Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунофенотипирование мононуклеарных клеток крови методом проточной цитофлюориметрии у больных с патологией пищеварительного тракта

л \ ^ н

¿ЛШСТВРСТБО ЗД>АЬ001РАШШЯ КАЗАХСКОЙ ССР

Научна-исоледовательокий ияагитуг эпадамиологаи .микробиологии. и шфаявдояных болезней

На правах руяопиои

АСШБЕКОВА Дария Тулеубеновна

ИМШОФКНОТИПИРОВАНИЕ МОНОНШЕАРНШ. КЛЕТОК КРОВИ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ШШШРШШРШ У БОЛЬНЫХ С ПАТШ ОГНЕЙ ШЩШРЛТВШЮГО ТРАКТА

( 14.00.36. - аллергология и иммунология )

АВТОРЕФЕРАТ диосергации на ооиоиаяив ученой степени вавдидага ыедицинояих наук

А)Ш-АТА - 1991

Работа выполнена в Научном Центре региональных пройдем питания АМН ОССР и Институте физиологии АН КазССР

Научные руководители:

доктор медицинских наук В.С.Нугманова

доктор медицинских наук А.Т.Шар-шнов

Официальные огшонеяты:

доктор медицинских ааук, профеооор Г.С.Суходоева

кандидат медицинских наук,

атаршяй научный сотрудник С.Г.Шурагова

Ведущее учравдение - Второй Мооковокий государственный ордена Ленина медащнокий институт им. Н.И.Парогова

Защита сооюатоа " "_1991 года в_чаоов

на заседании специализированного совета Ч 0*079.05.01) в Еауадо-иооледовагельском внотигуте эпидемиологии, микробаологш и тфвкщонних болезней МЗ £азССР (480002, Алма-Ата, ул. Макатаева, 34).

С даооергацпей ыоено ознакомитьоа в библиотеке Йнотигута.

Автореферат разослав " "_ 1891 года.

Учёный секретарь специализированного ооввса, кандидат мэдйциноких наук

Н.Ы.ЕУркипа

/ СБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛБОТН

"""^"ЛстУпльпосгь ппоблеми. Шярокая раопроограшпвоагь хронических п опухолезих заболеваний штегаршелытго трзкга авздегельогвуег о сохранении проблем в профилактика и лечеипи данной патологии. Разработка зф^кгавнцх методов диагноз пиш и терапия возмогла на оано-ю учета вммушшх яаруиеияй при указашщх заболеваниях (Д.С.Логшюэ я соавг., 1Ш6; П.М.Сапронелков, 1987).

Среди факторов, имевших значение а развития патологии пашевари-гельпого тракта, ведущее меозо занимает количественный днабалано еубпопуляций ишунояомпегенпшх «легок, а которым связана и функциональная недостаточность иммунной системы (Легер, 1990;'Мао ОегтоП е* а! , 1986;. Киго1 КаЪпшшза, 1930; Тагеап, ЗЬ.апаЬап , 1990), йго мокег привести к комплекояому наруиеиию струкгуряо-функциональ-яой целостности органов и систем организма, что в свою очередь способствует развитии ыгориодой яедоотазочноом иммунной оиотемы.

В связи о эгям прэдогавляег интерес вняонояие тара мера измэлэ-ннй оубпоцуляциояяого состава шлмунокомйетенгных клзгок и других параме1р0в ааагенн як.уякгета при ш г слоги органов пищеварения, ах зависимости ог кланвчеакого течения болезни, эф^ективноогн гэрапни. Однако, данные о оосггшши иммунной оиовеми фрагментарны, в частности, иедоогаеочно изучен вопрос о характере и степени наруиений количественного соотношения азбпоцуляшй иммунокомсютантпых вага ток периферической крова,

Б последней время большое раопроогранешш получили мэгода одеи-ки оубпопулдционяого ооогава клеток шмуяной оиогемы иа основе $зво-типирования о помощью мопоклопалышх сттшел. Наиболее информатики методом анализа результатов нммунофеногипяровашк является лазерная про»очная цито^люориметраа, позволявши оценивать количественно*-функциональные параметры связывания ыовокдональшх антител о оубао-

адляциявд шмувокомдагеазшых клегок. Данный меаод» однако, еще из нашел шгэокого применения в клинической даагиоогйка в с грело.

Цель рабогр. Номплекоаоэ изучение ирукгурно-фушашоналыщх оообеняоогей еублопулацдй ыонодукдеарнах клеток крова о помощью мо-ноклоналышх анмиел меюдад цихофлюоршегрш у больнш: с шюлога-ой пиаеварваедьвого гракга дая вндошша характера и штогенегичео-кой значимости изменений иммунной сиатеыы.

Задачи иооледованщ.

1. Изучи!ь кошчеогвонное распределение субпояуляций Т-лимфоци-гов а пзрифзрлчаокой крови о помощью иоаовдовалътх ангигел к СД4, СдЗ, СДЗ» СДЗ.- анжгеанш длаогерам у больных эрозивным эзофаги-яом, рсрояачеакиы гасгригои, язвенной болезнью двенадцавшерогной кишки, пищевой аллергией, раком пищевода и ракш аалудка.

2. Наследовать оуйдодуляциошый состав В-дашфоца$ов о помощыз моноклональных а ¡кипел к СД20, СД21 - авэдгеянш влаотераы магодом цроючноЗ шиофлюориыехрии» а гакга уровни в крова иммуноглобулинов

М,о иммунохилщчеоюш ыег о дом юшзличеокой переломен рзш у указанных больных.

3. Определи5ь колнчеогвенное оодораание в крови мононуклеараых елэюк СДПв, СДЕ4, СД56(кКНХ), ВХ» Д-Лн - антеннами адаа агорами а да!ь анализ характера а огепзяз ях изменений до сравнению о другн-ш оубпопулацшм ыоноздкдеаршп: клеток у больных о оагологией верхнего огдела гшдаваразельиого срама.

Оцешиь аагогевегичеокую злачзмоогъ количеогвзйных изменений мононуклеарлых кдогок при оздалышх заболеваниях шщз вара гельн ого' аракга, выяонигь их взаимосвязь о друтш дарамеарами иммунной оио-гемы, клиническими особенности болезней.

Научная новизна тебогы.

Вязрвыв о помощью меэода лазерной проточной цигофаюоримегрли о шпользованаем ыонокяояальннх аашел. проведено комплексное иооле- -

довзшв ангигашв лейкоцитарной дифференциации - СД2, СЯЗ, СД4, СДЭ, СДШ, СД14, СД20, СД21, СД55 СШШ1) на юнонуклеарннх клетках периферической кровп больных хроническим гастритом, эровнвншл эзофагктом, язвенной болознью двенадцатиперстной кишки* пищевой аллергией, раком пищевода, раком желудка.

- Впервые проанализированы пдраметрц флюоресценция иммуно-компэгентаос клеток* связавшихся о юноклональншн антителами,-средний канал флюоресценция и удельная фнюрасценция; Показана информативность указанных параметров при оценке распределения маркерных антигенов на лимфоцитах, их функциональное значение;

- Установлены взаимосвязи мевду колитесгвеню-фушсциональ-нши параметрами различных субпоцулэдиЗ ишунокомтиенгных клеток, показана патогенетическая значимость изменений отдельных звеньев иммунитета при патологии пищеварительного тракта.

Комплексный анализ субпопуляций шмушкомпегантних клеток у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного иракта гозволил выявить ряд информативных параштров, изучение взаимосвязей которых имеет значение для дифференциальной диагностики при опухолевой й хронической патологии органов пищеварения*;

I; При опухолевой патологии пищевода и аелудка по сравнения о неоцухолевнмя заболеваниями наблидается значительное повышение коэффициента корреляции меаду средними каналами флюоресценции СД14+-1лоноциюв я других субпопуляций данокуклеаршх клеток

2. При раке пищевода и желудка отмечалось уменьшение коэффициента корреляция между СД20+ В-лга^оцитами я СД56СНКН1) погсу-ляпией клеток.

Анализ параметров флгорееденщги клеток, овязанпкхоя о ю-

ноклональшвд антителами, полученных методом щюго чиой цгттофяю-римвтоиг, повводяз! оценить функциональные свойства отдельных суб-цопуляций икмунокошзтвнгвшс клеток и установить их патогенетическую вначиьоогь цри патологии вархвзго отдела пищеварительного тракта,

- Ивдуиофедогзлпрованиэ шшвдаеарншс клеток крови большк ерозивнш эвофагиюм выявило сшкете процентного содержания клеток, эксцрвоопцуюада СЩ56(пКН1) антиген естественных киллеров, на фоке значительного повышения степени экспрессии данного антигена.

- ЦитофлюориметрическиЯ анализ субдолуляций яммувокошетенг-ных клеток у больных равэм пищевода установил снижете огносигольного числа шяоцитов, несущих СД14 антиген, о одновременным повышением плотности распределения указанных маркеров. Выявлено хоз-расгание свази оксдрессии СД14 шлегулы с другими антигенными кластерами.

- Анализ В оиетемы ищуяитега позволил установить Обратную свяаь между вкодрессией СД20 в СД21 антигенов в синтезом иммуноглобулинов у больных ряком пвдевэда и йодудаа,

Оововввз' положения доложзш и обсукдош на соввгско-французском семинара "Современные достижения в перспективы диагностики анаша и ^.иунодафкцптов" (Алма-Ата, 1990)» сова гско-амезряканскоы симпозиума "Наиболее важные аспекты со временной науки о лягании" (Алма-Ата, 1990)4 всесовзноИ конференции . "Экологические аспекты вдауноштологичаоких состояний" (Аша-Ага, 2950)$ I сьездё иммунологов и аллергологов Узбекистана (Ташкент, 1991) ^ на совместном васедавви отделов иммунологии и пищевой аллергии НЦШП ММ СССР в иЩвшшотоВ Евдтсштш и аллергологии НИИ ¡ВМИВ'Ш ЕааССР (Алма-Ата. 1991) ^

Ш&ШШ& Ео геш Дисоергавди опубликовано 6 работ;

ШЙдад^рдаШЕ&ДШ^ЖГОй Диссертация изложена на 110 ограничат машинописного гекога и ооогояг из введения, 5 глав» заключение и выводов,' Диссертация иллюстрирована 16 цифровыми габ-лсдают и II рисункащ. Библиографический указатель включает 140 источников: из ига 4? отечественных и 93 ияомраншх.

МТЕИШШ И МВДН ИССЛЕДОВАШИ

Данные, приведенные в диссертации» являются результатом клинического и иммунологического исследования 70 условно здоровых доноров в возрасте ог 10 до 45 лег и 205 больных;-

¿ольнкэ были распределены по следующим клиническим црушшм: эрозивный зэо^агиг - 16 бэлотых; хронический гасгриг - 46 больных; язвенная болезнь двенадцатиперстной киша - 65 больных; пищевая аллергия - Кб больных; рак пищевода и взн^икулокардиозэо^агеаяь-ннй рак - 36 больных; рак кэлудка - 16 бэльшх (первичные);

Среди Сольных ироническим гастритом, язвенной болезнью преобладали лица молодого и среднего возраста - оз» 25 до 50 лег (средний возраст 39,35+1,12 лег)* болыитотво больных соогавили муж-чины- - 82,4Ж

Среди бальных онкологической шгологиеЗ чаще встречались лица старше 50 лаг (орсдний возраст 60,45±1,21 лег), из них 73,8Й - мужчины? '

Из 26 больных пащевоЗ аллергией женщины соогавили 76,47£, ; мужчины - 23,5321 Основной контингент - бэлыше в вэзраотэ 23-55 , лег (средний возраст 40,17.£1*15 лег)

Клиническое обследование включало изучение жалоб больных,, анамнеотических данных, осттр и физикальдаэ обследование* а так- ' не использование результатов лабораторных и неструшзнгалыш ые-' годов исследования. . ■ '

Иммунологические метода иооледоваьйя:

- комплексный анализ оубпоцулдаиЗ ч лимфоцитов (СД2, СДЗ, СД4, СЩ8 дифференцирово'гоыа iota сюры), В лилжбоц'нюв (СД20, СД2Х), осгеогвзнных килдерних junior (СЩ56) и-моноцитов (Щ1вл СЙ14); Были испольвованы следующие ковоклошльша анжела« коньювдо-ванные с флюоресцентной краской фикоэриафином! ТЗЩ, Т&Д1,2ШД1, ТГЮД1* В1ВД1, 'ИШШДГ, а гакщ антитела» ыечанше БИС: ifi>i*Mo2'i Негатпшый юн ¡роль осуществляли ш основа вычитания аутофлюорао-цешда клеток и фоновой фторесцеэдга, обусловленной связыванием

КЛЙГОК С ШШСПет^ИЧЗОКЯМИ ИЗОГВЩЧеоКИМИ аВВИХвЛШИ MsIgQ1-RB1, MsXgG2a-HDl, MsIgJOTTC ( Coulter Clone,США)';

В наоголдей pa боге исследования проводились на лазерном проточном цпгофшориштре mcs-c ( Couitronics,Фракция); Для анализа шдутюфш^расцеигнш: гиогограш нами были использована статистические црограшы immuno и Stat Pacic » позволяющие после вычиганйа нагатившее популяций получать параш д?ц флюоресценции клеток* связавшихся с штюювадьшшг антителами. Мы испо-; льЕОвали следуэдиа параметры:

IV Процент положительных клеток» связавшихся с шдакоэналь-нши антителами^

2* Средний кан^я флюоресценции { mean ), вввиощвй о? плот-нооги распределения антигенов,клеточной двЗЗэревдааада ш мембране шюнуклеарнш; клеток, в в некотором смысле зсарактеривукдай ^ункцвонатаное соо таяние изучаемой оубдопулации клеток;

32 Отвдшашо среднего канала флюоресценции к проценту поло-жигедьшх клзток (пеан / % )л обовначеяное вами как удельная флюоресценция и огразавдза пдогвоогь распределения антигенов кяеточ-ноа доМервшдаацви (СЩ) на единичных клетках.

~ Икмутяшмачоедае определение иммуноглобулинов A. M.Q в сыворотка 1?ровя ыатодом кинетической нефелометрия на имадунохи-

нпчосеом овзлазагороюз-г Вэскяап (Авсгркя), соемззяко о Кайтибековил Е;В;

Статистическая обработка данных проводилась совмеотно о научным сотрудником НИИ онкология и радиология Ш КазССР Курмангалиновоа И;А'.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССВДОВАНИЙ'. Результаты изучения различиях оубпопуляций иммунокомпэтентных клеток представлены в таблицах 1-72

Проведенный нами анализ экспрессия ди|форевцярово чных антигенов шнонуклзаров кровя ' о помощью проточной цитофлюориыегрии показал высокую информативность не только сока за толя Я-ного ссог-ношещя клеток подгадай системы, но п параметров, характеризующих плотность распродаланиз мембранных молекул,-сродниЯ канал флюоресценции я удельная флюоресценция:

Комплексная оценка изменений оубпопуляций шнонукяеарных клеток 1фови больных ювводила выявить сле-

дувдио особенности^ Сникенио процентного содержания нк -клеток по срашения о донорами я больными раком пищевода сопровождалось высоким уровнем удельной флюоресценция'; Прячем, данный показатель был в 4,5 раза вше, чем у здоровых, лиц п более чем в 5 раз вше по сравнении о группой больных раком пищевода (габл.1).

Как известно, иК-клетки рассматриваются как главные клетки, осуществляющие первую линию защиты в противоопухолевом иммунитете. Могно предположить, что снижение уровня естественных килдерных клеток с увеличением экспрессии антигенов говорит о повышении функциональной активности данной популяции клеток;

Интересным представляется факт того, что уровень клэгол, эксцреосирупщих 0Д14 дйфференцяровочный антиген» цри эрозивном . азофагито был снижен, но это г но о гь экспрессии данных мембренпаэс

молекул сохранена (табл.2); Было ошвчзно снижение огвооигельно-го числа В люфаигов4 экспрессиРУВДих (ЭД20 антиген о увеличением плотюсти распределения указанных молекул аа поверхности кдаюк (табл^ЗП

"" Ввиду высокого риска развита вло качественных новообразований у больных эрозивным эзофагитом ыы считаем необходимым цровао-ти анализ результатов имиунофв котирования ютоиукдаарних клаток крови больных адзм^РЯйЗйЗДЭ» Цию^лгоркштри ческий анализ субда-пуляций тдунокшшегенхиа клеток указанных больных ®вводил вы-

Ч -

явить следущие нарушение в ищунвой оиотеме'.У болыадс раком пищевода выявлено достоверное повышенно плотности распределения СД4 антигенов на мембране клеток (табл.4). Как известно, ЦД4 антиген ексцрессярувтса большой субподрядной Т лимфоцитов.Зрелые СЩ4+ клетки функционально характеризуются как хелшрн и инпукторы.Учи-тывая важную роль СЩ4 молекул в рефляции кооперативного взаимодействия различных субпопуляций клеток в холе иммунного ответа,ш считаем« что повышение плотности распределения данного антигена говорит о повышенной функциональной активности данной поприте клеток1; Данный подход с нашей точки ярения имеет определенный физиологический ошол>

В клинической практйке чаще, цришвяюг изучение отношения СД4/СШ8 дифцитов для оценки иммунного статуса организма; Лебадев,Повякина (1990* указывают в овзей работе на большую цен-ноегь анадвш.давнохо соотношения,

У больших раком вщевсяш соотношение цроадвтного содеряания СД4/СШБ оставалось нормальным {табя.5); Однако, оценка удельной флюоресцендви позволила выявить вшчитальвоа повышение соотношения данного параметра С!Д4/СЩ$ лтфягггов до сравнению о донорами'. Эти результаты позволяют очягвуь» его вналгзшютвосте вксцрессии

'. Параметры флюоресценции мононуклеаров периферической кровз,связавшихся с шшклональвшга ангигдлащЖКН-! КД1 к СД-55 антигенному кластеру и к Hi А- щ антигену, ■ получении методом лазерной проточной цитофлюоривдтрии у больно с

¡заболеваниями пищеварительного тракта

Группы больных ' ; * СД55 $iKH-I) ' : ' HU-Да '

: 2 : nsan ïmeaa. !% \ % • ï mean ¡тэап/2

гас?" 1/ii+lAZ ""32^76^3,об' "l8,10+5,19 3,33±0,Ш 58,S0±5,74 7,78±0,S3 4?BS „ =14 ')=9

2;Зрозившга ввофши 2,57+0*89 44,49+5,49 52,2I±I9,Iô 4,88+1,43 4I,II±4,76 5,55+2,26

п =11 " =3 0

5,40*0,73 _.„40,37i3,83." 12,43+2,40 8,59+0,73 64,2146,76 9,24±1,9Х ной кишка п =30 " =23

4,72+1,04 48,34±II,62 12,23*3,49 13,30+2,73 65,10-5,82 5,92±1,13 •

ашз проявлениями

S". Рак щщОёОда 5,77+1,26 37,40+4,20 Ю,30±2,53 5,76+0,7? 59,35+5,50 .14.24+2,77

: " я—18 "=13

6! Бак шщка 4.26*1.60 49,50*5,54 28,19+9,85 7,72+2,52 62,43+11,59 21,74+6,51

' -7=10

ТУ »Hops 6,08+0,71 30,58+2,26 11,78+1,83 8,81*0,61 60,71*3,19 30,79+17,84 ' 1-59

Р2,ЗЛ,05 РГ,6<оГо5 р2.3<0,05 Pl,6<0,05 Pl,5<0,05

P2Î5<0,05 Р3 7<0 05 Кз^ОБ Р3,5<0,05 Р4,5<0,05

р2,7<0,03 Р6,7<0,01 Р2,7<0,05 Р|*5<0,05 р4,6<0,05

Р5,7<0,01

Таблица 2

Иммуно^здатипирокшие ыонопудлеаршх клагок периферической крози го СДП и СЩ14 с гомощьа швоююнальнш: анкдад МоЬрис и Могшие я лЕзериой проточной цигофлзоршэгрии у больных: с заболеваниями пищеварительного тракта

Груша больных . .

Г;Хроничеекий 71,29+13,12 18,33+3,23

• ■гасадих _ п=12

2¿'Эрозивный ;ззо$а- 103,85+16,43 12,92+1,68

ГИ2

>/=10

З'.Язввнная болезнь , 68,45+6,48 15,42+1,93

двенадцагяпэро!"- ™

■ ной кишки п .

4. Пищевая аллзр- ■

ГЕЯ 69,58+7,63 15,;, 00^7,03

5*. Рак пищевода 77,82+7,55 17,42+2,83

6°; Рак желудка 101,28+14,86 13,03^2,07

<7=8

Г: Доноры 66,09+4,60 11^54+1,08

»=56

р1,7<Г0,05

СЩ4 (№-2) '

1»ие2П- > ^пиаап*- .. — .»-таеаа/'С» •■

•7471±3,36 64,14^6,70 4,27+1,08 26,57*6,97 /?=9

11,76+3,30 75,3618,42 4,26±1,24 22,82±7,05 /7=4

8,88+2,29 65,50+2,63 5,76+1,15 20,.'?+5,04 »«=18

6,47т2,23 67,34^-2,34 3,56+2,07 30,76+9,40

11,21+5,30 78,64+3,83 5,66+2,36 50,31+23,24

3,44+2,20 - - -

• 21,34±6,93 66,09±4,60 П,54±1,08 32,35+5,25 /7=56

Р4,7 <0,04 Р5,7С0,05 Р1,7 <0,001

Р2,7 <0,001 Р3,7 <0,001 р5,7 <0,05

а

Параметры флюоресценции В-лим$оцитов кровя, связашихся с ыодаклональншл антителами ВЕШ и ЛТ21 к антигенным кластерам СД20 и СД21, полученные методом лазерной проточной вдгофлвориматрии у больных с заболеваниями пищеварительного тракта

1РУППЫ бОЛЬНЫХ ^ «g ^ . mean ¡neai1 ^ $ ^ пегш, ^ Jje^n, Д, „'„

1.2РОНИЧ0СКИЙ гастрит Ю,59±2,24 63,541-9,09 П,32£3,19 3,64+0,38 43,05+2,34 15,35±1,73

п =13 v=9

2.3розивныЗ эзофагит 7,-16+1,12 79,19±9,54 15,29+3,81 2,35+0,71 45,52+4,68 23,64+7,10

/7 =11 /7=3

3.Язвенная болезнь двенадцатиперстной

кишки 10,84+1,43 62,99±4,66 14,72+3,54 6,46i0,98 53,47+7,00 9,94+0,97

л=29

4*. Пищевая аллергия 9,82±2,92 69,30*13,66 10,60^2,77 8,09+2,56 51,36+6,14 9,70*2,51

п =7

5Í Рак пищевода * 7,49+0,91 71,41+7,39 I2,69±2,42 3,27¿Q,47 56,37±5,55 22,04+5,21

/?=Г7 л=10

&; Рак яалздаа 5,53-J0,53 80,82^5,97 15,59+1,83 3,62±I,I4 9I,9I±I2,24 33,52±I6,I2

>7=10 "=5

71 &норы 12,41 jl,07 50,85+3,09 7,06±0,87 4,23+0,33 46,33+2,33 16,94+2,51

/7=59 ^ =41

pl,6<0,05 p2,7<0,01 p2,7 <0,05 pl,3<0,05 pl,5<0,05 Pl,3 <0,05

■ p2,7<0,01 p3,6 <0,05 p3,7 <0,05 p3,5<0,01 PI.6 <0,01 p3,5 <0,05

p3*6<0*01 p3,7< 0,05 P5,7<0,05 p3,7<^0,05 p3,6 <0,05 p3,7 <0,05

P5.7 <0,001 E5,7< 0,05 рб,7^0,001 P4,p<.1,0d p4,7<0,05

p6,7 <0,001 P6,7 <0,001 P5,6<0,05

Таблица 4

Параметра флюоресценция Т-лвл^оцпюв крови, связавшихся с моноклональными анттелзми Т4Щ я 5ВлД1 в антигенным класгорам СД4 и СДВ* полученные методом лазерной проточной ' цагофлюорелагрви У больных с заболеваниями пищеварительного тракта

^ V* ^ ^ У ^ ^ * < ✓ ^ ^ <*

Грушщ бОЛЬНЯХ • »»* V* ^ гр *>* у" *»* * 1 с! > <г .г *** теап шеап М . V ** г"" * ^ теап „ „ г.еап К---

гдрощчэский гастрит 33,92+3.56 52,69+4,17 1.91+0,39 24,77^2,65 74,13+7.00 3,35+0,58

/; =13 /7=13

З.Эрозиншй эзойагнт 33,49+3а31 64л47±5,70 2,03±0,36 30,П±3,68 8б,44±б,33 3,57+0,77

■ .-7=10 /7=10

3;язвеннан болезнь 32а41+1гЭ2 60,82±4,48 2,15±0,21 24, 44±1, 43 82Л2±3,75 3,71+0,29

двенадцатиперстной кишки /; =27

4»' Пищевая аллергия 27,45+3*17 64326^12,45 2,55+0,58 24,31±1,78 88,05+6,36 3,63^0,08

п= 7 //=6

5» Рак ПЕщавода «з^ 4 88 ¿»3 л 23 57,42±4,31 1,95+0,23 27,22+2,02 75,63^4,06 3,03+0,26

л =18 /?=17

б*. Рак желудка 33,51+4,60 62д54+5,'51 1,84±0,2б 27,11+2,63 84,57+6,24 3,46+0,50

>»=10 /'=10

7, Доноры 37»02+1,22 50*23+2,45 1,39+0,06 22,99+0,91 71,40+2,51 3,4410,19

л=50 /»=59

р4а7<0,01 Р3а7 <0,001 р2,7 < 0,05

рЗ,7<0^05 Р5,7 <0,05 Р3,7<0,05

Р4,7 <0,05

Таблица 5

Отэдпадае шртатоз фгаоресцадцви СД4/С1В лимфоцитов крови, меченных моноклональными автвлапя Т4Щ и Т8ЛД1» получзиыа методом лазерной проточной циюфшооршгвхраи У болъшзс о заболаванаяма пищеварительного тракта

Группы больных

Отношение параметров фляоресценции СД4/СД6 лимфоцитов

«И ^ **

^ ** *

— 1 • теап ! пеап /£

1,576*0,232 0,681*0,043 0,656+0,096

/1=12

1Л5310Л43 '0,745+0,040 0,679*0,118

/>=10

14 486*0,136 0,725*0,037 0,660±0,08Э

/;=27

I,174*0,168 0,631*0,094 0,614*0,099

о =26

1,38440,195 0,746*0,039 0,685+0,086

/,=17

1.738+0,028 0.735*0,028 0,694+0,092

1,782*0,109 0,68010,019 0,439+0,025

/?=50

Р247<0,01 Р1»7 <0,05

Р4Л7 <0,05 рЗ,7 <0,05

Р5,7 <0,01

рб,7 <0,01

П Хронический гаотраз!

'25 Эрозивный эзо^агиг

3," Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки

4» Пшцевая аллергия с келудоч-но-киае чнкми цроя влениями

5: Рак пищевода а? Рак кедудка 7, Доноры

о

СД4 к СД8 др^ершццровочных антигенов на лимфоцитах, проведенный с помочь» проточной цитофлюориметрии, представляет большую клиническую значимость, чем оценка процентного содержания данных суб-популяцнй клеток.

Июялюфенотипгрование ыононуклеарких клеток крови больных раком пищевода выявило также снижение относительного числа СД14+ ысноцитов. Црк этом значение среднего канала флюоресценции было повьшеншы (табл.2),

Как извес1но,моноцг1тц играют ключевую роль в цротивоопухоле-вом иммунитете посредством выделения фактора некроза опухоли и других цитокинов {йегер, 1920; Boiu et -а. ,1987):.- Так как СД14 ди^ферешкровочный антиген сшцифя<ген для моноцитов, по изменению данной популяции клеток мокко судить о ыоноци тарном звено иммунитета; Поэтому нам представляется, чк> повышенная экспрессия данного маркерного антигена на моноцитах у больных раком пищевода имеет определенный физиологический смысл, в понимании которого ватк-ное значение имел бы анализ взаимосвязей экспрессии шноци тарных ■'антигенов с другими количественно-функциональным! параметрами ишунной системы'. Процентное содержание естественных киллерных ¡слеток в крови больных ракоы пищевода было достоверно выше,чем у больных эрозивным эвофагигом и практически было равно норме1.'

Количество СД2о+ клеток бшо достоверно ниже, чем у здоровых доноров (габл'^З)'. Цричем уровень среднего канала флюоресценции клеток, овяэавшихся с гогоклональными антителами к СД20 кла с тару, ¿да выше, чзы у допоров, соответственно повышалась удельная флюо--рясценщгя'.

Ингервс фвдстааляло влияния говышенной экспрессии где0 ан-ssiretw на оийтйв В лимфоцитами иммуноглобулинов.

-Уровень иммуноглобулинов А. Ы, о б kiobh больных мы опреде-

ляли методом кинетической нефелометрии (табл.б)*. У больных раком пищевэда было выявлено достаточно низкое содержание ишуноглоф-линов различных типов; Особенно aro касалось иг.мгноглобулнна М, уровень которого был в среднем в 3 ре за нияе, чем у больных хроническим гастритом1. МояДО предположить, что снижение цроцокгного содержания СД20+ лимфоцитов, ведет к уменьшению синтеза ишуногло-булинов у больных с раком пищевода.*

Обращает на себя внимание различие в параметрах распределения СД2, СДЗ» СД56 (Ш-I) диффоренцировочннх антигенов на мембранах иммунокомпетевтньос клеток • цри рака ища вода и аелудка. У больных плотность распределения СДЗ антигена на

Т лимфоцитах била судеотв&шо зьше, чем у доноров и у больных хроническим гастритом (табл.7). Удельная флюоресценция СДЗ антигена на лимфоцитах с опухолевой и неопухолевоа патологией аелудка различалась почтя ддвое; Аналогичная тенденция била выявлена и вря анализа экспрессии СД2 антигена (Tafo.7). Следует отметить, что СД2 антиген оксдрассяруагся на воах зре/ак периферических ? лимфоцитах, а также та СДЗ - отрицательных большее гранулярных:лдафо-цптзх; Взроягво» дополнительное вовлечение данных клеток по вносило существенных изменений а количественное распределение пан-каркеров Т лимфоцитов- (СДЗ, СД2) у больных с раздам пелудка.

Как известно, СЩ2 и СДЗ антигена выполняют важные функции в пкдитом распознавали» неродного антигена; СДЗ молекула входит в структуру антиген распознающего рецептора, участвует в передаче импульса езт цигошгазма к жру клакой В результата антитанопоцй-фичэской активации 21 лимфоцитов цроисходит формирование тот' факторных Т. ияегогй' .

СД2 антвгенучастдует в реализации альтернативного пути активации. Т клеточного звена иммунитета (Чередеев, Ковальчук,12391

&

■ ст> ■ч» со о M

О

со <0

со

СО 1*

щ Ci

■ « _

Ю Ю П Ч" СО M M -H 11 *-l Ii

*t< t. t> ^ 1-1 ö

4 s-

ю со

OJ ю cû • <П

J » ш й с-г а и и

+« ^ -м

СО M С\!

со 8

ю

с»

9

s

SP с-

4? *

M к Г-

6

ч» со to

m я !ö Я*

со

щ

сю

8

СГ>

зм

со

со

■h 02 tn ,

ч ■

ф

ÎH M

Я 4

J\ *

b-i s

g

4'

г>

0?

<о

M $

ч* 8

w hi ю

«£> to öl. in

t—. ч ч ч

« W со счг M CVJ

% и J; w u %

i О s* О

P o> o ю

t- 4 ч ч

4«* w s ю ft ft OJ

¡S

(О

¡1 со

о

сг

+1

сч

со

CSÍ

и

S о

ч ч

О о

V V to «э

ь? w

ft р.

•ч

СМ ч» ч ч l-i СМ А Р(

о о

ч

О

V

со

P« •ч

от

м*

й

о

OJ

ч о

0J M

I

СП £> ' ч СО m ог

. w м ю ООО

Ч Ч Ч

ООО V V ч/ « СО «îf ч ч ч W И N P« Pi А

m

£

ns §

к

ï

я

'ДО»«» осл-о«.

А АЛД

оооо » » ik к

ОООО СЛСЛМСЛ

нш

к I»

СЯ-3

s s -3 lib а» о» Ö -3 OJ ч

Ь н- M 1 S 1 ¿r1 i 6 £ о Í « ^

8 h ел со to ы s в & i

8 8 ' a s to ¥ to to

Й í H

-а о»

СЛ ^ M

"VnÍ A VN . w . VI V Wl 'S

FS ^ Ы ** G> * ЦЛ ^ M ^ M » » M •• О » IÛ H Ö H » Itb*

oo

OlM

IP fe »

-Л-дО

АЛЛ

ООО » to к

ООО омел

M

•О "tí

42 <3

/\/\

ОО » ь

оо пел

и ta

M M

-л со

№

о 6

8

сл S2

fe ь

О ä

lb со

M

г

а>

M

о -о

s

I к

со

OJ

<3

л к

M

ю -о

Si

I»

сл сл

ъ *

ш со

I »

о

s

сл tf-

ы %

ы

<о о»

a

Й

ь

к -,

3

s

8

н-

äf

kiVbtiaw сл

CniotOtOMM Ol

Ь Ы Ш - -

OOOOOO •ЛООФ СОСЛ ■

Sî В a ï 8 ? 8

ь » ь

OOOOOO слслслслмм

•öM^ciid'ö оыммм

I» ft » » Ь

<l<j>ai лсо /^✓ч/уА

00000

1 I . ь

ооооо мелел ело

о

M

M te

о

i

о to

S3 £

ô

fe %

to

s

8

и

»4.

«я

о

Саг^геи 0t в1. ,1983; Регг-1п1 ег а1. ,1339), повышает уровень внутриклеточного цАШ. регулирует продукцию интерлейкина 2 и экспрессию рецепторов К нему ( СапЬгеИ ег а1.,1988; Саггега еъ аз.1968); Следовательно, анализ количественного распределения СДЗ и СД2 ди^еренцщювочных антигенов могет отражать функционадь-ноо состояние данной популяции моток.

Было такна отмечено повышение значения среднего канала флюоресценции естественных киллеров ш сравнению со здоровши лядами, чего на наблюдалось у больных с раком яйцевода; Нам представляется. что указанные различия осязаны о клиническими и гистологическими различиями опухолзвой патологии у больных раком пищевода и раком иелудка; Данное предположение содераится в работе Логинова . и др'.» (1986)'. Автор считает, что на степень выраженности изменений шнсвуклоаршк клеток крови при штологиа пищеварительного тракта влияет характер пораженною органа, активность патологичео-; кого процесса, его распространенность»

Шцуно^ввотшированив субгопуяяций ювднокошюгёнгшсс клеток крови у (Зольных шявдао достоверное онике-

кие процентного содержания Т лимфоцитов, несущих маркер ОДЗ (табл.71*. Плотности распределения данного антигена у больных хроническим гастритов была меньше, чем црк язвенной болезни,пищевой аллергии, рака пищевода и желудка; Было танке отмечено повышение удельной флюоресценции отношения СД4/СД8, что говорит о возможной активации хеллериой/ивдукторной популяции Т лимфоцитов (табл;5)'.

У больных хронкческда гастритом процентное содержание СД20+ . л[гл5оцятое было выше чем у больных раком яелуцка (табл.3)*. Количество иммуноглобулинов А, м, с было высоким - патологически / высокое содержание иммуноглобулине а и ювишенные уровни им-■'■ кстоглобулянОБ А и Ы (габл.6). По-видимому, происходила поликло-.

пальная активация В'лимфоцитов и пошшзкннА синтез иммуноглобулинов, что трабует соответствующей коррекции.

Использование лазерной проточной цвтос§лворшазрии для пмму-но^онотишрования моноцитов крови больных хроническим гастритом гозволило выявить снижение процэнгоогб содержания клеток, гксцрео-сирукщих СД14 антиген;" Количество СДПв+ клеток было повышено (габл*,2). Необходимо отметить, что СДПз маркер кроме моноцитов определяется такяэ на згранулоцитах и ЯК-клетках (Шапгага а» а1., 19891 Чсредезв,1939); Недавно бцяо показано, что на сда!"СД11в'(" оубпопулявдга клеток представлены прздшственники лифкинактивя-рованных киллеров (В1вмап1 ег а1. ,1939); Очевидно,что различая медщг СД14+ и Щ1в+ годануклзарами связаны с участием перечисленных выше популяций клеток в количественном распределении дан, ного маркера.

Изменение иммунного статуса у Сольных дашД^шЗЙШД-23" рактеризовалось снижением содержания Т ла.?5оцигов,несу1дшг маркер СД2^ Цри этом было отмэчода повшвоиив плотности распределения данного антигена на'клетках иммунной сиотиш. Аналогичная картина наблндалась и при анализа СДЗ антигена {табл.7). Снижение процентного содержания СД4+ Т лимфоцитов ввело к оппяонго соотношения данного параметра СД4/<ЩЗ популяции клеток; Повышение значения среднего канала флюоресценция (Ц04- клеток говорит о возможной активации данной популяции клеток (табл?4,5)?

Интересные результаты были голучзны цри анализа субпоцуляций . пкэдтокомпегвнетш хае ток больных ззщЛЕЗВ двенадцатипер-

стной кишки, свидетельствующие об увели юн и показателей флюоресценции» характеризующие шюгаооть распределений антигенов, практически у всех диф^еренпировочта клаоторов (таблЛ-7)'. Шшво предположить, что язвенная болезнь двонадщэтппорегдоя кишки соцровоя-

дается изменеиишв в иммунной системе, проявляющимися активацией всех звеньев иммунитета*. .

Выяснение взаимосвязи отдельных еубдацуляций ишгнокомпе-тентных клеток при патология пищеварительного тракта вызывает больной интерес, ЕэрреяшдояшЩ и регрессионный анализ взаимосвязи меаду оредним каналом флюоресценции, характеризующим степень эхопраосии диф^аращщзовочных антигенов на данонуклеарнык клетках, у больных опухолевой пагслогвей и язвенной болезнью позволил выявить следующие закономерности У больных раком пищевода и желудка гайяодалось уменьшение коэффициента корреляции между СД20 и СД£Б' 6Ш1-1) кластерами шз^нокг-шатепгных клеток го сравнению с донорами и язвенной болезньв*

' . ' Избсогко,чго естественные ккллерныа 1азгка и В лимфоциты функцяональво взаимосвязана (Mtchsl et &i, ,Ш39). Вероятно,что ; уменьшение козсйицзанта корреляции швдг СД20 и QH56 СЙН-1) ' субпопуяяциящ клеток было овязано с переключением рогулягорного действия /t/К клеток на выполнение факторных функций, вацравлен-нык на борьбу с опухолевым процеосом?

. Нами бшш отмечена важная роль моноцятарного звена вммуни- . тега в противоопухолевой защите*. Б работе Wilson et al. (1Э88) покаваяа зависимость активности естественных киллерных клеток от количества моноцитов*. Учитывая выиеиздоЕзщюа, ш изучили взаимосвязь экспрессии СД14 молекул на мембране клеток о параметрами ^лооресцендапт В лимфоцитов в естественных киллеров. Множественный кпэЭДяпиеит корреляции мэзду СЩ20 и 0556 (1!КН-1) клетками значительно возрастал tqv добавлении в уравнении показателя среднего канала флюоресценция СД14 клеток у больных раком пищевода.

Полученные результаты ыодтварадаот мнение о том, что процесс ра^ипя опухолей пщеваритадьяото ipaKia существенно вависит

oí количественно-функциональных изменений моноцитов периферической кропи, что вероятно связано с активным вовлечением осязанных клеток в регуляции и эф$екторное обеспечение противоопухолевой защиты ( Zembala et al.,1986

Таким образом, принимая во внимание выявленные иммунологические сдвиги при заболеваниях пищеварительного тракта, можно предположить важнуи роль иммунной систош в отдельных звеньях патогенеза указанной патологии*.

ВЫВОДЫ

Ii Иммунофеномпирование юнонуклеаршсс клеток периферической крови больных эрозивным эзо^агитом, зроничаскям 1'асгритом, язвенной бэлезньв двенадцатиперстной кишки, штцевэй аллергией, раком пищевода и яелудка методом проточной цягофюориметрии показало высокую информативность анализа параметров, характеризующих плотность распределения на мембрана клеток антигенов лейкоцитарной дифференциации: среднего канала флюоресценции и удельной флюоресценции; '

2. Цигофюориметрический анализ субпопуляций ишунокомщ-тентише клеток у йэльиых ерозивнш эзофагвтом позволил установить низкое процентное содержание клеток, экспресс йрущих СД56 v^KH-I) антиген естественных кяллзров» я значительное ювыиапие шютюотп распределения указанного антигена по оравнзнша со здоровыми доео-Р"т;п a {Ьдьяжгя раког* злдаюлс;* Втяаяе*!!? «тпсеиив относительного В лиД'ОЦигое, гх'сдроесаvwnrp: зерсв? СЩ20. одновременно о повшеиш! ежвгада рхгоцргеоая даккок» ввгягака* а таккв енташио дроцентЕого содсрьавия СД14+ данощтгов гэовл.

з: Игмуна^аиотппирошнко шнонугыгепршд клеток кровл (Ьль-ных раком пищевода лыавило значительное повшйниз соотношения

СД4/СДВ лимфоцитов го удельной флюоресценции! снижении процентного содержания В люфцитов, эксцрессцрующих 0Д2О антиген, на фоне повышения плотности распределения указанного маркера,при этом наблюдался низкий уровень иммуноглобулинов крови .Относительное число СД14+ моноцитов было снижено, вначоние среднего канала флсоресценции указанных клеток повышалось. Корреляционный анализ позволил установить значительное возрастание связи экоцрсс-овп СД14 антигена о другими антигенными кластерами, которая была низкой у адоровнх доноров и У большее язвенной болезнью двенадцатиперстной КЕШКЕ,-

4'. Оценка субпсод-лздяэ иного состэе" лимфоциюв методом проточной цатофлюоримехрйи у больиа раком желудка показало повша-низ степени эксцресоил С&2, СДЗ, СД55 №1-1} дифферонциро во чшх антигенов, а также соотношения СД4/СД8 по удельной флюоресценции * Било отмечено снижение относительного числа СД20+ В лимфоцитов о одноврвменнш повышением плотности распределения указанных мембранных молекул; Уровень иммуноглобулинов А, М,й в крови был снижен,

5. Сникшие содержания Т лимфоцитов, неоуцих маркер СДЗ, . . наблвдялооь у больных хроническим гастритбм";Соогно1аоние С!Д4/СД8 по удельной флюоресценции бияо повышено'; Процентное содержание В лимфоцитов, вкецреоойрущих СД20 антиген, было выше, чем у боль-ншг раюм Езлудка. Цря а той отмечался высокий уровень иммуноглобулинов в крови.-Относительное количество СД14+ моноцитов крови было сникенс!

_ 6'. Использование метода лазерной проточной цитофлюориметряи д.хй ищунофачогиадованзд шнонуклэаров >фозц больных пищевой гжмргиеА юеволичо выявить снижение цроценгною числа клоток, связававхся о.мошчдональнши антителами к (Щ2, СЩЗ, СД4 дифферен-

вдровочшм клаотерам, а также пошззшз степени эксцрсг-СД8 антигена на мембране клеток.

7'.* Ишунофлюоресцентный анализ антигенов шхето ;, ренциации у больных язвенной болезнью двонадцатиперо. -выявил оладующие особенности: повышение степени экспресс:-.-? C-'i., СДЗ, СД4, СДЗ, СД20, СД21, СД56 (lilffl-l) диффереотировочных антигенов; снижение процентного содержания СД4+ и СД14+ оубпопуля-ций иммунокомпетентных клеток';.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИГОВАННЫХ ПО ТЕ1ДЕ ДИССЕРТАЦИИ:

I; Клеточные иммунные механизмы и белки крови цри заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта / А.Т.Шарманов, Е.Б'.Кайпибеков, Д;Т«Асши5егова» Л'.Р.Цухамбахьярова // Тез'.маг 5 15 Всесоюзной доп$,- Краснодар, 1990';- с.34;

2. Оценка иммунного статуса у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта / В.'Б.КаЁпщбеков, Л'.Р'; Мухамбетьярова, Д';Г.Асылбекова» А'.Т.Шарматюв // Актуальные вопросы аллергологии'я иммунологии з дрядной ооио; Тсз'.докл;коп$; аллергологов и иммунологов - Ашхабад, 199Г.- с',92-93.

3. Илмуно логические аспекты пищевой аллергии и непереносимости I Ес;Нутаанова, Г.Юсешсанова, А;Л;Шршнов, Д.Т.Асылба-кова, З.М.Дюсенова // I Республиканский сьезд иммунологов и аллергологов Узбекистана: Тез*.докл;- Ташсенз* 199Г;

4. Immunologic function and metabolic disorders in patients with pathology of alimentary tract /A.E.Sharmanov, A.S.Saparov, L.IC.l.liiMiambetjarova, B.B.Kaishibekov, D.T.Asylbekova, I.A.Kurmnn-galinova // 10th Лее ting of European ?ederaticn of Innunological booisties: Abstracts.- .b'dinburg, 1990,

5.Ilatrition and food allergy / Zh.S.Nugmanova, E.M.Eecnsha-nova, ii.A.Shakieva, D.I.Asylbekova» P„I.3ubb-//-Jlosfc important

•issues of modern nutrition sciences Soviet-American Symposium, Abstracts.- AIea-A.ta, 1990.- p.51-53-

6. nutrition and immunity: clinical and experimental aspects./ ' A.T.Sharntanov, B.V.Monalthov, A,S.Saparov, L.K.tluihanibetjarova, E.B.Kaieliibelcov, D.T.Aeylbekova, X.A.KuimangalinlVa // Moat iopor-tant isauen of modern nutrition ocienco: Soviet- American Synpo-dIubi, Abstracts.- Alma-Ata, 1990.-p.65-67.,