Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Иммунологические аспекты диагностики и прогноза течения возрастной макулярной дегенерации и диабетической ретинопатии

На правах рукописи

Марных Сергей Анатольевич

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗА ТЕЧЕНИЯ ВОЗРАСТНОЙ МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИИ И ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ

14.03.09 — клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

11 НОЯ 2015

Москва —2015

005564502

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова Министерства Здравоохранения

Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Евсегнеева Ирина Валентиновна

Официальные оппоненты:

Винницкий Леонид Ильич, доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ, ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В.Петровского», руководитель лаборатории иммунологии и регуляторных механизмов в хирургии

Юдина Светлана Михайловна, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрава России, заведующая кафедрой клинической иммунологии и аллергологии

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова»

Защита состоится « »_2015 г. в_на заседании Диссертационного совета

Д 208.040.08 в ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России по адресу: 119992, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России по адресу: 119034, г. Москва, Зубовский бульвар, д. 37/1 и на сайте www.mma.ru

Автореферат разослан О иУЗСр^ ,2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинский наук,

профессор Калюжин Олег Витальевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Сахарный диабет (СД) и его осложнения стремительно врываются в ряд наиболее значимых причин заболеваемости и смертности в мире [Дедов И.И. и др. 2011; Sayin N. et al, 2015]. В мире насчитывают более 240 миллионов больных СД, а к 2030 году это число, по прогнозам специалистов, достигнет 370 миллионов [International Diabetes Federation, 2011]. Диабетическая ретинопатия (ДР) является наиболее распространенным микрососудистым осложнением СД и постепенно трансформируется в основную причину слепоты у работающего населения [Дедов И.И., 2001; Aiello L.M., 2003; Threatt J. et al, 2013]. Среди больных СД 1 и 2 типов с длительностью заболевания более двадцати лет распространенность ДР составляет 95% и 60%, соответственно [Garg S., Davis R.M., 2009]. Вместе с тем при СД 2 типа отмечают более высокий процент пациентов с потерей зрения [Kumari S. et al, 2008]. В течение 10 лет примерно у 64% людей с исходной ДР развиваются более тяжелые формы заболевания, а у 17% — пролиферативная ДР, при которой существенно увеличивается риск ухудшения зрения и слепоты [Klein R., 2008].

Патогенез ДР тесно связан с гипергликемией, которая запускает каскад событий, ведущий к нарушению функции эндотелия сосудов и нейродегенерации [Heng L.Z. et al, 2013]. В качестве важнейших механизмов прогрессирования ДР рассматриваются неоваскуляризация, хроническое окислительное повреждение, хроническое воспаление и лейкостаз [Tarr J.M. et al, 2013]. Эти процессы связаны или, по крайней мере, сопровождаются не только местными, но и системными иммунными расстройствами [Ahsan Н., 2015]. Описан ряд иммунопатологических событий, лежащих в основе развития пролиферативной ДР, в частности повышение внутриглазных концентраций ростовых факторов, растворимых форм молекул межклеточной адгезии, некоторых хемокинов и провоспалительных цитокинов [Chernykh V.V. et al, 2015; Jonas J.B. et al, 2010]. Однако информация о том, могут ли системные иммунологические показатели отражать неоангиогенез и нейродегенеративные процессы в сетчатке, крайне противоречива [Караулов A.B. и др., 2006, Караулов A.B. и др., 2008] и не позволяет выделить четкие критерии ранней диагностики и прогноза развития пролиферативной формы этого заболевания.

Рост средней продолжительности жизни неминуемо оказывает влияние на увеличение распространённости заболеваний, связанных с пожилым возрастом, в частности возрастной макулярной дегенерации (ВМД) [Khandhadia S. et al, 2012]. ВМД является одной из ведущих причин слепоты в развитых странах, уступая в этом отношении только катаракте и глаукоме и обусловливая 8,7% всех зарегистрированных случаев потери зрения [Resnikoff S. et al, 2004]. В настоящее время выделяют сухую и влажную формы ВМД [Cheung L.K., Eaton А., 2013].

з

Ключевыми событиями на ранних этапах этого заболевания являются накопление экстрацеллюлярных депозитов (друз) между мембраной Бруха и пигментным эпителием сетчатки и атрофия последнего, что соответствует сухой форме ВМД [Jager R.D. et al, 2008]. Появление участков хориоидальной неоваскуляризации, сопровождающееся экссудацией и расширением зоны поражения, характеризует развитие влажной формы ВМД, при которой многие патогенетические процессы становятся необратимыми [Zarbin М.А., 2004]. Достаточно большое число работ посвящено изучению иммунных механизмов патогенеза ВМД. Показано, что развитие влажной ВМД ассоциировано с повышением внутриглазных концентраций ряда хемокинов, растворимых форм молекул адгезии [Jonas J.B. et al, 2010], фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) [Ng E.W., Adamis А.Р., 2005] и некоторых провоспалительных цитокинов [Jonas J.B. et al, 2012]. Вместе с тем данные о системных иммунологических сдвигах, отражающих прогрессирование ВМД, менее однозначны [Караулов A.B. и др., 2007, Караулов A.B. и др., 2009].

VEGF рассматривается как основной ангиогенный регулятор хориоидальной неоваскуляризации [Leung D.W. et al, 1989] и важный фактор, увеличивающий проницаемость сосудов при ВМД [Keck P.J. et al, 1989, Senger D.R. et al, 1990]. Успехи последних лет в лечении влажной формы заболевания связаны с внедрением в клиническую практику анти-VEGF-npenapaTOB [Campa С., Harding S.P., 2011]. Однако эти средства имеют ограниченный потенциал в плане улучшения зрения пациентов. В этой связи выявление новых и уточнение раннее описанных иммунных механизмов прогрессирования ВМД имеет большое практическое значение и с точки зрения разработки патогенетически обоснованных методов лечения, обеспечивающих восстановление зрения [Ishikawa М., 2015].

Цель работы — установить особенности системных иммунологических сдвигов при разных формах диабетической ретинопатии у больных сахарным диабетом 2 типа и возрастной макулярной дегенерации для выявления лабораторных критериев прогрессирования этих глазных болезней.

Задачи исследования:

1) Изучить субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у больных СД 2 типа с препролиферативной и пролиферативной диабетической ретинопатией.

2) Определить концентрации Th 1 /Th2/Tr 1 -цитокинов в сыворотке крови у больных СД 2 типа с препролиферативной и пролиферативной диабетической ретинопатией.

3) Изучить уровень растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови у больных СД 2 типа с разными формами диабетической ретинопатии.

4) Определить субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных сухой и влажной возрастной макулярной дегенерацией.

5) Изучить концентрации ТЫ/ТЬ2/Тг1-цитокинов в сыворотке крови больных сухой и влажной возрастной макулярной дегенерацией.

6) Определить уровень растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови пациентов с разными формами возрастной макулярной дегенерации.

7) Выявить дополнительные иммунологические критерии диагностики и прогноза развития пролиферативной диабетической ретинопатии и влажной формы возрастной макулярной дегенерации.

Научна новизна

Модернизированы представления о характере изменений ряда системных иммунологических показателей при различных формах ДР у больных СД 2 типа и ВМД:

1) иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови;

2) концентрации цитокинов, характеризующих функцию хелперных/регуляторных субпопуляций С04+-клеток, в сыворотке крови;

3) уровня растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови.

Выявлены новые иммунологические критерии прогрессирования ДР: снижение в периферической крови числа СВ25+-лимфоцитов, повышение количества СБ95+- и НЬА-ОЯ+-клеток, а также содержания зНЬА-1 и зСЭ8 в сыворотке крови.

Установлены новые иммунологические маркеры развития влажной ВМД: увеличение в периферической крови количества СБЗ+-, СБ8+- и СБ38+-лимфоцитов, а также содержания вСВ25 и 8СБ54. Практическая значимость работы

Практическая ценность работы состоит в формулировке четких рекомендаций по мониторингу системных иммунологических показателей у больных препролиферативной ДР для оптимизации раннего выявления прогрессирования заболевания с развитием его пролиферативной формы.

Кроме того, установлены наиболее информативные системные иммунологические критерии, дополняющие и облегчающие своевременную верификацию влажной формы ВМД, что имеет высокий потенциал для практического использования.

Работа имеет практическую ценность и в связи с тем, что ее результаты могут предопределить рациональный поиск эффективных средств патогенетической, в том числе специфической, иммунотерапии ДР и ВМД.

5

Положения, выносимые на защиту:

1) В периферической крови больных ДР выявлены особенности субпопуляционного состава лимфоцитов, содержания хелперных/регуляторных цитокинов и растворимых форм мембранных антигенов, отражающие разные клинические фенотипы заболевания.

2) Установлены изменения иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови, уровня Thl/Th2/Trl -цитокинов и растворимых форм мембранных антигенов, характерные для сухой и влажной ВМД.

3) Мониторинг ряда системных иммунологических показателей у больных препролиферативной ДР может использоваться для раннего выявления прогрессирования заболевания и прогноза развития его пролиферативной формы.

4) У больных сухой ВМД дополнительным предиктором прогрессирования заболевания с развитием его влажной формы является рост в периферической крови количества CD3+-, CD8+- и CD3 8 ^-лимфоцитов, а также содержания sCD25 и sCD54. Личный вклад автора

Автор лично сформулировал цель и задачи работы, подобрал адекватные методы для решения поставленных задач, провел анализ данных литературы по теме диссертации, выполнял клинико-инструментапьные исследования и наблюдение за всеми включенными в работу пациентами, осуществлял отбор образцов крови, принимал непосредственное участие в изучении иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови, а также содержания цитокинов и растворимых форм мембранных молекул, лично провел математическую обработку и интерпретацию результатов диссертационной работы, сформулировал выводы и практические рекомендации. Отдельные исследования проведены совместно с сотрудниками НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина (г. Москва), НИИ молекулярной биологии и региональной экологии Нижегородского государственного университета им. Н.И.Лобачевского (г. Нижний Новгород) и кафедры клинической иммунологии и аллергологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (г. Москва). Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на 10-й Научно-практической конференции «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2007), Научно-практической конференции «Офтальмоиммунология: итоги и перспективы» (Москва, 2007), Юбилейной конференции КБ № 85 ФМБА России «60 лет в науке и практике» (Москва, 2008), 5-й Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2008), Всемирном форуме по иммунорегуляции (Давос, 2012), Всероссийской научно-практической конференции «Иммунопатология и иммунореабилитация: от теории к практике»

6

(Пенза, 2015). Апробация работы состоялась на совместном заседании кафедры клинической иммунологии и аллергологии и кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России 13 мая 2015 года.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Выявление системных иммунологических сдвигов у больных ВМД и ДР, которые могут использоваться как критерии диагностики и прогноза развития указанных заболеваний, соответствует формуле научной специальности 14.03.09 — клиническая иммунология, аллергология — и следующим областям исследований этой специальности:

- Изучение патогенеза иммунозависимых заболеваний (иммунодефицитных состояний, аллергической и аутоиммунной патологии).

— Разработка и усовершенствование методов диагностики, лечения и профилактики аллергических и иммунопатологических процессов. Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 6 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки России. Структура и объем работы

Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические рекомендации и список литературы. Список литературы содержит 36 отечественных и 103 иностранных источников. Материалы диссертации изложены на 106 страницах машинописного текста и включают 52 рисунка, 4 схемы и 3 таблицы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Общая характеристика обследованных лиц

Работа выполнена на базе Клинической больницы №85 Федерального медико-биологического агентства. В исследование включены 33 больных СД 2 типа с ДР (возраст 59±12 лет) и 35 пациентов с ВМД (возраст 68±13 лет). 19 больных ДР имели препролиферативную форму заболевания, 14 — пролиферативную. 20 пациентов с ВМД имели сухую форму заболевания, 15 - влажную.

Кроме того, изучены иммунологические показатели в образцах крови 20 здоровых доноров (возраст 61±9 лет), сформировавших контрольную группу; полученные данные приняты как условная норма.

Критериями исключения для всех групп больных были: злокачественные опухоли; хронические заболевания легких; СД 1 типа; системные аутоиммунные заболевания; туберкулез; ВИЧ/СПИД-инфекция; гепатиты В и С; другие

7

хронические и острые инфекционные заболевания, которые могли бы повлиять на системные иммунологические показатели. Критерием исключения для больных ДР, кроме того, был декомпенсированный СД, а для больных ВМД — СД 2 типа.

Возраст пациентов с ВМД превосходил таковой у больных СД 2 типа с ДР, при этом обе группы больных в этом отношении не отличались от группы здоровых доноров (Табл. 1). Не выявлено возрастных различий между подгруппами больных с препролиферативной и пролиферативной ДР, а также между подгруппами пациентов с сухой и влажной формами ВМД.

Таблица 1. Число, возраст и пол обследованных лиц

Диабетическая ретинопатия Возрастная макулярная дегенерация Здоровые добровольцы

Препроли-феративная Пролифе-ративная Всего Сухая Влажная Всего

Число 19 14 33 20 15 35 20

Возраст, лет 58±11 61±11 59±11 65±12 68±11 67±12* 61±9

Пол, муж/жен 8/11 6/8 14/19 8/12 6/9 14/21 9/11

Значимость различия при множественном сравнении выделенных показателей: р=0,021 (критерий Краскела-Уоллиса); в сравнении с больными ДР: * -р=0,001 (критерий Манна-Уитни) или р=0,026 (критерий Данна).

Гипертензию верифицировали, если артериальное давление превышало 140/90 мм рт. ст., и/или если обследованные лица принимали антигипертензивные препараты. Гиперхолестеринемию или гипертриглицеридемию определяли как повышение холестерина или триглицеридов в сыворотке крови более 200 мг/дл.

Базовая клиническая и биохимическая характеристика обследованных больных и здоровых добровольцев представлена в таблице 2.

По индексу массы тела пациенты с ДР и влажной ВМД превосходили контрольную группу. Выявлена тенденция к увеличению доли лиц с гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией и, особенно, с гипертензией среди больных ДР и ВМД. Вместе с тем статистически значимых отличий по этим характеристикам от группы здоровых добровольцев не установлено.

В крови больных обеими формами ДР уровни глюкозы и гликированного гемоглобина (НЬА1с) существенно не различались, но при этом превосходили соответствующие показатели у здоровых добровольцев. По всем указанных показателям статистически значимых различий между подгруппами больных с препролиферативной и пролиферативной ДР, а также между подгруппами пациентов с сухой и влажной ВМД не выявлено.

Всем пациентам проводилось комплексное офтальмологическое обследование, включающее определение остроты зрения, биомикроофтальмоскопию, осмотр с трехзеркальной линзой Гольдмана, статическую компьютерную периметрию, а также оптическую когерентную томографию сетчатки и флюоресцентную ангиографию глазного дна.

Таблица 2. Базовые клинические н биохимические характеристики

обследованных лиц

Диабетическая ретинопатия Возрастная макулярная дегенерация Здоровые добровольцы (п=20)

Препроли-феративная (п=19) Пролифе-ративная (п=14) Сухая (п=20) Влажная (п=15)

Индекс массы тела, кг/м2 28,9±4,1* 29,4±4,7* 27,1±3,9 28,7±3,4* 26,1±3,5

Гипертензия, п (%) 10 (53) 8(57) 11 (55) 9 (60)" 5(20)

Глюкоза, ммоль/л 8,4±1,9* 8,7±2,4* 5,1±0,7 5,3±0,6 5,2±0,6

HbAlc, % 7,6±1,8* 7,9±2,0* 5,4±0,4 5,3±0,5 5,1±0,5

Гиперхолестеринемия, п(%) 7(37) 6(43) 6(30) 6(40) 4(20)

Гипертриглицеридемия, п(%) 6(32) 6(43) 5(25) 5(33) 3(15)

Значимость различия с показателями здоровых добровольцев: * -р<0,05 (критерий Манна-Уитни); #— р=0,081 (критерий х2 с поправкой Йейтса)

Иммунологические методы исследования

Иммунофенотипирование клеток крови проводили методом непрямой поверхностной иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител (МКА), меченных флюорохромом (флюоресцеинизотиоцианатом или фикоэритрином), производства AbD Serotec (Великобритания) против различных мембранных антигенов: CD3, CD4, CD8, CDllb, CD16, CD20, CD25, CD38, CD54, CD71, CD95 и HLA-DR.

10 мкл МКА раскапывали по пробиркам. В пробирки, содержащие МКА, добавляли по 100 мкл цельной крови и инкубировали 30 минут при +4°С, после чего добавляли 1 мл лизирующего буфера и инкубировали еще 10 минут при комнатной температуре. Пробирки центрифугировали в течение 7 минут при 1000 об/мин, надосадочную жидкость сливали, осадок ресуспендировали, добавляя в каждую пробу по 2 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) при рН=7,4. Суспензии повторно центрифугировали в течение 7 минут при 1000 об/мин, супернатант вновь сливали, осадок ресуспендировали в 300 мкл PBS, содержащем 1% формалина. Реакцию

анализировали на проточном цитофлюориметре FACSCalibur (Becton Dickinson, США).

Уровень растворимых форм мембранных антигенов CD8 (sCD8), CD25 (sCD25), CD38 (sCD38), CD50 (sCD50), CD54 (sCD54) и CD95 (sCD95) и HLA-DR (sHLA-DR) в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с помощью меченных пероксидазой хрена МКА ИКО-31, ИКО-Ю5, ИКО-бО, ИКО-218, ИКО-20, ИКО-160 и ИКО-1, соответственно, и поликлональных антител против поверхностных антигенов мононуклеарных клеток периферической крови в качестве «первых» антител, сорбируемых на твердую фазу, как описано в работах [Фотиади О.Г., 2009; Худякова Н.Е. и др., 2004; Khudyakova N.E. et al, 2003].

При исследовании содержания растворимых молекул HLA I класса (sHLA-I) в сыворотке крови использовали МКА ИКО-53 (против а-цепи молекулы HLA-I) в качестве «первых» антител, сорбируемых на твёрдую фазу, и меченные пероксидазой хрена МКА ИКО-216 (против р2-микроглобулина молекулы HLA-I) в качестве иммуноферментного конъюгата.

Для определения ассоциатов sHLA-I+CD8 применяли МКА ИКО-53 как «первые» антитела и меченные пероксидазой МКА ИКО-31 как иммуноферментный конъюгат.

Учет результатов проводили с помощью фотометра Multiskan MS (Labsystems) при длине волны 492 нм. Результаты выражали в условных единицах (ед/мл).

Содержание цитокинов в сыворотке крови определяли с помощью высокочувствительного твердофазного иммуноферментного анализа, применяя тест-наборы Bender MedSystems (Австрия), в которых в качестве дополнительного амплифицирующего реагента используется биотинил-тирамид, в соответствии с инструкциями производителя (http://www.ebioscience.com/knowledge-center/product-line/elisa/high-sensitivity-elisa-kits.htm). Чувствительность наборов для определения ИЛ-2 составляла 0,4 пг/мл, ИЛ-4 - 0,1 пг/мл, ИЛ-10 - 0,05 пг/мл, ИФН-у - 0,06 пг/мл.

Методы статистического анализа

Обработку данных осуществляли с помощью программы Statistica 8 (StatSoft Inc) в соответствии с общепринятыми методами биомедицинской статистики [Платонов А.Е., 2000, Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2006]. Множественные межгрупповые сравнения независимых выборок проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса, парные сравнения независимых выборок по количественным характеристикам проводили с помощью критериев Данна и Манна-Уитни. При сравнении независимых выборок по качественным признакам использовали критерий х2 с поправкой Йейтса. При анализе связи переменных рассчитывали коэффициент корреляции Спирмена. Нулевая гипотеза отвергалась при р<0,05.

ю

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Субпопуляционнын состав лимфоцитов периферической крови больных ДР

У больных ДР количество лейкоцитов в периферической крови в математически подтврежденной степени превосходило таковое в группе сопоставимых по возрасту здоровых доноров. Отметим, что при этом у большинства обследованных пациентов число лейкоцитов оставалось в диапазоне общепринятых референсных значений нормы. Статистически значимого различия количества этих клеток между группами больных пролиферативной и препролиферативной ДР не обнаружено.

Изменения числа лимфоцитов у пациентов с ДР подчинялись сходным закономерностям.

Их количество в полтора раза превышало соотвествующие показатели контрольной группы и не различалось в зависимости от формы заболевания.

Примерно в той же степени у больных препролиферативной ДР увеличивалось количество Т-лимфоцитов (СВЗ+-клеток), тогда как у пациентов с пролиферативной формой заболевания наблюдали лишь тенденцию к росту числа этой популяции лимфоцитов. При этом, также как и в предыдущих случаях, статистически значимых отличий между группами с разными формами ДР не выявлено.

Установлена положительная корреляционная связь количества Т-клеток и их СБ4+-субпопуляции, включающей преимущественно Т-хелперы и отчасти регуляторные Т-клетки.

Несмотря на это, число С04+-лимфоцитов у больных ДР существенно не различалось как в сравнении с контролем, так и в зависимости от клинического фенотипа заболевания (Рис. 1).

При множественном сравнении выявлено различие между группами по количеству СВ8+-клеток, представляющих собой главным образом цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) (Рис. 1). Указанное различие было обусловлено экспансией этой субпопуляции у больных с препролиферативной ДР. У пациентов с пролиферативной формой заболевания число С08+-лимфоцитов не отличалось от такового у здоровых доноров.

Количество лимфоцитов с иммунофенотипом СБ16+ (МС-клеток) в крови больных препролиферативной и пролиферативной ДР превышало соответственно в 1,8 и 2,2 раза контрольные значения (Рис. 1).

Не установлено межгрупповых различий по числу С020+-клеток (В-лимфоцитов), тем не менее следует отметить тенденцию к его увеличению в обеих группах больных ДР.

1400 1200 1000 800 600 400 200 0

СР4

т

т

140 120 100 80 60 40 20 О

Контроль „ , „Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР

СР25

т

Контроль

Контроль „ „Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР

При множественном сравнении: р=0,032 (критерий Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * -р=0,021 (критерий Манна-Уитни) или р=0,027 (критерий Данна)

Контроль „ „ Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР

При множественном сравнении: р=0,009 (кр-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * - р=0,011 (кр-й Манна-Утни) или р=0,006 (кр-й Данна), ** - р=0,001 (кр-й Манна-Утни) или р=0,030 (кр-й Данна)

Препролиф. ДР

Пролиферат. ДР

Контроль

Препролиф. ДР

Пролиферат. ДР

Контроль

Препролиф. ДР

Пролиферат. ДР

При множественном сравнении: р=0,073 (кр-й При множественном сравнении: р=0,001 (кр-й Краскела-Уоллиса). При множественном сравнении: р=0,036 (кр-й

Краскела-Уоллиса). В сравнении с больными В сравнении с контролем: *-рЮ,001 (ф-й Манна-Утни) или Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: *-

препролиф. ДР: #-р=0,046 (кр-й Манна-Уигни) рИЗ,047 (кр-й Данна), **-р=0,001 (кр-й Манна-Утни) или ^0,035 (кр-й Манна-Утни) или р=0,052 (кр-й

или р=0,102 (кр-й Данна) р<0,001 (кр-й Д анна). В сравнении с больными препролиф. ДР: Данна). В сравнении с больными препролиф. ДР: # -

#-р=0,(Й6 (ф-й Манна-Утни) или р=0,548 (ф-й фнна) р=0,027 (кр-й Манна-Утни) или р=0,139 (ф-й Данна)

Рисунок 1. Иммунофенотип лимфоцитов периферической крови больных препролиферативной и пролиферативной ДР

Данные представлены как Ме (25%-75%; Мт-Мах), клеток/мкл

Неоднозначные данные были получены при изучении зависимости экспрессии на лимфоцитах различных активационных маркеров от клинической формы заболевания.

Установлено повышение количества НЬА-БК+-клеток в группе пациентов с пролиферативной ДР. Их число у этих больных превышало таковое как в контроле, так и в группе пациентов с препролиферативной ДР (подтверждено при парном сравнении с использованием критерия Манна-Уитни) (Рис. 1).

Наоборот, количество С071+-лимфоцитов статистически значимо увеличивалось только у больных с препролиферативной ДР; при пролиферативной форме заболевания число этих клеток не отличалось от показателей здоровых доноров.

Количество С025+-лимфоцитов у больных препролифетивной ДР было сходным с таковым в контрольной группе и вдвое превышало число этих клеток у пациентов с пролиферативной формой болезни. Указанное различие подтверждалось с помощью критерия Манна-Уитни, тогда как множественное межгрупповое сравнение с использованием критерия Краскела-Уоллиса и парное сравнение с помощью критерия Данна не опровергали нулевую гипотезу (Рис. 1).

Число лимфоцитов, экспрессирующих поздний активационный маркер (СБ95), свидетельствующий о готовности клеток, выполнивших свою функцию, к апоптозу, возрастало по мере прогрессирования заболевания. У больных препролиферативной ДР количество этих клеток превышало контроль вдвое, а в пролиферативной фазе заболевания дополнительно увеличивалось еще в полтора раза (Рис. 1).

Неоднозначными были и изменения числа лимфоцитов, экспрессирующих различные молекулы адгезии, у больных ДР.

Если количество С011Ь+-клеток увеличивалось в сравнении со здоровыми донорами только у пациентов с препролиферативной ДР, то число СОЗЯ+- и, особенно, С054+-лимфоцитов повышалось примерно в равной степени при обеих формах заболевания. Значимость указанных изменений, несмотря на достаточно высокую индивидуальную вариативность показателей, подтверждалась при разных вариантах математической обработки данных.

Концентрации ТЫ/ТЬ2/Тг1-цитокинов в сыворотке крови больных ДР

У пациентов с ДР установлены разные по направленности тренды изменения концентрации в сыворотке крови ИЛ-2 и ИФН-у - цитокинов, отражающих функциональную активность ТЫ-субпопуляции СБ4+-лимфоцитов (Табл. 3).

Уровень ИЛ-2 у больных препролиферативной ДР практически не отличался от такового здоровых доноров; в группе пацеиентов с пролиферативной формой заболевания отмечена тенденция к снижению этого показателя. Подчеркнем, что во

13

всех группах, особенно у больных пролиферативной ДР, достаточно часто содержание ИЛ-2 в сыворотке крови было ниже уровня детекции используемой высокочувствительной тест-системы.

Таблица 3. Концентрация цитокинов (пг/мл) в сыворотке крови больных

препролиферативной и пролиферативной ДР

Цитокин Контроль (здоровые добровольцы) Препролифератив-ная ДР Пролиферативная ДР Значимость различия при множественном сравнении (критерий Краскела-Уоллиса)

1 2 3

ИФН-у ЗДЗ (1,66-5,01; 0-6,65) 6,21 р,.1=0,014 (3,87-8,67; 1,54-9,55) 627 РР-З=0,013 (4,45-8,40; 1,94-9,99) р=0,004

ИЛ-2 1,55 (1,21-2,49; 0-4,62) 1,67 (1,13-3,08; 0-4^0) 3,93 (0-1,82; 0-4,09)

ИЛ-4 3,21 (2,64-3,56; 230-4,66) 2^9 (134-3,63; 039-4,61) 2,00 р,.3=0,034 (0,82-2,95; 0,48-438) р=0,039

ИЛ-10 2,19 (1,90-2,85; 1,70-7,14) 0,004 (3,22-5,27; 1,09-7,90) 4,71 р,-з=0Д)6 (2,86-6,73; 1,81-8,58) р=0,001

Примечание: Цифры в таблице представляют собой Ме (25%-75%; Мт-Мах). Курсивом представлена значимость различия при парном сравнении с контролем (критерий Данна).

Медианы концетрации ИФН-у, наоборот, возрастали примерно в полтора раза в обеих группах больных ДР, при этом зависимости степени повышения уровня этого цитокина от формы заболевания не обнаружено.

Продемонстриована тенденция к снижению содержания в сыворотке крови ТЬ2-продукта — ИЛ-4 - у пациентов с препролиферативной ДР; у больных с пролиферативной формой заболевания этот тренд достигал статистически значимого уровня. При парном сравнении уровня ИЛ-4 в группах с разными клиническими фенотипами ДР отличий не выявлено.

Установлена обратная корреляционная связь между концентрациями ИЛ-4 и ИФН-у.

Что касается ИЛ-10 — противовоспалительного продукта Tri-клеток, представляющих собой отдельную субпопуляцию регуляторных Т-лимфоцитов, - то его содержание прямо коррелировало с концентрацией ИФН-у — провоспалительного Thl-цитокина. При этом медиана уровня ИЛ-10 у больных ДР вне зависимости от формы заболевания была примерно вдвое выше таковой в контроле

Уровень растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови больных ДР

При изучении уровня растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови больных ДР не установлено

линейной закономерности их возрастания или снижения по мере прогрессирования заболевания от препролиферативной к пролиферативной форме заболевания.

Концентрации растворимых форм мембранных молекул адгезии вС038 и бСБЗО, во многом благодаря высокой индивидуальной вариативности этих показателей, практически не отличались во всех группах обследованных пациентов с ДР и здоровых доноров.

Напротив, содержание растворимой формы другой адгезионной молекулы — зСБ54 — в сыворотке крови больных ДР возрастало (Рис. 2). И хотя математически подтверждённых отличий между двумя группами пациентов с ДР не обнаружено, следует отметить тенденцию к снижению концентрации этой молекулы при переходе препролиферативной ДР в пролиферативную форму заболевания.

Уровень зСБ8 повышался только у больных пролиферативной ДР (Рис. 2). Медиана концентрации бСББ была выше таковой не только в контроле, но и у больных препролиферативной формой заболевания.

В целом сходные закономерности изменения содержания в сыворотке крови отмечены и для зНЬА-1. Концентрация этой молекулы у больных пролиферативной ДР была выше, чем в контрольной группе и у больных препролиферативной ДР (Рис. 2).

Уровень растворимых комплексов вНЬА-ЬКЛЭв статистически значимо не различался между группами. Вместе с тем следует отметить тенденцию к снижению концентрации зНЬА-1+СБ8 у больных препролиферативной ДР и к повышению — у пациентов с пролиферативной формой болезни.

Содержание вИГА-БЯ в сыворотке крови больных препролиферативной и пролиферативной ДР превышало соответственно в два и полтора раза таковое в группе здоровых доноров (Рис. 2). Парное сравнение не выявило отличий по уровню вНЬЛ-БЯ между группами с разными формами заболевания.

Концентрация зСБ25 возрастала только у больных препролиферативной ДР, однако из-за высокой вариативности указанного показателя это повышение подтверждалось лишь с помощью критерия Манна-Уитни при сравнении с контролем (Рис. 2). При множественном сравнении различия между группами опровергались.

Уровень бСВ95 в сыворотке крови увеличивался в полтора раза только у больных препролиферативной ДР (Рис. 2). В пролиферативную фазу заболевания содержание этой молекулы не отличалось от контроля и было в математически подтверждённой степени ниже, чем при препролиферативной ДР.

Установлена прямая корреляционная связь между концентрациями бС025 и зС095.

Контроль „ ___Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР н

При множественном сравнении: р=0,004 (кр-й Краскела-Уолписа). В сравнении с кошролем: * - р=0,005 (тф-й Манна-Ушни) или р=0,004 (кр-й Данна), ** - рр=0,003 (кр-й Манна-Ушни) или р=0,049 (кр-й Данна)

Контроль

Препролиф. ДР

Пролиферат. ДР

Контроль

Препролиф. ДР

Пролиферат. ДР

240 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0

бШ-А-ОЯ "Т

**

При множественном сравнении: рЮ,041 (га>й Краскела- При множественном сравнении: р=0,021 (1ф-й Краскела-

Уоллиса). В сравнении с контролем: *-р=0,021 (1ф-й Уоллиса). В сравнении с контролем: *-р=0,010 (кр-й

Манна-Ушни) или р=0,132 (кр-й Данна). В сравнении с Манна-Ушни) или р=0,030 (кр-й Д анна). В сравнении с

больными препролиф. ДР: #-р=0,046 (кр-й Манна- больными препролиф. ДР: #-р=0,028 (кр-й Манна-

Ушни) или р=0,059 (кр-й Данна) Уиши) или р=0,085 (кр-й Данна)

1600 г

Контроль , „„ Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР к

Контроль _ ___Пролиферат. ДР Контроль Пролиферат. ДР

Препролиф. ДР Препролиф. ДР к ^

При множественном сравнении: р=0,001 (тф-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с кошролем: * —р=0,015 (кр-й Манна-Ушни) или р=0,078 (ю>й Данна), ** -р<0,001 (кр-й Манна-Ушни) или р=0,001 (кр-й Данна)

При множественном сравнении: р=0,083 (критерий При множественном сравнении: р=0,002 (то-й Краскела-Краскела-Уоллиса). В сравнении с кошролем: *-р=0,038 Уоллиса). В сравнении с кошролем: *-р=0,001 (кр-й (кригерийМанна-Уити)илир=0,111 (фигерий Данна) Манна-Ушни) шти рЮ,003 (кр-й Данна). В сравнении с

больными препролиф. ДР: #-р=0,003 (тф-й Манна-Уитни) или р=0,022 (кр-й Данна)

Рисунок 2. Концентрация растворимых форм мембранных молекул в сыворотке крови больных ДР

Данные представлены как Ме (25%—75%; Мт-Мах), ед/мл

Субиопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных ВМД

У больных с различными клиническими формами ВМД содержание лейкоцитов в периферичекой крови не отличалось от такового в контрольной группе и было в пределах общепринятых референсных значений нормы.

Также не выявлено математически подтврежденных различий числа лимфоцитов в крови между группами обследованных больных и здоровых доноров. Вместе с тем следует отметить тенденцию к возрастанию количества этих клеток в ряду, контрольная группа —► больные сухой ВМД —* пациенты с влажной ВМД.

Число СОЗ+-клеток (Т-лимфоцитов) при сухой ВМД не отличалось от такового у здоровых доноров (Рис. 3).

У больных с влажной формой заболевания количество этих клеток существенно превосходило соответствующие показатели в группе пациентов с сухой ВМД.

Это было в значительной степени связано с увеличением числа СБ8+-лимфоцитов у больных влажной ВМД (Рис. 3), тогда как межгрупповых различий по содержанию С04+-клеток при разных вариантах статистической обработки полученных данных не обнаружено.

Количество С016+-лимфоцитов (ЫК-клеток) у больных обеими клиническими формами ВМД примерно вдвое превосходило контрольные значения (Рис. 3).

Число В-лимфоцитов (С020+-клеток) между группами не отличалось. При этом следует отметить высокую индивидуальную вариативность содержания этих клеток у всех больных ВМД и, особенно, у больных с влажной формой заболевания.

Не выявлено однотипных изменений числа лимфоцитов, экспрессирующих различные молекулы, свидетельствующие об активации клетки. У больных сухой ВМД отмечены выраженные тенденции к снижению числа СВ25+-лимфоцитов и к повышению - СБ71+-клеток. Количество этих субпопуляций лимфоцитов у пациентов с влажной ВМД и содержание НЬА-011+-клеток при обоих вариантах заболевания не отличалось от показателей контрольной группы. Напротив, установлен линейный возрастающий тренд числа СВ95+-лимфоцитов (клеток с поздним активационным маркером, свидетельствующим об их готовности к апоптозу) при прогрессировании заболевания от сухой к влажной форме ВМД. И хотя парное сравнение не выявило различий между двумя группами больных, у пациентов сухой ВМД количество С095+-клеток статистически значимо превышало контроль в полтора раза, а у пациентов с влажной формой заболевания — в два раза (Рис. 3).

Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулу адгезии СБПЬ, у больных ВМД не отличалось от такового здоровых доноров. Однако при влажной ВМД отмечена выраженная тенденция к увеличению числа этих клеток.

17

Контроль

Сухая ВМД Влажная ВМД

Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

При множественном сравнении: р=0,045 (критерий Краскела-Уоллиса). В сравнении с бальными сухой ВМД: # - р=0,026 (критерий Манна-Утни) или рЮ,046 (критерий Данна)

При множественном сравнении: р=0,085 (критерий Краскела-Уоллиса). В сравнении с больными сухой ВМД: # - р=0,036 (критерий Манна-Уигаи) или рЮ,088 (критерий Данна)

При множественном сравнении: р=0,013 (и>-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * —р=0,001 (га>й Манна-Уитни) или р=0,038 Оф-й Данна), ** -р=0,001 (кр-й Манна-Уигаи) или р=0,012 (кр-й Дэнна)

Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

При множественном сравнении: р=0,025 Оф-й Краскела- При множественном сравнении: р=0,003 (кр-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: •й Уоллиса). В сравнении с когаролем: * -р=0,001 (кр-й

Манна-Уигаи) или р=0,074 Оф-й Данна), ** -р=0,011 Манна-Уитни) или рЮ,003 Оф-й Данна). В сравнении с (кр-й Манна-Уиши) или р=0,023 Оф-й Данна) больными сухой ВМД #-{И),013 Оф-й Манна-Уитни)

или р=0,074(кр-й Данна)

При множественном сравнении: р<0,001 (критерий Краскела-Уоллиса); в сравнении с кошролем: * -р<0,001 (критерий Манна-Уигаи) или р=0,001 (критерий Данна)

Рисунок 3. Иммунофенотип лимфоцитов периферической крови больных сухой и влажной ВМД

Данные представлены как Ме (25%-75%; Мт-Мах), клеток/мкл

При влажной форме заболевания медиана количества СБ38+-лимфоцитов в периферической крови в 1,7 раз превышала соответствующий показатель в группе больных сухой ВМД и в 2,7 раза — в контрольной группе (Рис. 3). Число СЭ54+-лимфоцитов значительно и примерно в равной степени (в 4,5 раза) повышалось при влажной и сухой формах ВМД в сравнении с контрольной группой (Рис. 3).

Концентрации ТЫ/ТЬ2/Тг1-цитокинов в сыворотке крови больных ВМД У больных ВМД, также как и у пациентов с ДР, не выявлено корреляционной связи между уровнями цитокинов, отражающих функциональную активность ТЫ-клеток (Табл. 4).

Концентрация ИЛ-2 в сыворотке крови больных сухой и влажной ВМД не отличалась от таковой в контрольной группе, тогда как медиана содержания ИФН-у у пациентов с сухой ВМД почти в полтора раза превосходила соответствующий показатель у здоровых доноров и у больных влажной формой заболевания.

Таблица 3. Уровень цитокинов (иг/мл) в сыворотке крови больных ВМД

Цитокин Контроль (здоровые добровольцы) Сухая ВМД Влажная ВМД Значимость различия при множественном сравнении (критерий Краскела-Уоллиса)

1 2 3

ИФН-у 3,93 (1,66-5,01; 0-6,65) 5,74 рц=0,039 (3,75-8,66; 0-9,64) 3,92 (2,40-5,42; 0-7,94) р=0,033

ИЛ-2 1,55 (1Д 1-2,49; 0-4,62) 1,29 (0,92—2,65; 0-5,08) 1,41 (0,90-1,99; 0-3,87)

ИЛ-4 3,21 (2,64-3,56;230-4,66) 3,84 (222-4,71; 0,78-5,54) 3,07 (1,71-425; 0,63-530)

ИЛ-10 2,19 (1,90-2,85; 1,70-7,14) 2,69 (1,70-3,69; 0,61-6,34) 2,63 (1,42-3,47; 0,93-5,47)

Примечание: Цифры в таблице представляют собой Ме (25%—75%; Мт—Мах). Курсивом редставлена значимость различия при парном сравнении с контролем (критерий Данна).

Уровень ТЪ2-продукта - ИЛ-4 - и Тг1-цитокина - ИЛ-10 - в сыворотке крови не зависел не только от клинической формы ВМД, но и от наличия/отсутствия этого заболевания.

Уровень растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в сыворотке крови больных ВМД

У больных ВМД установлены разнонаправленные изменения содержания растворимых форм межклеточных молекул адгезии в сыворотке крови.

Концентрация зСБ38 снижалась вдвое при обеих формах ВМД (Рис. 4).

Уровень бСБ50 у больных сухой и влажной ВМД не отличался от такового в группе здоровых доноров.

Содержание вС054 повышалось только у пациентов с влажной ВМД (Рис. 4).

Не выявлено четкой зависимости содержания нПЬА-Г и вНЬЛ-БК от наличия/отсутствия той или иной формы ВМД.

Концентрация вСВ95 при влажной ВМД превышала таковую при сухой форме заболевания при парном сравнении с использованием критерия Манна-Уитни. Однако множественное сравнение с помощью критерия Краскела-Уоллиса и парное сравнение с применением критерия Данна не подтверждали межгрупповые различия по указанному признаку.

Уровень яС025 у больных влажной ВМД превосходил вдвое содержание этой молекулы в сыворотке крови как пациентов с сухой формой заболевания, так и здоровых доноров (Рис. 4).

Контроль

Сухая ВМД Влажная ВМД

Контроль

Сухая ВМД Влажная ВМД

.Д анные представлены как Ме (25%-75%; Мт-^4ах), ед'мл кОТ>38: При множественном сравнении: р=0,001 (кр-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * -р=0,051 (кр-й Манна-Уигаи) или р=0,001 (кр-й Данна), ** -р<0,011 (кр-й Манна-Уигаи) или р=0,001 Оф-й Данна)

<0)54: При множественном сравнении: р=0,033 (кр-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * -рК),013 (кр-й Манна-Уиши) или р=0,059 (кр-й Данна). В сравнении с больными сухой ВМД: # -рН),049 (кр-й Манна-Уитни) или рЮ,110 Оф-й Данна)

вС1)25: При множественном сравнении: р<0,001 (кр-й Краскела-Уоллиса). В сравнении с кошралем: * - р<0,001 (кр-й Манна-Уитни) или р<0,001 Оф-й Д анна). В сравнении с больными сухой ВМД:#-рО,'001 (кр-й Манна-Уигаи) илир=0,002(1ф-йДанна) Контроль Сухая ВМД Влажная ВМД

Рисунок 4. Концентрация растворимых форм мембранных молекул в сыворотке крови больных ВМД

Таким образом, проведенное исследование уточняет характер изменений иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови, сывороточного уровня ключевых цитокинов, характеризующих функцию ТЫ-, ТЬ2- и Тг1-клеток, а также содержания растворимых форм мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток при различных клинических формах ДР и ВМД. Тщательная математическая

обработка полученных данных позволила выделить ряд системных иммунологических показателей, которые могут использоваться как дополнительные критерии прогрессирования ДР и ВМД, в частности оптимизировать раннюю диагностику пролиферативной ДР и влажной ВМД.

ВЫВОДЫ

1. В периферической крови больных сахарным диабетом (СД) 2 типа с препролиферативной диабетической ретинопатией (ДР) в сравнении с группой здоровых доноров отмечено увеличение числа лейкоцитов, лимфоцитов и их С016+-, СБ38+- и СБ54+-субпопуляций; дальнейшего роста содержания этих клеток при пролиферативной форме заболевания не наблюдалось. Восходящий тренд количества СБЗ+-, СВ4+-, СБ8+-, СБ11Ь+- и СБ71+-клеток, выявленный у больных препролиферативной ДР, при развитии пролиферативной формы заболевания сменял вектор на нисходящий. При пролиферативной ДР в сравнении как со здоровыми донорами, так и с больными препролиферативной ДР, снижалось число СБ25+-лимфоцитов и повышалось количество СБ95+- и НЬА-БЫ+-клеток.

2. Уровни ИФН-у и ИЛ-10 в сыворотке крови больных СД 2 типа с препролиферативной и пролиферативной формами ДР повышались примерно в равной степени в сравнении показателями здоровых доноров. Концентрация ИЛ-4 при пролиферативной ДР была ниже нормальных значений, однако не отличалась от таковой у пациентов с препролиферативной ДР. Содержание ИЛ-2 не изменялось при обеих формах заболевания.

3. Концентрации зСБ54 и вНЬД-БЯ в сыворотке крови возрастали при препролиферативной ДР и в несколько меньшей степени при пролиферативной форме заболевания. Уровень вСВ95 повышался только у больных препролиферативной ДР, а у пациентов с пролиферативной формой заболевания не отличался от нормальных значений. Содержание вНЬА-1 и вСБв увеличивалось только у больных пролиферативной ДР. Концентрации бС038, эСЭЗО и бНЬА-1+СБ8 при обеих формах ДР не отличались от показателей здоровых доноров.

4. Число лейкоцитов, лимфоцитов, В-клеток, а также С04+-, С011Ь+- и НЬА-БК+-лимфоцитов в крови больных разными формами возрастной макулярной дегенерацией (ВМД) не отличалось от такового у здоровых доноров. При сухой ВМД содержание С025+-клеток снижалось, а С071+-клеток - повышалось; при влажной форме эти показатели не отличались от нормальных значений. Число СБ16+-, СБ54+- и С095+-лимфоцитов увеличивалось примерно в равной степени при сухой и влажной ВМД. Количество СОЗ+-, СБ8+- и СБ38+-лимфоцитов повышалось только у пациентов с влажной ВМД.

5. Концентрации ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови больных сухой и влажной ВМД не отличались от таковых у здоровых доноров. Уровень ИФН-у повышался только при сухой форме заболевания.

6. При влажной ВМД содержание sCD25 и sCD54 в сыворотке крови было выше, чем у здоровых доноров и у больных сухой ВМД. Концентрация sCD38 снижалась примерно вдвое при обеих формах заболевания. Выявлена тенденция к повышению содержания sCD95 у пациентов с влажной ВМД в сравнении с таковым при сухой ВМД, однако в обеих группах больных этот показатель не отличался нормы. Уровни sCD50, sHLA-I и sHLA-DR не отражали наличия/отсутствия той или иной формы ВМД.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В качестве дополнительных критериев диагностики пролиферативной ДР у больных СД 2 типа рекомендуется использовать снижение в периферической крови числа С025+-лимфоцитов, повышение количества CD95+- и HLA-DR+-icieTOK, а также содержания sHLA-I и sCD8. Мониторинг этих показателей у больных препролиферативной ДР оптимизирует раннее выявление прогрессирования заболевания с развитием его пролиферативной формы.

2. Как дополнительные критерии ранней диагностики влажной ВМД рекомендуется использовать увеличение в периферической крови количества CD3+-, CD8+- и CD38+-лимфоцитов, а также содержания sCD25 и sCD54. Рост этих показателей у больных сухой ВМД может отражать прогрессирование заболевания с развитием его влажной формы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Евсегнеева И.В, Фотиади О.Г, Марных CA. Исследование динамики сывороточных форм мембранных антигенов при различных клинических формах ЦХРД // Сборник материалов 10-й Научно-практической конференции «Актуальные проблемы офтальмологии». - М., 2007. - С. 38-43.

2. Евсеегнеева И.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Караулов A.B. Клинико-патогенетическая роль мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток в развитии ЦХРД и диабетической ретинопатии // Материалы научно-практической конференции «Офтальмоиммунология: итоги и перспективы». — М., 2007. — С. 110113.

3. Караулов A.B., Евсегнеева И.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Новиков В.В. Растворимые формы дифференцировочных антигенов при диабетической ретинопатии и ЦХРД // Тезисы 5-й Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». — М., 2008. — С. 48-50.

22

4. Евсегнеева И.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Новиков В.В., Караулов А.В. Исследование динамики сывороточных форм мембранных антигенов при различных клинических формах ЦХРД // Сборник материалов Юбилейной конференции КБ № 85 ФМБА России «60 лет в науке и практике». — М., 2008. - С. 316-321.

5. Евсегнеева И.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Новиков В.В., Караулов

A.В. Мембранные и растворимые формы дифференцировочных антигенов у больных сахарным диабетом 2 типа при развитии диабетической ретинопатии // Сборник материалов Юбилейной конференции КБ № 85 ФМБА России «60 лет в науке и практике». - М., 2008. - С. 307-315.

6. Новиков В.В., Бабаев А.А., Кравченко Г.А., Манакова Э.А., Пашина JI.A, Марных С.А., Караулов А.В. Растворимые ассоциаты антигенов адгезии CD54 и CD18 в сыворотке крови человека // Иммунология. - 2008. - № 4. — С. 220-222.

7. Караулов А.В., Евсегнеева И.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Новиков

B.В. Сравнительное исследование содержания растворимых форм дифференцировочных антигенов у больных диабетической ретинопатией и центральной хориоретинальной дистрофией // Аллергология и иммунология. -2008. - Т. 9. - № 4. - С. 456-457.

8. Караулов А.В., Марных С.А., Фотиади О.Г., Евсегнеева И.В. Растворимые формы дифференцировочных антигенов у больных центральной хориоретинальной дистрофией // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10. -№3.-С. 397-398.

9. Караулов А.В., Фотиади О.Г., Марных С.А., Евсегнеева И.В. Изучение содержания мембранных и растворимых форм дифференцировочных антигенов и молекул главного комплекса гистосовместимости у больных центральной хориоретинальной дистрофии // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. — Т. 54. -№ S3-4. - С.130-131.

10. Караулов А.В., Калюжин О.В., Евсегнеева И.В., Марных С.А., Михайлова И.Н., Артемьева К.А., Быковская С.Ю., Барышников А.Ю., Насонов E.JI. Эволюция Т-клеточных парадигм при иммунозависимых заболеваниях // Аллергология и иммунология. — 2011. -Т. 12. -№ 2. -С. 196-198.

11. Karaulov A., Babaev A., Kravchenko G., Marnych S., Evsegneeva I., Novikov V. Soluble multiprotein complexes of adhésion molecules in blood sérum // World immune régulation meeting — VI. - Davos, 2012. - P. 212.

12. Марных С. A. Концентрации цитокинов в сыворотке больных различными формами диабетической ретинопатии и возрастной макулярной дегенерации // Материалы Всероссийской научно-практической конференции

«Иммунопатология и иммунореабилитация: от теории к практике» / Под ред.

B.А.Алешкина. - Пенза. -2015. - С. 58-59.

13. Марных С.А., Евеегнеева И.В. Изменения содержания цитокинов в сыворотке больных диабетической ретинопатией и возрастной макулярной дегенерацией // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2015. - № 2. -

C. 77-83.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВМД - возрастная макулярная дегенерация

ДР — диабетическая ретинопатия

ИЛ — интерлейкин

ИФН — интерферон

МКА — моноклональные антитела

МПК — мононуклеары периферической крови

СД — сахарный диабет

ФНО — фактор некроза опухоли

ЦТЛ — цитотоксические Т-лимфоциты

HbAlc — гликированный гемоглобин

ICAM-1 - межклеточная молекула адгезии 1

NK — естественные киллеры

PBS — фосфатно-солевой буфер

Th — Т-хелперы

Tri - регуляторные Т-клетки, продуцирующие интрлейкин-10

Treg — регуляторные Т-клетки

VCAM-1 — молекула адгезии сосудистых клеток 1

VEGF — фактор роста эндотелия сосудов

Подписано в печать 21.10.2015 г. Формат А4/2 Бумага офсетная. Печать цифровая. Тираж 101 экз. Заказ № 13380-10-15 Типография ООО "Ай-клуб" (Печатный салон МДМ) 119146, г. Москва, Комсомольский пр-т, д.28 Тел. 8(495)782-88-39