Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Иммунологическая реактивность у больных в структуре алкогольного цикла

На правах рукописи

Шаманская Марина Геннадьевна

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ У БОЛЬНЫХ В СТРУКТУРЕ АЛКОГОЛЬНОГО ЦИКЛА

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЧИТА - 2009

003488796

Работа выполнена в ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Витковский Юрнй Антонович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Корытов Леонид Иннокентьевич

кандидат медицинских наук Березкин Александр Александрович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится " 2009 г. в "" " ча-

сов на заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия (672090, г. Чита, ул. Горького, 39-А).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия (672090, г. Чита, ул. Горького, 39-А).

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.118.Орл . д.м.н., профессор íl IV Q/J^^

0

Гаймоленко И.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Отечественная статистика свидетельствует о возрастающем увеличении потребления алкоголя и высокую летальность от различных осложнений, связанных с алкогольной зависимостью. Алкоголизм представляет собой актуальную тему не только в социальном, но и биологическом и медицинском аспектах. Неуклонный рост инвалидизации пациентов вследствие хронической интоксикации алкоголем, числа летальных исходов являются неблагоприятными показателями социально-экономического развития страны, требующих безотлагательных мер не только по профилактике, но и лечению алкогольной зависимости.

Важное место в патогенезе алкоголизма занимают иммунные механизмы. Известно, что при алкогольной зависимости изменяется клеточный состав и функции иммунокомпетентных клеток, продукция иммуноглобулинов и медиаторов иммунного ответа (Гамалея Н.Б. и соавт., 2000,2002; Koivisto Н, et al., 2008; Lau A. el al, 2009; Roychowdhury S. et al., 2009; Stadlbaucr V., et al, 2008). Среди наиболее частых причин заболеваемости и смертности у больных алкоголизмом являются тяжелые инфекции как следствие нарушений функций иммунной защиты (Aguilera V. et al, 2009; Lucey M.R., Weinrieb R.M., 2009). Нарушения в иммунитете у больных приводит к увеличению частоты возникновения опухолей, развитию аутоиммунных заболеваний, нарушению регене-ращга тканей (Гамалея Н.Б., Наумова Т. А., 2002; Nath В., Szabo G., 2009). Алко-голыпле поражения органов, в частности, печени, обусловлены развитием аутоиммунных процессов, запускаемых при употреблении алкоголя (Kurien В.Т., ScofieldR.H., 2008; Jeong W.I., Gao В., 2008).

Однако ЦНС является главной мишенью для алкоголя и острая или хроническая интоксикация вызывает структурные и функциональные нарушения мозга и приводит к органическим изменениям (Дареиский И. Д., 2008). Глиаль-ные клетки и их рецепторные комплексы TLR4/IL-1RI играют ведущую роль в иммунном ответе в ЦНС и развитии повреждений мозга и нейродегенерации. По современным представлениям уже низкие концентрации алкоголя (ЮшМ) вызывают развитие воспалительного процесса в мозе и глиальные клетки повышают продукцию цитокинов и медиаторов воспаления iNOS, NO, СОХ-2, активируют сигнальные пути IKK, МАРК и факторы чранскрипции (NF-кВ, АР-1), вовлекаемых в механизмы повреждения ЦНС (Blanco A.M., Guerri С., 2007; Davis R.L. et al., 2002; Lee H. et al, 2004).

Этанол приводит к дисбалансу про- и противовоспалительных цитокинов, вызывает торможение синтеза проопиомеланокортина в гипоталамусе и одновременно супрессию NK-клеток цитокинов (Chen С.Р. et al, 2006). Эффекты алкогольной интоксикации приобретают системный характер и сказываются

3

\

на всех защитных механизмах, в том числе и гемостазе. Общеизвестно, что иммунитет, гемостаз и неспецифическая резистентность организма выступают как единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты (Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Цыбиков H.H., 1999-2008). Изменения, возникающие в одном из функциональных звеньев в этой системе, обязательно приводят к сдвигам в других.

В настоящем исследовании мы попытались дать оценку иммунологических показателей и функций тромбоцитов у больных алкогольной зависимостью в различные фазы алкогольного цикла. Изучение механизмов иммунологического реагирования применительно к фазности алкогольного цикла является важным, так как позволит расширить представления о патогенезе хронической алкогольной интоксикации и определить возможные предикторы тяжести больных алкоголизмом, маркеры предстоящего рецидива.

Целью настоящего исследования явилось выяснить характер иммунологического реагирования, включающего динамику иммунокомпетентных клеток, содержание иммуноглобулинов, цитокинов, ростовых факторов, функцию тромбоцитов в различные фазы алкогольного цикла.

Задачи исследования:

1. Исследовать содержание субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, концентрацию IgG, поклассов IgGl-IgG4, IgM и IgE, TNFa, RalL-1, IL-4 в крови и ликворе у больных с 2-й, 2-3-ей и 3-ей стадией алкогольной зависимости в различные фазы алкогольного цикла.

2. Изучить лимфоцитарно тромбоцитарнуто адгезию у больных в различные фазы алкогольного цикла и оценить влияние на нее применяемых бензоди-азспинов, ß-адреноблокаторов и нейролептиков.

3. Определить содержание цшгаарного нейротрофического фактора (CNTF) и аутоантител к нему в крови и ликворе, а также суммарных аутоантител к ганглиозидам GM2, GDla, GDlb, GQlb в крови у больных алкоголизмом с разными клиническими проявлениями.

4. Исследовать агрегационную функцию тромбоцитов у больных алкоголизмом и выяснить действие препаратов, блокирующих D2-дофаминовые и ß-адренорецепторы - галоперидола и пропранолола, а также агониста бен-зодиазепиновых рецепторов - диазепама на агрегацию кровяных пластинок.

5. Провести корреляционный анализ между показателями иммунологического реагирования у больных алкоголизмом в зависимости от клинических проявлений.

Научная новизна. Впервые установлено, что у больных с алкогольной зависимостью в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкого-

дю и гиперсимпатикотошга увеличивается ЛТА и агрегация тромбоцитов. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием бензо-диазепинов, Р-адреноблокаторов, нейролептиков снижает лимфоцитарно-тром-боцитарные взаимодействия.

Впервые выявлено, что в крови и ликворе пациентов с алкоголизмом повышается концентрация Ка1Ь-1,1Ь-4 и ТИРа в зависимости от давности органического процесса. Впервые показано, что у больных алкоголизмом с паро-ксизмалыгыми судорожными расстройствами и типичном делирии в структуре синдрома отмены алкоголя содержание ОПТ в крови и его интратекаль-ная продукция повышается, а при тяжелых психозах - снижается. Содержание аутоантител к ОЯТР в крови и ликворе при алкоголизме зависит от остроты патологического процесса и давности органического процесса. У больных с алкоголизмом повышается концентрация в крови аутоантител к гапглиозидам асиало-ОМ и ОМ-1, которая коррелирует с тяжестью и частотой судорожного приступа. Титр аутоантител к вМ2, 001 а, 01) 1Ь, 0С>1Ь, увеличивается у больных с впервые возникшей острой психоорганической симптоматикой, а с давним атрофическим процессом - уменьшается.

Впервые обнаружено, что применение у больных алкоголизмом галопе-ридола, пропранолола, диазепама уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы. В работе получены новые сведения о патогенезе алкогольной зависимости, включающие лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия, продукцию цитокинов и ростовых факторов, выработку аутоантител к СМТК и гапглиозидам. Описаны эффекты нейротропных препаратов - пропранолола, галоперидола, диазепама на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию и агрегацию тромбоцитов у больных алкоголизмом.

Результаты исследования могут быть полезны для прогнозирования клинического течения алкогольной зависимости. Так, показатель ЛТА может выступать в качестве маркера предрецидивной фазы и отражать эффект медикаментозной терапии. Прогностически неблагоприятными иммунологическими показателями у больных алкоголизмом является низкая продукция протекторных цитокинов Яа1Ь-1, СМТР. В качестве показателей степени активности иммунопатологического процесса в Ц11С могут выступать уровни СШТ- аАТ и аАТ к гапглиозидам 0М1, СМ2,001а, 001Ь, 0(31Ь.

Внедрение результатов работы. Материалы исследования внедрены в учебный процесс ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия.

Полученные результаты используются в лечебно-диагностической работе

Читинского краевого наркологического диспансера, отделения неврологии Краевой клинической больницы (г. Чита), токсикологического отделения Читинской городской клинической больницы № 1.

Апробация диссертации. Основные результаты работы доложены на 1 Съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005); Международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы биологической, клинической и профилактической наркологии" (Москва, 2007); Международном симпозиуме по нсйроиммунологии (Санкт-Петербург, 2007); Конгрессе "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге", 2006); XX Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007); заседании Читинского отделения Физиологического общества им. И.П. Павлова (Чита, 2009).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 197 страницах машинописного текста и состоит из введения, главы обзора литературы, материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения, выводов и указателя литературы, включающего 281 работу, из них -148 отечественных и 133 зарубежных авторов, иллюстрирована 35 таблицами и 4 рисунками.

Положения, выносимые на защиту:

1. Состояние иммунитета у больных алкоголизмом характеризуется снижением относительного количества лимфоцитов с маркерами CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+, увеличением числа CD20+ клеток, фазностью продукции RalL-1, IL-4, TNFa повышением продукции IgM, IgG, поклассов IgG 1 -IgG4, IgE. У них в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкоголю и гиперсимпатикотонии увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием галоперидола, пропранолола и диазепама снижает лимфоцитарно-тром-боцитарную адгезию.

2. В крови пациентов с алкоголизмом повышается концентрация RalL-1, IL-4 и TNFa в зависимости от давности органического процесса. Хроническая интоксикация этанолом сопровождается нарушением интратекального го-меостаза выражающегося в локальном повышении продукции RaIL-1, TNFa, IL-4 вследствие активации глиальных элементов а также нейронов. Характер интратекальной продукциии RalL-1, TNF-a, IL-4 и их соотношение предопределяет тяжесть психопатологических расстройств, участвуя в модуляции апоптоза и нейрогенеза. Молекулы RaIL-1 при повреждении ЦНС выполняют нейропротективную роль и участвуют в регуляции нейрогенеза. Уровень CNTF и антител к ним в крови и ликворе отражает тяжесть и остроту повреждений в ЦНС у больных алкоголизмом. Титр аутоантител

к ганглиозидам асиало-GM и GM-1, GM2, GD1 a, GD1 b, GQ1 b в крови связаны с тяжестью и частотой судорожного приступа, психоорганической симптоматикой.

3. При алкогольной зависимости у больных в период абстиненции повышается ЛДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, сильно коррелирующая с уровнем симпатикотонии. Применение у больных алкоголизмом галопери-дола. пропраиолола, диазепама уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В работе с людьми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской Декларацией Всемирной медицинской ассоциации 2000 (World Médical Association Déclaration of Helsinki 1964).

Клиническая характеристика обследуемых групп пациентов. Обследовано 100 больных с алкогольной зависимостью 2, 2-3, и 3 стадии. Возраст обследованных больных составил от 23 до 58 лет. Алкогольные изменения личности выявлялись у 30 чел. Социальные последствия алкоголизма (потеря работы, конфликты в семье, развод и т.д.) отмечались в 22 случаях. По основным социально-демографическим показателям группы существенно не различались.

Наблюдаемые больные разделены на следующие группы:

1 - пациенты с диагнозом алкогольной зависимости 2 стадии, в возрасте от 23 до 40 лет - 40 чел.

2 - больные с "переходной" - 2-3 стадии алкогольной зависимости - 40 чел.

3 - больные с конечной 3 стадией алкогольной зависимости - 20 чел.

Обследование проводилось в динамике алкогольного цикла: АО - алкогольное опьянение в рамках абузуса, АО/АС - алкогольная абстиненция на фоне опянення, АА - алкогольная абстиненция вне опьянения (гиперергическая абстиненция), ГА - гииоергическая абстиненция, ПИ - ранняя постинтоксикационная фаза, СРм - становление ремиссии, ПРм - плато ремиссии, ПРц - пред-рецидивное состояние. Оценку тяжести состояния у пациентов мы проводили в соответствии с МКБ 10, приказа Министра здравоохранения РФ № 140 -1999 г.), а также с помощью адаптированных тест систем - модифицированных шкал. Для клинической оценки состояния больных использовались опросники, психометрическая адаптированная шкала с объективной и субъективной оценкой симптомов при абстиненции и постабстинентном состоянии (шкала GIWA-A, шкала симптомов адренергии, гипоадренерпга).

В исследования не включались больные с выраженной соматической и

неврологической патологией неалкогольного генеза, сочетанием алкогольной зависимости с зависимостью от других ПАВ, а также принимавшие участие в каких-либо клинических исследованиях в течение предшествующих 3 мес.

В качестве контроля использовали кровь 20 здоровых лиц мужского пола в возрасте от 19 до 40 лет.

Объектами изучения служили цельная кровь, плазма, сыворотка, форменные элементы крови здоровых и больных людей, спинномозговая жидкость.

Исследование субпопуляций лимфоцитов осуществляли методом иммуногистохимии с использованием моноклональпых антител ТОО "Мед-БиоСпектр" (Москва).

Определение концентрации иммуноглобулинов классов M,G, Е, иоклас-сов IgGl-IgG4, цитокинов RA1L-1, IL-4, и TNFa проводили иммунофермент-ным методом с использованием тест - наборов ООО "Вектор-Бест" (Новосибирск).

Определение концентрации цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и антител к нему выполняли методом твердофазного ИФА с использованием тест-систем фирмы "R&D Systems Quantikine CNTF" (Switzerland).

Определение титра суммарных антител к ганглиозидам GM1, GM1, GM2, GDla, GDlb, и GQlb (IgG и IgM-аутоантител) осуществляли методом ИФА с помощью набора для ИФА "BUHLMANN GangiioCombi EIA" (Switzerland).

Оценка лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (ЛТА). Определение показателя лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, относящегося к функциональным тестам оценки иммуннокомпетентных клеток, проводили по методу, предложенному Ю.А. Витковским и соавт. (1999). Подсчитывали число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов на 100 клеток. Степень адгезии определяли как число кровяных пластинок, адгезированных на поверхности одного лимфоцита.

Исследование агрегации тромбоцитов. Агрегация тромбоцитов изучалась с помощью анализатора "Биола" (Москва)турбидиметрическим методом по G. Вот (1962). В качестве индукторов использовали адреналин, АДФ (10 мкг/мл), коллаген.

Статистическая обработка результатов исследований проведена с использованием: непарамстрических критериев - W- Вилкоксон, критерия Фридмана (для связанных независимых событий), Kruskal-Wallis (для несвязанных независимых событий), корреляционного анализа - Pearson correlation. Для создания факторной модели привлечены показатели, характеризующие как клинические проявления при синдроме отмены у больных с алкогольной зависимостью, так и структурно-функциональное состояние плазматических мембран, иммунологические показатели (метод VARIM АХ вращения). 8

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 1. Состояние иммунитета у больных с алкогольной зависимостью

Установлено, что в период острых абстинентных расстройств происходит значительное уменьшение содержания клеток всех популяций лимфоцитов. Так, относительное число Т-клеток, несущих поверхностные маркеры СОЗ+, у больных 2 стадии со средней степенью тяжести синдрома отмены снижается до 43,9+ 0,6 %, 2-3 стадии - 42,7±0,36%, 3 стадии - 43+0,45%, в то время как у здоровых этот показатель составлял (66,2-Й,4%) (р<0,001). Относительное количество Т-хелперов с детерминантами С 04+ у пациентов 2-й стадией падает до 29,2+0,32%, 2-3 стадией - 27,5±0,21%, 3-й стадии - 27+0,37% против 38,6±1,1% у здоровых (р<0,01). Содержание лимфоцитов с маркерами СБ8+ у лиц со 2-й стадией болезни уменьшается до 20,7-1-0,26%, 2-3 стадией - до 19,3±0,18%, 3-й стадией-до 19,0±0,22%, тогда как у здоровых оно составляло 29,0+1,4% (р<0,01). Следует отметить, что процент С03+, С041, СБ8+ у пациентов продолжал снижаться на протяжении ностабстинентного периода, далее в период становления и плато ремиссии отмечалось увеличение этих показателей, однако не достигавших значений нормы.

Выявлено, что у больных с алкогольной зависимостью увеличивается относительное содержание лимфоцитов с поверхностными маркерами СО 16+ и С020+. Так, в период острых абстинентных расстройств у пациентов со 2-й стадией болезни количество естественных киллерных клеток с детерминантами С016+ повышалось до 18,4±0,26%, со 2-3 стадией - до 18,6+0,22%, с 3-ей стадией - до 18+0,33%) против 14+0,5%о у здоровых лиц (р<0,001). В постабстинентный период во всех наблюдаемых группах этот показатель поднимался и достигал наивысшего уровня у больных с 3 стадией алкогольной зависимости. Однако к периоду становления ремиссии относительное число лимфоцитов СБ 16+ снижалось, не достигая контрольных значений (р<0,01).

Обнаружено, что у больных в острый период абстинентных расстройств содержание В-лимфоцитов с детерминантами С020+ значительно увеличивалось и во 2-й стадии заболевания составило 18,9±0,46%о. В период постабстинентных расстройств количество этих клеток продолжалось увеличиваться, достигая максимальных значений у больных с 3 стадией алкогольной зависимости. Далее к периоду становления ремиссии относительное количество С020+ снижалось и при развитии плато не отличалось от аналогичного показателя здоровых лиц.

У пациентов всех 3 групп отмечалась гиперпродукция 1§0, которая достигала максимума в периоде становления ремиссии, особенно у пациентов со 2-3 и 3 стадией болезни. При этом концентрация подклассов 1а0(01,02,03,04) увеличивалась у всех больных. Так, содержание 1»01 превосходило показатель

здоровых в 2,5-3 раза (р<0,01).

Уровень IgM в 2-5 раз превышал показатель у здоровых. Максимальная концентрация IgM наблюдалась в период острой абстиненции, с последующим снижением в период становления ремиссии, не достигая при этом нормальных значений.

На протяжении постабстинентного периода и периода становления ремиссии у больных всех 3 групп повышалось содержание Ig Е, которое снижалось в фазу плато ремиссии.

2. Содержание цитокинов в сыворотке крови у пациентов с алкогольной зависимостью

Установлено, что у больных в разные фазы алкогольного цикла происходит различная продукция RAIL-1. Так уже в течение 2 и 3 фаз у больных со 2-й стадией зависимости содержание RAIL-1 увеличивается до 1159,4±217,4 пг/мл, 2-3-й стадией - до 1241,5±118,01 пг/мл, 3 стадией - до 882,6.1] 62,14 пг/мл против 76±5,1 пг/мл - у здоровых лиц (р<0,01).

. После появления гипоэргических компонентов острого периода синдрома отмены концентрации рецепторного антагониста ИЛ-1 существенно снижение только у больных со 2-й стадией (р<0,05), тогда как у пациентов с более тяжелым течением заболевания он находился на прежнем уровне (р>0,05).

В постабстинентный (постинтоксикационный) период наблюдений у представителей всех клинических групп уровень RAIL-1 падал и достигал наименьших значений к периоду становления ремиссии. Следует отметить, что только у больных со 2-й стадией заболевания содержание RAIL-1 наиболее близко подходило к значениям здоровых людей при развитии плато ремиссии (р>0,05). В то же время у пациентов со 2-3-й и 3-й стадиями недуга оно сохранялось на высоком уровне (р<0,01). Однако у лиц с 3-й стадией болезни в предре-цидивный период концентрация RAIL-1 не отличалась от значений здоровых людей.

Похожий характер содержания RAIL-1 отмечен у больных и в ликворе.

Уже в период 3 фазы концентрация ИЛ-4 у всех больных повышалась пропорционально тяжести болезни и длительности абузуса по сравнению со здоровыми лицами. Так, в сыворотке у больных со 2-й стадией содержание ИЛ-4 в 2 раза увеличивалось по сравнению с контролем (р<0,01), у пациентов со 2-3-й стадией - в 3 раза, 3-й стадией - в 4 раза (р<0,01). В течение постинтоксикационного периода уровень ИЛ-4 оставался высоким. В периоде становления ремиссии у больных со 2-й стадией полностью приходил к значениям здоровых людей, а у пациентов со 2-Зй и 3-й стадиями в 2 раза превышал контрольные значения (р<0,01).

Концентрация ТЫРа у всех пациентов находилась на достаточно высоком уровне, чем у здоровых людей и во всех группах отмечалось его увеличение на протяжении всех фаз алкогольного цикла.

3. Содержание в крови СЭТТ, аутоантител к С1ЧТГ и суммарных антител к ганглиозидам

Мы не обнаружили значимых отличий содержания €N1"? между группами здоровых и больных алкогольной зависимостью в первые сутки наблюдения. Исключение составили только пациенты с 2-3 стадией заболевания после тяжелого алкогольного делирия, у которых концентрация СШТ находилась на низком уровне - 0,28±0,09 пкг/мл, в то время как у здоровых она определялась выше - 4,4±0,78 пкг/мл (р<0,05).

У больных без тяжелых и затяжных психозов на 14-е сутки (постабстинентный период) содержание СЫ'ГР увеличилось в 2-4 раза. Так, у пациентов с проявлениями судорожного синдрома концентрация фактора повысилась с 6,5± 1,12 пкг/мл до 21,9±4,31 пкг/мл (р<0,01), после типичного алкогольного делирия - с 3,8±0,67 пкг/мл до 11,4±2,62 пкг/мл (р<0,01), с клиникой нейродегене-ративных расстройств - с 2,1 ±0,82 пкг/мл до 8,4 ± 2,11 пкг/мл (р<0,05).

Выявлено, что у всех больных с алкогольной зависимостью увеличено содержание аутоантител (аАТ) к СЫТР классов и 1§М. Наиболее высокие значения их концентраций обнаружено у пациентов с судорожным компонентом и типичным алкогольным делирием. Следует отметить, что динамика уровня аАТ отличается для классов и 1§М.

Количество аАТ в составе ígG к 14 дню наблюдения заметно возрастало. Так, у лиц, страдающих алкогольной зависимостью с судорожным компонентом концентрация аАТ-1§0 в эти сроки повысилась с 21 ,б±4,10 нг/мл до 37,5±6,09 иг/мл (р<0,05). Содержание аАТ к СКТГ в составе наоборот снижалось. Однако значимое их уменьшение отмечено только у пациентов с судорожным синдромом с 2,6±0,3 8 нг/мл до 1,6±0,22 нг/мл (р<0,05) и типичным алкогольным делирием 1,9±0,42 нг/мл до 0,9±0,12 нг/мл (р<0,05).

Установлено, что у больных алкоголизмом с судорожными расстройствами при синдроме отмены (группа 2) концентрация в крови суммарных аутоантител (аАТ) к ганглиозиду асиало-СМ и аАТ к СМ1 достигала наивысших значений (39,9±2,68 % и 44,48±8,88%) в сравнении с контролем (17,22±0,89% и 7,06±0,46% соответственно (р<0,01)). У пациентов 3-ей группы, у которых впервые развилась острая психоорганическая симптоматика алкогольного генеза, эти показатели находились на уровне для аАТ-асиало-ОМ - 34,15±5,45%, для СМ1 - 32,07±2,55% (р<0,01). У больных с давним органическим процессом (4 группа) содержание аАТ против асиало-СМ составило 24,12±1,62%, ОМ1-

13,03±0,53% (р<0,01).

Нами замечено, что у больных с пароксизмальным типом реагирования ЦНС (группа 2) отмечался повышенное содержание аутоантител к ганлиози-ду аАТ-ОМ1. Для подтверждения этого мы провели корреляционный анализ между выраженностью судорожных пароскизмальных расстройств и концентрацией суммарных аутоантител против асиало-ОМ и ОМ1. При этом отмечена сильная корреляционная зависимость между тяжестью судорожных расстройств и уровнем продукции аАТ к ОМ1(г = 0,91 при р<0,001), между тяжестью судорожных расстройств и уровнем продукции аАТ к асиало-ОМ 1 (г=0,85 при р<0,001). Таким образом, продукция аАТ к асиало-ОМ и СМ1сопряжена с выраженностью судорожных пароксизмальных расстройств. Мы считаем, что уровень аАТ отражает степень нейродеструктивных процессов возникающих на фоне судорожного приступа. Феномен острого повреждения мозга при алкогольном абстинентном синдроме развивается, как правило, у лиц с судорожным синдромом.

Установлено, что максимальная концентрация суммарных аутоантител в крови больных к минорным подтипам ганглиозидов - ОМ2, 001а, 001Ь, ОГНЬ наблюдалась у больных с впервые возникшей острой психоорганической симптоматикой (3 группа) (р<0,01) в сравнении с остальными клиническими группами. Менее выражена, в сравнении с предыдущей группой, продукция аАТ выявлялась у больных с пароксизмалыгыми судорожными расстройствами: к СМ2-15Д±1,50°/о,кОВ1а-11,32±0,83%,кСБ1Ь-11,0±1,33%,Сд1Ь-6,57±0,43% (р<0,01). Минимальное, в сравнении с предыдущими клиническими группами, содержание аАТ к ОМ2, 001а, 001Ь, 001Ь обнаружено у больных с давним атрофическим процессом.

Полученные результаты исследований убедительно свидетельствуют о развитии аутоиммунного механизма нейродегенерации у больных алкоголизмом, связанного с выработкой антител к ганглиозидам.

В результате полученных данных установлено, что у больных с алкоголизмом повышается концентрация в крови аутоантител к ганглиозидам асиало-ОМ и ОМ-1, достигающая максимальных значений у лиц с впервые возникшими судорожными пароксизмальиыми расстройствами алкогольного ге-неза. Продукция аАТ к ОМ-1 и асиало-ОМ коррелирует с тяжестью и частотой судорожного приступа.

Продукция аАТ к 0М2,001а, 001Ь,001Ьп большей степени выражена у больных с впервые возникшей острой психооргаиической симптоматикой по сравненшо с пациентами с пароксизмальиыми судорожными расстройствами. 11аименыпий уровень аАТ к 0М2,001а, 001Ъ, 001Ь выявляется у больных с давним атрофическим процессом.

4. Исследования цереброспинальной жидкости у пациентов с алкогольной зависимостью

Отмечено, что ннтратекальная продукция КА1Ь-1 у больных во 2 стадии была различной. Следует отметить, что у больных с психозами, судорожным пароксизмальным реагированием концентрация была максимальной. У больных 3 стадии, а также при более злокачественном течении, неблагоприятном исходе продукция была менее выражена. При этом минимальная продукция КЛ1Ь-1 при синдроме отмены наблюдалась у больных с органически измененной почвой алкогольного генеза.

Характерно, что продукция 1Ь-4 повышена почти в 10 раз у больных 2 и 3 стадии в сравнении с контрольной группой (р<0,01), что отражает степень активации гуморального звена иммунитета.

Обнаружено, что содержание ЮТ а в ликворе повышалось в обеих группах (р<0,01). У больных во 2 стадии продукция ТЫ Ра превосходила значения в 3 стадии (р<0,05).

Мы проследили концентрацию цилиарного нейротрофического фактора в спишюмозговой жидкости больных в зависимости от наличия признаков органического повреждения ЦНС (табл. 1,2). При этом отмечено, что у пациентов с выраженными признаками оргатиеской деструкции ЦНС ннтратекальная продукция СЖР резко снижена и значимо отличалась от контроля (р<0,01). У пациентов без признаков органической деструкции уровень СЫТР в ликворе находился заметно выше в сравнении с контролем (р<0,01).

Таблица 1.

Содержание CNTF в ликворе здоровых лиц и больных с алкогольной зависимостью (пг/мл) (М±т).

Исследуемые группы Концентрация CNTF (пг/мл)

Контроль - здоровые лица 0,82±0,02

Больные алкоголизмом:

о судорожным компонентом 4,91±1,08 р<0,01

с типичным алкогольным делирием ЗД±0,94 р<0,01 р <0,01

с тяжелым делирием 0,10±0,05 р<0,01 р,<0,01

Примечание: р- значимость различий с контролем (Manna-Withni); р^ значимость различий между больными (Manna-Withni).

Таблица 2.

Содержание CNTF в ликворе здоровых и больных алкоголизмом в зависимости от органической отягощенности (пг/мл) (М±т).

Исследуемые группы Концентрация CNTF (пг/мл)

Контроль - здоровые лица 0,82±0,02

Больные с алкоголизмом:

без признаков органической деструкции 3,59±0,82 р<0,01

с органически измененной почвой алкогольного генеза 0,12+0,05 р<0,01 р,<0,01

Примечание: р- значимость различий с контролем (Manna-Withni); р,- значимость различий между больными (Manna-Withni).

5. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных с алкогольной зависимостью

При исследовашш пациентов 2 стадии с алкогольной зависимостью, выявились разнообразные показатели ЛТА (табл.3).

Установлено, что у больных, находящихся в фазе алкогольного опьянения, показатель ЛТА снижался относительно здоровых лиц до 8,3±0,3 (р<0,01), степень ЛТА также уменьшалась до 2,1 ± 0,1 (р<0,01) (табл. 3). В период абстинентных расстройств вне опьянения показатель возрастал в 2-3 раза в сравнении с предыдущими фазами. С начала периода гипоергической абстиненции показатель ЛТА снижался на протяжении последующих фаз и приближался к нормальным значениям в период плато ремиссии. В фазе предрецидива отмечалось очередное повышение значений ЛТА 20,0±1,1 (р<0,01), степени ЛТА 3,8±0,06(р<0,01).

У больных со 2 стадией алкоголизма, находящихся в состоянии алкогольного опьянения, значения ЛТА в сравнении со здоровыми лицами снижались до 7,0+0,5% (р<0,01) (табл. 4). После лишения алкоголя у больных со 2 стадией в период абстинентных расстройств ЛТА увеличивалась. При неосложненном варианте абстинентного синдрома показатель ЛТА составил 27,0± 1,4% (р<0,01), степень ЛТА - 3,9+0,07% (р<0,05), при типичном алкогольном делирии уровень ЛТА также увеличивался - 31,0± 1,4% (р<0,01), степень ЛТА - 4,7+0,04% (р<0,01). При пароксизмальных судорожных расстройствах в структуре синдрома о гме-11ы значения ЛТА были максимальны -38+1,8% (р<0,01), степень ЛТА -5,1 ±0,08% (р<0,01). Следует заметить, что у больных с серией развернутых судорожных пароксизмов, а также при эпистатусе в первые часы отмечался рост ЛТА в ряде случаев до 54%. У пациентов с 3 стадией заболевания на фоне синдрома

Таблица 3.

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезии у больных алкоголизмом 2 стадии в различные фазы (М±т)

Исследуемые группы Показатель ЛТА, % Степень ЛТЛ

Здоровые люди (п=20) 14 ± 1 3,2 ± 0,06

Больные алкогольной зависимостью 2 стадии, (в динамике фаз алкогольного цикла):

1-алкогольное опьянение 8,3 ± 0,3 р<0,01 2,1 ± 0,1 р < 0,01

2-абстипепция на фоне опьянения 22,1 ± 0,8 р<0,01 3,23 ± 0,1 р > 0,05

3-абстиненция вне опьянения гиперергическая 32,3 ± 1,5 р<0,01 4,56 ± 0,08 р < 0,01

4-абст1шепция вне опьянения гипоергическая 24,3 ± 0,8 р<0,01 2,98 + 0,1 р > 0,05

5-постинтоксикацнонный период 18,8 ± 0,5 р<0,01 2,62 ± 0,08 р<0,01

6-становление ремиссии 14,8 + 0,2 р>0,05 2,71 ± 0,07 р<0,01

7-плато ремиссии 13,7 ± 0,1 р>0,05 2,77 + 0,09 р<0,01

8-предрецидив 20,0 ± 1,1 р<0,01 3,8 ± 0,06 р<0,01

Примечание: р- значимость различий с контролем (Kruskal-Wallis).

отмены показатель и степень ЛТА снижались по сравнению со здоровыми лицами. В состоянии ремиссии при актуализации патологического влечения к алкоголю выявлялось увеличение ЛТА до 21,0±1,2% (р<0,01), степени ЛТА до 3,9+0,06% (р<0,01).

Мы провели корреляционный анализ между выраженностью вышеперечисленных симптомов и уровнем ЛТА. В результате отмечена сильная положительная коррелляционная зависимость между показателем ЛТА и тяжестью симпатотонии (гиперадренергии) - г= + 0,76 (р<0,01), между степенью ЛТА и симпатотонией умеренная - г= + 0,7(р<0,01). Также выявлена сильная положительная корреляция между значением ЛТА и проявлением судорожных и продуктивных психопатологических расстройств - г = +0,71 (р<0,01), г = +0,74 (р<0,01) соответственно. Между степенью ЛТА и выраженностью судорожных расстройств умеренная положительная связь - г = +0,63 (р<0,01) и продуктивных психопатологических расстройств - г=+0,68 (р<0,01). Отрицательная корреляционная связь отмечалась между показателями ЛТА и парасимиа-

Таблица 4.

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у здоровых и больных алкоголизмом разных клинических групп (М±т)

Исследуемые группы ЛТА, % Степень ЛТА

Здоровые люди 14±1 3,2±0,06

Больные алкоголизмом 3 стадии тяжелое состояние, полиорганная недостаточность 6,1 ±0,2 р<0,01 1,1 ±0,04 р<0,01

Больные алкоголизмом 2 стадии разные клинические группы

Алкогольное опьянение 7±0,5 р<0,01 1,8±0,05 р<0,01

ААС неосложненный 27±1,4 р<0,01 3,9±0,07 р<0,05

ААС с судорожным компонентом 38± 1,8 р<0,01 5,1±0,08 р<0,01

Алкогольный делирий 31±1,4 р<0,01 4,7±0,04 р<0,01

Актуализация ПВ к алкоголю на фоне ремиссии 2Ш,2 р<0,01 3,9±0,0б р<0,05

Примечание: р- значимость различий с контролем (Kruskal-Wallis).

тическими симптомами и негативной психопатологической симптоматикой -г= - 0,71 (р<0,01), г~= - 0,67 (р<0,01) соответственно. Между степенью ЛТА и парасимпатическими симптомами отрицательная умеренная коррелляция г = - 0,62 (р<0,01), между степенью ЛТА и негативной психопатологической симптоматикой - г= - 0,64 (р<0,01).

В следующей серии наблюдений мы изучили влияние нейротропных препаратов на функцию ЛТА у пациентов с алкогольной зависимостью. С этой целью мы объединили больных в группы соответственно показаниям для назначения тех или иных препаратов (табл. 5).

Установлено, что через 2 часа после однократного введения пропрано-лола у пациентов показатель и степень ЛТА уменьшились почти в 2 раза (р<0,01). Применение бензодиазепинов и нейролептиков у больных вызывало уменьшение показателя и степени лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в 1,5 раза (р<0,01).

У пациентов с 3 стадией алкоголизма с крайне тяжелым состоянием с клиникой полиорганной недостаточности, выраженной гипотензией (с гипо-адренергическим синдромом), с исходно низкими параметрами лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (4 группа больных), которым по показаниям применяли дофамин, показатель ЛТА увеличивался в 2 раза, а степень ЛТА - в 4 раза(р<0,01).

Таблица 5.

Влияние психотропных препаратов на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у больных алкоголизмом (М±ш)

Группы больных До введения препарата После введения препарата

Показатель ЛТА, % Степень ЛТА Показатель ЛТА, % Степень ЛТА

1 группа -пропранолол 27,4 ± 1,40 3,9 ± 0,07 18,1 ± 1,20 р<0,01 2,1 ±0,09 р<0,01

2 группа -диазепам 38,1 ±2,10 5,1 ± 0,08 26,5 1- 3,10 р<0,01 3,5 ± 0,06 р<0,01

3 группа -галоперидол 21,1 ± 1,82 3,9 ± 0,06 17,8 ± 2,40 р<0,01 1,9 ± 0,02 р<0,01

4 группа -дофамин 6,0 ± 0,20 1,1 ± 0,04 11,1 ± 0,20 р<0,01 4,1 ±0,05 р<0,01

Примечание: р - значимость различий (критерий ХУ-Вилкоксон для связанных независимых показателей).

Установлено, что показатель ЛТА может выступать в качестве маркера предрецидивной фазы и отражать эффект медикаментозной терапии. Препараты, обладающие блокирующим действием на рецепторы - дофаминовые, (3-адренорецепторы, а также препарат-агонист бензодиазетшовых рецепторов (диазепам) оказывают тормозящее действие на взаимодействие лимфоцитов и тромбоцитов.

6. Агрегациоииая функция тромбоцитов у больных алкоголизмом

Установлено, что у пациентов с алкоголизмом увеличена максимальная степень АДФ-индуцировашюй агрегации тромбоцитов по сравнению с контролем (р<0,05). Ответ тромбоцитов на другие индукторы - адреналин и коллаген - не отличался от контрольных значений. Через 2 часа после инфузии ней-ротропных препаратов агрегационный потенциал кровяных пластинок тормозился. Так, введение диазепама снижало АДФ-индуцированную агрегацию с 10,59±0,8% до 8,63±0,1 % (р<0,05) (табл. 1). При этом увеличивалось время агрегации с 0,48±0,01 мин до 1,04±0,01 мин (р<0,05). Подобно этому уменьшалась амплитуда кривой адреналин- и коллаген-индуцироваиной агреации тромбоцитов и удлинялось ее время (р<0,05).

У пациентов, которым вводили пропранолол и галоперидол, наблюдалась такая же динамика показателей АДФ-, адреналин- и коллаген-индуцированной агрегации кровяных пластинок - через 2 часа регистрировалось снижение степени и увеличение времени агрегации (р<0,05).

Таким образом, нейротропные препараты у больных с алкоголизмом снижают агрегационный потенциал тромбоцитов.

выводы

1. У больных с алкогольной зависимостыо2-й, 2-3-ей и 3-ей стадии на протяжении всего алкогольного цикла снижается количество лимфоцитов с маркерами СОЗ I , С04+, С08+, С016+ и усиливается продукция ^ М, и его подклассов ]оС 1, ^02, а также ^Н. У них в фазах гипер- и гипоергических абстинентных расстройств, в постабстинентном периоде и во время становления ремиссии повышается относительное число СБ20+ клеток.

2. У больных в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкоголю и гиперсимпатикотонии увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитар-ная адгезия. При этом проявляется сильная корреляционная связь между уровнем симпатикотонии и показателем ЛТА. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием бензодиазепинов, р-адреноблока-торов, нейролептиков снижает лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия.

3. У пациентов со 2-й стадией алкоголизма при развитии гипер- и гипоергических абстинентных расстройств, в постабстинентном периоде и во время становления ремиссии в крови повышается концентрация 11а1Ь-1, а в плато ремиссии - снижается до контрольных значений. У лиц со 2-3-ей стадией болезни содержание Ка1Ь-1 находится на высоком уровне на протяжении всего аткоголыюго цикла. В предрецидивный период и при алкогольном опьянении в структуре абузуса у больных с 3-ей стадией показатели 11а1Ь-1 соответствуют здоровым и превышают эти значения в другие фазы алкогольного цикла. Не зависимо от стадии у больных с алкоголизмом увеличивается концентрация 1Ь-4. У пациентов со 2-3-й и 3-й стадией содержание Т№сс повышается в постинтоксикационный и не зависимо от стадии - в предрецидивный периоды. В ликворе у больных со 2-й стадией болезни повышается концентрация Яа1Ь-1, 1Ь-4, ТЫБа, а 3-й - 1Ь-4, ТЫРа.

4. При синдроме отмены алкоголя и в постабстинентный период у больных с пароксизмальными судорожными расстройствами, в большей степени, чем при психозах, повышается продукция СШТ и аутоантител к нему. У пациентов с тяжелыми психозами содержание СЫТР в крови существенно снижается по сравнению с другими группами. Продукция аАТ-1цМ максимальна в острый период отмены с последующим снижением, а аАТ-1§С характеризуется нарастанием в период постабстинентных расстройств.

5. У больных с алкоголизмом повышается концентрация в крови аутоантител к гапглиозидам асиало-СМ и СМ-1. Содержание аАТ к ОУМ и асиало-СМ коррелирует с тяжестью и частотой судорожного приступа. Продукция аАТ к СМ2, СЛ)1а,С01Ь, ОСНЬв большей степени выражена у больных с впервые

возникшей острой психоорганической симптоматикой по сравнению с пациентами с пароксизмальными судорожными расстройствами. Наименьший уровень аЛТ к GM2, GDla, GDlb, GQlb выявляется у больных с давним атрофическим процессом.

6. У больных алкоголизмом с пароксизмальными судорожными расстройствами в структуре синдрома отмены алкоголя интратекальная продукция CNTF повышена в большей степени, чем при алкогольных психозах. У пациентов с тяжелыми психозами содержание CNTF в ликворе существенно снижается по сравнению с другими группами. Содержание аутоантител к CNTF в ликворе при алкоголизме зависит от остроты патологического процесса.

7. У больных со 2-й стадией алкоголизма в период абстиненции повышается АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, сильно коррелирующая с уровнем снмпатикотошш. Применение у ннх препаратов, блокирующих 1)2-дофаминовые рецепторы и p-адренорецепторы - галоперидола и про-пранолола, а также агониста бензодиазепиновых рецепторов - диазепама -уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.

СПИС()КПУБЛИКАЦИЙГЮТЕМЕДНССЕ1,Т/\ЦИИ

1. Диагностическое значение теста лимфоцитарно-тромбоцитарпой адгезии. М.Г. Шаманская, Л.В Ильиных, И.Р. Тополев, С.В. Юрчук, А.В. Солиов, Ю.А. Витковский. // Научные труды 1 съезда физиологов СНГ. Сочи, 2005 - № 319. -С. 113.

2. Шаманская М.Г. Динамика некоторых цитокинов у пациентов с алкогольной зависимостью. / М.Г. Шаманская, Ю.А. Витковский. // Медицинская иммунология. 2006. - том 8. - № 2-3. - С. 384.

3. Production peculiarities of some cytokines in liquor in patients with alcoholic dependency under the withdrawal syndrome. International symposium. Interaction of the nervous and immune systems in health and disease. / M.G. Shamanskaya, Yu.A.Vitkovskiy, I.D Darenskiy, et al. // Abstracts of the International Symposium on Neuroimmunology St. Peterburg, May 31-June 2 2007. - P. 82.

4. Рецепторный антагонист ИЛ-1 у пациентов с алкогольной зависимостью (A3) 3 стадии в динамике. /М.Г. Шаманская, Ю.А. Витковский, В.В. Гавриленко, И. Д. Даренский, Т.Д Шумова, Е.А. Юдицкая. // XX съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова. Тезисы докладов. - М, 2007. - С. 179.

5. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия как объективный показатель иммунитета и гемостаза. / М.Г. Шаманская, Ю.А Витковский, А.В. Солпов, И.Г. Богданов, А.С. Богданова, А.Б. Долина, Б.И.Кузник. // Вестник гематологии. 2007. томЗ.-№2.-С.70.

6. Сравнительная оценка продукции некоторых цитокинов в ликворе у больных с алкогольной зависимостью при синдроме отмены. / М.Г. Шаманская, И. Д Даренский, Т.Д. Шумова, В.В. Гавриленко, Е.А. Юдицкая, В.Н.Затулин, А.А.Затулина, Д.В. Шишенков, Ю. А. Витковский. Материалы международной практической конференции. // Актуальные вопросы биологической, клинической и профилактической наркологии. Материалы международной научно-практической конференции. - М. - 2007. - С. 118.

7. Содержание цилиарного нейротрофического фактора и антител к нему в плазме крови пациентов с алкогольной зависимостью. / М.Г. Шаманская, И.Д. Даренский, Т.Д. Шумова, В.В. Гавриленко, Е.А Юдицкая, Ю.А. Владимирова, IO.A. Витковский. //Вопросы Наркологии. -2008. - №1. - С. 12-17.

8. Иммунитет и тяжесть абстиненции при алкогольной зависимости. / М.Г. Шаманская, И.Д. Даренский, Т.Д. Шумова, В.В. Гавриленко, Е.А. Юдицкая, Ю.А. Владимирова, Ю.А. Вигковский. //Наркология. - 2008. -№6. - С. 49-52.

9. Шаманская М.Г. Суммарные антитела к ганглиозидам GM, GM1, GM2, GDI а, GDlb и GQlb у пациентов при алкоголизме. / М.Г Шаманская, Ю.А. Витковский. // Дальневосточный медицинский журнал. - 2009. - №3. - С. 66-68.

10. Шаманская М.Г. Влияние нейротропных препаратов на лимфоцитарно -тромбоцитарную адгезию у больных с алкогольной зависимостью. / М.Г. Шаманская, Ю.А. Витковский. //Дальневосточный медицинский журнал. - 2009,-№2.-С. 89-93.

11. Шаманская М.Г. Влияние психотропных препаратов на агрегацию тромбоцитов у больных алкоголизмом. / М.Г. Шаманская, И.Д. Даренский, Ю.А. Витковский // Наркология. - 2009. - № 6. - С.66-71.

12. Шаманская М.Г. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных алкоголизмом. / М.Г. Шаманская, И.Д. Даренский, Ю.А. Витковский. // Вопросы Наркологии. - 2009. - №1. - С. 12-21.

13. Иптратекальная продукция цилиарного нейротрофического фактора и ауто-антител к нему у больных с алкогольной зависимостью. / М.Г. Шаманская, Е.А. Юдицкая, Т.Д Шумова, Д.В. Шишенков, Ю.А. Владимирова, Ю.А. Витковский// Сибирский медицинский журнал. - 2009. - №1. - С. 11-14.

Лицензия ИД №03077 от 23Л0.00. Подписано в печать 12Л 1.09. Бумага офсетная. Формат 60 х 84 '/16. Усл.печ.л-1,0 Тираж 100. Заказ № 1492009.

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул. Горького, 39а.

Отечественная статистика свидетельствует о возрастающем увеличении потребления алкоголя и высокую летальность от различных осложнений, связанных с алкогольной зависимостью. Алкоголизм представляет собой актуальную тему не только в социальном, но и биологическом и медицинском аспектах. Неуклонный рост инвалидизации пациентов вследствие хронической интоксикации алкоголем, числа летальных исходов являются неблагоприятными показателями социально-экономического развития страны, требующих безотлагательных мер не только по профилактике, но и лечению алкогольной зависимости.

Важное место в патогенезе алкоголизма занимают иммунные механизмы. Известно, что при алкогольной зависимости изменяется клеточный состав и функции иммунокомпетентных клеток, продукция иммуноглобулинов и медиаторов иммунного ответа (Гамалея Н.Б. и соавт., 2000, 2002; Koivisto Н. et al., 2008; Lau A et al., 2009; Roychowdhury S. et al., 2009; Stadlbauer V. et al., 2008). Среди наиболее частых причин заболеваемости и смертности у больных алкоголизмом являются тяжелые инфекции как следствие нарушений функций иммунной защиты (Aguilera V. et al., 2009; Lucey M.R., Weinrieb R.M., 2009). Нарушения в иммунитете у больных приводит к увеличению частоты возникновения опухолей, развитию аутоиммунных заболеваний, нарушению регенерации тканей (Гамалея Н.Б, Наумова Т.А., 2002; Nath В., Szabo G., 2009). Алкогольные поражения органов, в частности печени, обусловлены развитием аутоиммунных процессов, запускаемых при употреблении алкоголя (Jeong W.I, Gao В., 2008; Kurien В.Т., Scofield R.H., 2008).

Однако ЦНС является главной мишенью для алкоголя и острая или хроническая интоксикация вызывает структурные и функциональные нарушения мозга и приводит к органическим изменениям (Даренский И.Д.,

2008). Глиальные клетки и их рецепторные комплексы TLR4/IL-1RI играют ведущую роль в иммунном ответе в ЦНС и развитии повреждений мозга и нейродегенерации. По современным представлениям уже низкие концентрации алкоголя (ЮшМ) вызывают развитие воспалительного процесса в мозге и глиальные клетки повышают продукцию цитокинов и медиаторов воспаления iNOS, NO, СОХ-2, активируют сигнальные пути IKK, МАРК и факторы транскрипции (NF-кВ, АР-1), вовлекаемых в механизмы повреждения ЦНС (Blanco A.M., Guerri С., 2007; Davis R.L. et al., 2002;, Lee H. et al., 2004).

Этанол приводит к дисбалансу про- и противовоспалительных цитокинов, вызывает торможение синтеза проопиомеланокортина в гипоталамусе и одновременно супрессию NK-клеток, продукцию цитокинов (Chen С.Р. et al., 2006). Эффекты алкогольной интоксикации приобретают системный характер и сказываются на всех защитных механизмах, в том числе и гемостазе. Общеизвестно, что иммунитет, гемостаз и неспецифическая резистентность организма выступают как единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты (Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Цыбиков Н.Н., 1999-2008). Изменения, возникающие в одном из функциональных звеньев в этой системе, обязательно приводят к сдвигам в других.

В настоящем исследовании мы попытались дать оценку иммунологических показателей и функций тромбоцитов у больных алкогольной зависимостью в различные фазы алкогольного цикла. Изучение механизмов иммунологического реагирования применительно к фазности алкогольного цикла является важным, так как позволит расширить представления о патогенезе хронической алкогольной интоксикации и определить возможные предикторы тяжести больных алкоголизмом, маркеры предстоящего рецидива.

-<г 8

Целью настоящего исследования явилось выяснить характер иммунологического реагирования, включающего динамику иммунокомпетентных клеток, содержание иммуноглобулинов, цитокинов, ростовых факторов, функцию тромбоцитов в различные фазы алкогольного цикла.

Задачи исследования:

1. Исследовать содержание субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+, CD20+, концентрацию IgG, IgM и IgA, TNFa, RaIL-1, IL-4 в крови у больных со 2-й, 2-3-ей и 3-ей стадией алкогольной зависимости в различные фазы алкогольного цикла.

2. Изучить лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у больных в различные фазы алкогольного цикла и оценить влияние на нее применяемых бензодиазепинов, Р-адреноблокаторов и нейролептиков.

3. Определить содержание цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и аутоантител к нему в крови и ликворе, а также аутоантител к ганглиозидам GM2, GDI a, GDlb, GQlb в крови и ликворе у больных алкоголизмом с разными клиническими проявлениями.

4. Исследовать агрегационную функцию тромбоцитов у больных алкоголизмом и выяснить действие препаратов, блокирующих D2-дофаминовые и В-адренорецепторы - галоперидола и пропранолола, а также агониста бензодиазепиновых рецепторов - диазепама на агрегацию кровяных пластинок.

5. Провести корреляционный анализ между показателями иммунологического реагирования у больных алкоголизмом в зависимости от клинических проявлений.

Научная новизна

Впервые установлено, что у больных с алкогольной зависимостью в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкоголю и гиперсимпатикотонии увеличивается JTTA и агрегация тромбоцитов. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием бензодиазепинов, (3-адреноблокаторов, нейролептиков снижает лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия.

Впервые выявлено, что в крови и ликворе пациентов с алкоголизмом повышается концентрация RaIL-1, IL-4 и TNFa в зависимости от давности органического процесса. Впервые показано, что у больных алкоголизмом с пароксизмальными судорожными расстройствами и типичным делирием в структуре синдрома отмены алкоголя содержание CNTF в крови и его интратекальная продукция повышается, а при тяжелых психозах - снижается. Содержание аутоантител к CNTF в крови и ликворе при алкоголизме зависит от остроты патологического процесса и давности органического процесса. У больных с алкоголизмом повышается концентрация в крови аутоантител к ганглиозидам асиало-GM и GM-1, которая коррелирует с тяжестью и частотой судорожного приступа. Титр аутоантител к GM2, GDI а, GDlb, GQlb, увеличивается у больных с впервые возникшей острой психоорганической симптоматикой, а с давним атрофическим процессом — уменьшается.

Впервые обнаружено, что применение у больных алкоголизмом галоперидола, пропранолола, диазепама уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе получены новые сведения о патогенезе алкогольной зависимости, включающие лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия, продукцию цитокинов и ростовых факторов, выработку аутоантител к CNTF и ганглиозидам. Описаны эффекты нейротропных препаратов — пропранолола, галоперидола, диазепама на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию и агрегацию тромбоцитов у больных алкоголизмом.

Результаты исследования могут быть полезны для прогнозирования клинического течения алкогольной зависимости. Так, показатель J1TA может выступать в качестве маркера предрецидивной фазы и отражать эффект медикаментозной терапии. Прогностически неблагоприятными иммунологическими показателями у больных алкоголизмом является низкая продукция протекторных цитокинов RaIL-1, CNTF. В качестве показателей степени активности иммунопатологического процесса в ЦНС могут выступать уровни CNTF- аАТ и аАТ к ганглиозидам GM1, GM2, GDI a, GDlb, GQlb.

Внедрение результатов работы

Материалы исследования внедрены в учебный процесс ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия.

Полученные результаты используются в лечебно-диагностической работе Читинского краевого наркологического диспансера, отделения неврологии Краевой клинической больницы (г. Чита), токсикологического отделения Читинской городской клинической больницы № 1.

Апробация диссертации

Основные результаты работы доложены на 1 Съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), Международном симпозиуме по нейроиммунологии (Санкт-Петербург, 2006), Конгрессе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 2006), XX Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007), заседании Читинского отделения Физиологического общества им. И.П. Павлова (2009).

Положения, выносимые на защиту

1. Состояние иммунитета у больных алкоголизмом характеризуется снижением относительного количества лимфоцитов с маркерами CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+, увеличением числа CD20+ клеток, фазностью продукции RaIL-1, IL-4, TNFa повышением продукции IgA, IgM, IgG. У них в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкоголю и гиперсимпатикотонии увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием галоперидола, пропранолола и диазепама снижает лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию.

2. В крови пациентов с алкоголизмом повышается концентрация RaIL-1, IL-4 и TNFa в зависимости от давности органического процесса. Хроническая интоксикация этанолом сопровождается нарушением интратекального гомеостаза выражающегося в локальном повышении продукции RaIL-1, TNFa, IL-4 вследствие активации глиальных элементов, а также нейронов. Характер интратекальной продукции RaIL-1, TNF- a, IL-4 и их соотношение предопределяет тяжесть психопатологических расстройств, участвуя в модуляции апоптоза и нейрогенеза. Молекулы RaIL-1 при повреждении ЦНС выполняют нейропротективную роль и участвуют в регуляции нейрогенеза. Уровень CNTF и антител к ним в крови и ликворе отражает тяжесть и остроту повреждений в ЦНС у больных алкоголизмом. Титр аутоантител к ганглиозидам асиало-GM и

GM-1, GM2, GDI a, GDlb, GQlb в крови связаны с тяжестью и частотой судорожного приступа, психоорганической симптоматикой.

3. При алкогольной зависимости у больных в период абстиненции повышается АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, сильно коррелирующая с уровнем симпатикотонии. Применение у больных алкоголизмом галоперидола. пропранолола, диазепама уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.

ВЫВОДЫ

1. У больных с алкогольной зависимостью2-й, 2-3-ей и 3-ей стадии на протяжении всего алкогольного цикла снижается количество лимфоцитов с маркерами CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и усиливается продукция Ig М, IgG и его подклассов IgGl, IgG2, а также IgE. У них в фазах гипер- и гипоергических абстинентных расстройств, в постабстинентном периоде и во время становления ремиссии повышается относительное число CD20+ клеток.

2. У больных в фазу гиперергических проявлений и предрецидивную фазу алкогольного цикла на фоне актуализации патологического влечения к алкоголю и гиперсимпатикотонии увеличивается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия. При этом проявляется сильная корреляционная связь между уровнем симпатикотонии и показателем ЛТА. Медикаментозная терапия у больных алкоголизмом с использованием бензодиазепинов, р-адреноблокаторов, нейролептиков снижает лимфоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия.

3. У пациентов со 2-й стадией алкоголизма при развитии гипер- и гипоергических абстинентных расстройств, в постабстинентном периоде и во время становления ремиссии в крови повышается концентрация RaIL-1, а в плато ремиссии - снижается до контрольных значений. У лиц со 2-3-ей стадией болезни содержание RaIL-1 находится на высоком уровне на протяжении всего алкогольного цикла. В предрецидивный период и при алкогольном опьянении в структуре абузуса у больных с 3-ей стадией показатели RaIL-1 соответствуют здоровым и превышают эти значения в другие фазы алкогольного цикла. Не зависимо от стадии у больных с алкоголизмом увеличивается концентрация IL-4. У пациентов со 2-3-й и 3-й стадией содержание TNFa повышается в постинтоксикационный и не зависимо от стадии — в предрецидивный периоды. В ликворе у больных со 2-й стадией болезни повышается концентрация RaIL-1, IL-4, TNFa, а 3-й - IL-4, TNFa.

4. При синдроме отмены алкоголя и в постабстинентный период у больных с пароксизмальными судорожными расстройствами, в большей степени, чем при психозах, повышается продукция CNTF и аутоантител к нему. У пациентов с тяжелыми психозами содержание CNTF в крови существенно снижается по сравнению с другими группами. Продукция аАТ-IgM максимальна в острый период отмены с последующим снижением, а аАТ-IgG характеризуется нарастанием в период постабстинентных расстройств.

5. У больных с алкоголизмом повышается концентрация в крови аутоантител к ганглиозидам асиало-GM и GM-1. Содержание аАТ к GM-1 и асиало-GM коррелирует с тяжестью и частотой судорожного приступа. Продукция аАТ к GM2, GDI a, GDlb, GQlb в большей степени выражена у больных с впервые возникшей острой психоорганической симптоматикой по сравнению с пациентами с пароксизмальными судорожными расстройствами. Наименьший уровень аАТ к GM2, GDI a, GDlb, GQlb выявляется у больных с давним атрофическим процессом.

6. У больных алкоголизмом с пароксизмальными судорожными расстройствами в структуре синдрома отмены алкоголя интратекальная продукция CNTF повышена в большей степени, чем при алкогольных психозах. У пациентов с тяжелыми психозами содержание CNTF в ликворе существенно снижается по сравнению с другими группами. Содержание аутоантител к CNTF в ликворе при алкоголизме зависит от остроты патологического процесса.

7. У больных со 2-й стадией алкоголизма в период абстиненции повышается АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, сильно коррелирующая с уровнем симпатикотонии. Применение у них препаратов, блокирующих 02-дофаминовые рецепторы и В-адренорецепторы

152 галоперидола и пропранолола, а также агониста бензодиазепиновых рецепторов - диазепама - уменьшают агрегационный потенциал тромбоцитов.