Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунологические методы в диагностике злокачественных опухолей женской половой сферы и эндометриоза

г. г «•» д л

Г I О 0.4

1 * \т ж?

На правах рукописи

ЧЕРНИКОВА Ирина Александровна

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В ДИАГНОСТИКЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ЖЕНСКОЙ ПОЛОВОЙ СФЕРЫ И ЭНДОМЕТРИОЗА

14-00.36 - аллергология в ичмуно.кн >ги 14.00.01 - акушерство и гинекология

авто!'еф е рат диссертации на соискание ученой оепеки кандидата медицинских нал к

ПЕРМЬ -1997

Работа выполнена в Пермской государственной медицинской академии МЗ РФ и Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Н.В.Старцева кандидат медицинских наук, доцент Ю.И.Шилов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник С.ВШиршев доктор медицинских наук, профессор В.П.Баскаков

Ведущая организация - Челябинская государственная медицинская академия МЗ

Защита состоится « ¡а/О » июня 1997 г., в 7Л часов на заседании диссертационного совета К 200.46.01 Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Автореферат разослан «

■У€» 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, / у

старший научный сотрудник _— И.Б.Ившина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы, На протяжении последних лет в литературе широко дискутировались онкологические аспекты эндомет-риоза [Я.В. Бохман с соавт., 1973; Я.Б. Бохман, 1933; В.П. Баскаков, 1980; Б. Csernobilshy et ai., 1970]. Частота эндометриоза У женщин репродуктивного возраста составляет от 1 до 10%, при раке эндометриоз встречается б 17,8% случаев. В связи с общностью патогенетических механизмов, а также клинических проявлений существует опасность мимикрии зндометриоза и поздней диагностики рака. Тенденция к инфильтрирующему росту и распространению по лимфатическим и кровеносным сосудам с образованием вторичных очагов сближает, по мнению В.П. Баскакова [1979], зндометриоз с опухолевыми процессам», а отличает - отсутствие клеточной атипии и способности к автономному безудержному росту.

Высказывается другая точка зрения, согласно которой зндометриоз не следует считать пределухолевым процессом LA.H. Стри-хаков, 1380; Б.К. Железное с соавт., 1935; н. Biaustein, 1979]. По данный :-t;im авторов, истинная малнгнизациз эндометриоза редка. Однако в результате длительной гормональной терапии наблюдается структурная перестройка стромн эндометрия, которая вызывает ошибочное представление об эндометриальной саркоме, подвергающейся регрессу после прекращения гормональной терапии.

Известно, что в противоопухолевой защите принимает участие иммунная система. С ростом опухоли отмечается прогрессирующая иммуносулрессия, которая часто является одной из причин смерти больных [P.M. Хаитов, 1934; В.й. Говазло, 1937]. На ранних этапах развития опухоли степень иммуносупрессин различна и зависит от активации регуляторных Т-лимфоцитов, ингибирухяцих опухолеспе-циФическую цитотоксичность и тем самым облегчающих рост опухоли [Б.В. Полушкин с соавт., 1380].

По данным Н.В. Старцевой [19S2; 1994], при эндометриозе отмечается угнетение функции Т-супрессоров и активация остальных субпопуляций иимунокомпетентных клеток (Т-эффекторов ГЗТ, Т-хел-перов и В-лимфоцитов), повышение уровней аутоантител и циркулирующих иммунных комплексов. Изменения иммунного статуса больных эндометрмозем свидетельствуют о постоянно идущей в организме реакции иммунного отторжения. По мнению автора, аутоиммунитет при эндометриозе может на определенном этапе защищать организм женщины от развития рака.

В связи с высказанной точкой зрения опасность малнгнизацни

эндометриоза, возможно, преувеличена (следует исключить случаи, когда из-за трудности диагностики первоначально или первично развивающаяся злокачественная опухоль рассматривается как зндо-метриоз).

Нель исследованияг Провести сравнительный анализ изменений различных звеньев иммунной системы у больных эндометриозом и злокачественными опухолями женских половых органов, оценить их диагностическую и патогенетическую значимость.

1. Выявить частоту сочетания эндометупоза и рака на основании анализа архивного материала (истории болезни за 7 лет МСЧ й б г. Перми).

2. Провести сравнительное изучение состояния различных звеньев иммунной системы у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женских поповых органов по тестам, характеризующим состояние Т- и В-зимфоцитарных систем, Фагоцитарную активность лейкоцитов. Определить диФФеренциалъно-диагностичес-кую значимость исследований содержания канцероэмбрионального антигена в сыворотке крови обследованных больных.

3. Сравнить изменения пролиферативной активности Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации в зависимости от дозы митогена при различных вариантах учета радиометрического метода.

4. Оценить регуляторные эффекты преинкубации культур у больных эндометриозом и злокачественными опухолями женской половой сферы; проанализировать линейные и нелинейные связи эффекта преинкубации (по индексу преинкубации) с показателями интенсивности пролиферативиого ответа лимфоцитов на фитогемагглютинин.

Научная новизна. На основании впервые проведенного сравнительного анализа изменений показателей иммунного статуса у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы выявлены гак общие закономерности, характерные для обеих форм патологии, так и существенные различия, которые могут быть использованы для дифференциальной диагностики .

Впервые исследованные зависимость доза-эффект и регулятор-ные эффекты преинкубации в реакции бласттрансформации лимфоцитов показали, что угнетение пролиферативиого ответа на высокие концентрации ФГД и смещение оптимума ответа в сторону более низких концентраций митогена у больных эндометриозом связаны с супрессивным эффектом короткоживущнх регулаторных клеток, Преинкубация культур полностью восстанавливает зависимость доза-эффект до

профиля, характерного для здоровых женщин.

На основании проведенного регрессионного и од н офа к т ор н о г о дисперсионного анализов показано отсутствие влияния ФГЙ на пролиферации 1-лкифоцитов у больных злокачественными опухолями как в обычных, так и в проинкубированных культурах.

кои плане проведенное исследование расширяет существующие представления о патогенетической роли и механизмах иммунных сдвигов у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы. Полученные данные указывают на важное значение баланса регуляторных клеток иммунной системы в патогенезе эндокетриоза и ведущую роль глубокой недостаточности Т-лим-Фоцитаркого звена в развитии н прогреесировании злокачественных новообразований. Результаты работы могут быть использованы с целью дифференциальной диагностики. В практическом плане показана возможность использования доступных для широкого применения в клинической практике иммунологических тестов с целью дифференциальной диагностики неопластического роста при эндометриозе. Результаты работы внедрены в учебный процесс по иммунологии на кафедре микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета (цикл больного практикума для студентов 4 курса биологического Факультета "Культивирование нмкунекомпетентных клеток") и в учебный процесс на кафедре акушерства и гинекологии педиатрического Факультета Пермской государственной медицинской академии (лекция по доброкачественным и злокачественным опухолям женской половой сферы).

1. Показатели иммунограккы больных экдометрнозом и злокачественными опухолями сравнимы по степени уменьшения общего содержания Т-ликфоцитов (тЕ-РОК). Общим для обеих форм патологии является повышение количества И-РОК и ранник Е-РОК, У обследованных больных имеются различия в содержании теоФиллинчувстви-тельних Т-димфоцитов: при эндометриозе их уровень достоверно снижен, а при онкологических заболеваниях не изменен, что указывает на различные механизмы ннмуносупрессии.

2. У больных эндометриозом отмечено угнетение, пролифератнв-ного ответа в культурах с высокой концентрацией китогена (200 мкг/мл) и сдвиг оптимума блаеттрансформацин в сторону более низких концентраций ФГА. Преинкубация культур приводит к восстановлению Формы зависимости доза-эффект. У (Зольных злокачественными новообразованиями отмечено резке выраженное снижение накло-

на регрессионных кривых доза-аффект, вплоть до отсутствия влияния ФГА на пролиферацию "-лимфоцитов по данным дисперсионного анализа, что свидетельствует о развитии глубокой иммуносупрес-сии.

3. В комплексное обследование больных зндометриозом и злокачественными опухолями це л есообразно включение иммунологических тестов, которые будут способствовать своевременной диагностике и выбору рационального метода лечения.

Апробация работы м публикации. Результаты исследования доложены на итоговой конференции НГМД (1996), конференции молодых ученых ПГМА (1996), на Международной конференции молодых ученых в Ижевске (1996), на 5-том Международном экспертном форуме по иммунотерапии и генной терапии (Иерусалим, Израиль, 1996), на секции "Иммунология" Научной сессии Пермской государственной медицинской академии (1997), на совместном расширенном заседании лаборатории экологической иммунологии, лаборатории радиоизотопных исследований, лаборатории экологической генетики микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН, кафедр акушерства и гинекологии педфака, лечфака и ФУВ, ЦНИЛ Пермской государственной медицинской академии Минздрава РФ, Пермского отделения Всероссийского научного общества иммунологов (1997). По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура .диссертации. Диссертация изложена на 173 стр. машинописи и состоит из введения, обзора литературы (одна глава), материалов и методов, результатов (две главы), обсуждения, выводов и практических рекомендаций. В диссертации 66 таблиц, 12 рисунков. Прилагаемый список литературы включает 286 наименований (176 отечественных и 110 иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Обследовано 1б4 женщины. Среди них было 55 больных с генитальным эн-дометриозом (I группа), 47 человек со злокачественными опухолями тела матки и яичников (II группа) и 42 здоровых женщины репродуктивного возраста (III, контрольная группа). В I группе были выделены больные внутренним эндометриозом матки (67 человек); ретроцервикальным э ядом е т р и о з ом (g больных); эндометриозом яичников (11); с ссчетанными локализациями эндометриоза (Э). Вторую группу составили больные злокачественными опухолями (47 человек), среди которых опухоли матки выявлены у 36 человек (адено-карцинома in situ - у 3, рысокодифференцированная аденокарцинома

- у 16, умереннодифференцированная ад е н о кар ц и нома -у 7 , низко-дифференцированная аденокарцинома - у 5, саркома - у ¡5 женщин), а опухоли яичников - у 11 больных. Распределение больных II группы по стадиям приведено в табя, 1, Возраст обследованных женщин в I группе колебался от 21 до 47 дет, во II группе - от 20 до 49 лет.

Таблица 1

Распределение больных злокачественными новообразованиями по стадиям распространения процесса в соответствии с классификацией рака тела матки (Минздрав СССР, 1Э85), классификацией FIGO опухолей яичников (Минздрав CCCV, 1985), клинкко-анатомнческой классификацией сарком тела матки (1982) [Я,В. Бохман, 1939].

Группа Общее количество 0 I II III IV

Рак матки 31 з 25 2 1 _

Опухоли яичников 11 - - 3 2 6

Саркомы матки - 4 - - 1

Всего: 47 з 29 г; 3 7

Контрольную группу (III группа) составили 42 здоровые женщины репродуктивного возраста (от 26 до 45 лет).

Иммунологическое обследование с учетом динамики показателей в разные Фазы менструального цикла Ш.В. Старцева с соавт., 1980; К).И. Шилов, 1384,- Н.Н. Кеворков с соавт., 1993, и др.) у всех больных и женщин III группы проводили на 7-3-й день цикла. Все женщины II группы до проведения иммунологического обследования не подвергались хирургическим методам лечений, химио- и радиотерапии.

Для определения числа Т- и В-лимфоцитов использовали методы Е-розеткообразованмя [И. Jondal et 1972,- Р.В. Петров и со-

авт., 1976; 1992] и М-розеткообразования LS. Gupta, М.Н. Grieco, 1975].

Субпопудяцию Т-лимфоцитов с повышенной аффинностью CD2 мо-кул клеточной адгезии (Е-рецепторы) определяли методом раннего Е-розеткообразования (рЕ-РОК) [Г.В. Порядин с соавт., 1984; B.C. Кожевников, 1933; В.П. Лозовой с соавт. 1986; L. Shou et al., 1985, и др.].

Ауторозеткообразующие клетки (ауто-РОК) определяли методом R. Palacious et al. [1981] как в присутствии аутоллазмы, так и без нее. Эта субпопуляция представлена молодыми поеттимическими Т-лимфоцитами, которые обладают естественной цитотоксичностью и подавляют пролиферацию лимфоцитов в культуре [Г.'З. кубинский,

1987; Г.3. Еубинекий с стает., 1987; О.Ю. Леплина с coats т., 1987, и др.J.

Изменения экспрессии Е-рецепторов на фоне повышения уровня внутриклеточного цАМФ при ингибировании Фосфо д и эстеразы теофил-лином определяли б стандартном варианте тесниллипового теста [А. Shore et. al., 1978, А.А. Ярилин, 1985; Р.В. Петров с соавт., 1992].

Интенсивность пролиферативного ответа лимфоцитов в культуре на разные концентрации (10, ¡>0, 100, 200 мкг/мл) фитогемагглюти-нина-П (ФГА) оценивали в стандартном варианте ¡микрометода реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЯ) с использованием 96-луночных круглодонных планшетов IB.&. Хоробрых с соавт., 1983; М. A. Fletcher et al., 1992]. Каждая культура содержала 2*10ь клеток в 0,2 мл полной питательной среды (среда 199 с добавлением 10% аутоплазмы, 2 мМ L-глутамина, 10 мМ HEPES и 100 мкг/'мл гентами-цина). Культивирование осуществляли бо влажной атмосфере с Ь% СО2 при 37°С в течение 72 часов. За 18 часов до окончания культивирования в каждую лунку вносили по 2 мкКи {3? кбк) эН-метилтими-дина. Радиоактивность проб определяли на жидкостном сцинтилляци-онном счетчике "Бета-2" (Киевское НПО "Медаппаратура").

Для оценки функций молодых посттнмкчееких регуляторных Т-лимфоцитов, способных спонтанно неспецифически супрессировать пролиферативный ответ лимфоцитов и быстро исчезающих из культуры вследствие дадьнейней дифференцировки СЕВ. Васильева, Ю.И. Зимин, 1SS4; Г.З.Шубинский с соавт., 1983; 1985; 1987, и др.], использовали метод преинкубдции культур в течение 24 часов при 37°С без митогена. В последующем в культуры добавляли те же концентрации ФГА, что и в реакции бласттрансформации. Дальнейшее культивирование проводили в течение 72 часов от момента добавления митогенов, и анализ включения SH-тимидмна проводили аналогично описанному выше методу реакции бласттран^формации. Результаты анализировали как с использованием показателей, характеризующих интенсивность пролиферации, так и по индексу преинкубации (И.П.), который рассчитывали по следующей формуле:

число имп/мин в отсроченных культурах

К.П. — ----------------------------------------.

число имп/мин в неотсроченных культурах

Как было показано [Е.В. Васильева, Ю.И.Зимин, 1984, и Др.], при определенных концентрациях митогена уровень включения тими-дина в неотероченные культуры ниже, чем в отсроченные, а величина указанного индекса (при значении выше 1,0) характеризует суп-рессорную активность регуляторных Т-лимфоцитов, которая утрачи-

вается в результате их дифференцирован при преинкубации без ми-то гена [Г.З. Шубинский с соавт., 1985, и др.].

Фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови исследовали по методу В.Н. Каплика с соавт. [1992]. К 0,1 мл цельной гепаринизированной крови добавляли 0.1 «л эритроцитарнего коревого диагноетикума С100*10е эритроцитов/ил). Пробы инкубировали при 37°С в течение 20 минут, затем готовили мазки и проводили их микроскопию. Показатели фагоцитоза (процент Фагоцитоза, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс) рассчитывали ко всем фагоцитирующим клеткам (моноциты, нейтрофиды, эозинофилы и базофилы). Помимо этик традиционных, рассчитывали и абсолютные показатели фагоцитоза (абсолютное число "истинных" фагоцитирующих клеток и абсолютное число объектов фагоцитоза, захваченных Фагоцитами, на 1 мкл крови).

Количественное определение уровней иммуноглобулинов О, М, А в сыворотках крови проводили методом радиальной иммунодиффузии в агаровом геле- [й. Manci.nl еЪ а!., 1973].

Концентрацию канцер о зм бри она л ъпого антигена (СА-60) исследовали иммунометрическим методом, основанным на усиленной люми-нисценции, с помощь« моноклональных антител (АтеггЬат) на аппарате "Амерлайт".

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непарного и парного ь-критериев Стьюдента, ?-отно-шения (?) и непараметрических критериев (Вилкоксона суммы рангов {'л'), парного знакового теста Вилкоксона (Т), и-теста Манна-Уит-ни), а также методов корреляционного, регрессионного и дисперсионного анализа [Е.В. Гублер, 1978; Г.Ф, Лакин, 1990; Ю.Н. Тюрин, А.А. Макаров, 1995] на 13М-совместимых компьютерах.

Работа выполнена на базе кафедры акушерства и гинекологии педфака ПГМА, ЦННЯ ПГМА, лаборатории экологической иммунологии ИЭГМ УрО РАН, лаборатории радиоизотопных исследований ИЗГМ УрО РАН, гинекологических отделений МСЧ »9г. Перми и Пермского онкологического диспансер«, патологоанатомической лаборатории МСЧ К 9, гормональной лаборатории МСЧ Ж 9.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Клинико-иммунологический статус у больных эндометриозом и злокачественными опухолаин женской половой сферы

Проведенное исследование больных эндометриозом и злокачественными опухолями (по данным архивного материала) показало, что малигнизация эндометриоза встречается довольно редко - в 3,17%

о

случаев, что позволяет согласится с мнением Б.И. Жеяезнова и А.И. Стрижакова [1935].

Сравнительный анализ этих двух групп больных (по данным архивного материала) показал, что возраст больных зндометриозом был 26-45 лет, а злокачественными опухолями - 50-56 лет. Средний возраст менархе был одинаков (13,5 лет), как и паритет (от 1 до 3 родов). Обращает на себя внимание значительное число абортов в обеих группах. Основной асалобой больных зндометриозом были боли (50%), а у больных злокачественными новообразованиями - кровотечения различной степени выраженности (56,1%). Продолжительность заболевания у 70% больных зндометриозом составила в среднем 3 года, а у больных злокачественными опухолями колебалась от 1 до 12 месяцев.

В результате проведенного в настоящей работе сравнительного анализа изменений иммунологических показателей у больных зндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы удалось выявить как общие закономерности, характерные для обеих форм патологии, так и существенные отличия, которые могут быть использованы для дифференциальной диагностики. К общим изменениям относятся: 1) уменьшение абсолютного числа лимфоцитов;

2) снижение процента и абсолютного числа Т-лимфоцитов (тЕ-РОК);

3) повышение относительного (но не абсолютного) числа М-РОК; 4) повышение процента О-клеток; Ь) повышение процента ранних Е-РОК; 6) снижение относительного и абсолютного числа ауто-РОК в пробах с аутоплазмой; 7) повышение процента ауто-РОК в пробах без ау-топлазмы; 8) снижение абсолютного (но не относительного) числа теофиллинрезистентных Е-РОК; 9) снижение интегральных показателей, характеризующих активность фагоцитирующих клеток крови (табл. 2). Анализ данных, представленных в табл. 2, показывает, что степень выраженности Т-лимФопении, снижения числа молодых посттимических Т-лимфоцитов (ауто-РОК в пробах с аутоплазмой), увеличения пропорции зрелых Т-лимфоцитов с повышенной аффинностью С1>2 (ранние Е-РОК) и увеличения числа нулевых клеток у больных зндометриозом и злокачественными новообразованиями одинакова. Это, с одной стороны, указывает на общность механизмов перераспределения внутри популяции Т-лимфоцитов при этих заболеваниях, а с другой - на относительно невысокую информативность этих показателей для дифференциальной диагностики.

Полученные результаты подтверждают данные Н.В. Старцевой [1980, 1982, 1334] о развитии дисфункции Т-клеточного звена иммунной системы у больных зндометриозом и данные о Т-лимфоцитар-

Таблица 2

Изменения показателей ре-акции Е-розеткообразовакия, ауто-рок. числа М-РОК, нулевых (Е-Ц-) лимфоцитов, концентрации иммуноглобулинов и Фагоцитарной активности лейкоцитов

Показатель Зндометрноз (I группа) Злокачественные опухоли (II группа) Контрольная группа (111 группа)

Абс. число лимфоцитов 1569,0133,96* 1650,51105, 3*' 2170,7169,7

тЕ-РОК, абс. 340,93147,3* 877,5+55,4* 1232,3157,7

% 53,711,0* 54,111,4* 60,910,5

М-РОК, абс. 212,111В,2« 238,3116,2 249,719,4

% 13,210,63 14,7+0,8* 11,610,2

Нуле- абс. вые клетки % 546,0137,7 576,0162,4 594,0120,4

35,211,9* 34,112,5» 27,510,5

рЕ-РОК, абс. 731,3142,96 754,9154,6 728,97125,9

% 46,9811,4* 46,5111,7* 33,5+0,3

ауто-РОК с абс. аутоплаз- мой % 436,6134,1* 27,511,3* 448,8134,4* 27,711,4* 981,1136,5 45,311,1

ауто-РОК абс. без ауто-плазмы % 211,3117,3 13,110,7« 214,4+18,6 13,410,3» 229,5110,7 10,610,4

ТР-Е-РОК абс. 747,0143,О* 666,0143,0* 1030,0136,3

ТР-Е-РОК X 47,310,99b 40,911,3*Ь 47,410,4

ТЧ-Е-РОК абс. 93,215,Э*Ь 220,0+15,5*Ь 293,0+9,39

ТЧ-Е-РОК % 5,910,2*Ь 13,110,4Ь 13,510,2

Отношение %Т?-Е-РОК к %ТЧ-Е-РОК 3,810,5*Ь 3,310,ЗЬ 3,5+0,1

г/л 10,610,3 11,310,6 10,710,6

1еа, г/л 3,510,3 2,3+0,2 2,710,4

г/л 3,310,6 2,710,3 2,7+0,3

Процент фагоцитоза 44,811,I* 42,911,5* 56,210,9

Фагоцитарное число 1,610,1* 1,410,1* 2,210,1

Фагоцитарный индекс 3,610,2 3,3+0,2Й 3,9510,2

Абсолютное число "истинных" фагоцитов (на 1 мкл крови) 1379,11111,3* 1831,21126,3* 2696,3167,1

Абсолютное число захваченных объектов Фагоцитоза (на I мкл крови) 6775,31554,2* 5765,01573,2* 10634,2+457,5

Примечание. В табл. 2 знаками * и $ отмечены показатели, статистически значимо отличающиеся от контроля (* - Р<0,001, 9 - Р< <0,05). Буквами ь. и Ь отмечены показатели, статистически значимо различающиеся мевду I и II группами (а - Р-:0,05, Ь - Р<0,001 по непарному г-критерию Стьюдента).

ной недостаточности при злокачественных новообразованиях [P.M.. Хаитов, 1384; ft.П. Суслов, 1S84; В.И, Говалло, 1987; Я.В. Бок-ман, 1939; S. Derialme et al., 1995, и др.].

По-видимому, увеличение пропорции 0-клеток и относительно незрелых Форм В-лимфоцитов (М-РСЖ) связано именно с Т-лимфопени-ей, а не с ик повышенным образованием, так как абсолютное число этих клеток существенно не увеличивается (а абсолютное число М-РОК у больных эндометриозом даже снижается).

В то же время данные, полученные с помощью функциональных тестов, отражающих аффинность Е-рецепторов (тест раннего Е-ро-зеткообразования) и изменения ик экспрессии под действием повышения внутриклеточного цйМФ (теофидлиновый тест), а также теста аутологичного розеткообразованин {выявляющего ранние посттими-ческие Т-клеткн), указывают на то, что имеет место не столько уменьшение числа Т-лимфоцитов, сколько удельные изменения состава их субпопуляций, отличающихся как по степени зрелости, так и по функциональным свойствам. Как при эндометриозе, так и при злокачественных новообразованиях выявлено повышение процента ранних Е-РОК. Аналогичные данные при обследовании больных эндо-метриозом были получены и Н.В. Старцевой [1994]. Поскольку субпопуляция ранних Е-РОК представлена Т-лимфоцнтаки с повышенной аффинность» Е-рецептора и выполняет хелперно-индукторные функции в реакциях клеточноопоередованного иммунитета [B.C. Кожевников 1933; L. Shou et si., 1S35J, полученные данные могут свидетельствовать об активации периферических Т-лимфоцитов (возможно, вследствие антигенной стимуляции) при исследованных состояниях. В пользу указанного предположения свидетельствуют и данные- об одновременном снижении процента и абсолютного числа ауто-РОК, выявляемых в присутствии аутоплазмы. Эти клетки представлены в основном незрелыми поеттимическиыи Т-лимфоцитами [Г.Э. Шубинский с соавт., 1937; О.Ю. Леплина с соавт., 1987, и др.], и их уменьшение может быть связано с усилением дифференцировки в сторону более зрелых Т-лимфоцитов, участвующих в реакции раннего Е-розеткообразования.

Снижение абсолютного числа ауто-РОК в пробах с аутоплазмой у больных зндометриозом и злокачественными опухолями может иметь следствием нарушение естественной резистентности к опухолевым и эндометриоидным клеткам, так как Т-лимфоциты, образующие ауто-РОК, обладают естественной цитогоксичностью [Г.З. Кубинский с соавт., 1937; О.Ю. Леплина с соавт., 19S7, и др.].

Наиболее существенные различив изменений иммунологических

показателей первого уровня у больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями выявлены в теофиллкновом тесте (табл. 2). Процент теофиллинрезистеитных E-PÖK (ТР-Е-РОК) был значительно снижен у больных злокачественными новообразованиями, но не изменялся при экдометркозе. Однако содержание теофиллинчувст-вительнык E-POTJ при злокачественных новообразованиях не отличалось от содержания их у здоровых и достоверно превышало показатели больных эндометриозом. Существенно отличаются в обеих группах и значения отношения % ТР-Е-РОК к % T4-E-PÖK. Указанные показатели могут быть использованы для дифференциальной диагностики этих заболеваний.

Снижение- процента ТЧ-Е-РОК у больных звдомегриозом на фоне снижения общего числа Т-лимфоцитов, увеличения аффинности Е-ре-цептора (повышения % рЕ-РОК), отсутствия существенного изменения числа ТР-Е-РОК, возможно, может быть связано с повышением уровня внутриклеточного цЯМФ вследствие антигенной стимуляции. В пользу этого предположения свидетельствуют данные литературы [Vi-С. Hahn et al., 1992, 1993; T.L. Collins et. el., 1994, и др.З о повышении аффинности СШ после стимуляции in vitro Т-лимфоцитов ан-ти-СВЗ-ионокзонаяъяъти антителами, перекрестно связанными антителами против Т-клеточных рецепторов, специфическими антигенами или форбодмириетат ацетатом. Принципиально другой характер, по-видимому, имеет Т-лимфопения у больных злокачественными новообразованиями, у которых (б отличие от больных эндометриозом) выявлено существенное снижение ТР-Е-РОК, выполняющих хелпер-но-индукторные Функции в реакциях кдеточноопосредованного иммунитета, в частности, при ответе Т-клеток на митогены.

При исследовании концентрации иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM у больных эндометриозом и злокачественными опухолями не выявлено статистически значимых различий в сравнении со здоровыми женщинами (табл. 2).

К общим tea к для зндометриоза, так и злокачественных новообразований изменениям можно отнести и значительное угнетение Фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови (табл. 2). Это проявляется в уменьшении, с одной стороны, относительного и абсолютного числа клеток, реально участвующих в фагоцитозе, а с другой - в уменьшении относительного и абсолютного числа захватываемых ими объектов.

В последние годы проводится интенсивный поиск, специфических маркеров опухолевого процесса, определение которых можно использовать для ранней лабораторной диагностики злокачественного

роста. Среди ник важная роль отводится методам икмунохимического выявлений в сыворотке н плазме крови с помощью моноклоналышх антител онкоактигенов, ассоциированных со структурами мембран опухолевых клеток. Опубликованы отдельные сообщения о диагностическом значении определения концентрации антигенов серии CA (Cancer Antigen), в частности, CA-19-9, CA-125, CA-12-4, CA-15-5 и др., а также- LSA (Lipid Associated Sialic Acid Antigen), MCA (Murine like carcinoma) [М.Л. Алексеева с соавт., 1395; Л.В. Адамян с соавт., 1936; Р.ЕЕ. Könincks et al., 1992, 1994, 1996, и Др.]. Достаточно высокую диагностическую ценность имеет одновременное определение маркеров опухолей: CA-125, £'ЗА, СА-19-9. В наших исследованиях выявлен« изменения концентрации СА-60 - маркера злокачественных опухолей яичников и кишечника. Установлено, что его содержание у больных зндометриозок было достоверно ниже (пределы колебаний: от 0 до 1,76 кг/мл; *Л±т 0,56 ±0,126 нг/мл; число обследованных - 27), чем у больных злокачественными опухолями (пределы колебаний: от 0,17 до 8,58 нг/мд; Mlia 1,785+0,465; число обследованных - 17, р=0,019.3 по t-критерию Стыадента; Р= 0,0004 по W-крктерию Вилкоксона; Р = 0,0097 по U-критерию Ман-иа-Уитни; распределения в обеих группах по критерию Хи-кв&драт статистически значимо отличаются от нормального, F; 0,0001; у 5 из 17 человек этой группы содержание CA-60 превышало 1,76 нг/мл, т.е. максимальную концентрацию, выявленную у больных эндометрио-зом). Таким образом, определение Cft-60 может быть полезным в дифференциальной диагностика этих заболеваний.

Изменения пр олиферат и в н о г о ответа лимфоцитов в культура* с ФГА у больных эндокетрхозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы. Анализ зависимости доза-эффект и регуля-торных эффектов преинкубацки.

В настоящее время основным методом второго уровня оценки иммунной системы в клинических условиях является реакция бласт-трансформации лимфоцитов (РБТЛ) при стимуляции их в культуре ми-тогенами или аллогенными клетками. Широкое использование этого метода как в навей стране, так и за рубежом связано зачастую с невозможность» оценки функций иммунокомпетентных клеток в системе in vivo, в то время как воспроизведение и оценка антигенспе-цифического ответа in vitro сопряжены с большими методическими трудностями. Поэтому РБТЛ является удобной моделью иммунного от-

ьета in vitro. Обследовано 30 человек. Первая группа включала 11 больных эндометриозок б возрасте от 24 до 47 лет {из них 7 человек с 1-й стадией эндокетриоза матки, 3 женщины со 2-й стадией эндометриоза матки и 1 больная с 1-й стадией зндометриоза яичников) . Во второй группе обследовано Э человек (возраст больных -2S-49 лет) со злокачественными новообразованиями женской половой сферы преимущественно 1-й стадии (распределение больных по гистологической структуре опухоли и стадии приведено в табл. 3). У всех больных второй группы злокачественные новообразования были диагностированы впервые, и до иммунологического обследования они не подвергались хирургическим методам лечения, химиотерапии или лучевой терапии. Третью (контрольную) группу составили 10 здоровых женщин в возрасте от 23 до 45 лет с нормальной репродуктивной Функцией и двухфазным менструальным циклом продолжительностью 26-32 дня. Исследование проводили на 7-8-й день менструального цикла.

Таблица 3

Распределение обследованных в Е'ЕТД больных злокачественными опухолями по гистологической структуре опухоли и стадии

Диагноз Стадия Число больных

Больные злокачественными опухолями

1. Высокодифференцированный рак 1-я 3

2. Умереннодифференцированный 1-я 1

рак 3-я 1

3. Низкодифференцированний рак 1-я 1

4. Недифференцированный рак 1-я i

5. Саркома 1-я 1

6. Аденокарцинома яичника 1-я 1

Всего; 9

Для сопоставления информативности разных методов учета результатов радиометрического варианта РБТЛ полученные данные были проанализированы по следующим показателям: 1) абсолютные значения включения 3Н-ткмндкна в ДНК в нмп/мин; 2) индексы стимуляции (рассчитывались как отношение включения 3Н-тимидина в культурах с нитогенами и в культурах без митогека); 3) показатели разности включения 3Н-тикидина в культура» с ФГА и в культурах без митогена; 4) logio показателей нмп/мин; 5) logло значений индексов стимуляции, Прежде всего была проведена оценка соответствия распределения каждого из пяти вышеуказанных параметров РБТЛ закону нормального распределения по показателям асимметрии (As), эксцесса (Ss) и критерию Хи-квадрат (Хи). В результате установлено, что в большинстве случаев распределение показателей абсолютного значений включения 3Н-тиикдина в ДНК в имп/нкн, индексов стимуляции, разности в кмп/мин резко отличалось от закона

нормального распределения (Р<0, ООО 1-0, ОЬ). Логарифмирование абсолютных значений радиоактивности н индексов стимуляции несколько приближало распределение показателей к нормальному (распределение значений logxo имп/мин и logio индекса стимуляции некоторых вариантов культур статистически значимо не отличалось от нормального). Однако даже, после такого преобразования в ряде случаев распределение показателей продолжало отличаться от нормального. В частности, для показателей logio имп/мин распределение статистически значимо отличалось от закона нормального распределения по критерий Хи-квадрат у здоровых женщин в культурах лимфоцитов с добавлением 50 (Р-0,0107) и 100 мкг/мл ФГА (Р= 0,0064); у больных эндокетрнозом - в культурак без митогена (Р=0,0251), в культурах с 50 мкг/кл ФГА (Р=0.0041) и с 200 мкг/мл ФГА (Р=0,0251); у больных злокачественными новообразованиями - в культурах с добавлением 10 мкг/кл ФГА (Р=0,0224) и 50 мкг/мл ФГА (Р=0,0035). Поэтому при статистическом анализе использовали наряду с параметрическими критериями и непараметрические (W-крнтернй Вклкоксона суммы рангов, О-тест Манна-Уитни, парный знаковый Т-тест Вилкоксона), надежность которых не зависит от закона распределении. Направленность изменений реакции бласттрансформацик у больных зндометриозом и злокачественными новообразованиями при использовании веек пяти вышеуказанных показателей была сходной. Поэтому ниже будут приведены (с учетом того, что распределение большинства параметров !?ВТЛ ближе к log-нормальному) в основном результаты с расчетом logio имп/мин включения 3Н-тикидика.

На рис. 1, А представлены эмпирические данные зависимости доза-эффект для разных концентраций ФГй по средним геометрическим имп/мин (антилогарифм средних logio имп/мин). Сравнение эмпирических кривых доза-эффект показывает смещение оптимума концентрации ФГА в сторону более низких значений у больных эндомет-риозом в сравнении с контрольной группой и статистически значимое угнетение пролиферации в культурах с высокой концентрацией митогена (200 мкг/ил 4ТА). Анализ индивидуальных зависимостей доза-эффект показал, что значение концентрации митогена, вызывающей максимальный пролмФеративкый ответ, весьма индивидуально как у больных, так и у здоровых женщин. Поэтому для более точной оценки средних значений оптимальной концентрации митогена была проведена аппроксимация эмпирических зависимостей доза-эффект моделями полиномиальной регрессии третьей степени. На рис. 2 представлены результаты такой аппроксимации для зависимости меж-

Рис. 1. Эмпирические данные зависимости доза-эффект для разных концентраций ФГА по средним геометрическим имп/мин (антилогарифм средних 1ов.ю имп/мин) в обычных культурах (А) и в культурах с преинкубацией без митогена (В).

По первой горизонтальной оси: контр. - показатели контрольной группы, I - больных зндокетриозом, II - больных злокачественными новообразованиями. По второй горизонтальной оси: 1 - культуры без китогенов, 2 - с добавлением 10 кг.г/мл ФГй, 3 - ЬО мкг/мл ФГА, 4 - 100 мкг/мл ФГЙ, 5 - 200 мкг/мд ФГй. По вертикальной оси

средняя геометрическая интенсивности включения 3Н-тимидина в культуры (имп/мин*Ю-3). Буквой "а" отмечены показатели, статистически значимо отличающиеся (Р<0,05) от контрольной группы, "б" от показателей больных эндометриозом.

ду logic концентрации ФГА (х) н выраженностью пролиферации (у) по logic имп/мин (подобные модели со сходным результатом были рассчитаны и по отношению к другим показателям пролиферации). Как видно из рисунка, найденные регрессивные уравнения у больных эндометриозом и здоровых женщин высоко достоверны (Р<0,0001) и хорошо описывают эмпирические данные. Анализ построенных по этим уравнениям регрессионных кривых показывает, что для больных эндометриозом в сравнении со здоровыми женщинами характерны сдвиг оптимума в сторону более низких концентраций 'ФГА и значительное снижение уровня пролиферации на кривой зависимости доза-эффект в зоне высоких концентраций (100-200 мкг/мл). -Форма кривой зависимости доза-эффект была однотипной вне зависимости от использо-

с

N.4

Г

|"З.В Г3.6

г *

И /2 ч

Е ?

Г2,8

-г

' * '

Рис. 2. Математические модели зависимости доза-эффект для разных концентраций ФГА, построенные на основании уравнений полиномиальной регрессии 3-й степени зависимости между Ъ^ю концентрации ФГА (х) м показателями 1овк> имп/мин (у). А - обычные культуры у здоровых женщин. В - то же у больных эндометриозом, С культуры с пренниубацией у здоровых женщин, 0 - то же у больных эндометркозом. По оси абсцисс - 1оаю концентрации ФГА (мкг), по оси ординат - показатели пролиферации в 1оехо имп/мин. В обычных культурах найденная регрессионная зависимость у здоровых женщин описывается уравнением: у - 3,17+х1'*(-0,663)+х2*1, 21+ +х3*(-0,332); Р < 0,0001, а у больных эндометркозом - уравнением: у = ЗД1+х1*(-0,779)+х2*1>47-Ис3*<-0,433); Р<0,0001; Б преин-кубированных культурах - у здоровых женщин: у - 3,13+х1*(-1,19) + + х2*1,4Э+ х3*{-0,357); Р<0,0001, а у больных эндометриозом: у =

ванного показателя пролифератиЕнон активности лимфоцитов (данные приведены в диссертации и не представлены здесь). Поскольку зависимость между концентрацией митогена и уровнем пролиферации носит нелинейный характер, характеристика ее методом расчета среднеэффектиЕных концентраций (ЕДбо), т.е. способом, принятым в фармакологии и токсикологии, была бы не совсем корректной. с другой стороны, методы расчета ЕДг.о (например, способ Спирмена-Кербера) мало пригодны для анализа результатов РБТЛ. Поэтому для дополнительной проверки были рассчитаны средние значения 1оею концентраций ФГЙ, вызывающих максимальный эффект. Как у здоровых лиц, так и у больных эндометрнозом значения концентраций ФГА, вызывающих максимальную пролиферацию, варьировали и были индивидуальны. В обеих группах они колебались от 50 до 200 мкг/мл (минимальные и максимальные значения). Средние значения 1оню концентраций ФГЙ, вызывающих максимальный ответ как по числу имп/мин, так и по его десятичному логарифму, у здоровых женщин контрольной группы составили 2,10010,076, а у больных эндометрио-зом - 1,97010,0752 (различия статистически значимы по К-тесту Вилкоксона суммы рангов, Р=0,0121; а также по тесту Манна-Уитни, Р=0,0075). Таким образом, можно считать, что при эндометриозе наблюдается сдвиг оптимальной концентрации ФГЙ в сторону меньших значений. Следует отметить, что вышеприведенные, рассчитанные прямым методом средние оптимальные концентрации близки к оптимальным концентрациям, предсказываемым математическими моделями (рис. 2) при аппроксимации экспериментальных данных уравнениями полиномиальной регрессии третьей степени (если опустить перпендикуляр на ось абсцисс, то получаются приблизительно те же значения 1оею концентраций ФГЙ, вызывающих максимальный ответ).

Для уточнения возможных механизмов выявленных изменений реакции блаеттрансформацин исследовали регуляторные эффекты 24-часовой преинкубации лимфоцитов в культуральной среде без добавления митогенов. Как было показано в исследованиях, выполненных в 80-е годы [Е.В. Васильева, Ю.И. Зимин, 1984; Г.З. Кубинский с соавт., 1983; 1985; 1987, и др.], подобная преинкубация приводит к элиминации из культур (вследствие дифференцировки) относительно незрелых посттимнческих Т-лнмфоцитов, супрессирую-щих пролиферативный ответ лимфоцитов на субоптимальные и гипе-роптимальные^ концентрации митогенов (Кон й и РШ) . Поэтому в культурах с преинкубацией пролиферативный ответ выше, чем в культурах без нее (а величина индекса преинкубации при этом выше 1,0). Как видно из табл. 4, у здоровых женщин наибольшие значе-

ния индекса отмечены при концентрациях ФГА 100 н 200 мкг/мл и в культурах без митогенов, а наименьшие - в культурах с 50 и 10 мкг/мл ФГА. Сходная направленность изменения индекса отмечена и у больных эндометриозом (табл. 4). Таким образом, наибольший супрессорный потенциал у короткожмвущих регуляторных клеток выявлен при концентрациях митогека 100 - 200 ккг/мл. Средняя величина индекса преинкубацнк у больных зкдометриоэом при концентрации ФГА 100 мгсг/кд составила 1,310. Котя средний уровень индекса у больных зндомет-риозом в культурах с добавлением 100 и 200 мкг/мл ФГА был несколько выше, чем в контрольной группе, статистически значимые отличия были найдены только по ¡Г-отношению, но не по другим критериям. Учитывая, что различил по ¡Г-отноиению отражают в основном не различия средних, а различия кк дисперсий (то есть распределении данных), можно полагать, что группа больных эндометриозом по значению данного показателя более неоднородна, чем группа здоровых женщин. Это может служить косвенным признаком кзмене-ник активности иммунорегуляторных Т-клеток при эндокетриозе в сторону преобладания dciwa-регулирующего эффекта.

Для выяснения направленности регуляторного эффекта этих клеток провели корреляционный и регрессионный анализ зависимости между ве-личиной индекса прекнкубацни и показателями пролиферации в культурах без прекнкубацни. Результаты корреляционного анализа и расчета показателе-й простой линейной регрессии представлены в

Таблица 4

Изменения активности регуляторных субпопуляций лимфоцитов в реакции бласттрансформа.ции с ФГА по индексам преинкубации

Митоген и его концентрация, мкг/мл культуры Индекс прединкубации

Эндометриоз Злокачественные опухоли ¡Контрольная группа

Без митогена 1,220± 0,149 1,400+ 0,277 1 0 190 + 245

ФГА 10 мкг/мл 0,830± 0,121a* 1,220+ 0,393 i-2tr 0 О 861 + 241

ФГА 50 мкг/мл 0,9403: 0,315 0,949+ 0,253«« 0 О 815 + 236

ФГА 100 мкг/мл 1,910± 0,595е* 1.090± о;1811-2У 1 О 280 + 243

ФГА 200 мкг/мл 1,580+ Ü.396**- 1,050+ О,1671-2f 1 о 130+ 210

Примечание. В данной таблице приняты следующие обозначения:

, 30 - данные статистически достоверно (Р<0,05) отличаются от показателей контрольной группы соответственно по Ъ-критерию Стьюдента для непарных данных, отношению, непараметрическим критерию Вилкокеона суммы рангов, тесту Манна-Уитни; 1_2Ъ, 1_2К, 1_2И, 1_2и - по этим же критериям между показателями 1-й и 2-й групп.

Таблица 5

Показатели линейной корреляции и простой линейной регрессии между показателями индекса преннкубации (х ) и показателями уровня пролиферации в культурах без преннкубации ( у )

Показатель уровня пролиферации

Зндометриоз

Злокачественные опухоли

Контрольная группа

Абсолютные значения в имп./мин.

Индекс стимуляции

Показатели разности

1оню имп./мин,

г = - 0,33 Рг = 0,014 у= 11900 4-Х* *(-2750) Р=0,0124

г = -0,319 Рг - 0,0177 у=10,6

Р=0, 6-158

г ~=~-0,343 Рг = 0.0106 у= 10700+х*

*(-2880) Р=0,0093

г =~-0,294 Рг = 0,0291 у =3,7$ * (-0,123) Р = 6,0262

г = -0,199 Рг= 0,152 у— 9690+х* *(-3110) Р=0,181

г~=-0,115 Рг= 0.537 У— 6,024-х»-*<-1г41) Р=0,548_

г = -0,152 Рг= 0,675 у-67004-х* ■♦•(-2410) Р=0,314

г'=-0,32б" Ртг— 0,0288 у-3,65« *( -6,201) Р=0,0253

г =-0,137 Рг = 0,651 у=1130Й+х* *(-1890) Р=0,662

г =-0,308 Рг = 0,0292 у= 9,88+х* *■( -3,15) Р=0,Й26

г =-0,143 Рг = 0,673 у-9660+х* *(-1930) Р=0,317

"г" =-0,261 Рг = 0,0664 у=3,89+х* 4-0, 183) Р=0,6б08

1овю

индексов

стимуляции

г = -0,362 Рг= 0,6071 у=0,716+х*' *-{-0,153) Р<0,б062

г =-0,138 Рг= 0,627

г =-0,292 Рг- 0,0396

у- 0,293+х* у- 0,t43+X* *(=0Л207)

*(-0.0956) р=о,ёза

Р=0,6356

Примечание, Здесь, Рг - показатель достоверности коэффициента линейной корреляции ( г ); Р - показатель достоверности уравнения линейном регрессии.

табл. 5. Как видно из таблицы, отмечена отрицательная линейная корреляционная и регрессионная связь между показателями индекса преннкубации и показателями пролиферации. У больных эндометрио-зом статистически значимая отрицательная корреляция и линейная регрессия обнаружена практически со всеми проанализированными показателями уровня пролиферации. Напротив, у здоровых женщин контрольной группы и особенно у больных злокачественными новообразованиями подобная отрицательная взаимосвязь индекса преннкубации была статистически значимой лишь для некоторых показателей. Это также косвенно отражаем более высокий супрессивный потенциал ретуляторных клеток у больных эндометриозом в сравнении с двумя другими обследованными группами. Б то же время в некоторых случаях, когда линейная связь была статистически недостоверной, использование методов нелинейной регрессии позволило выявить нелинейные отрицательные взаимосвязи между указанными параметрами .

По-видимому, высокий уровень индекса у больных эндометрио-зом при концентрациях ФГА 100 и 200 может определять отмеченный

ранее при анализе результатов культур без преинкубации сдвиг оптимума зависимости доза-аффект в сторону более низких концентраций ФГА и снижение пролиФератквного ответа при указанных концентрациях. Косвенным подтверждением этому может служить одинаковая форма кривых зависимости доза-эФФект у больных эндометрио-зом и у здоровых в культурах с преиккубацией (рис. В) в сравнении с обычными культурами (рис, 1, А). Сходная зависимость доза-эффект ответа на ФГА в отсроченных культурах била выявлена и по отношению к другим показателям пролиферации (данные приведены в диссертации). То есть преинкубацик клеток без митогека Фактически отменяет выявленные ранее для обычных культур различия кривых зависимостей доза-эффект. Указанное обстоятельство позволяет предположить, что различия кривых зависимостей доза-эффект связаны именно с регуляторними клетками, активность которых зависит от првинкубации, или, иначе говоря, с повышением у больных эндометриозом активности клеток, супрессирующих пролиферацию на высокие дозы митогека.

Изменения после преинкубации зависимости доза-эффект подтверждаются и проведенным регрессионным анализом в отсроченных культурах, Анализ построенных по найденным уравнениям полиномиальной регрессии третьей степени кривых (рис. 2) показывает, что после преинку&ации у больных эндометриозом в сравнении с обычными культурами наблюдается сдвиг оптимума в сторону более высоких концентраций ФГА. Эти данные подтверждаются и прямым расчетом средних арифметических 1о§1.о концентраций ФГА, вызывающих максимальный эффект (2,08±0,0565 в отсроченных культурах у больных эндометриозом и 2,12±0,048 в контрольной группе). Таким образом, для отсроченных культур у больных эндометриозом в сравнении с неотсрочеиными характерно приближением зависимости доза-эффект к показателям контрольной группы. Значительно уменьшается наклон регрессионной кривой в диапазоне высоких концентраций ФГА, что, вероятно, связано с- элиминацией супрессорного эффекта регулятор-ных Т-клеток.

Как видно из рис. 1, у больных злокачественными новообразованиями наблюдается выраженное угнетение ответа Т-лимфоцитов. В этой группе отмечено и отсутствие достоверных различий в культурах с ФГА в сравнения с культурами без ммтогена, что свидетельствует о выраженном угнетении бласттрансформации. Проведенный однофакториый дисперсионный анализ, а также линейный регрессионный я корреляционный анализ зависимости пролиферации от логарифма концентрации ФГА показали отсутствие влияния ФГА на про-

лиферацию "-лимфоцитов в этой группе (Р>0,05), в то время как у больных зндометркозом и в контрольной группе дисперсионный анализ показал высокозначимый эффект разных концентраций ФРА на пролиферацию лимфоцитов (р<0,0001). При сравнении регрессионных зависимостей у больных злокачественными новообразованиями в сравнении со здоровыми женщинами контрольной группы к больными эндометриозом выявлено статистически значимое снижение угла наклона кривой линейной регрессии зависимости доза-эффект. Преинку-бация лимфоцитов существенно не изменяла зависимости доза-эффект. Проведенный регрессионный и одкоФакторный дисперсионный анализ показал отсутствие влияния ФГн на пролиферацию Т-лимфоцитов у больных злокачественными опухолями и в преинкубированных культурах. Таким образом» при злокачественном росте выявлена более глубокая недостаточность функции Т-димфоцитов, чем при эндомет-риозе, что может быть использовано для дифференциальной диагностики этик заболеваний и выбора оптимальных схем кммунокорриги-руюцей терапии.

В целом, проведенные исследования показали, что наиболее информативны в плане дифференциальной диагностики эндометриоза и злокачественных опухолей женской половой сферы показатели бласттрансформации лимфоцитов с исследованием зависимости доза-эффект, изменения концентрации СА-60 и теофиллиновый тест.

ВЫВОДЫ

1. На основании изучения историй болезни выявлена малигнизация эндометриоза в 3,17% случаев и показана несостоятельность клинических методов исследования для диФФеренциальной диагностики эндометриоза и злокачественных опухолей.

2. У больных зкдометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы обнаружены однотипные изменения в иммуног-рамме, характеризующиеся снижением абсолютного числа лимфоцитов, относительного и абсолютного количества Т-клеток (Е-РОК), незрелых посттимических Т-димфоцитов (ауто-РОК), абсолютного числа теофиллинрезистентных Е-РОК; повышением относительного уровня 0-клеток, молодых форм В-лимфоцитов (М-РОК) и Т-клеток с повышенной аффинностью <3)2 (ранние Е-РОК), а также угнетением показателей Фагоцитоза. В то же время установлены существенные различия в иммунограмме исследуемых групп, которые заключались в значительном снижении процентного содержания теофиллинрезистентных Е-РОК при злокачественных новообразованиях и снижении количества теофиллинчуветвительных Е-РОК у больных эндометриозом.

3. Содержание опухолевого маркера СА-60 у еояьких злокачественными новообразованиями было существенно выше, чем у больных эн-дометриозом, что позволяет использовать определение СЙ.-60 в дифференциально»! диагностике этик заболеваний.

4. При исследовании пролиферативного ответа Т-лнмфоцитов на разные концентрации ФГА выявлено изменение зависимости доза-эффект у больных эндометриозом: угнетение прол кфератно ног о ответа в культурах с высокой концентрацией митогена (200 мкг/мл) и сдвиг оптимума бяасттрансформацки в сторону более низких концентраций ФГА. Преинкубация культур без митогена у больных эндометриозом приводила к приближению зависимости доза-эффект к показателям контрольной группы. Выявлены отрицательные корреляционные и регрессионные связи между величиной индекса прекнкубацик и показателями пролиферации, что подтверждает участие короткохивущих ре-гуляторных клеток в изменении зависимости доза-эФФект.

5. У больных злокачественными новообразованиями отмечено резко выраженное угнетение пролиферативного ответа лккфоцктов, которое, помимо снижения абсолютных значений, характеризовалось уменьшением наклона регрессионных зависимостей доза-эффект, вплоть до отсутствия влияния ФГА на пролиферацию Т-лимфоцитов по данным дисперсионного анализа как в обычных, так и в преинкубированных культурах.

6. При злокачественной росте выявлена более глубокая недостаточность функции Т-лимфоцитов, чем при эндометрнозе, что может быть использовано для дифференциальной диагностики .заболеваний и выбора оптимальных схем иммунокорригирующей терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Черникова H.A., Старцева П.В. 0 сочетании рака и зндометри-оза // Актуальные вопросы клинической педиатрии, акушерства и гинекологии: Материалы 2-й науч. конф,, Киров, 23-24 сентября 1993. - Киров, 1993. - С. 353-353.

2. Старцева Н.В., Черникова И.А. Иммунологическая активность больных эндометриозом и раком в ера вн и те л ь н ом аспекте // Актуальные вопросы клинической педиатрии > акушерства и гинекология: Матерналм 3-й науч. конф., Киров, 23-30 сентября 1994. - Киров, 1994. - С. 46S-469.

3. Старцева ". В., Черникова Я.А., Гончаров Д.В. Психосоматические аспекты болевого синдрома при эндометриозе // Пермский медицинский журнал. - 1995 - Т.12, N 4. - С. 32-85.

4. Черникова И.Й., Старцевз Н.В. Использование опухолевого

маркера с д и ФФ >:■ р о н ц и а л ь к ой диагностике рака тела матки и генитального эндоиетриоза У/ Научная сессия 1996 года Пермской государственной медицинской академии: Тез. докл. - Пермь, 1996. - С. 233-233.

5. Черникова И.ft. Диагностическая ценность иммунологических тестов в ранней диагностике злокачественного роста у больных генитадьккм зкдокетриозом // Научно-практическая конференция молодых ученых Пермской государственной медицинской академии: Тез. докл. - Пермь, 1936. - С. 12-13.

6. Chernikova I.A. , Starseva ti.V. Anaemia as an iKtfiunodefiei-ency result in patients with genital endometriosis // First International Kedical Congress. Ishevsk, Russia, September, 1-5, 1996. Abstracts. - Izhevsk, 1996. - P. 13-19.

7. Chernikova I.A.., Shilov J. I., Shilova N.A., Starseva K.V PHA-induced lymphocyte proliferative responses in patients with genital malignant tumours or endometriosis. Analysis of dose-effect dependences and regulatory effects of culture preincubation // 5th International Expert Forum on Immunotherapy and Gene Therapy. Israel, Jerusalem, 4-7 June 1996. Abstracts. - Israel, 1996. - P.166-166.

8. Черникова И.ft., Шилов W.И., Шилова H.А., Старцева Н.В. Сравнительный анализ пролиферативного ответа лимфоцитов на фитогемагглютиннн у здоровых женщин, больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями женской половой сферы // Научная сессия 1997 года Пермской государственной медицинской академии: Тез. докл. - Пермь, 1997. - С. 69-69.

9. Черникова Й.А., Шилов Ю. И., Шилова Я. А., Старцева Н. В. Исследование влияния преинкубации на зависимость доза-эффект пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с ФГА у здоровых женщин, больных эндометриозом и злокачественными новообразованиями // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии н иккунофармакологии: Сб. тр. 1-й на-циональн. конф. Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, Москва, 28-31 января 1997. - Москва, 1997. - С. 346-346.