу глеток, образующих розетка с ЭБ (РСЖ) (Зау&р X,, 1987). ГЗТ изщуцировалц у крыс введением коэногешко: улотоя (ЭЕ) (Чорноусов А.Д. и др., 1979).

Коедоиграца» белка в енворотко еяределшаг бгурояовйы ыето-дом,. а в ШЖО и их хрокатографнчесетх фракциях - но Брэдфоцд, аспользуя краоашпь Куаася С-250 (Ыашклн С.С., 1932).

Яля оцонкь состояния печени и лсдг.елудочной яавезы в сыворотка кровя ысспери: штольнях яааотиых определили а-ктщдаоогь адъфа-а;иадасц, азпарзат- и алаЕНкзмтю'грацос^ераз, цаиочвой фсо-фатаац, у ста:шышва;щ обнув прочсодлаачбскую ш-лзвдость сыворотки л актавнооть естественных ьагаоаторов проаеаз (альоа-1-аятатрипсана и альфа-2-маг.роглейуиша), определяли коацонграции йалируАшьа, холастарша, бета-ошполрогевдов, внраханность пока-

»•■»телей тимоловой пробы. Через различные аромегутки зроыенл поо-м зачала введения гслатотрстного ада и перовязка протока под-ЕьлудочлоЗ лялезы проводили гасталогическоз исследование этих станов.

Статистическую обработку цифрового материала проведали цу-гея'-вачислохмя средних арифметических ветачш (М) и их стандартах опнбок (<о)* Существенность различий ерэднпх оценивали с гомада» критериев Стьэдента и Вилкоксопа-1ианна-Уитнв. . ~

ЕШЛЬТА'Ш ИССЩОВАШЗ

1Ш7НШСД5Г®ШУЩ23 ДЕЙСТВИЕ ПРОГРЕВАНИЯ ПЕЙ ТОЮЖХЖОМ ЯОРАИЕШ ПЕЧЛЗИ Л ОСТРСХД ПАШОЩАТИТЕ

О возникновении патолошческого процесса з печени при введении тетрахкорыегана суциля по изменению морфологических и • Зяохшических показателей. Еведензе аетрахлормотпна в течение 5 дней приводит к возникновении покуолыюй дистрофии гелатоцптоь1 с 14 нед отравления вакуольная дистрофия усиливается, ииевт ь-ео-го некроза о'хдедшве ■ гепагощтов. 1С 22 нед помимо вакуольной и )?рнлс70й. дистрофии гепатоцптов обнагггаяопется узлы регенерации I .раэвятйо прослоек соединительной амнв.- Дри кражковременпом введении тетразяорнетара в снворопсо крови повивается активность ютарта»г л ажаназагашотрасфераз, щелочной фоофатазн, рсвивает-)я пгаогбшшдубипостя,' погашается концентрация бета-лштопроте-щов, упадачиваеяся тимоловая проба, скипается содержание хо- . хесторина. Эта изменения свид^тельствуит о"воз-ликновенаи у от-.авлснЕкх ивотйик СЕДдроиов цитолиза, холестаза, печеночной вдостаточности и воспаления фазанов А.И. ,1988). Яря 14 и 22-шдольноу отравлении.твтрахлорлвтапйм синдром цнтолгза меяео вн-

раиен, i:c в бсдь^сЛ степени nr.:лг.-ло: ел хсиеетэза.

¡;ервопача-.:.:;о Cuao изучено влалкие 7;wpc.-::u шссг.^ вно^пой teunepaiypi: ::s развитие к 1С л IV", ¿¡дуц^ровасги:: СГ кра to:-:ci;-ческоЗ гена т ода пп:, ешыб:о; т::св*еиен1Е£; (Б-дневии) лве-деидол тетрахло^ета^а. Сдн окрагное 2 дву^.агкое г.рсгрсва;-:е здоровых к^ис ю а'Зялэ на развитие у них I!IC, аьдуци^свсннсго SB, Тре:и;ратиоо прогревание ста:.уларова::о здоровы:: upiw

на сЕ. Инъекции тетра^-^-иетапа и тсч^о L д'лел -_i:a-

чихадых овала ш.^шщИ ответ ::а LI'., васдеанае и х,е::ь

последнего i:ос тушения геяатотрсп;:ого ада. Грогрованпе таге::; яквотннх ;:е ус::.' :ва/:о, а, ¡-"против, утвса.:^ развитие П!0 ¡и сБ. Ba^a^omiac.;, угнетения при трехкратно:: прогрева и оказалась белгией, ¡с... пр:: одно- а дву;:ра!::э;.: Сга^сща I).

Результата otj::: кабладои^П аи:изз1Н5аат, что кратковременное введение здвоши гслататротиго ада, та;: хан и трелс.лгаоэ прогревание, агитирует ишунныД ответ :xi Т-зав"с:::.:ш антиген. Б результате прогревания на ¿о;:е усняе:шя н^акзго ответа, вис-ваииое тетрохлориетаноц» возникает ситуация возкоеноД пшзрреак ции отрешении;; ::ркс па антиген, что может превысить преде-» Qa-зиодогичеcitoli цалэс-с-бга&кост;:. Следствие;.: зтого явля&тся угнетение отвзга пссле нгог^люния о клеша!:: ::гнс.

Больной ашгрес иродстивллд: .¡зучеэде нко ш-

окоЛ вгсшсЗ талпоратурц на развитие ¿¡луниогс ответа чорез различный проиелуш: врелеш лозло с.кон-1з."кя авс;;е-;а:н тетрахлор-ыетана. Сказалось, что через ? д;;о1: пос.:е ызедшгкя .до ¡у..; шя реакция на 2Е Зила такой г:е у кэктролхпьс: ¿^ш'тки;:, з про-■ греванае б ».тот период, так как upasy аооле с.ах'_.ч;:та:^нс1Ч) введения ада, значительно угиемло раевптво :::r.iyiT.-1-o слота.

Таблица I

Вядяше умеренно бесовой внеиней температуры на развитие ШО, иадучаровак юго ЭБ, посла 5-днешого и 22-недельного введэная тетрахлорметака

Ш:

Условия опита

АОК, тнс/орган

РОК, юя/орган

1. Контроль (боэ прогревания и введения

2. Однократное ярохрезаоте

3. Двукратное прогреваипа .

4. Трехкратное прогревание

5. Отравление тетрахлоргзтаном

6. Отравление, однократное прогревание

7. Отравлекзе, двукратное прогревание .8, Отравление, трехкратное-ттроздавание

¿да)

19,4^3,7

29,8+4,1

28,4-15,2

39,4+6,1

Р1 <~0,С5

Введение яда в течение 5 дней

84,2+9,7 202,2+17,7 '

Рх ¿0,03 Р1^0,П5

10,8+2,3 90,2+8,1

Р1(2~0,0!5 ?1)2<0,05

в', 1+1,9 84', 1+7,8.

Р1,3~°.°В ?1,3<0'С5 • 4,2±0,2 65,7±7,0

129,3^X6,3 143,^17,1 163,4+15,9 200,1+19,5 ?! <0,05 Введение ада в течение 22 недель

15,5+1,8 103,0+6,3

4,2+0,7 63', 6+14,1 Рх 2<0,05 2<0,05

5,1^0,9 52,4+7,8 ?1>3<0,05 Р1|3Го,05

3,3+0,1 43,3+8,3 ?м70,05 Р1)4^0,05

Примечание: С этой и таблице 2 Р - достоверность различий .средних < 0,05.'-

ЦвФра радом с Р отмечает номер группы,по отношении с которой растачал достоверны. Каздая средняя получена в оштах иа 8-10 крысах. ''

Аналогичная картина нзйвдалэоь и через 14 дней после заключительного вводелия тетрахлорыетана. Нормализация теакцин организма на прогревание (усиление иммунного ответа) найлвдалась только на 30 день акслершента.

На основании подучешшх данных можно прпйти к заключению о.той, что реакция организма на антигенный раздражитель после кратковременного введения гепатотрошюго ада восстанавливается значительно быстрее, чем на деЯс.лпе агентов внешней среда, оказываниях а^яние на реактивность организме в отношении Т-зависи-шх актпгалов.

Ваэно было ыясшть кэ". реагирувт на уверенно внсокув вноа-шю теиперг туру гивотныз, длительно подвергавшей! действию гена то тротюго ада. Установлено, что у крас, получавши: тзтрахлор-метсш в течение 2, 8 или 14 нед, так та как у гхвотпкх, который вводили гецатотропный ад в тече1ше 5 диен, наДлЬдается существенное уснлет. - ПО на SB. Прогревание таких гшвотных приводит к угнетению нш.:унного ответа на SB, причем су^рессирующяй эффект трехкратного прогревания выражен сильнее,, чей однократного. , У крыс, :оторш тотрахлорметан вводили в течение 22 вед,' интенсивность выцуъдаго ответа на ЭБ не ошшчалась от контроля. Прогревая^ ле о-лис ¿швотылх угнетало разшгне у них 1И0 на ЭЕ (таблица I).

Аа .огичные результаты получены при изучения влияния прогревания а условиях -оксичеокого поражения печени на рвьвагае ГВТ, ивдуцированной ЗБ. Таким odpasou, как нра кра1^овреыеш>эы, так в при длительной введении гепатотрошюго еда г жввотннх реакция на антигеншВ реадралитоль вооотававли вдетая быстрее, чм реакция на выиуномОдузщрумдбе действо« агентов внешней среды.

Для сратх.шш пптергн-гэ Зило ечяс^'Т!., как штзт вксокая внешняя то;.пе.?этура за раззяве к&тшгого ответа при сжспери-монтальнои острог; панкреаатз, характеризующейся развитие:; вторичного шгмузюдеб'-итг (Пракопекхс Л.Г., йютроза H.A., 1991). Уста-овдено, что через 24 ч и 7 суток после пэревяз^я протока н сосудов подаедудочкоЗ делезы каблгдается утгтетешгс тг/тюго ответа на 333. Особенно резко оно внраконо через 7 суток. X 30 дот после операции реакцая на ЭБ полностью восстанавливается».. •' Стократное прогревание зевотншс через 24 ч после перевязки протока а сосудов додЕедудочной хвлезн усиливало развитие иммунного ответа на SB, восстанавливая его интенсивность до. уровня, наблюдавшегося в контроле. Такую реакцию на высокую температуру внешней среди ионно рассматривать как следствие вглте--шя ре:улягорннх механизмов, обеслвчпвавдих сохранение пщуют*-то гомеостаза. Прогревание через 7 суток после воспроизведения (П не влияло на раахлгие 1И0, что свидетельствует о нарушении рехуляторшсс ыеханизиов развитая' иицунной реакции через 7 суток . после операция. Ааалогачиая реакция на высокую вкеяшш температуру вайтакалась в через 30 дней после перевязка протока и сосудов иодаелудочпой яаяезн. Т&ым образом, при остром панкреатите, в отличие от токсической гепатопаТид, умеренно высокая внешняя температура нэ угаетаэт рэавятиэ иммунного ответа аа Т-завися-ный антиген, а на ранних стадиях его развитая даже усиливает этот процесс. Вместе о тем при Ш, тал же как при токсической • гепа топа таи восстановление реактивности тгфлюй система в отношения антигенного раэдрааителя происходит реныпе нормализации ей чувствительности к действий высокой температура внешней сре-'дн. '

И.ШЮ:.!ОдаЮТОЩАЯ активность сыворож крови пшотных,

получшик инъекции гшлготропного щц и подвергнутых ДЕЙСТВЕН) жерепно высокой шешей" тешератуе1

При различных фотах пзтолгтпз печени, с такле в условиях воздействия умеренно высокой внесшей тешерйтуры в кровп накапливаются соединения, обладающее ишуноиодулирующн.::! свойствами (Яхонтов Ю.О., 1980; Конопля А.И., Прокопенко Л.Г., 1988). Исходя лз-згого, задачей наших исследований стало ввделеше и изучение шхг/ноиодолируюцах факторов в сыворотке крыс, получавппх инъекции тетрахдорметана..и подвергнутых действию умеренно высо- . кой внешюй температуры.

Установлено, что сыворока крыс, получавпкх теграхлорыетан в течете 5 дней, 2, О I; 14 кед, обладает выражении тыуностп-цулирувдш аффектом. Аналогичным действие:.! обладает п сыворотка лза л;шх, подвергнутых терхкратноиу прогреванию. Прогревание (как одно-, те*: и трехкратное) ксвотных, получавши: инъекции гепатотропного ада в течение 5 дней, 2, 8, 14 'I 22 нед, приводит' к появлении в сыворотке крови субстанций, существенно яютн5ирую-щих развитие ШО на ЭБ у анлогешшх здоровых рецшщентой.

Ваано било выяснить какие компоненты сыворотки определяет илцувоиодулируиидав действие цельной сыворотки еизояшх, отравленных тетрахло1;.шпшэц п подвергнутых воздействии уиеренно высокой янешей ?е..шератури. Установлено, 1то бедки сыворотки крови крае, кратковременно получавиих тетрахдорыетан, выпадающие в осадок при БО^-нси насыщении, обладает „аракеанции :шчуносугрео-сорными свойстваш, в отличие от ОВ-БО животных, подвергнутых воздействии трехкратного прогревания. ОБ-50 прогретых и отравленных крыс облагают существенны:'.! ншуносупрессорным эффектом. Вероятно, ъ усясзиях прогревания в осадок при наенцезлш сыворот-

кп серпоккелш ашоннем вшгадают цммуносттуяярувщио, а при отравлении готрахлорметаном и совместном действии тетрахяорметана и высокой впекшей температуры в осадок попадают ишуносупрессор-ше субстанции. Введение интактяьы аллогенкш ре"шшентам 1Ш-50 отраьленнш: крас стимулирует формирование НЮ па ЗБ. НБ-50 про-грэгих крис иглмуногод^лщгугхзш эуфектоы не обладают. Введение лктактшм крысам НВ-50 отравленных и прогретых r.puc значительно тормозит ШО, индуцировании? ОБ. Об этой свидетельствует cmsse-1Шо количества ьыыугашх АОК и ТОК в селезенке крыс, получ^виих НЕ-50 аядогешшх прогретых л отравленных доноров соответственно в 3,3 и 1,7 раза по сравнению с контрольными гивотнии. При 50^-поа насыщении снворотки сернокислым аммонием в осадок выпадают высокомолекулярные белки, поэтому 0Б-50 разделяли гель-хроматографией на сейадексе G-ICO, при этом получено 2 белковые фракции,-1-я выходила в объеме 45-65 мл (около 65$ белка) П-я в объеме 190-210 мл (около 35% белка). Усыновлено, что ишуно-супрзссоршо субстанции .одераатся во фракции I (белки с и.и. более ICO кД) и во фракции П (белки с ы.м. 70-80 кД). При 50$-ном насыщении сыворотка сернокислым аммонием в надосадочноР жидкости остаются относительно низкошлекулярные белки, поэтому НБ-50 разделяли галъ-хроштографаей на сефадексе <3-50. При разделении получено 2 фракции: фракция I выходила в объеме 55-65 un (около ЗД2 бряка) о белками, у.а. которых превышала 50 кД, фракция П выходила в объеме 155-165 мл (около 20/5 6ei;ta), она содержала белки с и.и. 10-15 кД. Введение фракции I НБ-50 отравлен-нах и прогретых крыс зштактно а.)логечвш реципиентам значительно пнгибпровало формирование ишунвого ответа на ЗБ, в отличив от II фракции, стимулирующей развитие ШО,

Тами образом, ера прогревании яивотннх одновременно с ог-равлениеы твтраиюрштаиоы з сыворопсе какашпцяэтея не менее грех иш.уноиод7Л1!рук5зх факторов; иэдуносупре-юорный, вылодяпй при газделеши на сефадексе С -100 с белками фракции I СБ-50, иыеищшп u.U. более 100 кД, шцуносупрессорныЗ, шкодяцнй о бел-каш фракции П ОБ-50, иыегщнщ n.ij. 7G-S0 кД (по-вддн.\:о;,7, эти &е соединения пролвлявт вицуносупрессорнув активность во фракции I HS-IÜ при разделении на сеуадексе С -50 с белками, имеющими ы.и. более al кД а шл^уностпиулзруивдй, выходящий во фрак-' цви П ТБ-50 при разделении на сефадексе <? -50 с белкада, иаеа-дши u.u. 10-15 гД. Следовательно, при прогревании отравленных гепатотроанш адом крыс в сыворотке крови начишшт превалировать ншуносупрессорше соединения, накапливающиеся во фрахден белков с и.ы. более 100 кД и 70-80 тЛ- Е то со вреия низкшаде-гулярвый еи>!унос!пе.!уллруадий фактор, обнаруженный в сыворотке отравленных крыс аооде их прогревания, остается, но не оказывает существенного злвякия на конечный ищуносупрессорлыЗ эффект селваов сыворотки.

ЕКЩШОДУЛКРШЩ ШЗШ данющггсв ХИВОВЩ, йОЯУЧШШ ШЬЕКЦИЙ ШШГРОЩОГО ЯДА И ПОДВЕРГНУТЫХ дйстшю

. . шшо хасохоЗ шышШ ешерашы

йдуноыодулид'юцее действие субстанций сыворотки крови крас отравленных геватотронньел одой, опосредуется факторами, вэде-дявдиызся под их влиянием клетками селезенки (Конопля Л.К., Прокопенко JI.Г:, 1988}. Учитквая эго. было неучено выделение шиу-ноиодуядрун-гах факторов клетками селезенки крно, получавйих инъекции гепатотропного ада и повергнутых действии умеренно высокой вноснеС тестера Т7рн.

Введение ЕПСС отравле:зых тетрахлормотанои в течение 5 дней ¡рас аллогеняш гл:так?! пг; рецзшептам стимулировало у них развила ШО на ЭБ. Введение НЕКС одно- п трехкратно прогретых крыс гатактныгл животным не пз:.:ситло у hex ответную peai зп па вводный антиген - ЭБ. Прогревание ограаченшх :-.сцс шщуцярует видении a- icie'i-i2:.;n селозощ— факг pa, супресспрущего при аллогенном !вреносе развитг.е итукпого ответа па ЭБ. Разделение спленоцитар-ых белков, находящихся в EZJE., лролод^.ш ислользуя колоночную ель-хроматографию на сефадсксе С -ICO. Оращпя I, содержащая ¡едка.с ы.м. более ICQ кД (65$), выходит в свободном объенз (40-¡0 мл) фракции П п О (15 и содерзацяе болта м.м. 70-80 кД 10-15 кД соответственно), выходят в объемэ 70-80 160-180 ил. Ьлцуносупресснррщен акташзстью обладают субстащгщ, выходящие составе П фракция. Введение фракция С 1IEKC наоборот стшлулл-ует развитие ШО на ЭЗ у пнтактшх аидогенных реципиентов. Таим образом, если введете твтраялорыатана t течение 5 дней ин-уцирует способность сплеплщтов к выделении казкомолекулярного 10-15 кЛ) шад^остшуларуацегг фактора, то действие в этих ус-овиях высокой внепней тоапера iypu, не влияя на выделение ни: у-остимулпрующах субстанций, индуцирует выход в культуральную реду иыцуносупрессорпих субстанций с м.ы. более 7С-80 кД.

В связи с излсщюшшгл возник вспрос об экстракорпоральной лиянии высоко.: температуры на выделение содеюцизаии шлцуноцо-ршрумцих соединений. Для решения этого вопроса сгленоцаты от-„влендах крыс инкубировали а среде, имущей темпера тур/ 42°0 течение I ч. В часта опытов сшллоцата предварительно фрак-

аоняровали по способности првлипать к стеклу. Установлено, что ■ •

адооадочнал аидкость пршшпаюдах я недрвллпаюцих к о тему силе-

ноцатов здоровых или прогретых гшвошх ке обладает кыцуноыодз лируышдп эффектом. КПСС отравленных крыс стимулирует форшровг ние ШО на ЭБ при ее введении внтгпшпы аллогеннаи рецпшзггтаь хплчеы такая способность присуща иадосадочной гвдкости сплено-щтов, прилипающих к стеклу. Еадосадочная здкость прогретых клеток селезенки отравленных крыс, напротив, супрессирует развитие киыунлого ответа на ЭБ при аллогеинои переносе, причем супрессярувдш свойствами обладает только клетки селезешц;, прилипающие к стеклу. При разделении на сефадексо _ G -100 белись не прогретых сплоноцитов отравленных крас установлено, что лыиуносгииуларущей активностью обладают только белки фра:< дай П. Фрагадаонирование белков кадосадочной ацдкостп прогретш свленоцигоа отравленных ашотны^ показало, что шиуностгиуди-р&тщая активность фракции Е сохраняется, а фракция П цриобретг es своЗстзо супрессировать развитие иммунного ответа при аадо-гешюм переносе иктактпьы рецлпкектам (таблица 2).

Могло предположить, что выход в инкубационную среду имт.у-носудроссирующих субстанций является следствием резкого увеличения под влиянием высокой тешераауры проницаемости клеточнш ыембран спленоцпгоЕ крыс, отравленных гепатотропнш ядом. 06-¿apyse:moe наш наделение дамугюсупресспрувщах Факторов смене датами отравленных гепатотропнш ядом крыс после экстракорпорального действия на клетки уиереяно высокой температуры обосновывает перспективность использования' етого феномена для дпа: носина ^азличтавс фор? патологии печени.

Иш.уноыодулврующая активность хроматографпческих фракций стеноцитов отравленных крыс, экстре коре оральн о подвергнутых действию умерегчо высокой температуры

ИГе: ш: Условия 0ПЫТ8 :¿содействие :температуры . ::ш сплеко-: цкты ЛСК, тыс/орга:: 1 РОК, ;- или/орган

I. Контроль - 9813+1313

2. Введение 1Ш£С интактпых - 19,4+5,1 1С1.57:О,2

3. Введение 1ШСС отравленных крыс - 59,5+1С," 211,7+27,7

fZ.CS Рт

А. Введение I фракции 1ПЛС отравленных крыс - 1Г.4±С,9 1С1,3+17,3

5. Введение П фракции П1КС отравлении крыс - Г ,¿1,2 9е.4+16,Э

6. Введение Ь фракции КПСС отравленных крыс - 39,7+9,2 191, ¿21,5

Рт о<0,05 X,-

Введение НГКС отравленных крыс прогревание 5,7+1,3 00,3+5,4

Р1_3'С,С5 С.С5

е. Введение НГКС I фракции отравленных кр"с прогрева нт:е 1С,5+5.Б 92,4+9,1

Рд <0,05 Р^ <0,05

Введение Е фракции Н1КС отравленных крыс прогревание 0,1+1,7 51,7+7,7

10. Введение С! фракции КПСС отравленных крыс прогревание 4С.2+С.Б 204,5+31,4

Р1,2^0,С5 Р112с0,05

зсспташ как гссшюаодулятор пвт тош-гчнскш еораиршк . 1шени к действии на сргаемш мерено шсокой вншяй те.шератуш

Нах<ус1вШ1э Ештнологгчсокой реактивности, наблвдазяцееся при токсическом поранения печени, сочетающееся с. действием высокой температуры, обусловливает необходимость применения • прл эизх состояниях эффективно дз£стщип5-;х лмщгиомодуллторов. llozao лр&д-подовать, что нотаализущее аяаяняе ка развитие тзунною ответа, шщцпровзпного Т-зависимши антзгенаш, при токскчзском , nopaxcGKZE печени будут оказывать фармакологические средства,' стаб&газярующие чембранн гопатсцптов. Выраженным голетопротех-тлвпыи действием обладают палиненасшцекнке фосфоллпидц, з частно с те такой ех препарат как эссенцкале, который нейтрализует свободные радикалы, тсриозит реакции нерекисного сжслетя лм~ пвдов мембран, умзньшет образование в hex ллзофосфэпудалходина (Гордиенко А.Д., 1920).

Прв изучении влияния эссеншале на развитие Ш0 и IBT на ЗБ у отравленных п прогретых крае установлено, что инъекции кп-bothuli препарата нормализуют развитие ШС и пзт (рисунок I), Лваденпе- эссеицпале препятствует накоплению в сосудистом русле отравденшх к прогретых крыс -нздуномодулвх^щах факторов. Об втоы свидетельствует тот факт, что енворожка отравленных и про-' гратых крыс,, получавшех эссенцвале, ко оказывает шиуномэдулЕ-рутацеэ действие на развитие ГИО и ГЗТ на ЗБ прп аллэгенкон переносе.

Ошхеновдгы внтактнкх крнс, обработанные сывороткой отравленных гепатогрошам ядом жнвотпнх,'прело прогревания ввделяют в ¡¡ккубацкокнуи среду пищюоунресслруювйе факторы. Спяеноциты зле кнтахтшк крас, обработанные сывороткой отравлениях йееотеых,

во

45-

Г

Ж

Ж

90

бО-

ао-

я-

225-

ОХР-

/■ ОУ5-

05-огб-

Л

гп

ю

? £ 3 /23 /Я <3 * £> ,3

Рисунок I Влияние эссенциале ка развитие ШО и ГЗТ на ЭБ у отравленная ССГ4 и прогретых крас.

По оси ординат: I - количество АОК на селезёнку (тыс/орган); П - количество РОК ка селезёнку («ли/орган); 2 - разница массы (ыг) регионарного и коктрлатерального лимфатических углов; 17 - разница количества кариоцитов (кон) в этих же узлах.

По оси абсцисс: I - контроль; 2 - введение СС1^ и прогревание; 3 - введение эссенциале

и прогревание.

получавши: эссенциале, после прогревагжя :ге вцг,е::л::'г а среду ьукоподуллруьцке сэед":пс:г Теп-::,; о'разэ;:, ввьдеие эссе:щ;:але предотвращает пли ограничивает н;!луц:;;;~вп;:-:;>с гепатотрогпнг.: ядо: ввделеппе в сосудистое русла соединений, повытащи: чувствительность спленоцптов к деЗсшга уиореннэ высокой талгерэтуры.

В И 3 О Д I»

1. введение крысам тетрахлормстана или действие умеренно высокой внешней температуры усиливает рэзвитио гуморального тдугного ответа и пшерчувствнтельностп замедленного типа, индуцированные орптрогртзш: барана. При сочетанлоц воздействии на организм гепатотроаного дца и уверенно высокой впетмй температуры набдздается реско вырадснное угнетение обей:; иглдупно-го ответа.

2. действие на организм умеренно высокой внесней температуры нвдуцпрует вддачегше прплппаадпуп к стеклу ;:летка.\:;; селезсшс: отравлензш тетрахлор;.:этаноа крыс п:.иу::осупрессируэц::х фа:::гзпов, но не вл"яе'.' на выззагкое гепатотропккм адо:л вц^оленпе стал: клетками .¡глуностицулоруацого фактора.

3. Экстракорпоральное действие умеренно высокой впеаней температуры на прнщпавчие :•. стеклу ::лстка селегсики отравленных тетрахлораетаноы крыс пгдуцтрует вэделение ¡лл-упосупрес-сируюцзх ¿акторов. Прогревало клеток патактнш: гпвоткы:: и крыс с экспериментально визва:::ы;.: остры:.; панкреатитом такого э^уокта не вызаваеГ.

4. Повышение чувствительности спленоцптов отгавленззо: тет-рахлориоташ.: крыс к действию умеренно внсг::е." знешей тестера-

туры обусловлено пе пряиып дс£ствив.<! гепатотропиого ада, а влиянием на клеиг! и&уноотулвдзадш: &чстороз, какоплкиихся в сыворотке крови отравленных аызосшх.

5. Введение оссопцшло крысам, от}.азлз;иш;л тетрахлормотаьоы, предотвращает кыБцваег.оз деЦсгвнеа еда рчзвнтяе хуиоральногс- п>-мушого ответа к ги п о гч/вс тв:: т а" ¿и о с тг > заиедлеяпого тиля па эритроциты барана. Инъекц;:;; препарата стравчегаоп л прэгрстш; ¡сшоткии нормализуют подавленное денствлом яда и тепла равштео обеих сори к.глунного ответа.

о

6, Введение зссеициаяе досед отралшшшь татрэхло]':\;ета-но:.1 и ЕодзертутЕ:' дэ11стз::в уморе''¡ю высокой внешен тнгперлту-ры, предотвращает накопление в сосудисто;.; русле су "¡стоки;;!;, ио-дпфяцпруюада:; развитие различиях фор;:! хм-гдиого ответа при эддо-геннои переноси .и повиааетда чувствительность саленецптов к действии умеренно высокой внепнеЦ тегдературп.

РАГОТЫ, 0ПУЕИ2\0ВШШ ПО ТГ.Е ^':ССЕ?ГЛ1СПЗ

1. ТЬ.1мут10^0Д7Л1ргацие факторы у гивст:шх с ¡лкшеримеитемь-шм поражзкпеы печени // I Зсе с. нм^унол .съезд, Сочи, 15-17 ноя б. 19С9 г.: Тез .докл. Т.1. - П., 1£83. - С. 319-319 (соавт. А.И.Ко-ношм, Л. С. Авдеева).

2. Изучен»:э лигу '.оиодуллруиищу. дакторов крови крыс с экспериментальной патологией поченп // Актуальные вопроса хирургической аегтроэятерэлогяп. - Курск. - 1209. - С. 51-52 (соазт. Л.С. .Авдеева). »

■ 3. 7лр:,:ачстлостъ способа диагностики лрошчйсипх *о;>:-взбодеванпй почет:.// Тес.докл.объсд!:::с:л:о1. научной коь> молс>-дв: учоних, споцпал. и. студентов "Мздццнпсгая г-оуна - пракгп-

ческоыу здравоохранеш»". - Махачкала. - 1930. - С. 133-134 (соавт. А.Е.Дегтярев).

4. йадуноыодулиртщев действие высокой и низкой внешне"; температуры яри некоторых формах экспериментальной патология // Курск.гос.иед.ин-т. - Курск, 1990. - IX с. Деп. в ШПШ 03.09.90, й 4854-890.

5. й^иукоглодулиругощие факторы сыворотки г сплепоцлтов йи-вот^их с патологией печени, подвергнутых воздействия высокой к низкой внелжей гешературы // Матер.итоговой научной кокф. ин-та. - Курск. - 1991. ~ С. 66-67.

/